EGCG晶型I的制备方法

本申请是申请日为2018年11月21日、申请号为201811387339.6、发明名称为《EGCG晶型I及其制备方法》的发明专利的分案申请。

技术领域

本发明属于药物化学技术领域，具体的说，涉及EGCG晶型I的制备方法。

背景技术

EGCG(Epigallocatechin gallate)即表没食子儿茶素没食子酸酯，是绿茶茶多酚的主要组成成分。EGCG是茶叶特有的儿茶素，其量最高，占茶多酚制品的40％～50％。它是2-连苯酚基苯并吡喃与没食子酸形成的酯，具有酚类抗氧化剂的通用性，同时因其结构中有6个邻位酚羟基而有优于其他儿茶素的许多性质。

EGCG是典型的黄烷醇类化合物，因此具有黄烷醇的光谱特征。没食子儿茶素类除在240-280nm有吸收峰外，因其具有内酯结构而在350nm出峰，且通常有两个以上的峰位，EGCG的分子量为458，在室温和水中较稳定，pH值越低，稳定性越好。

大量的研究表明：EGCG具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗动脉硬化、抗血栓形成、抗血管增生、抗炎以及抗肿瘤作用，能清除自由基，对肾脏和肝脏的保护，降压、降脂、降血糖、抑制黑色素合成等功效。EGCG对多种疾病如癌症、心脑血管疾病、糖尿病、炎症等有预防保护作用。但是目前现有的制备方法中EGCG晶型I的收率较低。

发明内容

本发明提供了一种EGCG晶型I的制备方法，本发明提供的制备方法能够提高EGCG晶型I的收率。

为实现上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明提供了一种EGCG晶型I的制备方法，包括以下步骤：

绿茶经水提获得绿茶提取液；

将所述绿茶提取液采用聚酰胺作层析介质，洗脱剂为丙酮，洗脱时间为100min，得到洗脱液；所述洗脱剂的pH值为3.5，洗脱剂的流速为1.0mL/min；

将所述洗脱液经冷冻干燥重结晶，即得EGCG晶型Ⅰ；

所述EGCG晶型I使用Cu-Kα辐射，λ＝1.5405A，其以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图中在5.197、8.481、10.357、12.121、15.601、17.04、19.501、20.74、21.481、22.443、23.778、24.481、25.919、26.438、28.162、28.899、29.501、30.839、31.401、35.481、36.901、38.739±0.2具有X-射线粉末衍射峰。

在本发明中，所述EGCG晶型I的X-射线粉末衍射2θ位置24.481处衍射峰强度为100％。

在本发明中，所述EGCG晶型I的DSC分析熔融温度为83.12±0.25℃。

本发明的有益效果：

本发明提供的EGCG晶型Ⅰ纯度高，杂质含量很少，溶解速度快，易溶于乙醇，可溶于水中。本发明涉及的制备方法操作简单，可稳定获得目标晶型，且收率高。

附图说明

图1是EGCG晶型Ⅰ的X-射线粉末衍射图；

图2是EGCG晶型Ⅰ的DSC图；

图3是EGCG晶型Ⅰ的红外光谱图；

图4是EGCG晶型Ⅰ的显微镜图；

图5是1mg/mL的EGCG标准品(a)与EGCG晶型Ⅰ(b)的HPLC对照图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，下面将对本发明的优选实施例进行详细的说明，以方便技术人员理解。

实施例1

取绿茶，加入适量蒸馏水，加热60～80℃提取，得绿茶提取液；绿茶提取液采用聚酰胺作层析介质，洗脱剂为丙酮，洗脱剂pH 2.5，洗脱剂流速1.0mL/min，洗脱时间100min，将洗脱液经冷冻干燥重结晶，即得EGCG晶体。收率93％。

实施例2

取绿茶，加入适量蒸馏水，加热60～80℃提取，得绿茶提取液；绿茶提取液采用聚酰胺作层析介质，洗脱剂为丙酮，洗脱剂pH 3.5，洗脱剂流速1.0mL/min，洗脱时间100min，将洗脱液经冷冻干燥重结晶，即得EGCG晶体。收率97％。

实施例3

取绿茶，加入适量蒸馏水，加热60～80℃提取，得绿茶提取液；绿茶提取液采用聚酰胺作层析介质，洗脱剂为丙酮，洗脱剂pH 4.5，洗脱剂流速1.0mL/min，洗脱时间100min，将洗脱液经冷冻干燥重结晶，即得EGCG晶体。收率91％。

实验分析

1、在聚酰胺层析分离试验中，洗脱剂pH 3.5、流速1.0mL/min时效果最佳，EGCG流出集中在85-150min之间，100min时EGCG洗脱达最大值，此时可获高纯度的EGCG单体，收率97％。

2、对实施例中得到的白色结晶粉末(EGCG晶体)进行x-射线衍射分析

仪器：日本理学仪器，D/Max-2200X射线粉末衍射仪；扫描范围(°2Theta)：5°～60°；扫描步长(°2Theta)：0.02；扫描速度(°/min)：10

取实施例2得到的白色结晶粉末进行分析，结果见图1和表1。

表1

其差示扫描热分析图(DSC图)如图2所示；其红外光谱图(IR)如图3所示；其显微镜图如图4所示。

实施例1、3的分析结果与实施例2的分析结果无明显差异。

3、EGCG的含量测定

色谱条件：以甲醇和水为流动相；流速为每分钟1mL；柱温40℃；检测波长280nm。

对照品溶液的制备，取EGCG对照品1mg，精密称定，使其溶于1mL的UP水中，使对照品溶液浓度为1mg/mL。

供试品溶液的制备，取EGCG供试品1mg，精密称定，使其溶于1mL的UP水中，使供试品溶液浓度为1mg/mL。

测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10微升，注入液相色谱仪，测定，即得。

杂质测定：取本品适量(相当于对照品1mg)，置于EP管中，加1mLUP水，作为供试品溶液。精密量取供试品1mg，溶于1mLUP水中，作为对照品溶液。照[含量测定]项下的色谱条件，取对照溶液10微升，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10％，再精密量取供试品溶液与对照溶液各10微升，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2.5倍。供试品溶液色谱中，其他成分峰面积的和不得大于对照溶液主峰峰面积的2倍。

如图5所示，本发明实施例2得到的白色结晶粉末(EGCG晶型Ⅰ)中EGCG的含量高达97％以上。

实施例1、3的分析结果与实施例2的分析结果无明显差异。

本发明提供的制备方法操作简单，可稳定获得目标晶型。EGCG晶型Ⅰ纯度高，杂质含量很少，溶解速度快，易溶于乙醇，可溶于水中。

最后说明的是，以上优选实施例仅用于说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。