一种应用细胞切片评价化妆品原料及成品保湿的方法

技术领域

本发明涉及日化用品技术领域，更具体地说，它涉及一种应用细胞切片评价化妆品原料及成品保湿的方法。

背景技术

我国《化妆品标识管理规定》要求化妆品标识应当真实、准确、科学、合法；《化妆品监督管理条例》进一步强化了对化妆品宣称的管理，要求化妆品的功效宣称应当有充分的科学依据并公开依据摘要，接受社会监督，化妆品功效评价的重要性再次受到广泛关注。

《化妆品监督管理条例》中对于保湿功效的解读为用于补充或增强施用部位水分、油脂等成分含量；有助于保持施用部位水分含量或减少水分流失。目前评价化妆品保湿功效的方法主要包括文献资料或研究数据、物理称重法、生化反应法、3D细胞模型、动物实验法以及人体实验法。其中文献资料或研究数据最是广泛应用，但缺少通过补水达到的保湿的方法；物理称重法是根据化妆品的吸湿性能进行测试的一种方法，其模拟程度较低；生化反应法，如透明质酸钠酶抑制试验，根据单纯的生化指标或无法完全反映化妆品发挥作用的生理过程和机理，且无展示效果；3D细胞模型、动物实验法如斑马鱼失水模型恢复试验，周期长、成本高；人体实验成本高，依赖于个人的主观判断，实验结果难以量化且受较大的主观因素干扰。

由此可见，目前用于评价化妆品及其原料保湿功效的方法仍存在缺陷，一种新的用于评价化妆品原料及成品保湿性能的方法亟待发明。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述的不足，从而发明一种应用细胞切片评价化妆品原料及成品保湿的方法，此方法通过观察细胞接触水剂受试物前后的变化以验证受试物的补水保湿性，符合保湿中对于“补充或增强施用部位水分”的补水解读，具有直观、可操控性强、试验周期短等优点。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种应用细胞切片评价化妆品原料及成品保湿的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)细胞切片制备：取单层细胞，加入活体染色剂处理染色；

(2)模拟缺水干燥状态：取步骤(1)所得的细胞切片，添加氯化钠溶液，使细胞失水，模拟缺水干燥状态；

(3)补水保湿测定：取步骤(2)所得缺水干燥状态的细胞切片，加入受试物，观察细胞补水情况，以评价受试物的保湿性。

优选地，为了使直观化、客观化的评价结果进一步量化，可用专业图像分析软件分析步骤(3)中经加样后的细胞面积，根据各阶段图像的细胞面积用下列公式计算细胞的补水情况，以评价受试物的保湿性；

优选地，在步骤(1)中，所述单层细胞为动物细胞经细胞贴壁培养获取的单层细胞，或从植物表皮组织撕取的单层细胞。

优选地，在步骤(1)中，当所述单层细胞为动物细胞时，所述活体染色剂为健那绿染液；当所述单层细胞为植物细胞时，所述活体染色剂为中性红染液。

对于动物细胞，具体为：取出贴壁培养的单层表皮细胞，放在加有1/5000的健那绿染液的载波片上，再在37℃恒温水浴锅的金属板上染色10-15分钟，盖上盖玻片，显微镜观察。

对于植物细胞，具体为：撕取植物组织表皮细胞，放在加有1/3000的中性红染液的载波片上，染色5-10分钟，用吸水纸吸去中性红染液，换上蒸馏水，盖上盖玻片，显微镜观察，可见到被染成砖红色的中央大液泡。如植物细胞本身带有颜色易观察，则染色可跳过。

优选地，当步骤(1)中所述的单层细胞为动物细胞时，步骤(2)中添加质量浓度为1.5％的氯化钠溶液，模拟细胞缺水干燥状态；当步骤(1)中所述的单层细胞为植物细胞时，步骤(2)中添加质量浓度为4％的氯化钠溶液，诱导植物细胞失水。

优选地，步骤(1)至步骤(3)均在无菌环境下进行，且所有步骤中的所用试剂、用品均满足无菌条件。

优选地，步骤(2)中的受试物为透明类水剂化妆品原料或透明类水剂化妆品。

优选地，本发明设置有实验组、对照组，每组各设2个平行样。

优选地，当阳性对照组补水率大于80％，且阴性对照组补水率小于15％，实验系统有效。

优选地，当实验组细胞补水率大于45％，受试物判定为具有保湿效果；当实验组细胞补水率低于等于45％，受试物判定为不具有保湿效果。

本发明的方法可用于评价化妆品原料及成品的保湿性能。

本发明的技术原理如下：人表皮水分含量10％-30％，低于10％皮肤将严重干燥，导致皮肤出现干燥，细纹，粗糙等问题，所以皮肤保湿至关重要。保湿的先决条件是补水，补充肌肤细胞所需的水分，湿润肌肤表皮，有利于维持皮肤饱满、细腻。细胞通过渗透作用进行物质运输，当细胞液浓度小于外界溶液时，细胞失水，动物细胞皱缩/植物细胞发生质壁分离。当细胞液浓度大于外界溶液时，细胞吸水，动物细胞胀破/植物细胞发生质壁分离复原。在低倍镜观察下，已处理染色的细胞失水，细胞皱缩；然后通过添加受试物，细胞补水、膨胀饱满，以此来验证样品的补水效果。

本发明的有益效果在于：采用细胞生物学、渗透作用等相关原理制备透明类水剂化妆品原料及成品保湿效果评价的细胞切片，能直观再现模拟人体皮肤在在接触受试物后的补水过程，以直观可视的实验情况客观评价受试物的保湿效果。

附图说明

图1是本发明的操作流程图；

图2是本发明中阴性对照组在不同阶段的状态图；

图3是本发明中阳性对照组在不同阶段的状态图；

图4是本发明中A实验组在不同阶段的状态图；

图5是本发明中B实验组在不同阶段的状态图；

图6是本发明中C实验组在不同阶段的状态图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的描述，但本发明要求保护的范围并不局限于实施例表述的范围。

实施例1

(1)撕取洋葱表皮细胞，置于有一滴清水的载玻片上，盖上盖玻片，在显微镜下可观察到排列整齐的紫色细胞。

(2)取步骤(1)中细胞切片，加入4％氯化钠溶液，诱导细胞失水5分钟，模拟肌肤缺水干燥状态。

(3)取步骤(2)所得的缺水干燥状态的细胞切片，加入受试物，观察10分钟内细胞补水程度。用I PP图像分析软件(S/N41 N70000-63019)分析细胞面积(不含细胞壁)，根据各阶段图像的细胞面积(不含细胞壁)用下列公式计算细胞的补水情况以评价该受试物的保湿性。

在本实施例中，实验组分为A实验组、B实验组及C实验组，受试物分别为市售透明水剂类化妆品A、B、C；对照组分为阴性对照组及阳性对照组，阴性对照组的受试物为2.8倍生理盐水溶液，阳性对照组的受试物为0.1％透明质酸钠溶液；每组设置2个平衡样。

通过上述细胞补水率公式分析可得，阴性对照组、阳性对照组补水率分别为12.58％、99.60％，则实验系统有效。A实验组、B实验组及C实验组的细胞补水率分别为59.56％、70.20％、35.96％，故A受试物和B受试物判定为具有补水保湿效果,C受试物判定为不具有补水保湿效果。具体数据如下表：

注：细胞面积(不含细胞壁)＝截取分析图像面积-空白面积，本次截取分析图像面积为10mm*10mm。

其中，图2是阴性对照组初始状态、缺水干燥状态和加样后状态(从左到右)；图3是阳性对照组初始状态、缺水干燥状态和加样后状态(从左到右)图4是A实验组初始状态、缺水干燥状态和加样后状态(从左到右)图5是B实验组初始状态、缺水干燥状态和加样后状态(从左到右)；图6是C实验组初始状态、缺水干燥状态和加样后状态(从左到右)。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。