一种南方糙海参活性多肽的制备方法

技术领域

本发明涉及海产品加工技术领域，尤其涉及一种南方糙海参活性多肽的制备方法。

背景技术

糙海参属棘皮动物门，海参纲，海参科，因经煮熟去皮后粗糙而得名，在我国主要分布于南海海域。糙海参属于光参类，其营养价值偏低，价格低，产量高，主要作为日常食用，在食用加工过程中会产生大量副产物例如海参肠等，不仅造成资源浪费，而且还会带来环境污染。近年来，海参加工副产物的高值化利用已经成为一个重要的开发方向。

海参多肽是采用蛋白酶对海参进行酶解得到的小分子肽化合物，不仅具有抗氧化、提高免疫力和抗疲劳等生理活性，而且活性高、吸收率高、吸收速度快，保健价值很高。由于海参肠的蛋白质含量极高，为了提高海参肠的回收利用价值，可以以海参肠为原料制备活性海参多肽。现有的海参多肽制备工艺，制得的海参多肽活性较低，不利于更好地发挥保健功能，因此，需要进一步开发能够提高海参多肽活性的制备方法。

发明内容

本发明目的就是为了弥补已有技术的缺陷，提供一种南方糙海参活性多肽的制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种南方糙海参活性多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)从新鲜的南方糙海参内脏中挑取海参肠清洗干净，然后加入适量的水，低温匀浆，得到匀浆液；

(2)将匀浆液加热变性处理，得到变性液；

(3)将所述变性液反复冻融处理，得到预处理液；

(4)向所述预处理液中加入蛋白酶和N-糖苷酶进行酶解处理，然后高温灭酶，得到酶解液；

(5)将所述酶解液离心后，取上清液，经过膜分离、浓缩、干燥，得到南方糙海参活性多肽。

优选地，步骤(1)中，向清洗干净的海参肠中加入相当于海参肠质量0.5～1倍的水，在匀浆机中于0～5℃下匀浆，得到匀浆液。

优选地，步骤(2)中，加热变性处理的温度为80～90℃，时间为20～30min。

优选地，步骤(3)中，冻融处理的步骤包括：先在-20℃～-10℃下冷冻，然后在15～25℃下融解，按照上述冷冻融解工序重复2～4次，即可。

优选地，步骤(4)中，蛋白酶的用量为预处理液质量的0.1～0.2％，N-糖苷酶的用量为预处理液质量的0.02～0.03％。

优选地，步骤(4)中，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶中的一种或多种，所述N-糖苷酶为肽-N-糖苷酶F。

优选地，步骤(4)中，酶解处理的条件为：温度为40～55℃，pH为4～7，酶解时间为2～4h。

优选地，步骤(4)中，高温灭酶的条件为85～95℃、15～30min。

优选地，步骤(5)中，膜分离的方法为：采用截留分子量为5000～20000Da的超滤膜进行超滤处理，收集滤液，即可。

优选地，步骤(5)中，超滤处理的条件为：温度为25～30℃、压力为0.05～0.08MPa。

本发明的优点是：

本发明公开了一种南方糙海参活性多肽的制备方法，将海参肠依次进行清洗、匀浆、加热变性、反复冻融处理，然后加入蛋白酶和N-糖苷酶进行酶解处理，将得到的酶解液经过膜分离、浓缩、干燥，得到南方糙海参活性多肽。本发明以南方糙海参的海参肠为原料提取活性多肽，可以对海参加工副产物海参肠进行高值化利用，其原料来源丰富，成本低。海参中含大量糖蛋白，其酶解不够彻底，生物活性未得到充分的利用，而本发明通过加热变性和反复冻融处理相结合的方法，可以充分破坏海参肠中糖蛋白的立体构型使其形成线性结构，再结合酶解过程中N-糖苷酶的酶解处理，可以充分去除糖蛋白中的糖链，释放蛋白组分，从而被蛋白酶酶解形成多肽，有利于提高多肽的活性，提高多肽的保健价值。通过该方法制备海参活性多肽，加工工艺简单、操作方便，且制得的活性多肽具有抗疲劳更佳的抗疲劳效果，适合作为保健产品的原料。

具体实施方式

实施例1

一种南方糙海参活性多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)从新鲜的南方糙海参内脏中挑取海参肠清洗干净，然后向清洗干净的海参肠中加入相当于海参肠质量0.5倍的水，在匀浆机中于0℃下匀浆，得到匀浆液；

(2)将匀浆液在80℃下加热变性处理20min，得到变性液；

(3)将所述变性液在-20℃下冷冻，然后在15℃下融解，然后再在-20℃下冷冻，然后在15℃下融解，得到预处理液；

(4)向所述预处理液中加入木瓜蛋白酶和肽-N-糖苷酶F，在温度为40℃、pH为4的条件下酶解处理2h，然后在85℃下高温灭酶15min，得到酶解液，其中木瓜蛋白酶的用量为预处理液质量的0.2％，肽-N-糖苷酶F的用量为预处理液质量的0.03％；

(5)将所述酶解液离心后，取上清液，采用截留分子量为20000Da的超滤膜在温度为25℃、压力为0.05MPa的条件下进行超滤处理，收集滤液，浓缩、干燥，得到南方糙海参活性多肽。

实施例2

一种南方糙海参活性多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)从新鲜的南方糙海参内脏中挑取海参肠清洗干净，然后向清洗干净的海参肠中加入相当于海参肠质量1倍的水，在匀浆机中于5℃下匀浆，得到匀浆液；

(2)将匀浆液在90℃下加热变性处理30min，得到变性液；

(3)将所述变性液先在-10℃下冷冻，然后在25℃下融解，再在-10℃下冷冻，然后在25℃下融解，再在-10℃下冷冻，然后在25℃下融解，再在-10℃下冷冻，然后在25℃下融解，得到预处理液；

(4)向所述预处理液中加入碱性蛋白酶和肽-N-糖苷酶F，在温度为55℃、pH为7的条件下酶解处理4h，然后在95℃下高温灭酶30min，得到酶解液，其中碱性蛋白酶的用量为预处理液质量的0.1％，肽-N-糖苷酶F的用量为预处理液质量的0.02％；

(5)将所述酶解液离心后，取上清液，采用截留分子量为5000Da的超滤膜在温度为30℃、压力为0.08MPa的条件下进行超滤处理，收集滤液，浓缩、干燥，得到南方糙海参活性多肽。

实施例3

一种南方糙海参活性多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)从新鲜的南方糙海参内脏中挑取海参肠清洗干净，然后向清洗干净的海参肠中加入相当于海参肠质量0.8倍的水，在匀浆机中于4℃下匀浆，得到匀浆液；

(2)将匀浆液在85℃下加热变性处理25min，得到变性液；

(3)将所述变性液先在-15℃下冷冻，然后在20℃下融解，再在-15℃下冷冻，然后在20℃下融解，再在-15℃下冷冻，然后在20℃下融解，得到预处理液；

(4)向所述预处理液中加入中性蛋白酶和肽-N-糖苷酶F，在温度为50℃、pH为6的条件下酶解处理3h，然后在90℃下高温灭酶20min，得到酶解液，其中中性蛋白酶的用量为预处理液质量的0.15％，肽-N-糖苷酶F的用量为预处理液质量的0.025％；

(5)将所述酶解液离心后，取上清液，采用截留分子量为10000Da的超滤膜在温度为28℃、压力为0.07MPa的条件下进行超滤处理，收集滤液，浓缩、干燥，得到南方糙海参活性多肽。

对比例1

对比例1与实施例3的区别仅为：酶解处理过程中不加入肽-N-糖苷酶F，具体如下：

一种南方糙海参活性多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)从新鲜的南方糙海参内脏中挑取海参肠清洗干净，然后向清洗干净的海参肠中加入相当于海参肠质量0.8倍的水，在匀浆机中于4℃下匀浆，得到匀浆液；

(2)将匀浆液在85℃下加热变性处理25min，得到变性液；

(3)将所述变性液先在-15℃下冷冻，然后在20℃下融解，再在-15℃下冷冻，然后在20℃下融解，再在-15℃下冷冻，然后在20℃下融解，得到预处理液；

(4)向所述预处理液中加入中性蛋白酶，在温度为50℃、pH为6的条件下酶解处理3h，然后在90℃下高温灭酶20min，得到酶解液，其中中性蛋白酶的用量为预处理液质量的0.15％；

(5)将所述酶解液离心后，取上清液，采用截留分子量为10000Da的超滤膜在温度为28℃、压力为0.07MPa的条件下进行超滤处理，收集滤液，浓缩、干燥，得到南方糙海参活性多肽。

对比例2

对比例2与实施例3的区别仅为：不进行冻融处理，具体如下：

一种南方糙海参活性多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)从新鲜的南方糙海参内脏中挑取海参肠清洗干净，然后向清洗干净的海参肠中加入相当于海参肠质量0.8倍的水，在匀浆机中于4℃下匀浆，得到匀浆液；

(2)将匀浆液在85℃下加热变性处理25min，得到变性液；

(3)向所述变性液中加入中性蛋白酶和肽-N-糖苷酶F，在温度为50℃、pH为6的条件下酶解处理3h，然后在90℃下高温灭酶20min，得到酶解液，其中中性蛋白酶的用量为变性液质量的0.15％，肽-N-糖苷酶F的用量为变性液质量的0.025％；

(4)将所述酶解液离心后，取上清液，采用截留分子量为10000Da的超滤膜在温度为28℃、压力为0.07MPa的条件下进行超滤处理，收集滤液，浓缩、干燥，得到南方糙海参活性多肽。

对比例3

对比例3为常规的海参多肽提取方法，具体如下：

一种南方糙海参活性多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)从新鲜的南方糙海参内脏中挑取海参肠清洗干净，然后向清洗干净的海参肠中加入相当于海参肠质量0.8倍的水，在匀浆机中于4℃下匀浆，得到匀浆液；

(2)将匀浆液在85℃下加热变性处理25min，得到变性液；

(3)向所述变性液中加入中性蛋白酶，在温度为50℃、pH为6的条件下酶解处理3h，然后在90℃下高温灭酶20min，得到酶解液，其中中性蛋白酶的用量为变性液质量的0.15％；

(4)将所述酶解液离心后，取上清液，采用截留分子量为10000Da的超滤膜在温度为28℃、压力为0.07MPa的条件下进行超滤处理，收集滤液，浓缩、干燥，得到南方糙海参活性多肽。

试验例

采用小鼠负重游泳法对活性多肽的抗疲劳效果进行评测：

将100只小鼠随机分为4组，分别饲喂实施例3和对比例1-3制得的活性多肽，每日饲喂量为0.25g/kg。其余按照常规方法饲养。连续饲喂30d后进行负重试验。在小鼠尾根部负荷相当于小鼠体重5％的铅块，让小鼠在水温为25℃的泳池中负重游泳，记录开始游泳至小鼠死亡的时间，计算平均值。试验结果如表1所示：

表1

从表1可以看出，本发明的方法制备的海参活性多肽，能够显著提高抗疲劳能力，具有很高的应用潜力。