人工标志物等位基因
文献发布时间:2023-06-19 10:22:47
技术领域
本发明涉及生物技术领域。更具体地,本发明涉及一种制备用于鉴定生物体中感兴趣的核酸的人工标志物等位基因的方法。本发明还涉及确定混合群体中感兴趣的核酸的存在,以及将感兴趣的核酸渗入群体中的方法。本发明还涉及包含人工标志物等位基因的生物体,特别是植物和种子,并且涉及人工标志物等位基因的多种用途。
背景技术
一个多世纪以来,植物育种在增加作物产量方面取得了显著进展。但植物育种者不断面临新的挑战。农业方式的变化导致需要开发具有新农艺性状的基因型。新的真菌和害虫不断进化,并克服现有的寄主植物抗性。新的土地区域经常被用于耕种,使植物暴露于变化的生长条件下。最后,全球人口的增加将需要增加粮食作物。因此,增加作物产量的任务对植物育种者和农业科学家提出了前所未有的挑战。
植物育种将在协调解决上述问题的努力中发挥关键作用。考虑到当前的产量趋势、预计人口增长和对环境的压力,与产量稳定性和可持续性有关的性状是植物育种工作的主要重点。这些性状包括持久抗病性、非生物胁迫耐受性,以及养分利用效率和水分利用效率。
尽管对常规育种来持续提高产量感到乐观,将需要新的生物技术解决方案来最大化成功的机率。生物技术的一个领域,即DNA标志物技术,源于分子遗传学和基因组学的研究,为植物育种提供了广阔的前景。由于遗传连锁,DNA标志物可用于检测潜在于期望性状的基因中等位基因变异的存在。通过使用DNA标志物辅助植物育种,效率和精度可以大大提高。DNA标志物在植物育种中的使用称为标志物辅助选择(MAS),并且是‘分子育种’新学科的组成部分。
在过去的二十年中,DNA标志物技术在植物育种中的使用显著增加。但是,使用标志物辅助育种和鉴定合适的标志物是一个费力且费时的过程。此外,标志物辅助育种是有限的,因为植物基因组广泛分布着重复序列,其严重阻碍了诊断标志物的开发和使用的可能性。特别是对于基因组大小较大的农作物而言,低拷贝数DNA片段的鉴定可能具有高挑战性。此外,在许多情况下,只有与性状基因具有极其紧密连锁的DNA多态性或甚至是因果多态性本身,才能被开发用于转化为有用的DNA标志物。
EP 2 342 337 B1描述了一种在靶区域引入唯一的、人造的和选择性的标志物,而不是鉴别和开发自然存在的多态性的方法。所述策略基于鉴别和选择与感兴趣的性状紧密连锁的DNA片段,并通过将单核苷酸多态性(SNP)插入该DNA片段的基本保守核苷酸组成中而将该片段转化为选择性标志物。然而,EP 2 342 337 B1中描述的方法例如具有耗时且费力并且产生灵敏度和可靠性低的标志物的缺点,使得所得的标志物不适用于质量控制的目的。
因此,提供克服上述问题的人工标志物等位基因及其制备方法是有利的。
发明内容
本发明通过提供尤其可以用于质量控制应用的具有升高的灵敏度和可靠性的人工InDel标志物等位基因,而克服了这些问题。
根据本发明的第一方面,提供了一种制备用于鉴定生物体中感兴趣的核酸(其优选编码赋予感兴趣的性状的多肽)的人工标志物等位基因的方法,所述方法包括:
(a)鉴定生物体的基因组中与感兴趣的核酸遗传上连锁的至少一个基因组基因座,以及
(b)将至少一个InDel引入所述至少一个基因组基因座中,
从而制备可随感兴趣的核酸一起遗传给所述生物体后代的标志物等位基因。
根据本发明的第二方面,提供了一种用于在含感兴趣的核酸的个体和不含感兴趣的核酸的个体的混合群体中确定感兴趣的核酸(其优选编码赋予感兴趣的性状的多肽)的存在的方法,所述方法包括使用对人工标志物等位基因具有特异性的至少一个分子标志物和/或对野生型基因组基因座具有特异性的至少一个分子标志物来检测本发明的第一方面所述的人工标志物等位基因。
根据本发明的第三方面,提供了一种用于评估包含感兴趣的核酸(其优选编码赋予感兴趣的性状的多肽)的个体的群体的同质性的方法,所述方法包括使用对人工标志物等位基因具有特异性的至少一个分子标志物和/或对野生型基因组基因座具有特异性的至少一个分子标志物来检测本发明的第一方面所述的人工标志物等位基因并确定群体中的同质性,其中检测出野生型基因组基因座指示群体中包含感兴趣的核酸的个体的异质性分布。
根据本发明的第四方面,提供了一种用于将感兴趣的核酸(其优选编码赋予感兴趣的性状的多肽)渗入个体的群体中的方法,所述方法包括以下步骤:
(i)在包含感兴趣的核酸的供体生物体中制备根据本发明的第一方面的人工标志物等位基因;
(ii)将所述供体生物体与不含感兴趣的核酸的同一物种的受体生物体杂交,以产生异质遗传组成的后代;
(iii)回交/自交和选择人工标志物等位基因的存在以得到纯合遗传组成的后代,其包含受体生物体背景中的感兴趣的核酸,
(iv)任选地,重复步骤(iii)至少一次,优选重复多次。
所述方法的步骤(iii)基于使用专门用于检测子代中存在人工标志物等位基因的至少一个分子标志物和/或专门用于检测后代中不存在人工标志物等位基因的至少一个分子标志物进行的检测。
受体生物体可以是植物、动物、微生物或真菌,优选为植物,更优选为优良品系植物、野生型植物、突变植物、基因编辑的或碱基编辑的植物,或转基因植物。
根据本发明的第五方面,提供了一种制备人工标志物等位基因的方法,所述方法包括设计一个或多个基因型特异性InDel,并将所述InDel引入生物体基因组中的基因组基因座中,其中所述基因组基因座与感兴趣的核酸(其优选编码赋予感兴趣的性状的多肽)遗传上连锁。还提供了一种可通过此方法得到的包含至少一个基因型特异性InDel的人工标志物等位基因。
根据本发明的第六方面,提供了根据第五方面所述的人工标志物等位基因或可通过根据本发明的第一方面所述的方法得到的人工标志物等位基因在标志物辅助育种中的用途。
还提供了可编程核酸酶用于产生用于鉴定生物体基因组中感兴趣的核酸的根据本发明的第一方面所述的人工标志物等位基因的用途。所述可编程核酸酶可以选自CRISPR核酸酶系统、锌指核酸酶、TALEN、大范围核酸酶或碱基编辑器。
根据本发明的第七方面,提供了一种包含可通过根据第一方面所述的方法得到的人工标志物等位基因的生物体,优选为植物或其种子或包含根据第五方面所述的人工标志物等位基因的生物体,优选为植物或其种子。
发明详述
本发明的第一方面提供了一种制备用于鉴定生物体中感兴趣的核酸(其优选编码赋予感兴趣的性状的多肽)的人工标志物等位基因的方法,所述方法包括:
(a)鉴定生物体基因组中与感兴趣的核酸遗传上连锁的至少一个基因组基因座,以及
(b)将至少一个InDel引入所述至少一个基因组基因座中,
从而制备可随感兴趣的核酸一起遗传给所述生物体后代的标志物等位基因。
感兴趣的核酸优选地编码编码感兴趣的性状的多肽。所述性状可以是表型性状,并且可以例如通过肉眼或通过其它方式(例如,显微镜、通过生物化学分析、基因组分析、转录图谱等)在表型上观察到。所述表型可归因于单个基因或遗传基因座,或可归因于多个基因的作用。具有经济重要性的植物的基因组中的典型性状包括产量相关性状,包括抗倒伏性、花期、抗裂荚性、粒色、胚乳组成、营养含量、除草剂抗性(包括草甘膦抗性、草铵膦/草丁膦抗性、潮霉素(hyg)抗性、原卟啉原氧化酶(PPO)抑制剂抗性、ALS抑制剂抗性和麦草畏抗性)、抗病性(包括抗病毒性、抗真菌性、抗细菌性、抗虫性)、非生物胁迫(包括干旱胁迫、渗透胁迫、热胁迫、冷胁迫、氧化胁迫、重金属胁迫、氮缺乏、磷缺乏、盐胁迫或渍水、和营养利用效率及水分利用效率、雄性不育)抗性或耐受性。在本发明的优选实施方案中,可以基于通过可编程核酸酶或切口酶进行的基因编辑(GE)、基于通过基因编辑器进行的碱基编辑,或基于其组合,通过基于基因编辑(GE)的基因修饰或基于碱基编辑器的基因修饰,将感兴趣的性状人工引入感兴趣的核酸中。
本文所使用的“等位基因”是指特定基因组基因座上的核酸序列或基因的变体形式,且本文所使用的术语“人工标志物等位基因”是指通常在自然界中相关生物体中找不到的人工创造的唯一等位基因。在本发明的上下文中,“人工标志物等位基因”与期望的性状相关的感兴趣的核酸遗传上连锁。因此,本文所使用的“人工标志物等位基因”是指可用于鉴定生物体基因组中与感兴趣的性状相关的感兴趣的核酸的核苷酸多态性。
用于制备人工标志物等位基因的方法的第一步骤包括鉴定生物体基因组中与感兴趣的核酸遗传上连锁的至少一个基因组基因座。这样的基因组基因座是在生物体基因组内唯一,且在生物体的不同基因型之间高度保守的基因组基因座。动物或植物育种领域的技术人员将理解在本发明的上下文中术语“高度保守的”的含义。特别地,本文所使用的术语“高度保守的”是指这样的基因组序列(优选地长度在100bp至200bp之间),其在生物体不同基因型之间共有至少90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%、99%、99.5%或100%序列相同性。如本文所使用的,“基因型”是指个体或个体群组在一个或多个遗传基因座上的基因组成。个体或个体群组的基因型是全部基因的总和,并决定其表型。当提到生物体不同基因型之间的保守性时,这可能是生物体特定物种、栽培种或种族群体中不同个体之间的保守性。“栽培种”和“品种”在本文中可互换使用,用于指一个物种(例如,甜菜(B.vulgaris))中的一组植物,其共有某些遗传性状使得产生将其与所述物种内的其它可能的品种区分开的相同表型。栽培种可以是自交系或杂交体,这适用于相关农作物。
为了鉴定在不同基因型之间高度保守的基因组基因座,在一组个体中进行详细的序列分析以鉴定约100-200个碱基对(bp)的区域。所鉴定的区域在靶基因组中必须是唯一的,以允许通过基因组编辑或碱基编辑来特异性插入InDel。然后,高度保守的基因组基因座允许在基因型和遗传背景的最宽可能范围内普遍使用所述标志物。
所述基因组基因座理想地位于感兴趣的核酸的任何编码区域(例外情况下,可能有理由选择编码区域)、剪接信号或调控元件,3’UTR,5’UTR,内含子,miRNA,非编码RNA和任何其它可能特征之外。采取这些预防措施是因为不能排除基因组相互作用。基因的启动子区域通常不能很好地表征,因此靶基因3’方向的位置是优选的。但是,如果基因5’区域的位置是有利的,则假定启动子长度为1000bp,并且将不会选择所述启动子用于引入所述至少一个InDel。
此外,基因组基因座应优选与感兴趣的核酸物理邻近,并且与感兴趣的核酸完全连锁不平衡(LD),以避免在重组过程中人工标志物等位基因与感兴趣的核酸分离。术语“连锁不平衡”(LD)是指遗传基因座或性状(或二者)的非随机分隔,并且表示,相关基因座沿染色体的长度在足够的物理和/或遗传接近内,使得它们以大于随机频率(即,非随机频率)分隔在一起。
基因组基因座与感兴趣的核酸紧密连锁,因此,当将InDel引入基因组基因座中以创建人工标志物等位基因时,所述标志物等位基因可与感兴趣的核酸一起遗传给所述生物体的后代。基因组基因座理想地位于感兴趣的核酸侧翼的区域中,并且优选位于感兴趣的核酸的3’端处。感兴趣的核酸侧翼的区域优选与所述感兴趣的核酸相距至少2cM、至少1cM、至少0.5cM、至少0.1cM、至少0.09cM、至少0.08cM、至少0.07cM、至少0.06cM、至少0.05cM、至少0.04cM、至少0.03cM、至少0.02cM、至少0.01cM、至少0.009cM、至少0.008cM、至少0.007cM、至少0.006cM、至少0.005cM、至少0.004cM、至少0.003cM、至少0.002cM、至少0.001cM、至少0.0009cM、至少0.0008cM、至少0.0007cM、至少0.0006cM、至少0.0005cM、至少0.0004cM、至少0.0003cM、至少0.0002cM或至少0.0001cM,或相距上述值之间的任意处。本文所使用的“cM”定义了染色体上两个基因座之间的距离,并且是本领域众所周知的重组频率的量度。
术语“侧翼区域……”或“位于……侧翼的区域”在本文中可互换使用,并且是指与其中插入至少一个InDel以产生人工InDel标志物等位基因的感兴趣的核酸遗传上连锁的预定基因组基因座的核酸序列。
可选地,基因组基因座可以在感兴趣的核酸本身内。当基因组基因座位于感兴趣的核酸内时,所述基因组基因座应优选位于感兴趣的核酸的任何编码区域、剪接信号或调控元件,3’UTR,5’UTR,内含子,miRNA,非编码RNA等之外,因此,在将所述至少一个InDel引入基因组基因座时,不会导致功能丧失。
就可以确定的而言,插入所述至少一个InDel之后得到的基因组基因座的核苷酸序列,即所得的人工标志物等位基因,在所述生物体的基因组中是唯一的,这意味着它不会发生或极少发生在有关生物体的种质(germplasm)中。因此,所得的生物体在其与感兴趣的核酸紧密连锁的基因序列中包含特定引入的改变,所述感兴趣的核酸优选编码赋予感兴趣的性状的多肽。现在可以在标志物辅助育种中以任何常规方式使用和分析这种特定引入的InDel(其产生人工标志物等位基因),并如在本文中进一步描述的。
如本文所使用的,术语“种质”是指具有特定分子组成的遗传物质,其提供了生物体或细胞培养物和所述物质集合的某些或全部遗传品质。育种者使用术语“种质”来表示来自例如野生型物种、优良或家养育种系的遗传物质的集合,从中可以提取它们以创建品种或种族。如本文所使用的,“种质”可以是任何有生命的遗传资源,包括但不限于从其可以生长新植物的细胞、种子或组织,或植物部分(例如可培育为整株植物的叶、茎、花粉、胚珠、或细胞)。
“生物体”优选地为植物,但也可以是动物、真菌或微生物。本文所使用的术语“植物”是指整株植物、其祖先及其后代,以及指植物部分。植物部分可包括种子、组织、细胞、器官、叶、茎、根、新生胚根、花、花器部分、花瓣、果实、花粉、花粉管、花药丝、胚珠、胚囊、卵细胞、子房、接合子、胚胎、合子胚、体细胞胚、顶端分生组织、维管束、中柱鞘、配子体、孢子和插枝。本文所使用的术语“植物”还包括可以培育为整株植物或植物部分的植物种质。后代和祖先植物可以来自任何后代(filial generation)(例如,P、F1、F2、F3等)以及因其回交而产生的任何植物。
所述植物可以是任何植物,并且可以例如选自大麦(Hordeum vulgare)、球茎大麦(Hordeum bulbusom)、高粱(Sorghum bicolor)、甘蔗(Saccharum officinarium)、玉米(Zea mays)、谷子(Setaria italica)、小粒野生稻(Oryza minuta)、水稻(Oriza sativa)、澳洲野生稻(Oryza australiensis)、高秆野生稻(Oryza alta)、小麦(Triticumaestivum)、黑麦(Secale cereale)、苹果(Malus domestica)、二穗短柄草(Brachypodiumdistachyon)、海滨大麦(Hordeum marinum)、节节麦(Aegilops tauschii)、Daucusglochidiatus、甜菜(Beta vulgaris)、Daucus pusillus、Daucus muricatus、野胡萝卜(Daucus carota)、巨桉(Eucalyptus grandis)、美花烟草(Nicotiana sylvestris)、绒毛状烟草(Nicotiana tomentosiformis)、普通烟草(Nicotiana tabacum)、番茄(Solanumlycopersicum)、马铃薯(Solanum tuberosum)、中果咖啡(Coffea canephora)、葡萄(Vitisvinifera)、Erythrante guttata、黄花螺旋狸藻(Genlisea aurea)、黄瓜(Cucumissativus)、川桑(Morus notabilis)、Arabidopsis arenosa、琴叶拟南芥(Arabidopsislyrata)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)、须弥芥(Crucihimalaya himalaica)、卵叶须弥芥(Crucihimalaya wallichii)、弯曲碎米荠(Cardamine flexuosa)、北美独行菜(Lepidium virginicum)、荠菜(Capsella bursa pastoris)、Olmarabidopsis pumila、硬毛南芥(Arabis hirsute)、甘蓝型油菜(Brassica napus)、Brassica oeleracia、芜菁(Brassica rapa)、萝卜(Raphanus sativus)、芥菜(Brassica juncea)、黑芥(Brassicanigra)、芝麻菜(Eruca vesicaria subsp.sativa)、甜橙(Citrus sinensis)、麻疯树(Jatropha curcas)、毛果杨(Populus trichocarpa)、蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)、Cicer yamashitae、Cicer bijugum、鹰嘴豆(Cicer arietinum)、Cicer reticulatum、Cicer judaicum、木豆(Cajanus cajanifolius)、蔓草虫豆(Cajanus scarabaeoides)、菜豆(Phaseolus vulgaris)、大豆(Glycine max)、紫云英(Astragalus sinicus)、百脉根(Lotus japonicas)、夏堇(Torenia fournieri)、洋葱(Allium cepa)、大葱(Alliumfistulosum)、大蒜(Allium sativum)和韭菜(Allium tuberosum)。
用于制备人工标志物等位基因的方法中的第二步骤包括将至少一个InDel引入至少一个基因组基因座中。
本文所定义的“InDel”或“InDel标志物”是指生物体基因组内基因组基因座中的至少一个核苷酸插入和/或至少一个核苷酸缺失。所述至少一个核苷酸插入在本文中也称为“插入标志物”,且所述至少一个核苷酸缺失在本文中也称为“缺失标志物”。
在本发明的上下文中,“InDel”是指在预定基因组基因座的核苷酸序列中插入和/或缺失至少一个核苷酸,从而通过至少一个核苷酸改变基因组基因座的核苷酸序列的长度。因此,在本发明的上下文中,“InDel”是指向内源性核苷酸序列中并入至少一个额外的核苷酸,或从内源性核苷酸序列中去除至少一个核苷酸。与InDel相反,“单核苷酸多态性”(SNP)表示在基因组序列中的单核苷酸(A、C、T或G)发生改变时发生的序列变异。SNP是取代或替换给定核苷酸序列内的单核苷酸,从而使核苷酸序列的长度保持不变。
在本发明的优选实施方案中,所述至少一个InDel包含一个以上核苷酸插入和/或一个以上核苷酸缺失。所述至少一个InDel可包含插入1-60个碱基对的序列,所述序列与其中待引入所述至少一个InDel的生物体基因组非同源。任选地,InDel可包含插入超过60个碱基对的序列,所述序列与其中待引入所述至少一个InDel的生物体基因组非同源的。所述插入可以任选地包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个碱基对的序列或由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个碱基对的序列组成,所述序列与其中引入所述至少一个InDel的生物体基因组非同源。优选地,所述插入包含至少9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碱基对的序列的核苷酸序列或由至少9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碱基对的序列的核苷酸序列组成,所述序列与其中引入所述至少一个InDel的生物体基因组非同源。在本文中,术语“非同源”是指,所述插入物在生物体基因组中是唯一的,并且与生物体基因组中的核酸序列不具有同源性,所述同源性可能导致由于同源性定向修复而将所述插入物并入不期望的基因组位置中。在本文中,术语“非同源”还指,插入物在引入基因组基因座中时,会产生人工标志物等位基因,其在相关生物体的基因组内是唯一的。
在制备人工标志物等位基因的方法中,需要评估和选择预定基因组基因座中的插入物及其侧翼区域,以进行最佳测定设计,这意味着它们在给定生物体的基因组中必须是单一且不重复的。此外,所述插入物及其侧翼区域应显示出以下特征中的一项或多项:GC含量为约50%、G/C和A/T碱基之间分布平衡、二级结构(secondary structure)的机率降低。在预定基因组基因座的侧翼区域中插入至少一个核苷酸应产生在生物体不同基因型之间呈单态(即,唯一)的插入标志物等位基因。利用标准生物信息学工具和测序方法,通过对短序列进行迭代和重复分析来进行此项分析。
此外,侧翼区域在生物体的基因库中应该是单态的,这意味着它在生物体的不同基因型之间是高度保守的。
在本发明的另一个实施方案中,所述至少一个InDel可以额外地或可选择地包含在生物体基因组中基因组基因座中缺失1-60个碱基对的序列或由在生物体基因组中基因组基因座中缺失1-60个碱基对的序列组成。任选地,所述缺失是生物体基因组中基因组基因座中超过60个碱基对的序列的缺失。所述缺失可以是缺失至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60个碱基对。优选地,所述缺失包含至少9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碱基对的核苷酸序列或由至少9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碱基对的核苷酸序列组成。
所选择的缺失是不会导致基因或基因组区域内功能丧失的缺失。例如,缺失标志物优选位于与期望的感兴趣的性状相关的基因之外和/或位于非编码区域中,以避免任何功能丧失。在设计合适的缺失标志物时,本领域技术人员将容易理解要避免哪些基因组区域。
此外,需要选择预定基因组基因座中的缺失及其侧翼区域,以进行最佳测定设计,这意味着它们在给定生物体的基因组中必须是单一且不重复的,并表现出以下特征中的一项或多项:GC含量为约50%、G/C和A/T碱基之间分布平衡、二级DNA结构的机率降低。在预定基因组基因座的侧翼区域中缺失至少一个核苷酸应产生在生物体不同基因型之间呈单态的缺失标志物等位基因。利用标准生物信息学工具,通过对短序列进行迭代和重复分析来进行此项分析。
“G/C和A/T碱基之间分布平衡”是指GC含量为40%-55%,且相应的A/T具体取决于实际的GC含量即为60%-45%。所述分布可能是40%G/C和60%A/T、41%G/C和59%A/T、42%G/C和58%A/T、43%G/C和57%A/T、44%G/C和56%A/T、45%G/C和55%A/T、46%G/C和54%A/T、47%G/C和53%A/T、48%G/C和52%A/T、49%G/C和51%A/T、50%G/C和50%A/T、51%G/C和49%A/T、52%G/C和48%A/T、53%G/C和47%A/T、54%G/C和46%A/T,和/或55%G/C和45%A/T。G/C和A/T碱基之间的平衡分布会影响预定基因座处或邻近预定基因座的DNA的二级结构的产生,由此这种二级结构会影响分子标志物的退火。本领域技术人员充分意识到这一事实,并且能够预测特定序列对于最佳测定设计的适用性的计算。
此外,侧翼区域在生物体的基因库中应该是单态的(即,高度保守的),这意味着它在生物体的不同基因型之间是高度保守的。
插入和/或缺失的大小可以根据待开发的标志物测定法而发生变化。
在本发明的含义中,“引入”包括通过以下方式进行稳定或瞬态整合:转化(包括农杆菌介导转化)、转染、显微注射、基因枪轰击、使用如CRISPR系统(例如,CRISPR/Cas,特别是CRISPR/Cas9或CRISPR/Cpf1、CRISPR/CasX或CRISPR/CasY)、TALEN、锌指核酸酶或大范围核酸酶的基因编辑技术进行插入、任选地通过以下提及的基因编辑技术(包括优选地修复模板)之一进行同源重组、使用随机或靶向诱变(如TILLING或所述基因编辑技术)进行基因组基因座修饰等。
优选地,可以使用用于引入核苷酸插入和/或缺失的任何已知的合适诱变方法将所述至少一种InDel引入基因组基因座中。
例如,可以使用可编程核酸酶或切口酶引入所述至少一个InDel。可编程核酸酶或切口酶可选自任何已知的基因编辑(GE)工具,例如,定点核酸酶(SDN),包括CRISPR核酸酶系统,包括CRISPR/Cas9系统、CRISPR/Cfp1系统、CRISPR/CasX系统、CRISPR/CasY系统,锌指核酸酶、TALEN、大范围核酸酶和/或其任何组合、变体或催化活性片段。
定点核酸酶(SDN)或切口酶使用DNA切割酶(核酸酶)来产生靶向(或定点)DNA断裂。SDN应用的变体通常分为SDN-1(无修复模板)、SDN-2(通过使用DNA修复模板进行基因编辑)和SDN-3(通过使用DNA修复模板引入较大的插入/缺失),取决于DNA双链断裂修复或DNA单链断裂修复的结果。
任何可编程核酸酶或切口酶均可用于将点突变、插入或缺失引入生物体基因组中。本领域技术人员能够很容易地基于基因组序列和期望的效率来选择合适的技术。
例如,可以通过经典的SDN-1方法来产生点突变(即,非同源性末端接合(NHEJ)以随机插入/缺失一个或多个碱基,从而引起点突变)。在待产生点突变的位置(或与其紧密接近的位置)处,切割双链。然后NHEJ途径修复双链断裂,从而随机产生期望的点突变。选择一个特定的点突变是困难的,因为需要筛选大量的植物,因此,优选SDN-2方法(如下所述)将特定的点突变引入预定基因组位置处(即,使用修复模板进行同源性定向修复(HDR))。
对于SDN-2方法,在待引入点突变的预定基因组位置(或与其紧密接近的位置)处,切割DNA双链。通过在切割位点上游和下游添加具有同源侧翼区域的“修复模板”,可以通过HDR引入期望的点突变。这增加获得期望的突变的可能性。
通常而言,用于产生点突变的所述方法也可以用于产生缺失。除上述方法外,可能通过在待缺失序列的上游和下游产生两个双链断裂而缺失期望的序列。然后在选择步骤中,重要的是要确保发生精确的切割。
用于产生点突变的所述方法也可用于产生插入。优选SDN-2方法来产生插入,但在某些情况下SDN-1方法也可以是有用的。
本上下文中的CRISPR核酸酶系统描述了一种分子复合物,所述分子复合物包含至少一个小的且个体的向导RNA与Cas核酸酶或另一种CRISPR核酸酶(如Cpf1核酸酶)组合的分子复合物(Zetsche等(2015);“Cpf1 is a single RNA-guided endonuclease of aclass 2CRISPR-Cas system”,Cell 163(3):759-771),其可产生特定的DNA双链断裂。术语“CRISPR多肽”、“CRISPR核酸内切酶”、“CRISPR核酸酶”、“CRISPR蛋白”、“CRISPR效应子”或“CRISPR酶”在本文中可互换使用,并且是指作为位点特异性DNA核酸酶或切口酶的任何天然存在或人工的氨基酸序列,或编码其的核酸序列,其中“CRISPR多肽”源自任何生物体的CRISPR系统,其可以被克隆并用于靶向的基因组工程化。术语“CRISPR核酸酶”或“CRISPR多肽”还包括天然存在的CRISPR效应子序列或编码其的各个序列的突变体或催化活性片段或融合体。因此,“CRISPR核酸酶”或“CRISPR多肽”也可例如是指在其天然环境中具有内切核苷酸功能的CRISPR切口酶或甚至CRISPR多肽的核酸酶缺陷型变体。
术语“向导RNA”、“gRNA”、“单向导RNA”或“sgRNA”在本文中可互换使用,并且是指CRISPR RNA(crRNA)和反式激活crRNA(tracrRNA)的合成融合体,或者所述术语是指仅由crRNA和/或tracrRNA组成的单RNA分子,或者所述术语是指单独包含crRNA或tracrRNA部分的gRNA。因此,tracr和crRNA部分(如果按照相应的CRISPR多肽的要求存在的话)不一定必须存在于一个共价连接的RNA分子上,但是它们也可以包含两个单独的RNA分子,其可以缔合或可以通过非共价或共价相互作用而缔合以提供根据本公开的gRNA。例如,在诸如Cpf1的单RNA向导的核酸内切酶的情况下(参见Zetsche等,2015,同上),作为单向导核酸序列的crRNA可能足以介导DNA靶向。
如本文所使用的,术语“锌指核酸酶”是指包含核酸切割结构域的核酸酶,所述核酸切割结构域与含锌指阵列的结合结构域连接。切割结构域可以是II型限制性核酸内切酶Fokl的切割结构域。锌指核酸酶可以设计为虚拟靶向给定核酸分子中的任何期望序列以进行切割,并且设计锌指结合结构域以结合复杂基因组背景下唯一位点的这种可能性允许在活细胞中对单个基因组位点的靶向切割。将双链断裂靶向期望的基因组基因座可用于将InDel引入期望的基因组基因座的核苷酸序列中。可以通过本领域技术人员众所周知的方法产生锌指核酸酶以靶向感兴趣的位点。例如,可以通过结合已知特异性的各个锌指基序来设计具有期望的特异性的锌指结合结构域。与DNA结合的锌指蛋白Zif268的结构为这一领域的许多工作提供信息,并且已描述了为64个可能的碱基对三联体中的每一个获取锌指,并然后混合并匹配这些模块化锌指以设计具有任何期望的序列特异性的蛋白的概念(Pavletich NP,Pabo CO(1991);“Zinc finger-DNA recognition:crystal structure ofa Zif268-DNA complex at 2.1A”,Science 252(5007):809-17)。
本文所使用的术语“TAL效应子核酸酶”(TALEN)是指序列特异性核酸酶或编码其的核酸。TAL效应子是植物病原细菌的蛋白质,且被病原体注入到植物细胞中,在这里它们到达细胞核,并作为转录因子发挥作用以启动特异性植物基因。TAL效应子的主要氨基酸序列决定其所结合的核苷酸序列。因此,可以预测TAL效应子的靶位点,并且还可以工程化和产生TAL效应子用以结合特定核苷酸序列的目的。特异性取决于不完整的效应子可变数目,通常是34个氨基酸重复(Schornack et al.(2006)J.Plant Physiol.163:256)。多态性主要在重复位置12和13处,其在本文中称为重复可变双残基(RVD)。TAL效应子的RVD以直接、线性的方式对应于其靶位点中的核苷酸,一个RVD对应一个核苷酸,具有一些简并性且没有明显的背景依赖性。这一发现为蛋白质-DNA识别提供一种有价值的机制,其使得能够预测新的靶特异性TAL效应子的靶位点。TAL效应子本身并不包含核酸酶结构域。因此TAL效应子核酸酶或TALEN表示其中TAL效应子编码核酸序列与编码核酸酶或核酸酶的一部分的序列融合的融合构建体,所述核酸酶的一部分通常是来自II型限制性核酸内切酶(例如,FokI)的非特异性切割结构域(Kim et al.(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93:1156-1160)。可以与效应子结构域融合的其它有用的核酸内切酶可包括,例如,HhaI、HindIII、Nod、BbvCI、EcoRI、BglI和AlwI。可以利用某些核酸内切酶(例如,FokI)仅用作二聚体的事实来增强TAL效应子的靶特异性。例如,在某些情况下,每个FokI单体都可以与识别不同DNA靶序列的TAL效应子序列融合,并且只有当两个识别位点紧密接近时,非活性单体聚在一起形成功能性酶。通过要求DNA结合来激活核酸酶,可以产生高位点特异性的限制性酶。
如本文所使用的,术语“大范围核酸酶”是指以大于12个碱基对的识别序列结合双链DNA的核酸内切酶。天然存在的大范围核酸酶可以是单体(例如,I-SceI)或二聚体(例如,I-CreI)。本文所使用的术语大范围核酸酶可用于指单体大范围核酸酶、二聚体大范围核酸酶,或指缔合以形成二聚体大范围核酸酶的单体。术语“归巢核酸内切酶”与术语“大范围核酸酶”同义。由于大范围核酸酶的识别位点大,该位点在任何给定基因组中通常只出现一次。因此,大范围核酸酶可用于在哺乳动物细胞和植物中实现非常高水平的基因靶向效率(Rouet et al.,MoI.Cell.Biol.,1994,14,8096-106;Choulika et al.,MoI.Cell.Biol.,1995,15,1968-73)。在大范围核酸酶中,归巢核酸内切酶的LAGLIDADG家族在过去几年中已成为研究基因组和的重要工具。术语“LAGLIDADG大范围核酸酶”是指包括单个LAGLIDADG基序的大范围核酸酶(其为天然二聚体),或者是指包括两个LAGLIDADG基序的大范围核酸酶(其为天然单体)。
例如,也可以使用可编程碱基编辑器,任选地与可编程核酸酶结合,而引入所述至少一个InDel。本文所使用的可编程“碱基编辑器”是指具有与其衍生的蛋白质相同的催化活性的蛋白质或其片段,所述蛋白质或其片段(单独或作为分子复合物提供在本文中称为碱基编辑复合物时)具有介导靶向碱基修饰(即,转化感兴趣的碱基而产生感兴趣的点突变)的能力。优选地,在本发明的上下文中,至少一个碱基编辑器暂时性或永久性地连接至至少一个位点特异性的可编程效应子,或任选地连接至至少一个位点特异性的、可编程效应子复合物的组分。所述连接可以是共价的和/或非共价的。多个出版物已表明,使用与胞苷脱氨酶结构域载脂蛋白B mRNA编辑催化多肽(APOBEC1)(例如,衍生自大鼠的APOBEC)连接的CRISPR/Cas9切口酶或非功能性核酸酶,进行靶向碱基转化,主要是胞苷(C)转化为胸腺嘧啶(T)。胞苷脱氨酶催化胞嘧啶(C)的脱氨基反应,并产生尿嘧啶(U),其具有胸腺嘧啶(T)的碱基配对特性。大多数已知的胞苷脱氨酶在RNA上起作用,并且为数不多的接受DNA的实例需要单链(ss)DNA。对dCas9靶DNA复合物的研究表明,在形成Cas9向导RNA-DNA‘R-环’复合物后,替换的DNA链的至少九个核苷酸(nt)是不成对的(Jore et al.,Nat.Struct.Mol.Biol.,18,529-536(2011))。事实上,在Cas9 R-环复合物的结构中,替换的DNA链上的前间区序列的前11个nt是无序的,这表明它们的运动不是高度受限的。还已推测,Cas9切口酶诱导的非模板链中的胞嘧啶处的突变可能是由细胞胞嘧啶脱氨酶对它们的可及性引起的。有理由认为,R-环中此ssDNA片段的一个子集可以充当dCas9系胞苷脱氨酶(dCas9-tethered cytidine deaminase)的有效底物,以实现将DNA中的C直接、可编程转化为U(Komor等,同上)。近期,Goudelli等((2017).Programmable base editing of A·T toG·C in genomic DNA without DNA cleavage.Nature,551(7681),464.)描述了介导基因组DNA中A·T转化为G·C的腺嘌呤碱基编辑器(ABE)。
因此,根据本发明的任何碱基编辑复合物可以包含至少一种胞苷脱氨酶或其催化活性片段。所述至少一种碱基编辑复合物可包含胞苷脱氨酶或其催化活性片段形式的结构域,作为碱基编辑器。
在本发明的一个实施方案中,可以修饰包含期望的性状的供体植物,例如通过使用可编程核酸酶将InDel引入本文所述的合适的基因组基因座中以产生人工InDel标志物等位基因。在人工InDel标志物等位基因包含缺失的情况下,设计对缺失的序列具有特异性的引物。本领域技术人员将容易地设计合适的引物。
本文所使用的“引物”是指寡核苷酸(合成的或天然存在的),当置于互补链的合成由聚合酶催化的条件下时,所述寡核苷酸能够作为沿互补链的核酸合成或复制的起始点。通常,引物的长度为约10-30个核苷酸,但是可以更长或更短。引物可以以双链形式提供,但更常使用单链形式。引物还可包含可检测标记,例如5’端标记。
在将供体植物与野生型植物杂交后,通过例如(q)PCR或其它合适的技术分析后代样品中存在或不存在缺失标志物等位基因。本文所定义的“野生型”植物/生物体是指与其中已引入至少一个InDel的供体植物相同物种或品种的未修饰植物。
对缺失的序列具有特异性的引物获得的信号指示子代植物具有野生型基因型,其缺乏感兴趣的供体性状,或者至少感兴趣的性状没有被子代植物以纯合的方式遗传。相反,没有对于引物1+2的信号(见图1A)可以表明供体性状的同质繁殖(homogenousmultiplication)。然而,仍然不确定没有信号是否确实由于缺乏供体性状,或者是否其它因素(例如,引物退火不足等)是有责任的。为了提高引物特异性,缺失的长度优选为至少约10bp,优选长度为约20bp。
在人工InDel标志物等位基因包含插入和缺失的组合时,可以使用本文定义的可编程核酸酶,在感兴趣的核酸(其优选编码赋予感兴趣的性状的多肽)的侧翼区域内的预定基因组基因座插入与期望的性状连锁的插入和缺失。对插入具有特异性的引物(见以下说明中的引物3+4)可用于检测供体性状。由于在野生型中不存在插入,阳性信号可靠地指示后代植物中存在供体性状,使得存在或不存在期望的性状的评估具有高度特异性并且更加准确。此外,对缺失标志物具有特异性的引物可用于鉴定的确含有期望的性状的子代植物(对引物1+2无信号)。
因此,在确定期望的性状存在与否时,插入与缺失的组合更为可靠,因为存在/不存在由阳性PCR信号确定。所述方法允许评估供体植物和野生型植物杂交获得的子代样品的基因组中是否存在期望的性状,以及供体性状是以纯合还是杂合方式繁殖的。
因此,根据优选实施方案,本发明的方法包括引入包含插入和缺失的InDel。插入和/或缺失优选为至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碱基对。
如图1B所示,在此优选实施方案中,引物1+2可以完全位于缺失区域中,因此仅检测到野生型基因型。即使引物之一位于缺失之外(或两个引物部分地位于缺失之外),标志物系统仍具有特异性,因为将只有对于野生型基因型才会得到PCR产物。因此,只要引物的大部分(例如10bp)位于缺失区域内,就可以确保标志物系统的特异性。
除了对缺失具有特异性的引物1+2之外,还可以使用对插入具有特异性的额外的引物。例如,引物3+4可以完全位于插入区域中,使得仅检测到供体基因型。即使其中引物之一位于插入之外(或两个引物部分地位于插入之外),标志物系统仍具有特异性,因为只要有至少一个引物位于插入区域中,将只有对于供体基因型得到PCR产物。
因此,本文所述的本发明方法中的插入和缺失的组合以及使用对所插入的InDel具有特异性的引物,提供了确定存在或不存在期望的性状的可靠策略,因为通过阳性PCR信号确定存在/不存在显著降低“假阳性”或“假阴性”的可能性。
在本文所述的本发明方法的另一个实施方案中,在育种过程开始时,即在供体与期望的优良品系杂交之前,将至少一个InDel有利地引入供体植物基因组(其包含感兴趣的核酸,其优选地编码赋予感兴趣的性状的多肽)中的基因组基因座中。“优良品系”是指经过育种和选择优异农艺性状而得到的任何品系。许多优良品系是本领域技术人员可获得和已知的。
上述方法确保所有与供体杂交的优良品系都能很容易地针对InDel标志物等位基因进行筛选。通过基于给定供体基因组背景下产生的InDel标志物等位基因设计一种筛选测定法,可以对不同优良品系使用一个已建立的筛选系统,来评估此优良品系是否已经遗传期望的性状。这种方法避免了费力且耗时地开发针对通过使优良品系与供体品系杂交而在其中插入InDel标志物等位基因的给定优良品系的遗传背景而设计的标志物测定法。因此,使用上述方法,可以通过使用针对性状供体的基因组背景而设计的一种已建立的筛选方法来评估不同优良品系中是否包含供体的期望的性状。此外,可以并行测试由于基因组编辑而对于表型的副作用(例如,多效性作用)。
此外,如果已经在育种过程中使用InDel标志物等位基因,则可以对一个或几个优良供体进行编辑,以产生适合于标志物辅助育种和质量控制概念的第二供体世代(见图1C)。
图2示出示例性的上述育种过程。包含期望的性状(星号)的纯合供体与人工InDel标志物等位基因(灰色填充)连锁。通过可编程核酸酶将InDel多态性引入与期望的性状相关的感兴趣的核酸的合适侧翼区域的基因组基因座中。在普通的育种过程中,将纯合供体与数个优良品系杂交以得到(在回交/自交和选择后)包含与期望的性状相关的感兴趣的核酸的纯合优良品系。由于开发对供体品系的基因组背景具有特异性的InDel标志物等位基因,可以通过使用一种专为供体基因型的InDel标志物等位基因的侧翼区域设计的单一筛选测定法,来针对与期望的性状相关的InDel标志物等位基因筛选优良品系。因此,根据所述方法,不需要专为不同优良品系的不同基因型侧翼区域开发筛选测定法。因此,在育种为优良品系的过程(渗入过程)的最开始就将所述至少一个InDel插入与供体性状遗传上连锁的基因组基因座中,提供一种针对独立于其各自的基因组背景而插入的期望的性状,来筛选不同优良品系的方法。
本文所述的术语“回交”是指后代植物反复回交其亲本之一的过程。“供体”包含与InDel标志物等位基因连锁的与期望的性状相关的感兴趣的核酸序列,其被渗入受体品系。“受体”可以是感兴趣的核酸待渗入的优良品系或任何其它植物。如本文所定义的“渗入”是指遗传基因座的期望的等位基因从一个遗传背景传递到另一个遗传背景。初始杂交产生F1代。如图2所示,在多个世代之间重复进行回交(每个连续回交代的后代个体自身回交至相同的亲本基因型),直到得到包含与InDel标志物等位基因连锁的感兴趣的性状的纯合优良品系。
如本文所使用的,在标志物辅助选择或育种的上下文中,“选择(selecting)”或“选择(selection)”是指基于某些预定标准挑选或筛选期望的个体(正常是从群体中)的行为。合适的选择技术是众所周知的,并且是植物育种领域中任何技术人员的实验设置的常规部分。
将InDel引入基因组基因座中,得到可与感兴趣的核酸一起遗传给所述生物体的后代的人工标志物等位基因。人工标志物等位基因(一旦将InDel引入基因组区域)可以根据其多核苷酸长度和/或序列进行检测和区分。
因此,可以使用用于检测基因组DNA样品中多态性的任何可用的方法,来检测人工标志物等位基因,此类检测工具和方法在本文中是指“分子标志物”。基因组DNA样品可以是直接从植物中分离的基因组DNA、克隆基因组DNA或扩增基因组DNA。
基于PCR的方法优选用于检测人工标志物等位基因,但可以可替代地使用带有特异性探针的各种杂交技术中的任一种,包括Southern印迹杂交法(Southern blotting)、原位杂交法和比较基因组杂交法。此外,DNA消化和高效毛细管电泳可用于检测人工标志物等位基因。其它合适的检测方法包括微阵列、基于质谱的方法和/或核酸测序方法。
在本发明的优选实施方案中,分子标志物定义为对人工标志物等位基因具有特异性的一对引物,即,包含至少一个InDel的预定基因组基因座,或野生型基因组基因座。引物的长度优选为至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碱基对。
靶基因的标志物测定法也大多可用。但是,这些测定法并不总是完全诊断的/唯一的。完全诊断的标志物等位基因在每种情况下都是功能多态性。然而,由于感兴趣的核酸/感兴趣的性状的侧翼区域的特征,并非总是可以设计用于标志物辅助选择的合适的标志物测定法。此外,在功能性SNP标志物等位基因的情况下,不可能开发出适用于对育种过程中的新性状进行可靠质量控制测定的高灵敏度测定法。InDel标志物等位基因(与本文所述的一种类似)可以用于靶性状的标志物辅助选择中,并且可以应用于高灵敏度的质量控制测定中。例如,本发明的标志物等位基因可用于确保与相应目标性状相关的种子繁殖的纯度,并避免包含不期望的性状或缺乏期望的感兴趣的性状的种子受到污染。尽管原则上可以基于SNP多态性开发灵敏的测定法,SNP检测的灵敏度在技术上受到限制,并且灵敏度显著低于本文所述的人工InDel标志物等位基因,因为多态性的检测仅基于一个单碱基对错配,可很容易导致假阳性和假阴性的检测。在本文所述的InDel多态性的情况下,可以在数千个样品中检测一个(不期望的)等位基因,而SNP多态性只可以允许在几十个样品中检测(不期望的)等位基因。
根据本发明的第二方面,提供一种用于确定含感兴趣的核酸的个体和不含感兴趣的核酸的个体的混合群体中存在感兴趣的核酸(其优选编码赋予感兴趣的性状的多肽)的方法,所述方法包括使用对人工标志物等位基因具有特异性的至少一个分子标志物和/或对野生型基因组基因座具有特异性的至少一个分子标志物,检测本发明的第一方面所定义的人工标志物等位基因。
所述至少一个分子标志物如本文在本发明的第一方面中所定义的,并且优选为与野生型基因组基因座或人工标志物等位基因退火的一对引物。优选地,所述引物允许检测包含插入和缺失标志物的人工标志物等位基因。所述引物可对基因组基因座中插入或缺失的序列具有特异性。引物的长度优选为至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碱基对。
植物的“群体”是指包括任何数量的自然个体或从中获取的用于评估的样品或数据的集合。
根据本发明的第三方面,提供了一种评估包含感兴趣的核酸(其优选编码赋予感兴趣的性状的多肽)的个体的群体的同质性的方法,所述方法包括使用对人工标志物等位基因具有特异性的至少一个分子标志物和/或对野生型基因组基因座具有特异性的至少一个分子标志物来检测本发明的第一方面所述的人工标志物等位基因并确定群体中的同质性,其中检测出野生型基因组基因座指示群体中包含感兴趣的核酸的个体的异质性分布。
优选地,所述至少一个分子标志物是与野生型基因组基因座或人工标志物等位基因退火的一对引物。优选地,所述引物允许检测包含插入和缺失标志物的人工标志物等位基因。引物可对基因组基因座中插入或缺失的序列具有特异性。引物的长度优选为至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碱基对。
根据本发明的第四方面,提供了一种将感兴趣的核酸(其优选编码赋予感兴趣的性状的多肽)渗入个体的群体中的方法,所述方法包括以下步骤:
(i)在包含感兴趣的核酸的供体生物体中制备根据本发明的第一方面的人工标志物等位基因;
(ii)将所述供体生物体与不含感兴趣的核酸的同一物种的受体生物体杂交,以产生异质遗传组成的后代;
(iii)回交/自交和选择人工标志物等位基因的存在以得到纯合遗传组成的后代,其包含受体生物体背景中的感兴趣的核酸,
(iv)任选地,重复步骤(iii)至少一次,优选重复多次。
所述方法的步骤(iii)基于使用专门用于检测后代中存在人工标志物等位基因的至少一个分子标志物和/或专门用于检测后代中不存在人工标志物等位基因的至少一个分子标志物进行的检测。优选地,所述至少一个分子标志物是与野生型基因组基因座或人工标志物等位基因退火的一对引物。优选地,所述引物使得可以检测包含插入和缺失标志物的人工标志物等位基因。引物可对基因组基因座中插入或缺失的序列具有特异性。引物的长度优选为至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碱基对。
受体生物体可以是优良品系、野生型生物体或转基因生物体。术语“野生型”和“优良”如本文所定义。术语“转基因”是指这样的生物体,其中基因或遗传物质已从一个生物体转移到另一个生物体(通常通过多种基因工程技术中的任何一种),或从同一个生物体转移,但遗传物质不在其基因组中的天然基因座。
根据本发明的第五方面,提供一种制备对感兴趣的核酸具有特异性的人工标志物等位基因的方法,所述方法包括设计一个或多个基因型特异性InDel,并将所述InDel引入生物体基因组中的基因组基因座中,其中所述基因组基因座与感兴趣的核酸连锁。生物体可包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个单独的InDel,其产生用于检测和跟踪目的的各种指纹。
还提供一种包含可通过上述方法得到的至少一个基因型特异性InDel的人工标志物等位基因。
根据本发明的第六方面,提供根据第五方面所述的人工标志物等位基因或可通过根据本发明的第一方面所述的方法得到的人工标志物等位基因在标志物辅助育种中的用途。
本发明的另一个方面涉及InDel标志物等位基因与感兴趣的内源基因的修饰的组合的用途。感兴趣的基因的修饰可通过众所周知的基因编辑方法(例如,定点核酸酶,包括CRISPR核酸酶系统、锌指核酸酶、TALEN、大范围核酸酶等)实现,以产生感兴趣的“人工性状”。基于GE的基因修饰和本文所述的人工InDel标志物等位基因的组合使用容易地允许可以对再生的修饰的植物(来自基因编辑的植物材料)或其修饰的后代的直接且可靠的检测。
本文中提及的“内源”基因不仅是指以天然形式(即,没有任何人为干预)在植物中发现的相关基因,而且还指以分离形式随后(重新)引入植物(转基因)中的相同基因(或基本同源的核酸/基因)。例如,含有这种转基因的转基因植物可能遭遇转基因表达的实质增加或降低,和/或内源基因表达的实质增加或降低。分离的基因可以是从生物体分离的,或者可以是人造的(例如通过化学合成)。
还提供可编程核酸酶用于产生鉴别生物体基因组中感兴趣的核酸的人工标志物等位基因的用途。如本文所述,所述可编程核酸酶可选自CRISPR核酸酶系统、锌指核酸酶、TALEN或大范围核酸酶。
根据本发明的第七方面,提供一种包含可通过根据第一方面所述的方法得到的人工标志物等位基因或包含根据本发明的第五方面所述的人工标志物等位基因的植物或种子。所述植物可以是任何植物,并且可以例如选自大麦(Hordeum vulgare)、球茎大麦(Hordeum bulbusom)、高粱(Sorghum bicolor)、甘蔗(Saccharum officinarium)、玉米(Zea mays)、谷子(Setaria italica)、小粒野生稻(Oryza minuta)、水稻(Oriza sativa)、澳洲野生稻(Oryza australiensis)、高秆野生稻(Oryza alta)、小麦(Triticumaestivum)、黑麦(Secale cereale)、苹果(Malus domestica)、二穗短柄草(Brachypodiumdistachyon)、海滨大麦(Hordeum marinum)、节节麦(Aegilops tauschii)、Daucusglochidiatus、甜菜(Beta vulgaris)、Daucus pusillus、Daucus muricatus、野胡萝卜(Daucus carota)、巨桉(Eucalyptus grandis)、美花烟草(Nicotiana sylvestris)、绒毛状烟草(Nicotiana tomentosiformis)、普通烟草(Nicotiana tabacum)、番茄(Solanumlycopersicum)、马铃薯(Solanum tuberosum)、中果咖啡(Coffea canephora)、葡萄(Vitisvinifera)、Erythrante guttata、黄花螺旋狸藻(Genlisea aurea)、黄瓜(Cucumissativus)、川桑(Morus notabilis)、Arabidopsis arenosa、琴叶拟南芥(Arabidopsislyrata)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)、须弥芥(Crucihimalaya himalaica)、卵叶须弥芥(Crucihimalaya wallichii)、弯曲碎米荠(Cardamine flexuosa)、北美独行菜(Lepidium virginicum)、荠菜(Capsella bursa pastoris)、Olmarabidopsis pumila、硬毛南芥(Arabis hirsute)、甘蓝型油菜(Brassica napus)、Brassica oeleracia、芜菁(Brassica rapa)、萝卜(Raphanus sativus)、芥菜(Brassica juncea)、黑芥(Brassicanigra)、芝麻菜(Eruca vesicaria subsp.sativa)、甜橙(Citrus sinensis)、麻疯树(Jatropha curcas)、毛果杨(Populus trichocarpa)、蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)、Cicer yamashitae、Cicer bijugum、鹰嘴豆(Cicer arietinum)、Cicer reticulatum、Cicer judaicum、木豆(Cajanus cajanifolius)、蔓草虫豆(Cajanus scarabaeoides)、菜豆(Phaseolus vulgaris)、大豆(Glycine max)、紫云英(Astragalus sinicus)、百脉根(Lotus japonicas)、夏堇(Torenia fournieri)、洋葱(Allium cepa)、大葱(Alliumfistulosum)、大蒜(Allium sativum)和韭菜(Allium tuberosum)。
在本申请文件的整个说明书和权利要求书中,词语“包括”和“包含”及词语的变形,例如“包括(comprising)”和“包括(comprises)”,意为“包括但不限于”且不排除其它组件、整数或步骤。此外,除非上下文另有要求,否则单数包含复数:特别地,在使用不定冠词的情况下,除非上下文另有要求,否则申请文件应理解为考虑复数以及单数。
当涉及诸如参数、量、时间长度等的可测量值时,本文所使用的术语“约(about)”或“约(approximately)”旨在涵盖所述值+/-20%或更小的变化,优选为所述值+/-10%或更小的变化,更优选为所述值+/-5%或更小的变化,且甚至更优选为所述值+/-1%或更小的变化,以及从所述值+/-20%或更小的变化,优选为从所述值+/-10%或更小的变化,更优选为从所述值+/-5%或更小的变化,且甚至更优选为从所述值+/-1%或更小的变化,在这个范围内,这种变化适合于在所公开的本发明中执行。应当理解,修饰语“约”或“约”所指的值本身也被具体地且优选地公开。
尽管术语“一个或多个”或“至少一个”(例如一组成员中的一个或多个或至少一个成员)本身是清楚的,通过进一步举例说明,尤其是所述术语涵盖对任何一个所述成员或任何两个或更多个所述成员的引用,例如,所述成员中≥3、≥4、≥5、≥6或≥7等的任何,以及多达所有所述成员。
本发明的每个方面的优选特征可以如结合任何其它方面所描述的。在本申请的范围内,明确意图是,在前面的段落、权利要求和/或以下描述和附图中阐述的各个方面、实施方案、实施例和替代方案,以及特别是其各个特征,可以独立使用或以组合的方式使用。换言之,可以以任何方式和/或组合来组合所有的实施方案和/或任何实施方案的特征,除非这些特征是不相容的。
附图简述
现在将参考附图仅以举例的方式对本发明的一个或多个实施方案进行描述,其中:
图1A-C示出标志物辅助分析和质量控制测定的示意图,其中通过使用本发明的InDel方法可以确保具有期望的性状的繁殖的种子的纯度。
图2示出育种过程的示意图,其中在育种过程开始时,即在使供体与期望的优良品系杂交之前,将InDel引入供体植物(包含感兴趣的核酸,其优选编码赋予感兴趣的性状的多肽)的基因组基因座中。
图3示出编码突变的细胞色素P450氧化酶(其赋予雄性不育)的基因的InDel标志物辅助选择。
图4示出编码点突变的乙酰乳酸合酶(赋予除草剂抗性)的基因的InDel标志物辅助选择。
实施例
实施例1:缺失标志物等位基因
利用基因组编辑引入缺失用于标志物辅助选择
该实施例展示使用缺失标志物检测期望的性状,所述期望的性状否则由于位于病因多态性侧翼的基因组区域的特征,会是难以鉴定的。
在DE 10 2016 106 656.7中公开的甜菜突变体BvCYP703A2_gst在编码赋予突变体雄性不育表型的细胞色素P450氧化酶的基因中包含缺失(野生型(WT)BvCYP703=BvCYP703_WT(SEQ ID NO:75))。该表型可以例如用于改善育种程序和用于杂交种子的生产。
突变体BvCYP703A2_gst(SEQ ID NO:76)在位置1560和2100之间包含大的缺失(参见图3)。然而,由于位于缺失侧翼的基因组区域的特征(即,高度重复和高AT含量),难以(如果不是不可能的话)设计可以允许直接检测病因多态性本身的合适的引物和测定法。因此,由于缺乏合适的测定方法,所以不可能通过直接检测缺失来针对期望的基因型筛选通过将野生型植物与供体杂交而获得的后代植物。
因此,本发明人鉴定了编码细胞色素P450氧化酶的基因的侧翼区域中适合于InDel标志物辅助选择期望的基因型的区域。造成所述性状(雄性不育)的天然发生的缺失位于BvCYP703A2基因的第-200和+333位之间(编号从翻译起始位点开始)。由于缺失会引起基因破坏,毫无疑问,其余的基因特征(例如,外显子)是无功能的,并且在其余外显子内的额外的操作不会引起多效性作用。因此,选择其余外显子1的部分,跨越区域+334至+500,作为人工InDel标志物等位基因的靶位点。从缺失第+334位到感兴趣的区域末端(+500)的最大距离为166bp,对应于0.00096cM的遗传距离。对166bp片段的Blast分析未揭示甜菜基因组中的非特异性命中。进一步的序列分析(重复性、GC含量、碱基分布)导致将+434至+443的区域定义为人工缺失的靶位点,其中InDel特异性引物在第+420至+449位之间。
如本文所述,通过基因组编辑将缺失插入该靶位点(SEQ ID NO:77)。针对缺失标志物的侧翼区域设计合适的引物(参见上文)。由于其与期望的基因型的紧密连锁,该缺失可用于鉴定赋予雄性不育的后代植物。对于缺失的同质/异质检测,应进行两次PCR反应。
可用于检测供体和/或野生型株的可能引物有:
BvCYP703A2_WT_fwd:5’-TAGACGACTTGAACTATTTGTGAG-3’(SEQ ID NO:45)
BvCYP703A2_gst_fwd:5’-TAGACGACTTGAACTTCATAGGGC-3’(SEQ ID NO:46)
BvCYP703A2_rev:5’-AAAGTATTGCTTCCCTAGCAACA-3’(SEQ ID NO:47)
实施例2:插入标志物等位基因
利用基因组编辑引入插入用于标志物辅助选择
该实施例展示通过使用本文所述的InDel标志物方法,可以可靠地鉴定由于其因果联系是单核苷酸多态性(SNP)而难以进行检测的期望的性状。
在该实施例中,编码酶乙酰乳酸合酶的基因中第+1706位处的单点突变赋予甜菜植物中对磺酰脲类除草剂的抗性(如WO 2012/049268中所公开的;野生型(WT)BvALS=BvALS_WT(SEQ ID NO:78;点突变BvALS=BvALS_SU_res(SEQ ID NO:79))。该单核苷酸多态性是难以检测的,因为专为筛选具有供体性状的植物而设计的引物与野生型序列相比仅在一个单核苷酸上存在差异,因此增加假阳性和/或假阴性的可能性,这限制筛选的质量。
通过将InDel标志物引入编码乙酰乳酸合酶的突变的基因的侧翼区域,可以克服这一缺陷(参见图4)。
本发明人鉴定适合于设计人工标志物等位基因的突变的基因的形态发生侧翼区域。导致所述性状(SU抗性,W569L)的SNP位于BvALS基因的第+1706位处(编号从翻译起始位点开始)。所述基因的注释3’UTR区域在第+2252位处结束。本发明人无法定位从第+2253位开始到第+4000位的基因组特征。从SNP第+1706位到感兴趣的区域末端(+4000)的最大距离为2294bp,对应于0.00036cM的遗传距离。2294bp片段的Blast分析未揭示甜菜基因组中的非特异性命中。迭代序列分析(blast,比对)使得选择适合人工InDel放置的区域+2274至+2445。进一步的序列分析(重复地、GC含量、碱基分布)使得将区域+2285至+2293定义为人工靶位点,其中InDel特异性引物组在第+2274至+2303位之间(见图4)。
该靶位点中可以插入9bp长的插入物,所述插入物是非同源的并且对于供体品系的基因组库是唯一的(SEQ ID NO:80)。如本文所述设计针对所述插入物的侧翼区域的合适引物。对于插入标志物的同质/异质检测,需要进行两次PCR反应。
然后,基于这种方法,可以针对插入赋予除草剂抗性的期望的突变,而无需依赖病因多态性本身来筛选由供体与野生型植物杂交得到的后代植物。
可用于检测供体和/或野生型株的可能引物有:
BvALS_WT_fwd:5’-ACTAGTTGGCTTGGTGCATCT-3’(SEQ ID NO:48)
BvALS_SU_res_fwd:5’-ACTAGTTGGCTGCACTATCGTGC-3’(SEQ ID NO:49)
BvALS_rev:5’-CCAATGCTCCCATGTCAGGT-3’(SEQ ID NO:50)
实施例3:确保各个性状的种子繁殖纯度的质量控制测定
该实施例示出如何可以通过使用本文所述的InDel方法来确保具有期望的性状的繁殖种子的纯度。
在该实施例中,通过将核苷酸序列(GCACTATCG)引入其基因组来修饰包含期望的性状的供体品系,以产生与期望的性状紧密连锁的人工插入标志物等位基因。
在将包含插入标志物等位基因的供体与不含人工标志物等位基因的野生型植物杂交后,获得F1后代植物,其在其遗传组成上是异质的。回交和随后的选择产生野生型植物的遗传背景内包含感兴趣的性状的植物。为了确保包含期望的性状的植物的种子繁殖的同质性和纯度,使用对野生型(引物1+3)和/或供体(引物2+3)具有特异性的引物对来分析种子样品。之后,通过例如(q)PCR分析种子样品容易地允许评估纯度的程度(参见图1C)。
因此,基于该质量控制测定法,可以可靠地评估所测的种子样品对于期望的性状是否是纯合的,或者种子是否被与期望的供体性状对应的野生型基因/性状“污染”。如果与期望性状连锁的多态性是单核苷酸多态性,则这样的质量控制将是不可能的,因为单核苷酸错配不能提供足够的分辨率和特异性以确保通过(q)PCR的可靠的质量评估。
实施例4:用于产生与期望的性状连锁的人工InDel标志物等位基因的基于GE的技术
该实施例提供关于如何进行以下的技术描述:
(a)通过基于GE的基因修饰在编码细胞色素P450氧化酶的基因中具有较大缺失的供体基因组中产生缺失标志物等位基因造成雄性不育(实施例1),
(b)通过基于GE的基因修饰在编码酶乙酸乳酸合酶的基因中具有点突变的供体基因组中产生插入标志物等位基因赋予甜菜植物除草剂抗性(实施例2),以及
(c)通过经由GE引入特异性点突变(G→T)从而在甜菜植物中赋予除草剂抗性,并产生与人工产生的感兴趣的性状连锁的插入标志物等位基因,来修饰编码乙酸乳酸合酶的内源基因。
crRNA的设计和选择:
使用CRISPR RGEN工具设计针对Cpf1诱导的双链断裂的合适crRNA(http://www.rgenome.net/cas-designer/[Park J.,Bae S.,and Kim J.-S.Cas-Designer:A web-based tool for choice of CRISPR-Cas9 target sites.Bioinformatics 31,4014-4016(2015).以及Bae S.,Park J.,and Kim J.-S.Cas-OFFinder:A fast and versatilealgorithm that searches for potential off-target sites of Cas9 RNA-guidedendonucleases.Bioinformatics 30,1473-1475(2014).)。因此,鉴定并选择基因组DNA序列内合适的前间区序列(protospacer)。为确保来自毛螺科菌(Lachnospiraceaebacterium)ND2006(Lb)(SEQ ID NO:51)的Cpf1核酸内切酶的功能性,选择长度为24个核苷酸的前间区序列,其中,在5’端的基因组结合序列侧翼为必需的前间区序列邻近基序(PAM),其具有序列5’-TTTV-3’(V为G、C或A)。根据工具的规定质量标准选择合适的前间区序列,并使用甜菜的内部参考基因组分析其潜在的脱靶。
为了进一步的实验,选择crRNA,除了实际的靶序列外,crRNA还与功能性PAM具有至多15个相同碱基。由于前间区序列的前18个核苷酸对于识别和切割靶序列是必不可少的,因此有可能避免其它基因组序列中不必要的切割[Tang,X.,L.G.Lowder,T.Zhang,A.A.Malzahn,X.Zheng,D.F.Voytas,Z.Zhong,Y.Chen,Q.Ren,Q.Li,E.R.Kirkland,Y.Zhangand Y.Qi(2017)."A CRISPR-Cpf1 system for efficient genome editing andtranscriptional repression in plants."Nat Plants 3:17018]。基于这种方法,鉴定出特异于以下各个位置的潜在crRNA(参见表A)。
表A:所选择的靶序列。PAM序列带有下划线。
遗传元件的克隆:
为了克隆Cpf1-和crRNA表达盒,通过引入点突变(T→G)从靶载体pZFNnptII中去除限制性酶BbsI的阻碍识别序列。使用两种诱变引物,按照制造商的说明,用商业可得的诱变试剂盒进行诱变(参见表B)。
表B:用于引入点突变(G→T,带下划线)来去除BbsI识别序列的诱变引物
为了甜菜中Lbcpf1基因的表达,合成包含针对拟南芥(A.thaliana)进行密码子优化的DNA序列的DNA片段,其中所述DNA序列具有来自欧芹(Petroselinum crispum)的5’侧翼PcUbi启动子序列和来自Pea sp.的3’侧翼3A终止子序列(SEQ ID NO:52)。与克隆相关的Lbcpf1编码序列内限制性切割位点可通过引入沉默突变(即不影响氨基酸序列的核苷酸交换)而去除。密码子优化是基于ThermoScientific的GeneArt算法进行的。为了允许cpf1转运到细胞核中,cpf1的编码序列在5’端与来自SV40的核定位信号(NLS)以及在3’端与来自核质蛋白的NLS连接。为了与二元靶载体pZFNnptII连接,表达盒的侧翼是两个HindIII限制性切割位点。为了克隆crRNA表达盒,在5’侧翼HindIII切割位点和PcUbi启动子序列之间插入额外的PstI切割位点。通过遵循标准方案完成pZFNnptII_LbCpf1的连接。通过测序证实成功插入PcUbi::Cpf1::TPea表达盒(SEQ ID NO:52),其中将所用的引物设计为与跨越载体侧翼区域以及表达盒的部分的区域特异性结合(参见表C)。
表C:用于测序整合到pZFNnptII载体中的PcUbi::Cpf1::TPea表达盒的引物
在植物细胞中转录后,crRNA被两个侧翼核酶切割。因此,前体crRNA的侧翼为锤头状核酶(SEQ ID NO:53)和HDV核酶(SEQ ID NO:54)的编码序列[Tang,X.,L.G.Lowder,T.Zhang,A.A.Malzahn,X.Zheng,D.F.Voytas,Z.Zhong,Y.Chen,Q.Ren,Q.Li,E.R.Kirkland,Y.Zhang and Y.Qi(2017)."A CRISPR-Cpf1 system for efficientgenome editing and transcriptional repression in plants."Nat Plants 3:17018.]。存在用于转录crRNA的其它方法,例如通过PolII启动子、从mRNA上切割Cpf1、其它核酶等。为了将单个前间区序列与crRNA重复序列无缝连接,在crRNA重复和HDV核酶之间整合两个BbsI识别序列,其中相应地调整用于克隆的突出端。
为了确保cpf1和crRNA的表达强度相同,crRNA核酶盒的侧翼是5’端的PcUbi启动子序列和3’端的3A终止子序列。crRNA表达盒的侧翼为两个PstI切割位点,以便随后连接到pZFNnptII_Cpf1靶载体(SEQ ID NO:55)中。购买crRNA表达盒(SEQ ID NO:56)作为合成DNA片段。通过遵循标准方案进行连接。通过多轮测序证实正确插入表达盒。将前间区序列安排为互补寡核苷酸,并根据标准方案退火。以这种方式产生的24bp长的DNA片段的侧翼为与连接步骤有关的4nt突出端(参见表D)。
表D:用于产生24bp短前间区序列的寡核苷酸序列,用于连接的4nt突出端有下划线。
通过甜菜叶中农杆菌诱导的基因转移,测试4种crRNAs的效率。将pZFNtDTnptII质粒(SEQ ID NO:57)共转化以验证转化效率。遵循标准方案,通过真空渗透完成叶外植体的转化。在六天后通过荧光显微镜测量tDT的荧光。丢弃具有异质性荧光的外植体。渗透后十天,将叶外植体在液氮中速冻,通过CTAB方案分离基态DNA(ground DNA)和基因组DNA。通过NGS(外部服务提供商)根据相对于基因组DNA中未编辑序列的插入编辑数目(例如插入、缺失或核苷酸交换的数目),验证单个crRNA的效率。
由于所有测试的crRNA均显示出活性,因此与上述核酶、启动子序列和终止子序列一起作为反向表达盒的crRNAs crRNA_ALS_G/T(SEQ ID NO:58)、crRNA_CYP_Del(SEQ IDNO:59)、crRNA_ALS_In1(SEQ ID NO:60)(最有效)和crRNA_ALS_In2(SEQ ID NO:61)安排为合成DNA构建体(总共4个构建体;每个crRNA一个构建体(SEQ ID NO:62、63、64、65))。每个DNA构建体侧翼为用于克隆到靶载体pZFNnptII_LbCpf1(SEQ ID NO:55)中的两个PstI限制性切割位点。插入crRNA后,通过HindIII将LbCpf1和crRNA表达盒从pZFNnptII_LbCpf1_crRNA载体(SEQ ID NO:23、71、72、73、74)连接到pUbitDTnptII载体(SEQ ID NO:66、67、68、69、70)。
生成和使用用于HD修复的修复模板
ALS G→T突变
为了产生G→T点突变,将修复模板设计为在点突变的上游和下游包含1000bp。整个DNA模板被安排为2001bp长的合成DNA片段(SEQ ID NO:24),并直接用于提供商(provider)的载体骨架中的转化。根据最佳递送方案,使用基因枪通过基因枪共轰击将修复模板质粒和pUbitDTnptII_LbCpf1_crRNA质粒(SEQ ID NO:67)引入甜菜愈伤组织培养物中。转化后一天通过荧光显微镜基于瞬时tDT荧光验证转化效率。在无选择压力(即,没有卡那霉素(Kanamycin))的情况下,在芽诱导培养基中培养愈伤组织培养物。随后针对定点突变测试再生芽(原则上,如果点突变导致ALS抗性增加,则这种增加可用于选择期望的事件)。因此,通过CTAB分离基因组DNA。通过两次PCR,并使用引物5’ALS_G/T和ALS_G/T_Rv以及ALS_G/T_Fw和3’ALS_G/T,扩增点突变。之后,在每种情况中,用两种引物对PCR产物进行测序。在此,重要的是,第一引物的结合发生在修复模板的同源区域内,且第二引物的结合发生在修复模板的5’和3’侧翼同源区域之外(参见表E)。
表E:用于检测点突变的引物
除了检测甜菜基因组中成功点突变外,还分析质粒DNA的不期望的整合。因此,通过PCR分析了已确认在期望的基因座成功整合点突变的基因组DNA中是否存在质粒DNA。cpf1、crRNA核酶盒和tDT内的序列区域用下表F所列的引物扩增。
表F:用于检测甜菜芽基因组中稳定整合的质粒特异性序列的引物
ALS 9bp插入物:
对于ALS 9bp插入物,使用与对于上述ALS G→T突变相似的方法。9bp插入物GCACTATCG的上游和下游侧翼为1000bp的同源序列(SEQ ID NO:35)。
表G:用于检测插入的引物
G→T点突变和ALS中9bp插入物的组合插入:
通常,对于上述两种方法都使用类似的过程。然而,在这种情况下,修复模板的上游和下游侧翼仅为250bp同源序列,因为在具有相应修复模板上游和下游的1000bp的同源侧翼序列将会重叠。在此设置中,使用基因枪共轰击法转化crRNA_ALS_G/T和crRNA_ALS_In1的质粒以及两个修复模板。如上所述进行点突变和9bp插入物的检测。
CYP缺失标志物:
还可以使用上述方法之一来产生和检测缺失。对于产生缺失标志物,重要的是修复模板必须包含9bp缺失(ATTTGTGAG)。然后,其也位于修复模板上游和下游的1000bp同源序列侧翼,并用于构建体(SEQ ID NO:40)。
表H:用于检测缺失的引物
序列表
<110> 科沃施种子欧洲股份两合公司
<120> 人工标志物等位基因
<130> KWS0260PCT
<150> EP18174057.2
<151> 2018-05-24
<160> 80
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_ALS_G/T
<400> 1
tttaggtatg gttgtccaat gggaagat 28
<210> 2
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_ALS_In1
<400> 2
tttcggctat ggatgttgtg ttgcatca 28
<210> 3
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_ALS_In2
<400> 3
tttctacgtg gttcggttga tcatatag 28
<210> 4
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_CYP_Del
<400> 4
tttgtacgtg gttcggttga tcatatag 28
<210> 5
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutagenesis primer 1
<400> 5
cagtgcagcc gtcgtctgaa aacgaca 27
<210> 6
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mutagenesis primer 2
<400> 6
aacgtcagaa gccgactgca ctatag 26
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pSeq_LbCpf1_F1
<400> 7
agcgcaacgc aattaatgtg 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pSeq_LbCpf1_R1
<400> 8
gatgaagctg aggtagtacc 20
<210> 9
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pSeq_LbCpf1_F2
<400> 9
aggaaggtta gcaagctcga g 21
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pSeq_LbCpf1_R2
<400> 10
tctcgtcgac cttctggatg 20
<210> 11
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pSeq_LbCpf1_F3
<400> 11
atgctgagta cgatgacatc c 21
<210> 12
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pSeq_LbCpf1_R3
<400> 12
tagacctgct tctcaacctt ca 22
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pSeq_LbCpf1_F4
<400> 13
accactcact cctcgataag 20
<210> 14
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pSeq_LbCpf1_R4
<400> 14
aacgacaatc tgatcgggta c 21
<210> 15
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_ALS_GT/TG protospacer oligonucleotide
<400> 15
agatggtatg gttgtccaat gggaagat 28
<210> 16
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_ALS_G/T protospacer oligonucleotide
<400> 16
ggccatcttc ccattggaca accatacc 28
<210> 17
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_ALS_In1 protospacer oligonucleotide
<400> 17
agatggctat ggatgttgtg ttgcatca 28
<210> 18
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_ALS_In1 protospacer oligonucleotide
<400> 18
ggcctgatgc aacacaacat ccatagcc 28
<210> 19
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_ALS_In2 protospacer oligonulceotide
<400> 19
agattacgtg gttcggttga tcatatag 28
<210> 20
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_ALS_In2 protospacer oligonucleotide
<400> 20
ggccctatat gatcaaccga accacgta 28
<210> 21
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_CYP_Del protospacer oligonucleotide
<400> 21
agattacgtg gttcggttga tcatatag 28
<210> 22
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_CYP_Del protospacer oligonucleotide
<400> 22
ggccctatat gatcaaccga accacgta 28
<210> 23
<211> 16862
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pZFNnptII_LbCpf1_crRNA cassette
<400> 23
ccggattgaa agaaatatag tttaaatatt tattgataaa ataacaagtc aggtattata 60
gtccaagcaa aaacataaat ttattgatgc aagtttaaat tcagaaatat ttcaataact 120
gattatatca gctggtacat tgccgtagat gaaagactga gtgcgatatt atgtgtaata 180
cataaattga tgatatagct agcttagctc atcgggtcag aagaactcgt caagaaggcg 240
atagaaggcg atgcgctgcg aatcgggagc ggcgataccg taaagcacga ggaagcggtc 300
agcccattcg ccgccaagct cttcagcaat atcacgggta gccaacgcta tgtcctgata 360
gcggtccgcc acacccagcc ggccacagtc gatgaatcca gaaaagcggc cattttccac 420
catgatattc ggcaagcagg catcgccatg agtcacgacg agatcctcgc cgtcgggcat 480
gcgcgccttg agcctggcga acagttcggc tggcgcgagc ccctgatgct cttcgtccag 540
atcatcctga tcgacaagac cggcttccat ccgagtacgt gctcgctcga tgcgatgttt 600
cgcttggtgg tcgaatgggc aggtagccgg atcaagcgta tgcagccgcc gcattgcatc 660
agccatgatg gatactttct cggcaggagc aaggtgagat gacaggagat cctgccccgg 720
cacttcgccc aatagcagcc agtcccttcc cgcttcagtg acaacgtcga gcacagctgc 780
gcaaggaacg cccgtcgtgg ccagccacga tagccgcgct gcctcgtcct gaagttcatt 840
cagggcaccg gacaggtcgg tcttgacaaa aagaaccggg cgcccctgcg ctgacagccg 900
gaacacggcg gcatcagagc agccgattgt ctgttgtgcc cagtcatagc cgaatagcct 960
ctccacccaa gcggccggag aacctgcgtg caatccatct tgttcaatcc aagctcccat 1020
tttctgtgat tttggatgtg tttttgtatg gattgagagt gaatatgaga ctctaattgg 1080
ataccgaggg gaatttatgg aacgtcagtg gagcattttt gacaagaaat atttgctagc 1140
tgatagtgac cttaggcgac ttttgaacgc gcaataatgg tttctgacgt atgtgcttag 1200
ctcattaaac tccagaaacc cgcggctgag tggctccttc aacgttgcgg ttctgtcagt 1260
tccaaacgta aaacggcttg tcccgcgtca tcggcggggg tcattccgga ctgtggggcc 1320
atatcccaga actggttgag tcggtccaac acctgggtgc caatcatgtc gatggtgggg 1380
tatggccaat tttttttcaa ttcaaaaatg tagatgtccg cagcgttatt ataaaatgaa 1440
agtacatttt gataaaacga caaattacga tccgtcgtat ttataggcga aagcaataaa 1500
caaattattc taattcggaa atctttattt cgacgtgtct acattcacgt ccaaatgggg 1560
gcttagatga gaaacttcac gatcggctct agaggccatg gcggccgcac tagtggatcc 1620
cccgggatgc atgaattcaa gcttatcgat gtcgacaggc cttaagggcc agatcccccg 1680
ggctgcagaa gcctatactg tacttaactt gattgcataa ttacttgatc atagactcat 1740
agtaaacttg attacacaga taagtgaaga aacaaaccaa ttcaagacat aaccaaagag 1800
aggtgaaaga ctgttttata tgtctaacat tgcaccttaa tatcacactg ttagttcctt 1860
tcttacttaa attcaaccca ttaaagtaaa aacaacagat aataataatt tgagaatgaa 1920
caaaaggacc atatcattta ttaactctta tccatccatt tgcattttga tgtccgaaaa 1980
caaaaactga aagaacacag taaattacaa gcagaacaaa tgatagaaga aaacagcttt 2040
tccaatgcca taatactcaa acttagtagg attctggtgt gtgggcaatg aaactgatgc 2100
attgaacttg acgaacgttg tcgaaaccga tgatacggac gaaagctggg aggcctggtc 2160
ccattcgcca tgccgaagca tgttgcccag ccggcgccag cgaggaggct gggaccatgc 2220
cggccaggtc ttccgcggtc agactgagcg aagactcatc tacacttagt agaaattaga 2280
cgagcttact cgtttcgtcc tcacggactc atcagtaatt tggatccgct gcacatacat 2340
aacatatcaa gatcagaaca cacatataca cacacaaata caatcaagtc aacaactcca 2400
aaaagtccag atctacatat atacatacgt aaataacaaa atcatgtaaa taatcacaat 2460
catgtaatcc agatctatgc acatatatat atacacaatt aataaaaaaa atgatataac 2520
agatctatat ctatgtatgt aacaacacaa tcagatgaga gaagtgatgt tttcagatct 2580
gtatacatac aaacacaaac agatgaacaa ttgatacgta gatccatatg tatacgtaca 2640
attagctaca cgattaaatg aaaaaaatca acgatttcgg attggtacac acaaacgcaa 2700
caatatgaag aaattcatat ctgattagat ataaacataa ccacgtgtag atacacagtc 2760
aaatcaacaa atttatagct tctaaacgga tgagatgaac aagataaaga tattcacata 2820
aggcatacat aagataagca gattaacaaa ctagcaataa tacataccta attaaaacaa 2880
ggaataacag agagagagag agagagagag atttaccttg aaaatgaaga ggagaagaga 2940
ggatttctta aaattggggg tagagaaaga aagatgatga attgtgagaa aggagagata 3000
gaaggggggg ttgtatatat aggctgtaga agattatttt tgtgtttgag gcggtgaagg 3060
aagaggggat ctgactatga cacgtttgcg gttacgtatt tcgataggag tctttcaacg 3120
cttaacgccg ttactctata tgaccgtttg ggccgtaacg gggccgtttg ttaacgctga 3180
tgttgattct tttctttctt tctttcttcc ttttttaaag aagcaattgt acaatcgttg 3240
ctagctgtca aacggataat tcggatacgg atatgcctat attcatatcc gtaatttttc 3300
tgcaggaatt cgatctggca cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac 3360
gcaattaatg tgagttagct cactcattag gcaccccagg ctttacactt tatgcttccg 3420
gctcgtatgt tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa cagctatgac 3480
atgattacga attcaaaaat tacggatatg aatataggca tatccgtatc cgaattatcc 3540
gtttgacagc tagcaacgat tgtacaattg cttctttaaa aaaggaagaa agaaagaaag 3600
aaaagaatca acatcagcgt taacaaacgg ccccgttacg gcccaaacgg tcatatagag 3660
taacggcgtt aagcgttgaa agactcctat cgaaatacgt aaccgcaaac gtgtcatagt 3720
cagatcccct cttccttcac cgcctcaaac acaaaaataa tcttctacag cctatatata 3780
caaccccccc ttctatctct cctttctcac aattcatcat ctttctttct ctacccccaa 3840
ttttaagaaa tcctctcttc tcctcttcat tttcaaggta aatctctctc tctctctctc 3900
tctctgttat tccttgtttt aattaggtat gtattattgc tagtttgtta atctgcttat 3960
cttatgtatg ccttatgtga atatctttat cttgttcatc tcatccgttt agaagctata 4020
aatttgttga tttgactgtg tatctacacg tggttatgtt tatatctaat cagatatgaa 4080
tttcttcata ttgttgcgtt tgtgtgtacc aatccgaaat cgttgatttt tttcatttaa 4140
tcgtgtagct aattgtacgt atacatatgg atctacgtat caattgttca tctgtttgtg 4200
tttgtatgta tacagatctg aaaacatcac ttctctcatc tgattgtgtt gttacataca 4260
tagatataga tctgttatat catttttttt attaattgtg tatatatata tgtgcataga 4320
tctggattac atgattgtga ttatttacat gattttgtta tttacgtatg tatatatgta 4380
gatctggact ttttggagtt gttgacttga ttgtatttgt gtgtgtatat gtgtgttctg 4440
atcttgatat gttatgtatg tgcagcgaat tcggcgcgcc atggctccta agaagaagag 4500
gaaggttagc aagctcgaga agtttaccaa ctgctacagc ctctctaaga ccctcaggtt 4560
caaggctatc cctgtgggaa agacccaaga gaatatcgac aacaagaggc tcctcgtcga 4620
ggatgagaag agagctgaag attacaaggg cgtgaagaag ctcctcgaca ggtactacct 4680
cagcttcatc aacgatgtgc tccacagcat caagctcaag aacctcaaca actacatcag 4740
cctcttccgt aagaaaacca ggaccgagaa agagaacaaa gagcttgaga acctcgagat 4800
caacctccgt aaagagatcg ccaaggcttt caagggaaac gagggataca agagcctctt 4860
caagaaggat attatcgaga caatcctgcc tgagttcctg gacgataagg atgagatcgc 4920
tctcgtgaac agcttcaacg gattcactac tgccttcacc ggattcttcg acaacaggga 4980
aaacatgttc agcgaagagg ccaagagcac ctctatcgct ttcagatgca tcaacgagaa 5040
cctcacgcgt tacatcagca acatggacat cttcgagaag gtggacgcca tcttcgataa 5100
gcacgaggtg caagaaatca aagagaagat cctcaacagc gactacgacg tcgaggactt 5160
ttttgaaggg gagttcttca acttcgttct cacccaagag ggcatcgacg tgtacaacgc 5220
tattatcgga ggattcgtga ccgagtctgg ggagaagatt aagggactca acgagtacat 5280
caacctgtac aaccagaaaa cgaagcagaa gctcccgaag ttcaagccgc tctacaagca 5340
ggttctctct gatcgtgaga gcctctcatt ttacggtgag ggttacacct ctgacgagga 5400
agtgcttgag gttttccgta acaccctcaa caagaacagc gagatcttct cgtccatcaa 5460
gaagttggag aaacttttca agaacttcga cgagtacagc agcgctggga tcttcgttaa 5520
gaacggacct gctatcagca ccatcagcaa ggatattttc ggcgagtgga acgtgatcag 5580
ggacaagtgg aatgctgagt acgatgacat ccacctcaag aagaaggctg tcgtcactga 5640
gaagtacgag gatgacaggc gtaagtcgtt caagaagatc ggctctttca gcctcgagca 5700
gcttcaagaa tacgctgatg ctgatctcag cgtggtcgag aagctcaaag agatcatcat 5760
ccagaaggtc gacgagatct acaaggtgta cgggtcctct gagaagttgt tcgatgctga 5820
tttcgtcctc gagaagagtc tgaagaagaa cgacgctgtc gtcgcgatca tgaaggattt 5880
gctcgacagc gtgaagtcct tcgagaacta tatcaaggcc ttcttcggag agggcaaaga 5940
gactaatagg gacgagtctt tctacgggga tttcgtgctc gcttacgata tcctcctcaa 6000
ggtggaccat atctacgacg ccatcagaaa ctacgtgacc cagaagcctt acagcaagga 6060
caagttcaag ttgtactttc agaacccgca gttcatgggc ggatgggaca aagacaaaga 6120
gacagattac agggccacca tcctcaggta cgggtctaag tactacctgg ccatcatgga 6180
caagaaatac gccaagtgcc tccaaaagat cgacaaggat gacgtgaacg ggaactatga 6240
gaagatcaac tacaagctcc ttccgggacc gaacaagatg cttcctaagg tgttcttcag 6300
caagaaatgg atggcctact acaacccgtc tgaggacatc cagaaaatct acaagaacgg 6360
gaccttcaag aaaggcgaca tgttcaacct caacgactgc cacaagctca tcgatttctt 6420
caaggacagc atctcgcgtt acccgaagtg gtctaacgct tacgacttta acttcagcga 6480
gacagaaaag tacaaggata tcgccgggtt ctaccgtgag gttgaggaac agggttacaa 6540
ggttagcttc gagagcgcct ccaagaaaga ggttgacaag ttggtcgaag agggcaagct 6600
ctacatgttc cagatctata acaaggactt ctccgacaag agccacggaa ctcctaacct 6660
ccatacgatg tacttcaagc tgcttttcga cgagaacaac cacgggcaga tcagactttc 6720
tggtggtgct gaactcttca tgcgtagggc ctcactcaag aaagaagagt tggttgttca 6780
cccggccaac tctccaatcg ctaacaagaa tcctgacaac ccgaaaaaga ccaccacgct 6840
gtcttacgac gtctacaagg acaaaaggtt cagcgaggac cagtacgagc ttcatatccc 6900
gatcgctatc aacaagtgcc cgaagaacat cttcaagatc aataccgagg tgagggtgct 6960
gctcaagcac gatgataacc cttacgtgat cggaatcgat cgtggtgaga gaaacctcct 7020
ctacatcgtt gtggtggacg gaaagggaaa catcgtcgag cagtacagcc tgaacgagat 7080
tatcaacaat ttcaacggca tcaggatcaa gaccgactac cactcactcc tcgataagaa 7140
agaaaaagag cgtttcgagg ccaggcagaa ctggacttct atcgaaaaca tcaaagagtt 7200
gaaggccggc tacatctctc aggtggtgca taagatctgc gagctggtgg aaaagtacga 7260
tgctgtgatc gctcttgagg acctcaactc tgggttcaag aacagtagag tgaaggttga 7320
gaagcaggtc taccaaaagt tcgagaagat gctcatcgac aagctcaact acatggtgga 7380
caaaaagagc aacccttgcg ctaccggtgg tgctcttaag ggataccaga tcacgaacaa 7440
gttcgagtcc ttcaagagca tgagcaccca gaacggcttc atcttctata tccctgcttg 7500
gctcaccagc aagatcgatc cttctactgg tttcgtgaac ctgctcaaga ccaagtacac 7560
ctcgatcgcc gacagcaaga agttcatctc gtctttcgac aggatcatgt acgtgccgga 7620
agaggatctt ttcgagttcg ctctcgacta taagaacttc agcaggaccg acgccgacta 7680
cattaagaag tggaagctct actcctacgg gaaccgtatc aggatcttcc gaaatccgaa 7740
gaaaaacaac gtgttcgact gggaagaagt gtgcctcacc tctgcctaca aagaactgtt 7800
caacaagtac ggcatcaact accagcaggg tgatatcagg gctcttttgt gcgagcagag 7860
cgacaaggca ttctacagct cattcatggc cctcatgtct ctcatgctcc agatgaggaa 7920
ctctatcacc ggaaggaccg atgtggactt ccttatctct ccggtcaaga actctgacgg 7980
gatcttctac gacagccgta actatgaggc tcaagagaac gctatcctgc cgaagaatgc 8040
tgatgcaaac ggggcttaca acattgcgag aaaggttctc tgggctatcg ggcagtttaa 8100
gaaagcggaa gatgagaagc tcgacaaggt gaagatcgcc atctccaaca aagagtggct 8160
tgagtacgct cagacctccg ttaagcacaa gaggcctgct gctactaaga aagctggcca 8220
ggccaaaaag aagaagtgag gcgcgccgag ctccaggcct cccagctttc gtccgtatca 8280
tcggtttcga caacgttcgt caagttcaat gcatcagttt cattgcccac acaccagaat 8340
cctactaagt ttgagtatta tggcattgga aaagctgttt tcttctatca tttgttctgc 8400
ttgtaattta ctgtgttctt tcagtttttg ttttcggaca tcaaaatgca aatggatgga 8460
taagagttaa taaatgatat ggtccttttg ttcattctca aattattatt atctgttgtt 8520
tttactttaa tgggttgaat ttaagtaaga aaggaactaa cagtgtgata ttaaggtgca 8580
atgttagaca tataaaacag tctttcacct ctctttggtt atgtcttgaa ttggtttgtt 8640
tcttcactta tctgtgtaat caagtttact atgagtctat gatcaagtaa ttatgcaatc 8700
aagttaagta cagtataggc ttgagctccc taggatcaag cttatcgatg tcgacaggcc 8760
ttaagggcca gatcttgggc ccggtacccg atcagattgt cgtttcccgc cttcggttta 8820
aactatcagt gtttgacagg atatattggc gggtaaacct aagagaaaag agcgtttatt 8880
agaataatcg gatatttaaa agggcgtgaa aaggtttatc cgttcgtcca tttgtatgtg 8940
catgccaacc acagggttcc cctcgggagt gcttggcatt ccgtgcgata atgacttctg 9000
ttcaaccacc caaacgtcgg aaagcctgac gacggagcag cattccaaaa agatcccttg 9060
gctcgtctgg gtcggctaga aggtcgagtg ggctgctgtg gcttgatccc tcaacgcggt 9120
cgcggacgta gcgcagcgcc gaaaaatcct cgatcgcaaa tccgacgctg tcgaaaagcg 9180
tgatctgctt gtcgctcttt cggccgacgt cctggccagt catcacgcgc caaagttccg 9240
tcacaggatg atctggcgcg agttgctgga tctcgccttc aatccgggtc tgtggcggga 9300
actccacgaa aatatccgaa cgcagcaaga tatcgcggtg catctcggtc ttgcctgggc 9360
agtcgccgcc gacgccgttg atgtggacgc cgaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg 9420
ataatctcat gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg 9480
tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc 9540
aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc 9600
tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtt cttctagtgt 9660
agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc 9720
taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact 9780
caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac 9840
agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagctatgag 9900
aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg 9960
gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg 10020
tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga 10080
gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt 10140
ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccga ttaccgcctt 10200
tgagtgagct gataccgctc gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt cagtgagcga 10260
ggaagcggaa gagcgcctga tgcggtattt tctccttacg catctgtgcg gtatttcaca 10320
ccgcatatgg tgcactctca gtacaatctg ctctgatgcc gcatagttaa gccagtatac 10380
actccgctat cgctacgtga ctgggtcatg gctgcgcccc gacacccgcc aacacccgct 10440
gacgcgccct gacgggcttg tctgctcccg gcatccgctt acagacaagc tgtgaccgtc 10500
tccgggagct gcatgtgtca gaggttttca ccgtcatcac cgaaacgcgc gaggcagggg 10560
tacgtcgagg tcgatccaac ccctccgctg ctatagtgca gtcggcttct gacgttcagt 10620
gcagccgtcg tctgaaaacg acatgtcgca caagtcctaa gttacgcgac aggctgccgc 10680
cctgcccttt tcctggcgtt ttcttgtcgc gtgttttagt cgcataaagt agaatacttg 10740
cgactagaac cggagacatt acgccatgaa caagagcgcc gccgctggcc tgctgggcta 10800
tgcccgcgtc agcaccgacg accaggactt gaccaaccaa cgggccgaac tgcacgcggc 10860
cggctgcacc aagctgtttt ccgagaagat caccggcacc aggcgcgacc gcccggagct 10920
ggccaggatg cttgaccacc tacgccctgg cgacgttgtg acagtgacca ggctagaccg 10980
cctggcccgc agcacccgcg acctactgga cattgccgag cgcatccagg aggccggcgc 11040
gggcctgcgt agcctggcag agccgtgggc cgacaccacc acgccggccg gccgcatggt 11100
gttgaccgtg ttcgccggca ttgccgagtt cgagcgttcc ctaatcatcg accgcacccg 11160
gagcgggcgc gaggccgcca aggcgcgagg cgtgaagttt ggcccccgcc ctaccctcac 11220
cccggcacag atcgcgcacg cccgcgagct gatcgaccag gaaggccgca ccgtgaaaga 11280
ggcggctgca ctgcttggcg tgcatcgctc gaccctgtac cgcgcacttg agcgcagcga 11340
ggaagtgacg cccaccgagg ccaggcggcg cggtgccttc cgtgaggacg cattgaccga 11400
ggccgacgcc ctggcggccg ccgagaatga acgccaagag gaacaagcat gaaaccgcac 11460
caggacggcc aggacgaacc gtttttcatt accgaagaga tcgaggcgga gatgatcgcg 11520
gccgggtacg tgttcgagcc gcccgcgcac gtctcaaccg tgcggctgca tgaaatcctg 11580
gccggtttgt ctgatgccaa gctcgcggcc tggccggcga gcttggccgc tgaagaaacc 11640
gagcgccgcc gtctaaaaag gtgatgtgta tttgagtaaa acagcttgcg tcatgcggtc 11700
gctgcgtata tgatgcgatg agtaaataaa caaatacgca aggggaacgc atgaaggtta 11760
tcgctgtact taaccagaaa ggcgggtcag gcaagacgac catcgcaacc catctagccc 11820
gcgccctgca actcgccggg gccgatgttc tgttagtcga ttccgatccc cagggcagtg 11880
cccgcgattg ggcggccgtg cgggaagatc aaccgctaac cgttgtcggc atcgaccgcc 11940
cgacgattga ccgcgacgtg aaggccatcg gccggcgcga cttcgtagtg atcgacggag 12000
cgccccaggc ggcggacttg gctgtgtccg cgatcaaggc agccgacttc gtgctgattc 12060
cggtgcagcc aagcccttac gacatatggg ccaccgccga cctggtggag ctggttaagc 12120
agcgcattga ggtcacggat ggaaggctac aagcggcctt tgtcgtgtcg cgggcgatca 12180
aaggcacgcg catcggcggt gaggttgccg aggcgctggc cgggtacgag ctgcccattc 12240
ttgagtcccg tatcacgcag cgcgtgagct acccaggcac tgccgccgcc ggcacaaccg 12300
ttcttgaatc agaacccgag ggcgacgctg cccgcgaggt ccaggcgctg gccgctgaaa 12360
ttaaatcaaa actcatttga gttaatgagg taaagagaaa atgagcaaaa gcacaaacac 12420
gctaagtgcc ggccgtccga gcgcacgcag cagcaaggct gcaacgttgg ccagcctggc 12480
agacacgcca gccatgaagc gggtcaactt tcagttgccg gcggaggatc acaccaagct 12540
gaagatgtac gcggtacgcc aaggcaagac cattaccgag ctgctatctg aatacatcgc 12600
gcagctacca gagtaaatga gcaaatgaat aaatgagtag atgaatttta gcggctaaag 12660
gaggcggcat ggaaaatcaa gaacaaccag gcaccgacgc cgtggaatgc cccatgtgtg 12720
gaggaacggg cggttggcca ggcgtaagcg gctgggttgt ctgccggccc tgcaatggca 12780
ctggaacccc caagcccgag gaatcggcgt gagcggtcgc aaaccatccg gcccggtaca 12840
aatcggcgcg gcgctgggtg atgacctggt ggagaagttg aaggcggcgc aggccgccca 12900
gcggcaacgc atcgaggcag aagcacgccc cggtgaatcg tggcaagcgg ccgctgatcg 12960
aatccgcaaa gaatcccggc aaccgccggc agccggtgcg ccgtcgatta ggaagccgcc 13020
caagggcgac gagcaaccag attttttcgt tccgatgctc tatgacgtgg gcacccgcga 13080
tagtcgcagc atcatggacg tggccgtttt ccgtctgtcg aagcgtgacc gacgagctgg 13140
cgaggtgatc cgctacgagc ttccagacgg gcacgtagag gtttccgcag ggccggccgg 13200
catggcgagt gtgtgggatt acgacctggt actgatggcg gtttcccatc taaccgaatc 13260
catgaaccga taccgggaag ggaagggaga caagcccggc cgcgtgttcc gtccacacgt 13320
tgcggacgta ctcaagttct gccggcgagc cgatggcgga aagcagaaag acgacctggt 13380
agaaacctgc attcggttaa acaccacgca cgttgccatg cagcgtacga agaaggccaa 13440
gaacggccgc ctggtgacgg tatccgaggg tgaagccttg attagccgct acaagatcgt 13500
aaagagcgaa accgggcggc cggagtacat cgagatcgag ctagctgatt ggatgtaccg 13560
cgagatcaca gaaggcaaga acccggacgt gctgacggtt caccccgatt actttttgat 13620
cgatcccggc atcggccgtt ttctctaccg cctggcacgc cgcgccgcag gcaaggcaga 13680
agccagatgg ttgttcaaga cgatctacga acgcagtggc agcgccggag agttcaagaa 13740
gttctgtttc accgtgcgca agctgatcgg gtcaaatgac ctgccggagt acgatttgaa 13800
ggaggaggcg gggcaggctg gcccgatcct agtcatgcgc taccgcaacc tgatcgaggg 13860
cgaagcatcc gccggttcct aatgtacgga gcagatgcta gggcaaattg ccctagcagg 13920
ggaaaaaggt cgaaaaggtc tctttcctgt ggatagcacg tacattggga acccaaagcc 13980
gtacattggg aaccggaacc cgtacattgg gaacccaaag ccgtacattg ggaaccggtc 14040
acacatgtaa gtgactgata taaaagagaa aaaaggcgat ttttccgcct aaaactcttt 14100
aaaacttatt aaaactctta aaacccgcct ggcctgtgca taactgtctg gccagcgcac 14160
agccgaagag ctgcaaaaag cgcctaccct tcggtcgctg cgctccctac gccccgccgc 14220
ttcgcgtcgg cctatcgcgg ccgctggccg ctcaaaaatg gctggcctac ggccaggcaa 14280
tctaccaggg cgcggacaag ccgcgccgtc gccactcgac cgccggcgcc cacatcaagg 14340
caccggtggg tatgcctgac gatgcgtgga gaccgaaacc ttgcgctcgt tcgccagcca 14400
ggacagaaat gcctcgactt cgctgctgcc caaggttgcc gggtgacgca caccgtggaa 14460
acggatgaag gcacgaaccc agtggacata agcctgttcg gttcgtaagc tgtaatgcaa 14520
gtagcgtatg cgctcacgca actggtccag aaccttgacc gaacgcagcg gtggtaacgg 14580
cgcagtggcg gttttcatgg cttgttatga ctgttttttt ggggtacagt ctatgcctcg 14640
ggcatccaag cagcaagcgc gttacgccgt gggtcgatgt ttgatgttat ggagcagcaa 14700
cgatgttacg cagcagggca gtcgccctaa aacaaagtta aacatcatga gggaagcggt 14760
gatcgccgaa gtatcgactc aactatcaga ggtagttggc gtcatcgagc gccatctcga 14820
accgacgttg ctggccgtac atttgtacgg ctccgcagtg gatggcggcc tgaagccaca 14880
cagtgatatt gatttgctgg ttacggtgac cgtaaggctt gatgaaacaa cgcggcgagc 14940
tttgatcaac gaccttttgg aaacttcggc ttcccctgga gagagcgaga ttctccgcgc 15000
tgtagaagtc accattgttg tgcacgacga catcattccg tggcgttatc cagctaagcg 15060
cgaactgcaa tttggagaat ggcagcgcaa tgacattctt gcaggtatct tcgagccagc 15120
cacgatcgac attgatctgg ctatcttgct gacaaaagca agagaacata gcgttgcctt 15180
ggtaggtcca gcggcggagg aactctttga tccggttcct gaacaggatc tatttgaggc 15240
gctaaatgaa accttaacgc tatggaactc gccgcccgac tgggctggcg atgagcgaaa 15300
tgtagtgctt acgttgtccc gcatttggta cagcgcagta accggcaaaa tcgcgccgaa 15360
ggatgtcgct gccgactggg caatggagcg cctgccggcc cagtatcagc ccgtcatact 15420
tgaagctaga caggcttatc ttggacaaga agaagatcgc ttggcctcgc gcgcagatca 15480
gttggaagaa tttgtccact acgtgaaagg cgagatcacc aaggtagtcg gcaaataatg 15540
tctaacaatt cgttcaagcc gacgccgctt cgcggcgcgg cttaactcaa gcgttagatg 15600
cactaagcac ataattgctc acagccaaac tatcaggtca agtctgcttt tattattttt 15660
aagcgtgcat aataagccct acacaaattg ggagatatat catgaaaggc tggctttttc 15720
ttgttatcgc aatagttggc gaagtaatcg caacatagct tgcttggtcg ttccgcgtga 15780
acgtcggctc gattgtacct gcgttcaaat actttgcgat cgtgttgcgc gcctgcccgg 15840
tgcgtcggct gatctcacgg atcgactgct tctctcgcaa cgccatccga cggatgatgt 15900
ttaaaagtcc catgtggatc actccgttgc cccgtcgctc accgtgttgg ggggaaggtg 15960
cacatggctc agttctcaat ggaaattatc tgcctaaccg gctcagttct gcgtagaaac 16020
caacatgcaa gctccaccgg gtgcaaagcg gcagcggcgg caggatatat tcaattgtaa 16080
atggcttcat gtccgggaaa tctacatgga tcagcaatga gtatgatggt caatatggag 16140
aaaaagaaag agtaattacc aatttttttt caattcaaaa atgtagatgt ccgcagcgtt 16200
attataaaat gaaagtacat tttgataaaa cgacaaatta cgatccgtcg tatttatagg 16260
cgaaagcaat aaacaaatta ttctaattcg gaaatcttta tttcgacgtg tctacattca 16320
cgtccaaatg ggggcttaga tgagaaactt cacgatcggc tctagttcga gcgatctagt 16380
aacatagatg acaccgcgcg cgataattta tcctagtttg cgcgctatat tttgttttct 16440
atcgcgtatt aaatgtataa ttgcgggact ctaatcataa aaacccatct cataaataac 16500
gtcatgcatt acatgttaat tattacatgc ttaacgtaat tcaacagaaa ttatatgata 16560
atcatcgcaa gaccggcaac aggattcaat cttaagaaac tttattgcca aatgtttgaa 16620
cgatcgggga aattcgtttc tatgcttcaa ttctgctcta tagatgttct tctagtctta 16680
acttttagaa ggcacaacat ttgaaatgtt ggtaattttt ctgctgggta gtgaaccatt 16740
gtaatttgtg tttgcttata ttatccgttg ggtttctcta tgttatctgt ggggccatat 16800
cccagaactg gttgagtcgg tccaacacct gggtgccaat catgtcgatg gtggggtatg 16860
gt 16862
<210> 24
<211> 2001
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Repair-Template ALS G/T
<400> 24
ggtaggcctg gacctgtttt gattgatctt cctaaagata ttcagcagca attggttgtt 60
cctgattggg ataggccttt taagttgggt gggtatatgt ctaggctgcc aaagtccaag 120
ttttcgacga atgaggttgg acttcttgag cagattgtga ggttgatgag tgagtcgaag 180
aagcctgtct tgtatgtggg aggtgggtgt ttgaattcta gtgaggagtt gaggagattt 240
gttgagttga cagggattcc ggtggctagt actttgatgg ggttggggtc ttacccttgt 300
aatgatgaac tgtctcttca tatgttgggg atgcacggga ctgtttatgc caattatgcg 360
gtggataagg cggatttgtt gcttgctttc ggggttaggt ttgatgatcg tgtgaccggg 420
aagctcgagg cgtttgctag ccgtgctaag attgtgcata ttgatattga ctctgctgag 480
attgggaaga acaagcagcc ccatgtgtcc atttgtgctg atgttaaatt ggcattgcgg 540
ggtatgaata agattctgga gtctagaata gggaagctga atttggattt ctccaagtgg 600
agagaagaat taggtgagca gaagaaggaa ttcccactga gttttaagac atttggggat 660
gcaattcctc cacaatatgc cattcaggtg cttgatgagt tgaccaatgg taatgctatt 720
ataagtactg gtgttgggca gcaccaaatg tgggctgcgc agcattacaa gtacagaaac 780
cctcgccaat ggctgacctc tggtgggttg ggggctatgg ggtttgggct accagccgcc 840
attggagctg cagttgctcg accagatgca gtggttgtcg atattgatgg ggatggcagt 900
tttattatga atgttcaaga gttggctaca attagggtgg aaaatctccc agttaagata 960
atgctgctaa acaatcaaca tttaggtatg gttgtccaat tggaagatag gttctataaa 1020
gctaaccggg cacatacata ccttggaaac ccttccaaat ctgctgatat cttccctgat 1080
atgctcaaat tcgctgaggc atgtgatatt ccttctgccc gtgttagcaa cgtggctgat 1140
ttgagggccg ccattcaaac aatgttggat actccagggc cgtacctgct cgatgtgatt 1200
gtaccgcatc aagagcatgt gttgcctatg attccaagtg gtgccggttt caaggatacc 1260
attacagagg gtgatggaag aacctcttat tgatcggttt aatgacggtt ggaaccattt 1320
aaagagggta agctatatta ctgtatgtat attagtatgt tcctggataa tttagaagct 1380
tttgtctgtt gtcttttgca gtttatgaag ttagtttgct gttgtcatgt tacttgttac 1440
tttaaaaagc tttttgtagt ttttgagcaa ctagtatgga atgctcttcc tgtattgctt 1500
ggaaaattca caaaagtggt ttttcggcta tggatgttgt gttgcatcat gcatatatag 1560
cttgatatac tagttggctt ggtgcatctt taacatatac taatgagact acgacagcaa 1620
ttgccaatta gttggcttga cataattctt agtctgccac tagaaatctt gcttcttttt 1680
tttccctcat ttgttgaaag tccctgttgc gacctgacat gggagcattg gagattgttt 1740
agcaatagca gttgcagtta ggtgactaca gtcatcttcc aaatatgaat actctctgga 1800
ggggaggagg ttttacaaaa tatgagtttt taacacatga gaaacttata ttaaacaagg 1860
ttgagtcacc ccatattttt caaagttgac ttttgtctga tttgggtgac tatgcctgtt 1920
gtatgcaata aactcgatgt acataagact tgtataatcc aatctaaccc ttcctggctg 1980
attatgaaac cgagtcggct a 2001
<210> 25
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 5'ALS_G/T primer
<400> 25
gttttggatg tagaggatat tcctaga 27
<210> 26
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ALS_G/T_Rv primer
<400> 26
cagggaagat atcagcagat ttg 23
<210> 27
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ALS_G/T_Fw primer
<400> 27
ctacaattag ggtggaaaat ctc 23
<210> 28
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 3'ALS_G/T primer
<400> 28
ctctagtggt cacctggcat c 21
<210> 29
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pSeq_LbCpf1_F4 primer
<400> 29
accactcact cctcgataag 20
<210> 30
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pSeq_LbCpf1_R3 primer
<400> 30
tagacctgct tctcaacctt ca 22
<210> 31
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pSeq_Ribozyme_F primer
<400> 31
tgcagcggat ccaaattact g 21
<210> 32
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pSeq_Ribozyme_R primer
<400> 32
cctggtccca ttcgccat 18
<210> 33
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pSeq_tDT_F primer
<400> 33
ttacaagaag ctgtccttcc 20
<210> 34
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 34
gtactgttcc acgatggtgt 20
<210> 35
<211> 2010
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Repair-Template ALS 9bp Insertion
<400> 35
gaatttggat ttctccaagt ggagagaaga attaggtgag cagaagaagg aattcccact 60
gagttttaag acatttgggg atgcaattcc tccacaatat gccattcagg tgcttgatga 120
gttgaccaat ggtaatgcta ttataagtac tggtgttggg cagcaccaaa tgtgggctgc 180
gcagcattac aagtacagaa accctcgcca atggctgacc tctggtgggt tgggggctat 240
ggggtttggg ctaccagccg ccattggagc tgcagttgct cgaccagatg cagtggttgt 300
cgatattgat ggggatggca gttttattat gaatgttcaa gagttggcta caattagggt 360
ggaaaatctc ccagttaaga taatgctgct aaacaatcaa catttaggta tggttgtcca 420
atgggaagat aggttctata aagctaaccg ggcacataca taccttggaa acccttccaa 480
atctgctgat atcttccctg atatgctcaa attcgctgag gcatgtgata ttccttctgc 540
ccgtgttagc aacgtggctg atttgagggc cgccattcaa acaatgttgg atactccagg 600
gccgtacctg ctcgatgtga ttgtaccgca tcaagagcat gtgttgccta tgattccaag 660
tggtgccggt ttcaaggata ccattacaga gggtgatgga agaacctctt attgatcggt 720
ttaatgacgg ttggaaccat ttaaagaggg taagctatat tactgtatgt atattagtat 780
gttcctggat aatttagaag cttttgtctg ttgtcttttg cagtttatga agttagtttg 840
ctgttgtcat gttacttgtt actttaaaaa gctttttgta gtttttgagc aactagtatg 900
gaatgctctt cctgtattgc ttggaaaatt cacaaaagtg gtttttcggc tatggatgtt 960
gtgttgcatc atgcatatat agcttgatat actagttggc tgcactatcg tggtgcatct 1020
ttaacatata ctaatgagac tacgacagca attgccaatt agttggcttg acataattct 1080
tagtctgcca ctagaaatct tgcttctttt ttttccctca tttgttgaaa gtccctgttg 1140
cgacctgaca tgggagcatt ggagattgtt tagcaatagc agttgcagtt aggtgactac 1200
agtcatcttc caaatatgaa tactctctgg aggggaggag gttttacaaa atatgagttt 1260
ttaacacatg agaaacttat attaaacaag gttgagtcac cccatatttt tcaaagttga 1320
cttttgtctg atttgggtga ctatgcctgt tgtatgcaat aaactcgatg tacataagac 1380
ttgtataatc caatctaacc cttcctggct gattatgaaa ccgagtcggc taatttgttg 1440
cttgatcttc atgtgtgagc ctgatgccag gtgaccacta gaggagtacc tttcattgag 1500
atatcgattc ggttaattgg ttcctcatat gggtctcaaa actgaatttt tctcaggctc 1560
tcttctaacc agttgttgaa ttttatgaaa cttcagtcca gttaaaactt tgatcccgga 1620
tcagaatttc tctgagttgt tcttccgcct ctcagttcca ctgttccagt gttcttggtc 1680
ctcaacctgt actctgagct atttctgcaa acacctgaag ttcctgctgc ccttggacaa 1740
atacagaatg cagcattagc atttatttaa gacaagatga atacttgctc ccctgttagt 1800
tatgctaatt ctgcattagt attctttaat tttaattaga tactgcaatc cgtgaactct 1860
gcagtttctt gatctctctc tgtttcaatt tctcctatct tatcgcccat ttctttaggc 1920
tttcgttatc tatcgtctaa ttcaagagta ggtaactagg tacgggataa aactttttca 1980
tgaagaacct atgttcccgt attatgctgt 2010
<210> 36
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 5'ALS_Insertion primer
<400> 36
gtgctgatgt taaattggca ttgc 24
<210> 37
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ALS_Insertion_Rv primer
<400> 37
ctagtggcag actaagaatt atg 23
<210> 38
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ALS_Insertion_Fw primer
<400> 38
gaatgctctt cctgtattgc ttg 23
<210> 39
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 3'ALS_Insertion primer
<400> 39
cagttcaaca caaaagaagt tgtc 24
<210> 40
<211> 2000
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Repair-Template CYP Deletionsmarker
<400> 40
tagagttttt cgatttacga ttgtggtaaa ttaattgtaa ttgatcggtt gtcttgtagt 60
caagaaatga cgtatgaatc aatttagggc atgttctctt cggcataaaa cagctgaact 120
gaattgaact gaactgaaat gaatagtgat atgtgagagt aaaagtattg tcaagagctg 180
aactgagctg aactgaacgg atctgaactg aactgatcta atctgaacta atctgaactg 240
aactgaactg aattgaactg aaaataagct agggaaaaca gacccttact actattatat 300
aacctcgttt aaatattagg aaattaaaaa aataattata tttctttata ctttattaac 360
ctattgaggt ttttatattg actcccaaat actattttat agatcatgcc atgttaatga 420
gcaaactact ttctcacatc tttataggag aaaaagtaga tcactcacta gcatatcatg 480
accagcgaaa ccaaccaacg ctaatagttt tattgcttcc attagagata agagttaact 540
aataatacca tctttgtgaa attttgatgg attttggaac tttagcaata tatttactgt 600
gtgcactttt tgctaccaaa attttatacc aatggctcaa gtcctactta tacacaacat 660
acaaactccc tcccggccca ccaaggtggc ccttatttgg aaacctcctt caactagggc 720
cacttcccca ccgcgatttc gcctcatttt gtgaaaaata tgggccttta gtctacataa 780
ggcttggtaa tgtggatgcc ataaccacta atgatccaga aatcatacgt gagatcttag 840
ttcgacaaga tgatgtattt gcgtctcgtc cacatacctt agccgcaacc cacttggctt 900
acaatagtgg tgatgtggcc ttggctccaa tgggaccaaa atggaaaaga atgagaagga 960
tatgcatgga gcacttgctc acaactagac gacttgaact tcatagggct gatgaggcac 1020
gacatttggt ccaagacgta ttaactcgtt cccacaaaga taaagttgtt aatttgaggg 1080
aagtgttagg tgcattttct atgaataacg tgactagaat gttgctaggg aagcaatact 1140
ttggggccgg gacggcgggc ccacaagagg ctctagagtt tatgcatata acacatgagt 1200
tgttttggtt actaggcttg atttacttgg gtgattattt gcctttttgg aggtgggttg 1260
atccatatgg atgtgaaaag aaaatgaggg aagttgaaaa aagggtagat gatttccatc 1320
gcaaaattat agaggaacat aggaaggaga agaaaaggaa agaagaaatg ggagtgaatg 1380
agggtgaaat ggattttgta gatattttgt tggctttgcc tggtgaaaat ggaaatgagc 1440
atatggatga tgcagatatt aaagctctaa ttcaggtaat tcatgtataa tttgaatgtg 1500
atcgatacaa agtttgatag aaaacatatt tgcataaata tatggttgcc ctactagacc 1560
caataaaata cataattatt gccttactag ttgaaagttg aaacaaccta gctaccattt 1620
tgttgtgatt atcattagcc aaccaaaatt atttcttgca tccatatatt aatgttgaga 1680
tcagagtcgg catatttaca attacttgta acattttaag caaacaaatt aaaatatttt 1740
ttggcaagtc cattttattg aataatacct atatcttaaa atgaattctt ggtcatgtac 1800
acttgccttt caaggtacca atatttgacc atatgtaatt actattaaca aatttgataa 1860
aatctaataa tatgtaaata tacattcacg cacatattag aaacaaagat cacaaatgat 1920
aatgcaaaat aacttatttg aactaatgtt gtgaagttaa atttggaaca aaaggtatat 1980
ttgtattgcc gaattttaat 2000
<210> 41
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 5'CYP_Deletion primer
<400> 41
gtctttacat agcaaaacaa tattgaag 28
<210> 42
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CYP_Deletion_Rv primer
<400> 42
ctaacacttc cctcaaatta acaac 25
<210> 43
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CYP_Deletion_Fw primer
<400> 43
caatagtggt gatgtggcct tgg 23
<210> 44
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 3'CYP_Deletion primer
<400> 44
ggtaactagt aaaagtatac tcatc 25
<210> 45
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BvCYP703A2_WT_fwd primer
<400> 45
tagacgactt gaactatttg tgag 24
<210> 46
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BvCYP703A2_gst_fwd primer
<400> 46
tagacgactt gaacttcata gggc 24
<210> 47
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BvCYP703A2_rev primer
<400> 47
aaagtattgc ttccctagca aca 23
<210> 48
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BvALS_WT_fwd primer
<400> 48
actagttggc ttggtgcatc t 21
<210> 49
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BvALS_SU_res_fwd primer
<400> 49
actagttggc tgcactatcg tgc 23
<210> 50
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BvALS_rev primer
<400> 50
ccaatgctcc catgtcaggt 20
<210> 51
<211> 3759
<212> DNA
<213> Lachnospiraceae bacterium
<400> 51
atggctccta agaagaagag gaaggttagc aagctcgaga agtttaccaa ctgctacagc 60
ctctctaaga ccctcaggtt caaggctatc cctgtgggaa agacccaaga gaatatcgac 120
aacaagaggc tcctcgtcga ggatgagaag agagctgaag attacaaggg cgtgaagaag 180
ctcctcgaca ggtactacct cagcttcatc aacgatgtgc tccacagcat caagctcaag 240
aacctcaaca actacatcag cctcttccgt aagaaaacca ggaccgagaa agagaacaaa 300
gagcttgaga acctcgagat caacctccgt aaagagatcg ccaaggcttt caagggaaac 360
gagggataca agagcctctt caagaaggat attatcgaga caatcctgcc tgagttcctg 420
gacgataagg atgagatcgc tctcgtgaac agcttcaacg gattcactac tgccttcacc 480
ggattcttcg acaacaggga aaacatgttc agcgaagagg ccaagagcac ctctatcgct 540
ttcagatgca tcaacgagaa cctcacgcgt tacatcagca acatggacat cttcgagaag 600
gtggacgcca tcttcgataa gcacgaggtg caagaaatca aagagaagat cctcaacagc 660
gactacgacg tcgaggactt ttttgaaggg gagttcttca acttcgttct cacccaagag 720
ggcatcgacg tgtacaacgc tattatcgga ggattcgtga ccgagtctgg ggagaagatt 780
aagggactca acgagtacat caacctgtac aaccagaaaa cgaagcagaa gctcccgaag 840
ttcaagccgc tctacaagca ggttctctct gatcgtgaga gcctctcatt ttacggtgag 900
ggttacacct ctgacgagga agtgcttgag gttttccgta acaccctcaa caagaacagc 960
gagatcttct cgtccatcaa gaagttggag aaacttttca agaacttcga cgagtacagc 1020
agcgctggga tcttcgttaa gaacggacct gctatcagca ccatcagcaa ggatattttc 1080
ggcgagtgga acgtgatcag ggacaagtgg aatgctgagt acgatgacat ccacctcaag 1140
aagaaggctg tcgtcactga gaagtacgag gatgacaggc gtaagtcgtt caagaagatc 1200
ggctctttca gcctcgagca gcttcaagaa tacgctgatg ctgatctcag cgtggtcgag 1260
aagctcaaag agatcatcat ccagaaggtc gacgagatct acaaggtgta cgggtcctct 1320
gagaagttgt tcgatgctga tttcgtcctc gagaagagtc tgaagaagaa cgacgctgtc 1380
gtcgcgatca tgaaggattt gctcgacagc gtgaagtcct tcgagaacta tatcaaggcc 1440
ttcttcggag agggcaaaga gactaatagg gacgagtctt tctacgggga tttcgtgctc 1500
gcttacgata tcctcctcaa ggtggaccat atctacgacg ccatcagaaa ctacgtgacc 1560
cagaagcctt acagcaagga caagttcaag ttgtactttc agaacccgca gttcatgggc 1620
ggatgggaca aagacaaaga gacagattac agggccacca tcctcaggta cgggtctaag 1680
tactacctgg ccatcatgga caagaaatac gccaagtgcc tccaaaagat cgacaaggat 1740
gacgtgaacg ggaactatga gaagatcaac tacaagctcc ttccgggacc gaacaagatg 1800
cttcctaagg tgttcttcag caagaaatgg atggcctact acaacccgtc tgaggacatc 1860
cagaaaatct acaagaacgg gaccttcaag aaaggcgaca tgttcaacct caacgactgc 1920
cacaagctca tcgatttctt caaggacagc atctcgcgtt acccgaagtg gtctaacgct 1980
tacgacttta acttcagcga gacagaaaag tacaaggata tcgccgggtt ctaccgtgag 2040
gttgaggaac agggttacaa ggttagcttc gagagcgcct ccaagaaaga ggttgacaag 2100
ttggtcgaag agggcaagct ctacatgttc cagatctata acaaggactt ctccgacaag 2160
agccacggaa ctcctaacct ccatacgatg tacttcaagc tgcttttcga cgagaacaac 2220
cacgggcaga tcagactttc tggtggtgct gaactcttca tgcgtagggc ctcactcaag 2280
aaagaagagt tggttgttca cccggccaac tctccaatcg ctaacaagaa tcctgacaac 2340
ccgaaaaaga ccaccacgct gtcttacgac gtctacaagg acaaaaggtt cagcgaggac 2400
cagtacgagc ttcatatccc gatcgctatc aacaagtgcc cgaagaacat cttcaagatc 2460
aataccgagg tgagggtgct gctcaagcac gatgataacc cttacgtgat cggaatcgat 2520
cgtggtgaga gaaacctcct ctacatcgtt gtggtggacg gaaagggaaa catcgtcgag 2580
cagtacagcc tgaacgagat tatcaacaat ttcaacggca tcaggatcaa gaccgactac 2640
cactcactcc tcgataagaa agaaaaagag cgtttcgagg ccaggcagaa ctggacttct 2700
atcgaaaaca tcaaagagtt gaaggccggc tacatctctc aggtggtgca taagatctgc 2760
gagctggtgg aaaagtacga tgctgtgatc gctcttgagg acctcaactc tgggttcaag 2820
aacagtagag tgaaggttga gaagcaggtc taccaaaagt tcgagaagat gctcatcgac 2880
aagctcaact acatggtgga caaaaagagc aacccttgcg ctaccggtgg tgctcttaag 2940
ggataccaga tcacgaacaa gttcgagtcc ttcaagagca tgagcaccca gaacggcttc 3000
atcttctata tccctgcttg gctcaccagc aagatcgatc cttctactgg tttcgtgaac 3060
ctgctcaaga ccaagtacac ctcgatcgcc gacagcaaga agttcatctc gtctttcgac 3120
aggatcatgt acgtgccgga agaggatctt ttcgagttcg ctctcgacta taagaacttc 3180
agcaggaccg acgccgacta cattaagaag tggaagctct actcctacgg gaaccgtatc 3240
aggatcttcc gaaatccgaa gaaaaacaac gtgttcgact gggaagaagt gtgcctcacc 3300
tctgcctaca aagaactgtt caacaagtac ggcatcaact accagcaggg tgatatcagg 3360
gctcttttgt gcgagcagag cgacaaggca ttctacagct cattcatggc cctcatgtct 3420
ctcatgctcc agatgaggaa ctctatcacc ggaaggaccg atgtggactt ccttatctct 3480
ccggtcaaga actctgacgg gatcttctac gacagccgta actatgaggc tcaagagaac 3540
gctatcctgc cgaagaatgc tgatgcaaac ggggcttaca acattgcgag aaaggttctc 3600
tgggctatcg ggcagtttaa gaaagcggaa gatgagaagc tcgacaaggt gaagatcgcc 3660
atctccaaca aagagtggct tgagtacgct cagacctccg ttaagcacaa gaggcctgct 3720
gctactaaga aagctggcca ggccaaaaag aagaagtga 3759
<210> 52
<211> 5228
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> PcUbi:Cpf1:TPea expression cassette
<400> 52
aaaaattacg gatatgaata taggcatatc cgtatccgaa ttatccgttt gacagctagc 60
aacgattgta caattgcttc tttaaaaaag gaagaaagaa agaaagaaaa gaatcaacat 120
cagcgttaac aaacggcccc gttacggccc aaacggtcat atagagtaac ggcgttaagc 180
gttgaaagac tcctatcgaa atacgtaacc gcaaacgtgt catagtcaga tcccctcttc 240
cttcaccgcc tcaaacacaa aaataatctt ctacagccta tatatacaac ccccccttct 300
atctctcctt tctcacaatt catcatcttt ctttctctac ccccaatttt aagaaatcct 360
ctcttctcct cttcattttc aaggtaaatc tctctctctc tctctctctc tgttattcct 420
tgttttaatt aggtatgtat tattgctagt ttgttaatct gcttatctta tgtatgcctt 480
atgtgaatat ctttatcttg ttcatctcat ccgtttagaa gctataaatt tgttgatttg 540
actgtgtatc tacacgtggt tatgtttata tctaatcaga tatgaatttc ttcatattgt 600
tgcgtttgtg tgtaccaatc cgaaatcgtt gatttttttc atttaatcgt gtagctaatt 660
gtacgtatac atatggatct acgtatcaat tgttcatctg tttgtgtttg tatgtataca 720
gatctgaaaa catcacttct ctcatctgat tgtgttgtta catacataga tatagatctg 780
ttatatcatt ttttttatta attgtgtata tatatatgtg catagatctg gattacatga 840
ttgtgattat ttacatgatt ttgttattta cgtatgtata tatgtagatc tggacttttt 900
ggagttgttg acttgattgt atttgtgtgt gtatatgtgt gttctgatct tgatatgtta 960
tgtatgtgca gcgaattcgg cgcgccatgg ctcctaagaa gaagaggaag gttagcaagc 1020
tcgagaagtt taccaactgc tacagcctct ctaagaccct caggttcaag gctatccctg 1080
tgggaaagac ccaagagaat atcgacaaca agaggctcct cgtcgaggat gagaagagag 1140
ctgaagatta caagggcgtg aagaagctcc tcgacaggta ctacctcagc ttcatcaacg 1200
atgtgctcca cagcatcaag ctcaagaacc tcaacaacta catcagcctc ttccgtaaga 1260
aaaccaggac cgagaaagag aacaaagagc ttgagaacct cgagatcaac ctccgtaaag 1320
agatcgccaa ggctttcaag ggaaacgagg gatacaagag cctcttcaag aaggatatta 1380
tcgagacaat cctgcctgag ttcctggacg ataaggatga gatcgctctc gtgaacagct 1440
tcaacggatt cactactgcc ttcaccggat tcttcgacaa cagggaaaac atgttcagcg 1500
aagaggccaa gagcacctct atcgctttca gatgcatcaa cgagaacctc acgcgttaca 1560
tcagcaacat ggacatcttc gagaaggtgg acgccatctt cgataagcac gaggtgcaag 1620
aaatcaaaga gaagatcctc aacagcgact acgacgtcga ggactttttt gaaggggagt 1680
tcttcaactt cgttctcacc caagagggca tcgacgtgta caacgctatt atcggaggat 1740
tcgtgaccga gtctggggag aagattaagg gactcaacga gtacatcaac ctgtacaacc 1800
agaaaacgaa gcagaagctc ccgaagttca agccgctcta caagcaggtt ctctctgatc 1860
gtgagagcct ctcattttac ggtgagggtt acacctctga cgaggaagtg cttgaggttt 1920
tccgtaacac cctcaacaag aacagcgaga tcttctcgtc catcaagaag ttggagaaac 1980
ttttcaagaa cttcgacgag tacagcagcg ctgggatctt cgttaagaac ggacctgcta 2040
tcagcaccat cagcaaggat attttcggcg agtggaacgt gatcagggac aagtggaatg 2100
ctgagtacga tgacatccac ctcaagaaga aggctgtcgt cactgagaag tacgaggatg 2160
acaggcgtaa gtcgttcaag aagatcggct ctttcagcct cgagcagctt caagaatacg 2220
ctgatgctga tctcagcgtg gtcgagaagc tcaaagagat catcatccag aaggtcgacg 2280
agatctacaa ggtgtacggg tcctctgaga agttgttcga tgctgatttc gtcctcgaga 2340
agagtctgaa gaagaacgac gctgtcgtcg cgatcatgaa ggatttgctc gacagcgtga 2400
agtccttcga gaactatatc aaggccttct tcggagaggg caaagagact aatagggacg 2460
agtctttcta cggggatttc gtgctcgctt acgatatcct cctcaaggtg gaccatatct 2520
acgacgccat cagaaactac gtgacccaga agccttacag caaggacaag ttcaagttgt 2580
actttcagaa cccgcagttc atgggcggat gggacaaaga caaagagaca gattacaggg 2640
ccaccatcct caggtacggg tctaagtact acctggccat catggacaag aaatacgcca 2700
agtgcctcca aaagatcgac aaggatgacg tgaacgggaa ctatgagaag atcaactaca 2760
agctccttcc gggaccgaac aagatgcttc ctaaggtgtt cttcagcaag aaatggatgg 2820
cctactacaa cccgtctgag gacatccaga aaatctacaa gaacgggacc ttcaagaaag 2880
gcgacatgtt caacctcaac gactgccaca agctcatcga tttcttcaag gacagcatct 2940
cgcgttaccc gaagtggtct aacgcttacg actttaactt cagcgagaca gaaaagtaca 3000
aggatatcgc cgggttctac cgtgaggttg aggaacaggg ttacaaggtt agcttcgaga 3060
gcgcctccaa gaaagaggtt gacaagttgg tcgaagaggg caagctctac atgttccaga 3120
tctataacaa ggacttctcc gacaagagcc acggaactcc taacctccat acgatgtact 3180
tcaagctgct tttcgacgag aacaaccacg ggcagatcag actttctggt ggtgctgaac 3240
tcttcatgcg tagggcctca ctcaagaaag aagagttggt tgttcacccg gccaactctc 3300
caatcgctaa caagaatcct gacaacccga aaaagaccac cacgctgtct tacgacgtct 3360
acaaggacaa aaggttcagc gaggaccagt acgagcttca tatcccgatc gctatcaaca 3420
agtgcccgaa gaacatcttc aagatcaata ccgaggtgag ggtgctgctc aagcacgatg 3480
ataaccctta cgtgatcgga atcgatcgtg gtgagagaaa cctcctctac atcgttgtgg 3540
tggacggaaa gggaaacatc gtcgagcagt acagcctgaa cgagattatc aacaatttca 3600
acggcatcag gatcaagacc gactaccact cactcctcga taagaaagaa aaagagcgtt 3660
tcgaggccag gcagaactgg acttctatcg aaaacatcaa agagttgaag gccggctaca 3720
tctctcaggt ggtgcataag atctgcgagc tggtggaaaa gtacgatgct gtgatcgctc 3780
ttgaggacct caactctggg ttcaagaaca gtagagtgaa ggttgagaag caggtctacc 3840
aaaagttcga gaagatgctc atcgacaagc tcaactacat ggtggacaaa aagagcaacc 3900
cttgcgctac cggtggtgct cttaagggat accagatcac gaacaagttc gagtccttca 3960
agagcatgag cacccagaac ggcttcatct tctatatccc tgcttggctc accagcaaga 4020
tcgatccttc tactggtttc gtgaacctgc tcaagaccaa gtacacctcg atcgccgaca 4080
gcaagaagtt catctcgtct ttcgacagga tcatgtacgt gccggaagag gatcttttcg 4140
agttcgctct cgactataag aacttcagca ggaccgacgc cgactacatt aagaagtgga 4200
agctctactc ctacgggaac cgtatcagga tcttccgaaa tccgaagaaa aacaacgtgt 4260
tcgactggga agaagtgtgc ctcacctctg cctacaaaga actgttcaac aagtacggca 4320
tcaactacca gcagggtgat atcagggctc ttttgtgcga gcagagcgac aaggcattct 4380
acagctcatt catggccctc atgtctctca tgctccagat gaggaactct atcaccggaa 4440
ggaccgatgt ggacttcctt atctctccgg tcaagaactc tgacgggatc ttctacgaca 4500
gccgtaacta tgaggctcaa gagaacgcta tcctgccgaa gaatgctgat gcaaacgggg 4560
cttacaacat tgcgagaaag gttctctggg ctatcgggca gtttaagaaa gcggaagatg 4620
agaagctcga caaggtgaag atcgccatct ccaacaaaga gtggcttgag tacgctcaga 4680
cctccgttaa gcacaagagg cctgctgcta ctaagaaagc tggccaggcc aaaaagaaga 4740
agtgaggcgc gccgagctcc aggcctccca gctttcgtcc gtatcatcgg tttcgacaac 4800
gttcgtcaag ttcaatgcat cagtttcatt gcccacacac cagaatccta ctaagtttga 4860
gtattatggc attggaaaag ctgttttctt ctatcatttg ttctgcttgt aatttactgt 4920
gttctttcag tttttgtttt cggacatcaa aatgcaaatg gatggataag agttaataaa 4980
tgatatggtc cttttgttca ttctcaaatt attattatct gttgttttta ctttaatggg 5040
ttgaatttaa gtaagaaagg aactaacagt gtgatattaa ggtgcaatgt tagacatata 5100
aaacagtctt tcacctctct ttggttatgt cttgaattgg tttgtttctt cacttatctg 5160
tgtaatcaag tttactatga gtctatgatc aagtaattat gcaatcaagt taagtacagt 5220
ataggctt 5228
<210> 53
<211> 37
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HH ribozyme encoding sequence
<400> 53
ctgatgagtc cgtgaggacg aaacgagtaa gctcgtc 37
<210> 54
<211> 68
<212> DNA
<213> Hepatitis Delta Virus
<400> 54
ggccggcatg gtcccagcct cctcgctggc gccggctggg caacatgctt cggcatggcg 60
aatgggac 68
<210> 55
<211> 15245
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pZFNnptII_Cpf1 target vector
<400> 55
tgcaggaatt cgatctggca cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac 60
gcaattaatg tgagttagct cactcattag gcaccccagg ctttacactt tatgcttccg 120
gctcgtatgt tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa cagctatgac 180
atgattacga attcaaaaat tacggatatg aatataggca tatccgtatc cgaattatcc 240
gtttgacagc tagcaacgat tgtacaattg cttctttaaa aaaggaagaa agaaagaaag 300
aaaagaatca acatcagcgt taacaaacgg ccccgttacg gcccaaacgg tcatatagag 360
taacggcgtt aagcgttgaa agactcctat cgaaatacgt aaccgcaaac gtgtcatagt 420
cagatcccct cttccttcac cgcctcaaac acaaaaataa tcttctacag cctatatata 480
caaccccccc ttctatctct cctttctcac aattcatcat ctttctttct ctacccccaa 540
ttttaagaaa tcctctcttc tcctcttcat tttcaaggta aatctctctc tctctctctc 600
tctctgttat tccttgtttt aattaggtat gtattattgc tagtttgtta atctgcttat 660
cttatgtatg ccttatgtga atatctttat cttgttcatc tcatccgttt agaagctata 720
aatttgttga tttgactgtg tatctacacg tggttatgtt tatatctaat cagatatgaa 780
tttcttcata ttgttgcgtt tgtgtgtacc aatccgaaat cgttgatttt tttcatttaa 840
tcgtgtagct aattgtacgt atacatatgg atctacgtat caattgttca tctgtttgtg 900
tttgtatgta tacagatctg aaaacatcac ttctctcatc tgattgtgtt gttacataca 960
tagatataga tctgttatat catttttttt attaattgtg tatatatata tgtgcataga 1020
tctggattac atgattgtga ttatttacat gattttgtta tttacgtatg tatatatgta 1080
gatctggact ttttggagtt gttgacttga ttgtatttgt gtgtgtatat gtgtgttctg 1140
atcttgatat gttatgtatg tgcagcgaat tcggcgcgcc atggctccta agaagaagag 1200
gaaggttagc aagctcgaga agtttaccaa ctgctacagc ctctctaaga ccctcaggtt 1260
caaggctatc cctgtgggaa agacccaaga gaatatcgac aacaagaggc tcctcgtcga 1320
ggatgagaag agagctgaag attacaaggg cgtgaagaag ctcctcgaca ggtactacct 1380
cagcttcatc aacgatgtgc tccacagcat caagctcaag aacctcaaca actacatcag 1440
cctcttccgt aagaaaacca ggaccgagaa agagaacaaa gagcttgaga acctcgagat 1500
caacctccgt aaagagatcg ccaaggcttt caagggaaac gagggataca agagcctctt 1560
caagaaggat attatcgaga caatcctgcc tgagttcctg gacgataagg atgagatcgc 1620
tctcgtgaac agcttcaacg gattcactac tgccttcacc ggattcttcg acaacaggga 1680
aaacatgttc agcgaagagg ccaagagcac ctctatcgct ttcagatgca tcaacgagaa 1740
cctcacgcgt tacatcagca acatggacat cttcgagaag gtggacgcca tcttcgataa 1800
gcacgaggtg caagaaatca aagagaagat cctcaacagc gactacgacg tcgaggactt 1860
ttttgaaggg gagttcttca acttcgttct cacccaagag ggcatcgacg tgtacaacgc 1920
tattatcgga ggattcgtga ccgagtctgg ggagaagatt aagggactca acgagtacat 1980
caacctgtac aaccagaaaa cgaagcagaa gctcccgaag ttcaagccgc tctacaagca 2040
ggttctctct gatcgtgaga gcctctcatt ttacggtgag ggttacacct ctgacgagga 2100
agtgcttgag gttttccgta acaccctcaa caagaacagc gagatcttct cgtccatcaa 2160
gaagttggag aaacttttca agaacttcga cgagtacagc agcgctggga tcttcgttaa 2220
gaacggacct gctatcagca ccatcagcaa ggatattttc ggcgagtgga acgtgatcag 2280
ggacaagtgg aatgctgagt acgatgacat ccacctcaag aagaaggctg tcgtcactga 2340
gaagtacgag gatgacaggc gtaagtcgtt caagaagatc ggctctttca gcctcgagca 2400
gcttcaagaa tacgctgatg ctgatctcag cgtggtcgag aagctcaaag agatcatcat 2460
ccagaaggtc gacgagatct acaaggtgta cgggtcctct gagaagttgt tcgatgctga 2520
tttcgtcctc gagaagagtc tgaagaagaa cgacgctgtc gtcgcgatca tgaaggattt 2580
gctcgacagc gtgaagtcct tcgagaacta tatcaaggcc ttcttcggag agggcaaaga 2640
gactaatagg gacgagtctt tctacgggga tttcgtgctc gcttacgata tcctcctcaa 2700
ggtggaccat atctacgacg ccatcagaaa ctacgtgacc cagaagcctt acagcaagga 2760
caagttcaag ttgtactttc agaacccgca gttcatgggc ggatgggaca aagacaaaga 2820
gacagattac agggccacca tcctcaggta cgggtctaag tactacctgg ccatcatgga 2880
caagaaatac gccaagtgcc tccaaaagat cgacaaggat gacgtgaacg ggaactatga 2940
gaagatcaac tacaagctcc ttccgggacc gaacaagatg cttcctaagg tgttcttcag 3000
caagaaatgg atggcctact acaacccgtc tgaggacatc cagaaaatct acaagaacgg 3060
gaccttcaag aaaggcgaca tgttcaacct caacgactgc cacaagctca tcgatttctt 3120
caaggacagc atctcgcgtt acccgaagtg gtctaacgct tacgacttta acttcagcga 3180
gacagaaaag tacaaggata tcgccgggtt ctaccgtgag gttgaggaac agggttacaa 3240
ggttagcttc gagagcgcct ccaagaaaga ggttgacaag ttggtcgaag agggcaagct 3300
ctacatgttc cagatctata acaaggactt ctccgacaag agccacggaa ctcctaacct 3360
ccatacgatg tacttcaagc tgcttttcga cgagaacaac cacgggcaga tcagactttc 3420
tggtggtgct gaactcttca tgcgtagggc ctcactcaag aaagaagagt tggttgttca 3480
cccggccaac tctccaatcg ctaacaagaa tcctgacaac ccgaaaaaga ccaccacgct 3540
gtcttacgac gtctacaagg acaaaaggtt cagcgaggac cagtacgagc ttcatatccc 3600
gatcgctatc aacaagtgcc cgaagaacat cttcaagatc aataccgagg tgagggtgct 3660
gctcaagcac gatgataacc cttacgtgat cggaatcgat cgtggtgaga gaaacctcct 3720
ctacatcgtt gtggtggacg gaaagggaaa catcgtcgag cagtacagcc tgaacgagat 3780
tatcaacaat ttcaacggca tcaggatcaa gaccgactac cactcactcc tcgataagaa 3840
agaaaaagag cgtttcgagg ccaggcagaa ctggacttct atcgaaaaca tcaaagagtt 3900
gaaggccggc tacatctctc aggtggtgca taagatctgc gagctggtgg aaaagtacga 3960
tgctgtgatc gctcttgagg acctcaactc tgggttcaag aacagtagag tgaaggttga 4020
gaagcaggtc taccaaaagt tcgagaagat gctcatcgac aagctcaact acatggtgga 4080
caaaaagagc aacccttgcg ctaccggtgg tgctcttaag ggataccaga tcacgaacaa 4140
gttcgagtcc ttcaagagca tgagcaccca gaacggcttc atcttctata tccctgcttg 4200
gctcaccagc aagatcgatc cttctactgg tttcgtgaac ctgctcaaga ccaagtacac 4260
ctcgatcgcc gacagcaaga agttcatctc gtctttcgac aggatcatgt acgtgccgga 4320
agaggatctt ttcgagttcg ctctcgacta taagaacttc agcaggaccg acgccgacta 4380
cattaagaag tggaagctct actcctacgg gaaccgtatc aggatcttcc gaaatccgaa 4440
gaaaaacaac gtgttcgact gggaagaagt gtgcctcacc tctgcctaca aagaactgtt 4500
caacaagtac ggcatcaact accagcaggg tgatatcagg gctcttttgt gcgagcagag 4560
cgacaaggca ttctacagct cattcatggc cctcatgtct ctcatgctcc agatgaggaa 4620
ctctatcacc ggaaggaccg atgtggactt ccttatctct ccggtcaaga actctgacgg 4680
gatcttctac gacagccgta actatgaggc tcaagagaac gctatcctgc cgaagaatgc 4740
tgatgcaaac ggggcttaca acattgcgag aaaggttctc tgggctatcg ggcagtttaa 4800
gaaagcggaa gatgagaagc tcgacaaggt gaagatcgcc atctccaaca aagagtggct 4860
tgagtacgct cagacctccg ttaagcacaa gaggcctgct gctactaaga aagctggcca 4920
ggccaaaaag aagaagtgag gcgcgccgag ctccaggcct cccagctttc gtccgtatca 4980
tcggtttcga caacgttcgt caagttcaat gcatcagttt cattgcccac acaccagaat 5040
cctactaagt ttgagtatta tggcattgga aaagctgttt tcttctatca tttgttctgc 5100
ttgtaattta ctgtgttctt tcagtttttg ttttcggaca tcaaaatgca aatggatgga 5160
taagagttaa taaatgatat ggtccttttg ttcattctca aattattatt atctgttgtt 5220
tttactttaa tgggttgaat ttaagtaaga aaggaactaa cagtgtgata ttaaggtgca 5280
atgttagaca tataaaacag tctttcacct ctctttggtt atgtcttgaa ttggtttgtt 5340
tcttcactta tctgtgtaat caagtttact atgagtctat gatcaagtaa ttatgcaatc 5400
aagttaagta cagtataggc ttgagctccc taggatcaag cttatcgatg tcgacaggcc 5460
ttaagggcca gatcttgggc ccggtacccg atcagattgt cgtttcccgc cttcggttta 5520
aactatcagt gtttgacagg atatattggc gggtaaacct aagagaaaag agcgtttatt 5580
agaataatcg gatatttaaa agggcgtgaa aaggtttatc cgttcgtcca tttgtatgtg 5640
catgccaacc acagggttcc cctcgggagt gcttggcatt ccgtgcgata atgacttctg 5700
ttcaaccacc caaacgtcgg aaagcctgac gacggagcag cattccaaaa agatcccttg 5760
gctcgtctgg gtcggctaga aggtcgagtg ggctgctgtg gcttgatccc tcaacgcggt 5820
cgcggacgta gcgcagcgcc gaaaaatcct cgatcgcaaa tccgacgctg tcgaaaagcg 5880
tgatctgctt gtcgctcttt cggccgacgt cctggccagt catcacgcgc caaagttccg 5940
tcacaggatg atctggcgcg agttgctgga tctcgccttc aatccgggtc tgtggcggga 6000
actccacgaa aatatccgaa cgcagcaaga tatcgcggtg catctcggtc ttgcctgggc 6060
agtcgccgcc gacgccgttg atgtggacgc cgaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg 6120
ataatctcat gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg 6180
tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc 6240
aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc 6300
tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtt cttctagtgt 6360
agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc 6420
taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact 6480
caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac 6540
agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagctatgag 6600
aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg 6660
gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg 6720
tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga 6780
gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt 6840
ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccga ttaccgcctt 6900
tgagtgagct gataccgctc gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt cagtgagcga 6960
ggaagcggaa gagcgcctga tgcggtattt tctccttacg catctgtgcg gtatttcaca 7020
ccgcatatgg tgcactctca gtacaatctg ctctgatgcc gcatagttaa gccagtatac 7080
actccgctat cgctacgtga ctgggtcatg gctgcgcccc gacacccgcc aacacccgct 7140
gacgcgccct gacgggcttg tctgctcccg gcatccgctt acagacaagc tgtgaccgtc 7200
tccgggagct gcatgtgtca gaggttttca ccgtcatcac cgaaacgcgc gaggcagggg 7260
tacgtcgagg tcgatccaac ccctccgctg ctatagtgca gtcggcttct gacgttcagt 7320
gcagccgtcg tctgaaaacg acatgtcgca caagtcctaa gttacgcgac aggctgccgc 7380
cctgcccttt tcctggcgtt ttcttgtcgc gtgttttagt cgcataaagt agaatacttg 7440
cgactagaac cggagacatt acgccatgaa caagagcgcc gccgctggcc tgctgggcta 7500
tgcccgcgtc agcaccgacg accaggactt gaccaaccaa cgggccgaac tgcacgcggc 7560
cggctgcacc aagctgtttt ccgagaagat caccggcacc aggcgcgacc gcccggagct 7620
ggccaggatg cttgaccacc tacgccctgg cgacgttgtg acagtgacca ggctagaccg 7680
cctggcccgc agcacccgcg acctactgga cattgccgag cgcatccagg aggccggcgc 7740
gggcctgcgt agcctggcag agccgtgggc cgacaccacc acgccggccg gccgcatggt 7800
gttgaccgtg ttcgccggca ttgccgagtt cgagcgttcc ctaatcatcg accgcacccg 7860
gagcgggcgc gaggccgcca aggcgcgagg cgtgaagttt ggcccccgcc ctaccctcac 7920
cccggcacag atcgcgcacg cccgcgagct gatcgaccag gaaggccgca ccgtgaaaga 7980
ggcggctgca ctgcttggcg tgcatcgctc gaccctgtac cgcgcacttg agcgcagcga 8040
ggaagtgacg cccaccgagg ccaggcggcg cggtgccttc cgtgaggacg cattgaccga 8100
ggccgacgcc ctggcggccg ccgagaatga acgccaagag gaacaagcat gaaaccgcac 8160
caggacggcc aggacgaacc gtttttcatt accgaagaga tcgaggcgga gatgatcgcg 8220
gccgggtacg tgttcgagcc gcccgcgcac gtctcaaccg tgcggctgca tgaaatcctg 8280
gccggtttgt ctgatgccaa gctcgcggcc tggccggcga gcttggccgc tgaagaaacc 8340
gagcgccgcc gtctaaaaag gtgatgtgta tttgagtaaa acagcttgcg tcatgcggtc 8400
gctgcgtata tgatgcgatg agtaaataaa caaatacgca aggggaacgc atgaaggtta 8460
tcgctgtact taaccagaaa ggcgggtcag gcaagacgac catcgcaacc catctagccc 8520
gcgccctgca actcgccggg gccgatgttc tgttagtcga ttccgatccc cagggcagtg 8580
cccgcgattg ggcggccgtg cgggaagatc aaccgctaac cgttgtcggc atcgaccgcc 8640
cgacgattga ccgcgacgtg aaggccatcg gccggcgcga cttcgtagtg atcgacggag 8700
cgccccaggc ggcggacttg gctgtgtccg cgatcaaggc agccgacttc gtgctgattc 8760
cggtgcagcc aagcccttac gacatatggg ccaccgccga cctggtggag ctggttaagc 8820
agcgcattga ggtcacggat ggaaggctac aagcggcctt tgtcgtgtcg cgggcgatca 8880
aaggcacgcg catcggcggt gaggttgccg aggcgctggc cgggtacgag ctgcccattc 8940
ttgagtcccg tatcacgcag cgcgtgagct acccaggcac tgccgccgcc ggcacaaccg 9000
ttcttgaatc agaacccgag ggcgacgctg cccgcgaggt ccaggcgctg gccgctgaaa 9060
ttaaatcaaa actcatttga gttaatgagg taaagagaaa atgagcaaaa gcacaaacac 9120
gctaagtgcc ggccgtccga gcgcacgcag cagcaaggct gcaacgttgg ccagcctggc 9180
agacacgcca gccatgaagc gggtcaactt tcagttgccg gcggaggatc acaccaagct 9240
gaagatgtac gcggtacgcc aaggcaagac cattaccgag ctgctatctg aatacatcgc 9300
gcagctacca gagtaaatga gcaaatgaat aaatgagtag atgaatttta gcggctaaag 9360
gaggcggcat ggaaaatcaa gaacaaccag gcaccgacgc cgtggaatgc cccatgtgtg 9420
gaggaacggg cggttggcca ggcgtaagcg gctgggttgt ctgccggccc tgcaatggca 9480
ctggaacccc caagcccgag gaatcggcgt gagcggtcgc aaaccatccg gcccggtaca 9540
aatcggcgcg gcgctgggtg atgacctggt ggagaagttg aaggcggcgc aggccgccca 9600
gcggcaacgc atcgaggcag aagcacgccc cggtgaatcg tggcaagcgg ccgctgatcg 9660
aatccgcaaa gaatcccggc aaccgccggc agccggtgcg ccgtcgatta ggaagccgcc 9720
caagggcgac gagcaaccag attttttcgt tccgatgctc tatgacgtgg gcacccgcga 9780
tagtcgcagc atcatggacg tggccgtttt ccgtctgtcg aagcgtgacc gacgagctgg 9840
cgaggtgatc cgctacgagc ttccagacgg gcacgtagag gtttccgcag ggccggccgg 9900
catggcgagt gtgtgggatt acgacctggt actgatggcg gtttcccatc taaccgaatc 9960
catgaaccga taccgggaag ggaagggaga caagcccggc cgcgtgttcc gtccacacgt 10020
tgcggacgta ctcaagttct gccggcgagc cgatggcgga aagcagaaag acgacctggt 10080
agaaacctgc attcggttaa acaccacgca cgttgccatg cagcgtacga agaaggccaa 10140
gaacggccgc ctggtgacgg tatccgaggg tgaagccttg attagccgct acaagatcgt 10200
aaagagcgaa accgggcggc cggagtacat cgagatcgag ctagctgatt ggatgtaccg 10260
cgagatcaca gaaggcaaga acccggacgt gctgacggtt caccccgatt actttttgat 10320
cgatcccggc atcggccgtt ttctctaccg cctggcacgc cgcgccgcag gcaaggcaga 10380
agccagatgg ttgttcaaga cgatctacga acgcagtggc agcgccggag agttcaagaa 10440
gttctgtttc accgtgcgca agctgatcgg gtcaaatgac ctgccggagt acgatttgaa 10500
ggaggaggcg gggcaggctg gcccgatcct agtcatgcgc taccgcaacc tgatcgaggg 10560
cgaagcatcc gccggttcct aatgtacgga gcagatgcta gggcaaattg ccctagcagg 10620
ggaaaaaggt cgaaaaggtc tctttcctgt ggatagcacg tacattggga acccaaagcc 10680
gtacattggg aaccggaacc cgtacattgg gaacccaaag ccgtacattg ggaaccggtc 10740
acacatgtaa gtgactgata taaaagagaa aaaaggcgat ttttccgcct aaaactcttt 10800
aaaacttatt aaaactctta aaacccgcct ggcctgtgca taactgtctg gccagcgcac 10860
agccgaagag ctgcaaaaag cgcctaccct tcggtcgctg cgctccctac gccccgccgc 10920
ttcgcgtcgg cctatcgcgg ccgctggccg ctcaaaaatg gctggcctac ggccaggcaa 10980
tctaccaggg cgcggacaag ccgcgccgtc gccactcgac cgccggcgcc cacatcaagg 11040
caccggtggg tatgcctgac gatgcgtgga gaccgaaacc ttgcgctcgt tcgccagcca 11100
ggacagaaat gcctcgactt cgctgctgcc caaggttgcc gggtgacgca caccgtggaa 11160
acggatgaag gcacgaaccc agtggacata agcctgttcg gttcgtaagc tgtaatgcaa 11220
gtagcgtatg cgctcacgca actggtccag aaccttgacc gaacgcagcg gtggtaacgg 11280
cgcagtggcg gttttcatgg cttgttatga ctgttttttt ggggtacagt ctatgcctcg 11340
ggcatccaag cagcaagcgc gttacgccgt gggtcgatgt ttgatgttat ggagcagcaa 11400
cgatgttacg cagcagggca gtcgccctaa aacaaagtta aacatcatga gggaagcggt 11460
gatcgccgaa gtatcgactc aactatcaga ggtagttggc gtcatcgagc gccatctcga 11520
accgacgttg ctggccgtac atttgtacgg ctccgcagtg gatggcggcc tgaagccaca 11580
cagtgatatt gatttgctgg ttacggtgac cgtaaggctt gatgaaacaa cgcggcgagc 11640
tttgatcaac gaccttttgg aaacttcggc ttcccctgga gagagcgaga ttctccgcgc 11700
tgtagaagtc accattgttg tgcacgacga catcattccg tggcgttatc cagctaagcg 11760
cgaactgcaa tttggagaat ggcagcgcaa tgacattctt gcaggtatct tcgagccagc 11820
cacgatcgac attgatctgg ctatcttgct gacaaaagca agagaacata gcgttgcctt 11880
ggtaggtcca gcggcggagg aactctttga tccggttcct gaacaggatc tatttgaggc 11940
gctaaatgaa accttaacgc tatggaactc gccgcccgac tgggctggcg atgagcgaaa 12000
tgtagtgctt acgttgtccc gcatttggta cagcgcagta accggcaaaa tcgcgccgaa 12060
ggatgtcgct gccgactggg caatggagcg cctgccggcc cagtatcagc ccgtcatact 12120
tgaagctaga caggcttatc ttggacaaga agaagatcgc ttggcctcgc gcgcagatca 12180
gttggaagaa tttgtccact acgtgaaagg cgagatcacc aaggtagtcg gcaaataatg 12240
tctaacaatt cgttcaagcc gacgccgctt cgcggcgcgg cttaactcaa gcgttagatg 12300
cactaagcac ataattgctc acagccaaac tatcaggtca agtctgcttt tattattttt 12360
aagcgtgcat aataagccct acacaaattg ggagatatat catgaaaggc tggctttttc 12420
ttgttatcgc aatagttggc gaagtaatcg caacatagct tgcttggtcg ttccgcgtga 12480
acgtcggctc gattgtacct gcgttcaaat actttgcgat cgtgttgcgc gcctgcccgg 12540
tgcgtcggct gatctcacgg atcgactgct tctctcgcaa cgccatccga cggatgatgt 12600
ttaaaagtcc catgtggatc actccgttgc cccgtcgctc accgtgttgg ggggaaggtg 12660
cacatggctc agttctcaat ggaaattatc tgcctaaccg gctcagttct gcgtagaaac 12720
caacatgcaa gctccaccgg gtgcaaagcg gcagcggcgg caggatatat tcaattgtaa 12780
atggcttcat gtccgggaaa tctacatgga tcagcaatga gtatgatggt caatatggag 12840
aaaaagaaag agtaattacc aatttttttt caattcaaaa atgtagatgt ccgcagcgtt 12900
attataaaat gaaagtacat tttgataaaa cgacaaatta cgatccgtcg tatttatagg 12960
cgaaagcaat aaacaaatta ttctaattcg gaaatcttta tttcgacgtg tctacattca 13020
cgtccaaatg ggggcttaga tgagaaactt cacgatcggc tctagttcga gcgatctagt 13080
aacatagatg acaccgcgcg cgataattta tcctagtttg cgcgctatat tttgttttct 13140
atcgcgtatt aaatgtataa ttgcgggact ctaatcataa aaacccatct cataaataac 13200
gtcatgcatt acatgttaat tattacatgc ttaacgtaat tcaacagaaa ttatatgata 13260
atcatcgcaa gaccggcaac aggattcaat cttaagaaac tttattgcca aatgtttgaa 13320
cgatcgggga aattcgtttc tatgcttcaa ttctgctcta tagatgttct tctagtctta 13380
acttttagaa ggcacaacat ttgaaatgtt ggtaattttt ctgctgggta gtgaaccatt 13440
gtaatttgtg tttgcttata ttatccgttg ggtttctcta tgttatctgt ggggccatat 13500
cccagaactg gttgagtcgg tccaacacct gggtgccaat catgtcgatg gtggggtatg 13560
gtccggattg aaagaaatat agtttaaata tttattgata aaataacaag tcaggtatta 13620
tagtccaagc aaaaacataa atttattgat gcaagtttaa attcagaaat atttcaataa 13680
ctgattatat cagctggtac attgccgtag atgaaagact gagtgcgata ttatgtgtaa 13740
tacataaatt gatgatatag ctagcttagc tcatcgggtc agaagaactc gtcaagaagg 13800
cgatagaagg cgatgcgctg cgaatcggga gcggcgatac cgtaaagcac gaggaagcgg 13860
tcagcccatt cgccgccaag ctcttcagca atatcacggg tagccaacgc tatgtcctga 13920
tagcggtccg ccacacccag ccggccacag tcgatgaatc cagaaaagcg gccattttcc 13980
accatgatat tcggcaagca ggcatcgcca tgagtcacga cgagatcctc gccgtcgggc 14040
atgcgcgcct tgagcctggc gaacagttcg gctggcgcga gcccctgatg ctcttcgtcc 14100
agatcatcct gatcgacaag accggcttcc atccgagtac gtgctcgctc gatgcgatgt 14160
ttcgcttggt ggtcgaatgg gcaggtagcc ggatcaagcg tatgcagccg ccgcattgca 14220
tcagccatga tggatacttt ctcggcagga gcaaggtgag atgacaggag atcctgcccc 14280
ggcacttcgc ccaatagcag ccagtccctt cccgcttcag tgacaacgtc gagcacagct 14340
gcgcaaggaa cgcccgtcgt ggccagccac gatagccgcg ctgcctcgtc ctgaagttca 14400
ttcagggcac cggacaggtc ggtcttgaca aaaagaaccg ggcgcccctg cgctgacagc 14460
cggaacacgg cggcatcaga gcagccgatt gtctgttgtg cccagtcata gccgaatagc 14520
ctctccaccc aagcggccgg agaacctgcg tgcaatccat cttgttcaat ccaagctccc 14580
attttctgtg attttggatg tgtttttgta tggattgaga gtgaatatga gactctaatt 14640
ggataccgag gggaatttat ggaacgtcag tggagcattt ttgacaagaa atatttgcta 14700
gctgatagtg accttaggcg acttttgaac gcgcaataat ggtttctgac gtatgtgctt 14760
agctcattaa actccagaaa cccgcggctg agtggctcct tcaacgttgc ggttctgtca 14820
gttccaaacg taaaacggct tgtcccgcgt catcggcggg ggtcattccg gactgtgggg 14880
ccatatccca gaactggttg agtcggtcca acacctgggt gccaatcatg tcgatggtgg 14940
ggtatggcca attttttttc aattcaaaaa tgtagatgtc cgcagcgtta ttataaaatg 15000
aaagtacatt ttgataaaac gacaaattac gatccgtcgt atttataggc gaaagcaata 15060
aacaaattat tctaattcgg aaatctttat ttcgacgtgt ctacattcac gtccaaatgg 15120
gggcttagat gagaaacttc acgatcggct ctagaggcca tggcggccgc actagtggat 15180
cccccgggat gcatgaattc aagcttatcg atgtcgacag gccttaaggg ccagatcccc 15240
cgggc 15245
<210> 56
<211> 1611
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA expression cassette
<400> 56
aaaaattacg gatatgaata taggcatatc cgtatccgaa ttatccgttt gacagctagc 60
aacgattgta caattgcttc tttaaaaaag gaagaaagaa agaaagaaaa gaatcaacat 120
cagcgttaac aaacggcccc gttacggccc aaacggtcat atagagtaac ggcgttaagc 180
gttgaaagac tcctatcgaa atacgtaacc gcaaacgtgt catagtcaga tcccctcttc 240
cttcaccgcc tcaaacacaa aaataatctt ctacagccta tatatacaac ccccccttct 300
atctctcctt tctcacaatt catcatcttt ctttctctac ccccaatttt aagaaatcct 360
ctcttctcct cttcattttc aaggtaaatc tctctctctc tctctctctc tgttattcct 420
tgttttaatt aggtatgtat tattgctagt ttgttaatct gcttatctta tgtatgcctt 480
atgtgaatat ctttatcttg ttcatctcat ccgtttagaa gctataaatt tgttgatttg 540
actgtgtatc tacacgtggt tatgtttata tctaatcaga tatgaatttc ttcatattgt 600
tgcgtttgtg tgtaccaatc cgaaatcgtt gatttttttc atttaatcgt gtagctaatt 660
gtacgtatac atatggatct acgtatcaat tgttcatctg tttgtgtttg tatgtataca 720
gatctgaaaa catcacttct ctcatctgat tgtgttgtta catacataga tatagatctg 780
ttatatcatt ttttttatta attgtgtata tatatatgtg catagatctg gattacatga 840
ttgtgattat ttacatgatt ttgttattta cgtatgtata tatgtagatc tggacttttt 900
ggagttgttg acttgattgt atttgtgtgt gtatatgtgt gttctgatct tgatatgtta 960
tgtatgtgca gcggatccaa attactgatg agtccgtgag gacgaaacga gtaagctcgt 1020
ctaatttcta ctaagtgtag atgagtcttc gctcagtctg accgcggaag acctggccgg 1080
catggtccca gcctcctcgc tggcgccggc tgggcaacat gcttcggcat ggcgaatggg 1140
accaggcctc ccagctttcg tccgtatcat cggtttcgac aacgttcgtc aagttcaatg 1200
catcagtttc attgcccaca caccagaatc ctactaagtt tgagtattat ggcattggaa 1260
aagctgtttt cttctatcat ttgttctgct tgtaatttac tgtgttcttt cagtttttgt 1320
tttcggacat caaaatgcaa atggatggat aagagttaat aaatgatatg gtccttttgt 1380
tcattctcaa attattatta tctgttgttt ttactttaat gggttgaatt taagtaagaa 1440
aggaactaac agtgtgatat taaggtgcaa tgttagacat ataaaacagt ctttcacctc 1500
tctttggtta tgtcttgaat tggtttgttt cttcacttat ctgtgtaatc aagtttacta 1560
tgagtctatg atcaagtaat tatgcaatca agttaagtac agtataggct t 1611
<210> 57
<211> 9763
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pZFNtDTnptII plasmid
<400> 57
agcttatcga tgtcgacagg ccttaagggc cagatcttgg gcccggtacc cgatcagatt 60
gtcgtttccc gccttcggtt taaactatca gtgtttgaca ggatatattg gcgggtaaac 120
ctaagagaaa agagcgttta ttagaataat cggatattta aaagggcgtg aaaaggttta 180
tccgttcgtc catttgtatg tgcatgccaa ccacagggtt cccctcggga gtgcttggca 240
ttccgtgcga taatgacttc tgttcaacca cccaaacgtc ggaaagcctg acgacggagc 300
agcattccaa aaagatccct tggctcgtct gggtcggcta gaaggtcgag tgggctgctg 360
tggcttgatc cctcaacgcg gtcgcggacg tagcgcagcg ccgaaaaatc ctcgatcgca 420
aatccgacgc tgtcgaaaag cgtgatctgc ttgtcgctct ttcggccgac gtcctggcca 480
gtcatcacgc gccaaagttc cgtcacagga tgatctggcg cgagttgctg gatctcgcct 540
tcaatccggg tctgtggcgg gaactccacg aaaatatccg aacgcagcaa gatatcgcgg 600
tgcatctcgg tcttgcctgg gcagtcgccg ccgacgccgt tgatgtggac gccgaaaagg 660
atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg 720
ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt 780
ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg 840
ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata 900
ccaaatactg ttcttctagt gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca 960
ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag 1020
tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc 1080
tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga 1140
tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg 1200
tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac 1260
gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg 1320
tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg 1380
ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct 1440
gtggataacc gattaccgcc tttgagtgag ctgataccgc tcgccgcagc cgaacgaccg 1500
agcgcagcga gtcagtgagc gaggaagcgg aagagcgcct gatgcggtat tttctcctta 1560
cgcatctgtg cggtatttca caccgcatat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg 1620
ccgcatagtt aagccagtat acactccgct atcgctacgt gactgggtca tggctgcgcc 1680
ccgacacccg ccaacacccg ctgacgcgcc ctgacgggct tgtctgctcc cggcatccgc 1740
ttacagacaa gctgtgaccg tctccgggag ctgcatgtgt cagaggtttt caccgtcatc 1800
accgaaacgc gcgaggcagg ggtacgtcga ggtcgatcca acccctccgc tgctatagtg 1860
cagtcggctt ctgacgttca gtgcagccgt cgtctgaaaa cgacatgtcg cacaagtcct 1920
aagttacgcg acaggctgcc gccctgccct tttcctggcg ttttcttgtc gcgtgtttta 1980
gtcgcataaa gtagaatact tgcgactaga accggagaca ttacgccatg aacaagagcg 2040
ccgccgctgg cctgctgggc tatgcccgcg tcagcaccga cgaccaggac ttgaccaacc 2100
aacgggccga actgcacgcg gccggctgca ccaagctgtt ttccgagaag atcaccggca 2160
ccaggcgcga ccgcccggag ctggccagga tgcttgacca cctacgccct ggcgacgttg 2220
tgacagtgac caggctagac cgcctggccc gcagcacccg cgacctactg gacattgccg 2280
agcgcatcca ggaggccggc gcgggcctgc gtagcctggc agagccgtgg gccgacacca 2340
ccacgccggc cggccgcatg gtgttgaccg tgttcgccgg cattgccgag ttcgagcgtt 2400
ccctaatcat cgaccgcacc cggagcgggc gcgaggccgc caaggcgcga ggcgtgaagt 2460
ttggcccccg ccctaccctc accccggcac agatcgcgca cgcccgcgag ctgatcgacc 2520
aggaaggccg caccgtgaaa gaggcggctg cactgcttgg cgtgcatcgc tcgaccctgt 2580
accgcgcact tgagcgcagc gaggaagtga cgcccaccga ggccaggcgg cgcggtgcct 2640
tccgtgagga cgcattgacc gaggccgacg ccctggcggc cgccgagaat gaacgccaag 2700
aggaacaagc atgaaaccgc accaggacgg ccaggacgaa ccgtttttca ttaccgaaga 2760
gatcgaggcg gagatgatcg cggccgggta cgtgttcgag ccgcccgcgc acgtctcaac 2820
cgtgcggctg catgaaatcc tggccggttt gtctgatgcc aagctcgcgg cctggccggc 2880
gagcttggcc gctgaagaaa ccgagcgccg ccgtctaaaa aggtgatgtg tatttgagta 2940
aaacagcttg cgtcatgcgg tcgctgcgta tatgatgcga tgagtaaata aacaaatacg 3000
caaggggaac gcatgaaggt tatcgctgta cttaaccaga aaggcgggtc aggcaagacg 3060
accatcgcaa cccatctagc ccgcgccctg caactcgccg gggccgatgt tctgttagtc 3120
gattccgatc cccagggcag tgcccgcgat tgggcggccg tgcgggaaga tcaaccgcta 3180
accgttgtcg gcatcgaccg cccgacgatt gaccgcgacg tgaaggccat cggccggcgc 3240
gacttcgtag tgatcgacgg agcgccccag gcggcggact tggctgtgtc cgcgatcaag 3300
gcagccgact tcgtgctgat tccggtgcag ccaagccctt acgacatatg ggccaccgcc 3360
gacctggtgg agctggttaa gcagcgcatt gaggtcacgg atggaaggct acaagcggcc 3420
tttgtcgtgt cgcgggcgat caaaggcacg cgcatcggcg gtgaggttgc cgaggcgctg 3480
gccgggtacg agctgcccat tcttgagtcc cgtatcacgc agcgcgtgag ctacccaggc 3540
actgccgccg ccggcacaac cgttcttgaa tcagaacccg agggcgacgc tgcccgcgag 3600
gtccaggcgc tggccgctga aattaaatca aaactcattt gagttaatga ggtaaagaga 3660
aaatgagcaa aagcacaaac acgctaagtg ccggccgtcc gagcgcacgc agcagcaagg 3720
ctgcaacgtt ggccagcctg gcagacacgc cagccatgaa gcgggtcaac tttcagttgc 3780
cggcggagga tcacaccaag ctgaagatgt acgcggtacg ccaaggcaag accattaccg 3840
agctgctatc tgaatacatc gcgcagctac cagagtaaat gagcaaatga ataaatgagt 3900
agatgaattt tagcggctaa aggaggcggc atggaaaatc aagaacaacc aggcaccgac 3960
gccgtggaat gccccatgtg tggaggaacg ggcggttggc caggcgtaag cggctgggtt 4020
gtctgccggc cctgcaatgg cactggaacc cccaagcccg aggaatcggc gtgagcggtc 4080
gcaaaccatc cggcccggta caaatcggcg cggcgctggg tgatgacctg gtggagaagt 4140
tgaaggcggc gcaggccgcc cagcggcaac gcatcgaggc agaagcacgc cccggtgaat 4200
cgtggcaagc ggccgctgat cgaatccgca aagaatcccg gcaaccgccg gcagccggtg 4260
cgccgtcgat taggaagccg cccaagggcg acgagcaacc agattttttc gttccgatgc 4320
tctatgacgt gggcacccgc gatagtcgca gcatcatgga cgtggccgtt ttccgtctgt 4380
cgaagcgtga ccgacgagct ggcgaggtga tccgctacga gcttccagac gggcacgtag 4440
aggtttccgc agggccggcc ggcatggcga gtgtgtggga ttacgacctg gtactgatgg 4500
cggtttccca tctaaccgaa tccatgaacc gataccggga agggaaggga gacaagcccg 4560
gccgcgtgtt ccgtccacac gttgcggacg tactcaagtt ctgccggcga gccgatggcg 4620
gaaagcagaa agacgacctg gtagaaacct gcattcggtt aaacaccacg cacgttgcca 4680
tgcagcgtac gaagaaggcc aagaacggcc gcctggtgac ggtatccgag ggtgaagcct 4740
tgattagccg ctacaagatc gtaaagagcg aaaccgggcg gccggagtac atcgagatcg 4800
agctagctga ttggatgtac cgcgagatca cagaaggcaa gaacccggac gtgctgacgg 4860
ttcaccccga ttactttttg atcgatcccg gcatcggccg ttttctctac cgcctggcac 4920
gccgcgccgc aggcaaggca gaagccagat ggttgttcaa gacgatctac gaacgcagtg 4980
gcagcgccgg agagttcaag aagttctgtt tcaccgtgcg caagctgatc gggtcaaatg 5040
acctgccgga gtacgatttg aaggaggagg cggggcaggc tggcccgatc ctagtcatgc 5100
gctaccgcaa cctgatcgag ggcgaagcat ccgccggttc ctaatgtacg gagcagatgc 5160
tagggcaaat tgccctagca ggggaaaaag gtcgaaaagg tctctttcct gtggatagca 5220
cgtacattgg gaacccaaag ccgtacattg ggaaccggaa cccgtacatt gggaacccaa 5280
agccgtacat tgggaaccgg tcacacatgt aagtgactga tataaaagag aaaaaaggcg 5340
atttttccgc ctaaaactct ttaaaactta ttaaaactct taaaacccgc ctggcctgtg 5400
cataactgtc tggccagcgc acagccgaag agctgcaaaa agcgcctacc cttcggtcgc 5460
tgcgctccct acgccccgcc gcttcgcgtc ggcctatcgc ggccgctggc cgctcaaaaa 5520
tggctggcct acggccaggc aatctaccag ggcgcggaca agccgcgccg tcgccactcg 5580
accgccggcg cccacatcaa ggcaccggtg ggtatgcctg acgatgcgtg gagaccgaaa 5640
ccttgcgctc gttcgccagc caggacagaa atgcctcgac ttcgctgctg cccaaggttg 5700
ccgggtgacg cacaccgtgg aaacggatga aggcacgaac ccagtggaca taagcctgtt 5760
cggttcgtaa gctgtaatgc aagtagcgta tgcgctcacg caactggtcc agaaccttga 5820
ccgaacgcag cggtggtaac ggcgcagtgg cggttttcat ggcttgttat gactgttttt 5880
ttggggtaca gtctatgcct cgggcatcca agcagcaagc gcgttacgcc gtgggtcgat 5940
gtttgatgtt atggagcagc aacgatgtta cgcagcaggg cagtcgccct aaaacaaagt 6000
taaacatcat gagggaagcg gtgatcgccg aagtatcgac tcaactatca gaggtagttg 6060
gcgtcatcga gcgccatctc gaaccgacgt tgctggccgt acatttgtac ggctccgcag 6120
tggatggcgg cctgaagcca cacagtgata ttgatttgct ggttacggtg accgtaaggc 6180
ttgatgaaac aacgcggcga gctttgatca acgacctttt ggaaacttcg gcttcccctg 6240
gagagagcga gattctccgc gctgtagaag tcaccattgt tgtgcacgac gacatcattc 6300
cgtggcgtta tccagctaag cgcgaactgc aatttggaga atggcagcgc aatgacattc 6360
ttgcaggtat cttcgagcca gccacgatcg acattgatct ggctatcttg ctgacaaaag 6420
caagagaaca tagcgttgcc ttggtaggtc cagcggcgga ggaactcttt gatccggttc 6480
ctgaacagga tctatttgag gcgctaaatg aaaccttaac gctatggaac tcgccgcccg 6540
actgggctgg cgatgagcga aatgtagtgc ttacgttgtc ccgcatttgg tacagcgcag 6600
taaccggcaa aatcgcgccg aaggatgtcg ctgccgactg ggcaatggag cgcctgccgg 6660
cccagtatca gcccgtcata cttgaagcta gacaggctta tcttggacaa gaagaagatc 6720
gcttggcctc gcgcgcagat cagttggaag aatttgtcca ctacgtgaaa ggcgagatca 6780
ccaaggtagt cggcaaataa tgtctaacaa ttcgttcaag ccgacgccgc ttcgcggcgc 6840
ggcttaactc aagcgttaga tgcactaagc acataattgc tcacagccaa actatcaggt 6900
caagtctgct tttattattt ttaagcgtgc ataataagcc ctacacaaat tgggagatat 6960
atcatgaaag gctggctttt tcttgttatc gcaatagttg gcgaagtaat cgcaacatag 7020
cttgcttggt cgttccgcgt gaacgtcggc tcgattgtac ctgcgttcaa atactttgcg 7080
atcgtgttgc gcgcctgccc ggtgcgtcgg ctgatctcac ggatcgactg cttctctcgc 7140
aacgccatcc gacggatgat gtttaaaagt cccatgtgga tcactccgtt gccccgtcgc 7200
tcaccgtgtt ggggggaagg tgcacatggc tcagttctca atggaaatta tctgcctaac 7260
cggctcagtt ctgcgtagaa accaacatgc aagctccacc gggtgcaaag cggcagcggc 7320
ggcaggatat attcaattgt aaatggcttc atgtccggga aatctacatg gatcagcaat 7380
gagtatgatg gtcaatatgg agaaaaagaa agagtaatta ccaatttttt ttcaattcaa 7440
aaatgtagat gtccgcagcg ttattataaa atgaaagtac attttgataa aacgacaaat 7500
tacgatccgt cgtatttata ggcgaaagca ataaacaaat tattctaatt cggaaatctt 7560
tatttcgacg tgtctacatt cacgtccaaa tgggggctta gatgagaaac ttcacgatcg 7620
gctctagttc gagcgatcta gtaacataga tgacaccgcg cgcgataatt tatcctagtt 7680
tgcgcgctat attttgtttt ctatcgcgta ttaaatgtat aattgcggga ctctaatcat 7740
aaaaacccat ctcataaata acgtcatgca ttacatgtta attattacat gcttaacgta 7800
attcaacaga aattatatga taatcatcgc aagaccggca acaggattca atcttaagaa 7860
actttattgc caaatgtttg aacgatcggg gaaattcgtt tctatgcttc aattctgctc 7920
tatagatgtt cttctagtct taacttttag aaggcacaac atttgaaatg ttggtaattt 7980
ttctgctggg tagtgaacca ttgtaatttg tgtttgctta tattatccgt tgggtttctc 8040
tatgttatct gtggggccat atcccagaac tggttgagtc ggtccaacac ctgggtgcca 8100
atcatgtcga tggtggggta tggtccggat tgaaagaaat atagtttaaa tatttattga 8160
taaaataaca agtcaggtat tatagtccaa gcaaaaacat aaatttattg atgcaagttt 8220
aaattcagaa atatttcaat aactgattat atcagctggt acattgccgt agatgaaaga 8280
ctgagtgcga tattatgtgt aatacataaa ttgatgatat agctagctta gctcatcggg 8340
tcagaagaac tcgtcaagaa ggcgatagaa ggcgatgcgc tgcgaatcgg gagcggcgat 8400
accgtaaagc acgaggaagc ggtcagccca ttcgccgcca agctcttcag caatatcacg 8460
ggtagccaac gctatgtcct gatagcggtc cgccacaccc agccggccac agtcgatgaa 8520
tccagaaaag cggccatttt ccaccatgat attcggcaag caggcatcgc catgagtcac 8580
gacgagatcc tcgccgtcgg gcatgcgcgc cttgagcctg gcgaacagtt cggctggcgc 8640
gagcccctga tgctcttcgt ccagatcatc ctgatcgaca agaccggctt ccatccgagt 8700
acgtgctcgc tcgatgcgat gtttcgcttg gtggtcgaat gggcaggtag ccggatcaag 8760
cgtatgcagc cgccgcattg catcagccat gatggatact ttctcggcag gagcaaggtg 8820
agatgacagg agatcctgcc ccggcacttc gcccaatagc agccagtccc ttcccgcttc 8880
agtgacaacg tcgagcacag ctgcgcaagg aacgcccgtc gtggccagcc acgatagccg 8940
cgctgcctcg tcctgaagtt cattcagggc accggacagg tcggtcttga caaaaagaac 9000
cgggcgcccc tgcgctgaca gccggaacac ggcggcatca gagcagccga ttgtctgttg 9060
tgcccagtca tagccgaata gcctctccac ccaagcggcc ggagaacctg cgtgcaatcc 9120
atcttgttca atccaagctc ccattttctg tgattttgga tgtgtttttg tatggattga 9180
gagtgaatat gagactctaa ttggataccg aggggaattt atggaacgtc agtggagcat 9240
ttttgacaag aaatatttgc tagctgatag tgaccttagg cgacttttga acgcgcaata 9300
atggtttctg acgtatgtgc ttagctcatt aaactccaga aacccgcggc tgagtggctc 9360
cttcaacgtt gcggttctgt cagttccaaa cgtaaaacgg cttgtcccgc gtcatcggcg 9420
ggggtcattc cggactgtgg ggccatatcc cagaactggt tgagtcggtc caacacctgg 9480
gtgccaatca tgtcgatggt ggggtatggc caattttttt tcaattcaaa aatgtagatg 9540
tccgcagcgt tattataaaa tgaaagtaca ttttgataaa acgacaaatt acgatccgtc 9600
gtatttatag gcgaaagcaa taaacaaatt attctaattc ggaaatcttt atttcgacgt 9660
gtctacattc acgtccaaat gggggcttag atgagaaact tcacgatcgg ctctagaggc 9720
catggcggcc gcactagtgg atcccccggg atgcatgaat tca 9763
<210> 58
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_ALS G/T
<400> 58
attaaagatg attcacatct aggtatggtt gtccaatggg aagat 45
<210> 59
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_Cyp Del
<400> 59
attaaagatg attcacatct atacgtggtt cggttgatca tatag 45
<210> 60
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_ALS In1
<400> 60
attaaagatg attcacatct aggctatgga tgttgtgttg catca 45
<210> 61
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_ALS In2
<400> 61
attaaagatg attcacatct atacgtggtt cggttgatca tatag 45
<210> 62
<211> 1603
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_ALS_G/T_expression cassette
<400> 62
aaaaattacg gatatgaata taggcatatc cgtatccgaa ttatccgttt gacagctagc 60
aacgattgta caattgcttc tttaaaaaag gaagaaagaa agaaagaaaa gaatcaacat 120
cagcgttaac aaacggcccc gttacggccc aaacggtcat atagagtaac ggcgttaagc 180
gttgaaagac tcctatcgaa atacgtaacc gcaaacgtgt catagtcaga tcccctcttc 240
cttcaccgcc tcaaacacaa aaataatctt ctacagccta tatatacaac ccccccttct 300
atctctcctt tctcacaatt catcatcttt ctttctctac ccccaatttt aagaaatcct 360
ctcttctcct cttcattttc aaggtaaatc tctctctctc tctctctctc tgttattcct 420
tgttttaatt aggtatgtat tattgctagt ttgttaatct gcttatctta tgtatgcctt 480
atgtgaatat ctttatcttg ttcatctcat ccgtttagaa gctataaatt tgttgatttg 540
actgtgtatc tacacgtggt tatgtttata tctaatcaga tatgaatttc ttcatattgt 600
tgcgtttgtg tgtaccaatc cgaaatcgtt gatttttttc atttaatcgt gtagctaatt 660
gtacgtatac atatggatct acgtatcaat tgttcatctg tttgtgtttg tatgtataca 720
gatctgaaaa catcacttct ctcatctgat tgtgttgtta catacataga tatagatctg 780
ttatatcatt ttttttatta attgtgtata tatatatgtg catagatctg gattacatga 840
ttgtgattat ttacatgatt ttgttattta cgtatgtata tatgtagatc tggacttttt 900
ggagttgttg acttgattgt atttgtgtgt gtatatgtgt gttctgatct tgatatgtta 960
tgtatgtgca gcggatccaa attactgatg agtccgtgag gacgaaacga gtaagctcgt 1020
ctaatttcta ctaagtgtag atccatacca acaggttacc cttctaggcc ggcatggtcc 1080
cagcctcctc gctggcgccg gctgggcaac atgcttcggc atggcgaatg ggaccaggcc 1140
tcccagcttt cgtccgtatc atcggtttcg acaacgttcg tcaagttcaa tgcatcagtt 1200
tcattgccca cacaccagaa tcctactaag tttgagtatt atggcattgg aaaagctgtt 1260
ttcttctatc atttgttctg cttgtaattt actgtgttct ttcagttttt gttttcggac 1320
atcaaaatgc aaatggatgg ataagagtta ataaatgata tggtcctttt gttcattctc 1380
aaattattat tatctgttgt ttttacttta atgggttgaa tttaagtaag aaaggaacta 1440
acagtgtgat attaaggtgc aatgttagac atataaaaca gtctttcacc tctctttggt 1500
tatgtcttga attggtttgt ttcttcactt atctgtgtaa tcaagtttac tatgagtcta 1560
tgatcaagta attatgcaat caagttaagt acagtatagg ctt 1603
<210> 63
<211> 1603
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_ALS_In1 expression cassette
<400> 63
aaaaattacg gatatgaata taggcatatc cgtatccgaa ttatccgttt gacagctagc 60
aacgattgta caattgcttc tttaaaaaag gaagaaagaa agaaagaaaa gaatcaacat 120
cagcgttaac aaacggcccc gttacggccc aaacggtcat atagagtaac ggcgttaagc 180
gttgaaagac tcctatcgaa atacgtaacc gcaaacgtgt catagtcaga tcccctcttc 240
cttcaccgcc tcaaacacaa aaataatctt ctacagccta tatatacaac ccccccttct 300
atctctcctt tctcacaatt catcatcttt ctttctctac ccccaatttt aagaaatcct 360
ctcttctcct cttcattttc aaggtaaatc tctctctctc tctctctctc tgttattcct 420
tgttttaatt aggtatgtat tattgctagt ttgttaatct gcttatctta tgtatgcctt 480
atgtgaatat ctttatcttg ttcatctcat ccgtttagaa gctataaatt tgttgatttg 540
actgtgtatc tacacgtggt tatgtttata tctaatcaga tatgaatttc ttcatattgt 600
tgcgtttgtg tgtaccaatc cgaaatcgtt gatttttttc atttaatcgt gtagctaatt 660
gtacgtatac atatggatct acgtatcaat tgttcatctg tttgtgtttg tatgtataca 720
gatctgaaaa catcacttct ctcatctgat tgtgttgtta catacataga tatagatctg 780
ttatatcatt ttttttatta attgtgtata tatatatgtg catagatctg gattacatga 840
ttgtgattat ttacatgatt ttgttattta cgtatgtata tatgtagatc tggacttttt 900
ggagttgttg acttgattgt atttgtgtgt gtatatgtgt gttctgatct tgatatgtta 960
tgtatgtgca gcggatccaa attactgatg agtccgtgag gacgaaacga gtaagctcgt 1020
ctaatttcta ctaagtgtag atccgatacc tacaacacaa cgtagtggcc ggcatggtcc 1080
cagcctcctc gctggcgccg gctgggcaac atgcttcggc atggcgaatg ggaccaggcc 1140
tcccagcttt cgtccgtatc atcggtttcg acaacgttcg tcaagttcaa tgcatcagtt 1200
tcattgccca cacaccagaa tcctactaag tttgagtatt atggcattgg aaaagctgtt 1260
ttcttctatc atttgttctg cttgtaattt actgtgttct ttcagttttt gttttcggac 1320
atcaaaatgc aaatggatgg ataagagtta ataaatgata tggtcctttt gttcattctc 1380
aaattattat tatctgttgt ttttacttta atgggttgaa tttaagtaag aaaggaacta 1440
acagtgtgat attaaggtgc aatgttagac atataaaaca gtctttcacc tctctttggt 1500
tatgtcttga attggtttgt ttcttcactt atctgtgtaa tcaagtttac tatgagtcta 1560
tgatcaagta attatgcaat caagttaagt acagtatagg ctt 1603
<210> 64
<211> 1603
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_ALS_In2 expression cassette
<400> 64
aaaaattacg gatatgaata taggcatatc cgtatccgaa ttatccgttt gacagctagc 60
aacgattgta caattgcttc tttaaaaaag gaagaaagaa agaaagaaaa gaatcaacat 120
cagcgttaac aaacggcccc gttacggccc aaacggtcat atagagtaac ggcgttaagc 180
gttgaaagac tcctatcgaa atacgtaacc gcaaacgtgt catagtcaga tcccctcttc 240
cttcaccgcc tcaaacacaa aaataatctt ctacagccta tatatacaac ccccccttct 300
atctctcctt tctcacaatt catcatcttt ctttctctac ccccaatttt aagaaatcct 360
ctcttctcct cttcattttc aaggtaaatc tctctctctc tctctctctc tgttattcct 420
tgttttaatt aggtatgtat tattgctagt ttgttaatct gcttatctta tgtatgcctt 480
atgtgaatat ctttatcttg ttcatctcat ccgtttagaa gctataaatt tgttgatttg 540
actgtgtatc tacacgtggt tatgtttata tctaatcaga tatgaatttc ttcatattgt 600
tgcgtttgtg tgtaccaatc cgaaatcgtt gatttttttc atttaatcgt gtagctaatt 660
gtacgtatac atatggatct acgtatcaat tgttcatctg tttgtgtttg tatgtataca 720
gatctgaaaa catcacttct ctcatctgat tgtgttgtta catacataga tatagatctg 780
ttatatcatt ttttttatta attgtgtata tatatatgtg catagatctg gattacatga 840
ttgtgattat ttacatgatt ttgttattta cgtatgtata tatgtagatc tggacttttt 900
ggagttgttg acttgattgt atttgtgtgt gtatatgtgt gttctgatct tgatatgtta 960
tgtatgtgca gcggatccaa attactgatg agtccgtgag gacgaaacga gtaagctcgt 1020
ctaatttcta ctaagtgtag atatgcacca agccaactag tatatcggcc ggcatggtcc 1080
cagcctcctc gctggcgccg gctgggcaac atgcttcggc atggcgaatg ggaccaggcc 1140
tcccagcttt cgtccgtatc atcggtttcg acaacgttcg tcaagttcaa tgcatcagtt 1200
tcattgccca cacaccagaa tcctactaag tttgagtatt atggcattgg aaaagctgtt 1260
ttcttctatc atttgttctg cttgtaattt actgtgttct ttcagttttt gttttcggac 1320
atcaaaatgc aaatggatgg ataagagtta ataaatgata tggtcctttt gttcattctc 1380
aaattattat tatctgttgt ttttacttta atgggttgaa tttaagtaag aaaggaacta 1440
acagtgtgat attaaggtgc aatgttagac atataaaaca gtctttcacc tctctttggt 1500
tatgtcttga attggtttgt ttcttcactt atctgtgtaa tcaagtttac tatgagtcta 1560
tgatcaagta attatgcaat caagttaagt acagtatagg ctt 1603
<210> 65
<211> 1603
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> crRNA_Cyp_Del expression cassette
<400> 65
aaaaattacg gatatgaata taggcatatc cgtatccgaa ttatccgttt gacagctagc 60
aacgattgta caattgcttc tttaaaaaag gaagaaagaa agaaagaaaa gaatcaacat 120
cagcgttaac aaacggcccc gttacggccc aaacggtcat atagagtaac ggcgttaagc 180
gttgaaagac tcctatcgaa atacgtaacc gcaaacgtgt catagtcaga tcccctcttc 240
cttcaccgcc tcaaacacaa aaataatctt ctacagccta tatatacaac ccccccttct 300
atctctcctt tctcacaatt catcatcttt ctttctctac ccccaatttt aagaaatcct 360
ctcttctcct cttcattttc aaggtaaatc tctctctctc tctctctctc tgttattcct 420
tgttttaatt aggtatgtat tattgctagt ttgttaatct gcttatctta tgtatgcctt 480
atgtgaatat ctttatcttg ttcatctcat ccgtttagaa gctataaatt tgttgatttg 540
actgtgtatc tacacgtggt tatgtttata tctaatcaga tatgaatttc ttcatattgt 600
tgcgtttgtg tgtaccaatc cgaaatcgtt gatttttttc atttaatcgt gtagctaatt 660
gtacgtatac atatggatct acgtatcaat tgttcatctg tttgtgtttg tatgtataca 720
gatctgaaaa catcacttct ctcatctgat tgtgttgtta catacataga tatagatctg 780
ttatatcatt ttttttatta attgtgtata tatatatgtg catagatctg gattacatga 840
ttgtgattat ttacatgatt ttgttattta cgtatgtata tatgtagatc tggacttttt 900
ggagttgttg acttgattgt atttgtgtgt gtatatgtgt gttctgatct tgatatgtta 960
tgtatgtgca gcggatccaa attactgatg agtccgtgag gacgaaacga gtaagctcgt 1020
ctaatttcta ctaagtgtag atatgcacca agccaactag tatatcggcc ggcatggtcc 1080
cagcctcctc gctggcgccg gctgggcaac atgcttcggc atggcgaatg ggaccaggcc 1140
tcccagcttt cgtccgtatc atcggtttcg acaacgttcg tcaagttcaa tgcatcagtt 1200
tcattgccca cacaccagaa tcctactaag tttgagtatt atggcattgg aaaagctgtt 1260
ttcttctatc atttgttctg cttgtaattt actgtgttct ttcagttttt gttttcggac 1320
atcaaaatgc aaatggatgg ataagagtta ataaatgata tggtcctttt gttcattctc 1380
aaattattat tatctgttgt ttttacttta atgggttgaa tttaagtaag aaaggaacta 1440
acagtgtgat attaaggtgc aatgttagac atataaaaca gtctttcacc tctctttggt 1500
tatgtcttga attggtttgt ttcttcactt atctgtgtaa tcaagtttac tatgagtcta 1560
tgatcaagta attatgcaat caagttaagt acagtatagg ctt 1603
<210> 66
<211> 5816
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pUbitDTnptII vector
<400> 66
agctttccct atagtgagtc gtattagagc ttggcgtaat catggtcata gctgtttcct 60
gtgtgaaatt gttatccgct cacaattcca cacaacatac gagccggaag cataaagtgt 120
aaagcctggg gtgcctaatg agtgagctaa ctcacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc 180
gctttccagt cgggaaacct gtcgtgccag ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg 240
agaggcggtt tgcgtattgg gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg 300
gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca 360
gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac 420
cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac 480
aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg 540
tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac 600
ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc aatgctcacg ctgtaggtat 660
ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag 720
cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac 780
ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt 840
gctacagagt tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaaggac agtatttggt 900
atctgcgctc tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc 960
aaacaaacca ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga 1020
aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac 1080
gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc 1140
cttttaaatt aaaaatgaag ttttaaatca atctaaagta tatatgagta aacttggtct 1200
gacagttacc aatgcttaat cagtgaggca cctatctcag cgatctgtct atttcgttca 1260
tccatagttg cctgactccc cgtcgtgtag ataactacga tacgggaggg cttaccatct 1320
ggccccagtg ctgcaatgat accgcgagac ccacgctgac cggctccaga tttatcagca 1380
ataaaccagc cagccggaag ggccgagcgc agaagtggtc ctgcaacttt atccgcctcc 1440
atccagtcta ttaattgttg ccgggaagct agagtaagta gttcgccagt taatagtttg 1500
cgcaacgttg ttgccattgc tacaggcatc gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct 1560
tcactcagct ccggttccca acgatcaagg cgagttacat gatcccccat gttgtgcaaa 1620
aaagcggtta gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta 1680
tcactcatgg ttatggcagc actgcataat tctcttactg tcatgccatc cgtaagatgc 1740
ttttctgtga ctggtgagta ctcaaccaag tcattctgag aatagtgtat gcggcgaccg 1800
agttgctctt gcccggcgtc aatacgggat aataccgcgc cacatagcag aactttaaaa 1860
gtgctcatca ttggaaaacg ttcttcgggg cgaaaactct caaggatctt accgctgttg 1920
agatccagtt cgatgtaacc cactcgtgca cccaactgat cttcagcatc ttttactttc 1980
accagcgttt ctgggtgagc aaaaacagga aggcaaaatg ccgcaaaaaa gggaataagg 2040
gcgacacgga aatgttgaat actcatactc ttcctttttc aatattattg aagcatttat 2100
cagggttatt gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaagaaata 2160
ggggttctgc gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgaaa ttgtaaacgt taatgttttg 2220
ttaaatttcg cgttaaatat ttgttaaatc agcttatttt ttaaccagta agcagaaaat 2280
gacaaaaatc cttataaatc aaaagaatag accgagttag ttgtgagtgt tgttccagtt 2340
tggaacaaga gtccactatt aaagaacgtg gactccaacg taaaaccgtc tatcagggcg 2400
atggcccact acgtgaacca tcacccaaat caagtttttg gaggtcgagg tgccgtaaag 2460
cactaaatcg gaaccctaaa gggagccccc gatttagagc ttgacgggga aagccggcga 2520
acgtggcgag aaaggaaggg aagaaagcga aaggagcggg cgctagggcg ctggcaagtg 2580
tagcggtcac gctgcgcgta accaccacac ccgccgcgct taatgcgccg ctactgggcg 2640
cgtcccattc gccattcagg ctgcgcaact gttgggaagg gcgatcggtg cgggcctctt 2700
cgctattacg ccagctggcg aaagggggat gtgctgcaag gcgattaagt tgggtaacgc 2760
cagggttttc ccagtcacga cgttgtaaaa cgacggccag tgaattatcg attaaattaa 2820
ccctcactaa agggagagac gaattcgaat ccaaaaatta cggatatgaa tataggcata 2880
tccgtatccg aattatccgt ttgacagcta gcaacgattg tacaattgct tctttaaaaa 2940
aggaagaaag aaagaaagaa aagaatcaac atcagcgtta acaaacggcc ccgttacggc 3000
ccaaacggtc atatagagta acggcgttaa gcgttgaaag actcctatcg aaatacgtaa 3060
ccgcaaacgt gtcatagtca gatcccctct tccttcaccg cctcaaacac aaaaataatc 3120
ttctacagcc tatatataca accccccctt ctatctctcc tttctcacaa ttcatcatct 3180
ttctttctct acccccaatt ttaagaaatc ctctcttctc ctcttcattt tcaaggtaaa 3240
tctctctctc tctctctctc tctgttattc cttgttttaa ttaggtatgt attattgcta 3300
gtttgttaat ctgcttatct tatgtatgcc ttatgtgaat atctttatct tgttcatctc 3360
atccgtttag aagctataaa tttgttgatt tgactgtgta tctacacgtg gttatgttta 3420
tatctaatca gatatgaatt tcttcatatt gttgcgtttg tgtgtaccaa tccgaaatcg 3480
ttgatttttt tcatttaatc gtgtagctaa ttgtacgtat acatatggat ctacgtatca 3540
attgttcatc tgtttgtgtt tgtatgtata cagatctgaa aacatcactt ctctcatctg 3600
attgtgttgt tacatacata gatatagatc tgttatatca ttttttttat taattgtgta 3660
tatatatatg tgcatagatc tggattacat gattgtgatt atttacatga ttttgttatt 3720
tacgtatgta tatatgtaga tctggacttt ttggagttgt tgacttgatt gtatttgtgt 3780
gtgtatatgt gtgttctgat cttgatatgt tatgtatgtg cagctgaacc ctcgagatcc 3840
tctcaacaca acatatacaa aacaaacgaa tctcaagcaa tcaagcattc tacttctatt 3900
gcagcaattt aaatcatttc ttttaaagca aaagcaattt tctgaaaatt ttcaccattt 3960
acgaacgata gggcgcgatc ccgccaccat ggtgagcaag ggcgaggagg tcatcaaaga 4020
gttcatgcgc ttcaaggtgc gcatggaggg ctccatgaac ggccacgagt tcgagatcga 4080
gggcgagggc gagggccgcc cctacgaggg cacccagacc gccaagctga aggtgaccaa 4140
gggcggcccc ctgcccttcg cctgggacat cctgtccccc cagttcatgt acggctccaa 4200
ggcgtacgtg aagcaccccg ccgacatccc cgattacaag aagctgtcct tccccgaggg 4260
cttcaagtgg gagcgcgtga tgaacttcga ggacggcggt ctggtgaccg tgacccagga 4320
ctcctccctg caggacggca cgctgatcta caaggtgaag atgcgcggca ccaacttccc 4380
ccccgacggc cccgtaatgc agaagaagac catgggctgg gaggcctcca ccgagcgcct 4440
gtacccccgc gacggcgtgc tgaagggcga gatccaccag gccctgaagc tgaaggacgg 4500
cggccactac ctggtggagt tcaagaccat ctacatggcc aagaagcccg tgcaactgcc 4560
cggctactac tacgtggaca ccaagctgga catcacctcc cacaacgagg actacaccat 4620
cgtggaacag tacgagcgct ccgagggccg ccaccacctg ttcctgtacg gcatggacga 4680
gctgtacaag tctagaggta ccggttgttg gcccatggga gcttggattg aacaagatgg 4740
attgcacgca ggttctccgg ccgcttgggt ggagaggcta ttcggctatg actgggcaca 4800
acagacaatc ggctgctctg atgccgccgt gttccggctg tcagcgcagg ggcgcccggt 4860
tctttttgtc aagaccgacc tgtccggtgc cctgaatgaa ctgcaggacg aggcagcgcg 4920
gctatcgtgg ctggccacga cgggcgttcc ttgcgcagct gtgctcgacg ttgtcactga 4980
agcgggaagg gactggctgc tattgggcga agtgccgggg caggatctcc tgtcatctca 5040
ccttgctcct gccgagaaag tatccatcat ggctgatgca atgcggcggc tgcatacgct 5100
tgatccggct acctgcccat tcgaccacca agcgaaacat cgcatcgagc gagcacgtac 5160
tcggatggaa gccggtcttg tcgatcagga tgatctggac gaagagcatc aggggctcgc 5220
gccagccgaa ctgttcgcca ggctcaaggc gcgcatgccc gacggcgagg atctcgtcgt 5280
gacccatggc gatgcctgct tgccgaatat catggtggaa aatggccgct tttctggatt 5340
catcgactgt ggccggctgg gtgtggcgga ccgctatcag gacatagcgt tggctacccg 5400
tgatattgct gaagagcttg gcggcgaatg ggctgaccgc ttcctcgtgc tttacggtat 5460
cgccgctccc gattcgcagc gcatcgcctt ctatcgcctt cttgacgagt tcttctgagc 5520
gggacccaag ctaggccatc gatacgcgta cgtcgcgacc gcggacatgt acagagctcg 5580
agaagtacta gagtccgcaa aaatcaccag tctctctcta caaatctatc tctctctatt 5640
tttctccaga ataatgtgtg agtagttccc agataaggga attagggttc ttatagggtt 5700
tcgctcatgt gttgagcata taagaaaccc ttagtatgta tttgtatttg taaaatactt 5760
ctatcaataa aatttctaat tcctaaaacc aaaatccagt gacctgcagg catgca 5816
<210> 67
<211> 12928
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pUbitDTnptII_LbCPF1_CrRNA_ALS_G/T vector
<400> 67
gatcctctca acacaacata tacaaaacaa acgaatctca agcaatcaag cattctactt 60
ctattgcagc aatttaaatc atttctttta aagcaaaagc aattttctga aaattttcac 120
catttacgaa cgatagggcg cgatcccgcc accatggtga gcaagggcga ggaggtcatc 180
aaagagttca tgcgcttcaa ggtgcgcatg gagggctcca tgaacggcca cgagttcgag 240
atcgagggcg agggcgaggg ccgcccctac gagggcaccc agaccgccaa gctgaaggtg 300
accaagggcg gccccctgcc cttcgcctgg gacatcctgt ccccccagtt catgtacggc 360
tccaaggcgt acgtgaagca ccccgccgac atccccgatt acaagaagct gtccttcccc 420
gagggcttca agtgggagcg cgtgatgaac ttcgaggacg gcggtctggt gaccgtgacc 480
caggactcct ccctgcagga cggcacgctg atctacaagg tgaagatgcg cggcaccaac 540
ttcccccccg acggccccgt aatgcagaag aagaccatgg gctgggaggc ctccaccgag 600
cgcctgtacc cccgcgacgg cgtgctgaag ggcgagatcc accaggccct gaagctgaag 660
gacggcggcc actacctggt ggagttcaag accatctaca tggccaagaa gcccgtgcaa 720
ctgcccggct actactacgt ggacaccaag ctggacatca cctcccacaa cgaggactac 780
accatcgtgg aacagtacga gcgctccgag ggccgccacc acctgttcct gtacggcatg 840
gacgagctgt acaagtctag aggtaccggt tgttggccca tgggagcttg gattgaacaa 900
gatggattgc acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg ctatgactgg 960
gcacaacaga caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc gcaggggcgc 1020
ccggttcttt ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca ggacgaggca 1080
gcgcggctat cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct cgacgttgtc 1140
actgaagcgg gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga tctcctgtca 1200
tctcaccttg ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg gcggctgcat 1260
acgcttgatc cggctacctg cccattcgac caccaagcga aacatcgcat cgagcgagca 1320
cgtactcgga tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga gcatcagggg 1380
ctcgcgccag ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgcgca tgcccgacgg cgaggatctc 1440
gtcgtgaccc atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg ccgcttttct 1500
ggattcatcg actgtggccg gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat agcgttggct 1560
acccgtgata ttgctgaaga gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct cgtgctttac 1620
ggtatcgccg ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga cgagttcttc 1680
tgagcgggac ccaagctagg ccatcgatac gcgtacgtcg cgaccgcgga catgtacaga 1740
gctcgagaag tactagagtc cgcaaaaatc accagtctct ctctacaaat ctatctctct 1800
ctatttttct ccagaataat gtgtgagtag ttcccagata agggaattag ggttcttata 1860
gggtttcgct catgtgttga gcatataaga aacccttagt atgtatttgt atttgtaaaa 1920
tacttctatc aataaaattt ctaattccta aaaccaaaat ccagtgacct gcaggcatgc 1980
aagcttatcg atgtcgacag gccttaaggg ccagatcccc cgggctgcag aagcctatac 2040
tgtacttaac ttgattgcat aattacttga tcatagactc atagtaaact tgattacaca 2100
gataagtgaa gaaacaaacc aattcaagac ataaccaaag agaggtgaaa gactgtttta 2160
tatgtctaac attgcacctt aatatcacac tgttagttcc tttcttactt aaattcaacc 2220
cattaaagta aaaacaacag ataataataa tttgagaatg aacaaaagga ccatatcatt 2280
tattaactct tatccatcca tttgcatttt gatgtccgaa aacaaaaact gaaagaacac 2340
agtaaattac aagcagaaca aatgatagaa gaaaacagct tttccaatgc cataatactc 2400
aaacttagta ggattctggt gtgtgggcaa tgaaactgat gcattgaact tgacgaacgt 2460
tgtcgaaacc gatgatacgg acgaaagctg ggaggcctgg tcccattcgc catgccgaag 2520
catgttgccc agccggcgcc agcgaggagg ctgggaccat gccggcctag aagggtaacc 2580
tgttggtatg gatctacact tagtagaaat taatctacac ttagtagaaa ttagacgagc 2640
ttactcgttt cgtcctcacg gactcatcag taatttggat ccgctgcaca tacataacat 2700
atcaagatca gaacacacat atacacacac aaatacaatc aagtcaacaa ctccaaaaag 2760
tccagatcta catatataca tacgtaaata acaaaatcat gtaaataatc acaatcatgt 2820
aatccagatc tatgcacata tatatataca caattaataa aaaaaatgat ataacagatc 2880
tatatctatg tatgtaacaa cacaatcaga tgagagaagt gatgttttca gatctgtata 2940
catacaaaca caaacagatg aacaattgat acgtagatcc atatgtatac gtacaattag 3000
ctacacgatt aaatgaaaaa aatcaacgat ttcggattgg tacacacaaa cgcaacaata 3060
tgaagaaatt catatctgat tagatataaa cataaccacg tgtagataca cagtcaaatc 3120
aacaaattta tagcttctaa acggatgaga tgaacaagat aaagatattc acataaggca 3180
tacataagat aagcagatta acaaactagc aataatacat acctaattaa aacaaggaat 3240
aacagagaga gagagagaga gagagattta ccttgaaaat gaagaggaga agagaggatt 3300
tcttaaaatt gggggtagag aaagaaagat gatgaattgt gagaaaggag agatagaagg 3360
gggggttgta tatataggct gtagaagatt atttttgtgt ttgaggcggt gaaggaagag 3420
gggatctgac tatgacacgt ttgcggttac gtatttcgat aggagtcttt caacgcttaa 3480
cgccgttact ctatatgacc gtttgggccg taacggggcc gtttgttaac gctgatgttg 3540
attcttttct ttctttcttt cttccttttt taaagaagca attgtacaat cgttgctagc 3600
tgtcaaacgg ataattcgga tacggatatg cctatattca tatccgtaat ttttctgcag 3660
gaattcgatc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg ggcagtgagc gcaacgcaat 3720
taatgtgagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttta cactttatgc ttccggctcg 3780
tatgttgtgt ggaattgtga gcggataaca atttcacaca ggaaacagct atgacatgat 3840
tacgaattca aaaattacgg atatgaatat aggcatatcc gtatccgaat tatccgtttg 3900
acagctagca acgattgtac aattgcttct ttaaaaaagg aagaaagaaa gaaagaaaag 3960
aatcaacatc agcgttaaca aacggccccg ttacggccca aacggtcata tagagtaacg 4020
gcgttaagcg ttgaaagact cctatcgaaa tacgtaaccg caaacgtgtc atagtcagat 4080
cccctcttcc ttcaccgcct caaacacaaa aataatcttc tacagcctat atatacaacc 4140
cccccttcta tctctccttt ctcacaattc atcatctttc tttctctacc cccaatttta 4200
agaaatcctc tcttctcctc ttcattttca aggtaaatct ctctctctct ctctctctct 4260
gttattcctt gttttaatta ggtatgtatt attgctagtt tgttaatctg cttatcttat 4320
gtatgcctta tgtgaatatc tttatcttgt tcatctcatc cgtttagaag ctataaattt 4380
gttgatttga ctgtgtatct acacgtggtt atgtttatat ctaatcagat atgaatttct 4440
tcatattgtt gcgtttgtgt gtaccaatcc gaaatcgttg atttttttca tttaatcgtg 4500
tagctaattg tacgtataca tatggatcta cgtatcaatt gttcatctgt ttgtgtttgt 4560
atgtatacag atctgaaaac atcacttctc tcatctgatt gtgttgttac atacatagat 4620
atagatctgt tatatcattt tttttattaa ttgtgtatat atatatgtgc atagatctgg 4680
attacatgat tgtgattatt tacatgattt tgttatttac gtatgtatat atgtagatct 4740
ggactttttg gagttgttga cttgattgta tttgtgtgtg tatatgtgtg ttctgatctt 4800
gatatgttat gtatgtgcag cgaattcggc gcgccatggc tcctaagaag aagaggaagg 4860
ttagcaagct cgagaagttt accaactgct acagcctctc taagaccctc aggttcaagg 4920
ctatccctgt gggaaagacc caagagaata tcgacaacaa gaggctcctc gtcgaggatg 4980
agaagagagc tgaagattac aagggcgtga agaagctcct cgacaggtac tacctcagct 5040
tcatcaacga tgtgctccac agcatcaagc tcaagaacct caacaactac atcagcctct 5100
tccgtaagaa aaccaggacc gagaaagaga acaaagagct tgagaacctc gagatcaacc 5160
tccgtaaaga gatcgccaag gctttcaagg gaaacgaggg atacaagagc ctcttcaaga 5220
aggatattat cgagacaatc ctgcctgagt tcctggacga taaggatgag atcgctctcg 5280
tgaacagctt caacggattc actactgcct tcaccggatt cttcgacaac agggaaaaca 5340
tgttcagcga agaggccaag agcacctcta tcgctttcag atgcatcaac gagaacctca 5400
cgcgttacat cagcaacatg gacatcttcg agaaggtgga cgccatcttc gataagcacg 5460
aggtgcaaga aatcaaagag aagatcctca acagcgacta cgacgtcgag gacttttttg 5520
aaggggagtt cttcaacttc gttctcaccc aagagggcat cgacgtgtac aacgctatta 5580
tcggaggatt cgtgaccgag tctggggaga agattaaggg actcaacgag tacatcaacc 5640
tgtacaacca gaaaacgaag cagaagctcc cgaagttcaa gccgctctac aagcaggttc 5700
tctctgatcg tgagagcctc tcattttacg gtgagggtta cacctctgac gaggaagtgc 5760
ttgaggtttt ccgtaacacc ctcaacaaga acagcgagat cttctcgtcc atcaagaagt 5820
tggagaaact tttcaagaac ttcgacgagt acagcagcgc tgggatcttc gttaagaacg 5880
gacctgctat cagcaccatc agcaaggata ttttcggcga gtggaacgtg atcagggaca 5940
agtggaatgc tgagtacgat gacatccacc tcaagaagaa ggctgtcgtc actgagaagt 6000
acgaggatga caggcgtaag tcgttcaaga agatcggctc tttcagcctc gagcagcttc 6060
aagaatacgc tgatgctgat ctcagcgtgg tcgagaagct caaagagatc atcatccaga 6120
aggtcgacga gatctacaag gtgtacgggt cctctgagaa gttgttcgat gctgatttcg 6180
tcctcgagaa gagtctgaag aagaacgacg ctgtcgtcgc gatcatgaag gatttgctcg 6240
acagcgtgaa gtccttcgag aactatatca aggccttctt cggagagggc aaagagacta 6300
atagggacga gtctttctac ggggatttcg tgctcgctta cgatatcctc ctcaaggtgg 6360
accatatcta cgacgccatc agaaactacg tgacccagaa gccttacagc aaggacaagt 6420
tcaagttgta ctttcagaac ccgcagttca tgggcggatg ggacaaagac aaagagacag 6480
attacagggc caccatcctc aggtacgggt ctaagtacta cctggccatc atggacaaga 6540
aatacgccaa gtgcctccaa aagatcgaca aggatgacgt gaacgggaac tatgagaaga 6600
tcaactacaa gctccttccg ggaccgaaca agatgcttcc taaggtgttc ttcagcaaga 6660
aatggatggc ctactacaac ccgtctgagg acatccagaa aatctacaag aacgggacct 6720
tcaagaaagg cgacatgttc aacctcaacg actgccacaa gctcatcgat ttcttcaagg 6780
acagcatctc gcgttacccg aagtggtcta acgcttacga ctttaacttc agcgagacag 6840
aaaagtacaa ggatatcgcc gggttctacc gtgaggttga ggaacagggt tacaaggtta 6900
gcttcgagag cgcctccaag aaagaggttg acaagttggt cgaagagggc aagctctaca 6960
tgttccagat ctataacaag gacttctccg acaagagcca cggaactcct aacctccata 7020
cgatgtactt caagctgctt ttcgacgaga acaaccacgg gcagatcaga ctttctggtg 7080
gtgctgaact cttcatgcgt agggcctcac tcaagaaaga agagttggtt gttcacccgg 7140
ccaactctcc aatcgctaac aagaatcctg acaacccgaa aaagaccacc acgctgtctt 7200
acgacgtcta caaggacaaa aggttcagcg aggaccagta cgagcttcat atcccgatcg 7260
ctatcaacaa gtgcccgaag aacatcttca agatcaatac cgaggtgagg gtgctgctca 7320
agcacgatga taacccttac gtgatcggaa tcgatcgtgg tgagagaaac ctcctctaca 7380
tcgttgtggt ggacggaaag ggaaacatcg tcgagcagta cagcctgaac gagattatca 7440
acaatttcaa cggcatcagg atcaagaccg actaccactc actcctcgat aagaaagaaa 7500
aagagcgttt cgaggccagg cagaactgga cttctatcga aaacatcaaa gagttgaagg 7560
ccggctacat ctctcaggtg gtgcataaga tctgcgagct ggtggaaaag tacgatgctg 7620
tgatcgctct tgaggacctc aactctgggt tcaagaacag tagagtgaag gttgagaagc 7680
aggtctacca aaagttcgag aagatgctca tcgacaagct caactacatg gtggacaaaa 7740
agagcaaccc ttgcgctacc ggtggtgctc ttaagggata ccagatcacg aacaagttcg 7800
agtccttcaa gagcatgagc acccagaacg gcttcatctt ctatatccct gcttggctca 7860
ccagcaagat cgatccttct actggtttcg tgaacctgct caagaccaag tacacctcga 7920
tcgccgacag caagaagttc atctcgtctt tcgacaggat catgtacgtg ccggaagagg 7980
atcttttcga gttcgctctc gactataaga acttcagcag gaccgacgcc gactacatta 8040
agaagtggaa gctctactcc tacgggaacc gtatcaggat cttccgaaat ccgaagaaaa 8100
acaacgtgtt cgactgggaa gaagtgtgcc tcacctctgc ctacaaagaa ctgttcaaca 8160
agtacggcat caactaccag cagggtgata tcagggctct tttgtgcgag cagagcgaca 8220
aggcattcta cagctcattc atggccctca tgtctctcat gctccagatg aggaactcta 8280
tcaccggaag gaccgatgtg gacttcctta tctctccggt caagaactct gacgggatct 8340
tctacgacag ccgtaactat gaggctcaag agaacgctat cctgccgaag aatgctgatg 8400
caaacggggc ttacaacatt gcgagaaagg ttctctgggc tatcgggcag tttaagaaag 8460
cggaagatga gaagctcgac aaggtgaaga tcgccatctc caacaaagag tggcttgagt 8520
acgctcagac ctccgttaag cacaagaggc ctgctgctac taagaaagct ggccaggcca 8580
aaaagaagaa gtgaggcgcg ccgagctcca ggcctcccag ctttcgtccg tatcatcggt 8640
ttcgacaacg ttcgtcaagt tcaatgcatc agtttcattg cccacacacc agaatcctac 8700
taagtttgag tattatggca ttggaaaagc tgttttcttc tatcatttgt tctgcttgta 8760
atttactgtg ttctttcagt ttttgttttc ggacatcaaa atgcaaatgg atggataaga 8820
gttaataaat gatatggtcc ttttgttcat tctcaaatta ttattatctg ttgtttttac 8880
tttaatgggt tgaatttaag taagaaagga actaacagtg tgatattaag gtgcaatgtt 8940
agacatataa aacagtcttt cacctctctt tggttatgtc ttgaattggt ttgtttcttc 9000
acttatctgt gtaatcaagt ttactatgag tctatgatca agtaattatg caatcaagtt 9060
aagtacagta taggcttgag ctccctagga tcaagctttc cctatagtga gtcgtattag 9120
agcttggcgt aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc gctcacaatt 9180
ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta atgagtgagc 9240
taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc 9300
cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct 9360
tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca 9420
gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac 9480
atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt 9540
ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg 9600
cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc 9660
tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc 9720
gtggcgcttt ctcaatgctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc 9780
aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac 9840
tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt 9900
aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct 9960
aactacggct acactagaag gacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc 10020
ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt 10080
ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg 10140
atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc 10200
atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa 10260
tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag 10320
gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg 10380
tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga 10440
gacccacgct gaccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag 10500
cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa 10560
gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc 10620
atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcactca gctccggttc ccaacgatca 10680
aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg 10740
atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat 10800
aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc 10860
aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg 10920
gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg 10980
gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt 11040
gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca 11100
ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata 11160
ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac 11220
atatttgaat gtatttagaa aaataaagaa ataggggttc tgcgcacatt tccccgaaaa 11280
gtgccacctg aaattgtaaa cgttaatgtt ttgttaaatt tcgcgttaaa tatttgttaa 11340
atcagcttat tttttaacca gtaagcagaa aatgacaaaa atccttataa atcaaaagaa 11400
tagaccgagt tagttgtgag tgttgttcca gtttggaaca agagtccact attaaagaac 11460
gtggactcca acgtaaaacc gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa ccatcaccca 11520
aatcaagttt ttggaggtcg aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct aaagggagcc 11580
cccgatttag agcttgacgg ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa gggaagaaag 11640
cgaaaggagc gggcgctagg gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc gtaaccacca 11700
cacccgccgc gcttaatgcg ccgctactgg gcgcgtccca ttcgccattc aggctgcgca 11760
actgttggga agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg gcgaaagggg 11820
gatgtgctgc aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta 11880
aaacgacggc cagtgaatta tcgattaaat taaccctcac taaagggaga gacgaattcg 11940
aatccaaaaa ttacggatat gaatataggc atatccgtat ccgaattatc cgtttgacag 12000
ctagcaacga ttgtacaatt gcttctttaa aaaaggaaga aagaaagaaa gaaaagaatc 12060
aacatcagcg ttaacaaacg gccccgttac ggcccaaacg gtcatataga gtaacggcgt 12120
taagcgttga aagactccta tcgaaatacg taaccgcaaa cgtgtcatag tcagatcccc 12180
tcttccttca ccgcctcaaa cacaaaaata atcttctaca gcctatatat acaacccccc 12240
cttctatctc tcctttctca caattcatca tctttctttc tctaccccca attttaagaa 12300
atcctctctt ctcctcttca ttttcaaggt aaatctctct ctctctctct ctctctgtta 12360
ttccttgttt taattaggta tgtattattg ctagtttgtt aatctgctta tcttatgtat 12420
gccttatgtg aatatcttta tcttgttcat ctcatccgtt tagaagctat aaatttgttg 12480
atttgactgt gtatctacac gtggttatgt ttatatctaa tcagatatga atttcttcat 12540
attgttgcgt ttgtgtgtac caatccgaaa tcgttgattt ttttcattta atcgtgtagc 12600
taattgtacg tatacatatg gatctacgta tcaattgttc atctgtttgt gtttgtatgt 12660
atacagatct gaaaacatca cttctctcat ctgattgtgt tgttacatac atagatatag 12720
atctgttata tcattttttt tattaattgt gtatatatat atgtgcatag atctggatta 12780
catgattgtg attatttaca tgattttgtt atttacgtat gtatatatgt agatctggac 12840
tttttggagt tgttgacttg attgtatttg tgtgtgtata tgtgtgttct gatcttgata 12900
tgttatgtat gtgcagctga accctcga 12928
<210> 68
<211> 12928
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pUbitDTnptII_LbCpf1_ crRNA _ ALS_In1 vector
<400> 68
gatcctctca acacaacata tacaaaacaa acgaatctca agcaatcaag cattctactt 60
ctattgcagc aatttaaatc atttctttta aagcaaaagc aattttctga aaattttcac 120
catttacgaa cgatagggcg cgatcccgcc accatggtga gcaagggcga ggaggtcatc 180
aaagagttca tgcgcttcaa ggtgcgcatg gagggctcca tgaacggcca cgagttcgag 240
atcgagggcg agggcgaggg ccgcccctac gagggcaccc agaccgccaa gctgaaggtg 300
accaagggcg gccccctgcc cttcgcctgg gacatcctgt ccccccagtt catgtacggc 360
tccaaggcgt acgtgaagca ccccgccgac atccccgatt acaagaagct gtccttcccc 420
gagggcttca agtgggagcg cgtgatgaac ttcgaggacg gcggtctggt gaccgtgacc 480
caggactcct ccctgcagga cggcacgctg atctacaagg tgaagatgcg cggcaccaac 540
ttcccccccg acggccccgt aatgcagaag aagaccatgg gctgggaggc ctccaccgag 600
cgcctgtacc cccgcgacgg cgtgctgaag ggcgagatcc accaggccct gaagctgaag 660
gacggcggcc actacctggt ggagttcaag accatctaca tggccaagaa gcccgtgcaa 720
ctgcccggct actactacgt ggacaccaag ctggacatca cctcccacaa cgaggactac 780
accatcgtgg aacagtacga gcgctccgag ggccgccacc acctgttcct gtacggcatg 840
gacgagctgt acaagtctag aggtaccggt tgttggccca tgggagcttg gattgaacaa 900
gatggattgc acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg ctatgactgg 960
gcacaacaga caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc gcaggggcgc 1020
ccggttcttt ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca ggacgaggca 1080
gcgcggctat cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct cgacgttgtc 1140
actgaagcgg gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga tctcctgtca 1200
tctcaccttg ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg gcggctgcat 1260
acgcttgatc cggctacctg cccattcgac caccaagcga aacatcgcat cgagcgagca 1320
cgtactcgga tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga gcatcagggg 1380
ctcgcgccag ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgcgca tgcccgacgg cgaggatctc 1440
gtcgtgaccc atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg ccgcttttct 1500
ggattcatcg actgtggccg gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat agcgttggct 1560
acccgtgata ttgctgaaga gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct cgtgctttac 1620
ggtatcgccg ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga cgagttcttc 1680
tgagcgggac ccaagctagg ccatcgatac gcgtacgtcg cgaccgcgga catgtacaga 1740
gctcgagaag tactagagtc cgcaaaaatc accagtctct ctctacaaat ctatctctct 1800
ctatttttct ccagaataat gtgtgagtag ttcccagata agggaattag ggttcttata 1860
gggtttcgct catgtgttga gcatataaga aacccttagt atgtatttgt atttgtaaaa 1920
tacttctatc aataaaattt ctaattccta aaaccaaaat ccagtgacct gcaggcatgc 1980
aagcttatcg atgtcgacag gccttaaggg ccagatcccc cgggctgcag aagcctatac 2040
tgtacttaac ttgattgcat aattacttga tcatagactc atagtaaact tgattacaca 2100
gataagtgaa gaaacaaacc aattcaagac ataaccaaag agaggtgaaa gactgtttta 2160
tatgtctaac attgcacctt aatatcacac tgttagttcc tttcttactt aaattcaacc 2220
cattaaagta aaaacaacag ataataataa tttgagaatg aacaaaagga ccatatcatt 2280
tattaactct tatccatcca tttgcatttt gatgtccgaa aacaaaaact gaaagaacac 2340
agtaaattac aagcagaaca aatgatagaa gaaaacagct tttccaatgc cataatactc 2400
aaacttagta ggattctggt gtgtgggcaa tgaaactgat gcattgaact tgacgaacgt 2460
tgtcgaaacc gatgatacgg acgaaagctg ggaggcctgg tcccattcgc catgccgaag 2520
catgttgccc agccggcgcc agcgaggagg ctgggaccat gccggccact acgttgtgtt 2580
gtaggtatcg gatctacact tagtagaaat taatctacac ttagtagaaa ttagacgagc 2640
ttactcgttt cgtcctcacg gactcatcag taatttggat ccgctgcaca tacataacat 2700
atcaagatca gaacacacat atacacacac aaatacaatc aagtcaacaa ctccaaaaag 2760
tccagatcta catatataca tacgtaaata acaaaatcat gtaaataatc acaatcatgt 2820
aatccagatc tatgcacata tatatataca caattaataa aaaaaatgat ataacagatc 2880
tatatctatg tatgtaacaa cacaatcaga tgagagaagt gatgttttca gatctgtata 2940
catacaaaca caaacagatg aacaattgat acgtagatcc atatgtatac gtacaattag 3000
ctacacgatt aaatgaaaaa aatcaacgat ttcggattgg tacacacaaa cgcaacaata 3060
tgaagaaatt catatctgat tagatataaa cataaccacg tgtagataca cagtcaaatc 3120
aacaaattta tagcttctaa acggatgaga tgaacaagat aaagatattc acataaggca 3180
tacataagat aagcagatta acaaactagc aataatacat acctaattaa aacaaggaat 3240
aacagagaga gagagagaga gagagattta ccttgaaaat gaagaggaga agagaggatt 3300
tcttaaaatt gggggtagag aaagaaagat gatgaattgt gagaaaggag agatagaagg 3360
gggggttgta tatataggct gtagaagatt atttttgtgt ttgaggcggt gaaggaagag 3420
gggatctgac tatgacacgt ttgcggttac gtatttcgat aggagtcttt caacgcttaa 3480
cgccgttact ctatatgacc gtttgggccg taacggggcc gtttgttaac gctgatgttg 3540
attcttttct ttctttcttt cttccttttt taaagaagca attgtacaat cgttgctagc 3600
tgtcaaacgg ataattcgga tacggatatg cctatattca tatccgtaat ttttctgcag 3660
gaattcgatc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg ggcagtgagc gcaacgcaat 3720
taatgtgagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttta cactttatgc ttccggctcg 3780
tatgttgtgt ggaattgtga gcggataaca atttcacaca ggaaacagct atgacatgat 3840
tacgaattca aaaattacgg atatgaatat aggcatatcc gtatccgaat tatccgtttg 3900
acagctagca acgattgtac aattgcttct ttaaaaaagg aagaaagaaa gaaagaaaag 3960
aatcaacatc agcgttaaca aacggccccg ttacggccca aacggtcata tagagtaacg 4020
gcgttaagcg ttgaaagact cctatcgaaa tacgtaaccg caaacgtgtc atagtcagat 4080
cccctcttcc ttcaccgcct caaacacaaa aataatcttc tacagcctat atatacaacc 4140
cccccttcta tctctccttt ctcacaattc atcatctttc tttctctacc cccaatttta 4200
agaaatcctc tcttctcctc ttcattttca aggtaaatct ctctctctct ctctctctct 4260
gttattcctt gttttaatta ggtatgtatt attgctagtt tgttaatctg cttatcttat 4320
gtatgcctta tgtgaatatc tttatcttgt tcatctcatc cgtttagaag ctataaattt 4380
gttgatttga ctgtgtatct acacgtggtt atgtttatat ctaatcagat atgaatttct 4440
tcatattgtt gcgtttgtgt gtaccaatcc gaaatcgttg atttttttca tttaatcgtg 4500
tagctaattg tacgtataca tatggatcta cgtatcaatt gttcatctgt ttgtgtttgt 4560
atgtatacag atctgaaaac atcacttctc tcatctgatt gtgttgttac atacatagat 4620
atagatctgt tatatcattt tttttattaa ttgtgtatat atatatgtgc atagatctgg 4680
attacatgat tgtgattatt tacatgattt tgttatttac gtatgtatat atgtagatct 4740
ggactttttg gagttgttga cttgattgta tttgtgtgtg tatatgtgtg ttctgatctt 4800
gatatgttat gtatgtgcag cgaattcggc gcgccatggc tcctaagaag aagaggaagg 4860
ttagcaagct cgagaagttt accaactgct acagcctctc taagaccctc aggttcaagg 4920
ctatccctgt gggaaagacc caagagaata tcgacaacaa gaggctcctc gtcgaggatg 4980
agaagagagc tgaagattac aagggcgtga agaagctcct cgacaggtac tacctcagct 5040
tcatcaacga tgtgctccac agcatcaagc tcaagaacct caacaactac atcagcctct 5100
tccgtaagaa aaccaggacc gagaaagaga acaaagagct tgagaacctc gagatcaacc 5160
tccgtaaaga gatcgccaag gctttcaagg gaaacgaggg atacaagagc ctcttcaaga 5220
aggatattat cgagacaatc ctgcctgagt tcctggacga taaggatgag atcgctctcg 5280
tgaacagctt caacggattc actactgcct tcaccggatt cttcgacaac agggaaaaca 5340
tgttcagcga agaggccaag agcacctcta tcgctttcag atgcatcaac gagaacctca 5400
cgcgttacat cagcaacatg gacatcttcg agaaggtgga cgccatcttc gataagcacg 5460
aggtgcaaga aatcaaagag aagatcctca acagcgacta cgacgtcgag gacttttttg 5520
aaggggagtt cttcaacttc gttctcaccc aagagggcat cgacgtgtac aacgctatta 5580
tcggaggatt cgtgaccgag tctggggaga agattaaggg actcaacgag tacatcaacc 5640
tgtacaacca gaaaacgaag cagaagctcc cgaagttcaa gccgctctac aagcaggttc 5700
tctctgatcg tgagagcctc tcattttacg gtgagggtta cacctctgac gaggaagtgc 5760
ttgaggtttt ccgtaacacc ctcaacaaga acagcgagat cttctcgtcc atcaagaagt 5820
tggagaaact tttcaagaac ttcgacgagt acagcagcgc tgggatcttc gttaagaacg 5880
gacctgctat cagcaccatc agcaaggata ttttcggcga gtggaacgtg atcagggaca 5940
agtggaatgc tgagtacgat gacatccacc tcaagaagaa ggctgtcgtc actgagaagt 6000
acgaggatga caggcgtaag tcgttcaaga agatcggctc tttcagcctc gagcagcttc 6060
aagaatacgc tgatgctgat ctcagcgtgg tcgagaagct caaagagatc atcatccaga 6120
aggtcgacga gatctacaag gtgtacgggt cctctgagaa gttgttcgat gctgatttcg 6180
tcctcgagaa gagtctgaag aagaacgacg ctgtcgtcgc gatcatgaag gatttgctcg 6240
acagcgtgaa gtccttcgag aactatatca aggccttctt cggagagggc aaagagacta 6300
atagggacga gtctttctac ggggatttcg tgctcgctta cgatatcctc ctcaaggtgg 6360
accatatcta cgacgccatc agaaactacg tgacccagaa gccttacagc aaggacaagt 6420
tcaagttgta ctttcagaac ccgcagttca tgggcggatg ggacaaagac aaagagacag 6480
attacagggc caccatcctc aggtacgggt ctaagtacta cctggccatc atggacaaga 6540
aatacgccaa gtgcctccaa aagatcgaca aggatgacgt gaacgggaac tatgagaaga 6600
tcaactacaa gctccttccg ggaccgaaca agatgcttcc taaggtgttc ttcagcaaga 6660
aatggatggc ctactacaac ccgtctgagg acatccagaa aatctacaag aacgggacct 6720
tcaagaaagg cgacatgttc aacctcaacg actgccacaa gctcatcgat ttcttcaagg 6780
acagcatctc gcgttacccg aagtggtcta acgcttacga ctttaacttc agcgagacag 6840
aaaagtacaa ggatatcgcc gggttctacc gtgaggttga ggaacagggt tacaaggtta 6900
gcttcgagag cgcctccaag aaagaggttg acaagttggt cgaagagggc aagctctaca 6960
tgttccagat ctataacaag gacttctccg acaagagcca cggaactcct aacctccata 7020
cgatgtactt caagctgctt ttcgacgaga acaaccacgg gcagatcaga ctttctggtg 7080
gtgctgaact cttcatgcgt agggcctcac tcaagaaaga agagttggtt gttcacccgg 7140
ccaactctcc aatcgctaac aagaatcctg acaacccgaa aaagaccacc acgctgtctt 7200
acgacgtcta caaggacaaa aggttcagcg aggaccagta cgagcttcat atcccgatcg 7260
ctatcaacaa gtgcccgaag aacatcttca agatcaatac cgaggtgagg gtgctgctca 7320
agcacgatga taacccttac gtgatcggaa tcgatcgtgg tgagagaaac ctcctctaca 7380
tcgttgtggt ggacggaaag ggaaacatcg tcgagcagta cagcctgaac gagattatca 7440
acaatttcaa cggcatcagg atcaagaccg actaccactc actcctcgat aagaaagaaa 7500
aagagcgttt cgaggccagg cagaactgga cttctatcga aaacatcaaa gagttgaagg 7560
ccggctacat ctctcaggtg gtgcataaga tctgcgagct ggtggaaaag tacgatgctg 7620
tgatcgctct tgaggacctc aactctgggt tcaagaacag tagagtgaag gttgagaagc 7680
aggtctacca aaagttcgag aagatgctca tcgacaagct caactacatg gtggacaaaa 7740
agagcaaccc ttgcgctacc ggtggtgctc ttaagggata ccagatcacg aacaagttcg 7800
agtccttcaa gagcatgagc acccagaacg gcttcatctt ctatatccct gcttggctca 7860
ccagcaagat cgatccttct actggtttcg tgaacctgct caagaccaag tacacctcga 7920
tcgccgacag caagaagttc atctcgtctt tcgacaggat catgtacgtg ccggaagagg 7980
atcttttcga gttcgctctc gactataaga acttcagcag gaccgacgcc gactacatta 8040
agaagtggaa gctctactcc tacgggaacc gtatcaggat cttccgaaat ccgaagaaaa 8100
acaacgtgtt cgactgggaa gaagtgtgcc tcacctctgc ctacaaagaa ctgttcaaca 8160
agtacggcat caactaccag cagggtgata tcagggctct tttgtgcgag cagagcgaca 8220
aggcattcta cagctcattc atggccctca tgtctctcat gctccagatg aggaactcta 8280
tcaccggaag gaccgatgtg gacttcctta tctctccggt caagaactct gacgggatct 8340
tctacgacag ccgtaactat gaggctcaag agaacgctat cctgccgaag aatgctgatg 8400
caaacggggc ttacaacatt gcgagaaagg ttctctgggc tatcgggcag tttaagaaag 8460
cggaagatga gaagctcgac aaggtgaaga tcgccatctc caacaaagag tggcttgagt 8520
acgctcagac ctccgttaag cacaagaggc ctgctgctac taagaaagct ggccaggcca 8580
aaaagaagaa gtgaggcgcg ccgagctcca ggcctcccag ctttcgtccg tatcatcggt 8640
ttcgacaacg ttcgtcaagt tcaatgcatc agtttcattg cccacacacc agaatcctac 8700
taagtttgag tattatggca ttggaaaagc tgttttcttc tatcatttgt tctgcttgta 8760
atttactgtg ttctttcagt ttttgttttc ggacatcaaa atgcaaatgg atggataaga 8820
gttaataaat gatatggtcc ttttgttcat tctcaaatta ttattatctg ttgtttttac 8880
tttaatgggt tgaatttaag taagaaagga actaacagtg tgatattaag gtgcaatgtt 8940
agacatataa aacagtcttt cacctctctt tggttatgtc ttgaattggt ttgtttcttc 9000
acttatctgt gtaatcaagt ttactatgag tctatgatca agtaattatg caatcaagtt 9060
aagtacagta taggcttgag ctccctagga tcaagctttc cctatagtga gtcgtattag 9120
agcttggcgt aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc gctcacaatt 9180
ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta atgagtgagc 9240
taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc 9300
cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct 9360
tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca 9420
gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac 9480
atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt 9540
ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg 9600
cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc 9660
tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc 9720
gtggcgcttt ctcaatgctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc 9780
aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac 9840
tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt 9900
aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct 9960
aactacggct acactagaag gacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc 10020
ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt 10080
ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg 10140
atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc 10200
atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa 10260
tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag 10320
gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg 10380
tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga 10440
gacccacgct gaccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag 10500
cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa 10560
gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc 10620
atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcactca gctccggttc ccaacgatca 10680
aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg 10740
atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat 10800
aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc 10860
aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg 10920
gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg 10980
gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt 11040
gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca 11100
ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata 11160
ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac 11220
atatttgaat gtatttagaa aaataaagaa ataggggttc tgcgcacatt tccccgaaaa 11280
gtgccacctg aaattgtaaa cgttaatgtt ttgttaaatt tcgcgttaaa tatttgttaa 11340
atcagcttat tttttaacca gtaagcagaa aatgacaaaa atccttataa atcaaaagaa 11400
tagaccgagt tagttgtgag tgttgttcca gtttggaaca agagtccact attaaagaac 11460
gtggactcca acgtaaaacc gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa ccatcaccca 11520
aatcaagttt ttggaggtcg aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct aaagggagcc 11580
cccgatttag agcttgacgg ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa gggaagaaag 11640
cgaaaggagc gggcgctagg gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc gtaaccacca 11700
cacccgccgc gcttaatgcg ccgctactgg gcgcgtccca ttcgccattc aggctgcgca 11760
actgttggga agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg gcgaaagggg 11820
gatgtgctgc aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta 11880
aaacgacggc cagtgaatta tcgattaaat taaccctcac taaagggaga gacgaattcg 11940
aatccaaaaa ttacggatat gaatataggc atatccgtat ccgaattatc cgtttgacag 12000
ctagcaacga ttgtacaatt gcttctttaa aaaaggaaga aagaaagaaa gaaaagaatc 12060
aacatcagcg ttaacaaacg gccccgttac ggcccaaacg gtcatataga gtaacggcgt 12120
taagcgttga aagactccta tcgaaatacg taaccgcaaa cgtgtcatag tcagatcccc 12180
tcttccttca ccgcctcaaa cacaaaaata atcttctaca gcctatatat acaacccccc 12240
cttctatctc tcctttctca caattcatca tctttctttc tctaccccca attttaagaa 12300
atcctctctt ctcctcttca ttttcaaggt aaatctctct ctctctctct ctctctgtta 12360
ttccttgttt taattaggta tgtattattg ctagtttgtt aatctgctta tcttatgtat 12420
gccttatgtg aatatcttta tcttgttcat ctcatccgtt tagaagctat aaatttgttg 12480
atttgactgt gtatctacac gtggttatgt ttatatctaa tcagatatga atttcttcat 12540
attgttgcgt ttgtgtgtac caatccgaaa tcgttgattt ttttcattta atcgtgtagc 12600
taattgtacg tatacatatg gatctacgta tcaattgttc atctgtttgt gtttgtatgt 12660
atacagatct gaaaacatca cttctctcat ctgattgtgt tgttacatac atagatatag 12720
atctgttata tcattttttt tattaattgt gtatatatat atgtgcatag atctggatta 12780
catgattgtg attatttaca tgattttgtt atttacgtat gtatatatgt agatctggac 12840
tttttggagt tgttgacttg attgtatttg tgtgtgtata tgtgtgttct gatcttgata 12900
tgttatgtat gtgcagctga accctcga 12928
<210> 69
<211> 12928
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pUbitDTnptII_LbCpf1_ crRNA _ ALS_In2 vector
<400> 69
gatcctctca acacaacata tacaaaacaa acgaatctca agcaatcaag cattctactt 60
ctattgcagc aatttaaatc atttctttta aagcaaaagc aattttctga aaattttcac 120
catttacgaa cgatagggcg cgatcccgcc accatggtga gcaagggcga ggaggtcatc 180
aaagagttca tgcgcttcaa ggtgcgcatg gagggctcca tgaacggcca cgagttcgag 240
atcgagggcg agggcgaggg ccgcccctac gagggcaccc agaccgccaa gctgaaggtg 300
accaagggcg gccccctgcc cttcgcctgg gacatcctgt ccccccagtt catgtacggc 360
tccaaggcgt acgtgaagca ccccgccgac atccccgatt acaagaagct gtccttcccc 420
gagggcttca agtgggagcg cgtgatgaac ttcgaggacg gcggtctggt gaccgtgacc 480
caggactcct ccctgcagga cggcacgctg atctacaagg tgaagatgcg cggcaccaac 540
ttcccccccg acggccccgt aatgcagaag aagaccatgg gctgggaggc ctccaccgag 600
cgcctgtacc cccgcgacgg cgtgctgaag ggcgagatcc accaggccct gaagctgaag 660
gacggcggcc actacctggt ggagttcaag accatctaca tggccaagaa gcccgtgcaa 720
ctgcccggct actactacgt ggacaccaag ctggacatca cctcccacaa cgaggactac 780
accatcgtgg aacagtacga gcgctccgag ggccgccacc acctgttcct gtacggcatg 840
gacgagctgt acaagtctag aggtaccggt tgttggccca tgggagcttg gattgaacaa 900
gatggattgc acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg ctatgactgg 960
gcacaacaga caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc gcaggggcgc 1020
ccggttcttt ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca ggacgaggca 1080
gcgcggctat cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct cgacgttgtc 1140
actgaagcgg gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga tctcctgtca 1200
tctcaccttg ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg gcggctgcat 1260
acgcttgatc cggctacctg cccattcgac caccaagcga aacatcgcat cgagcgagca 1320
cgtactcgga tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga gcatcagggg 1380
ctcgcgccag ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgcgca tgcccgacgg cgaggatctc 1440
gtcgtgaccc atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg ccgcttttct 1500
ggattcatcg actgtggccg gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat agcgttggct 1560
acccgtgata ttgctgaaga gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct cgtgctttac 1620
ggtatcgccg ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga cgagttcttc 1680
tgagcgggac ccaagctagg ccatcgatac gcgtacgtcg cgaccgcgga catgtacaga 1740
gctcgagaag tactagagtc cgcaaaaatc accagtctct ctctacaaat ctatctctct 1800
ctatttttct ccagaataat gtgtgagtag ttcccagata agggaattag ggttcttata 1860
gggtttcgct catgtgttga gcatataaga aacccttagt atgtatttgt atttgtaaaa 1920
tacttctatc aataaaattt ctaattccta aaaccaaaat ccagtgacct gcaggcatgc 1980
aagcttatcg atgtcgacag gccttaaggg ccagatcccc cgggctgcag aagcctatac 2040
tgtacttaac ttgattgcat aattacttga tcatagactc atagtaaact tgattacaca 2100
gataagtgaa gaaacaaacc aattcaagac ataaccaaag agaggtgaaa gactgtttta 2160
tatgtctaac attgcacctt aatatcacac tgttagttcc tttcttactt aaattcaacc 2220
cattaaagta aaaacaacag ataataataa tttgagaatg aacaaaagga ccatatcatt 2280
tattaactct tatccatcca tttgcatttt gatgtccgaa aacaaaaact gaaagaacac 2340
agtaaattac aagcagaaca aatgatagaa gaaaacagct tttccaatgc cataatactc 2400
aaacttagta ggattctggt gtgtgggcaa tgaaactgat gcattgaact tgacgaacgt 2460
tgtcgaaacc gatgatacgg acgaaagctg ggaggcctgg tcccattcgc catgccgaag 2520
catgttgccc agccggcgcc agcgaggagg ctgggaccat gccggccgat atactagttg 2580
gcttggtgca tatctacact tagtagaaat taatctacac ttagtagaaa ttagacgagc 2640
ttactcgttt cgtcctcacg gactcatcag taatttggat ccgctgcaca tacataacat 2700
atcaagatca gaacacacat atacacacac aaatacaatc aagtcaacaa ctccaaaaag 2760
tccagatcta catatataca tacgtaaata acaaaatcat gtaaataatc acaatcatgt 2820
aatccagatc tatgcacata tatatataca caattaataa aaaaaatgat ataacagatc 2880
tatatctatg tatgtaacaa cacaatcaga tgagagaagt gatgttttca gatctgtata 2940
catacaaaca caaacagatg aacaattgat acgtagatcc atatgtatac gtacaattag 3000
ctacacgatt aaatgaaaaa aatcaacgat ttcggattgg tacacacaaa cgcaacaata 3060
tgaagaaatt catatctgat tagatataaa cataaccacg tgtagataca cagtcaaatc 3120
aacaaattta tagcttctaa acggatgaga tgaacaagat aaagatattc acataaggca 3180
tacataagat aagcagatta acaaactagc aataatacat acctaattaa aacaaggaat 3240
aacagagaga gagagagaga gagagattta ccttgaaaat gaagaggaga agagaggatt 3300
tcttaaaatt gggggtagag aaagaaagat gatgaattgt gagaaaggag agatagaagg 3360
gggggttgta tatataggct gtagaagatt atttttgtgt ttgaggcggt gaaggaagag 3420
gggatctgac tatgacacgt ttgcggttac gtatttcgat aggagtcttt caacgcttaa 3480
cgccgttact ctatatgacc gtttgggccg taacggggcc gtttgttaac gctgatgttg 3540
attcttttct ttctttcttt cttccttttt taaagaagca attgtacaat cgttgctagc 3600
tgtcaaacgg ataattcgga tacggatatg cctatattca tatccgtaat ttttctgcag 3660
gaattcgatc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg ggcagtgagc gcaacgcaat 3720
taatgtgagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttta cactttatgc ttccggctcg 3780
tatgttgtgt ggaattgtga gcggataaca atttcacaca ggaaacagct atgacatgat 3840
tacgaattca aaaattacgg atatgaatat aggcatatcc gtatccgaat tatccgtttg 3900
acagctagca acgattgtac aattgcttct ttaaaaaagg aagaaagaaa gaaagaaaag 3960
aatcaacatc agcgttaaca aacggccccg ttacggccca aacggtcata tagagtaacg 4020
gcgttaagcg ttgaaagact cctatcgaaa tacgtaaccg caaacgtgtc atagtcagat 4080
cccctcttcc ttcaccgcct caaacacaaa aataatcttc tacagcctat atatacaacc 4140
cccccttcta tctctccttt ctcacaattc atcatctttc tttctctacc cccaatttta 4200
agaaatcctc tcttctcctc ttcattttca aggtaaatct ctctctctct ctctctctct 4260
gttattcctt gttttaatta ggtatgtatt attgctagtt tgttaatctg cttatcttat 4320
gtatgcctta tgtgaatatc tttatcttgt tcatctcatc cgtttagaag ctataaattt 4380
gttgatttga ctgtgtatct acacgtggtt atgtttatat ctaatcagat atgaatttct 4440
tcatattgtt gcgtttgtgt gtaccaatcc gaaatcgttg atttttttca tttaatcgtg 4500
tagctaattg tacgtataca tatggatcta cgtatcaatt gttcatctgt ttgtgtttgt 4560
atgtatacag atctgaaaac atcacttctc tcatctgatt gtgttgttac atacatagat 4620
atagatctgt tatatcattt tttttattaa ttgtgtatat atatatgtgc atagatctgg 4680
attacatgat tgtgattatt tacatgattt tgttatttac gtatgtatat atgtagatct 4740
ggactttttg gagttgttga cttgattgta tttgtgtgtg tatatgtgtg ttctgatctt 4800
gatatgttat gtatgtgcag cgaattcggc gcgccatggc tcctaagaag aagaggaagg 4860
ttagcaagct cgagaagttt accaactgct acagcctctc taagaccctc aggttcaagg 4920
ctatccctgt gggaaagacc caagagaata tcgacaacaa gaggctcctc gtcgaggatg 4980
agaagagagc tgaagattac aagggcgtga agaagctcct cgacaggtac tacctcagct 5040
tcatcaacga tgtgctccac agcatcaagc tcaagaacct caacaactac atcagcctct 5100
tccgtaagaa aaccaggacc gagaaagaga acaaagagct tgagaacctc gagatcaacc 5160
tccgtaaaga gatcgccaag gctttcaagg gaaacgaggg atacaagagc ctcttcaaga 5220
aggatattat cgagacaatc ctgcctgagt tcctggacga taaggatgag atcgctctcg 5280
tgaacagctt caacggattc actactgcct tcaccggatt cttcgacaac agggaaaaca 5340
tgttcagcga agaggccaag agcacctcta tcgctttcag atgcatcaac gagaacctca 5400
cgcgttacat cagcaacatg gacatcttcg agaaggtgga cgccatcttc gataagcacg 5460
aggtgcaaga aatcaaagag aagatcctca acagcgacta cgacgtcgag gacttttttg 5520
aaggggagtt cttcaacttc gttctcaccc aagagggcat cgacgtgtac aacgctatta 5580
tcggaggatt cgtgaccgag tctggggaga agattaaggg actcaacgag tacatcaacc 5640
tgtacaacca gaaaacgaag cagaagctcc cgaagttcaa gccgctctac aagcaggttc 5700
tctctgatcg tgagagcctc tcattttacg gtgagggtta cacctctgac gaggaagtgc 5760
ttgaggtttt ccgtaacacc ctcaacaaga acagcgagat cttctcgtcc atcaagaagt 5820
tggagaaact tttcaagaac ttcgacgagt acagcagcgc tgggatcttc gttaagaacg 5880
gacctgctat cagcaccatc agcaaggata ttttcggcga gtggaacgtg atcagggaca 5940
agtggaatgc tgagtacgat gacatccacc tcaagaagaa ggctgtcgtc actgagaagt 6000
acgaggatga caggcgtaag tcgttcaaga agatcggctc tttcagcctc gagcagcttc 6060
aagaatacgc tgatgctgat ctcagcgtgg tcgagaagct caaagagatc atcatccaga 6120
aggtcgacga gatctacaag gtgtacgggt cctctgagaa gttgttcgat gctgatttcg 6180
tcctcgagaa gagtctgaag aagaacgacg ctgtcgtcgc gatcatgaag gatttgctcg 6240
acagcgtgaa gtccttcgag aactatatca aggccttctt cggagagggc aaagagacta 6300
atagggacga gtctttctac ggggatttcg tgctcgctta cgatatcctc ctcaaggtgg 6360
accatatcta cgacgccatc agaaactacg tgacccagaa gccttacagc aaggacaagt 6420
tcaagttgta ctttcagaac ccgcagttca tgggcggatg ggacaaagac aaagagacag 6480
attacagggc caccatcctc aggtacgggt ctaagtacta cctggccatc atggacaaga 6540
aatacgccaa gtgcctccaa aagatcgaca aggatgacgt gaacgggaac tatgagaaga 6600
tcaactacaa gctccttccg ggaccgaaca agatgcttcc taaggtgttc ttcagcaaga 6660
aatggatggc ctactacaac ccgtctgagg acatccagaa aatctacaag aacgggacct 6720
tcaagaaagg cgacatgttc aacctcaacg actgccacaa gctcatcgat ttcttcaagg 6780
acagcatctc gcgttacccg aagtggtcta acgcttacga ctttaacttc agcgagacag 6840
aaaagtacaa ggatatcgcc gggttctacc gtgaggttga ggaacagggt tacaaggtta 6900
gcttcgagag cgcctccaag aaagaggttg acaagttggt cgaagagggc aagctctaca 6960
tgttccagat ctataacaag gacttctccg acaagagcca cggaactcct aacctccata 7020
cgatgtactt caagctgctt ttcgacgaga acaaccacgg gcagatcaga ctttctggtg 7080
gtgctgaact cttcatgcgt agggcctcac tcaagaaaga agagttggtt gttcacccgg 7140
ccaactctcc aatcgctaac aagaatcctg acaacccgaa aaagaccacc acgctgtctt 7200
acgacgtcta caaggacaaa aggttcagcg aggaccagta cgagcttcat atcccgatcg 7260
ctatcaacaa gtgcccgaag aacatcttca agatcaatac cgaggtgagg gtgctgctca 7320
agcacgatga taacccttac gtgatcggaa tcgatcgtgg tgagagaaac ctcctctaca 7380
tcgttgtggt ggacggaaag ggaaacatcg tcgagcagta cagcctgaac gagattatca 7440
acaatttcaa cggcatcagg atcaagaccg actaccactc actcctcgat aagaaagaaa 7500
aagagcgttt cgaggccagg cagaactgga cttctatcga aaacatcaaa gagttgaagg 7560
ccggctacat ctctcaggtg gtgcataaga tctgcgagct ggtggaaaag tacgatgctg 7620
tgatcgctct tgaggacctc aactctgggt tcaagaacag tagagtgaag gttgagaagc 7680
aggtctacca aaagttcgag aagatgctca tcgacaagct caactacatg gtggacaaaa 7740
agagcaaccc ttgcgctacc ggtggtgctc ttaagggata ccagatcacg aacaagttcg 7800
agtccttcaa gagcatgagc acccagaacg gcttcatctt ctatatccct gcttggctca 7860
ccagcaagat cgatccttct actggtttcg tgaacctgct caagaccaag tacacctcga 7920
tcgccgacag caagaagttc atctcgtctt tcgacaggat catgtacgtg ccggaagagg 7980
atcttttcga gttcgctctc gactataaga acttcagcag gaccgacgcc gactacatta 8040
agaagtggaa gctctactcc tacgggaacc gtatcaggat cttccgaaat ccgaagaaaa 8100
acaacgtgtt cgactgggaa gaagtgtgcc tcacctctgc ctacaaagaa ctgttcaaca 8160
agtacggcat caactaccag cagggtgata tcagggctct tttgtgcgag cagagcgaca 8220
aggcattcta cagctcattc atggccctca tgtctctcat gctccagatg aggaactcta 8280
tcaccggaag gaccgatgtg gacttcctta tctctccggt caagaactct gacgggatct 8340
tctacgacag ccgtaactat gaggctcaag agaacgctat cctgccgaag aatgctgatg 8400
caaacggggc ttacaacatt gcgagaaagg ttctctgggc tatcgggcag tttaagaaag 8460
cggaagatga gaagctcgac aaggtgaaga tcgccatctc caacaaagag tggcttgagt 8520
acgctcagac ctccgttaag cacaagaggc ctgctgctac taagaaagct ggccaggcca 8580
aaaagaagaa gtgaggcgcg ccgagctcca ggcctcccag ctttcgtccg tatcatcggt 8640
ttcgacaacg ttcgtcaagt tcaatgcatc agtttcattg cccacacacc agaatcctac 8700
taagtttgag tattatggca ttggaaaagc tgttttcttc tatcatttgt tctgcttgta 8760
atttactgtg ttctttcagt ttttgttttc ggacatcaaa atgcaaatgg atggataaga 8820
gttaataaat gatatggtcc ttttgttcat tctcaaatta ttattatctg ttgtttttac 8880
tttaatgggt tgaatttaag taagaaagga actaacagtg tgatattaag gtgcaatgtt 8940
agacatataa aacagtcttt cacctctctt tggttatgtc ttgaattggt ttgtttcttc 9000
acttatctgt gtaatcaagt ttactatgag tctatgatca agtaattatg caatcaagtt 9060
aagtacagta taggcttgag ctccctagga tcaagctttc cctatagtga gtcgtattag 9120
agcttggcgt aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc gctcacaatt 9180
ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta atgagtgagc 9240
taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc 9300
cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct 9360
tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca 9420
gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac 9480
atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt 9540
ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg 9600
cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc 9660
tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc 9720
gtggcgcttt ctcaatgctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc 9780
aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac 9840
tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt 9900
aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct 9960
aactacggct acactagaag gacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc 10020
ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt 10080
ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg 10140
atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc 10200
atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa 10260
tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag 10320
gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg 10380
tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga 10440
gacccacgct gaccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag 10500
cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa 10560
gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc 10620
atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcactca gctccggttc ccaacgatca 10680
aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg 10740
atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat 10800
aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc 10860
aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg 10920
gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg 10980
gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt 11040
gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca 11100
ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata 11160
ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac 11220
atatttgaat gtatttagaa aaataaagaa ataggggttc tgcgcacatt tccccgaaaa 11280
gtgccacctg aaattgtaaa cgttaatgtt ttgttaaatt tcgcgttaaa tatttgttaa 11340
atcagcttat tttttaacca gtaagcagaa aatgacaaaa atccttataa atcaaaagaa 11400
tagaccgagt tagttgtgag tgttgttcca gtttggaaca agagtccact attaaagaac 11460
gtggactcca acgtaaaacc gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa ccatcaccca 11520
aatcaagttt ttggaggtcg aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct aaagggagcc 11580
cccgatttag agcttgacgg ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa gggaagaaag 11640
cgaaaggagc gggcgctagg gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc gtaaccacca 11700
cacccgccgc gcttaatgcg ccgctactgg gcgcgtccca ttcgccattc aggctgcgca 11760
actgttggga agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg gcgaaagggg 11820
gatgtgctgc aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta 11880
aaacgacggc cagtgaatta tcgattaaat taaccctcac taaagggaga gacgaattcg 11940
aatccaaaaa ttacggatat gaatataggc atatccgtat ccgaattatc cgtttgacag 12000
ctagcaacga ttgtacaatt gcttctttaa aaaaggaaga aagaaagaaa gaaaagaatc 12060
aacatcagcg ttaacaaacg gccccgttac ggcccaaacg gtcatataga gtaacggcgt 12120
taagcgttga aagactccta tcgaaatacg taaccgcaaa cgtgtcatag tcagatcccc 12180
tcttccttca ccgcctcaaa cacaaaaata atcttctaca gcctatatat acaacccccc 12240
cttctatctc tcctttctca caattcatca tctttctttc tctaccccca attttaagaa 12300
atcctctctt ctcctcttca ttttcaaggt aaatctctct ctctctctct ctctctgtta 12360
ttccttgttt taattaggta tgtattattg ctagtttgtt aatctgctta tcttatgtat 12420
gccttatgtg aatatcttta tcttgttcat ctcatccgtt tagaagctat aaatttgttg 12480
atttgactgt gtatctacac gtggttatgt ttatatctaa tcagatatga atttcttcat 12540
attgttgcgt ttgtgtgtac caatccgaaa tcgttgattt ttttcattta atcgtgtagc 12600
taattgtacg tatacatatg gatctacgta tcaattgttc atctgtttgt gtttgtatgt 12660
atacagatct gaaaacatca cttctctcat ctgattgtgt tgttacatac atagatatag 12720
atctgttata tcattttttt tattaattgt gtatatatat atgtgcatag atctggatta 12780
catgattgtg attatttaca tgattttgtt atttacgtat gtatatatgt agatctggac 12840
tttttggagt tgttgacttg attgtatttg tgtgtgtata tgtgtgttct gatcttgata 12900
tgttatgtat gtgcagctga accctcga 12928
<210> 70
<211> 12928
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pUbitDTnptII_LbCpf1_ crRNA _ Cyp_Del
<400> 70
gatcctctca acacaacata tacaaaacaa acgaatctca agcaatcaag cattctactt 60
ctattgcagc aatttaaatc atttctttta aagcaaaagc aattttctga aaattttcac 120
catttacgaa cgatagggcg cgatcccgcc accatggtga gcaagggcga ggaggtcatc 180
aaagagttca tgcgcttcaa ggtgcgcatg gagggctcca tgaacggcca cgagttcgag 240
atcgagggcg agggcgaggg ccgcccctac gagggcaccc agaccgccaa gctgaaggtg 300
accaagggcg gccccctgcc cttcgcctgg gacatcctgt ccccccagtt catgtacggc 360
tccaaggcgt acgtgaagca ccccgccgac atccccgatt acaagaagct gtccttcccc 420
gagggcttca agtgggagcg cgtgatgaac ttcgaggacg gcggtctggt gaccgtgacc 480
caggactcct ccctgcagga cggcacgctg atctacaagg tgaagatgcg cggcaccaac 540
ttcccccccg acggccccgt aatgcagaag aagaccatgg gctgggaggc ctccaccgag 600
cgcctgtacc cccgcgacgg cgtgctgaag ggcgagatcc accaggccct gaagctgaag 660
gacggcggcc actacctggt ggagttcaag accatctaca tggccaagaa gcccgtgcaa 720
ctgcccggct actactacgt ggacaccaag ctggacatca cctcccacaa cgaggactac 780
accatcgtgg aacagtacga gcgctccgag ggccgccacc acctgttcct gtacggcatg 840
gacgagctgt acaagtctag aggtaccggt tgttggccca tgggagcttg gattgaacaa 900
gatggattgc acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg ctatgactgg 960
gcacaacaga caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc gcaggggcgc 1020
ccggttcttt ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca ggacgaggca 1080
gcgcggctat cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct cgacgttgtc 1140
actgaagcgg gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga tctcctgtca 1200
tctcaccttg ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg gcggctgcat 1260
acgcttgatc cggctacctg cccattcgac caccaagcga aacatcgcat cgagcgagca 1320
cgtactcgga tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga gcatcagggg 1380
ctcgcgccag ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgcgca tgcccgacgg cgaggatctc 1440
gtcgtgaccc atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg ccgcttttct 1500
ggattcatcg actgtggccg gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat agcgttggct 1560
acccgtgata ttgctgaaga gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct cgtgctttac 1620
ggtatcgccg ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga cgagttcttc 1680
tgagcgggac ccaagctagg ccatcgatac gcgtacgtcg cgaccgcgga catgtacaga 1740
gctcgagaag tactagagtc cgcaaaaatc accagtctct ctctacaaat ctatctctct 1800
ctatttttct ccagaataat gtgtgagtag ttcccagata agggaattag ggttcttata 1860
gggtttcgct catgtgttga gcatataaga aacccttagt atgtatttgt atttgtaaaa 1920
tacttctatc aataaaattt ctaattccta aaaccaaaat ccagtgacct gcaggcatgc 1980
aagcttatcg atgtcgacag gccttaaggg ccagatcccc cgggctgcag aagcctatac 2040
tgtacttaac ttgattgcat aattacttga tcatagactc atagtaaact tgattacaca 2100
gataagtgaa gaaacaaacc aattcaagac ataaccaaag agaggtgaaa gactgtttta 2160
tatgtctaac attgcacctt aatatcacac tgttagttcc tttcttactt aaattcaacc 2220
cattaaagta aaaacaacag ataataataa tttgagaatg aacaaaagga ccatatcatt 2280
tattaactct tatccatcca tttgcatttt gatgtccgaa aacaaaaact gaaagaacac 2340
agtaaattac aagcagaaca aatgatagaa gaaaacagct tttccaatgc cataatactc 2400
aaacttagta ggattctggt gtgtgggcaa tgaaactgat gcattgaact tgacgaacgt 2460
tgtcgaaacc gatgatacgg acgaaagctg ggaggcctgg tcccattcgc catgccgaag 2520
catgttgccc agccggcgcc agcgaggagg ctgggaccat gccggccgat atactagttg 2580
gcttggtgca tatctacact tagtagaaat taatctacac ttagtagaaa ttagacgagc 2640
ttactcgttt cgtcctcacg gactcatcag taatttggat ccgctgcaca tacataacat 2700
atcaagatca gaacacacat atacacacac aaatacaatc aagtcaacaa ctccaaaaag 2760
tccagatcta catatataca tacgtaaata acaaaatcat gtaaataatc acaatcatgt 2820
aatccagatc tatgcacata tatatataca caattaataa aaaaaatgat ataacagatc 2880
tatatctatg tatgtaacaa cacaatcaga tgagagaagt gatgttttca gatctgtata 2940
catacaaaca caaacagatg aacaattgat acgtagatcc atatgtatac gtacaattag 3000
ctacacgatt aaatgaaaaa aatcaacgat ttcggattgg tacacacaaa cgcaacaata 3060
tgaagaaatt catatctgat tagatataaa cataaccacg tgtagataca cagtcaaatc 3120
aacaaattta tagcttctaa acggatgaga tgaacaagat aaagatattc acataaggca 3180
tacataagat aagcagatta acaaactagc aataatacat acctaattaa aacaaggaat 3240
aacagagaga gagagagaga gagagattta ccttgaaaat gaagaggaga agagaggatt 3300
tcttaaaatt gggggtagag aaagaaagat gatgaattgt gagaaaggag agatagaagg 3360
gggggttgta tatataggct gtagaagatt atttttgtgt ttgaggcggt gaaggaagag 3420
gggatctgac tatgacacgt ttgcggttac gtatttcgat aggagtcttt caacgcttaa 3480
cgccgttact ctatatgacc gtttgggccg taacggggcc gtttgttaac gctgatgttg 3540
attcttttct ttctttcttt cttccttttt taaagaagca attgtacaat cgttgctagc 3600
tgtcaaacgg ataattcgga tacggatatg cctatattca tatccgtaat ttttctgcag 3660
gaattcgatc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg ggcagtgagc gcaacgcaat 3720
taatgtgagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttta cactttatgc ttccggctcg 3780
tatgttgtgt ggaattgtga gcggataaca atttcacaca ggaaacagct atgacatgat 3840
tacgaattca aaaattacgg atatgaatat aggcatatcc gtatccgaat tatccgtttg 3900
acagctagca acgattgtac aattgcttct ttaaaaaagg aagaaagaaa gaaagaaaag 3960
aatcaacatc agcgttaaca aacggccccg ttacggccca aacggtcata tagagtaacg 4020
gcgttaagcg ttgaaagact cctatcgaaa tacgtaaccg caaacgtgtc atagtcagat 4080
cccctcttcc ttcaccgcct caaacacaaa aataatcttc tacagcctat atatacaacc 4140
cccccttcta tctctccttt ctcacaattc atcatctttc tttctctacc cccaatttta 4200
agaaatcctc tcttctcctc ttcattttca aggtaaatct ctctctctct ctctctctct 4260
gttattcctt gttttaatta ggtatgtatt attgctagtt tgttaatctg cttatcttat 4320
gtatgcctta tgtgaatatc tttatcttgt tcatctcatc cgtttagaag ctataaattt 4380
gttgatttga ctgtgtatct acacgtggtt atgtttatat ctaatcagat atgaatttct 4440
tcatattgtt gcgtttgtgt gtaccaatcc gaaatcgttg atttttttca tttaatcgtg 4500
tagctaattg tacgtataca tatggatcta cgtatcaatt gttcatctgt ttgtgtttgt 4560
atgtatacag atctgaaaac atcacttctc tcatctgatt gtgttgttac atacatagat 4620
atagatctgt tatatcattt tttttattaa ttgtgtatat atatatgtgc atagatctgg 4680
attacatgat tgtgattatt tacatgattt tgttatttac gtatgtatat atgtagatct 4740
ggactttttg gagttgttga cttgattgta tttgtgtgtg tatatgtgtg ttctgatctt 4800
gatatgttat gtatgtgcag cgaattcggc gcgccatggc tcctaagaag aagaggaagg 4860
ttagcaagct cgagaagttt accaactgct acagcctctc taagaccctc aggttcaagg 4920
ctatccctgt gggaaagacc caagagaata tcgacaacaa gaggctcctc gtcgaggatg 4980
agaagagagc tgaagattac aagggcgtga agaagctcct cgacaggtac tacctcagct 5040
tcatcaacga tgtgctccac agcatcaagc tcaagaacct caacaactac atcagcctct 5100
tccgtaagaa aaccaggacc gagaaagaga acaaagagct tgagaacctc gagatcaacc 5160
tccgtaaaga gatcgccaag gctttcaagg gaaacgaggg atacaagagc ctcttcaaga 5220
aggatattat cgagacaatc ctgcctgagt tcctggacga taaggatgag atcgctctcg 5280
tgaacagctt caacggattc actactgcct tcaccggatt cttcgacaac agggaaaaca 5340
tgttcagcga agaggccaag agcacctcta tcgctttcag atgcatcaac gagaacctca 5400
cgcgttacat cagcaacatg gacatcttcg agaaggtgga cgccatcttc gataagcacg 5460
aggtgcaaga aatcaaagag aagatcctca acagcgacta cgacgtcgag gacttttttg 5520
aaggggagtt cttcaacttc gttctcaccc aagagggcat cgacgtgtac aacgctatta 5580
tcggaggatt cgtgaccgag tctggggaga agattaaggg actcaacgag tacatcaacc 5640
tgtacaacca gaaaacgaag cagaagctcc cgaagttcaa gccgctctac aagcaggttc 5700
tctctgatcg tgagagcctc tcattttacg gtgagggtta cacctctgac gaggaagtgc 5760
ttgaggtttt ccgtaacacc ctcaacaaga acagcgagat cttctcgtcc atcaagaagt 5820
tggagaaact tttcaagaac ttcgacgagt acagcagcgc tgggatcttc gttaagaacg 5880
gacctgctat cagcaccatc agcaaggata ttttcggcga gtggaacgtg atcagggaca 5940
agtggaatgc tgagtacgat gacatccacc tcaagaagaa ggctgtcgtc actgagaagt 6000
acgaggatga caggcgtaag tcgttcaaga agatcggctc tttcagcctc gagcagcttc 6060
aagaatacgc tgatgctgat ctcagcgtgg tcgagaagct caaagagatc atcatccaga 6120
aggtcgacga gatctacaag gtgtacgggt cctctgagaa gttgttcgat gctgatttcg 6180
tcctcgagaa gagtctgaag aagaacgacg ctgtcgtcgc gatcatgaag gatttgctcg 6240
acagcgtgaa gtccttcgag aactatatca aggccttctt cggagagggc aaagagacta 6300
atagggacga gtctttctac ggggatttcg tgctcgctta cgatatcctc ctcaaggtgg 6360
accatatcta cgacgccatc agaaactacg tgacccagaa gccttacagc aaggacaagt 6420
tcaagttgta ctttcagaac ccgcagttca tgggcggatg ggacaaagac aaagagacag 6480
attacagggc caccatcctc aggtacgggt ctaagtacta cctggccatc atggacaaga 6540
aatacgccaa gtgcctccaa aagatcgaca aggatgacgt gaacgggaac tatgagaaga 6600
tcaactacaa gctccttccg ggaccgaaca agatgcttcc taaggtgttc ttcagcaaga 6660
aatggatggc ctactacaac ccgtctgagg acatccagaa aatctacaag aacgggacct 6720
tcaagaaagg cgacatgttc aacctcaacg actgccacaa gctcatcgat ttcttcaagg 6780
acagcatctc gcgttacccg aagtggtcta acgcttacga ctttaacttc agcgagacag 6840
aaaagtacaa ggatatcgcc gggttctacc gtgaggttga ggaacagggt tacaaggtta 6900
gcttcgagag cgcctccaag aaagaggttg acaagttggt cgaagagggc aagctctaca 6960
tgttccagat ctataacaag gacttctccg acaagagcca cggaactcct aacctccata 7020
cgatgtactt caagctgctt ttcgacgaga acaaccacgg gcagatcaga ctttctggtg 7080
gtgctgaact cttcatgcgt agggcctcac tcaagaaaga agagttggtt gttcacccgg 7140
ccaactctcc aatcgctaac aagaatcctg acaacccgaa aaagaccacc acgctgtctt 7200
acgacgtcta caaggacaaa aggttcagcg aggaccagta cgagcttcat atcccgatcg 7260
ctatcaacaa gtgcccgaag aacatcttca agatcaatac cgaggtgagg gtgctgctca 7320
agcacgatga taacccttac gtgatcggaa tcgatcgtgg tgagagaaac ctcctctaca 7380
tcgttgtggt ggacggaaag ggaaacatcg tcgagcagta cagcctgaac gagattatca 7440
acaatttcaa cggcatcagg atcaagaccg actaccactc actcctcgat aagaaagaaa 7500
aagagcgttt cgaggccagg cagaactgga cttctatcga aaacatcaaa gagttgaagg 7560
ccggctacat ctctcaggtg gtgcataaga tctgcgagct ggtggaaaag tacgatgctg 7620
tgatcgctct tgaggacctc aactctgggt tcaagaacag tagagtgaag gttgagaagc 7680
aggtctacca aaagttcgag aagatgctca tcgacaagct caactacatg gtggacaaaa 7740
agagcaaccc ttgcgctacc ggtggtgctc ttaagggata ccagatcacg aacaagttcg 7800
agtccttcaa gagcatgagc acccagaacg gcttcatctt ctatatccct gcttggctca 7860
ccagcaagat cgatccttct actggtttcg tgaacctgct caagaccaag tacacctcga 7920
tcgccgacag caagaagttc atctcgtctt tcgacaggat catgtacgtg ccggaagagg 7980
atcttttcga gttcgctctc gactataaga acttcagcag gaccgacgcc gactacatta 8040
agaagtggaa gctctactcc tacgggaacc gtatcaggat cttccgaaat ccgaagaaaa 8100
acaacgtgtt cgactgggaa gaagtgtgcc tcacctctgc ctacaaagaa ctgttcaaca 8160
agtacggcat caactaccag cagggtgata tcagggctct tttgtgcgag cagagcgaca 8220
aggcattcta cagctcattc atggccctca tgtctctcat gctccagatg aggaactcta 8280
tcaccggaag gaccgatgtg gacttcctta tctctccggt caagaactct gacgggatct 8340
tctacgacag ccgtaactat gaggctcaag agaacgctat cctgccgaag aatgctgatg 8400
caaacggggc ttacaacatt gcgagaaagg ttctctgggc tatcgggcag tttaagaaag 8460
cggaagatga gaagctcgac aaggtgaaga tcgccatctc caacaaagag tggcttgagt 8520
acgctcagac ctccgttaag cacaagaggc ctgctgctac taagaaagct ggccaggcca 8580
aaaagaagaa gtgaggcgcg ccgagctcca ggcctcccag ctttcgtccg tatcatcggt 8640
ttcgacaacg ttcgtcaagt tcaatgcatc agtttcattg cccacacacc agaatcctac 8700
taagtttgag tattatggca ttggaaaagc tgttttcttc tatcatttgt tctgcttgta 8760
atttactgtg ttctttcagt ttttgttttc ggacatcaaa atgcaaatgg atggataaga 8820
gttaataaat gatatggtcc ttttgttcat tctcaaatta ttattatctg ttgtttttac 8880
tttaatgggt tgaatttaag taagaaagga actaacagtg tgatattaag gtgcaatgtt 8940
agacatataa aacagtcttt cacctctctt tggttatgtc ttgaattggt ttgtttcttc 9000
acttatctgt gtaatcaagt ttactatgag tctatgatca agtaattatg caatcaagtt 9060
aagtacagta taggcttgag ctccctagga tcaagctttc cctatagtga gtcgtattag 9120
agcttggcgt aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc gctcacaatt 9180
ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta atgagtgagc 9240
taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc 9300
cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct 9360
tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca 9420
gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac 9480
atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt 9540
ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg 9600
cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc 9660
tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc 9720
gtggcgcttt ctcaatgctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc 9780
aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac 9840
tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt 9900
aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct 9960
aactacggct acactagaag gacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc 10020
ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt 10080
ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg 10140
atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc 10200
atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa 10260
tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag 10320
gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg 10380
tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga 10440
gacccacgct gaccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag 10500
cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa 10560
gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc 10620
atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcactca gctccggttc ccaacgatca 10680
aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg 10740
atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat 10800
aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc 10860
aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg 10920
gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg 10980
gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt 11040
gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca 11100
ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata 11160
ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac 11220
atatttgaat gtatttagaa aaataaagaa ataggggttc tgcgcacatt tccccgaaaa 11280
gtgccacctg aaattgtaaa cgttaatgtt ttgttaaatt tcgcgttaaa tatttgttaa 11340
atcagcttat tttttaacca gtaagcagaa aatgacaaaa atccttataa atcaaaagaa 11400
tagaccgagt tagttgtgag tgttgttcca gtttggaaca agagtccact attaaagaac 11460
gtggactcca acgtaaaacc gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa ccatcaccca 11520
aatcaagttt ttggaggtcg aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct aaagggagcc 11580
cccgatttag agcttgacgg ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa gggaagaaag 11640
cgaaaggagc gggcgctagg gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc gtaaccacca 11700
cacccgccgc gcttaatgcg ccgctactgg gcgcgtccca ttcgccattc aggctgcgca 11760
actgttggga agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg gcgaaagggg 11820
gatgtgctgc aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta 11880
aaacgacggc cagtgaatta tcgattaaat taaccctcac taaagggaga gacgaattcg 11940
aatccaaaaa ttacggatat gaatataggc atatccgtat ccgaattatc cgtttgacag 12000
ctagcaacga ttgtacaatt gcttctttaa aaaaggaaga aagaaagaaa gaaaagaatc 12060
aacatcagcg ttaacaaacg gccccgttac ggcccaaacg gtcatataga gtaacggcgt 12120
taagcgttga aagactccta tcgaaatacg taaccgcaaa cgtgtcatag tcagatcccc 12180
tcttccttca ccgcctcaaa cacaaaaata atcttctaca gcctatatat acaacccccc 12240
cttctatctc tcctttctca caattcatca tctttctttc tctaccccca attttaagaa 12300
atcctctctt ctcctcttca ttttcaaggt aaatctctct ctctctctct ctctctgtta 12360
ttccttgttt taattaggta tgtattattg ctagtttgtt aatctgctta tcttatgtat 12420
gccttatgtg aatatcttta tcttgttcat ctcatccgtt tagaagctat aaatttgttg 12480
atttgactgt gtatctacac gtggttatgt ttatatctaa tcagatatga atttcttcat 12540
attgttgcgt ttgtgtgtac caatccgaaa tcgttgattt ttttcattta atcgtgtagc 12600
taattgtacg tatacatatg gatctacgta tcaattgttc atctgtttgt gtttgtatgt 12660
atacagatct gaaaacatca cttctctcat ctgattgtgt tgttacatac atagatatag 12720
atctgttata tcattttttt tattaattgt gtatatatat atgtgcatag atctggatta 12780
catgattgtg attatttaca tgattttgtt atttacgtat gtatatatgt agatctggac 12840
tttttggagt tgttgacttg attgtatttg tgtgtgtata tgtgtgttct gatcttgata 12900
tgttatgtat gtgcagctga accctcga 12928
<210> 71
<211> 16875
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pZFNnptII_LbCpf1_crRNA_ALS_G/T vector
<400> 71
ccggattgaa agaaatatag tttaaatatt tattgataaa ataacaagtc aggtattata 60
gtccaagcaa aaacataaat ttattgatgc aagtttaaat tcagaaatat ttcaataact 120
gattatatca gctggtacat tgccgtagat gaaagactga gtgcgatatt atgtgtaata 180
cataaattga tgatatagct agcttagctc atcgggtcag aagaactcgt caagaaggcg 240
atagaaggcg atgcgctgcg aatcgggagc ggcgataccg taaagcacga ggaagcggtc 300
agcccattcg ccgccaagct cttcagcaat atcacgggta gccaacgcta tgtcctgata 360
gcggtccgcc acacccagcc ggccacagtc gatgaatcca gaaaagcggc cattttccac 420
catgatattc ggcaagcagg catcgccatg agtcacgacg agatcctcgc cgtcgggcat 480
gcgcgccttg agcctggcga acagttcggc tggcgcgagc ccctgatgct cttcgtccag 540
atcatcctga tcgacaagac cggcttccat ccgagtacgt gctcgctcga tgcgatgttt 600
cgcttggtgg tcgaatgggc aggtagccgg atcaagcgta tgcagccgcc gcattgcatc 660
agccatgatg gatactttct cggcaggagc aaggtgagat gacaggagat cctgccccgg 720
cacttcgccc aatagcagcc agtcccttcc cgcttcagtg acaacgtcga gcacagctgc 780
gcaaggaacg cccgtcgtgg ccagccacga tagccgcgct gcctcgtcct gaagttcatt 840
cagggcaccg gacaggtcgg tcttgacaaa aagaaccggg cgcccctgcg ctgacagccg 900
gaacacggcg gcatcagagc agccgattgt ctgttgtgcc cagtcatagc cgaatagcct 960
ctccacccaa gcggccggag aacctgcgtg caatccatct tgttcaatcc aagctcccat 1020
tttctgtgat tttggatgtg tttttgtatg gattgagagt gaatatgaga ctctaattgg 1080
ataccgaggg gaatttatgg aacgtcagtg gagcattttt gacaagaaat atttgctagc 1140
tgatagtgac cttaggcgac ttttgaacgc gcaataatgg tttctgacgt atgtgcttag 1200
ctcattaaac tccagaaacc cgcggctgag tggctccttc aacgttgcgg ttctgtcagt 1260
tccaaacgta aaacggcttg tcccgcgtca tcggcggggg tcattccgga ctgtggggcc 1320
atatcccaga actggttgag tcggtccaac acctgggtgc caatcatgtc gatggtgggg 1380
tatggccaat tttttttcaa ttcaaaaatg tagatgtccg cagcgttatt ataaaatgaa 1440
agtacatttt gataaaacga caaattacga tccgtcgtat ttataggcga aagcaataaa 1500
caaattattc taattcggaa atctttattt cgacgtgtct acattcacgt ccaaatgggg 1560
gcttagatga gaaacttcac gatcggctct agaggccatg gcggccgcac tagtggatcc 1620
cccgggatgc atgaattcaa gcttatcgat gtcgacaggc cttaagggcc agatcccccg 1680
ggctgcagaa gcctatactg tacttaactt gattgcataa ttacttgatc atagactcat 1740
agtaaacttg attacacaga taagtgaaga aacaaaccaa ttcaagacat aaccaaagag 1800
aggtgaaaga ctgttttata tgtctaacat tgcaccttaa tatcacactg ttagttcctt 1860
tcttacttaa attcaaccca ttaaagtaaa aacaacagat aataataatt tgagaatgaa 1920
caaaaggacc atatcattta ttaactctta tccatccatt tgcattttga tgtccgaaaa 1980
caaaaactga aagaacacag taaattacaa gcagaacaaa tgatagaaga aaacagcttt 2040
tccaatgcca taatactcaa acttagtagg attctggtgt gtgggcaatg aaactgatgc 2100
attgaacttg acgaacgttg tcgaaaccga tgatacggac gaaagctggg aggcctggtc 2160
ccattcgcca tgccgaagca tgttgcccag ccggcgccag cgaggaggct gggaccatgc 2220
cggcctagaa gggtaacctg ttggtatgga tctacactta gtagaaatta atctacactt 2280
agtagaaatt agacgagctt actcgtttcg tcctcacgga ctcatcagta atttggatcc 2340
gctgcacata cataacatat caagatcaga acacacatat acacacacaa atacaatcaa 2400
gtcaacaact ccaaaaagtc cagatctaca tatatacata cgtaaataac aaaatcatgt 2460
aaataatcac aatcatgtaa tccagatcta tgcacatata tatatacaca attaataaaa 2520
aaaatgatat aacagatcta tatctatgta tgtaacaaca caatcagatg agagaagtga 2580
tgttttcaga tctgtataca tacaaacaca aacagatgaa caattgatac gtagatccat 2640
atgtatacgt acaattagct acacgattaa atgaaaaaaa tcaacgattt cggattggta 2700
cacacaaacg caacaatatg aagaaattca tatctgatta gatataaaca taaccacgtg 2760
tagatacaca gtcaaatcaa caaatttata gcttctaaac ggatgagatg aacaagataa 2820
agatattcac ataaggcata cataagataa gcagattaac aaactagcaa taatacatac 2880
ctaattaaaa caaggaataa cagagagaga gagagagaga gagatttacc ttgaaaatga 2940
agaggagaag agaggatttc ttaaaattgg gggtagagaa agaaagatga tgaattgtga 3000
gaaaggagag atagaagggg gggttgtata tataggctgt agaagattat ttttgtgttt 3060
gaggcggtga aggaagaggg gatctgacta tgacacgttt gcggttacgt atttcgatag 3120
gagtctttca acgcttaacg ccgttactct atatgaccgt ttgggccgta acggggccgt 3180
ttgttaacgc tgatgttgat tcttttcttt ctttctttct tcctttttta aagaagcaat 3240
tgtacaatcg ttgctagctg tcaaacggat aattcggata cggatatgcc tatattcata 3300
tccgtaattt ttctgcagga attcgatctg gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg 3360
cagtgagcgc aacgcaatta atgtgagtta gctcactcat taggcacccc aggctttaca 3420
ctttatgctt ccggctcgta tgttgtgtgg aattgtgagc ggataacaat ttcacacagg 3480
aaacagctat gacatgatta cgaattcaaa aattacggat atgaatatag gcatatccgt 3540
atccgaatta tccgtttgac agctagcaac gattgtacaa ttgcttcttt aaaaaaggaa 3600
gaaagaaaga aagaaaagaa tcaacatcag cgttaacaaa cggccccgtt acggcccaaa 3660
cggtcatata gagtaacggc gttaagcgtt gaaagactcc tatcgaaata cgtaaccgca 3720
aacgtgtcat agtcagatcc cctcttcctt caccgcctca aacacaaaaa taatcttcta 3780
cagcctatat atacaacccc cccttctatc tctcctttct cacaattcat catctttctt 3840
tctctacccc caattttaag aaatcctctc ttctcctctt cattttcaag gtaaatctct 3900
ctctctctct ctctctctgt tattccttgt tttaattagg tatgtattat tgctagtttg 3960
ttaatctgct tatcttatgt atgccttatg tgaatatctt tatcttgttc atctcatccg 4020
tttagaagct ataaatttgt tgatttgact gtgtatctac acgtggttat gtttatatct 4080
aatcagatat gaatttcttc atattgttgc gtttgtgtgt accaatccga aatcgttgat 4140
ttttttcatt taatcgtgta gctaattgta cgtatacata tggatctacg tatcaattgt 4200
tcatctgttt gtgtttgtat gtatacagat ctgaaaacat cacttctctc atctgattgt 4260
gttgttacat acatagatat agatctgtta tatcattttt tttattaatt gtgtatatat 4320
atatgtgcat agatctggat tacatgattg tgattattta catgattttg ttatttacgt 4380
atgtatatat gtagatctgg actttttgga gttgttgact tgattgtatt tgtgtgtgta 4440
tatgtgtgtt ctgatcttga tatgttatgt atgtgcagcg aattcggcgc gccatggctc 4500
ctaagaagaa gaggaaggtt agcaagctcg agaagtttac caactgctac agcctctcta 4560
agaccctcag gttcaaggct atccctgtgg gaaagaccca agagaatatc gacaacaaga 4620
ggctcctcgt cgaggatgag aagagagctg aagattacaa gggcgtgaag aagctcctcg 4680
acaggtacta cctcagcttc atcaacgatg tgctccacag catcaagctc aagaacctca 4740
acaactacat cagcctcttc cgtaagaaaa ccaggaccga gaaagagaac aaagagcttg 4800
agaacctcga gatcaacctc cgtaaagaga tcgccaaggc tttcaaggga aacgagggat 4860
acaagagcct cttcaagaag gatattatcg agacaatcct gcctgagttc ctggacgata 4920
aggatgagat cgctctcgtg aacagcttca acggattcac tactgccttc accggattct 4980
tcgacaacag ggaaaacatg ttcagcgaag aggccaagag cacctctatc gctttcagat 5040
gcatcaacga gaacctcacg cgttacatca gcaacatgga catcttcgag aaggtggacg 5100
ccatcttcga taagcacgag gtgcaagaaa tcaaagagaa gatcctcaac agcgactacg 5160
acgtcgagga cttttttgaa ggggagttct tcaacttcgt tctcacccaa gagggcatcg 5220
acgtgtacaa cgctattatc ggaggattcg tgaccgagtc tggggagaag attaagggac 5280
tcaacgagta catcaacctg tacaaccaga aaacgaagca gaagctcccg aagttcaagc 5340
cgctctacaa gcaggttctc tctgatcgtg agagcctctc attttacggt gagggttaca 5400
cctctgacga ggaagtgctt gaggttttcc gtaacaccct caacaagaac agcgagatct 5460
tctcgtccat caagaagttg gagaaacttt tcaagaactt cgacgagtac agcagcgctg 5520
ggatcttcgt taagaacgga cctgctatca gcaccatcag caaggatatt ttcggcgagt 5580
ggaacgtgat cagggacaag tggaatgctg agtacgatga catccacctc aagaagaagg 5640
ctgtcgtcac tgagaagtac gaggatgaca ggcgtaagtc gttcaagaag atcggctctt 5700
tcagcctcga gcagcttcaa gaatacgctg atgctgatct cagcgtggtc gagaagctca 5760
aagagatcat catccagaag gtcgacgaga tctacaaggt gtacgggtcc tctgagaagt 5820
tgttcgatgc tgatttcgtc ctcgagaaga gtctgaagaa gaacgacgct gtcgtcgcga 5880
tcatgaagga tttgctcgac agcgtgaagt ccttcgagaa ctatatcaag gccttcttcg 5940
gagagggcaa agagactaat agggacgagt ctttctacgg ggatttcgtg ctcgcttacg 6000
atatcctcct caaggtggac catatctacg acgccatcag aaactacgtg acccagaagc 6060
cttacagcaa ggacaagttc aagttgtact ttcagaaccc gcagttcatg ggcggatggg 6120
acaaagacaa agagacagat tacagggcca ccatcctcag gtacgggtct aagtactacc 6180
tggccatcat ggacaagaaa tacgccaagt gcctccaaaa gatcgacaag gatgacgtga 6240
acgggaacta tgagaagatc aactacaagc tccttccggg accgaacaag atgcttccta 6300
aggtgttctt cagcaagaaa tggatggcct actacaaccc gtctgaggac atccagaaaa 6360
tctacaagaa cgggaccttc aagaaaggcg acatgttcaa cctcaacgac tgccacaagc 6420
tcatcgattt cttcaaggac agcatctcgc gttacccgaa gtggtctaac gcttacgact 6480
ttaacttcag cgagacagaa aagtacaagg atatcgccgg gttctaccgt gaggttgagg 6540
aacagggtta caaggttagc ttcgagagcg cctccaagaa agaggttgac aagttggtcg 6600
aagagggcaa gctctacatg ttccagatct ataacaagga cttctccgac aagagccacg 6660
gaactcctaa cctccatacg atgtacttca agctgctttt cgacgagaac aaccacgggc 6720
agatcagact ttctggtggt gctgaactct tcatgcgtag ggcctcactc aagaaagaag 6780
agttggttgt tcacccggcc aactctccaa tcgctaacaa gaatcctgac aacccgaaaa 6840
agaccaccac gctgtcttac gacgtctaca aggacaaaag gttcagcgag gaccagtacg 6900
agcttcatat cccgatcgct atcaacaagt gcccgaagaa catcttcaag atcaataccg 6960
aggtgagggt gctgctcaag cacgatgata acccttacgt gatcggaatc gatcgtggtg 7020
agagaaacct cctctacatc gttgtggtgg acggaaaggg aaacatcgtc gagcagtaca 7080
gcctgaacga gattatcaac aatttcaacg gcatcaggat caagaccgac taccactcac 7140
tcctcgataa gaaagaaaaa gagcgtttcg aggccaggca gaactggact tctatcgaaa 7200
acatcaaaga gttgaaggcc ggctacatct ctcaggtggt gcataagatc tgcgagctgg 7260
tggaaaagta cgatgctgtg atcgctcttg aggacctcaa ctctgggttc aagaacagta 7320
gagtgaaggt tgagaagcag gtctaccaaa agttcgagaa gatgctcatc gacaagctca 7380
actacatggt ggacaaaaag agcaaccctt gcgctaccgg tggtgctctt aagggatacc 7440
agatcacgaa caagttcgag tccttcaaga gcatgagcac ccagaacggc ttcatcttct 7500
atatccctgc ttggctcacc agcaagatcg atccttctac tggtttcgtg aacctgctca 7560
agaccaagta cacctcgatc gccgacagca agaagttcat ctcgtctttc gacaggatca 7620
tgtacgtgcc ggaagaggat cttttcgagt tcgctctcga ctataagaac ttcagcagga 7680
ccgacgccga ctacattaag aagtggaagc tctactccta cgggaaccgt atcaggatct 7740
tccgaaatcc gaagaaaaac aacgtgttcg actgggaaga agtgtgcctc acctctgcct 7800
acaaagaact gttcaacaag tacggcatca actaccagca gggtgatatc agggctcttt 7860
tgtgcgagca gagcgacaag gcattctaca gctcattcat ggccctcatg tctctcatgc 7920
tccagatgag gaactctatc accggaagga ccgatgtgga cttccttatc tctccggtca 7980
agaactctga cgggatcttc tacgacagcc gtaactatga ggctcaagag aacgctatcc 8040
tgccgaagaa tgctgatgca aacggggctt acaacattgc gagaaaggtt ctctgggcta 8100
tcgggcagtt taagaaagcg gaagatgaga agctcgacaa ggtgaagatc gccatctcca 8160
acaaagagtg gcttgagtac gctcagacct ccgttaagca caagaggcct gctgctacta 8220
agaaagctgg ccaggccaaa aagaagaagt gaggcgcgcc gagctccagg cctcccagct 8280
ttcgtccgta tcatcggttt cgacaacgtt cgtcaagttc aatgcatcag tttcattgcc 8340
cacacaccag aatcctacta agtttgagta ttatggcatt ggaaaagctg ttttcttcta 8400
tcatttgttc tgcttgtaat ttactgtgtt ctttcagttt ttgttttcgg acatcaaaat 8460
gcaaatggat ggataagagt taataaatga tatggtcctt ttgttcattc tcaaattatt 8520
attatctgtt gtttttactt taatgggttg aatttaagta agaaaggaac taacagtgtg 8580
atattaaggt gcaatgttag acatataaaa cagtctttca cctctctttg gttatgtctt 8640
gaattggttt gtttcttcac ttatctgtgt aatcaagttt actatgagtc tatgatcaag 8700
taattatgca atcaagttaa gtacagtata ggcttgagct ccctaggatc aagcttatcg 8760
atgtcgacag gccttaaggg ccagatcttg ggcccggtac ccgatcagat tgtcgtttcc 8820
cgccttcggt ttaaactatc agtgtttgac aggatatatt ggcgggtaaa cctaagagaa 8880
aagagcgttt attagaataa tcggatattt aaaagggcgt gaaaaggttt atccgttcgt 8940
ccatttgtat gtgcatgcca accacagggt tcccctcggg agtgcttggc attccgtgcg 9000
ataatgactt ctgttcaacc acccaaacgt cggaaagcct gacgacggag cagcattcca 9060
aaaagatccc ttggctcgtc tgggtcggct agaaggtcga gtgggctgct gtggcttgat 9120
ccctcaacgc ggtcgcggac gtagcgcagc gccgaaaaat cctcgatcgc aaatccgacg 9180
ctgtcgaaaa gcgtgatctg cttgtcgctc tttcggccga cgtcctggcc agtcatcacg 9240
cgccaaagtt ccgtcacagg atgatctggc gcgagttgct ggatctcgcc ttcaatccgg 9300
gtctgtggcg ggaactccac gaaaatatcc gaacgcagca agatatcgcg gtgcatctcg 9360
gtcttgcctg ggcagtcgcc gccgacgccg ttgatgtgga cgccgaaaag gatctaggtg 9420
aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc gttccactga 9480
gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta 9540
atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa 9600
gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatact 9660
gttcttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca 9720
tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt 9780
accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg 9840
ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag 9900
cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta 9960
agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat 10020
ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg 10080
tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc 10140
ttttgctggc cttttgctca catgttcttt cctgcgttat cccctgattc tgtggataac 10200
cgattaccgc ctttgagtga gctgataccg ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg 10260
agtcagtgag cgaggaagcg gaagagcgcc tgatgcggta ttttctcctt acgcatctgt 10320
gcggtatttc acaccgcata tggtgcactc tcagtacaat ctgctctgat gccgcatagt 10380
taagccagta tacactccgc tatcgctacg tgactgggtc atggctgcgc cccgacaccc 10440
gccaacaccc gctgacgcgc cctgacgggc ttgtctgctc ccggcatccg cttacagaca 10500
agctgtgacc gtctccggga gctgcatgtg tcagaggttt tcaccgtcat caccgaaacg 10560
cgcgaggcag gggtacgtcg aggtcgatcc aacccctccg ctgctatagt gcagtcggct 10620
tctgacgttc agtgcagccg tcgtctgaaa acgacatgtc gcacaagtcc taagttacgc 10680
gacaggctgc cgccctgccc ttttcctggc gttttcttgt cgcgtgtttt agtcgcataa 10740
agtagaatac ttgcgactag aaccggagac attacgccat gaacaagagc gccgccgctg 10800
gcctgctggg ctatgcccgc gtcagcaccg acgaccagga cttgaccaac caacgggccg 10860
aactgcacgc ggccggctgc accaagctgt tttccgagaa gatcaccggc accaggcgcg 10920
accgcccgga gctggccagg atgcttgacc acctacgccc tggcgacgtt gtgacagtga 10980
ccaggctaga ccgcctggcc cgcagcaccc gcgacctact ggacattgcc gagcgcatcc 11040
aggaggccgg cgcgggcctg cgtagcctgg cagagccgtg ggccgacacc accacgccgg 11100
ccggccgcat ggtgttgacc gtgttcgccg gcattgccga gttcgagcgt tccctaatca 11160
tcgaccgcac ccggagcggg cgcgaggccg ccaaggcgcg aggcgtgaag tttggccccc 11220
gccctaccct caccccggca cagatcgcgc acgcccgcga gctgatcgac caggaaggcc 11280
gcaccgtgaa agaggcggct gcactgcttg gcgtgcatcg ctcgaccctg taccgcgcac 11340
ttgagcgcag cgaggaagtg acgcccaccg aggccaggcg gcgcggtgcc ttccgtgagg 11400
acgcattgac cgaggccgac gccctggcgg ccgccgagaa tgaacgccaa gaggaacaag 11460
catgaaaccg caccaggacg gccaggacga accgtttttc attaccgaag agatcgaggc 11520
ggagatgatc gcggccgggt acgtgttcga gccgcccgcg cacgtctcaa ccgtgcggct 11580
gcatgaaatc ctggccggtt tgtctgatgc caagctcgcg gcctggccgg cgagcttggc 11640
cgctgaagaa accgagcgcc gccgtctaaa aaggtgatgt gtatttgagt aaaacagctt 11700
gcgtcatgcg gtcgctgcgt atatgatgcg atgagtaaat aaacaaatac gcaaggggaa 11760
cgcatgaagg ttatcgctgt acttaaccag aaaggcgggt caggcaagac gaccatcgca 11820
acccatctag cccgcgccct gcaactcgcc ggggccgatg ttctgttagt cgattccgat 11880
ccccagggca gtgcccgcga ttgggcggcc gtgcgggaag atcaaccgct aaccgttgtc 11940
ggcatcgacc gcccgacgat tgaccgcgac gtgaaggcca tcggccggcg cgacttcgta 12000
gtgatcgacg gagcgcccca ggcggcggac ttggctgtgt ccgcgatcaa ggcagccgac 12060
ttcgtgctga ttccggtgca gccaagccct tacgacatat gggccaccgc cgacctggtg 12120
gagctggtta agcagcgcat tgaggtcacg gatggaaggc tacaagcggc ctttgtcgtg 12180
tcgcgggcga tcaaaggcac gcgcatcggc ggtgaggttg ccgaggcgct ggccgggtac 12240
gagctgccca ttcttgagtc ccgtatcacg cagcgcgtga gctacccagg cactgccgcc 12300
gccggcacaa ccgttcttga atcagaaccc gagggcgacg ctgcccgcga ggtccaggcg 12360
ctggccgctg aaattaaatc aaaactcatt tgagttaatg aggtaaagag aaaatgagca 12420
aaagcacaaa cacgctaagt gccggccgtc cgagcgcacg cagcagcaag gctgcaacgt 12480
tggccagcct ggcagacacg ccagccatga agcgggtcaa ctttcagttg ccggcggagg 12540
atcacaccaa gctgaagatg tacgcggtac gccaaggcaa gaccattacc gagctgctat 12600
ctgaatacat cgcgcagcta ccagagtaaa tgagcaaatg aataaatgag tagatgaatt 12660
ttagcggcta aaggaggcgg catggaaaat caagaacaac caggcaccga cgccgtggaa 12720
tgccccatgt gtggaggaac gggcggttgg ccaggcgtaa gcggctgggt tgtctgccgg 12780
ccctgcaatg gcactggaac ccccaagccc gaggaatcgg cgtgagcggt cgcaaaccat 12840
ccggcccggt acaaatcggc gcggcgctgg gtgatgacct ggtggagaag ttgaaggcgg 12900
cgcaggccgc ccagcggcaa cgcatcgagg cagaagcacg ccccggtgaa tcgtggcaag 12960
cggccgctga tcgaatccgc aaagaatccc ggcaaccgcc ggcagccggt gcgccgtcga 13020
ttaggaagcc gcccaagggc gacgagcaac cagatttttt cgttccgatg ctctatgacg 13080
tgggcacccg cgatagtcgc agcatcatgg acgtggccgt tttccgtctg tcgaagcgtg 13140
accgacgagc tggcgaggtg atccgctacg agcttccaga cgggcacgta gaggtttccg 13200
cagggccggc cggcatggcg agtgtgtggg attacgacct ggtactgatg gcggtttccc 13260
atctaaccga atccatgaac cgataccggg aagggaaggg agacaagccc ggccgcgtgt 13320
tccgtccaca cgttgcggac gtactcaagt tctgccggcg agccgatggc ggaaagcaga 13380
aagacgacct ggtagaaacc tgcattcggt taaacaccac gcacgttgcc atgcagcgta 13440
cgaagaaggc caagaacggc cgcctggtga cggtatccga gggtgaagcc ttgattagcc 13500
gctacaagat cgtaaagagc gaaaccgggc ggccggagta catcgagatc gagctagctg 13560
attggatgta ccgcgagatc acagaaggca agaacccgga cgtgctgacg gttcaccccg 13620
attacttttt gatcgatccc ggcatcggcc gttttctcta ccgcctggca cgccgcgccg 13680
caggcaaggc agaagccaga tggttgttca agacgatcta cgaacgcagt ggcagcgccg 13740
gagagttcaa gaagttctgt ttcaccgtgc gcaagctgat cgggtcaaat gacctgccgg 13800
agtacgattt gaaggaggag gcggggcagg ctggcccgat cctagtcatg cgctaccgca 13860
acctgatcga gggcgaagca tccgccggtt cctaatgtac ggagcagatg ctagggcaaa 13920
ttgccctagc aggggaaaaa ggtcgaaaag gtctctttcc tgtggatagc acgtacattg 13980
ggaacccaaa gccgtacatt gggaaccgga acccgtacat tgggaaccca aagccgtaca 14040
ttgggaaccg gtcacacatg taagtgactg atataaaaga gaaaaaaggc gatttttccg 14100
cctaaaactc tttaaaactt attaaaactc ttaaaacccg cctggcctgt gcataactgt 14160
ctggccagcg cacagccgaa gagctgcaaa aagcgcctac ccttcggtcg ctgcgctccc 14220
tacgccccgc cgcttcgcgt cggcctatcg cggccgctgg ccgctcaaaa atggctggcc 14280
tacggccagg caatctacca gggcgcggac aagccgcgcc gtcgccactc gaccgccggc 14340
gcccacatca aggcaccggt gggtatgcct gacgatgcgt ggagaccgaa accttgcgct 14400
cgttcgccag ccaggacaga aatgcctcga cttcgctgct gcccaaggtt gccgggtgac 14460
gcacaccgtg gaaacggatg aaggcacgaa cccagtggac ataagcctgt tcggttcgta 14520
agctgtaatg caagtagcgt atgcgctcac gcaactggtc cagaaccttg accgaacgca 14580
gcggtggtaa cggcgcagtg gcggttttca tggcttgtta tgactgtttt tttggggtac 14640
agtctatgcc tcgggcatcc aagcagcaag cgcgttacgc cgtgggtcga tgtttgatgt 14700
tatggagcag caacgatgtt acgcagcagg gcagtcgccc taaaacaaag ttaaacatca 14760
tgagggaagc ggtgatcgcc gaagtatcga ctcaactatc agaggtagtt ggcgtcatcg 14820
agcgccatct cgaaccgacg ttgctggccg tacatttgta cggctccgca gtggatggcg 14880
gcctgaagcc acacagtgat attgatttgc tggttacggt gaccgtaagg cttgatgaaa 14940
caacgcggcg agctttgatc aacgaccttt tggaaacttc ggcttcccct ggagagagcg 15000
agattctccg cgctgtagaa gtcaccattg ttgtgcacga cgacatcatt ccgtggcgtt 15060
atccagctaa gcgcgaactg caatttggag aatggcagcg caatgacatt cttgcaggta 15120
tcttcgagcc agccacgatc gacattgatc tggctatctt gctgacaaaa gcaagagaac 15180
atagcgttgc cttggtaggt ccagcggcgg aggaactctt tgatccggtt cctgaacagg 15240
atctatttga ggcgctaaat gaaaccttaa cgctatggaa ctcgccgccc gactgggctg 15300
gcgatgagcg aaatgtagtg cttacgttgt cccgcatttg gtacagcgca gtaaccggca 15360
aaatcgcgcc gaaggatgtc gctgccgact gggcaatgga gcgcctgccg gcccagtatc 15420
agcccgtcat acttgaagct agacaggctt atcttggaca agaagaagat cgcttggcct 15480
cgcgcgcaga tcagttggaa gaatttgtcc actacgtgaa aggcgagatc accaaggtag 15540
tcggcaaata atgtctaaca attcgttcaa gccgacgccg cttcgcggcg cggcttaact 15600
caagcgttag atgcactaag cacataattg ctcacagcca aactatcagg tcaagtctgc 15660
ttttattatt tttaagcgtg cataataagc cctacacaaa ttgggagata tatcatgaaa 15720
ggctggcttt ttcttgttat cgcaatagtt ggcgaagtaa tcgcaacata gcttgcttgg 15780
tcgttccgcg tgaacgtcgg ctcgattgta cctgcgttca aatactttgc gatcgtgttg 15840
cgcgcctgcc cggtgcgtcg gctgatctca cggatcgact gcttctctcg caacgccatc 15900
cgacggatga tgtttaaaag tcccatgtgg atcactccgt tgccccgtcg ctcaccgtgt 15960
tggggggaag gtgcacatgg ctcagttctc aatggaaatt atctgcctaa ccggctcagt 16020
tctgcgtaga aaccaacatg caagctccac cgggtgcaaa gcggcagcgg cggcaggata 16080
tattcaattg taaatggctt catgtccggg aaatctacat ggatcagcaa tgagtatgat 16140
ggtcaatatg gagaaaaaga aagagtaatt accaattttt tttcaattca aaaatgtaga 16200
tgtccgcagc gttattataa aatgaaagta cattttgata aaacgacaaa ttacgatccg 16260
tcgtatttat aggcgaaagc aataaacaaa ttattctaat tcggaaatct ttatttcgac 16320
gtgtctacat tcacgtccaa atgggggctt agatgagaaa cttcacgatc ggctctagtt 16380
cgagcgatct agtaacatag atgacaccgc gcgcgataat ttatcctagt ttgcgcgcta 16440
tattttgttt tctatcgcgt attaaatgta taattgcggg actctaatca taaaaaccca 16500
tctcataaat aacgtcatgc attacatgtt aattattaca tgcttaacgt aattcaacag 16560
aaattatatg ataatcatcg caagaccggc aacaggattc aatcttaaga aactttattg 16620
ccaaatgttt gaacgatcgg ggaaattcgt ttctatgctt caattctgct ctatagatgt 16680
tcttctagtc ttaactttta gaaggcacaa catttgaaat gttggtaatt tttctgctgg 16740
gtagtgaacc attgtaattt gtgtttgctt atattatccg ttgggtttct ctatgttatc 16800
tgtggggcca tatcccagaa ctggttgagt cggtccaaca cctgggtgcc aatcatgtcg 16860
atggtggggt atggt 16875
<210> 72
<211> 16875
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pZFNnptII_LbCpf1_crRNA_ALS_In1 vector
<400> 72
ccggattgaa agaaatatag tttaaatatt tattgataaa ataacaagtc aggtattata 60
gtccaagcaa aaacataaat ttattgatgc aagtttaaat tcagaaatat ttcaataact 120
gattatatca gctggtacat tgccgtagat gaaagactga gtgcgatatt atgtgtaata 180
cataaattga tgatatagct agcttagctc atcgggtcag aagaactcgt caagaaggcg 240
atagaaggcg atgcgctgcg aatcgggagc ggcgataccg taaagcacga ggaagcggtc 300
agcccattcg ccgccaagct cttcagcaat atcacgggta gccaacgcta tgtcctgata 360
gcggtccgcc acacccagcc ggccacagtc gatgaatcca gaaaagcggc cattttccac 420
catgatattc ggcaagcagg catcgccatg agtcacgacg agatcctcgc cgtcgggcat 480
gcgcgccttg agcctggcga acagttcggc tggcgcgagc ccctgatgct cttcgtccag 540
atcatcctga tcgacaagac cggcttccat ccgagtacgt gctcgctcga tgcgatgttt 600
cgcttggtgg tcgaatgggc aggtagccgg atcaagcgta tgcagccgcc gcattgcatc 660
agccatgatg gatactttct cggcaggagc aaggtgagat gacaggagat cctgccccgg 720
cacttcgccc aatagcagcc agtcccttcc cgcttcagtg acaacgtcga gcacagctgc 780
gcaaggaacg cccgtcgtgg ccagccacga tagccgcgct gcctcgtcct gaagttcatt 840
cagggcaccg gacaggtcgg tcttgacaaa aagaaccggg cgcccctgcg ctgacagccg 900
gaacacggcg gcatcagagc agccgattgt ctgttgtgcc cagtcatagc cgaatagcct 960
ctccacccaa gcggccggag aacctgcgtg caatccatct tgttcaatcc aagctcccat 1020
tttctgtgat tttggatgtg tttttgtatg gattgagagt gaatatgaga ctctaattgg 1080
ataccgaggg gaatttatgg aacgtcagtg gagcattttt gacaagaaat atttgctagc 1140
tgatagtgac cttaggcgac ttttgaacgc gcaataatgg tttctgacgt atgtgcttag 1200
ctcattaaac tccagaaacc cgcggctgag tggctccttc aacgttgcgg ttctgtcagt 1260
tccaaacgta aaacggcttg tcccgcgtca tcggcggggg tcattccgga ctgtggggcc 1320
atatcccaga actggttgag tcggtccaac acctgggtgc caatcatgtc gatggtgggg 1380
tatggccaat tttttttcaa ttcaaaaatg tagatgtccg cagcgttatt ataaaatgaa 1440
agtacatttt gataaaacga caaattacga tccgtcgtat ttataggcga aagcaataaa 1500
caaattattc taattcggaa atctttattt cgacgtgtct acattcacgt ccaaatgggg 1560
gcttagatga gaaacttcac gatcggctct agaggccatg gcggccgcac tagtggatcc 1620
cccgggatgc atgaattcaa gcttatcgat gtcgacaggc cttaagggcc agatcccccg 1680
ggctgcagaa gcctatactg tacttaactt gattgcataa ttacttgatc atagactcat 1740
agtaaacttg attacacaga taagtgaaga aacaaaccaa ttcaagacat aaccaaagag 1800
aggtgaaaga ctgttttata tgtctaacat tgcaccttaa tatcacactg ttagttcctt 1860
tcttacttaa attcaaccca ttaaagtaaa aacaacagat aataataatt tgagaatgaa 1920
caaaaggacc atatcattta ttaactctta tccatccatt tgcattttga tgtccgaaaa 1980
caaaaactga aagaacacag taaattacaa gcagaacaaa tgatagaaga aaacagcttt 2040
tccaatgcca taatactcaa acttagtagg attctggtgt gtgggcaatg aaactgatgc 2100
attgaacttg acgaacgttg tcgaaaccga tgatacggac gaaagctggg aggcctggtc 2160
ccattcgcca tgccgaagca tgttgcccag ccggcgccag cgaggaggct gggaccatgc 2220
cggccactac gttgtgttgt aggtatcgga tctacactta gtagaaatta atctacactt 2280
agtagaaatt agacgagctt actcgtttcg tcctcacgga ctcatcagta atttggatcc 2340
gctgcacata cataacatat caagatcaga acacacatat acacacacaa atacaatcaa 2400
gtcaacaact ccaaaaagtc cagatctaca tatatacata cgtaaataac aaaatcatgt 2460
aaataatcac aatcatgtaa tccagatcta tgcacatata tatatacaca attaataaaa 2520
aaaatgatat aacagatcta tatctatgta tgtaacaaca caatcagatg agagaagtga 2580
tgttttcaga tctgtataca tacaaacaca aacagatgaa caattgatac gtagatccat 2640
atgtatacgt acaattagct acacgattaa atgaaaaaaa tcaacgattt cggattggta 2700
cacacaaacg caacaatatg aagaaattca tatctgatta gatataaaca taaccacgtg 2760
tagatacaca gtcaaatcaa caaatttata gcttctaaac ggatgagatg aacaagataa 2820
agatattcac ataaggcata cataagataa gcagattaac aaactagcaa taatacatac 2880
ctaattaaaa caaggaataa cagagagaga gagagagaga gagatttacc ttgaaaatga 2940
agaggagaag agaggatttc ttaaaattgg gggtagagaa agaaagatga tgaattgtga 3000
gaaaggagag atagaagggg gggttgtata tataggctgt agaagattat ttttgtgttt 3060
gaggcggtga aggaagaggg gatctgacta tgacacgttt gcggttacgt atttcgatag 3120
gagtctttca acgcttaacg ccgttactct atatgaccgt ttgggccgta acggggccgt 3180
ttgttaacgc tgatgttgat tcttttcttt ctttctttct tcctttttta aagaagcaat 3240
tgtacaatcg ttgctagctg tcaaacggat aattcggata cggatatgcc tatattcata 3300
tccgtaattt ttctgcagga attcgatctg gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg 3360
cagtgagcgc aacgcaatta atgtgagtta gctcactcat taggcacccc aggctttaca 3420
ctttatgctt ccggctcgta tgttgtgtgg aattgtgagc ggataacaat ttcacacagg 3480
aaacagctat gacatgatta cgaattcaaa aattacggat atgaatatag gcatatccgt 3540
atccgaatta tccgtttgac agctagcaac gattgtacaa ttgcttcttt aaaaaaggaa 3600
gaaagaaaga aagaaaagaa tcaacatcag cgttaacaaa cggccccgtt acggcccaaa 3660
cggtcatata gagtaacggc gttaagcgtt gaaagactcc tatcgaaata cgtaaccgca 3720
aacgtgtcat agtcagatcc cctcttcctt caccgcctca aacacaaaaa taatcttcta 3780
cagcctatat atacaacccc cccttctatc tctcctttct cacaattcat catctttctt 3840
tctctacccc caattttaag aaatcctctc ttctcctctt cattttcaag gtaaatctct 3900
ctctctctct ctctctctgt tattccttgt tttaattagg tatgtattat tgctagtttg 3960
ttaatctgct tatcttatgt atgccttatg tgaatatctt tatcttgttc atctcatccg 4020
tttagaagct ataaatttgt tgatttgact gtgtatctac acgtggttat gtttatatct 4080
aatcagatat gaatttcttc atattgttgc gtttgtgtgt accaatccga aatcgttgat 4140
ttttttcatt taatcgtgta gctaattgta cgtatacata tggatctacg tatcaattgt 4200
tcatctgttt gtgtttgtat gtatacagat ctgaaaacat cacttctctc atctgattgt 4260
gttgttacat acatagatat agatctgtta tatcattttt tttattaatt gtgtatatat 4320
atatgtgcat agatctggat tacatgattg tgattattta catgattttg ttatttacgt 4380
atgtatatat gtagatctgg actttttgga gttgttgact tgattgtatt tgtgtgtgta 4440
tatgtgtgtt ctgatcttga tatgttatgt atgtgcagcg aattcggcgc gccatggctc 4500
ctaagaagaa gaggaaggtt agcaagctcg agaagtttac caactgctac agcctctcta 4560
agaccctcag gttcaaggct atccctgtgg gaaagaccca agagaatatc gacaacaaga 4620
ggctcctcgt cgaggatgag aagagagctg aagattacaa gggcgtgaag aagctcctcg 4680
acaggtacta cctcagcttc atcaacgatg tgctccacag catcaagctc aagaacctca 4740
acaactacat cagcctcttc cgtaagaaaa ccaggaccga gaaagagaac aaagagcttg 4800
agaacctcga gatcaacctc cgtaaagaga tcgccaaggc tttcaaggga aacgagggat 4860
acaagagcct cttcaagaag gatattatcg agacaatcct gcctgagttc ctggacgata 4920
aggatgagat cgctctcgtg aacagcttca acggattcac tactgccttc accggattct 4980
tcgacaacag ggaaaacatg ttcagcgaag aggccaagag cacctctatc gctttcagat 5040
gcatcaacga gaacctcacg cgttacatca gcaacatgga catcttcgag aaggtggacg 5100
ccatcttcga taagcacgag gtgcaagaaa tcaaagagaa gatcctcaac agcgactacg 5160
acgtcgagga cttttttgaa ggggagttct tcaacttcgt tctcacccaa gagggcatcg 5220
acgtgtacaa cgctattatc ggaggattcg tgaccgagtc tggggagaag attaagggac 5280
tcaacgagta catcaacctg tacaaccaga aaacgaagca gaagctcccg aagttcaagc 5340
cgctctacaa gcaggttctc tctgatcgtg agagcctctc attttacggt gagggttaca 5400
cctctgacga ggaagtgctt gaggttttcc gtaacaccct caacaagaac agcgagatct 5460
tctcgtccat caagaagttg gagaaacttt tcaagaactt cgacgagtac agcagcgctg 5520
ggatcttcgt taagaacgga cctgctatca gcaccatcag caaggatatt ttcggcgagt 5580
ggaacgtgat cagggacaag tggaatgctg agtacgatga catccacctc aagaagaagg 5640
ctgtcgtcac tgagaagtac gaggatgaca ggcgtaagtc gttcaagaag atcggctctt 5700
tcagcctcga gcagcttcaa gaatacgctg atgctgatct cagcgtggtc gagaagctca 5760
aagagatcat catccagaag gtcgacgaga tctacaaggt gtacgggtcc tctgagaagt 5820
tgttcgatgc tgatttcgtc ctcgagaaga gtctgaagaa gaacgacgct gtcgtcgcga 5880
tcatgaagga tttgctcgac agcgtgaagt ccttcgagaa ctatatcaag gccttcttcg 5940
gagagggcaa agagactaat agggacgagt ctttctacgg ggatttcgtg ctcgcttacg 6000
atatcctcct caaggtggac catatctacg acgccatcag aaactacgtg acccagaagc 6060
cttacagcaa ggacaagttc aagttgtact ttcagaaccc gcagttcatg ggcggatggg 6120
acaaagacaa agagacagat tacagggcca ccatcctcag gtacgggtct aagtactacc 6180
tggccatcat ggacaagaaa tacgccaagt gcctccaaaa gatcgacaag gatgacgtga 6240
acgggaacta tgagaagatc aactacaagc tccttccggg accgaacaag atgcttccta 6300
aggtgttctt cagcaagaaa tggatggcct actacaaccc gtctgaggac atccagaaaa 6360
tctacaagaa cgggaccttc aagaaaggcg acatgttcaa cctcaacgac tgccacaagc 6420
tcatcgattt cttcaaggac agcatctcgc gttacccgaa gtggtctaac gcttacgact 6480
ttaacttcag cgagacagaa aagtacaagg atatcgccgg gttctaccgt gaggttgagg 6540
aacagggtta caaggttagc ttcgagagcg cctccaagaa agaggttgac aagttggtcg 6600
aagagggcaa gctctacatg ttccagatct ataacaagga cttctccgac aagagccacg 6660
gaactcctaa cctccatacg atgtacttca agctgctttt cgacgagaac aaccacgggc 6720
agatcagact ttctggtggt gctgaactct tcatgcgtag ggcctcactc aagaaagaag 6780
agttggttgt tcacccggcc aactctccaa tcgctaacaa gaatcctgac aacccgaaaa 6840
agaccaccac gctgtcttac gacgtctaca aggacaaaag gttcagcgag gaccagtacg 6900
agcttcatat cccgatcgct atcaacaagt gcccgaagaa catcttcaag atcaataccg 6960
aggtgagggt gctgctcaag cacgatgata acccttacgt gatcggaatc gatcgtggtg 7020
agagaaacct cctctacatc gttgtggtgg acggaaaggg aaacatcgtc gagcagtaca 7080
gcctgaacga gattatcaac aatttcaacg gcatcaggat caagaccgac taccactcac 7140
tcctcgataa gaaagaaaaa gagcgtttcg aggccaggca gaactggact tctatcgaaa 7200
acatcaaaga gttgaaggcc ggctacatct ctcaggtggt gcataagatc tgcgagctgg 7260
tggaaaagta cgatgctgtg atcgctcttg aggacctcaa ctctgggttc aagaacagta 7320
gagtgaaggt tgagaagcag gtctaccaaa agttcgagaa gatgctcatc gacaagctca 7380
actacatggt ggacaaaaag agcaaccctt gcgctaccgg tggtgctctt aagggatacc 7440
agatcacgaa caagttcgag tccttcaaga gcatgagcac ccagaacggc ttcatcttct 7500
atatccctgc ttggctcacc agcaagatcg atccttctac tggtttcgtg aacctgctca 7560
agaccaagta cacctcgatc gccgacagca agaagttcat ctcgtctttc gacaggatca 7620
tgtacgtgcc ggaagaggat cttttcgagt tcgctctcga ctataagaac ttcagcagga 7680
ccgacgccga ctacattaag aagtggaagc tctactccta cgggaaccgt atcaggatct 7740
tccgaaatcc gaagaaaaac aacgtgttcg actgggaaga agtgtgcctc acctctgcct 7800
acaaagaact gttcaacaag tacggcatca actaccagca gggtgatatc agggctcttt 7860
tgtgcgagca gagcgacaag gcattctaca gctcattcat ggccctcatg tctctcatgc 7920
tccagatgag gaactctatc accggaagga ccgatgtgga cttccttatc tctccggtca 7980
agaactctga cgggatcttc tacgacagcc gtaactatga ggctcaagag aacgctatcc 8040
tgccgaagaa tgctgatgca aacggggctt acaacattgc gagaaaggtt ctctgggcta 8100
tcgggcagtt taagaaagcg gaagatgaga agctcgacaa ggtgaagatc gccatctcca 8160
acaaagagtg gcttgagtac gctcagacct ccgttaagca caagaggcct gctgctacta 8220
agaaagctgg ccaggccaaa aagaagaagt gaggcgcgcc gagctccagg cctcccagct 8280
ttcgtccgta tcatcggttt cgacaacgtt cgtcaagttc aatgcatcag tttcattgcc 8340
cacacaccag aatcctacta agtttgagta ttatggcatt ggaaaagctg ttttcttcta 8400
tcatttgttc tgcttgtaat ttactgtgtt ctttcagttt ttgttttcgg acatcaaaat 8460
gcaaatggat ggataagagt taataaatga tatggtcctt ttgttcattc tcaaattatt 8520
attatctgtt gtttttactt taatgggttg aatttaagta agaaaggaac taacagtgtg 8580
atattaaggt gcaatgttag acatataaaa cagtctttca cctctctttg gttatgtctt 8640
gaattggttt gtttcttcac ttatctgtgt aatcaagttt actatgagtc tatgatcaag 8700
taattatgca atcaagttaa gtacagtata ggcttgagct ccctaggatc aagcttatcg 8760
atgtcgacag gccttaaggg ccagatcttg ggcccggtac ccgatcagat tgtcgtttcc 8820
cgccttcggt ttaaactatc agtgtttgac aggatatatt ggcgggtaaa cctaagagaa 8880
aagagcgttt attagaataa tcggatattt aaaagggcgt gaaaaggttt atccgttcgt 8940
ccatttgtat gtgcatgcca accacagggt tcccctcggg agtgcttggc attccgtgcg 9000
ataatgactt ctgttcaacc acccaaacgt cggaaagcct gacgacggag cagcattcca 9060
aaaagatccc ttggctcgtc tgggtcggct agaaggtcga gtgggctgct gtggcttgat 9120
ccctcaacgc ggtcgcggac gtagcgcagc gccgaaaaat cctcgatcgc aaatccgacg 9180
ctgtcgaaaa gcgtgatctg cttgtcgctc tttcggccga cgtcctggcc agtcatcacg 9240
cgccaaagtt ccgtcacagg atgatctggc gcgagttgct ggatctcgcc ttcaatccgg 9300
gtctgtggcg ggaactccac gaaaatatcc gaacgcagca agatatcgcg gtgcatctcg 9360
gtcttgcctg ggcagtcgcc gccgacgccg ttgatgtgga cgccgaaaag gatctaggtg 9420
aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc gttccactga 9480
gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta 9540
atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa 9600
gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatact 9660
gttcttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca 9720
tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt 9780
accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg 9840
ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag 9900
cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta 9960
agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat 10020
ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg 10080
tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc 10140
ttttgctggc cttttgctca catgttcttt cctgcgttat cccctgattc tgtggataac 10200
cgattaccgc ctttgagtga gctgataccg ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg 10260
agtcagtgag cgaggaagcg gaagagcgcc tgatgcggta ttttctcctt acgcatctgt 10320
gcggtatttc acaccgcata tggtgcactc tcagtacaat ctgctctgat gccgcatagt 10380
taagccagta tacactccgc tatcgctacg tgactgggtc atggctgcgc cccgacaccc 10440
gccaacaccc gctgacgcgc cctgacgggc ttgtctgctc ccggcatccg cttacagaca 10500
agctgtgacc gtctccggga gctgcatgtg tcagaggttt tcaccgtcat caccgaaacg 10560
cgcgaggcag gggtacgtcg aggtcgatcc aacccctccg ctgctatagt gcagtcggct 10620
tctgacgttc agtgcagccg tcgtctgaaa acgacatgtc gcacaagtcc taagttacgc 10680
gacaggctgc cgccctgccc ttttcctggc gttttcttgt cgcgtgtttt agtcgcataa 10740
agtagaatac ttgcgactag aaccggagac attacgccat gaacaagagc gccgccgctg 10800
gcctgctggg ctatgcccgc gtcagcaccg acgaccagga cttgaccaac caacgggccg 10860
aactgcacgc ggccggctgc accaagctgt tttccgagaa gatcaccggc accaggcgcg 10920
accgcccgga gctggccagg atgcttgacc acctacgccc tggcgacgtt gtgacagtga 10980
ccaggctaga ccgcctggcc cgcagcaccc gcgacctact ggacattgcc gagcgcatcc 11040
aggaggccgg cgcgggcctg cgtagcctgg cagagccgtg ggccgacacc accacgccgg 11100
ccggccgcat ggtgttgacc gtgttcgccg gcattgccga gttcgagcgt tccctaatca 11160
tcgaccgcac ccggagcggg cgcgaggccg ccaaggcgcg aggcgtgaag tttggccccc 11220
gccctaccct caccccggca cagatcgcgc acgcccgcga gctgatcgac caggaaggcc 11280
gcaccgtgaa agaggcggct gcactgcttg gcgtgcatcg ctcgaccctg taccgcgcac 11340
ttgagcgcag cgaggaagtg acgcccaccg aggccaggcg gcgcggtgcc ttccgtgagg 11400
acgcattgac cgaggccgac gccctggcgg ccgccgagaa tgaacgccaa gaggaacaag 11460
catgaaaccg caccaggacg gccaggacga accgtttttc attaccgaag agatcgaggc 11520
ggagatgatc gcggccgggt acgtgttcga gccgcccgcg cacgtctcaa ccgtgcggct 11580
gcatgaaatc ctggccggtt tgtctgatgc caagctcgcg gcctggccgg cgagcttggc 11640
cgctgaagaa accgagcgcc gccgtctaaa aaggtgatgt gtatttgagt aaaacagctt 11700
gcgtcatgcg gtcgctgcgt atatgatgcg atgagtaaat aaacaaatac gcaaggggaa 11760
cgcatgaagg ttatcgctgt acttaaccag aaaggcgggt caggcaagac gaccatcgca 11820
acccatctag cccgcgccct gcaactcgcc ggggccgatg ttctgttagt cgattccgat 11880
ccccagggca gtgcccgcga ttgggcggcc gtgcgggaag atcaaccgct aaccgttgtc 11940
ggcatcgacc gcccgacgat tgaccgcgac gtgaaggcca tcggccggcg cgacttcgta 12000
gtgatcgacg gagcgcccca ggcggcggac ttggctgtgt ccgcgatcaa ggcagccgac 12060
ttcgtgctga ttccggtgca gccaagccct tacgacatat gggccaccgc cgacctggtg 12120
gagctggtta agcagcgcat tgaggtcacg gatggaaggc tacaagcggc ctttgtcgtg 12180
tcgcgggcga tcaaaggcac gcgcatcggc ggtgaggttg ccgaggcgct ggccgggtac 12240
gagctgccca ttcttgagtc ccgtatcacg cagcgcgtga gctacccagg cactgccgcc 12300
gccggcacaa ccgttcttga atcagaaccc gagggcgacg ctgcccgcga ggtccaggcg 12360
ctggccgctg aaattaaatc aaaactcatt tgagttaatg aggtaaagag aaaatgagca 12420
aaagcacaaa cacgctaagt gccggccgtc cgagcgcacg cagcagcaag gctgcaacgt 12480
tggccagcct ggcagacacg ccagccatga agcgggtcaa ctttcagttg ccggcggagg 12540
atcacaccaa gctgaagatg tacgcggtac gccaaggcaa gaccattacc gagctgctat 12600
ctgaatacat cgcgcagcta ccagagtaaa tgagcaaatg aataaatgag tagatgaatt 12660
ttagcggcta aaggaggcgg catggaaaat caagaacaac caggcaccga cgccgtggaa 12720
tgccccatgt gtggaggaac gggcggttgg ccaggcgtaa gcggctgggt tgtctgccgg 12780
ccctgcaatg gcactggaac ccccaagccc gaggaatcgg cgtgagcggt cgcaaaccat 12840
ccggcccggt acaaatcggc gcggcgctgg gtgatgacct ggtggagaag ttgaaggcgg 12900
cgcaggccgc ccagcggcaa cgcatcgagg cagaagcacg ccccggtgaa tcgtggcaag 12960
cggccgctga tcgaatccgc aaagaatccc ggcaaccgcc ggcagccggt gcgccgtcga 13020
ttaggaagcc gcccaagggc gacgagcaac cagatttttt cgttccgatg ctctatgacg 13080
tgggcacccg cgatagtcgc agcatcatgg acgtggccgt tttccgtctg tcgaagcgtg 13140
accgacgagc tggcgaggtg atccgctacg agcttccaga cgggcacgta gaggtttccg 13200
cagggccggc cggcatggcg agtgtgtggg attacgacct ggtactgatg gcggtttccc 13260
atctaaccga atccatgaac cgataccggg aagggaaggg agacaagccc ggccgcgtgt 13320
tccgtccaca cgttgcggac gtactcaagt tctgccggcg agccgatggc ggaaagcaga 13380
aagacgacct ggtagaaacc tgcattcggt taaacaccac gcacgttgcc atgcagcgta 13440
cgaagaaggc caagaacggc cgcctggtga cggtatccga gggtgaagcc ttgattagcc 13500
gctacaagat cgtaaagagc gaaaccgggc ggccggagta catcgagatc gagctagctg 13560
attggatgta ccgcgagatc acagaaggca agaacccgga cgtgctgacg gttcaccccg 13620
attacttttt gatcgatccc ggcatcggcc gttttctcta ccgcctggca cgccgcgccg 13680
caggcaaggc agaagccaga tggttgttca agacgatcta cgaacgcagt ggcagcgccg 13740
gagagttcaa gaagttctgt ttcaccgtgc gcaagctgat cgggtcaaat gacctgccgg 13800
agtacgattt gaaggaggag gcggggcagg ctggcccgat cctagtcatg cgctaccgca 13860
acctgatcga gggcgaagca tccgccggtt cctaatgtac ggagcagatg ctagggcaaa 13920
ttgccctagc aggggaaaaa ggtcgaaaag gtctctttcc tgtggatagc acgtacattg 13980
ggaacccaaa gccgtacatt gggaaccgga acccgtacat tgggaaccca aagccgtaca 14040
ttgggaaccg gtcacacatg taagtgactg atataaaaga gaaaaaaggc gatttttccg 14100
cctaaaactc tttaaaactt attaaaactc ttaaaacccg cctggcctgt gcataactgt 14160
ctggccagcg cacagccgaa gagctgcaaa aagcgcctac ccttcggtcg ctgcgctccc 14220
tacgccccgc cgcttcgcgt cggcctatcg cggccgctgg ccgctcaaaa atggctggcc 14280
tacggccagg caatctacca gggcgcggac aagccgcgcc gtcgccactc gaccgccggc 14340
gcccacatca aggcaccggt gggtatgcct gacgatgcgt ggagaccgaa accttgcgct 14400
cgttcgccag ccaggacaga aatgcctcga cttcgctgct gcccaaggtt gccgggtgac 14460
gcacaccgtg gaaacggatg aaggcacgaa cccagtggac ataagcctgt tcggttcgta 14520
agctgtaatg caagtagcgt atgcgctcac gcaactggtc cagaaccttg accgaacgca 14580
gcggtggtaa cggcgcagtg gcggttttca tggcttgtta tgactgtttt tttggggtac 14640
agtctatgcc tcgggcatcc aagcagcaag cgcgttacgc cgtgggtcga tgtttgatgt 14700
tatggagcag caacgatgtt acgcagcagg gcagtcgccc taaaacaaag ttaaacatca 14760
tgagggaagc ggtgatcgcc gaagtatcga ctcaactatc agaggtagtt ggcgtcatcg 14820
agcgccatct cgaaccgacg ttgctggccg tacatttgta cggctccgca gtggatggcg 14880
gcctgaagcc acacagtgat attgatttgc tggttacggt gaccgtaagg cttgatgaaa 14940
caacgcggcg agctttgatc aacgaccttt tggaaacttc ggcttcccct ggagagagcg 15000
agattctccg cgctgtagaa gtcaccattg ttgtgcacga cgacatcatt ccgtggcgtt 15060
atccagctaa gcgcgaactg caatttggag aatggcagcg caatgacatt cttgcaggta 15120
tcttcgagcc agccacgatc gacattgatc tggctatctt gctgacaaaa gcaagagaac 15180
atagcgttgc cttggtaggt ccagcggcgg aggaactctt tgatccggtt cctgaacagg 15240
atctatttga ggcgctaaat gaaaccttaa cgctatggaa ctcgccgccc gactgggctg 15300
gcgatgagcg aaatgtagtg cttacgttgt cccgcatttg gtacagcgca gtaaccggca 15360
aaatcgcgcc gaaggatgtc gctgccgact gggcaatgga gcgcctgccg gcccagtatc 15420
agcccgtcat acttgaagct agacaggctt atcttggaca agaagaagat cgcttggcct 15480
cgcgcgcaga tcagttggaa gaatttgtcc actacgtgaa aggcgagatc accaaggtag 15540
tcggcaaata atgtctaaca attcgttcaa gccgacgccg cttcgcggcg cggcttaact 15600
caagcgttag atgcactaag cacataattg ctcacagcca aactatcagg tcaagtctgc 15660
ttttattatt tttaagcgtg cataataagc cctacacaaa ttgggagata tatcatgaaa 15720
ggctggcttt ttcttgttat cgcaatagtt ggcgaagtaa tcgcaacata gcttgcttgg 15780
tcgttccgcg tgaacgtcgg ctcgattgta cctgcgttca aatactttgc gatcgtgttg 15840
cgcgcctgcc cggtgcgtcg gctgatctca cggatcgact gcttctctcg caacgccatc 15900
cgacggatga tgtttaaaag tcccatgtgg atcactccgt tgccccgtcg ctcaccgtgt 15960
tggggggaag gtgcacatgg ctcagttctc aatggaaatt atctgcctaa ccggctcagt 16020
tctgcgtaga aaccaacatg caagctccac cgggtgcaaa gcggcagcgg cggcaggata 16080
tattcaattg taaatggctt catgtccggg aaatctacat ggatcagcaa tgagtatgat 16140
ggtcaatatg gagaaaaaga aagagtaatt accaattttt tttcaattca aaaatgtaga 16200
tgtccgcagc gttattataa aatgaaagta cattttgata aaacgacaaa ttacgatccg 16260
tcgtatttat aggcgaaagc aataaacaaa ttattctaat tcggaaatct ttatttcgac 16320
gtgtctacat tcacgtccaa atgggggctt agatgagaaa cttcacgatc ggctctagtt 16380
cgagcgatct agtaacatag atgacaccgc gcgcgataat ttatcctagt ttgcgcgcta 16440
tattttgttt tctatcgcgt attaaatgta taattgcggg actctaatca taaaaaccca 16500
tctcataaat aacgtcatgc attacatgtt aattattaca tgcttaacgt aattcaacag 16560
aaattatatg ataatcatcg caagaccggc aacaggattc aatcttaaga aactttattg 16620
ccaaatgttt gaacgatcgg ggaaattcgt ttctatgctt caattctgct ctatagatgt 16680
tcttctagtc ttaactttta gaaggcacaa catttgaaat gttggtaatt tttctgctgg 16740
gtagtgaacc attgtaattt gtgtttgctt atattatccg ttgggtttct ctatgttatc 16800
tgtggggcca tatcccagaa ctggttgagt cggtccaaca cctgggtgcc aatcatgtcg 16860
atggtggggt atggt 16875
<210> 73
<211> 16875
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pZFNnptII_LbCpf1_crRNA_ALS_In2 vector
<400> 73
ccggattgaa agaaatatag tttaaatatt tattgataaa ataacaagtc aggtattata 60
gtccaagcaa aaacataaat ttattgatgc aagtttaaat tcagaaatat ttcaataact 120
gattatatca gctggtacat tgccgtagat gaaagactga gtgcgatatt atgtgtaata 180
cataaattga tgatatagct agcttagctc atcgggtcag aagaactcgt caagaaggcg 240
atagaaggcg atgcgctgcg aatcgggagc ggcgataccg taaagcacga ggaagcggtc 300
agcccattcg ccgccaagct cttcagcaat atcacgggta gccaacgcta tgtcctgata 360
gcggtccgcc acacccagcc ggccacagtc gatgaatcca gaaaagcggc cattttccac 420
catgatattc ggcaagcagg catcgccatg agtcacgacg agatcctcgc cgtcgggcat 480
gcgcgccttg agcctggcga acagttcggc tggcgcgagc ccctgatgct cttcgtccag 540
atcatcctga tcgacaagac cggcttccat ccgagtacgt gctcgctcga tgcgatgttt 600
cgcttggtgg tcgaatgggc aggtagccgg atcaagcgta tgcagccgcc gcattgcatc 660
agccatgatg gatactttct cggcaggagc aaggtgagat gacaggagat cctgccccgg 720
cacttcgccc aatagcagcc agtcccttcc cgcttcagtg acaacgtcga gcacagctgc 780
gcaaggaacg cccgtcgtgg ccagccacga tagccgcgct gcctcgtcct gaagttcatt 840
cagggcaccg gacaggtcgg tcttgacaaa aagaaccggg cgcccctgcg ctgacagccg 900
gaacacggcg gcatcagagc agccgattgt ctgttgtgcc cagtcatagc cgaatagcct 960
ctccacccaa gcggccggag aacctgcgtg caatccatct tgttcaatcc aagctcccat 1020
tttctgtgat tttggatgtg tttttgtatg gattgagagt gaatatgaga ctctaattgg 1080
ataccgaggg gaatttatgg aacgtcagtg gagcattttt gacaagaaat atttgctagc 1140
tgatagtgac cttaggcgac ttttgaacgc gcaataatgg tttctgacgt atgtgcttag 1200
ctcattaaac tccagaaacc cgcggctgag tggctccttc aacgttgcgg ttctgtcagt 1260
tccaaacgta aaacggcttg tcccgcgtca tcggcggggg tcattccgga ctgtggggcc 1320
atatcccaga actggttgag tcggtccaac acctgggtgc caatcatgtc gatggtgggg 1380
tatggccaat tttttttcaa ttcaaaaatg tagatgtccg cagcgttatt ataaaatgaa 1440
agtacatttt gataaaacga caaattacga tccgtcgtat ttataggcga aagcaataaa 1500
caaattattc taattcggaa atctttattt cgacgtgtct acattcacgt ccaaatgggg 1560
gcttagatga gaaacttcac gatcggctct agaggccatg gcggccgcac tagtggatcc 1620
cccgggatgc atgaattcaa gcttatcgat gtcgacaggc cttaagggcc agatcccccg 1680
ggctgcagaa gcctatactg tacttaactt gattgcataa ttacttgatc atagactcat 1740
agtaaacttg attacacaga taagtgaaga aacaaaccaa ttcaagacat aaccaaagag 1800
aggtgaaaga ctgttttata tgtctaacat tgcaccttaa tatcacactg ttagttcctt 1860
tcttacttaa attcaaccca ttaaagtaaa aacaacagat aataataatt tgagaatgaa 1920
caaaaggacc atatcattta ttaactctta tccatccatt tgcattttga tgtccgaaaa 1980
caaaaactga aagaacacag taaattacaa gcagaacaaa tgatagaaga aaacagcttt 2040
tccaatgcca taatactcaa acttagtagg attctggtgt gtgggcaatg aaactgatgc 2100
attgaacttg acgaacgttg tcgaaaccga tgatacggac gaaagctggg aggcctggtc 2160
ccattcgcca tgccgaagca tgttgcccag ccggcgccag cgaggaggct gggaccatgc 2220
cggccgatat actagttggc ttggtgcata tctacactta gtagaaatta atctacactt 2280
agtagaaatt agacgagctt actcgtttcg tcctcacgga ctcatcagta atttggatcc 2340
gctgcacata cataacatat caagatcaga acacacatat acacacacaa atacaatcaa 2400
gtcaacaact ccaaaaagtc cagatctaca tatatacata cgtaaataac aaaatcatgt 2460
aaataatcac aatcatgtaa tccagatcta tgcacatata tatatacaca attaataaaa 2520
aaaatgatat aacagatcta tatctatgta tgtaacaaca caatcagatg agagaagtga 2580
tgttttcaga tctgtataca tacaaacaca aacagatgaa caattgatac gtagatccat 2640
atgtatacgt acaattagct acacgattaa atgaaaaaaa tcaacgattt cggattggta 2700
cacacaaacg caacaatatg aagaaattca tatctgatta gatataaaca taaccacgtg 2760
tagatacaca gtcaaatcaa caaatttata gcttctaaac ggatgagatg aacaagataa 2820
agatattcac ataaggcata cataagataa gcagattaac aaactagcaa taatacatac 2880
ctaattaaaa caaggaataa cagagagaga gagagagaga gagatttacc ttgaaaatga 2940
agaggagaag agaggatttc ttaaaattgg gggtagagaa agaaagatga tgaattgtga 3000
gaaaggagag atagaagggg gggttgtata tataggctgt agaagattat ttttgtgttt 3060
gaggcggtga aggaagaggg gatctgacta tgacacgttt gcggttacgt atttcgatag 3120
gagtctttca acgcttaacg ccgttactct atatgaccgt ttgggccgta acggggccgt 3180
ttgttaacgc tgatgttgat tcttttcttt ctttctttct tcctttttta aagaagcaat 3240
tgtacaatcg ttgctagctg tcaaacggat aattcggata cggatatgcc tatattcata 3300
tccgtaattt ttctgcagga attcgatctg gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg 3360
cagtgagcgc aacgcaatta atgtgagtta gctcactcat taggcacccc aggctttaca 3420
ctttatgctt ccggctcgta tgttgtgtgg aattgtgagc ggataacaat ttcacacagg 3480
aaacagctat gacatgatta cgaattcaaa aattacggat atgaatatag gcatatccgt 3540
atccgaatta tccgtttgac agctagcaac gattgtacaa ttgcttcttt aaaaaaggaa 3600
gaaagaaaga aagaaaagaa tcaacatcag cgttaacaaa cggccccgtt acggcccaaa 3660
cggtcatata gagtaacggc gttaagcgtt gaaagactcc tatcgaaata cgtaaccgca 3720
aacgtgtcat agtcagatcc cctcttcctt caccgcctca aacacaaaaa taatcttcta 3780
cagcctatat atacaacccc cccttctatc tctcctttct cacaattcat catctttctt 3840
tctctacccc caattttaag aaatcctctc ttctcctctt cattttcaag gtaaatctct 3900
ctctctctct ctctctctgt tattccttgt tttaattagg tatgtattat tgctagtttg 3960
ttaatctgct tatcttatgt atgccttatg tgaatatctt tatcttgttc atctcatccg 4020
tttagaagct ataaatttgt tgatttgact gtgtatctac acgtggttat gtttatatct 4080
aatcagatat gaatttcttc atattgttgc gtttgtgtgt accaatccga aatcgttgat 4140
ttttttcatt taatcgtgta gctaattgta cgtatacata tggatctacg tatcaattgt 4200
tcatctgttt gtgtttgtat gtatacagat ctgaaaacat cacttctctc atctgattgt 4260
gttgttacat acatagatat agatctgtta tatcattttt tttattaatt gtgtatatat 4320
atatgtgcat agatctggat tacatgattg tgattattta catgattttg ttatttacgt 4380
atgtatatat gtagatctgg actttttgga gttgttgact tgattgtatt tgtgtgtgta 4440
tatgtgtgtt ctgatcttga tatgttatgt atgtgcagcg aattcggcgc gccatggctc 4500
ctaagaagaa gaggaaggtt agcaagctcg agaagtttac caactgctac agcctctcta 4560
agaccctcag gttcaaggct atccctgtgg gaaagaccca agagaatatc gacaacaaga 4620
ggctcctcgt cgaggatgag aagagagctg aagattacaa gggcgtgaag aagctcctcg 4680
acaggtacta cctcagcttc atcaacgatg tgctccacag catcaagctc aagaacctca 4740
acaactacat cagcctcttc cgtaagaaaa ccaggaccga gaaagagaac aaagagcttg 4800
agaacctcga gatcaacctc cgtaaagaga tcgccaaggc tttcaaggga aacgagggat 4860
acaagagcct cttcaagaag gatattatcg agacaatcct gcctgagttc ctggacgata 4920
aggatgagat cgctctcgtg aacagcttca acggattcac tactgccttc accggattct 4980
tcgacaacag ggaaaacatg ttcagcgaag aggccaagag cacctctatc gctttcagat 5040
gcatcaacga gaacctcacg cgttacatca gcaacatgga catcttcgag aaggtggacg 5100
ccatcttcga taagcacgag gtgcaagaaa tcaaagagaa gatcctcaac agcgactacg 5160
acgtcgagga cttttttgaa ggggagttct tcaacttcgt tctcacccaa gagggcatcg 5220
acgtgtacaa cgctattatc ggaggattcg tgaccgagtc tggggagaag attaagggac 5280
tcaacgagta catcaacctg tacaaccaga aaacgaagca gaagctcccg aagttcaagc 5340
cgctctacaa gcaggttctc tctgatcgtg agagcctctc attttacggt gagggttaca 5400
cctctgacga ggaagtgctt gaggttttcc gtaacaccct caacaagaac agcgagatct 5460
tctcgtccat caagaagttg gagaaacttt tcaagaactt cgacgagtac agcagcgctg 5520
ggatcttcgt taagaacgga cctgctatca gcaccatcag caaggatatt ttcggcgagt 5580
ggaacgtgat cagggacaag tggaatgctg agtacgatga catccacctc aagaagaagg 5640
ctgtcgtcac tgagaagtac gaggatgaca ggcgtaagtc gttcaagaag atcggctctt 5700
tcagcctcga gcagcttcaa gaatacgctg atgctgatct cagcgtggtc gagaagctca 5760
aagagatcat catccagaag gtcgacgaga tctacaaggt gtacgggtcc tctgagaagt 5820
tgttcgatgc tgatttcgtc ctcgagaaga gtctgaagaa gaacgacgct gtcgtcgcga 5880
tcatgaagga tttgctcgac agcgtgaagt ccttcgagaa ctatatcaag gccttcttcg 5940
gagagggcaa agagactaat agggacgagt ctttctacgg ggatttcgtg ctcgcttacg 6000
atatcctcct caaggtggac catatctacg acgccatcag aaactacgtg acccagaagc 6060
cttacagcaa ggacaagttc aagttgtact ttcagaaccc gcagttcatg ggcggatggg 6120
acaaagacaa agagacagat tacagggcca ccatcctcag gtacgggtct aagtactacc 6180
tggccatcat ggacaagaaa tacgccaagt gcctccaaaa gatcgacaag gatgacgtga 6240
acgggaacta tgagaagatc aactacaagc tccttccggg accgaacaag atgcttccta 6300
aggtgttctt cagcaagaaa tggatggcct actacaaccc gtctgaggac atccagaaaa 6360
tctacaagaa cgggaccttc aagaaaggcg acatgttcaa cctcaacgac tgccacaagc 6420
tcatcgattt cttcaaggac agcatctcgc gttacccgaa gtggtctaac gcttacgact 6480
ttaacttcag cgagacagaa aagtacaagg atatcgccgg gttctaccgt gaggttgagg 6540
aacagggtta caaggttagc ttcgagagcg cctccaagaa agaggttgac aagttggtcg 6600
aagagggcaa gctctacatg ttccagatct ataacaagga cttctccgac aagagccacg 6660
gaactcctaa cctccatacg atgtacttca agctgctttt cgacgagaac aaccacgggc 6720
agatcagact ttctggtggt gctgaactct tcatgcgtag ggcctcactc aagaaagaag 6780
agttggttgt tcacccggcc aactctccaa tcgctaacaa gaatcctgac aacccgaaaa 6840
agaccaccac gctgtcttac gacgtctaca aggacaaaag gttcagcgag gaccagtacg 6900
agcttcatat cccgatcgct atcaacaagt gcccgaagaa catcttcaag atcaataccg 6960
aggtgagggt gctgctcaag cacgatgata acccttacgt gatcggaatc gatcgtggtg 7020
agagaaacct cctctacatc gttgtggtgg acggaaaggg aaacatcgtc gagcagtaca 7080
gcctgaacga gattatcaac aatttcaacg gcatcaggat caagaccgac taccactcac 7140
tcctcgataa gaaagaaaaa gagcgtttcg aggccaggca gaactggact tctatcgaaa 7200
acatcaaaga gttgaaggcc ggctacatct ctcaggtggt gcataagatc tgcgagctgg 7260
tggaaaagta cgatgctgtg atcgctcttg aggacctcaa ctctgggttc aagaacagta 7320
gagtgaaggt tgagaagcag gtctaccaaa agttcgagaa gatgctcatc gacaagctca 7380
actacatggt ggacaaaaag agcaaccctt gcgctaccgg tggtgctctt aagggatacc 7440
agatcacgaa caagttcgag tccttcaaga gcatgagcac ccagaacggc ttcatcttct 7500
atatccctgc ttggctcacc agcaagatcg atccttctac tggtttcgtg aacctgctca 7560
agaccaagta cacctcgatc gccgacagca agaagttcat ctcgtctttc gacaggatca 7620
tgtacgtgcc ggaagaggat cttttcgagt tcgctctcga ctataagaac ttcagcagga 7680
ccgacgccga ctacattaag aagtggaagc tctactccta cgggaaccgt atcaggatct 7740
tccgaaatcc gaagaaaaac aacgtgttcg actgggaaga agtgtgcctc acctctgcct 7800
acaaagaact gttcaacaag tacggcatca actaccagca gggtgatatc agggctcttt 7860
tgtgcgagca gagcgacaag gcattctaca gctcattcat ggccctcatg tctctcatgc 7920
tccagatgag gaactctatc accggaagga ccgatgtgga cttccttatc tctccggtca 7980
agaactctga cgggatcttc tacgacagcc gtaactatga ggctcaagag aacgctatcc 8040
tgccgaagaa tgctgatgca aacggggctt acaacattgc gagaaaggtt ctctgggcta 8100
tcgggcagtt taagaaagcg gaagatgaga agctcgacaa ggtgaagatc gccatctcca 8160
acaaagagtg gcttgagtac gctcagacct ccgttaagca caagaggcct gctgctacta 8220
agaaagctgg ccaggccaaa aagaagaagt gaggcgcgcc gagctccagg cctcccagct 8280
ttcgtccgta tcatcggttt cgacaacgtt cgtcaagttc aatgcatcag tttcattgcc 8340
cacacaccag aatcctacta agtttgagta ttatggcatt ggaaaagctg ttttcttcta 8400
tcatttgttc tgcttgtaat ttactgtgtt ctttcagttt ttgttttcgg acatcaaaat 8460
gcaaatggat ggataagagt taataaatga tatggtcctt ttgttcattc tcaaattatt 8520
attatctgtt gtttttactt taatgggttg aatttaagta agaaaggaac taacagtgtg 8580
atattaaggt gcaatgttag acatataaaa cagtctttca cctctctttg gttatgtctt 8640
gaattggttt gtttcttcac ttatctgtgt aatcaagttt actatgagtc tatgatcaag 8700
taattatgca atcaagttaa gtacagtata ggcttgagct ccctaggatc aagcttatcg 8760
atgtcgacag gccttaaggg ccagatcttg ggcccggtac ccgatcagat tgtcgtttcc 8820
cgccttcggt ttaaactatc agtgtttgac aggatatatt ggcgggtaaa cctaagagaa 8880
aagagcgttt attagaataa tcggatattt aaaagggcgt gaaaaggttt atccgttcgt 8940
ccatttgtat gtgcatgcca accacagggt tcccctcggg agtgcttggc attccgtgcg 9000
ataatgactt ctgttcaacc acccaaacgt cggaaagcct gacgacggag cagcattcca 9060
aaaagatccc ttggctcgtc tgggtcggct agaaggtcga gtgggctgct gtggcttgat 9120
ccctcaacgc ggtcgcggac gtagcgcagc gccgaaaaat cctcgatcgc aaatccgacg 9180
ctgtcgaaaa gcgtgatctg cttgtcgctc tttcggccga cgtcctggcc agtcatcacg 9240
cgccaaagtt ccgtcacagg atgatctggc gcgagttgct ggatctcgcc ttcaatccgg 9300
gtctgtggcg ggaactccac gaaaatatcc gaacgcagca agatatcgcg gtgcatctcg 9360
gtcttgcctg ggcagtcgcc gccgacgccg ttgatgtgga cgccgaaaag gatctaggtg 9420
aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc gttccactga 9480
gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta 9540
atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa 9600
gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatact 9660
gttcttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca 9720
tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt 9780
accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg 9840
ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag 9900
cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta 9960
agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat 10020
ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg 10080
tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc 10140
ttttgctggc cttttgctca catgttcttt cctgcgttat cccctgattc tgtggataac 10200
cgattaccgc ctttgagtga gctgataccg ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg 10260
agtcagtgag cgaggaagcg gaagagcgcc tgatgcggta ttttctcctt acgcatctgt 10320
gcggtatttc acaccgcata tggtgcactc tcagtacaat ctgctctgat gccgcatagt 10380
taagccagta tacactccgc tatcgctacg tgactgggtc atggctgcgc cccgacaccc 10440
gccaacaccc gctgacgcgc cctgacgggc ttgtctgctc ccggcatccg cttacagaca 10500
agctgtgacc gtctccggga gctgcatgtg tcagaggttt tcaccgtcat caccgaaacg 10560
cgcgaggcag gggtacgtcg aggtcgatcc aacccctccg ctgctatagt gcagtcggct 10620
tctgacgttc agtgcagccg tcgtctgaaa acgacatgtc gcacaagtcc taagttacgc 10680
gacaggctgc cgccctgccc ttttcctggc gttttcttgt cgcgtgtttt agtcgcataa 10740
agtagaatac ttgcgactag aaccggagac attacgccat gaacaagagc gccgccgctg 10800
gcctgctggg ctatgcccgc gtcagcaccg acgaccagga cttgaccaac caacgggccg 10860
aactgcacgc ggccggctgc accaagctgt tttccgagaa gatcaccggc accaggcgcg 10920
accgcccgga gctggccagg atgcttgacc acctacgccc tggcgacgtt gtgacagtga 10980
ccaggctaga ccgcctggcc cgcagcaccc gcgacctact ggacattgcc gagcgcatcc 11040
aggaggccgg cgcgggcctg cgtagcctgg cagagccgtg ggccgacacc accacgccgg 11100
ccggccgcat ggtgttgacc gtgttcgccg gcattgccga gttcgagcgt tccctaatca 11160
tcgaccgcac ccggagcggg cgcgaggccg ccaaggcgcg aggcgtgaag tttggccccc 11220
gccctaccct caccccggca cagatcgcgc acgcccgcga gctgatcgac caggaaggcc 11280
gcaccgtgaa agaggcggct gcactgcttg gcgtgcatcg ctcgaccctg taccgcgcac 11340
ttgagcgcag cgaggaagtg acgcccaccg aggccaggcg gcgcggtgcc ttccgtgagg 11400
acgcattgac cgaggccgac gccctggcgg ccgccgagaa tgaacgccaa gaggaacaag 11460
catgaaaccg caccaggacg gccaggacga accgtttttc attaccgaag agatcgaggc 11520
ggagatgatc gcggccgggt acgtgttcga gccgcccgcg cacgtctcaa ccgtgcggct 11580
gcatgaaatc ctggccggtt tgtctgatgc caagctcgcg gcctggccgg cgagcttggc 11640
cgctgaagaa accgagcgcc gccgtctaaa aaggtgatgt gtatttgagt aaaacagctt 11700
gcgtcatgcg gtcgctgcgt atatgatgcg atgagtaaat aaacaaatac gcaaggggaa 11760
cgcatgaagg ttatcgctgt acttaaccag aaaggcgggt caggcaagac gaccatcgca 11820
acccatctag cccgcgccct gcaactcgcc ggggccgatg ttctgttagt cgattccgat 11880
ccccagggca gtgcccgcga ttgggcggcc gtgcgggaag atcaaccgct aaccgttgtc 11940
ggcatcgacc gcccgacgat tgaccgcgac gtgaaggcca tcggccggcg cgacttcgta 12000
gtgatcgacg gagcgcccca ggcggcggac ttggctgtgt ccgcgatcaa ggcagccgac 12060
ttcgtgctga ttccggtgca gccaagccct tacgacatat gggccaccgc cgacctggtg 12120
gagctggtta agcagcgcat tgaggtcacg gatggaaggc tacaagcggc ctttgtcgtg 12180
tcgcgggcga tcaaaggcac gcgcatcggc ggtgaggttg ccgaggcgct ggccgggtac 12240
gagctgccca ttcttgagtc ccgtatcacg cagcgcgtga gctacccagg cactgccgcc 12300
gccggcacaa ccgttcttga atcagaaccc gagggcgacg ctgcccgcga ggtccaggcg 12360
ctggccgctg aaattaaatc aaaactcatt tgagttaatg aggtaaagag aaaatgagca 12420
aaagcacaaa cacgctaagt gccggccgtc cgagcgcacg cagcagcaag gctgcaacgt 12480
tggccagcct ggcagacacg ccagccatga agcgggtcaa ctttcagttg ccggcggagg 12540
atcacaccaa gctgaagatg tacgcggtac gccaaggcaa gaccattacc gagctgctat 12600
ctgaatacat cgcgcagcta ccagagtaaa tgagcaaatg aataaatgag tagatgaatt 12660
ttagcggcta aaggaggcgg catggaaaat caagaacaac caggcaccga cgccgtggaa 12720
tgccccatgt gtggaggaac gggcggttgg ccaggcgtaa gcggctgggt tgtctgccgg 12780
ccctgcaatg gcactggaac ccccaagccc gaggaatcgg cgtgagcggt cgcaaaccat 12840
ccggcccggt acaaatcggc gcggcgctgg gtgatgacct ggtggagaag ttgaaggcgg 12900
cgcaggccgc ccagcggcaa cgcatcgagg cagaagcacg ccccggtgaa tcgtggcaag 12960
cggccgctga tcgaatccgc aaagaatccc ggcaaccgcc ggcagccggt gcgccgtcga 13020
ttaggaagcc gcccaagggc gacgagcaac cagatttttt cgttccgatg ctctatgacg 13080
tgggcacccg cgatagtcgc agcatcatgg acgtggccgt tttccgtctg tcgaagcgtg 13140
accgacgagc tggcgaggtg atccgctacg agcttccaga cgggcacgta gaggtttccg 13200
cagggccggc cggcatggcg agtgtgtggg attacgacct ggtactgatg gcggtttccc 13260
atctaaccga atccatgaac cgataccggg aagggaaggg agacaagccc ggccgcgtgt 13320
tccgtccaca cgttgcggac gtactcaagt tctgccggcg agccgatggc ggaaagcaga 13380
aagacgacct ggtagaaacc tgcattcggt taaacaccac gcacgttgcc atgcagcgta 13440
cgaagaaggc caagaacggc cgcctggtga cggtatccga gggtgaagcc ttgattagcc 13500
gctacaagat cgtaaagagc gaaaccgggc ggccggagta catcgagatc gagctagctg 13560
attggatgta ccgcgagatc acagaaggca agaacccgga cgtgctgacg gttcaccccg 13620
attacttttt gatcgatccc ggcatcggcc gttttctcta ccgcctggca cgccgcgccg 13680
caggcaaggc agaagccaga tggttgttca agacgatcta cgaacgcagt ggcagcgccg 13740
gagagttcaa gaagttctgt ttcaccgtgc gcaagctgat cgggtcaaat gacctgccgg 13800
agtacgattt gaaggaggag gcggggcagg ctggcccgat cctagtcatg cgctaccgca 13860
acctgatcga gggcgaagca tccgccggtt cctaatgtac ggagcagatg ctagggcaaa 13920
ttgccctagc aggggaaaaa ggtcgaaaag gtctctttcc tgtggatagc acgtacattg 13980
ggaacccaaa gccgtacatt gggaaccgga acccgtacat tgggaaccca aagccgtaca 14040
ttgggaaccg gtcacacatg taagtgactg atataaaaga gaaaaaaggc gatttttccg 14100
cctaaaactc tttaaaactt attaaaactc ttaaaacccg cctggcctgt gcataactgt 14160
ctggccagcg cacagccgaa gagctgcaaa aagcgcctac ccttcggtcg ctgcgctccc 14220
tacgccccgc cgcttcgcgt cggcctatcg cggccgctgg ccgctcaaaa atggctggcc 14280
tacggccagg caatctacca gggcgcggac aagccgcgcc gtcgccactc gaccgccggc 14340
gcccacatca aggcaccggt gggtatgcct gacgatgcgt ggagaccgaa accttgcgct 14400
cgttcgccag ccaggacaga aatgcctcga cttcgctgct gcccaaggtt gccgggtgac 14460
gcacaccgtg gaaacggatg aaggcacgaa cccagtggac ataagcctgt tcggttcgta 14520
agctgtaatg caagtagcgt atgcgctcac gcaactggtc cagaaccttg accgaacgca 14580
gcggtggtaa cggcgcagtg gcggttttca tggcttgtta tgactgtttt tttggggtac 14640
agtctatgcc tcgggcatcc aagcagcaag cgcgttacgc cgtgggtcga tgtttgatgt 14700
tatggagcag caacgatgtt acgcagcagg gcagtcgccc taaaacaaag ttaaacatca 14760
tgagggaagc ggtgatcgcc gaagtatcga ctcaactatc agaggtagtt ggcgtcatcg 14820
agcgccatct cgaaccgacg ttgctggccg tacatttgta cggctccgca gtggatggcg 14880
gcctgaagcc acacagtgat attgatttgc tggttacggt gaccgtaagg cttgatgaaa 14940
caacgcggcg agctttgatc aacgaccttt tggaaacttc ggcttcccct ggagagagcg 15000
agattctccg cgctgtagaa gtcaccattg ttgtgcacga cgacatcatt ccgtggcgtt 15060
atccagctaa gcgcgaactg caatttggag aatggcagcg caatgacatt cttgcaggta 15120
tcttcgagcc agccacgatc gacattgatc tggctatctt gctgacaaaa gcaagagaac 15180
atagcgttgc cttggtaggt ccagcggcgg aggaactctt tgatccggtt cctgaacagg 15240
atctatttga ggcgctaaat gaaaccttaa cgctatggaa ctcgccgccc gactgggctg 15300
gcgatgagcg aaatgtagtg cttacgttgt cccgcatttg gtacagcgca gtaaccggca 15360
aaatcgcgcc gaaggatgtc gctgccgact gggcaatgga gcgcctgccg gcccagtatc 15420
agcccgtcat acttgaagct agacaggctt atcttggaca agaagaagat cgcttggcct 15480
cgcgcgcaga tcagttggaa gaatttgtcc actacgtgaa aggcgagatc accaaggtag 15540
tcggcaaata atgtctaaca attcgttcaa gccgacgccg cttcgcggcg cggcttaact 15600
caagcgttag atgcactaag cacataattg ctcacagcca aactatcagg tcaagtctgc 15660
ttttattatt tttaagcgtg cataataagc cctacacaaa ttgggagata tatcatgaaa 15720
ggctggcttt ttcttgttat cgcaatagtt ggcgaagtaa tcgcaacata gcttgcttgg 15780
tcgttccgcg tgaacgtcgg ctcgattgta cctgcgttca aatactttgc gatcgtgttg 15840
cgcgcctgcc cggtgcgtcg gctgatctca cggatcgact gcttctctcg caacgccatc 15900
cgacggatga tgtttaaaag tcccatgtgg atcactccgt tgccccgtcg ctcaccgtgt 15960
tggggggaag gtgcacatgg ctcagttctc aatggaaatt atctgcctaa ccggctcagt 16020
tctgcgtaga aaccaacatg caagctccac cgggtgcaaa gcggcagcgg cggcaggata 16080
tattcaattg taaatggctt catgtccggg aaatctacat ggatcagcaa tgagtatgat 16140
ggtcaatatg gagaaaaaga aagagtaatt accaattttt tttcaattca aaaatgtaga 16200
tgtccgcagc gttattataa aatgaaagta cattttgata aaacgacaaa ttacgatccg 16260
tcgtatttat aggcgaaagc aataaacaaa ttattctaat tcggaaatct ttatttcgac 16320
gtgtctacat tcacgtccaa atgggggctt agatgagaaa cttcacgatc ggctctagtt 16380
cgagcgatct agtaacatag atgacaccgc gcgcgataat ttatcctagt ttgcgcgcta 16440
tattttgttt tctatcgcgt attaaatgta taattgcggg actctaatca taaaaaccca 16500
tctcataaat aacgtcatgc attacatgtt aattattaca tgcttaacgt aattcaacag 16560
aaattatatg ataatcatcg caagaccggc aacaggattc aatcttaaga aactttattg 16620
ccaaatgttt gaacgatcgg ggaaattcgt ttctatgctt caattctgct ctatagatgt 16680
tcttctagtc ttaactttta gaaggcacaa catttgaaat gttggtaatt tttctgctgg 16740
gtagtgaacc attgtaattt gtgtttgctt atattatccg ttgggtttct ctatgttatc 16800
tgtggggcca tatcccagaa ctggttgagt cggtccaaca cctgggtgcc aatcatgtcg 16860
atggtggggt atggt 16875
<210> 74
<211> 16875
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pZFNnptII_LbCpf1_crRNA_Cyp_Del vector
<400> 74
ccggattgaa agaaatatag tttaaatatt tattgataaa ataacaagtc aggtattata 60
gtccaagcaa aaacataaat ttattgatgc aagtttaaat tcagaaatat ttcaataact 120
gattatatca gctggtacat tgccgtagat gaaagactga gtgcgatatt atgtgtaata 180
cataaattga tgatatagct agcttagctc atcgggtcag aagaactcgt caagaaggcg 240
atagaaggcg atgcgctgcg aatcgggagc ggcgataccg taaagcacga ggaagcggtc 300
agcccattcg ccgccaagct cttcagcaat atcacgggta gccaacgcta tgtcctgata 360
gcggtccgcc acacccagcc ggccacagtc gatgaatcca gaaaagcggc cattttccac 420
catgatattc ggcaagcagg catcgccatg agtcacgacg agatcctcgc cgtcgggcat 480
gcgcgccttg agcctggcga acagttcggc tggcgcgagc ccctgatgct cttcgtccag 540
atcatcctga tcgacaagac cggcttccat ccgagtacgt gctcgctcga tgcgatgttt 600
cgcttggtgg tcgaatgggc aggtagccgg atcaagcgta tgcagccgcc gcattgcatc 660
agccatgatg gatactttct cggcaggagc aaggtgagat gacaggagat cctgccccgg 720
cacttcgccc aatagcagcc agtcccttcc cgcttcagtg acaacgtcga gcacagctgc 780
gcaaggaacg cccgtcgtgg ccagccacga tagccgcgct gcctcgtcct gaagttcatt 840
cagggcaccg gacaggtcgg tcttgacaaa aagaaccggg cgcccctgcg ctgacagccg 900
gaacacggcg gcatcagagc agccgattgt ctgttgtgcc cagtcatagc cgaatagcct 960
ctccacccaa gcggccggag aacctgcgtg caatccatct tgttcaatcc aagctcccat 1020
tttctgtgat tttggatgtg tttttgtatg gattgagagt gaatatgaga ctctaattgg 1080
ataccgaggg gaatttatgg aacgtcagtg gagcattttt gacaagaaat atttgctagc 1140
tgatagtgac cttaggcgac ttttgaacgc gcaataatgg tttctgacgt atgtgcttag 1200
ctcattaaac tccagaaacc cgcggctgag tggctccttc aacgttgcgg ttctgtcagt 1260
tccaaacgta aaacggcttg tcccgcgtca tcggcggggg tcattccgga ctgtggggcc 1320
atatcccaga actggttgag tcggtccaac acctgggtgc caatcatgtc gatggtgggg 1380
tatggccaat tttttttcaa ttcaaaaatg tagatgtccg cagcgttatt ataaaatgaa 1440
agtacatttt gataaaacga caaattacga tccgtcgtat ttataggcga aagcaataaa 1500
caaattattc taattcggaa atctttattt cgacgtgtct acattcacgt ccaaatgggg 1560
gcttagatga gaaacttcac gatcggctct agaggccatg gcggccgcac tagtggatcc 1620
cccgggatgc atgaattcaa gcttatcgat gtcgacaggc cttaagggcc agatcccccg 1680
ggctgcagaa gcctatactg tacttaactt gattgcataa ttacttgatc atagactcat 1740
agtaaacttg attacacaga taagtgaaga aacaaaccaa ttcaagacat aaccaaagag 1800
aggtgaaaga ctgttttata tgtctaacat tgcaccttaa tatcacactg ttagttcctt 1860
tcttacttaa attcaaccca ttaaagtaaa aacaacagat aataataatt tgagaatgaa 1920
caaaaggacc atatcattta ttaactctta tccatccatt tgcattttga tgtccgaaaa 1980
caaaaactga aagaacacag taaattacaa gcagaacaaa tgatagaaga aaacagcttt 2040
tccaatgcca taatactcaa acttagtagg attctggtgt gtgggcaatg aaactgatgc 2100
attgaacttg acgaacgttg tcgaaaccga tgatacggac gaaagctggg aggcctggtc 2160
ccattcgcca tgccgaagca tgttgcccag ccggcgccag cgaggaggct gggaccatgc 2220
cggccgatat actagttggc ttggtgcata tctacactta gtagaaatta atctacactt 2280
agtagaaatt agacgagctt actcgtttcg tcctcacgga ctcatcagta atttggatcc 2340
gctgcacata cataacatat caagatcaga acacacatat acacacacaa atacaatcaa 2400
gtcaacaact ccaaaaagtc cagatctaca tatatacata cgtaaataac aaaatcatgt 2460
aaataatcac aatcatgtaa tccagatcta tgcacatata tatatacaca attaataaaa 2520
aaaatgatat aacagatcta tatctatgta tgtaacaaca caatcagatg agagaagtga 2580
tgttttcaga tctgtataca tacaaacaca aacagatgaa caattgatac gtagatccat 2640
atgtatacgt acaattagct acacgattaa atgaaaaaaa tcaacgattt cggattggta 2700
cacacaaacg caacaatatg aagaaattca tatctgatta gatataaaca taaccacgtg 2760
tagatacaca gtcaaatcaa caaatttata gcttctaaac ggatgagatg aacaagataa 2820
agatattcac ataaggcata cataagataa gcagattaac aaactagcaa taatacatac 2880
ctaattaaaa caaggaataa cagagagaga gagagagaga gagatttacc ttgaaaatga 2940
agaggagaag agaggatttc ttaaaattgg gggtagagaa agaaagatga tgaattgtga 3000
gaaaggagag atagaagggg gggttgtata tataggctgt agaagattat ttttgtgttt 3060
gaggcggtga aggaagaggg gatctgacta tgacacgttt gcggttacgt atttcgatag 3120
gagtctttca acgcttaacg ccgttactct atatgaccgt ttgggccgta acggggccgt 3180
ttgttaacgc tgatgttgat tcttttcttt ctttctttct tcctttttta aagaagcaat 3240
tgtacaatcg ttgctagctg tcaaacggat aattcggata cggatatgcc tatattcata 3300
tccgtaattt ttctgcagga attcgatctg gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg 3360
cagtgagcgc aacgcaatta atgtgagtta gctcactcat taggcacccc aggctttaca 3420
ctttatgctt ccggctcgta tgttgtgtgg aattgtgagc ggataacaat ttcacacagg 3480
aaacagctat gacatgatta cgaattcaaa aattacggat atgaatatag gcatatccgt 3540
atccgaatta tccgtttgac agctagcaac gattgtacaa ttgcttcttt aaaaaaggaa 3600
gaaagaaaga aagaaaagaa tcaacatcag cgttaacaaa cggccccgtt acggcccaaa 3660
cggtcatata gagtaacggc gttaagcgtt gaaagactcc tatcgaaata cgtaaccgca 3720
aacgtgtcat agtcagatcc cctcttcctt caccgcctca aacacaaaaa taatcttcta 3780
cagcctatat atacaacccc cccttctatc tctcctttct cacaattcat catctttctt 3840
tctctacccc caattttaag aaatcctctc ttctcctctt cattttcaag gtaaatctct 3900
ctctctctct ctctctctgt tattccttgt tttaattagg tatgtattat tgctagtttg 3960
ttaatctgct tatcttatgt atgccttatg tgaatatctt tatcttgttc atctcatccg 4020
tttagaagct ataaatttgt tgatttgact gtgtatctac acgtggttat gtttatatct 4080
aatcagatat gaatttcttc atattgttgc gtttgtgtgt accaatccga aatcgttgat 4140
ttttttcatt taatcgtgta gctaattgta cgtatacata tggatctacg tatcaattgt 4200
tcatctgttt gtgtttgtat gtatacagat ctgaaaacat cacttctctc atctgattgt 4260
gttgttacat acatagatat agatctgtta tatcattttt tttattaatt gtgtatatat 4320
atatgtgcat agatctggat tacatgattg tgattattta catgattttg ttatttacgt 4380
atgtatatat gtagatctgg actttttgga gttgttgact tgattgtatt tgtgtgtgta 4440
tatgtgtgtt ctgatcttga tatgttatgt atgtgcagcg aattcggcgc gccatggctc 4500
ctaagaagaa gaggaaggtt agcaagctcg agaagtttac caactgctac agcctctcta 4560
agaccctcag gttcaaggct atccctgtgg gaaagaccca agagaatatc gacaacaaga 4620
ggctcctcgt cgaggatgag aagagagctg aagattacaa gggcgtgaag aagctcctcg 4680
acaggtacta cctcagcttc atcaacgatg tgctccacag catcaagctc aagaacctca 4740
acaactacat cagcctcttc cgtaagaaaa ccaggaccga gaaagagaac aaagagcttg 4800
agaacctcga gatcaacctc cgtaaagaga tcgccaaggc tttcaaggga aacgagggat 4860
acaagagcct cttcaagaag gatattatcg agacaatcct gcctgagttc ctggacgata 4920
aggatgagat cgctctcgtg aacagcttca acggattcac tactgccttc accggattct 4980
tcgacaacag ggaaaacatg ttcagcgaag aggccaagag cacctctatc gctttcagat 5040
gcatcaacga gaacctcacg cgttacatca gcaacatgga catcttcgag aaggtggacg 5100
ccatcttcga taagcacgag gtgcaagaaa tcaaagagaa gatcctcaac agcgactacg 5160
acgtcgagga cttttttgaa ggggagttct tcaacttcgt tctcacccaa gagggcatcg 5220
acgtgtacaa cgctattatc ggaggattcg tgaccgagtc tggggagaag attaagggac 5280
tcaacgagta catcaacctg tacaaccaga aaacgaagca gaagctcccg aagttcaagc 5340
cgctctacaa gcaggttctc tctgatcgtg agagcctctc attttacggt gagggttaca 5400
cctctgacga ggaagtgctt gaggttttcc gtaacaccct caacaagaac agcgagatct 5460
tctcgtccat caagaagttg gagaaacttt tcaagaactt cgacgagtac agcagcgctg 5520
ggatcttcgt taagaacgga cctgctatca gcaccatcag caaggatatt ttcggcgagt 5580
ggaacgtgat cagggacaag tggaatgctg agtacgatga catccacctc aagaagaagg 5640
ctgtcgtcac tgagaagtac gaggatgaca ggcgtaagtc gttcaagaag atcggctctt 5700
tcagcctcga gcagcttcaa gaatacgctg atgctgatct cagcgtggtc gagaagctca 5760
aagagatcat catccagaag gtcgacgaga tctacaaggt gtacgggtcc tctgagaagt 5820
tgttcgatgc tgatttcgtc ctcgagaaga gtctgaagaa gaacgacgct gtcgtcgcga 5880
tcatgaagga tttgctcgac agcgtgaagt ccttcgagaa ctatatcaag gccttcttcg 5940
gagagggcaa agagactaat agggacgagt ctttctacgg ggatttcgtg ctcgcttacg 6000
atatcctcct caaggtggac catatctacg acgccatcag aaactacgtg acccagaagc 6060
cttacagcaa ggacaagttc aagttgtact ttcagaaccc gcagttcatg ggcggatggg 6120
acaaagacaa agagacagat tacagggcca ccatcctcag gtacgggtct aagtactacc 6180
tggccatcat ggacaagaaa tacgccaagt gcctccaaaa gatcgacaag gatgacgtga 6240
acgggaacta tgagaagatc aactacaagc tccttccggg accgaacaag atgcttccta 6300
aggtgttctt cagcaagaaa tggatggcct actacaaccc gtctgaggac atccagaaaa 6360
tctacaagaa cgggaccttc aagaaaggcg acatgttcaa cctcaacgac tgccacaagc 6420
tcatcgattt cttcaaggac agcatctcgc gttacccgaa gtggtctaac gcttacgact 6480
ttaacttcag cgagacagaa aagtacaagg atatcgccgg gttctaccgt gaggttgagg 6540
aacagggtta caaggttagc ttcgagagcg cctccaagaa agaggttgac aagttggtcg 6600
aagagggcaa gctctacatg ttccagatct ataacaagga cttctccgac aagagccacg 6660
gaactcctaa cctccatacg atgtacttca agctgctttt cgacgagaac aaccacgggc 6720
agatcagact ttctggtggt gctgaactct tcatgcgtag ggcctcactc aagaaagaag 6780
agttggttgt tcacccggcc aactctccaa tcgctaacaa gaatcctgac aacccgaaaa 6840
agaccaccac gctgtcttac gacgtctaca aggacaaaag gttcagcgag gaccagtacg 6900
agcttcatat cccgatcgct atcaacaagt gcccgaagaa catcttcaag atcaataccg 6960
aggtgagggt gctgctcaag cacgatgata acccttacgt gatcggaatc gatcgtggtg 7020
agagaaacct cctctacatc gttgtggtgg acggaaaggg aaacatcgtc gagcagtaca 7080
gcctgaacga gattatcaac aatttcaacg gcatcaggat caagaccgac taccactcac 7140
tcctcgataa gaaagaaaaa gagcgtttcg aggccaggca gaactggact tctatcgaaa 7200
acatcaaaga gttgaaggcc ggctacatct ctcaggtggt gcataagatc tgcgagctgg 7260
tggaaaagta cgatgctgtg atcgctcttg aggacctcaa ctctgggttc aagaacagta 7320
gagtgaaggt tgagaagcag gtctaccaaa agttcgagaa gatgctcatc gacaagctca 7380
actacatggt ggacaaaaag agcaaccctt gcgctaccgg tggtgctctt aagggatacc 7440
agatcacgaa caagttcgag tccttcaaga gcatgagcac ccagaacggc ttcatcttct 7500
atatccctgc ttggctcacc agcaagatcg atccttctac tggtttcgtg aacctgctca 7560
agaccaagta cacctcgatc gccgacagca agaagttcat ctcgtctttc gacaggatca 7620
tgtacgtgcc ggaagaggat cttttcgagt tcgctctcga ctataagaac ttcagcagga 7680
ccgacgccga ctacattaag aagtggaagc tctactccta cgggaaccgt atcaggatct 7740
tccgaaatcc gaagaaaaac aacgtgttcg actgggaaga agtgtgcctc acctctgcct 7800
acaaagaact gttcaacaag tacggcatca actaccagca gggtgatatc agggctcttt 7860
tgtgcgagca gagcgacaag gcattctaca gctcattcat ggccctcatg tctctcatgc 7920
tccagatgag gaactctatc accggaagga ccgatgtgga cttccttatc tctccggtca 7980
agaactctga cgggatcttc tacgacagcc gtaactatga ggctcaagag aacgctatcc 8040
tgccgaagaa tgctgatgca aacggggctt acaacattgc gagaaaggtt ctctgggcta 8100
tcgggcagtt taagaaagcg gaagatgaga agctcgacaa ggtgaagatc gccatctcca 8160
acaaagagtg gcttgagtac gctcagacct ccgttaagca caagaggcct gctgctacta 8220
agaaagctgg ccaggccaaa aagaagaagt gaggcgcgcc gagctccagg cctcccagct 8280
ttcgtccgta tcatcggttt cgacaacgtt cgtcaagttc aatgcatcag tttcattgcc 8340
cacacaccag aatcctacta agtttgagta ttatggcatt ggaaaagctg ttttcttcta 8400
tcatttgttc tgcttgtaat ttactgtgtt ctttcagttt ttgttttcgg acatcaaaat 8460
gcaaatggat ggataagagt taataaatga tatggtcctt ttgttcattc tcaaattatt 8520
attatctgtt gtttttactt taatgggttg aatttaagta agaaaggaac taacagtgtg 8580
atattaaggt gcaatgttag acatataaaa cagtctttca cctctctttg gttatgtctt 8640
gaattggttt gtttcttcac ttatctgtgt aatcaagttt actatgagtc tatgatcaag 8700
taattatgca atcaagttaa gtacagtata ggcttgagct ccctaggatc aagcttatcg 8760
atgtcgacag gccttaaggg ccagatcttg ggcccggtac ccgatcagat tgtcgtttcc 8820
cgccttcggt ttaaactatc agtgtttgac aggatatatt ggcgggtaaa cctaagagaa 8880
aagagcgttt attagaataa tcggatattt aaaagggcgt gaaaaggttt atccgttcgt 8940
ccatttgtat gtgcatgcca accacagggt tcccctcggg agtgcttggc attccgtgcg 9000
ataatgactt ctgttcaacc acccaaacgt cggaaagcct gacgacggag cagcattcca 9060
aaaagatccc ttggctcgtc tgggtcggct agaaggtcga gtgggctgct gtggcttgat 9120
ccctcaacgc ggtcgcggac gtagcgcagc gccgaaaaat cctcgatcgc aaatccgacg 9180
ctgtcgaaaa gcgtgatctg cttgtcgctc tttcggccga cgtcctggcc agtcatcacg 9240
cgccaaagtt ccgtcacagg atgatctggc gcgagttgct ggatctcgcc ttcaatccgg 9300
gtctgtggcg ggaactccac gaaaatatcc gaacgcagca agatatcgcg gtgcatctcg 9360
gtcttgcctg ggcagtcgcc gccgacgccg ttgatgtgga cgccgaaaag gatctaggtg 9420
aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc gttccactga 9480
gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta 9540
atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa 9600
gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatact 9660
gttcttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca 9720
tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt 9780
accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg 9840
ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag 9900
cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta 9960
agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat 10020
ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg 10080
tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc 10140
ttttgctggc cttttgctca catgttcttt cctgcgttat cccctgattc tgtggataac 10200
cgattaccgc ctttgagtga gctgataccg ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg 10260
agtcagtgag cgaggaagcg gaagagcgcc tgatgcggta ttttctcctt acgcatctgt 10320
gcggtatttc acaccgcata tggtgcactc tcagtacaat ctgctctgat gccgcatagt 10380
taagccagta tacactccgc tatcgctacg tgactgggtc atggctgcgc cccgacaccc 10440
gccaacaccc gctgacgcgc cctgacgggc ttgtctgctc ccggcatccg cttacagaca 10500
agctgtgacc gtctccggga gctgcatgtg tcagaggttt tcaccgtcat caccgaaacg 10560
cgcgaggcag gggtacgtcg aggtcgatcc aacccctccg ctgctatagt gcagtcggct 10620
tctgacgttc agtgcagccg tcgtctgaaa acgacatgtc gcacaagtcc taagttacgc 10680
gacaggctgc cgccctgccc ttttcctggc gttttcttgt cgcgtgtttt agtcgcataa 10740
agtagaatac ttgcgactag aaccggagac attacgccat gaacaagagc gccgccgctg 10800
gcctgctggg ctatgcccgc gtcagcaccg acgaccagga cttgaccaac caacgggccg 10860
aactgcacgc ggccggctgc accaagctgt tttccgagaa gatcaccggc accaggcgcg 10920
accgcccgga gctggccagg atgcttgacc acctacgccc tggcgacgtt gtgacagtga 10980
ccaggctaga ccgcctggcc cgcagcaccc gcgacctact ggacattgcc gagcgcatcc 11040
aggaggccgg cgcgggcctg cgtagcctgg cagagccgtg ggccgacacc accacgccgg 11100
ccggccgcat ggtgttgacc gtgttcgccg gcattgccga gttcgagcgt tccctaatca 11160
tcgaccgcac ccggagcggg cgcgaggccg ccaaggcgcg aggcgtgaag tttggccccc 11220
gccctaccct caccccggca cagatcgcgc acgcccgcga gctgatcgac caggaaggcc 11280
gcaccgtgaa agaggcggct gcactgcttg gcgtgcatcg ctcgaccctg taccgcgcac 11340
ttgagcgcag cgaggaagtg acgcccaccg aggccaggcg gcgcggtgcc ttccgtgagg 11400
acgcattgac cgaggccgac gccctggcgg ccgccgagaa tgaacgccaa gaggaacaag 11460
catgaaaccg caccaggacg gccaggacga accgtttttc attaccgaag agatcgaggc 11520
ggagatgatc gcggccgggt acgtgttcga gccgcccgcg cacgtctcaa ccgtgcggct 11580
gcatgaaatc ctggccggtt tgtctgatgc caagctcgcg gcctggccgg cgagcttggc 11640
cgctgaagaa accgagcgcc gccgtctaaa aaggtgatgt gtatttgagt aaaacagctt 11700
gcgtcatgcg gtcgctgcgt atatgatgcg atgagtaaat aaacaaatac gcaaggggaa 11760
cgcatgaagg ttatcgctgt acttaaccag aaaggcgggt caggcaagac gaccatcgca 11820
acccatctag cccgcgccct gcaactcgcc ggggccgatg ttctgttagt cgattccgat 11880
ccccagggca gtgcccgcga ttgggcggcc gtgcgggaag atcaaccgct aaccgttgtc 11940
ggcatcgacc gcccgacgat tgaccgcgac gtgaaggcca tcggccggcg cgacttcgta 12000
gtgatcgacg gagcgcccca ggcggcggac ttggctgtgt ccgcgatcaa ggcagccgac 12060
ttcgtgctga ttccggtgca gccaagccct tacgacatat gggccaccgc cgacctggtg 12120
gagctggtta agcagcgcat tgaggtcacg gatggaaggc tacaagcggc ctttgtcgtg 12180
tcgcgggcga tcaaaggcac gcgcatcggc ggtgaggttg ccgaggcgct ggccgggtac 12240
gagctgccca ttcttgagtc ccgtatcacg cagcgcgtga gctacccagg cactgccgcc 12300
gccggcacaa ccgttcttga atcagaaccc gagggcgacg ctgcccgcga ggtccaggcg 12360
ctggccgctg aaattaaatc aaaactcatt tgagttaatg aggtaaagag aaaatgagca 12420
aaagcacaaa cacgctaagt gccggccgtc cgagcgcacg cagcagcaag gctgcaacgt 12480
tggccagcct ggcagacacg ccagccatga agcgggtcaa ctttcagttg ccggcggagg 12540
atcacaccaa gctgaagatg tacgcggtac gccaaggcaa gaccattacc gagctgctat 12600
ctgaatacat cgcgcagcta ccagagtaaa tgagcaaatg aataaatgag tagatgaatt 12660
ttagcggcta aaggaggcgg catggaaaat caagaacaac caggcaccga cgccgtggaa 12720
tgccccatgt gtggaggaac gggcggttgg ccaggcgtaa gcggctgggt tgtctgccgg 12780
ccctgcaatg gcactggaac ccccaagccc gaggaatcgg cgtgagcggt cgcaaaccat 12840
ccggcccggt acaaatcggc gcggcgctgg gtgatgacct ggtggagaag ttgaaggcgg 12900
cgcaggccgc ccagcggcaa cgcatcgagg cagaagcacg ccccggtgaa tcgtggcaag 12960
cggccgctga tcgaatccgc aaagaatccc ggcaaccgcc ggcagccggt gcgccgtcga 13020
ttaggaagcc gcccaagggc gacgagcaac cagatttttt cgttccgatg ctctatgacg 13080
tgggcacccg cgatagtcgc agcatcatgg acgtggccgt tttccgtctg tcgaagcgtg 13140
accgacgagc tggcgaggtg atccgctacg agcttccaga cgggcacgta gaggtttccg 13200
cagggccggc cggcatggcg agtgtgtggg attacgacct ggtactgatg gcggtttccc 13260
atctaaccga atccatgaac cgataccggg aagggaaggg agacaagccc ggccgcgtgt 13320
tccgtccaca cgttgcggac gtactcaagt tctgccggcg agccgatggc ggaaagcaga 13380
aagacgacct ggtagaaacc tgcattcggt taaacaccac gcacgttgcc atgcagcgta 13440
cgaagaaggc caagaacggc cgcctggtga cggtatccga gggtgaagcc ttgattagcc 13500
gctacaagat cgtaaagagc gaaaccgggc ggccggagta catcgagatc gagctagctg 13560
attggatgta ccgcgagatc acagaaggca agaacccgga cgtgctgacg gttcaccccg 13620
attacttttt gatcgatccc ggcatcggcc gttttctcta ccgcctggca cgccgcgccg 13680
caggcaaggc agaagccaga tggttgttca agacgatcta cgaacgcagt ggcagcgccg 13740
gagagttcaa gaagttctgt ttcaccgtgc gcaagctgat cgggtcaaat gacctgccgg 13800
agtacgattt gaaggaggag gcggggcagg ctggcccgat cctagtcatg cgctaccgca 13860
acctgatcga gggcgaagca tccgccggtt cctaatgtac ggagcagatg ctagggcaaa 13920
ttgccctagc aggggaaaaa ggtcgaaaag gtctctttcc tgtggatagc acgtacattg 13980
ggaacccaaa gccgtacatt gggaaccgga acccgtacat tgggaaccca aagccgtaca 14040
ttgggaaccg gtcacacatg taagtgactg atataaaaga gaaaaaaggc gatttttccg 14100
cctaaaactc tttaaaactt attaaaactc ttaaaacccg cctggcctgt gcataactgt 14160
ctggccagcg cacagccgaa gagctgcaaa aagcgcctac ccttcggtcg ctgcgctccc 14220
tacgccccgc cgcttcgcgt cggcctatcg cggccgctgg ccgctcaaaa atggctggcc 14280
tacggccagg caatctacca gggcgcggac aagccgcgcc gtcgccactc gaccgccggc 14340
gcccacatca aggcaccggt gggtatgcct gacgatgcgt ggagaccgaa accttgcgct 14400
cgttcgccag ccaggacaga aatgcctcga cttcgctgct gcccaaggtt gccgggtgac 14460
gcacaccgtg gaaacggatg aaggcacgaa cccagtggac ataagcctgt tcggttcgta 14520
agctgtaatg caagtagcgt atgcgctcac gcaactggtc cagaaccttg accgaacgca 14580
gcggtggtaa cggcgcagtg gcggttttca tggcttgtta tgactgtttt tttggggtac 14640
agtctatgcc tcgggcatcc aagcagcaag cgcgttacgc cgtgggtcga tgtttgatgt 14700
tatggagcag caacgatgtt acgcagcagg gcagtcgccc taaaacaaag ttaaacatca 14760
tgagggaagc ggtgatcgcc gaagtatcga ctcaactatc agaggtagtt ggcgtcatcg 14820
agcgccatct cgaaccgacg ttgctggccg tacatttgta cggctccgca gtggatggcg 14880
gcctgaagcc acacagtgat attgatttgc tggttacggt gaccgtaagg cttgatgaaa 14940
caacgcggcg agctttgatc aacgaccttt tggaaacttc ggcttcccct ggagagagcg 15000
agattctccg cgctgtagaa gtcaccattg ttgtgcacga cgacatcatt ccgtggcgtt 15060
atccagctaa gcgcgaactg caatttggag aatggcagcg caatgacatt cttgcaggta 15120
tcttcgagcc agccacgatc gacattgatc tggctatctt gctgacaaaa gcaagagaac 15180
atagcgttgc cttggtaggt ccagcggcgg aggaactctt tgatccggtt cctgaacagg 15240
atctatttga ggcgctaaat gaaaccttaa cgctatggaa ctcgccgccc gactgggctg 15300
gcgatgagcg aaatgtagtg cttacgttgt cccgcatttg gtacagcgca gtaaccggca 15360
aaatcgcgcc gaaggatgtc gctgccgact gggcaatgga gcgcctgccg gcccagtatc 15420
agcccgtcat acttgaagct agacaggctt atcttggaca agaagaagat cgcttggcct 15480
cgcgcgcaga tcagttggaa gaatttgtcc actacgtgaa aggcgagatc accaaggtag 15540
tcggcaaata atgtctaaca attcgttcaa gccgacgccg cttcgcggcg cggcttaact 15600
caagcgttag atgcactaag cacataattg ctcacagcca aactatcagg tcaagtctgc 15660
ttttattatt tttaagcgtg cataataagc cctacacaaa ttgggagata tatcatgaaa 15720
ggctggcttt ttcttgttat cgcaatagtt ggcgaagtaa tcgcaacata gcttgcttgg 15780
tcgttccgcg tgaacgtcgg ctcgattgta cctgcgttca aatactttgc gatcgtgttg 15840
cgcgcctgcc cggtgcgtcg gctgatctca cggatcgact gcttctctcg caacgccatc 15900
cgacggatga tgtttaaaag tcccatgtgg atcactccgt tgccccgtcg ctcaccgtgt 15960
tggggggaag gtgcacatgg ctcagttctc aatggaaatt atctgcctaa ccggctcagt 16020
tctgcgtaga aaccaacatg caagctccac cgggtgcaaa gcggcagcgg cggcaggata 16080
tattcaattg taaatggctt catgtccggg aaatctacat ggatcagcaa tgagtatgat 16140
ggtcaatatg gagaaaaaga aagagtaatt accaattttt tttcaattca aaaatgtaga 16200
tgtccgcagc gttattataa aatgaaagta cattttgata aaacgacaaa ttacgatccg 16260
tcgtatttat aggcgaaagc aataaacaaa ttattctaat tcggaaatct ttatttcgac 16320
gtgtctacat tcacgtccaa atgggggctt agatgagaaa cttcacgatc ggctctagtt 16380
cgagcgatct agtaacatag atgacaccgc gcgcgataat ttatcctagt ttgcgcgcta 16440
tattttgttt tctatcgcgt attaaatgta taattgcggg actctaatca taaaaaccca 16500
tctcataaat aacgtcatgc attacatgtt aattattaca tgcttaacgt aattcaacag 16560
aaattatatg ataatcatcg caagaccggc aacaggattc aatcttaaga aactttattg 16620
ccaaatgttt gaacgatcgg ggaaattcgt ttctatgctt caattctgct ctatagatgt 16680
tcttctagtc ttaactttta gaaggcacaa catttgaaat gttggtaatt tttctgctgg 16740
gtagtgaacc attgtaattt gtgtttgctt atattatccg ttgggtttct ctatgttatc 16800
tgtggggcca tatcccagaa ctggttgagt cggtccaaca cctgggtgcc aatcatgtcg 16860
atggtggggt atggt 16875
<210> 75
<211> 4120
<212> DNA
<213> Beta vulgaris
<400> 75
gtatatcgtt gccacatgtg cgttgaattt ttccttttcc tatcctttcc actccatatt 60
ctcctcaaaa gtgtgtaaaa atccgacaca cgagtagaat gggattgaag tgggtcaaga 120
tctgaaacca atgggtcaat gccacaaaat aaggtaaggt ttctcgcagt agcaaaaaaa 180
taaagttaag ttgagagaaa aattatgaat agttgtttct cgtgaagagt tgtatacaaa 240
aaaagtctaa tttgatacat tttcttttac atttataaag gattgaccaa tcatccaaat 300
taccaaatat ttaggatata aatctttcag attacaaccc atatatgata cactaaattt 360
tacatgaggc aatggaggat ttgcatgaat atcgaggaga gaaaaaatta gttacaaaac 420
ttgcataatt tatccaaacc aaatcaagtc aagaaacaac gaacaatatt atcattagta 480
ctataagtat atattatagg cttagagcaa agccctaact accacactgc acacaaatga 540
taactagtaa gagaggaaaa tacaaattta agattcaaca tagcaaatta ttcatgattc 600
atgattcatg attcatgatt catgattcac gaacatcaag aatggtatag ctgataaagg 660
acaatttaaa cataagtgta aagctcgcac atcatcaatt atattcgcat actactagac 720
caatctttac ttagtacatg tgttagtaca tgtgttactt catatcagat gtattgattg 780
ttgccaatga catatcatgt tcacttaatc ttagggccat ttaattataa catggagaat 840
aatacaactt aaaattatgt ggtggctatc atctcatttt ctagataatt aaacctttat 900
tttgtataca tatatattgt ctttacatag caaaacaata ttgaaggtat aacaaccttt 960
cccttttctt ttactacatg tttatgttag agtttttcga tttacgattg tggtaaatta 1020
attgtaattg atcggttgtc ttgtagtcaa gaaatgacgt atgaatcaat ttagggcatg 1080
ttctcttcgg cataaaacag ctgaactgaa ttgaactgaa ctgaaatgaa tagtgatatg 1140
tgagagtaaa agtattgtca agagctgaac tgagctgaac tgaacggatc tgaactgaac 1200
tgatctaatc tgaactaatc tgaactgaac tgaactgaat tgaactgaaa ataagctagg 1260
gaaaacagac ccttactact attatataac ctcgtttaaa tattaggaaa ttaaaaaaat 1320
aattatattt ctttatactt tattaaccta ttgaggtttt tatattgact cccaaatact 1380
attttataga tcatgccatg ttaatgagca aactactttc tcacatcttt ataggagaaa 1440
aagtagatca ctcactagca tatcatgacc agcgaaacca accaacgcta atagttttat 1500
tgcttccatt agagataaga gttaactaat aataccatct ttgtgaaatt ttgatggatt 1560
ttggaacttt agcaatatat ttactgtgtg cactttttgc taccaaaatt ttataccaat 1620
ggctcaagtc ctacttatac acaacataca aactccctcc cggcccacca aggtggccct 1680
tatttggaaa cctccttcaa ctagggccac ttccccaccg cgatttcgcc tcattttgtg 1740
aaaaatatgg gcctttagtc tacataaggc ttggtaatgt ggatgccata accactaatg 1800
atccagaaat catacgtgag atcttagttc gacaagatga tgtatttgcg tctcgtccac 1860
ataccttagc cgcaacccac ttggcttaca atagtggtga tgtggccttg gctccaatgg 1920
gaccaaaatg gaaaagaatg agaaggatat gcatggagca cttgctcaca actagacgac 1980
ttgaactatt tgtgagtcat agggctgatg aggcacgaca tttggtccaa gacgtattaa 2040
ctcgttccca caaagataaa gttgttaatt tgagggaagt gttaggtgca ttttctatga 2100
ataacgtgac tagaatgttg ctagggaagc aatactttgg ggccgggacg gcgggcccac 2160
aagaggctct agagtttatg catataacac atgagttgtt ttggttacta ggcttgattt 2220
acttgggtga ttatttgcct ttttggaggt gggttgatcc atatggatgt gaaaagaaaa 2280
tgagggaagt tgaaaaaagg gtagatgatt tccatcgcaa aattatagag gaacatagga 2340
aggagaagaa aaggaaagaa gaaatgggag tgaatgaggg tgaaatggat tttgtagata 2400
ttttgttggc tttgcctggt gaaaatggaa atgagcatat ggatgatgca gatattaaag 2460
ctctaattca ggtaattcat gtataatttg aatgtgatcg atacaaagtt tgatagaaaa 2520
catatttgca taaatatatg gttgccctac tagacccaat aaaatacata attattgcct 2580
tactagttga aagttgaaac aacctagcta ccattttgtt gtgattatca ttagccaacc 2640
aaaattattt cttgcatcca tatattaatg ttgagatcag agtcggcata tttacaatta 2700
cttgtaacat tttaagcaaa caaattaaaa tattttttgg caagtccatt ttattgaata 2760
atacctatat cttaaaatga attcttggtc atgtacactt gcctttcaag gtaccaatat 2820
ttgaccatat gtaattacta ttaacaaatt tgataaaatc taataatatg taaatataca 2880
ttcacgcaca tattagaaac aaagatcaca aatgataatg caaaataact tatttgaact 2940
aatgttgtga agttaaattt ggaacaaaag gtatatttgt attgccgaat tttaatttat 3000
aaattactta taacaacaac tcaatatgta aaactgttaa gatggagtgt ggatagaatg 3060
agatgagtat acttttacta gttaccactc gaaaatgcat ttcctccttt gtttatagtt 3120
gttctaactt ctattatcat aaataatttt ttggacttat ttcaatgtat atttacaacg 3180
ctaattgttt aattttttaa aaatacataa tgtaaacaag gatttcatgg tcaattatac 3240
acattataaa tattatctta aaaaacttat taatgctcaa ttagtatcca taatatagga 3300
tatgatagca gcagcaacag acacatcagc tgtaaccaac gaatgggcca tggcagaagt 3360
aataaaacac ccacgtgtcc tccacaagat ccaacaagag cttaacacaa tagtaggacc 3420
caatcgaatg gtaacagaat cagatcttcc ccaccttaac tacctacgtt gtgtcgtacg 3480
tgaaacgttc cgaatgcatc cagcaggacc ctttttaatc ccacatgaat cactacgcca 3540
tacaacaatc aacggctatg atatcccatc tgggacacgt gtcttcatca acacacatgg 3600
gttaggacgt aaccttaaag tgtgggacaa catagaggat ttttaccctg aaagacattg 3660
gccgttggat ggaagtagag ttgagattag ccatggatct gattttaaaa tattaccatt 3720
tagtgctggg aagagaagat gtcctggggc cccacttggg gtggtgtttg tgttgatggg 3780
attggctaca ctttttcatg catttgattg gttaccacct gatggaatga aggcagaaga 3840
aattgatact aaggaagttt atgggatgac tatgcctaaa gctcaacctt taatggcttt 3900
ggctaaacct aggcttgctc atttatatct ttgatacatg ttcatattgt ggtgcactta 3960
taagcacaat agacaaatac aagtttgtat cgactctaac atgttgttta gtattagtat 4020
actgcaactc tacaagtatg taatttctat aaactataaa cacaagtcat aacgcatttt 4080
gttttgaaaa aaaagaggtt acattgtctt acaccataaa 4120
<210> 76
<211> 4220
<212> DNA
<213> Beta vulgaris
<400> 76
gtatatcgtt gccacatgtg cgttgaattt ttccttttcc tatcctttcc actccatatt 60
ctcctcaaaa gtgtgtaaaa atccgacaca cgagtagaat gggattgaag tgggtcaaga 120
tctgaaacca atgggtcaat gccacaaaat aaggtaaggt ttctcgcagt agcaaaaaaa 180
taaagttaag ttgagagaaa aattatgaat agttgtttct cgtgaagagt tgtatacaaa 240
aaaagtctaa tttgatacat tttcttttac atttataaag gattgaccaa tcatccaaat 300
taccaaatat ttaggatata aatctttcag attacaaccc atatatgata cactaaattt 360
tacatgaggc aatggaggat ttgcatgaat atcgaggaga gaaaaaatta gttacaaaac 420
ttgcataatt tatccaaacc aaatcaagtc aagaaacaac gaacaatatt atcattagta 480
ctataagtat atattatagg cttagagcaa agccctaact accacactgc acacaaatga 540
taactagtaa gagaggaaaa tacaaattta agattcaaca tagcaaatta ttcatgattc 600
atgattcatg attcatgatt catgattcac gaacatcaag aatggtatag ctgataaagg 660
acaatttaaa cataagtgta aagctcgcac atcatcaatt atattcgcat actactagac 720
caatctttac ttagtacatg tgttagtaca tgtgttactt catatcagat gtattgattg 780
ttgccaatga catatcatgt tcacttaatc ttagggccat ttaattataa catggagaat 840
aatacaactt aaaattatgt ggtggctatc atctcatttt ctagataatt aaacctttat 900
tttgtataca tatatattgt ctttacatag caaaacaata ttgaaggtat aacaaccttt 960
cccttttctt ttactacatg tttatgttag agtttttcga tttacgattg tggtaaatta 1020
attgtaattg atcggttgtc ttgtagtcaa gaaatgacgt atgaatcaat ttagggcatg 1080
ttctcttcgg cataaaacag ctgaactgaa ttgaactgaa ctgaaatgaa tagtgatatg 1140
tgagagtaaa agtattgtca agagctgaac tgagctgaac tgaacggatc tgaactgaac 1200
tgatctaatc tgaactaatc tgaactgaac tgaactgaat tgaactgaaa ataagctagg 1260
gaaaacagac ccttactact attatataac ctcgtttaaa tattaggaaa ttaaaaaaat 1320
aattatattt ctttatactt tattaaccta ttatacaata gtggtgatgt ggccttggct 1380
ccaatgggac caaaatggaa aagaatgaga aggatatgca tggagcactt gctcacaact 1440
agacgacttg aactatttgt gagtcatagg gctgatgagg cacgacattt ggtccaagac 1500
gtattaactc gttcccacaa agataaagtt gttaatttga gggaagtgtt aggtgcattt 1560
tctatgaata acgtgactag aatgttgcta gggaagcaat actttggggc cgggacggcg 1620
ggcccacaag aggctctaga gtttatgcat ataacacatg agttgttttg gttactaggc 1680
ttgatttact tgggtgatta tttgcctttt tggaggtggg ttgatccata tggatgtgaa 1740
aagaaaatga gggaagttga aaaaagggta gatgatttcc atcgcaaaat tatagaggaa 1800
cataggaagg agaagaaaag gaaagaagaa atgggagtga atgagggtga aatggatttt 1860
gtagatattt tgttggcttt gcctggtgaa aatggaaatg agcatatgga tgatgcagat 1920
attaaagctc taattcaggt aattcatgta taatttgaat gtgatacaaa gtttgataga 1980
aaacatattt gcataaatac atggttaccc tactagaccc aataaaatac ataattattg 2040
ccttgctagt tgaaagttga aacaacctag ctaccatttt gttgtgatta tcattagcca 2100
accaaaacta tttcttgcat ccatatatta atgttgagag tcgccatatt tacaattact 2160
tgtaacattt tgagcaaaca aattaaaata ttttttggca agtccatttt attgaatgat 2220
acctatatct taaaatgaat ccttggttat gtacacttgc ctttcaaggt accaatattt 2280
gaccatatgt aattactatt aacaaatttg ataaaatcta ataatatgta aatatacgtt 2340
cacgcacata ttagaaacaa agatcacaaa tgataatgca aaataactta tttgaactaa 2400
tgttgtgaag ttaaatttgg aacaaaaggt atatttgtat tgccgaattt taatttataa 2460
attacttata acaacaactc aatatgtaaa actgttaaga tggagtgtgg atagaatgag 2520
atgagtatac ttttactagt taccactcga aattgcattt cctcctttgt ttatagttgt 2580
tctaacttct attatcataa ataatttttg gacttatttc aatgtatatt tacaacgtta 2640
attgtttaat tttttaaaaa tacataatgt aaacaaggat ttcatggtca attatacaca 2700
ttatagatat tatcttaaaa aacttactaa tgctcaatta gtgtccataa tataggatat 2760
gatagcagca gcaacagaca catcagctgt aaccaacgaa tgggccatgg cagaagtaat 2820
aaaacaccca cgtgtcctcc acaagatcca acaagagctt aacacaatag taggacccaa 2880
tcgaatggta acagaatcag atcttcccca ccttaactac ctacgttgtg tcgtacgcga 2940
aacgtttcgg atgcatccag caggaccctt tttaatccca catgaatcac tacgccatac 3000
aacaatcaac ggctatgata tcccatctgg gacacgtgtc ttcatcaaca cacatgggtt 3060
aggacgtaac cttaaagtgt gggacaacat agaggatttt taccctgaaa gacattggcc 3120
gttggatgga agtagagttg agattagcca tggatctgat tttaaaatat taccatttag 3180
tgctgggaag agaagatgtc ctggggcccc acttggggtg gtgtttgtgt tgatgggatt 3240
ggctacactt tttcatgcat ttgattggtt accacctgat ggaatgaagg cagaagaaat 3300
tgatactaag gaagtttatg ggatgactat gcctaaagct caacctttaa tggctttggc 3360
taaacctagg cttgctcctc atttatatct ttgatacatg ttcatattgt ggtgcactta 3420
taagcacact agctcaaata gacaaataca agcttgtatt gactctaaca tgttatttaa 3480
tattagcata ctgcaactct acaactacaa gtatgtaatc tctataaatt ataaacataa 3540
gtcataacgc atcttgtttt gaaaaaaaaa gctacacttt cttacaccat aaactgttcc 3600
gttactaaat tcttcttggc ttattttaga attaattttt caattttcct atttacttat 3660
aacacaagat aagaaaatcg actaacaata tttcacaaca ttatatcttg atagttcgtt 3720
gaaattaata attttcaata atttcaaaac gcaaaaagct tctttgttcg gataaattca 3780
cgtcattttc aataaaatcg caaaatcttc ccttgccatc aaggaacaaa tttttcacat 3840
caaaactctt cttccaaaaa gtatacttct ccattgatta tgtaaaagag tttgcatgtt 3900
ctaatccatt agtatgtatt tttcggataa gaagttgtat tacaagctta aataaagata 3960
taaacttagt taaatatcga ccaatccaca atatgtatct tcatatgtgt ccatcagcgc 4020
ctaaccttga gatgtagatc atctaaagca cattaacatg gcgtactcct cctgttcaaa 4080
tcagggttgt ttgaaaccaa acttctccaa aatacttcct cagtaatgaa gagaaaaact 4140
cacattctga aaaacatcaa catcatggtt ctatggtcta gtggttatga cactggactc 4200
tgaatccagt aacccgagtt 4220
<210> 77
<211> 4211
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BvCYP703A2_gst including artificial InDel marker allele
<400> 77
gtatatcgtt gccacatgtg cgttgaattt ttccttttcc tatcctttcc actccatatt 60
ctcctcaaaa gtgtgtaaaa atccgacaca cgagtagaat gggattgaag tgggtcaaga 120
tctgaaacca atgggtcaat gccacaaaat aaggtaaggt ttctcgcagt agcaaaaaaa 180
taaagttaag ttgagagaaa aattatgaat agttgtttct cgtgaagagt tgtatacaaa 240
aaaagtctaa tttgatacat tttcttttac atttataaag gattgaccaa tcatccaaat 300
taccaaatat ttaggatata aatctttcag attacaaccc atatatgata cactaaattt 360
tacatgaggc aatggaggat ttgcatgaat atcgaggaga gaaaaaatta gttacaaaac 420
ttgcataatt tatccaaacc aaatcaagtc aagaaacaac gaacaatatt atcattagta 480
ctataagtat atattatagg cttagagcaa agccctaact accacactgc acacaaatga 540
taactagtaa gagaggaaaa tacaaattta agattcaaca tagcaaatta ttcatgattc 600
atgattcatg attcatgatt catgattcac gaacatcaag aatggtatag ctgataaagg 660
acaatttaaa cataagtgta aagctcgcac atcatcaatt atattcgcat actactagac 720
caatctttac ttagtacatg tgttagtaca tgtgttactt catatcagat gtattgattg 780
ttgccaatga catatcatgt tcacttaatc ttagggccat ttaattataa catggagaat 840
aatacaactt aaaattatgt ggtggctatc atctcatttt ctagataatt aaacctttat 900
tttgtataca tatatattgt ctttacatag caaaacaata ttgaaggtat aacaaccttt 960
cccttttctt ttactacatg tttatgttag agtttttcga tttacgattg tggtaaatta 1020
attgtaattg atcggttgtc ttgtagtcaa gaaatgacgt atgaatcaat ttagggcatg 1080
ttctcttcgg cataaaacag ctgaactgaa ttgaactgaa ctgaaatgaa tagtgatatg 1140
tgagagtaaa agtattgtca agagctgaac tgagctgaac tgaacggatc tgaactgaac 1200
tgatctaatc tgaactaatc tgaactgaac tgaactgaat tgaactgaaa ataagctagg 1260
gaaaacagac ccttactact attatataac ctcgtttaaa tattaggaaa ttaaaaaaat 1320
aattatattt ctttatactt tattaaccta ttatacaata gtggtgatgt ggccttggct 1380
ccaatgggac caaaatggaa aagaatgaga aggatatgca tggagcactt gctcacaact 1440
agacgacttg aacttcatag ggctgatgag gcacgacatt tggtccaaga cgtattaact 1500
cgttcccaca aagataaagt tgttaatttg agggaagtgt taggtgcatt ttctatgaat 1560
aacgtgacta gaatgttgct agggaagcaa tactttgggg ccgggacggc gggcccacaa 1620
gaggctctag agtttatgca tataacacat gagttgtttt ggttactagg cttgatttac 1680
ttgggtgatt atttgccttt ttggaggtgg gttgatccat atggatgtga aaagaaaatg 1740
agggaagttg aaaaaagggt agatgatttc catcgcaaaa ttatagagga acataggaag 1800
gagaagaaaa ggaaagaaga aatgggagtg aatgagggtg aaatggattt tgtagatatt 1860
ttgttggctt tgcctggtga aaatggaaat gagcatatgg atgatgcaga tattaaagct 1920
ctaattcagg taattcatgt ataatttgaa tgtgatacaa agtttgatag aaaacatatt 1980
tgcataaata catggttacc ctactagacc caataaaata cataattatt gccttgctag 2040
ttgaaagttg aaacaaccta gctaccattt tgttgtgatt atcattagcc aaccaaaact 2100
atttcttgca tccatatatt aatgttgaga gtcgccatat ttacaattac ttgtaacatt 2160
ttgagcaaac aaattaaaat attttttggc aagtccattt tattgaatga tacctatatc 2220
ttaaaatgaa tccttggtta tgtacacttg cctttcaagg taccaatatt tgaccatatg 2280
taattactat taacaaattt gataaaatct aataatatgt aaatatacgt tcacgcacat 2340
attagaaaca aagatcacaa atgataatgc aaaataactt atttgaacta atgttgtgaa 2400
gttaaatttg gaacaaaagg tatatttgta ttgccgaatt ttaatttata aattacttat 2460
aacaacaact caatatgtaa aactgttaag atggagtgtg gatagaatga gatgagtata 2520
cttttactag ttaccactcg aaattgcatt tcctcctttg tttatagttg ttctaacttc 2580
tattatcata aataattttt ggacttattt caatgtatat ttacaacgtt aattgtttaa 2640
ttttttaaaa atacataatg taaacaagga tttcatggtc aattatacac attatagata 2700
ttatcttaaa aaacttacta atgctcaatt agtgtccata atataggata tgatagcagc 2760
agcaacagac acatcagctg taaccaacga atgggccatg gcagaagtaa taaaacaccc 2820
acgtgtcctc cacaagatcc aacaagagct taacacaata gtaggaccca atcgaatggt 2880
aacagaatca gatcttcccc accttaacta cctacgttgt gtcgtacgcg aaacgtttcg 2940
gatgcatcca gcaggaccct ttttaatccc acatgaatca ctacgccata caacaatcaa 3000
cggctatgat atcccatctg ggacacgtgt cttcatcaac acacatgggt taggacgtaa 3060
ccttaaagtg tgggacaaca tagaggattt ttaccctgaa agacattggc cgttggatgg 3120
aagtagagtt gagattagcc atggatctga ttttaaaata ttaccattta gtgctgggaa 3180
gagaagatgt cctggggccc cacttggggt ggtgtttgtg ttgatgggat tggctacact 3240
ttttcatgca tttgattggt taccacctga tggaatgaag gcagaagaaa ttgatactaa 3300
ggaagtttat gggatgacta tgcctaaagc tcaaccttta atggctttgg ctaaacctag 3360
gcttgctcct catttatatc tttgatacat gttcatattg tggtgcactt ataagcacac 3420
tagctcaaat agacaaatac aagcttgtat tgactctaac atgttattta atattagcat 3480
actgcaactc tacaactaca agtatgtaat ctctataaat tataaacata agtcataacg 3540
catcttgttt tgaaaaaaaa agctacactt tcttacacca taaactgttc cgttactaaa 3600
ttcttcttgg cttattttag aattaatttt tcaattttcc tatttactta taacacaaga 3660
taagaaaatc gactaacaat atttcacaac attatatctt gatagttcgt tgaaattaat 3720
aattttcaat aatttcaaaa cgcaaaaagc ttctttgttc ggataaattc acgtcatttt 3780
caataaaatc gcaaaatctt cccttgccat caaggaacaa atttttcaca tcaaaactct 3840
tcttccaaaa agtatacttc tccattgatt atgtaaaaga gtttgcatgt tctaatccat 3900
tagtatgtat ttttcggata agaagttgta ttacaagctt aaataaagat ataaacttag 3960
ttaaatatcg accaatccac aatatgtatc ttcatatgtg tccatcagcg cctaaccttg 4020
agatgtagat catctaaagc acattaacat ggcgtactcc tcctgttcaa atcagggttg 4080
tttgaaacca aacttctcca aaatacttcc tcagtaatga agagaaaaac tcacattctg 4140
aaaaacatca acatcatggt tctatggtct agtggttatg acactggact ctgaatccag 4200
taacccgagt t 4211
<210> 78
<211> 3252
<212> DNA
<213> Beta vulgaris
<400> 78
atggcggcta ccttcacaaa cccaacattt tccccttcct caactccatt aaccaaaacc 60
ctaaaatccc aatcttccat ctcttcaacc ctcccctttt ccacccctcc caaaacccca 120
actccactct ttcaccgtcc cctccaaatc tcatcctccc aatcccacaa atcatccgcc 180
attaaaacac aaactcaagc accttcttct ccagctattg aagattcatc tttcgtttct 240
cgatttggcc ctgatgaacc cagaaaaggg tccgatgtcc tcgttgaagc tcttgagcgt 300
gaaggtgtta ccaatgtgtt tgcttaccct ggtggtgcat ctatggaaat ccaccaagct 360
ctcacacgct ctaaaaccat ccgcaatgtc ctccctcgcc atgaacaagg cggggttttc 420
gccgccgagg gatatgctag agctactgga aaggttggtg tctgcattgc gacttctggt 480
cctggtgcta ccaacctcgt atcaggtctt gctgacgctc tccttgattc tgtccctctt 540
gttgccatca ctggccaagt tccacgccgt atgattggca ctgatgcttt tcaggagact 600
ccaattgttg aggtgacaag gtctattact aagcataatt atttagtttt ggatgtagag 660
gatattccta gaattgttaa ggaagccttt tttttagcta attctggtag gcctggacct 720
gttttgattg atcttcctaa agatattcag cagcaattgg ttgttcctga ttgggatagg 780
ccttttaagt tgggtgggta tatgtctagg ctgccaaagt ccaagttttc gacgaatgag 840
gttggacttc ttgagcagat tgtgaggttg atgagtgagt cgaagaagcc tgtcttgtat 900
gtgggaggtg ggtgtttgaa ttctagtgag gagttgagga gatttgttga gttgacaggg 960
attccggtgg ctagtacttt gatggggttg gggtcttacc cttgtaatga tgaactgtct 1020
cttcatatgt tggggatgca cgggactgtt tatgccaatt atgcggtgga taaggcggat 1080
ttgttgcttg ctttcggggt taggtttgat gatcgtgtga ccgggaagct cgaggcgttt 1140
gctagccgtg ctaagattgt gcatattgat attgactctg ctgagattgg gaagaacaag 1200
cagccccatg tgtccatttg tgctgatgtt aaattggcat tgcggggtat gaataagatt 1260
ctggagtcta gaatagggaa gctgaatttg gatttctcca agtggagaga agaattaggt 1320
gagcagaaga aggaattccc actgagtttt aagacatttg gggatgcaat tcctccacaa 1380
tatgccattc aggtgcttga tgagttgacc aatggtaatg ctattataag tactggtgtt 1440
gggcagcacc aaatgtgggc tgcgcagcat tacaagtaca gaaaccctcg ccaatggctg 1500
acctctggtg ggttgggggc tatggggttt gggctaccag ccgccattgg agctgcagtt 1560
gctcgaccag atgcagtggt tgtcgatatt gatggggatg gcagttttat tatgaatgtt 1620
caagagttgg ctacaattag ggtggaaaat ctcccagtta agataatgct gctaaacaat 1680
caacatttag gtatggttgt ccaatgggaa gataggttct ataaagctaa ccgggcacat 1740
acataccttg gaaacccttc caaatctgct gatatcttcc ctgatatgct caaattcgct 1800
gaggcatgtg atattccttc tgcccgtgtt agcaacgtgg ctgatttgag ggccgccatt 1860
caaacaatgt tggatactcc agggccgtac ctgctcgatg tgattgtacc gcatcaagag 1920
catgtgttgc ctatgattcc aagtggtgcc ggtttcaagg ataccattac agagggtgat 1980
ggaagaacct cttattgatc ggtttaatga cggttggaac catttaaaga gggtaagcta 2040
tattactgta tgtatattag tatgttcctg gataatttag aagcttttgt ctgttgtctt 2100
ttgcagttta tgaagttagt ttgctgttgt catgttactt gttactttaa aaagcttttt 2160
gtagtttttg agcaactagt atggaatgct cttcctgtat tgcttggaaa attcacaaaa 2220
gtggtttttc ggctatggat gttgtgttgc atcatgcata tatagcttga tatactagtt 2280
ggcttggtgc atctttaaca tatactaatg agactacgac agcaattgcc aattagttgg 2340
cttgacataa ttcttagtct gccactagaa atcttgcttc ttttttttcc ctcatttgtt 2400
gaaagtccct gttgcgacct gacatgggag cattggagat tgtttagcaa tagcagttgc 2460
agttaggtga ctacagtcat cttccaaata tgaatactct ctggagggga ggaggtttta 2520
caaaatatga gtttttaaca catgagaaac ttatattaaa caaggttgag tcaccccata 2580
tttttcaaag ttgacttttg tctgatttgg gtgactatgc ctgttgtatg caataaactc 2640
gatgtacata agacttgtat aatccaatct aacccttcct ggctgattat gaaaccgagt 2700
cggctaattt gttgcttgat cttcatgtgt gagcctgatg ccaggtgacc actagaggag 2760
tacctttcat tgagatatcg attcggttaa ttggttcctc atatgggtct caaaactgaa 2820
tttttctcag gctctcttct aaccagttgt tgaattttat gaaacttcag tccagttaaa 2880
actttgatcc cggatcagaa tttctctgag ttgttcttcc gcctctcagt tccactgttc 2940
cagtgttctt ggtcctcaac ctgtactctg agctatttct gcaaacacct gaagttcctg 3000
ctgcccttgg acaaatacag aatgcagcat tagcatttat ttaagacaag atgaatactt 3060
gctcccctgt tagttatgct aattctgcat tagtattctt taattttaat tagatactgc 3120
aatccgtgaa ctctgcagtt tcttgatctc tctctgtttc aatttctcct atcttatcgc 3180
ccatttcttt aggctttcgt tatctatcgt ctaattcaag agtaggtaac taggtacggg 3240
ataaaacttt tt 3252
<210> 79
<211> 3252
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BvALS_SU_res: mutated BvALS W569L
<400> 79
atggcggcta ccttcacaaa cccaacattt tccccttcct caactccatt aaccaaaacc 60
ctaaaatccc aatcttccat ctcttcaacc ctcccctttt ccacccctcc caaaacccca 120
actccactct ttcaccgtcc cctccaaatc tcatcctccc aatcccacaa atcatccgcc 180
attaaaacac aaactcaagc accttcttct ccagctattg aagattcatc tttcgtttct 240
cgatttggcc ctgatgaacc cagaaaaggg tccgatgtcc tcgttgaagc tcttgagcgt 300
gaaggtgtta ccaatgtgtt tgcttaccct ggtggtgcat ctatggaaat ccaccaagct 360
ctcacacgct ctaaaaccat ccgcaatgtc ctccctcgcc atgaacaagg cggggttttc 420
gccgccgagg gatatgctag agctactgga aaggttggtg tctgcattgc gacttctggt 480
cctggtgcta ccaacctcgt atcaggtctt gctgacgctc tccttgattc tgtccctctt 540
gttgccatca ctggccaagt tccacgccgt atgattggca ctgatgcttt tcaggagact 600
ccaattgttg aggtgacaag gtctattact aagcataatt atttagtttt ggatgtagag 660
gatattccta gaattgttaa ggaagccttt tttttagcta attctggtag gcctggacct 720
gttttgattg atcttcctaa agatattcag cagcaattgg ttgttcctga ttgggatagg 780
ccttttaagt tgggtgggta tatgtctagg ctgccaaagt ccaagttttc gacgaatgag 840
gttggacttc ttgagcagat tgtgaggttg atgagtgagt cgaagaagcc tgtcttgtat 900
gtgggaggtg ggtgtttgaa ttctagtgag gagttgagga gatttgttga gttgacaggg 960
attccggtgg ctagtacttt gatggggttg gggtcttacc cttgtaatga tgaactgtct 1020
cttcatatgt tggggatgca cgggactgtt tatgccaatt atgcggtgga taaggcggat 1080
ttgttgcttg ctttcggggt taggtttgat gatcgtgtga ccgggaagct cgaggcgttt 1140
gctagccgtg ctaagattgt gcatattgat attgactctg ctgagattgg gaagaacaag 1200
cagccccatg tgtccatttg tgctgatgtt aaattggcat tgcggggtat gaataagatt 1260
ctggagtcta gaatagggaa gctgaatttg gatttctcca agtggagaga agaattaggt 1320
gagcagaaga aggaattccc actgagtttt aagacatttg gggatgcaat tcctccacaa 1380
tatgccattc aggtgcttga tgagttgacc aatggtaatg ctattataag tactggtgtt 1440
gggcagcacc aaatgtgggc tgcgcagcat tacaagtaca gaaaccctcg ccaatggctg 1500
acctctggtg ggttgggggc tatggggttt gggctaccag ccgccattgg agctgcagtt 1560
gctcgaccag atgcagtggt tgtcgatatt gatggggatg gcagttttat tatgaatgtt 1620
caagagttgg ctacaattag ggtggaaaat ctcccagtta agataatgct gctaaacaat 1680
caacatttag gtatggttgt ccaattggaa gataggttct ataaagctaa ccgggcacat 1740
acataccttg gaaacccttc caaatctgct gatatcttcc ctgatatgct caaattcgct 1800
gaggcatgtg atattccttc tgcccgtgtt agcaacgtgg ctgatttgag ggccgccatt 1860
caaacaatgt tggatactcc agggccgtac ctgctcgatg tgattgtacc gcatcaagag 1920
catgtgttgc ctatgattcc aagtggtgcc ggtttcaagg ataccattac agagggtgat 1980
ggaagaacct cttattgatc ggtttaatga cggttggaac catttaaaga gggtaagcta 2040
tattactgta tgtatattag tatgttcctg gataatttag aagcttttgt ctgttgtctt 2100
ttgcagttta tgaagttagt ttgctgttgt catgttactt gttactttaa aaagcttttt 2160
gtagtttttg agcaactagt atggaatgct cttcctgtat tgcttggaaa attcacaaaa 2220
gtggtttttc ggctatggat gttgtgttgc atcatgcata tatagcttga tatactagtt 2280
ggcttggtgc atctttaaca tatactaatg agactacgac agcaattgcc aattagttgg 2340
cttgacataa ttcttagtct gccactagaa atcttgcttc ttttttttcc ctcatttgtt 2400
gaaagtccct gttgcgacct gacatgggag cattggagat tgtttagcaa tagcagttgc 2460
agttaggtga ctacagtcat cttccaaata tgaatactct ctggagggga ggaggtttta 2520
caaaatatga gtttttaaca catgagaaac ttatattaaa caaggttgag tcaccccata 2580
tttttcaaag ttgacttttg tctgatttgg gtgactatgc ctgttgtatg caataaactc 2640
gatgtacata agacttgtat aatccaatct aacccttcct ggctgattat gaaaccgagt 2700
cggctaattt gttgcttgat cttcatgtgt gagcctgatg ccaggtgacc actagaggag 2760
tacctttcat tgagatatcg attcggttaa ttggttcctc atatgggtct caaaactgaa 2820
tttttctcag gctctcttct aaccagttgt tgaattttat gaaacttcag tccagttaaa 2880
actttgatcc cggatcagaa tttctctgag ttgttcttcc gcctctcagt tccactgttc 2940
cagtgttctt ggtcctcaac ctgtactctg agctatttct gcaaacacct gaagttcctg 3000
ctgcccttgg acaaatacag aatgcagcat tagcatttat ttaagacaag atgaatactt 3060
gctcccctgt tagttatgct aattctgcat tagtattctt taattttaat tagatactgc 3120
aatccgtgaa ctctgcagtt tcttgatctc tctctgtttc aatttctcct atcttatcgc 3180
ccatttcttt aggctttcgt tatctatcgt ctaattcaag agtaggtaac taggtacggg 3240
ataaaacttt tt 3252
<210> 80
<211> 3261
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BvALS_SU_res including artifical InDel marker allele
<400> 80
atggcggcta ccttcacaaa cccaacattt tccccttcct caactccatt aaccaaaacc 60
ctaaaatccc aatcttccat ctcttcaacc ctcccctttt ccacccctcc caaaacccca 120
actccactct ttcaccgtcc cctccaaatc tcatcctccc aatcccacaa atcatccgcc 180
attaaaacac aaactcaagc accttcttct ccagctattg aagattcatc tttcgtttct 240
cgatttggcc ctgatgaacc cagaaaaggg tccgatgtcc tcgttgaagc tcttgagcgt 300
gaaggtgtta ccaatgtgtt tgcttaccct ggtggtgcat ctatggaaat ccaccaagct 360
ctcacacgct ctaaaaccat ccgcaatgtc ctccctcgcc atgaacaagg cggggttttc 420
gccgccgagg gatatgctag agctactgga aaggttggtg tctgcattgc gacttctggt 480
cctggtgcta ccaacctcgt atcaggtctt gctgacgctc tccttgattc tgtccctctt 540
gttgccatca ctggccaagt tccacgccgt atgattggca ctgatgcttt tcaggagact 600
ccaattgttg aggtgacaag gtctattact aagcataatt atttagtttt ggatgtagag 660
gatattccta gaattgttaa ggaagccttt tttttagcta attctggtag gcctggacct 720
gttttgattg atcttcctaa agatattcag cagcaattgg ttgttcctga ttgggatagg 780
ccttttaagt tgggtgggta tatgtctagg ctgccaaagt ccaagttttc gacgaatgag 840
gttggacttc ttgagcagat tgtgaggttg atgagtgagt cgaagaagcc tgtcttgtat 900
gtgggaggtg ggtgtttgaa ttctagtgag gagttgagga gatttgttga gttgacaggg 960
attccggtgg ctagtacttt gatggggttg gggtcttacc cttgtaatga tgaactgtct 1020
cttcatatgt tggggatgca cgggactgtt tatgccaatt atgcggtgga taaggcggat 1080
ttgttgcttg ctttcggggt taggtttgat gatcgtgtga ccgggaagct cgaggcgttt 1140
gctagccgtg ctaagattgt gcatattgat attgactctg ctgagattgg gaagaacaag 1200
cagccccatg tgtccatttg tgctgatgtt aaattggcat tgcggggtat gaataagatt 1260
ctggagtcta gaatagggaa gctgaatttg gatttctcca agtggagaga agaattaggt 1320
gagcagaaga aggaattccc actgagtttt aagacatttg gggatgcaat tcctccacaa 1380
tatgccattc aggtgcttga tgagttgacc aatggtaatg ctattataag tactggtgtt 1440
gggcagcacc aaatgtgggc tgcgcagcat tacaagtaca gaaaccctcg ccaatggctg 1500
acctctggtg ggttgggggc tatggggttt gggctaccag ccgccattgg agctgcagtt 1560
gctcgaccag atgcagtggt tgtcgatatt gatggggatg gcagttttat tatgaatgtt 1620
caagagttgg ctacaattag ggtggaaaat ctcccagtta agataatgct gctaaacaat 1680
caacatttag gtatggttgt ccaattggaa gataggttct ataaagctaa ccgggcacat 1740
acataccttg gaaacccttc caaatctgct gatatcttcc ctgatatgct caaattcgct 1800
gaggcatgtg atattccttc tgcccgtgtt agcaacgtgg ctgatttgag ggccgccatt 1860
caaacaatgt tggatactcc agggccgtac ctgctcgatg tgattgtacc gcatcaagag 1920
catgtgttgc ctatgattcc aagtggtgcc ggtttcaagg ataccattac agagggtgat 1980
ggaagaacct cttattgatc ggtttaatga cggttggaac catttaaaga gggtaagcta 2040
tattactgta tgtatattag tatgttcctg gataatttag aagcttttgt ctgttgtctt 2100
ttgcagttta tgaagttagt ttgctgttgt catgttactt gttactttaa aaagcttttt 2160
gtagtttttg agcaactagt atggaatgct cttcctgtat tgcttggaaa attcacaaaa 2220
gtggtttttc ggctatggat gttgtgttgc atcatgcata tatagcttga tatactagtt 2280
ggctgcacta tcgtggtgca tctttaacat atactaatga gactacgaca gcaattgcca 2340
attagttggc ttgacataat tcttagtctg ccactagaaa tcttgcttct tttttttccc 2400
tcatttgttg aaagtccctg ttgcgacctg acatgggagc attggagatt gtttagcaat 2460
agcagttgca gttaggtgac tacagtcatc ttccaaatat gaatactctc tggaggggag 2520
gaggttttac aaaatatgag tttttaacac atgagaaact tatattaaac aaggttgagt 2580
caccccatat ttttcaaagt tgacttttgt ctgatttggg tgactatgcc tgttgtatgc 2640
aataaactcg atgtacataa gacttgtata atccaatcta acccttcctg gctgattatg 2700
aaaccgagtc ggctaatttg ttgcttgatc ttcatgtgtg agcctgatgc caggtgacca 2760
ctagaggagt acctttcatt gagatatcga ttcggttaat tggttcctca tatgggtctc 2820
aaaactgaat ttttctcagg ctctcttcta accagttgtt gaattttatg aaacttcagt 2880
ccagttaaaa ctttgatccc ggatcagaat ttctctgagt tgttcttccg cctctcagtt 2940
ccactgttcc agtgttcttg gtcctcaacc tgtactctga gctatttctg caaacacctg 3000
aagttcctgc tgcccttgga caaatacaga atgcagcatt agcatttatt taagacaaga 3060
tgaatacttg ctcccctgtt agttatgcta attctgcatt agtattcttt aattttaatt 3120
agatactgca atccgtgaac tctgcagttt cttgatctct ctctgtttca atttctccta 3180
tcttatcgcc catttcttta ggctttcgtt atctatcgtc taattcaaga gtaggtaact 3240
aggtacggga taaaactttt t 3261
- 人工标志物等位基因
- 一种特异性靶向阿尔兹海默症标志物的非生物纳米人工抗体的制备方法与用途