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显示减少的伤口诱导的表面变色的植物

文献发布时间:2023-06-19 19:28:50


显示减少的伤口诱导的表面变色的植物

本申请是CN201780013778.8的分案申请。

技术领域

本发明涉及显示减少的伤口诱导的表面变色的植物。本发明还涉及经修饰的基因同源物,其导致植物中减少的伤口诱导的表面变色,本发明还涉及其序列和这些序列用于鉴定经修饰的基因同源物的存在的用途。本发明还涉及此类植物的种子和后代以及用于获得此类植物的繁殖材料。

背景技术

近年来,消费者便利性以及新产品的开发促进了市场上可获得的加工蔬菜和水果的增加的选择性。即食产品(即切割、洗涤和包装形式)可以包括单独加工的或在混合的组合物中的莴苣(Lactuca sativa)和其他叶类蔬菜,例如菊苣(Cichorium intybus)和苦苣(Cichorium endivia)。在蔬菜的收获、加工和储存过程中最重要且经常遇到的问题之一是在植物或其部分的伤口表面上通过粉红色变色可见的伤口诱导的表面变色的发展,所述变色在长期储存后逐渐变成棕色。其他农作物如马铃薯(Solanum tuberosum),洋葱(Alliumcepa),朝鲜蓟(artichocke)(Cynara cardunculus var.Scolymus),水稻(Oryza sativa),玉米(Zea mays),桃(Prunus persica),茄子(Solanum melongena),芹菜和根芹菜(Apiumgraveolens),苹果(Malus domestica),香蕉(Musa acuminate),大豆(Glycine max),梨(Pyrus x bretschneideri),小麦(Triticum aestivum),萝卜(Raphanus sativus),甘蓝和花椰菜(Brassica oleracea)等也可能受到植物或其部分(例如叶、植物的整个头部、果实、花序、种子、花球(curd)、茎、块茎、球茎和根等)上可见的伤口诱导的表面变色。

伤口诱导的表面变色或伤口诱导的变色是由伤口处和伤口周围的强烈伤口反应引起的,并且导致收获和任选加工的产品快速变质。消费者认为蔬菜和果实的变色不具吸引力并且会损害产品质量,从而降低产品的适销性和/或导致收获和任选加工的产品的浪费。

伤口反应是植物或其部分通过生成新的绝缘屏障来愈合伤口并保护自身免受病原体侵害的一种手段。该反应是植物对物理损伤诸如切割或挫伤的复杂生物反应,并且暗示了许多蛋白的活性。局部反应主要旨在闭合伤口表面,这是由伤口表面处或紧接其后的细胞的局部死亡所致。除了这些可见效果之外,还已知诱导其他反应如增加的呼吸或乙烯产生。

在生物化学水平,研究表明,创伤可以导致苯丙烷途径(PP途径)的诱导,这尤其是多酚和对植物重要的其他化合物的产生所需要的。

PP途径的第一步是通过苯丙氨酸氨裂解酶(PAL)将氨基酸苯丙氨酸转化为肉桂酸。通过诱导至少一种同种型的基因表达,PAL在受伤后得到增强。该反应导致多酚的形成,该多酚被多酚氧化酶(PPO)氧化。PPO存在于质体中并在受伤时释放并活化。多酚的氧化导致形成高反应性的醌,其可与氨基酸或蛋白反应,这导致粉红色、棕色或黑色的变色。

为了减少蔬菜诸如莴苣中的伤口诱导的表面变色,已经开发并应用了许多收获后和加工后处理。化学或物理处理的实例是在改良的气氛下包装新鲜切割的叶类蔬菜、可食涂层的应用、热休克处理和化学品的添加。

虽然这些处理防止伤口引起的变色的出现,但如果包装损坏或在打开包装后不久,收获和最终加工的产品仍易于变色。此外,化学品的使用和对用于这种处理的专用设备的需求显著增加了成本。由于这些原因,用于减少植物中伤口诱导的表面变色的更可行的基于遗传的解决方案是优选的。

在导致本发明的研究中,令人惊讶地发现,对植物中F5H基因同源物的修饰与在其相应的野生型F5H基因同源物中不包含这种修饰的植物或其部分相比导致伤口诱导的表面变色减少。F5H基因同源物编码阿魏酸5-羟化酶(F5H)蛋白同源物。在拟南芥(Arabidopsisthaliana)中描述了两种F5H基因同源物,称为F5H1和F5H2。F5H酶是PP途径的一部分,其中它负责丙二醛和松柏醇的羟基化。F5H蛋白属于一种新的被称为CYP84的植物细胞色素P450依赖性单加氧酶的家族。然而,尚未描述F5H在伤口诱导的表面变色中的作用。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种显示出减少的伤口诱导的表面变色的植物。

因此,本发明提供了包含经修饰的F5H基因同源物的植物,其中所述基因同源物与其相应的野生型F5H基因同源物相比包含修饰,其中与不包含经修饰的F5H基因同源物的植物相比,所述植物中经修饰的F5H基因同源物的存在导致伤口诱导的表面变色的减少。

术语“减少”总是与对照植物或其部分的伤口诱导的表面变色相关地测量,所述对照植物或其部分不具有对F5H基因同源物的这样的修饰,因此是包含野生型F5H基因同源物的野生型植物,并且不显示减少的伤口诱导的表面变色。如本文所用,显示“减少的伤口诱导的表面变色”或“伤口诱导的表面变色的减少”的植物是与野生型植物的伤口诱导的表面变色相比具有减少的伤口诱导的表面变色的植物。因此,减少的伤口诱导的表面变色的改善被定义为与不包含经修饰的F5H基因同源物的植物相比,变色的延迟出现和/或降低的强度。与野生型植物的伤口诱导的表面变色的变色和表面相比,通过伤口表面的较弱强度变色可以看到降低的变色强度和/或变色表面较小。最终,完全没有伤口引起的变色。变色的延迟出现意味着变色的开始发生在稍后的时间。因此,植物更久地保持其新鲜外观,这实际上是保质期的增加。

本发明还提供了经修饰的F5H基因同源物的序列,以鉴定包含导致本发明性状的所述经修饰的植物。

一种特定物种内的F5H基因同源物的数量在不同植物物种间不同。根据本申请中描述的基因同源物的定义,发现莴苣植物基因组包含两种F5H基因同源物。本文称为F5H1的一种同源物位于染色体4上,具有SEQ ID No:115所示的野生型DNA编码序列(CDS),并且编码具有SEQ ID No:1的野生型F5H1蛋白。本文中的另一种莴苣同源物称为F5H2,位于染色体3上,具有SEQ ID No:116所示的野生型DNA编码序列,并且编码具有SEQ ID No:2的野生型F5H2蛋白。

还发现朝鲜蓟、水稻、玉米、桃和茄子的基因组也包含两种F5H基因同源物,其野生型SEQ ID编号列于表2。物种菊苣、苦苣、芹菜和根芹菜和苹果包含三种F5H基因同源物,其野生型SEQ ID编号列于表2。香蕉的基因组包含四种F5H同源物,其野生型SEQ ID编号列于表2中。大豆、梨、小麦、萝卜以及甘蓝和花椰菜的基因组包含五种F5H同源物,其野生型SEQID编号列于表2中,而马铃薯和洋葱的基因组在其基因组中包含一种F5H基因同源物,该同源物的野生型SEQ ID编号列于表2中。

在优选的实施方案中,本发明涉及属于莴苣属(Lactuca)的植物。特别地,本发明涉及包含两种F5H基因同源物的莴苣植物,所述两种F5H基因同源物与编码野生型蛋白(SEQID No:1和2)的野生型基因(SEQ ID No:115和116)的核苷酸序列相比被修饰。在其基因组中包含经修饰的F5H基因同源物的其他植物也是发明的一部分,例如马铃薯、洋葱、朝鲜蓟、水稻、玉米、桃、茄子、菊苣、苦苣、芹菜、苹果、香蕉、大豆、梨、小麦、萝卜和甘蓝。

在另一个实施方案中,本发明涉及属于以下物种的植物的经修饰的F5H基因同源物:马铃薯,洋葱,莴苣,朝鲜蓟,水稻,玉米,桃,茄子,菊苣,苦苣,芹菜,苹果,香蕉,大豆,梨,小麦,萝卜或甘蓝,其中所述经修饰的F5H基因同源物与其野生型序列相比包含至少一个修饰,并且其中所述修饰导致所述植物的减少的伤口诱导的表面变色。在本申请中,目的不是要求拟南芥的经修饰的F5H基因或登录号为XP_011028697(预测:细胞色素P450 84A1样[胡杨(Populus euphratica)])的NCBI数据库序列。

在一个实施方案中,本发明涉及具有SEQ ID No:174所示序列的经修饰的F5H1基因同源物,与不包含经修饰的F5H1基因同源物的植物相比,其导致减少的伤口诱导的表面变色。

在一个实施方案中,本发明涉及具有SEQ ID No:174所示序列的经修饰的F5H1基因同源物和具有SEQ ID No:175、176、177、178或179所示序列的经修饰的F5H2基因同源物,其与不包含经修饰的F5H基因同源物的植物相比,导致减少的伤口诱导的表面变色。本发明涉及包含经修饰的F5H基因同源物的植物,其中所述基因同源物与其相应的野生型F5H基因同源物相比包含修饰,其中与不包含经修饰的F5H基因同源物的植物相比,所述植物中经修饰的F5H基因同源物的存在导致伤口诱导的表面变色的减少。

在一个实施方案中,本发明涉及包含经修饰的F5H基因同源物的植物,其中所述基因同源物与其相应的野生型F5H基因同源物相比包含修饰,其中与不包含经修饰的F5H基因同源物的植物相比,所述植物中经修饰的F5H基因同源物的存在导致伤口诱导的表面变色的减少,并且其中野生型F5H基因序列由SEQ ID No:58-114中的任一序列表示。

在一个具体实施方案中,本发明涉及包含本发明的经修饰的F5H基因同源物的植物,其中所述植物选自马铃薯,洋葱,莴苣,朝鲜蓟,水稻,玉米,桃,茄子,菊苣,苦苣,芹菜,苹果,香蕉,大豆,梨,小麦,萝卜和甘蓝,其野生型F5H基因序列SEQ ID编号列于表2中。在本申请中,目的不是要求包含经修饰的F5H基因的拟南芥植物,特别是Meyer等人在NationalAcademy of Sciences(1996)或Huang等人在Planta(一个国际植物生物学杂志)(2009)的出版物中公开的那种,或包含登录号为XP_011028697(预测:细胞色素P450 84A1样[胡杨(Populus euphratica)])的NCBI数据库序列的植物。

在另一个实施方案中,本发明涉及包含两种经修饰的F5H基因同源物的植物,其中与不包含经修饰的F5H基因同源物的植物相比,所述植物中经修饰的F5H基因同源物的存在导致伤口诱导的表面变色的减少。

在一个具体实施方案中,本发明涉及包含本发明的两种经修饰的F5H基因同源物的植物,其中所述植物选自莴苣,朝鲜蓟,粳稻(Oryza sativa Japonica),玉米,桃,茄子,菊苣,苦苣,芹菜,苹果,香蕉,大豆,梨,小麦,萝卜和甘蓝,其野生型F5H基因序列SEQ ID编号列于表2中。

在另一个实施方案中,本发明涉及包含三种经修饰的F5H基因同源物的植物,其中与不包含经修饰的F5H基因同源物的植物相比,所述植物中经修饰的F5H基因同源物的存在导致伤口诱导的表面变色的减少。

在一个具体实施方案中,本发明涉及包含本发明的三种经修饰的F5H基因同源物的植物,其中所述植物选自菊苣,苦苣,芹菜,苹果,香蕉,大豆,梨,小麦,萝卜和甘蓝,其野生型F5H基因序列SEQ ID编号列于表2中。

在另一个实施方案中,本发明涉及包含四种经修饰的F5H基因同源物的植物,其中与不包含经修饰的F5H基因同源物的植物相比,所述植物中经修饰的F5H基因同源物的存在导致伤口诱导的表面变色的减少。

在一个具体实施方案中,本发明涉及包含本发明的四种经修饰的F5H基因同源物的植物,其中所述植物选自香蕉,大豆,梨,小麦,萝卜和甘蓝,其野生型F5H基因序列SEQ ID编号列于表2中。

在另一个实施方案中,本发明涉及包含五种或更多种经修饰的F5H基因同源物的植物,其中与不包含经修饰的F5H基因同源物的植物相比,所述植物中经修饰的F5H基因同源物的存在导致伤口诱导的表面变色的减少。

在一个具体实施方案中,本发明涉及包含五种或更多种本发明的经修饰的F5H基因同源物的植物,其中所述植物选自大豆,梨,小麦,萝卜和甘蓝,其野生型F5H基因序列SEQID编号列于表2中。

本发明涉及包含经修饰的F5H基因同源物的可食用植物,例如蔬菜、果实和谷物,其中所述基因同源物与其相应的野生型F5H基因同源物相比包含修饰,并且其中与不包含经修饰的F5H基因同源物的植物相比,所述植物中经修饰的F5H基因同源物的存在导致伤口诱导的表面变色的减少。

如本文所用的“本发明的植物”是包含经修饰的F5H基因同源物的植物,其中所述基因同源物与其相应的野生型F5H基因同源物相比包含修饰,并且其中与不包含经修饰的F5H基因同源物的植物相比,所述植物中经修饰的F5H基因同源物的存在导致伤口诱导的表面变色的减少。本发明的植物是可食用植物,例如蔬菜、果实或谷类。优选地,本发明的植物选自马铃薯,洋葱,莴苣,朝鲜蓟,水稻,玉米,桃,茄子,菊苣,苦苣,芹菜,苹果,香蕉,大豆,梨,小麦,萝卜和甘蓝,其野生型F5H基因序列SEQ ID编号列于表2中。甚至更优选地,本发明的植物是莴苣植物。

基因之间的关系被定义为同源性。在本申请中,“同源基因”是指源自共同祖先基因的两个相关基因。同源序列被称为“同源物”,该术语可以应用于基因和蛋白。术语“同源的”或“同源物”可互换使用。同源基因编码同源蛋白。根据我们的定义,本发明涉及的F5H蛋白同源物的野生型序列列于表2中。此外,在导致本发明的研究中鉴定的所有F5H蛋白同源物具有共有序列的五个基序,所述共有序列表示在表1中,并由MAST(Motif Alignment&Search Tool)和MEME(Multi Em for Motif Elicitation)以其具有一定程度变异的氨基酸序列提供。

优选地,本发明的F5H蛋白同源物包含具有至少54%的同一性百分比,更优选具有至少60%的同一性百分比,甚至更优选具有至少65%的同一性百分比,甚至更优选具有至少70%的同一性百分比,甚至更优选具有至少75%的同一性百分比,甚至更优选具有至少80%的同一性百分比,甚至更优选具有至少85%的同一性百分比,更优选具有至少90%的同一性百分比,甚至更优选具有至少95%的同一性百分比,并且最优选具有100%的同一性百分比的表1中所示的基序。五个基序的共有序列列于表1中,并在图4中F5H蛋白直系同源物的比对中突出显示。

表1:存在于所有F5H蛋白同源物序列中的基序

“直系同源基因”是存在于不同物种中的同源基因,其源自共同的祖先基因并且通过物种形成事件分开。术语“直系同源基因”或“直系同源物”可互换使用。因此,本发明提供了对物种内的F5H基因同源物和不同物种的F5H基因直系同源物的修饰,所有这些都导致所述物种中减少的伤口诱导的表面变色。本发明涉及的F5H蛋白和基因直系同源物的野生型序列的SEQ ID编号列于表2中。

在本申请中,“基因”包括外显子序列和调节序列,例如启动子序列、UTR和多腺苷酸化信号,并且如果存在,它还包含内含子序列。对F5H基因同源物的修饰通过基因核苷酸序列中的至少一个变化产生“经修饰的基因同源物”。术语“修饰”和“突变”可互换使用。通常,修饰改变基因的表达和/或由包含经修饰的基因编码的蛋白的活性。对基因序列的修饰可以抑制基因转录,从而防止或减少经修饰的基因的表达或可以导致不稳定的mRNA。修饰也可以是F5H基因序列的改变,其导致编码的蛋白的水平降低、活性降低或完全缺失。在一些情况下,修饰还可导致蛋白的过表达,其可能是经修饰的表型的原因。本申请中描述了为了修饰基因的修饰和技术的实例的非限制性列表。

如本文所用,“野生型”或“WT”是指生物体在自然界中存在的形式,在本文的情况下是不显示伤口诱导的表面变色的减少的植物。

如本文所用,野生型基因或基因同源物是指未经修饰的F5H基因,因为它将在不显示伤口诱导的表面变色减少的植物中存在。野生型植物用作对照植物,其不携带经修饰的F5H基因同源物,因此不显示减少的伤口诱导的表面变色。为了具有可比性,包含经修饰的F5H基因同源物的本发明的植物和野生型植物应选自相同类型、优选相同品种、相同年龄并在相同条件下生长。

如本文所用,术语“F5H基因”或“经修饰的F5H基因”意指一种或多种经修饰的F5H基因。“包含经修饰的F5H基因同源物的植物”包含一种或多种经修饰的F5H基因同源物。

在本申请中,“性状”一词是指植物的表型。“本发明的性状”、“性状”或“表型性状”、“表型”、“特征”可互换使用。本文使用的本发明的性状是由于存在经修饰的F5H基因同源物及其相应的F5H蛋白而导致的减少的伤口诱导的表面变色。

如本文所用,“本发明的经修饰的F5H基因同源物”是指F5H同源物,其包含在植物中导致减少的伤口诱导的表面变色的任何修饰。优选地,本发明的经修饰的F5H基因同源物包含表3中所示的修饰。“本发明的经修饰的F5H基因同源物”、“本发明的基因”、“本发明的F5H基因”、“本发明的F5H基因同源物”可互换使用。

本发明涉及本发明的植物,其中F5H1蛋白的内源水平的降低是由于表2中列出的野生型F5H1序列中的提前终止密码子。

本发明涉及用于产生表现出减少的伤口诱导的表面变色的植物的方法,其包括降低植物中F5H1蛋白的内源水平。

本发明还涉及用于产生表现出减少的伤口诱导的表面变色的植物的方法,其包括降低植物中F5H1蛋白的内源水平,其中突变由CRISPR、化学试剂、辐射或其组合实现。

可以通过诱变引入F5H基因的修饰。本领域技术人员已知几种化学或物理处理,其可用于诱导植物物种如莴苣中的基因突变。诱变包括通过一种或多种化学化合物和/或通过物理方法和/或通过插入遗传元件随机引入至少一种修饰,所述化学化合物为例如甲基磺酸乙酯(EMS),亚硝基甲基脲,羟胺,原黄素,N-甲基-N-亚硝基胍,N-乙基-N-亚硝基脲,N-甲基-N-硝基-亚硝基胍,硫酸二乙酯,乙烯亚胺,叠氮化钠,甲醛,氨基甲酸乙酯,苯酚和环氧乙烷,所述物理方法为例如紫外线照射、快中子暴露、X射线、γ照射,所述遗传元件为例如转座子、T-DNA、逆转录病毒元件。诱变还包括通过同源重组、基于寡核苷酸的突变诱导、锌指核酸酶(ZFN)、转录激活因子样效应核酸酶(TALEN)或成簇规律间隔的短回文重复(CRISPR)系统的更特异性的、靶向引入至少一种修饰。

待经修饰的植物的种子可以用含有不同浓度的诱变剂如EMS的溶液处理。EMS主要烷基化DNA链的鸟嘌呤(G)残基,其在DNA复制期间导致与胸腺嘧啶(T)而不是胞嘧啶(C)配对。因此,GC碱基对以一定频率变为AT碱基对,该频率由EMS的有效剂量和植物的错配修复系统的活性决定。EMS的有效剂量取决于所用浓度、种子大小和其他物理性质以及种子在EMS溶液中孵育的时间。已经用EMS处理的种子通常称为M1种子。作为处理的结果,M1种子的组织在其细胞的基因组中包含随机点突变,并且存在于细胞亚群中的将形成种系组织(生发细胞)的那些将转移到下一代,其被称为M2。单倍不足从而导致不育或诱导胚胎致死的突变或其组合将不会转移至M2代。应该注意的是,尽管大多数EMS诱导的突变和由此产生的性状是隐性的,但是存在导致半显性或显性性状的显性突变可能发生的可能性。

在一个实施方案中,本发明涉及包含经修饰的F5H基因同源物的植物,其中所述基因同源物与其相应的野生型F5H基因同源物相比发生突变,其中与不包含经修饰的F5H基因同源物的植物相比,所述植物中经修饰的F5H基因同源物的存在导致伤口诱导的表面变色的减少。

在一个具体实施方案中,本发明涉及包含经修饰的F5H基因同源物的植物,其中所述基因同源物与其相应的野生型F5H基因同源物相比包含人造突变,其中与不包含经修饰的F5H基因同源物的植物相比,所述植物中经修饰的F5H基因同源物的存在导致伤口诱导的表面变色的减少。

在一个实施方案中,本发明涉及包含本发明的经修饰的F5H1基因同源物的植物或植物部分,其中与由相应的野生型F5H1基因同源物所产生的蛋白的表达相比,所述修饰导致F5H1蛋白同源物的蛋白表达的减少或不存在。

在一个具体实施方案中,本发明涉及包含经修饰的F5H1基因同源物的莴苣植物或植物部分,其中与由相应的野生型F5H1基因同源物所产生的蛋白的表达相比,所述修饰导致F5H1蛋白同源物的蛋白表达的减少或不存在。

在一个实施方案中,本发明涉及包含本发明的经修饰的F5H2基因同源物的植物或植物部分,其中与由相应的野生型F5H2基因同源物所产生的蛋白的表达相比,所述修饰导致F5H2蛋白同源物的蛋白表达的减少或不存在或增加。

在一个具体实施方案中,本发明涉及包含经修饰的F5H2基因同源物的莴苣植物或植物部分,其中与由相应的野生型F5H2基因同源物所产生的蛋白的表达相比,所述修饰导致F5H2蛋白同源物的蛋白表达的减少或不存在或增加。

本发明还涉及产生本发明的植物的方法,其包括降低植物中F5H1蛋白的内源水平,其中通过由基因沉默或RNAi降低植物的F5H1基因同源物的表达来降低植物中F5H1蛋白的内源水平。

本发明还涉及表现出减少的伤口诱导的表面变色并显示降低的F5H1表达的植物,其中所述减少或不存在是由本申请中描述的方法引起的。

当在本发明的上下文中经修饰的F5H基因的表达不存在或减少时,这意味着导致功能性蛋白合成的基因表达被阻止并因此不存在或者经修饰的F5H基因的表达小于野生型F5H基因的表达从而导致较低水平的蛋白。所述基因表达的阻止或减少在本文中直接或间接地导致减少的伤口诱导的表面变色的性状。

还可以通过用例如RNA寡核苷酸或DNA寡核苷酸阻止基因转录或优选通过表达作用于F5H基因启动子的负作用转录因子来阻止或减少基因表达。阻止或减少基因表达的方法的其他实例是F5H mRNA或转录物的去稳定化,优选借助于与F5H mRNA或转录物互补的核酸分子,其选自反义RNA、RNAi分子、病毒诱导基因沉默(VIGS)分子、共抑制分子、RNA寡核苷酸或DNA寡核苷酸。这种使mRNA或转录物去稳定化的方法是本领域技术人员熟知的。

导致F5H活性降低或不存在的修饰的实例是导致编码蛋白中的提前终止密码子、移码或氨基酸取代的修饰。所述F5H蛋白活性的降低或不存在本文直接或间接地导致减少的伤口诱导的表面变色的性状。例如,通过将一个或多个突变引入F5H基因的编码序列,可以发生F5H蛋白的活性降低。与其中不存在这样的突变的野生型F5H基因编码的F5H蛋白相比,F5H基因的突变可能影响编码蛋白的生物学功能。

在一个实施方案中,本发明涉及显示减少的伤口诱导的表面变色的植物,其包含经修饰的F5H基因同源物,其中与由相应的野生型F5H基因同源物产生的蛋白的活性相比,所述修饰导致F5H蛋白同源物的蛋白活性的降低或不存在。

在一个特定的实施方案中,本发明涉及显示减少的伤口诱导的表面变色的植物,其包含经修饰的F5H1基因同源物,其中与由相应的野生型F5H1基因同源物产生的蛋白的活性相比,所述修饰导致F5H1蛋白同源物的蛋白活性的降低或不存在。

在一个实施方案中,本发明涉及显示减少的伤口诱导的表面变色的植物,其包含经修饰的F5H2基因同源物,其中与由相应的野生型F5H2基因同源物产生的蛋白的活性相比,所述修饰导致F5H2蛋白同源物的蛋白活性的降低或不存在。

如实施例1中所述,通过使用诱变剂EMS产生本发明的植物。从用诱变剂处理一次的种子生长并选择其显示减少的伤口诱导的表面变色的能力的植物在其基因组的一个F5H基因同源物中包括至少一个突变。为了对植物的其他F5H基因同源物进行修饰,已经携带一种或多种经修饰的F5H基因同源物的种子可以用诱变剂进行额外回合的处理,并且在用诱变剂的每轮处理后选择它们显示减少的伤口诱导的表面变色的能力。例如,在其基因组中具有两个F5H基因同源物的莴苣植物用诱变剂EMS处理两次,以便在该植物的两个F5H基因同源物中引入修饰。

对基因的修饰可以是隐性的、显性的或中间的。术语“中间”和“半显性”可以互换使用。在隐性性状的情况下,基因的修饰需要以纯合状态存在,以使性状完全可见。本文描述的一些修饰是隐性的,因此只有在基因的两个等位基因都具有修饰时才赋予减少的伤口诱导的表面变色。显性或中间的修饰也可以在杂合状态下看到。中间性状的杂合表型位于纯合显性遗传基因型和纯合隐性遗传基因型的表型之间。这些类型的修改也是本发明的一部分。

F5H1或F5H2基因同源物中的修饰可以以杂合或纯合状态存在。优选地,F5H1基因同源物中的修饰以纯合状态存在。可以通过使用分子标记来确认植物的基因型。优选地,通过使用实施例3中描述的分子标记确认植物的基因型。

在一个实施方案中,本发明涉及包含F5H基因同源物的植物,所述F5H基因同源物与相应的野生型序列相比包含修饰,其中所述修饰导致显示减少的伤口诱导的表面变色的不同表型。

在一个实施方案中,本发明涉及包含F5H基因同源物的植物,所述F5H基因同源物与相应的野生型序列相比包含修饰,其中与不包含经修饰的F5H基因同源物的植物相比,所述修饰导致显示减少的伤口诱导的表面变色的不同表型。

在本申请的上下文中,减少的伤口诱导的变色优选地由莴苣种子的基因组中存在的修饰引起,所述莴苣种子保藏于NCIMB,保藏号为NCIMB 42546、NCIMB 42547、NCIMB42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550和NCIMB 42551。突变描述于表3中。

种子批次16E.607_B01的种子以保藏号NCIMB 45546保藏于NCIMB。保藏的种子包含F5H1基因同源物中的突变1。

种子批次16E.607_B02的种子以保藏号NCIMB 42547保藏于NCIMB。保藏的种子包含F5H1基因同源物中的突变1和F5H2基因同源物中的突变2。

种子批次16E.607_B03的种子以保藏号NCIMB 42548保藏于NCIMB。保藏的种子包含F5H1基因同源物中的突变1和F5H2基因同源物中的突变3。

种子批次16E.607_B04的种子以保藏号NCIMB 42549保藏于NCIMB。保藏的种子包含F5H1基因同源物中的突变1和F5H2基因同源物中的突变4。

种子批次16E.607_B05的种子以保藏号NCIMB 42550保藏于NCIMB。保藏的种子包含F5H1基因同源物中的突变1和F5H2基因同源物中的突变5。

种子批次16E.607_B06的种子以保藏号NCIMB 42551保藏于NCIMB。保藏的种子包含F5H1基因同源物中的突变1和F5H2基因同源物中的突变6。

包含突变1的莴苣F5H1基因同源物由SEQ ID No:174表示。

包含突变2的莴苣F5H2基因同源物由SEQ ID No:175表示。

包含突变3的莴苣F5H2基因同源物由SEQ ID No:176表示。

包含突变4的莴苣F5H2基因同源物由SEQ ID No:177表示。

包含突变5的莴苣F5H2基因同源物由SEQ ID No:178表示。

包含突变6的莴苣F5H2基因同源物由SEQ ID No:179表示。

对基因的修饰可导致相应蛋白序列中的提前终止密码子、移码、氨基酸取代或剪接变体。蛋白序列中的修饰是编码蛋白的DNA序列中碱基对的取代、缺失和变化的结果。

当对DNA序列的修饰导致提前终止密码子时,转录导致编码蛋白的截短形式。修饰可以发生在蛋白序列的区域中,该区域含有一个或多个进行其功能和/或与其底物或其他蛋白相互作用和/或适当折叠成功能性蛋白所必需的结构域或活性位点。

当对DNA序列的修饰导致移码突变时,蛋白翻译将导致与WT序列完全不同的氨基酸序列,并且经常导致提前终止密码子。翻译的蛋白通常具有与WT蛋白不同的生物学功能。这些修饰是由于插入或缺失多个不是三的倍数的碱基对引起的,其导致编码蛋白的单个氨基酸的三联体密码子相对于原始开放阅读框的移位和从而蛋白的氨基酸序列的变化。如果插入或缺失是三的倍数,它也可能导致与野生型序列不同的氨基酸序列。

DNA序列的编码序列中的一个或多个碱基对的修饰可导致编码的蛋白序列中的氨基酸改变。由于遗传密码的冗余,一些突变导致相同的氨基酸,这些突变被称为“沉默突变”。此外,一些氨基酸变化是“保守的”,即它们导致用具有相当性质的另一种氨基酸取代氨基酸(例如在残基的极性、电荷、溶解度、疏水性、亲水性或两亲性质上是相似的),这样突变不太可能显著影响成熟蛋白的功能和/或改变其折叠。其他氨基酸变化是非沉默的、非保守的氨基酸变化,并且是在底物识别、酶的活性位点、相互作用结构域中起作用的结构域中或在主要结构性结构域中用具有不同化学性质的另一种氨基酸取代氨基酸,这种氨基酸变化可能部分或完全破坏编码蛋白的功能性,而不必影响编码基因的表达水平。这些类型的突变可能导致编码蛋白的不利的稳定性、功能性和/或结构效应。非沉默和非保守氨基酸变化也可导致编码蛋白的过表达。

F5H基因的启动子序列中的突变也可能扰乱编码的F5H蛋白的生物学功能,因为这样的突变可能导致基因的完全缺失(例如随后导致F5H蛋白完全缺失),或者显著降低且生物学不足水平的转录(例如随后导致F5H蛋白水平降低)或F5H蛋白的过表达(例如随后导致更高水平的F5H蛋白)。

在本发明中,通过测量F5H1基因同源物和F5H2基因同源物的RNA进行基因表达分析。分析显示在受伤时诱导F5H1和F5H2的表达。F5H1的表达似乎比F5H2的表达更早开始,并且F5H1的表达似乎在具有突变1和任选F5H2基因同源物中的突变如突变3或突变6的植物中降低。

本发明涉及包含经修饰的F5H基因同源物的植物,其中所述基因同源物与其相应的野生型F5H基因同源物相比包含修饰,其中与不包含经修饰的F5H基因同源物的植物相比,所述植物中经修饰的F5H基因同源物的存在导致伤口诱导的表面变色的减少。本发明涉及包含本发明的经修饰的F5H基因的植物,其中所述修饰导致提前终止密码子。

本发明涉及莴苣植物,其包含被称为F5H1的第一经修饰的F5H基因同源物和任选地被称为F5H2的第二经修饰的F5H基因同源物,所述F5H1的野生型具有SEQ ID No.115,所述F5H2的野生型具有SEQ ID No.116。

本发明还涉及莴苣植物,其中经修饰的F5H1基因同源物是纯合存在的,并且经修饰的F5H2基因同源物是杂合或纯合存在的。

本发明还涉及莴苣植物,其中经修饰的F5H1基因包含提前终止密码子。

本发明还涉及莴苣植物,其中经修饰的F5H1基因包含由SEQ ID No:115的第370位的突变C>T引起的提前终止密码子。

在一个实施方案中,本发明涉及图4中列出的本发明的另一种植物,并且提前终止密码子是由对应于莴苣中SEQ ID No:115的第370位的位置的突变引起的。

本发明还涉及莴苣植物,其包含被称为F5H1的第一经修饰的F5H基因同源物和任选地被称为F5H2的第二经修饰的F5H基因同源物,所述F5H1的野生型具有SEQ ID No.115,所述F5H2的野生型具有SEQ ID No.116,其中经修饰的F5H2基因编码具有一个或多个氨基酸取代的蛋白。

本发明还涉及莴苣植物,其包含被称为F5H1的第一经修饰的F5H基因同源物和任选地被称为F5H2的第二经修饰的F5H基因同源物,所述F5H1的野生型具有SEQ ID No.115,所述F5H2的野生型具有SEQ ID No.116,其中经修饰的F5H2基因编码蛋白质,所述蛋白质包含SEQ ID No:2的编码的F5H2蛋白的第154位的苏氨酸至异亮氨酸的氨基酸取代,和/或SEQID No:2的编码的F5H2蛋白的第165位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代,和/或SEQ ID No:2的编码的F5H2蛋白的第308位的丝氨酸至苯丙氨酸的氨基酸取代,和/或SEQ ID No:2的编码的F5H2蛋白的第434位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代,和/或SEQ ID No:2的编码的F5H2蛋白的第436位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代。

本发明还涉及莴苣植物,其包含被称为F5H1的第一经修饰的F5H基因同源物和任选地被称为F5H2的第二经修饰的F5H基因同源物,所述F5H1的野生型具有SEQ ID No.115,所述F5H2的野生型具有SEQ ID No.116,其中编码的F5H2蛋白的第154位的苏氨酸至异亮氨酸的氨基酸取代是SEQ ID No:116的第461位的C>T核苷酸变化的结果,编码的F5H2蛋白的第165位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代是SEQ ID No:116的第494位的G>A核苷酸变化的结果,编码的F5H2蛋白的第308位的丝氨酸至苯丙氨酸的氨基酸取代是SEQ ID No:116的第923位的C>T核苷酸变化的结果,编码的F5H2蛋白的第434位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代是SEQ ID No:116的第1301位的G>A核苷酸变化的结果,和编码的F5H2蛋白的第436位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代是SEQ ID No:116的第1307位的G>A核苷酸变化的结果。

在一个实施方案中,本发明涉及图4中列出的本发明的另一种植物,并且氨基酸取代位于对应于莴苣中的位置的位置。

本发明还涉及莴苣植物,其包含含有提前终止密码子的经修饰的F5H1基因和含有氨基酸取代的F5H2基因。

本发明涉及莴苣植物,其包含含有提前终止密码子的经修饰的F5H1基因和含有氨基酸取代的F5H2基因,其中F5H1基因中的提前终止密码子由SEQ ID No:115的第370位的C>T突变引起,并且F5H2基因的选自编码的F5H2蛋白的第154位的苏氨酸至异亮氨酸的氨基酸取代是SEQ ID No:116的第461位的C>T核苷酸变化的结果,编码的F5H2蛋白的第165位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代是SEQ ID No:116的第494位的G>A核苷酸变化的结果,编码的F5H2蛋白的第308位的丝氨酸至苯丙氨酸的氨基酸取代是SEQ ID No:116的第923位的C>T核苷酸变化的结果,编码的F5H2蛋白的第434位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代是SEQ IDNo:116的第1301位的G>A核苷酸变化的结果,和编码的F5H2蛋白的第436位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代是SEQ ID No:116的第1307位的G>A核苷酸变化的结果。

在一个实施方案中,本发明涉及本发明的莴苣植物,其包含含有提前终止密码子的经修饰的F5H1基因和含有氨基酸取代的F5H2基因,F5H1基因中的提前终止密码子由SEQID No:115的第370位的C>T突变引起,并且F5H2基因的编码的F5H2蛋白的第159位的甘氨酸至丝氨酸的氨基酸取代是SEQ ID NO:116的第475位的G>A核苷酸变化的结果。

特别地,本发明涉及莴苣植物,其包含对F5H1基因同源物的一种修饰,其中所述修饰导致莴苣F5H1基因的编码序列中的提前终止密码子,以及包含对F5H2基因的修饰,其中所述修饰导致氨基酸取代。当两种突变(导致F5H1基因同源物中的提前终止密码子的突变和导致F5H2蛋白序列中的氨基酸取代的突变)由植物携带时,效果增强并且包含这些突变的植物显示延迟的伤口诱导的表面变色。因此,与仅包含经修饰的F5H1基因同源物的植物相比,包含经修饰的F5H1基因同源物和经修饰的F5H2基因同源物的植物显示延迟的伤口诱导的表面变色。

用F2植物进行分离分析,该植物由表现出减少的伤口诱导的表面变色并且包含纯合状态下的F5H1基因同源物中的突变和F5H2基因同源物中的突变的植物与不包含经修饰的F5H基因同源物的野生型植物的杂交产生。得到的F1植物自交,并分析从获得的种子生长的F2植物的表型。F2-植物包含纯合状态、杂合状态的突变或不包含任何突变。本发明性状的分离分析结果表明,为了显示减少的伤口诱导的表面变色,植物需要包含F5H1同源物上的突变1(F5H1基因同源物中的C

在一个实施方案中,本发明涉及包含如表3中所示的对莴苣植物的F5H1基因同源物的经修饰的植物。

在又一个实施方案中,本发明涉及如表3中所示的莴苣植物的F5H1基因同源物的突变1与F5H2基因同源物的突变2、3、4、5和6中的一种或多种突变的组合。

本发明还涉及经修饰的F5H基因同源物,其赋予植物减少的伤口诱导的表面变色。

本发明还涉及经修饰的F5H基因同源物用于开发表现出减少的伤口诱导的表面变色的植物的用途。

已经在本研究过程中鉴定并在本申请中描述的经修饰的F5H基因同源物肯定不是将导致本发明的性状的对F5H基因同源物的唯一修饰,因此本发明不应限于本申请中描述的具体修饰而是延伸至导致减少的伤口诱导的表面变色的对基因和/或蛋白的所有其他修饰。通过使用本文描述的或本领域已知的方法,技术人员非常能够在莴苣或包含F5H基因同源物的每种其他植物中引入具有相同或相似作用的所描述的或其他突变。

通过使用如本文所述的表型筛选测试,可以确定与WT植物的变色相比伤口诱导的表面变色是否减少。表型测试可用于检测莴苣和其他具有F5H基因同源物的作物中减少的伤口诱导的表面变色。导致减少的伤口诱导的表面变色的基因同源物的修饰可用于任何可能变色的植物,但它特别适用于蔬菜或果实。

此外,技术人员还能够检测除本申请中表征的同源物之外的其他F5H基因同源物。技术人员可以检测与本发明相关的作物中或本申请中未描述的其他作物中的其他基因同源物。在检测到这些其他同源物后,技术人员能够通过使用本申请中描述的或本领域已知的方法修饰它们的序列。通过修饰其他F5H基因同源物,可以增强伤口诱导的表面变色的减少。

氨基酸取代可以在不显著影响蛋白结构、功能和稳定性的蛋白区域中发生。然而,在良好保守的结构域内的位置处发生的氨基酸取代可能影响蛋白的表达水平或活性水平。F5H蛋白直系同源物之间的多序列比对揭示了高度保守的位置,其可能与F5H蛋白的稳定性、功能和/或结构相关。根据本发明发现,F5H蛋白同源物包含表1中列出并且在蛋白比对中突出显示的五个保守基序(图4),其在所有物种中得到鉴定。这些保守区域内的非保守氨基酸变化可破坏编码的F5H蛋白的稳定性、功能性和/或结构。然而,这些基序之外的修饰也可能影响编码的F5H蛋白的稳定性、功能性和/或结构。

更特别地,莴苣F5H2 DNA序列(SEQ ID No:116)的G

更特别地,莴苣F5H2 DNA序列(SEQ ID No:116)的T

更特别地,莴苣F5H2 DNA序列(SEQ ID No:116)的G

本发明广泛适用于在其基因组中携带至少一种功能性F5H基因同源物的所有植物物种和作物。存在于其他植物物种中的F5H基因被称为“基因直系同源物”,并且编码具有相同或相似功能的F5H蛋白。F5H直系同源物即其他物种中的F5H基因的鉴定可以在许多作物中进行,其方法是本领域已知的。在本研究中,通过使用基本局部比对搜索工具(BLAST)程序将莴苣F5H蛋白序列(SEQ ID No:1和2)与其他植物基因组的序列进行比较,在其他作物中鉴定了F5H基因的直系同源物。每种物种的最佳命中被鉴定为候选F5H直系同源基因,列于表2中。使用CLUSTAL对蛋白序列进行的多序列比对证实候选基因是直系同源F5H基因(图4)。一旦已知直系同源F5H基因的DNA序列及其编码的F5H蛋白,该信息可用于使用本文所述的方法或本领域技术人员已知的方法调节或修饰由所述基因编码的蛋白。

因此,本发明还涉及以下物种的植物:马铃薯,洋葱,朝鲜蓟,水稻,玉米,桃,茄子,菊苣,苦苣,芹菜,苹果,香蕉,大豆,梨,小麦,萝卜和甘蓝,其在基因组中包含一个或多个经修饰的F5H基因同源物,该经修饰的同源物导致减少的伤口诱导的表面变色。

本发明涉及选择显示减少的伤口诱导的表面变色的植物的方法,其中该方法包括筛选植物或植物群体中导致植物中减少的伤口诱导的表面变色的经修饰的F5H基因同源物的存在,任选地应用表型测试以鉴定显示减少的伤口诱导的表面变色的植物,并选择显示减少的伤口诱导的表面变色的植物。

用于检测和选择显示减少的伤口诱导的变色的植物的方法是例如表型测试,例如实施例2中描述和说明的测试,和/或实施例3中表征的分子标记的使用。两种方法均可用于在F1或由与显示减少的伤口诱导的变色和包含经修饰的F5H基因同源物的亲本植物的杂交产生的任何其他代中直接或间接检测和选择表现出减少的伤口诱导的表面变色和包含经修饰的F5H基因的植物。

如实施例2中所述,本发明的性状可以在叶盘测试中在表型上确定,其包括通过采取例如植物的叶盘诱导伤口的步骤。样品的形状不限于圆盘,而是一片带有伤口的叶,无论形状如何。将叶样品在用缓冲液MES润湿的湿润滤纸之间孵育,并在7.5℃孵育3天、5天和10天后,将其与取自在其基因组中不携带经修饰的F5H基因同源物的对照植物即野生型植物的叶样品(其在相同条件下孵育相同的时间)进行比较。

可以在适当的标度上评估不同叶盘样品上伤口诱导的表面变色的存在和强度,以便比较它们。技术人员可以使用具有任何细分的标度。在实施例2中描述的表型分析中,伤口诱导的表面变色表现为围绕叶盘边缘的粉红色环。当颜色饱和并且伤口引起的表面变色非常强时,变色可能呈现红色至非常暗的红色。标度的例子是从9到0,其中9表示边缘上没有变色可见,评分8表示叶盘在边缘周围具有非常轻微的粉红色变色,评分5表示叶盘具有边缘周围的红色/粉红色变色薄环,评分2意味着与具有评分9、8、7、6、5、4或者3的叶盘相比,叶盘在边缘周围具有红色/粉红色变色的更深和更厚的环,并且评分0意味着叶盘在边缘周围具有非常暗红色和厚的变色环。每个评分的一个例子如图5所示。本申请中描述的标度是一个标度的例子,其可用于将评分赋予进行测试的植物的叶盘和另一个植物以便比较它们和鉴定减少的伤口诱导的表面变色。叶盘的评分应优选由一个人完成。

为了鉴定减少的伤口诱导的表面变色,应将待测植物的评分与取样后3、5和10天的野生型植物的评分进行比较。从显示减少的伤口诱导的表面变色的植物中取出的叶盘在孵育同一天具有高于野生型植物的叶盘评分的分数。优选地,从显示减少的伤口诱导的表面变色的植物中取出的叶盘具有评分9或评分8。包含经修饰的F5H1基因和经修饰的F5H2基因的植物在孵育同一天具有比仅包含经修饰的F5H1基因同源物的植物更高的评分。为了具有可比性,植物的叶盘测试应在与相同条件下生长的植物相同的条件下进行。

或者,伤口诱导的表面变色也可以通过切割植物或其部分并储存该切割部分直至其显示伤口诱导的表面变色来确定。伤口诱导的表面变色的评估可以通过再现植物的常规储存条件来进行。收获成熟期的植物并切成片。对于莴苣植物,切割方法可取决于用于进行测试的莴苣品种。将植物片洗涤并在5-6℃下储存在塑料袋中的冷却室中。在洗涤后1、2、3、4、7和10天后,评估伤口诱导的表面变色的存在和强度。为了检测变色,将切割的叶片与WT植物的切割叶片进行比较。伤口诱导的表面变色的存在和强度可通过切割边缘上粉红色变色的存在和强度来检测,其可通过使用9至4的标度来评估,其中9表示没有见到伤口诱导的表面变色的迹象,8表示可见到第一个小的粉红色变色痕迹(几乎看不见,只有辉光),7表示粉红色变色出现在某些边缘,6表示粉红色变色在所有切割边缘都可见,5表示在所有切割边缘上都可以看到强烈的粉红色变色,4表示在所有切割边缘上都可以看到深粉红色变色。显示减少的伤口诱导的表面变色的植物具有比野生型植物更高的分数。为了具有可比性,整个莴苣头部的表型分析应在与相同条件下生长的植物相同的条件下进行。

本发明涉及用于在植物的基因组中检测引起所述植物或其部分中减少的伤口诱导的表面变色的突变的分子标记,其中所述标记是任何野生型序列中的突变,其SEQ ID编号显示在表2中。

本发明涉及用于在植物的基因组中检测引起所述植物或其部分中减少的伤口诱导的表面变色的突变的分子标记,其中所述突变是SEQ ID No:115的第370位的C>T的核苷酸变化。

本发明涉及用于在植物的基因组中检测引起所述植物或其部分中减少的伤口诱导的表面变色的突变的分子标记,其中所述突变是由SEQ ID No:116的第461位的C>T变化引起的编码的蛋白的第154位的苏氨酸至异亮氨酸的氨基酸取代,和/或由SEQ ID No:116的第494位的G>A变化引起的编码的蛋白的第165位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代,和/或由SEQ ID No:116的第923位的C>T变化引起的编码的蛋白的第308位的丝氨酸至苯丙氨酸的氨基酸取代,和/或由SEQ ID No:116的第1301位的G>A变化引起的编码的蛋白的第434位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代,和/或由SEQ ID No:116的第1307位的G>A SNP变化引起的编码的蛋白的第436位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代。

本发明还涉及如本文所述的分子标记的用途,用于鉴定或开发显示减少的伤口诱导的表面变色的植物,或开发与本发明的经修饰的F5H基因同源物相关的其他标记。

本发明还涉及鉴定与植物的减少的伤口诱导的表面变色相关的分子标记的方法,其包括:

a)从植物和从所述植物的一个或两个亲本中分离DNA;

b)在对应于SEQ ID No:174、175、176、177、178或179的序列处或附近筛选所述DNA的区域中的分子标记;和

c)确定所述标记与来自所述植物的一个或两个亲本的减少的伤口诱导的表型的共遗传。

本发明还涉及分子标记用于鉴定F5H基因同源物中导致减少的伤口诱导的表面变色的修饰或开发与本发明的经修饰的F5H基因同源物相关的其他标志的用途。分子标记基于对作为该性状基础的F5H基因同源物的修饰。本申请中提供了合适的分子标记的非排他性列表。本领域技术人员熟悉创建和使用它们来检测和选择具有经修饰的F5H基因同源物的植物,所述F5H基因同源物是在育种期间减少的伤口诱导的表面变色的原因。

在导致本发明的研究期间,在莴苣的两种F5H基因同源物中鉴定了许多EMS诱导的SNP突变。F5H1中鉴定的SNP之一导致蛋白中的终止密码子,并且F5H2中5个鉴定的SNP导致蛋白序列中的氨基酸改变。SNP可用作检测植物基因组中经修饰的F5H基因同源物的存在的标记。

在一个具体实施方案中,一种合适的分子标记是表5中所示的莴苣的F5H1基因中的C

在一个具体实施方案中,一种合适的分子标记是表6中所示的莴苣的F5H2基因中的C

在一个具体实施方案中,一种合适的分子标记是表6中所示的莴苣的F5H2基因中的G

在一个具体实施方案中,一种合适的分子标记是表6中所示的莴苣的F5H2基因中的C

在一个具体实施方案中,一种合适的分子标记是表6中所示的莴苣的F5H2基因中的G

在一个具体实施方案中,一种合适的分子标记是表6中所示的莴苣的F5H2基因中的G

本发明涉及分子标记和这些标记的用途,用于鉴定经修饰的F5H基因同源物,其导致包含F5H基因同源物的所有植物中减少的伤口诱导的表面变色。上述SNP标记特别适用于莴苣。

本发明涉及确定本发明的植物中经修饰的F5H基因同源物的存在的方法,其包括以下步骤:从所述植物获得核酸样品,将所述核酸与获自包含野生型F5H基因同源物的参考植物的核酸样品进行比较,并检测两种核酸样品之间的多态性,其中检测到的多态性指示所述经修饰的同源物的存在。

优选地,野生型F5H基因同源物是其SEQ ID编号列于表2中的任一序列。

可以将经修饰的F5H基因引入相同或不同物种的任何其他遗传背景中。缺乏修饰的植物可具有其他所需性状。对于两性相容的植物,可以通过杂交和/或回交以及在其中可检测到减少的伤口诱导的表面变色的第一代中进行选择来实现基因渗入。杂交之后可任选地进行胚胎拯救技术或导致成功组合和基因渗入的其他技术,这些技术是本领域技术人员已知的。亲本植物可以是直接从保藏的种子生长的植物或来自所述种子的后代植物或来自通过其他方法鉴定具有本发明性状的种子的后代植物。

当性状是显性单基因性时,它可以仅在一代(F1)中基因渗入另一种植物中。当性状是隐性的和/或涉及多于一个基因时,基因渗入可能包括需要多代的育种过程。本文使用基因渗入来描述整个过程。对于显性性状,携带修饰的植物的选择可以在F1或在由具有所需性状的植物与没有该性状的植物之间的杂交产生的任何其他世代开始。对于隐性性状,使用表型测试和/或使用分子标记的选择在F2或在从杂交或者可选择地从回交产生的任何其他世代开始。

在一个具体实施方案中,可以使用标准育种技术将一种或多种经修饰的莴苣F5H基因同源物从携带经修饰的莴苣F5H基因同源物的莴苣植物基因渗入缺乏经修饰的莴苣F5H基因同源物的莴苣植物中。

本发明还涉及适于产生植物的繁殖材料,所述植物在其基因组中包含一个或多个经修饰的F5H基因并且表现出减少的伤口诱导的变色。在一个实施方案中,繁殖材料由适于有性繁殖的植物部分形成,特别是小孢子、花粉、子房、胚珠、胚囊和卵细胞。在另一个实施方案中,繁殖材料由适于营养繁殖的部分形成,特别是小孢子、花粉、子房、胚珠、胚、胚囊、卵细胞、插枝、根、根尖、下胚轴、子叶、茎、叶、花、花药、种子、分生细胞、原生质体和细胞、或其组织培养物。

本发明还涉及从所述繁殖材料生长或再生的植物,该植物在其基因组中包含一种或多种如本文所定义的经修饰的F5H基因,从而提供具有减少的伤口诱导的表面变色的植物。

特别地,由繁殖材料产生的植物包含在从种子生长的莴苣植物中发现的经修饰的F5H基因同源物,所述种子的代表性种子保藏于NCIMB,保藏号为NCIMB 42546、NCIMB42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550和NCIMB 42551。

本发明还涉及本发明的包含为植物提供减少的伤口诱导的表面变色的经修饰的F5H基因的植物在赋予该性状的植物育种中的用途。

本发明涉及产生显示出减少的伤口诱导的表面变色的植物的方法,该方法包括:

a)将包含权利要求1的经修饰的F5H基因同源物的植物与另一植物杂交;

b)任选地执行一轮或多轮自交和/或杂交;和

c)任选地在每轮自交或杂交后选择包含所述减少的伤口诱导的表面变色的植物。

在一个实施方案中,表型选择和/或通过使用分子标记选择所述植物。

在一个方面,本发明涉及用于产生显示减少的伤口诱导的表面变色的植物的方法,其包括:

a)将包含导致该性状的本发明的经修饰的F5H基因同源物的植物与另一植物杂交;

b)自交所得F1以获得F2植物;

c)选择在F2中具有该性状的植物;

d)任选地进行额外的一轮或多轮自交或杂交,并随后选择包含/显示本发明的性状的植物。

在一个方面,本发明涉及用于产生显示减少的伤口诱导的表面变色的植物的方法,其包括:

a)将包含导致该性状的本发明的经修饰的F5H基因同源物的植物与另一植物杂交;

b)任选地使得到的F1与优选的亲本回交;

c)选择F2中具有该性状的植物;

d)任选地进行额外的一轮或多轮自交或杂交,并随后选择包含该性状的植物。

本发明另外提供了将另一种所需性状引入具有本发明的性状的植物中的方法,其包括:

a)将包含本发明的经修饰的F5H基因同源物并且显示减少的伤口诱导的表面变色的植物与包含所需性状的第二植物杂交以产生F1后代;

b)选择包含减少的伤口诱导的表面变色的所述性状和所需性状的F1后代植物;

c)将选择的F1后代与任一亲本杂交,以产生回交后代;

d)选择包含所需性状并显示减少的伤口诱导的表面变色的回交后代;和

e)任选地接连重复步骤c)和d)一次或多次以产生选择的第四代或更高的回交后代,其包含经修饰的F5H基因同源物并且显示减少的伤口诱导的表面变色。本发明包括通过该方法产生的植物。

在一个实施方案中,通过使用实施例3中描述的标记,在F1或任何其他世代中进行显示减少的伤口诱导的表面变色的植物的选择。在另一个方面,本发明的性状的选择开始于杂交或可选地回交的F2中。F2中植物的选择可以在表型上进行,也可以通过使用直接或间接检测决定性状的经修饰的F5H基因的所述标记进行。

在一个实施方案中,对于显示减少的伤口诱导的表面变色的植物的选择在F3或后一代中开始。

在一个实施方案中,包含本发明的F5H基因同源物的植物是近交系、杂种、双单倍体或分离群体的植物。

本发明还提供了产生显示减少的伤口诱导的表面变色的植物的方法,该方法通过使用双单倍体产生技术产生包含所述性状的双单倍体系来进行。

本发明还涉及可以生长成显示减少的伤口诱导的表面变色的植物的杂种种子,以及产生这种杂种种子的方法,其包括使第一亲本植物与第二亲本植物杂交并收获所得的杂种种子,其中所述第一亲本植物和/或所述第二亲本植物是所要求保护的植物。

本发明还涉及产生显示减少的伤口诱导的表面变色的杂种植物的方法,其包括使第一亲本植物与第二亲本植物杂交并收获所得的杂种种子,其中第一亲本植物和/或第二亲本植物是显示减少的伤口诱导的表面变色的植物,以及将所述杂交种子生长成显示减少的伤口诱导的表面变色的杂种植物。

本发明还涉及产生杂种植物种子的方法,其包括使第一亲本植物与第二亲本植物杂交并收获所得的植物种子,其中所述第一亲本植物和/或所述第二亲本植物包含本发明的经修饰的F5H基因同源物。

本发明还涉及产生显示减少的伤口诱导的表面变色的植物的方法,其包括从其基因组中包含导致减少的伤口诱导的表面变色的性状的经修饰的F5H基因同源物的种子生长植物。所述种子是其代表性样品保藏于NCIMB的合适的种子,其保藏号为NCIMB 42546、NCIMB 42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550和NCIMB 42551。

本发明还涉及种子产生方法,其包括从种子生长植物,所述种子的代表性样品保藏于NCIMB,保藏号为NCIMB 42546、NCIMB 42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550和NCIMB 42551,允许植物产生种子,以及收获这些种子。种子的产生适合通过杂交或自交来完成。

本发明涉及通过使用如本文所述的本发明的植物作为组织来源的组织培养产生显示减少的伤口诱导的表面变色的植物的方法。

本发明还涉及通过如本文所述的本发明的植物的部分的营养繁殖产生显示减少的伤口诱导的表面变色的植物的方法。

在一个实施方案中,本发明涉及产生显示减少的伤口诱导的表面变色的植物的方法,其通过使用遗传修饰方法将所述性状从本发明的植物基因渗入到植物中来进行。遗传修饰包括使用来自不可杂交的物种的基因或合成基因的转基因修饰或基因转移,以及使用来自作物植物本身或来自两性兼容的供体植物的编码(农业)性状的天然基因的同源基因修饰(cisgenic modification)或同源转基因(cisgenesis)。

本发明还涉及用于开发显示减少的伤口诱导的表面变色的植物的育种方法,其中使用包含所述性状的种质。包含经修饰的F5H基因同源物并且代表种质的所述植物的代表性种子保藏于NCIMB,保藏号为NCIMB 42546、NCIMB 42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550和NCIMB 42551。

在另一个实施方案中,本发明涉及产生显示减少的伤口诱导的表面变色的植物的方法,其中包含赋予所述性状的经修饰的F5H基因同源物的植物的后代或繁殖材料用作将所述性状基因渗入到另一植物中的来源。包含经修饰的F5H基因同源物的所述植物的代表性种子保藏于NCIMB,保藏号为NCIMB 42546、NCIMB 42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550和NCIMB 42551。

本发明优选提供显示减少的伤口诱导的表面变色的植物,该植物可通过本文所述和/或本领域技术人员熟悉的任何方法获得。

在育种携带经修饰的F5H基因同源物的新植物的过程中,可以独立于经修饰的F5H基因将期望的农艺性状引入植物中。如本文所用,“期望的性状”包括但不限于例如,改善的产率、叶形状、叶大小、叶数量、叶颜色、种子数、种子大小、植物活力、植株高度、抽苔和对一种或多种疾病或致病生物的抗性。这些期望的性状中的任何一种可以与经修饰的F5H基因同源物组合。

本发明还涉及用于产生显示本发明的减少的伤口诱导的表面变色的农艺学优良植物的方法,其包括将经修饰的F5H基因同源物基因渗入到农艺学优良植物中。这可以通过本申请中描述的或本领域已知的方法实现。本发明还包括通过该方法产生的植物。

在又一个实施方案中,本发明的农艺学优良植物是近交系或杂种。

如本文所用,近交系的植物是植物群体中由三轮或更多轮自交或回交导致的植物;或所述植物是双单倍体。近交系可以例如是用于产生商业杂种的亲代系。

如本文所用,杂种植物是植物,其是具有不同基因型的两种不同植物之间杂交的结果。更特别地,杂种植物是两种不同近交系的植物之间杂交的结果,这样的杂种植物可以例如是F

在一个实施方案中,本发明的植物,即包含本发明的经修饰的F5H基因的植物,是农艺学上的优良植物。

在本发明的上下文中,农艺学上的优良植物是具有如下基因型的植物,所述基因型由于人为干预的定向杂交和选择导致可区分的和期望的农艺性状的累积,其允许生产者收获具有商业意义的产品。

本发明还涉及包含本发明的植物的一部分的食品。食品可以包含本发明的植物的一个或多个收获部分,涉及可以包含天然或经加工的形式的本发明的植物的收获叶的食品,以及涉及可以包含一种或多种在生长基质中用于在家庭环境中从莴苣植物中收获叶的本发明的植物的容器。收获的部分或食品可以是或包含植物的头部和/或部分,例如本发明的植物的叶。食品或收获的部分可能已经历一个或多个加工步骤。这样的加工步骤可包括但不限于以下处理中的任何一种或其组合:切割,洗涤或沙拉混合物,其可包含本发明的植物的部分,例如叶。获得的经加工的形式也是本发明的一部分。所有食品和收获的部分都在其基因组中携带本发明的经修饰的F5H基因同源物。

本发明涉及本发明的植物的一部分,其中所述部分是叶、植物的整个头部、果实、花序、种子、花球(curd)、茎、块茎、球茎或根,任选其是经加工的形式。

本发明还涉及能够发育成本发明的植物的种子。

本发明还涉及本发明的植物的种子,其中种子在其基因组中包含经修饰的F5H基因同源物。

本发明还涉及本发明的植物的细胞,该细胞在其基因组中包含经修饰的F5H基因,并为该植物提供减少的伤口诱导的变色。这种细胞可以与植物或其部分分离或可以是植物或其部分的一部分。

本发明还涉及莴苣植物(Lactuca sativa)的细胞,该莴苣植物显示出减少的伤口诱导的表面变色,如在2016年2月19日在NCIMB保藏于NCIMB并且具有以下保藏号之一的种子生长的莴苣植物中发现的:NCIMB 42546、NCIMB 42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550或NCIMB 42551。

本发明还涉及植物的细胞,该植物包含经修饰的F5H基因并显示减少的伤口诱导的表面变色。

本发明还涉及植物的细胞,其包含经修饰的F5H基因并且显示减少的伤口诱导的表面变色,该植物可通过杂交包含经修饰的F5H基因的植物并选择显示减少的伤口诱导的表面变色的植物而获得。

本发明还涉及莴苣植物(Lactuca sativa)的细胞,该莴苣植物显示出减少的伤口诱导的表面变色,如在2016年2月19日在NCIMB保藏于NCIMB并且具有以下保藏号之一的种子生长的莴苣植物中发现的:NCIMB 42546、NCIMB 42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550或NCIMB 42551,该莴苣植物可如下获得:将莴苣植物与如在2016年2月19日在NCIMB保藏于NCIMB并且具有以下保藏号之一的种子生长的莴苣植物杂交:NCIMB 42546、NCIMB 42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550或NCIMB 42551,并选择显示减少的伤口诱导的表面变色的莴苣植物。

本发明还涉及以保藏号NCIMB 42546、NCIMB 42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550和NCIMB 42551在NCIMB下保藏的种子用于将显示减少的伤口诱导的表面变色的植物开发成另一种莴苣植物(Lactuca sativa)的用途。

本发明还涉及种子用于将减少的伤口诱导的表面变色性状转移到另一种有农艺学价值的莴苣植物的用途,所述种子的代表性样品保藏于NCIMB保藏号为NCIMB 42546、NCIMB 42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550和NCIMB 42551。

本发明还涉及包含本发明的经修饰的F5H基因同源物并且显示减少的伤口诱导的表面变色的植物作为作物的用途。

特别地,本发明涉及表现出减少的伤口诱导的表面变色的莴苣植物(Lactucasativa)作为农物的用途,所述减少的伤口诱导的表面变色是如在2016年2月19日保藏于NCIMB并且具有以下保藏号之一的种子生长的莴苣植物中发现的:NCIMB 42546、NCIMB42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550或NCIMB 42551。

本发明还涉及包含本发明的经修饰的F5H基因同源物并显示减少的伤口诱导的表面变色的植物作为种子来源的用途。

特别地,本发明涉及表现出减少的伤口诱导的表面变色的莴苣植物(Lactucasativa)作为种子来源的用途,所述减少的伤口诱导的表面变色是如在2016年2月19日保藏于NCIMB并且具有以下保藏号之一的种子生长的莴苣植物中发现的:NCIMB 42546、NCIMB42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550或NCIMB 42551。

本发明还涉及包含本发明的经修饰的F5H基因同源物并显示减少的伤口诱导的表面变色的植物作为繁殖来源的用途。

特别地,本发明涉及表现出减少的伤口诱导的表面变色的莴苣植物(Lactucasativa)作为繁殖材料的来源的用途,所述减少的伤口诱导的表面变色是如在2016年2月19日保藏于NCIMB并且具有以下保藏号之一的种子生长的莴苣植物中发现的:NCIMB 42546、NCIMB 42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550或NCIMB 42551。

本发明还涉及包含本发明的经修饰的F5H基因同源物并显示减少的伤口诱导的表面变色的植物用于消费的用途。

特别地,本发明涉及表现出减少的伤口诱导的表面变色的莴苣植物(Lactucasativa)用于消费的用途,所述减少的伤口诱导的表面变色是如在2016年2月19日保藏于NCIMB并且具有以下保藏号之一的种子生长的莴苣植物中发现的:NCIMB 42546、NCIMB42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550或NCIMB 42551。本发明还涉及本发明的经修饰的F5H基因同源物用于赋予植物减少的伤口诱导的表面变色的用途。

特别地,本发明涉及在2016年2月19日保藏于NCIMB并且具有保藏号NCIMB 42546、NCIMB 42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550或NCIMB 42551其中之一的种子中发现的F5H基因同源物用于赋予莴苣植物(Lactuca sativa)减少的伤口诱导的表面变色的用途。

本发明涉及植物作为本发明的经修饰的F5H基因同源物的接受者的用途。

特别地,本发明涉及在2016年2月19日保藏于NCIMB并且具有保藏号NCIMB 42546、NCIMB 42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550或NCIMB 42551其中之一的种子中发现的莴苣植物(Lactuca sativa)的用途。

本发明还涉及本发明的经修饰的F5H基因用于赋予植物减少的伤口诱导的表面变色的用途。

特别地,本发明涉及在2016年2月19日保藏于NCIMB并且具有保藏号NCIMB 42546、NCIMB 42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550或NCIMB 42551其中之一的种子中发现的经修饰的F5H基因同源物的用途,其赋予莴苣植物(Lactuca sativa)减少的伤口诱导的表面变色。

本发明还涉及使用在2016年2月19日保藏于NCIMB并且具有保藏号NCIMB 42546、NCIMB 42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550或NCIMB 42551其中之一的种子用于转移减少的伤口诱导表面变色到另一种莴苣植物(Lactuca sativa)中的用途。

保藏信息

本发明的包含导致减少的伤口诱导的表面变色的修饰的F5H基因同源物的莴苣植物(Lactuca sativa)的种子在2016年2月19日保藏于NCIMB Ltd,Ferguson Building,Craibstone Estate,Bucksburn,Aberdeen AB21 9YA,UK,保藏号为NCIMB 42546、NCIMB42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550和NCIMB 42551。

保藏的种子不符合获得植物品种保护所需的DUS标准,因此不能被认为是植物品种。

附图说明

在实施例中,参考以下附图:

图1:在WT和不同突变体的莴苣样品孵育3天时,实施例2中描述的表型测试的叶盘。第1行和第8行是取自野生型莴苣植物的叶盘样品,第2行和第9行是取自包含突变1的莴苣植物的叶盘样品,第3行是取自包含突变1和突变2的莴苣植物的叶盘样品,第4行是取自包含突变1和突变3的莴苣植物的叶盘样品,第5行是取自包含突变和突变4的莴苣植物的叶盘样品,第6行是取自包含突变和突变5的莴苣植物的叶盘样品,和第7行是取自包含突变和突变6的莴苣植物的叶盘样品。突变如表3所示。

图2:在WT和不同突变体的莴苣样品孵育5天后,实施例2中描述的表型测试的叶盘。第1行和第8行是取自野生型莴苣植物的叶盘样品,第2行和第9行是取自包含突变1的莴苣植物的叶盘样品,第3行是取自包含突变1和突变2的莴苣植物的叶盘样品,第4行是取自包含突变1和突变3的莴苣植物的叶盘样品,第5行是取自包含突变和突变4的莴苣植物的叶盘样品,第6行是取自包含突变和突变5的莴苣植物的叶盘样品,和第7行是取自包含突变和突变6的莴苣植物的叶盘样品。突变如表3所示。

图3:在WT和不同突变体的莴苣样品孵育10天后,实施例2中描述的表型测试的叶盘。第1行和第8行是取自野生型莴苣植物的叶盘样品,第2行和第9行是取自包含突变1的莴苣植物的叶盘样品,第3行是取自包含突变1和突变2的莴苣植物的叶盘样品,第4行是取自包含突变1和突变3的莴苣植物的叶盘样品,第5行是取自包含突变和突变4的莴苣植物的叶盘样品,第6行是取自包含突变和突变5的莴苣植物的叶盘样品,和第7行是取自包含突变和突变6的莴苣植物的叶盘样品。突变如表3所示。

图4:具有野生型序列的直系同源蛋白与表2中列出的SEQ ID编号的比对(通过MUSCLE(3.8)的CLUSTAL多序列比对)。

表1的基序在序列中突出显示。

在比对下方使用以下符号:

*--该列中的所有残基都相同

:--已观察到保守取代

.--已观察到半保守取代

--无匹配(空白)

图5:用于评价叶盘上伤口诱导的表面变色的标度的实例,其用每个分数的描述和具有给定分数的叶盘的图形表示。

图6:如实施例7中所述的包含突变1和突变3的莴苣植物的F2系的分离分析的表型测试的叶盘。图片代表在取样后孵育1、2、3、4和7天后的叶盘。

图7:如实施例8中所述的包含突变1和突变3的整个莴苣头部的表型分析。

表2:F5H直系同源物概述。此概述表明哪些SEQ ID No与哪种植物物种相关。

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表3:莴苣的F5H1和F5H2基因同源物的修饰

(AA=氨基酸,Nt=核苷酸,CDS=DNA编码序列,Pos.=位置)

表3显示了F5H1和F5H2突变以及对编码的F5H1和F5H2蛋白序列的影响。位置是如在莴苣的序列SEQ ID No:115(F5H1 CDS序列野生型)、SEQ ID No:116(F5H2 CDS序列野生型)、SEQ ID No:1(F5H1蛋白序列野生型)和SEQ ID No:2(F5H2蛋白序列野生型)中的。

具体实施方式

实施例

实施例1

通过用EMS处理产生莴苣植物突变体

为了产生莴苣植物的突变体,莴苣品种Troubadour、Apache、Yorvik和Roderick的约2000粒种子通过将种子在室温下浸没在0.05%(w/v)或0.07%(w/v)EMS的充气溶液中24小时来用EMS处理。在EMS处理后,将M1种子用水冲洗,萌芽并在20℃、16小时光照、8小时黑暗状态下在温室中生长,以产生M2种子,其被收获并成大批量。通过使用实施例2中描述的表型测试筛选所得的M2植物群体的莴苣植物,其显示减少的伤口诱导的变色。

选择莴苣植物,其是Troubadour品种的突变体,并且在实施例2中描述的表型测试中孵育叶盘样品3至5天后与WT相比确实表现出减少的伤口诱导的表面变色,并与来自品种Troubadour的第二莴苣植物杂交。在与植物和品系选择组合的重复近亲繁殖周期后,从该杂交产生F6系11K200310。进行选择以维持减少的伤口诱导的表面变色并减少不期望的背景突变的影响。

然后以与先前在第一EMS处理中描述的相同方式对11K200310系的5000粒种子进行第二轮EMS处理,但是代替使用浓度为0.14%的EMS。然后将EMS处理的种子播种在温室中,然后使用如实施例2中所述的表型测试再次筛选所得的植物群体中具有伤口诱导的表面变色的莴苣植物。

实施例2

显示减少的伤口诱导的表面变色的植物的表型鉴定

将来自用一轮或两轮EMS处理的种子生长的实施例1的植物筛选其显示减少的伤口诱导的表面变色的潜力。当它们产生大约6片真叶,其大小为可以在不切割中间叶脉的情况下采取样品时,从植物中取出叶盘样品。对于该实验,植物处于在温室中生长的成熟阶段(约2个月大)。将获得的样品放在用MES缓冲液润湿的滤纸上。叶的上侧与滤纸接触。用也用MES缓冲液润湿的第二滤纸覆盖叶。除去两个滤纸之间的气泡,将叶盘在容器中在湿润的滤纸之间在7.5℃孵育。在叶样品孵育三天、五天和十天后,由一个人对伤口诱导的表面变色就由叶样品边缘周围的粉红色代表的伤口诱导的表面变色的存在和强度进行评分。在该表型鉴定中使用的标度的实例是从9到0,其中9表示叶盘的边缘没有变色,评分8表示叶盘在边缘周围具有非常轻微的粉红色变色,评分5表示叶片在边缘周围有红色/粉红色变色薄环,评分2表示与具有评分9、8、7、6、5、4或者3的叶盘相比,叶盘在边缘周围具有红色/粉红色变色的更深和更厚的环和评分0意味着叶盘在边缘周围具有非常暗红色和厚的变色环。虽然可以使用不同的标度来评估伤口诱导的表面变色的强度,但是标度的范围应该从没有伤口诱导的表面变色到最高强度的伤口诱导的表面变色。将最感兴趣的候选者生长种子并根据相同的方案重新播种和重新测试。

确认一些候选者的减少的伤口诱导的变色。在取样后第3天、第7天和第10天叶片上伤口诱导的表面变色的表型测试结果显示在图1、2和3中,并且分数表示在表4中;在第3天(图1),WT显示伤口诱导的表面变色(评分0),与野生型植物的伤口诱导的表面变色相比,包含突变1的植物显示出减少的伤口诱导的表面变色(评分7)。并且包含突变1和突变2、3、4、5或6的植物未显示任何伤口诱导的表面变色(评分9)。在第5天(图2),WT显示伤口诱导的表面变色(评分0),与WT(评分0)相比,用EMS处理一次并且在其F5H1基因同源物中具有突变1(表3)的植物显示减少的伤口诱导的表面变色(评分2),并且经过两轮EMS处理的植物相比,并在其F5H1基因同源物中具有突变1(表3)和在其F5H2基因同源物中具有突变2、3、4、5或6(表3)的植物未显示任何伤口诱导的表面变色或与包含突变1的植物相比显示减少的伤口诱导的表面变色(评分7至9)。在第10天(图3),用EMS处理一次并且在其F5H1基因同源物中具有突变1的植物显示出伤口诱导的表面变色(评分0),已经处理两轮EMS并且具有其F5H1基因同源物中的突变1(表3)和其F5H2基因同源物中的突变2、3、4、5或6(表3)的植物未显示任何伤口诱导的表面变色或与包含突变1的植物相比显示减少的伤口诱导的表面变色(评分5至9)。

将这些植物自交以产生种子,然后将种子保藏于NCIMB,保藏号为NCIMB 42546、NCIMB 42547、NCIMB 42548、NCIMB 42549、NCIMB 42550和NCIMB 42551。

表4:用于在叶片取样后3、4、5、6、7和10天表型鉴定显示减少的伤口诱导的表面变色的植物的叶盘的分数

实施例3

莴苣F5H同源物的修饰

通过使用标准DNA测序技术分析由EMS处理产生的并且显示减少的伤口诱导的表面变色的莴苣植物的DNA以鉴定F5H基因同源物中的突变。鉴定了莴苣植物的基因同源物F5H1和F5H2中的许多突变。

4号染色体上的莴苣F5H基因同源物(本文称为F5H1)中的突变导致SEQ ID No:1中所示的相应野生型蛋白序列中的提前终止密码子。3号染色体上莴苣F5H基因(在本文中称为F5H2)的不同突变导致SEQ ID No:2中所示的相应野生型蛋白的序列中的氨基酸改变。在莴苣植物中经修饰的F5H1蛋白的存在导致减少的伤口诱导的表面变色。在莴苣植物中经修饰的F5H1和F5H2蛋白的存在增强了这种效果。在莴苣属植物的F5H基因同源物中鉴定了下表5和表6中列出的突变。表中仅显示包含突变核苷酸(SNP)和每一侧的50个侧翼核苷酸的部分F5H1和F5H2序列。

表5:莴苣的F5H1基因同源物中SNP突变的序列数据。

表6:莴苣的F5H2基因同源物中SNP突变的序列数据

实施例4

F5H基因直系同源物和保守区域的鉴定

通过使用BLASTN和BLASTP程序鉴定其他作物物种中的F5H基因直系同源物,以比较莴苣植物的F5H1和F5H2的DNA和蛋白序列与其他作物物种的序列。每个物种的最佳命中被鉴定为候选F5H1和F5H2基因直系同源物。携带一种或多种F5H基因直系同源物的植物的非限制性列表如下表所示。

表7:携带F5H基因直系同源物的植物物种的列表和这些植物的基因组中存在的基因直系同源物的数目。F5H基因直系同源序列的SEQ ID编号列于表2中。

比对显示在不同物种的F5H基因直系同源物中存在高度保守的氨基酸。在蛋白序列比对的图4中F5H基因直系同源物序列中突出显示的高度保守氨基酸区域的实例列于表1中。

实施例5

开发具有本发明的性状的新植物

将显示孵育10天后减少的伤口诱导的变色并且通过实施例2中描述的表型测试发现的编号为15E238260的莴苣植物自交。通过使用基于实施例3中的SNP标记的DNA标记测试,植物15E238260显示出对于F5H1基因同源物中的突变和F5H2基因同源物中的突变是纯合的。使用植物15E238260的花作为花粉供体与莴苣品种Hofnar的植物(其在实施例2中描述的表型测试中显示出与野生型植物一样的伤口诱导的表面变色)进行杂交。上述杂交导致编号为15E97481的一批F1种子。

播种四粒F1-种子,将得到的编号为15E748101、15E748102、15E748103和15E748104的植物自交以产生F2-种子。播种这些F2-种子,通过实施例2中描述的表型测试测试各株F2-植物的减少的伤口诱导的表面变色。预期每16株F2-植物中有3至5天后显示减少的伤口诱导的表面变色,并且预期每16株F2-植物中有1个如实施例2所述的在7.5℃孵育叶盘10天后显示减少的伤口诱导的表面变色。

因此预期在孵育10天后显示减少的伤口诱导的表面变色的F2植物对于F5H1基因同源物中的突变以及对于F5H2基因同源物中的突变是纯合的。将选择的F2植物自交以产生F3-种子。通过在该种子批次中生长10株F3植物并观察在孵育10天后其中每一株的减少的伤口诱导的表面变色(如实施例2),所选F2植物中两个突变基因的纯合存在已经被证实。通过使用识别野生型和突变基因之间差异的分子标记进行植物的选择和所选基因型的确认。

实施例6

通过回交进行本发明的性状的基因渗入

为了基因渗入F5H1基因同源物的突变和F5H2基因同源物的突变到莴苣品种Hofnar中,进行了与作为回交亲本的品种Hofnar的回交。为此目的,将通过使用如实施例2中所述的表型测试在孵育10天后显示减少的伤口诱导的表面变色的所选F2植物用作与Hofnar杂交的亲本。播种得到的BC1-种子,并将BC1-植物用作与Hofnar杂交的亲本以产生BC2-种子。播种20粒BC2-种子,并将它们各自自交以产生BC2.S1-种子。播种这20个BC2.S1-种子批次(即BC2.S1家族),每个种子批次20株BC2.S1植物,以选择BC2.S1家族,其对于F5H1基因同源物的突变和F5H2基因同源物的突变是分离的。为此目的,如实施例2中所述以10天的孵育时间用表型测试测试每个BC2.S1家族的20株植物中的每一株。在这十天后,选择BC2.S1家族,其显示出减少的伤口诱导的变色表型的分离。从这样的家族中选择具有减少的伤口诱导的表面变色表型的BC2.S1植物,并将其用作与Hofnar的BC3杂交的亲本。该BC2.S1植物也自交以产生BC2.S2-种子。将10个BC2.S2-种子生长成植物并如实施例2中所述在表型测试中进行测试,以确认所有这些中的减少的伤口诱导的变色,10天后,它们确实在表型测试中显示没有伤口诱导的变色或减少的伤口诱导的变色。这证实了F5H1基因同源物中的突变的纯合存在以及F5H2基因同源物中的突变的纯合存在。通过使用识别野生型和突变基因之间差异的分子标记,也可以进行植物的选择和所选基因型的确认。

播种所得的BC3-种子,并将BC3-植物用作与Hofnar杂交的亲本以产生BC4-种子。播种20粒BC4-种子,并将它们各自自交以产生BC4.S1-种子。播种这20个BC4.S1-种子批次(即BC4.S1家族),每个种子批次20株BC4.S1植物,以选择BC4.S1家族,其对于F5H1基因同源物的突变和F5H2基因同源物的突变是分离的。为此目的,如实施例2中所述以10天的孵育时间用表型测试测试每个BC4.S1家族的20株植物中的每一株。在这十天后,选择BC4.S1家族,其显示出减少的伤口诱导的表面变色表型的分离。从这样的家族中选择具有减少的伤口诱导的表面变色表型的BC4.S1植物,并且其可以用作与Hofnar的BC5杂交的亲本。该BC4.S1植物也自交以产生BC4.S2-种子,其中播种10粒种子以证实所有这些种子中的减少的伤口诱导的表面变色。植物的选择和所选基因型的确认也可以通过使用识别野生型和突变基因之间差异的分子标记来完成,例如,如实施例3中所述的基于SNP的标记。每种选择的植物的基因型也可以通过使用分子标记来确认。

在测试中将BC4.S2-种子播种,并将所得植物与在相同测试中生长的品种Hofnar的植物进行比较。通过这种方式确定BC4代是否与Hofnar足够相似,以供种植者在实践中使用。

实施例7

本发明的性状的分离分析

编号为15E238260的显示减少的伤口诱导的变色并且包含纯合状态的突变1(F5H1基因同源物中的C

将从F1种子生长的F1植物播种并自交以产生F2-种子。从F2种子生长的植物用于分析本发明性状的分离。

突变是在植物中纯合缺失、杂合存在或纯合存在的。表8中示出了本申请中的不同基因型及其名称。通过使用如实施例2中所述的叶盘测试评估减少的伤口诱导的表面变色,但是对于分离分析,叶盘取自幼苗(大约2周大)。每个叶盘的评分在表9中表示,并且作为实例,包含突变1和突变3的莴苣植物的叶盘在图6中表示。

表8:用于图6中所示的分离分析的植物的基因型的表示

表9:包含突变1和突变3的植物的F2群体的表型分析。植物的基因型如表8所示:

表9中的结果显示,为了显示减少的伤口诱导的表面变色,植物需要在F5H1基因同源物上携带突变1(F5H1基因同源物中的C

实施例8

整个莴苣头部的表型分析

在成熟阶段(约3个月大)收获莴苣植物,优选选择土地中间的植物用于表型分析。将收获的植物在5℃的冷却室中储存过夜,放在用塑料包裹的盒子中以避免干燥。然后在低温(约15℃)下切割植物。老叶、显示尖枯症状的叶和外叶从头部移除。包含突变1、突变1和突变2、突变1和突变3、突变1和突变4、突变1和突变5、突变1和突变6的植物以及野生型植物(Troubadour)的两个或三个植物头部被垂直切割成四个部分以去除核心,四个部分还水平切割2或3次。对于表型分析,用洗衣机洗涤100克切好的莴苣叶(使用气泡的洗涤步骤:3分钟,离心时间:最高速度2.5分钟),并在每次洗涤步骤后更换水。对于小规模洗涤,水应尽可能冷,并且洗涤应在大水槽中进行。将切好的和洗过的叶在沙拉旋转器中干燥。

将切好的叶装入没有乙烯的干燥塑料袋中,将其折叠2次并储存在盒子中并在5-6℃下储存。这些袋子没有重叠地放在一起。

图7显示了不包含经修饰的F5H基因同源物的野生型莴苣品种Troubadour(野生型)、包含突变1(F5H1基因同源物中的C

进行了另一项分析,其评估了洗涤后3、7和14天的伤口诱导的表面变色。结果表示在表10中。与野生型相比,包含突变1的植物显示出减少的伤口诱导的表面变色。与野生型和包含突变1的植物相比,包含突变1和突变3、4、5或6的植物显示减少的伤口诱导的表面变色。包含突变1和突变2的植物与包含突变1的植物在地14天显示相同的减少的伤口诱导的表面变色,但伤口诱导的表面变色比包含突变1的植物在7天时发展得更慢,包含突变1的植物评分为7,包含突变1和突变2的植物评分为8。

表10:在切割头部、洗涤叶并在5-6℃下将叶储存3、7和9或14天后整个莴苣头部的表型分析:

序列

蛋白

SEQ ID No:1

>Lettuce_LsF5H_1_1

MESLQIPIAFYAIIAILTFFFLSWVRRKPLPPGPMGWPIIGNMLMMDQLTHRGLARLAEKYGGILHLKMGFSHTIAVSSPEMARIILQEKDNIFANRPATIAITYLTYNGVDLAFANYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWDSVRDEVDTMVKATAINSGTPVNLGELVFGLTHDIIYRAAFGSISHEGKEEFIRILQEYTKLFGAFNLADFIPFLGFIDPAGLNTRLPAARAALDGFIDKIIDEHLRKGKKTGDEGLDNDMVDEMLAFYSEEGKVNEGGDLQNAINLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMTELMHTPEALKRVQQEMANVVGLDRRVEESDLEKLTYFKCVIKETLRLHPPIPVLLHQSSEATEVSGYHIPKGTRVMVNAYAINRDKNSWEDPDTFNPSRFLQNGAPDFRGSNYEFLPFGSGRRSCPGMQLGLYAMEMAVAHLLHCFTWELPDGMKPSEIDMGDVFGLTAPKAIRLVAVPTPRLLCPLY

SEQ ID No:2

>Lettuce_LsF5H_2_1

MDPKSILLYVVLPLLTFFLLSRLRRKPLPPGPRGWPLIGNMLMMDQLTHRGLARLGEKYGGLLHLKMGFSHTVAVSSPEIARQVLQVQDNIFANRPATIAISYLTYDRQDMAFANYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWDSVRDEVVSMVKITAASSGTAVNLGELVFGLTHDIIYRAAFGSISHEGKEEFIRILQEYTKLFGAFNLADFVPWLGFIDPAGLNTRLPKARAALDRFIDKIIDEHLAKERKTGDEEDNDMVDEMLAFYSEEGKVNEGEDLQNAIRLTRNNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWALTELMHTPESLKRAQQELADVVGLDRRVEESDFEKLTYFKCVIKETLRLHPPIPVLLHQSSEATSVAGYHIPKGTRVMVNAFAINRDKNSWKDPHTFNPSRFLQDGAPDFKGSNYEFLPFGSGRRSCPGMQLGLYAMEMAVAHLLHSFTWQLPDGMKPSEIDMNDVFGLTAPKAIRLVAVPTPRLLCPLY

SEQ ID No:3

>Endive_ce_gene1

MDYLQIPIPIYAIIAILTFFFLAWLRRKPLPPGPMGWPIIGNMLMMDQLTHRGLASLANKYGGILHLKMGFSHTIAVSSPEIARQILQEKDNIFANRPATIAITYLTYNRVDMAFANYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWDSVRDEVDTMVKATATNSGLPVNLGELVFGLTHDIIYRAAFGSISHEGKEEFIRILQEYTKLFGAFNLADFIPMLGFIDPAGLNTRLPAARAALDGFIDKIIDEHLSKEKKTGDENVDNDMVDEMLAFYSEDGRINEGGDLQNAINLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWTMTELMHTPEALXRVQQELTNVVGLDRRVEESDFEKLTYFKCVIKETLRMHPPIPVLLHQSSEATEVSGYHIPKGTRVMVNAYAINRDKXSWEDPDTFNPSRFLQNGAPDFRGSNYEFLPFGSGRRSCPGMQLGLYAMEMAVAHLLHCFTWDLPDGMKPSEIDMGDVFGLTAPKAIRLVAVPTPRLLCPLY

SEQ ID No:4

>Endive_ce_gene2

MDSLQIPIPVYAIIAILTFFFLAWLRRKPLPPGPIGWPIIGNMLMMDQLTHRGLASLAKKYGGILHLKMGFSHTIAVSSPEIARQILQEKDNIFANRPATIAITYLTYNRVDMAFANYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWDSVRDEVDTMVKATAINSGLPVNLGELVFGLTHDIIYRAAFGSISHEGKEEFIRILQEYTKLFGAFNLADFIPMLGFIDPAGLNTRLPAARAALDGFIDKIIDEHLSKEKKTGDENVDNDMVDEMLAFYSEDGRVNEGGDLQNAINLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWTMTELMHTPEALKRVQQELTNVVGLDRRVEESDFEKLTYFKCVIKETLRMHPPIPVLLHQSSEATEVSGYHIPKGTRVMVNAYAINRDKNSWEDPDTFNPSRFLQNGAPDFRGSNYEFLPFGSGRRSCPGMQLGLYAMEMAVAHLLLCFTWELPDGMKPSEIDMGDVFGLTAPKAIRLVAVPTPRLLCPLY

SEQ ID No:5

>Endive_ce_kethel_v0.1_EVM71979

MDPMSILLYVVLPLFTFFLLSRFRRKPLPPGPRGWPVIGNMLMMDQLTHRGLARLGEKYGGLLHLKMGFSHTVAVSSPEIARQVLQVQDNIFANRPATIAISYLTYDRQDMAFANYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWDSVRDEVVSMIKITAASSGSAVNLGELVFGLTHDIIYRAAFGSISHEGKEEFIRILQEYTKLFGAFNLADFIPWLGFIDPAGLNNRLPKARAALDGFIDKIIDEHLRKEKKTGDEEDNDMVDEMLAFYSEEGKVNEGEDLQNAIRLTRNNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWALTELMHTPESLKRAQQELVDVVGLDRRVEESDFEKLTYFRCVIKETLRLHPPIPVLLHQSSEATEVAGYHIPKGTRVMVNAFAINRDKNSWKDPHTFNPSRFLQDGAPDFKGSNYEFLPFGSGRRSCPGMQLGLYAMEMAVAHLLHSFTWQLPDGMKPSEIDMSDVFGLTAPKAIRLVAVPTPRLLCPLY

SEQ ID No:6

>Chicory_ci_vitessa_fr_v1_EVM170737

MDSLQIPIPVYAIIAVLTFVFVAWLRRKPLPPGPMGWPIIGNMLMMDQLTHRGLASLAKKYGGILHLKMGFSHTIAVSSPEIARQILQEKDNIFANRPATIAITYLTYNRVDMAFANYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWDSVRDEVDTMVKATATNSGLPVNLGELVFGLTHDIIYRAAFGSISHEGKEEFIRILQEYTKLFGAFNLADFIPMLGFIDPAGLNTRLPAARAALDGFIDKIIDEHLSKEKKTGDENVDNDMVDEMLAFYSEDGRINEGGDLQNAINLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWTMTELMHTPEALKRVQQELTNVVGLDRRVEESDFEKLTYFKCVIKETLRMHPPIPVLLHQSSEATEVSGYHIPKGTRVMVNAYAINRDKNSWEDPDTFNPSRFLQNGAPDFRGSNYEFLPFGSGRRSCPGMQLGLYAMEMAVAHLLHCFTWELPDGMKPSEIDMGDVFGLTAPKAIRLVAVPTPRLLCPLY

SEQ ID No:7

>Chicory_ci_vitessa_fr_v1_EVM170780

MDSLQIPIPVYAIIAILTFFFLAWLRRKPLPPGPMGWPIIGNMLMMDQLTHRGLASLAKKYGGILHLKMGFSHTIAVSSPEIARQILQEKDNIFANRPATIAITYLTYNRVDMAFANYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWDSVRDEVDTMVKATAINSGLPVNLGELVFGLTHDIIYRAAFGSISHEGKEEFIRILQEYTKLFGAFNLADFIPMLGFIDPAGLNTRLPAARAALDGFIDKIIDEHLSKEKKTGDENVDNDMVDEMLAFYSEDGRVNEGGDLQNAINLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWTMTELMHTPEALKRVQQELTNVVGLDRRVEESDFEKLTYFKCVIKETLRMHPPIPVLLHQSSEATEVSGYHIPKGTRVMVNAYAINRDKNSWEDPDTFNPSRFLQNGAPDFRGSNYEFLPFGSGRRSCPGMQLGLYAMEMAVAHLLHCFTWELPDGMKPSEIDMGDVFGLTAPKAIRLVAVPTPRLLCPLY

SEQ ID No:8

>Chicory_ci_vitessa_fr_v1_EVM158591

MDPMSILLYVVLPLFTFFLLSRLRRKPLPPGPRGWPVIGNMLMMDQLTHRGLARLGEKYGGLLHLKMGFSHTVAVSSPEIARQVLQVQDNIFANRPATIAISYLTYDRQDMAFANYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWDSVRDEVISMIKITAASSGSAVNLGELVFGLTHDIIYRAAFGSISHEGKEEFIRILQEYTKLFGAFNLADFIPWLGFIDPAGLNTRLPKARAALDGFIDKIIDEHLSKEKKTGDEEDNDMVDEMLAFYSEEGKVNEGEDLQNAIRLTRNNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWALTELMHTPESLKRAQQELADVVGLDRRVEESDFEKLTYFRCVIKETLRLHPPIPVLLHQSSEATEVAGYHIPKGTRVMVNAFAINRDKNSWKDPHMFNPSRFLQDGAPDFKGSNYEFLPFGSGRRSCPGMQLGLYAMEMAVAHLLHSFTWQLPDGMKPSEIDMSDVFGLTAPKAIRLVAVPTPRLLCPLY

SEQ ID No:11

>Celery_RZ_draft_99.605_EVM363634

MSLLFILLLTIISMIFFISRFGGKPYPPGPRRLPVIGNTLMMACLTHRGLAKLASRYGGLFYLRMGAQDIVVVSTPDMARQILQTHQDQISNRPTSIALDYLSYGRANMAFADYSPWWRQMRKICVMKLFSRARVESWNSVRDELNHMLRDVASNANQAINLGELVFGFTEKIIYRAAFGSRLSDGGTEFIKIMQEFSKLFGSFNVCDFVPWMSRADPQGLKARLRKARGSLDTFIDSIIDQHIIKRKGKNIGDKDMVDELLAFYTEEGEAKAESDDLQATIKLTKNNIKGIIMDIMFGGTETVAAAIEWAMSELLKNPEELRKTQEELSNVVGLHRCVEEGDLEKLTYLKCVLKETLRLHPPLPFLPRAAAEDVYVAGYYIPAGSRVIINLWAMGHDGKCWNDEPEAFKPSRFLDVGAPDYRNNNFEFIPFGTGRRSCPGMQLGLHAFEMGLAHLLHCFNWELPDGMKPSQVDMSDMYGLSAPKATRLIAVPTPRLLCPIC

SEQ ID No:12

>Celery_RZ_draft_99.605_EVM348724

MTTIFFFLLLLCLFLARRKPYPPGPKGWPIIGNMLIMDKLTHRGLAKIATQYGGIVHLRMGFLHMVTVSTPDMVREVLQIQDTVFANRPATMNISYLTYNRADMAFANYGPFWRQMRKISIIKLFSRKRAESWDSVRDQVDDMLGKVVSNSGLSVNIGELVFGLTRNIIYRAAFGSISGQGQDEFIKIMQEFSKLFGAFNICDFVPGITWLDPQGFKVRLVKARESLDKFIDSILDEHIANQKSNLNGSTDEGNGDMVYQLLAFYSEEQSKVNHSDDTNNALKLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMSELMGSPEDLKRVQQELIDVVGLHRRVEENDFDKLIYLKCCIKETLRLHPPIPLLLHETAQEAVVAGYHIPAKSRVMINSWAVNRDPNSWDDPEKFKPSRFLKQGMPDFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMQLGLYAFEMAVAHLLHSFNWELPDGMKPSELDTNDVFGLTAPRATRLVAVPTPRLLCSIC

SEQ ID No:13

>Celery_c17480_g1_i1|m.26831

METNTTAMTILFFILPLLSFFLLSSFRRKRYPPGPKGWPIIGNLLMMDKLSHRGLAKLAAQYGGLVHLRMGFLHMFTVSTPDMAREVLQIQDNIFANRPATMNISYLTYDRADMAFANYGPFWRQMRKISVMKLFSRKRAESWDSVREEVDDMVKIVLSKTGCSVNIGELVFGLTRNIIYRAAFGTLSHEGQDEFIKILQEFSKLFGAFNICDFVPGLTWADPQGFMGRVVKARASLDGFIDSIIDAHIEKKKSSKNGIIDEGNSDMVYELLDFYGEEKAKVSEFEDQNSSLKLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMSELMRSPKDLKKVQQELVNVVGLHRRVEESDFDKLTYLKCCIKETLRLHPPIPLLLHETAQDAEVAGYHIPARSRVIINSWAINRDPNSWTDPDTFKPSRFLQEGMPDFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMQLGLYALEIAVAHLLHCFNWELPDGMKPSEVDTDDVFGLTAPRATRLVAVPTPRLLCPIS

SEQ ID No:14

>Brassica_Bo1g005770

MESSISQTLSQVLDPTTGILIVVSLFIFIGLITRGRRPPYPPGPRGWPIIGNMSMMDQLTHRGLANLAKKYGGLCHLRMGFLHMYAVSSPDVARQVLQVQDSVFSNRPATIAISYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKVCVMKVFSRKRAESWASVRDEVDRMIRSVSSNVGKSINVGEQIFALTRNITYRAAFGSACEKGQDEFIRILQEFSKLFGAFNVADFIPYFGWIDPQGINKRLVKARNDLDGFIDDIIDEHIKKKENQNSIDAGDVVDTDMVDDLLAFYSEEAKLVSETADLQNSIKLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWALTELLRSPEDLKRVQQELAEVVGLDRRVEESDIEKLTFLKCTLKETLRLHPPIPLLLHETAEDTEIDGYFVPKKSRVMINAFAIGRDKNSWVDPETFRPSRFLEPGVPDFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMQLGLYALELAVAHILHCFTWKLPDGMKPSELDMSDVFGLTAPKATRLYAVPSTRLICSV

SEQ ID No:15

>Brassica_Bo7g117840

MESSVSQTLSQVLDPTTAILIVVSLFIFIGLITRRRRSYPPGPRGWPIIGNMLMMDQLTHRGLANLAKKYGGLCHLRMGFLHMYAVSSPDVARQVLQVQDSIFSNRPATIAISYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKVCVMKVFSRKRAESWASVRDEVDKMIRSVSSNVGKSINVGEQIFALTRNITYRAAFGSACEKGQDEFIRILQEFSKLFGAFNVADFIPYFGWIDPQGINKRLVKARNDLDGFIDDIIDEHMKKKENQNTVDDGYVGDTDMVDDLLAFYSEEAKLVSETTDLQNSIKLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWALTELLRSPEDLKRVQQELAEVVGLDRRVEESDIEKLTFLKCTLKETLRLHPPIPLLLHETAEDTEIDGYFVPKRSRVMINAFAIGRDPKSWPDAETFRPSRFLEPGVADFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMQLGLYALELAVAHILHCFTWKLPDGMKPSELDMNDVFGLTAPKATRLFAVPSTRLICAV

SEQ ID No:16

>Brassica_Bo7g119430

MDCLLCSPILYVVLIFLWYLVRVLLTRSNPFPPGPKGYPIIGNMKLKNQLNHRGLAELAKQYGGLLHLQMGRIHIVAASTAEMAREILQVQDVVFANRPANVAISYLTYNRADMAFANYGPLWRQMRKVCVMKLFSRKRAESWASVRDEINTMVQTLTKQTGSPVNVGELVFALTRNITYRAAFGSFARDGQDEFVKILQEFSKLFGAFDITEFLPWMKWFSNRDFSKRLENARKSLDGFIDRIIDAHIEKKNSRKQDDDGLEDDMVDELMAFYSGESGENGGKSNDSLSSFKLTRDNIKALVMDVMFGGTETVASAIEWAMTELMKNPHELVKLQQELADVIGLNREFHESDLENLPYFRCAMKETLRLHPPIPLLLHEAAADSVVSGYSIPRDSRVMINVYAIGRDGSVWTEPDAFRPGRFMDSKAPDFKGSDFEFLPFGSGRRSCPGMQLGLYAMELAVAHMLHSFDWELPEGGSSDDLDMTDMFGLTAPRATRLIAVPSYRLKCPMVI

SEQ ID No:17

>Brassica_Bo3g093960

MESLLSQTLNQVIDPTPSVLLITISLLVVVYLISQWFKPLYPPGPKGLPVIGNMLMMDQLTHHGLAKLAHKYGGLFHLRMGFRHVFAITSPDVARQVLQVQDISFSNRPVNVAINYLTYDLADMAFAPYGPFWREMRKVCVMKVFSRKRTESWASVREEVNNMVRSFSSNVGKPVNVGELIFTLTRNITYRAAFGAACETEQDEFIRILQEFSKLFGAFNIADFIPFLGWFDFQGINKRLVKARNDLDGFIDEVIDEHMKKRETVNVDEDTDMVDDLLAFYSEDSSTNRNKNTVKLTRDNIKALVMDVMFGGTETMASGIEWALTELLRNPAELKRLQQELTEVVGLDRRVDDTHLEQLTFLKCTLKETMRLHPPIPLILHEAIEDRKLQGFFVPKGSRLMINAFAIARDPKLWVDPEAFRPSRFMEPGMPDFMGTNFEFIPFGAGRRSCPGMQLGLYAMEVAVANIIHCFTWKLPDGMKPSELDMSDVMGLTAPRATRLIAVPDTRLICPVYP

SEQ ID No:18

>Brassica_XP_013607401.1

MYTLMTLILLVPLLLFLFRHLLSRRLRQRKPYPPGPKGLPIIGNILMMNQFNHRGLAKLSRTYGGLLHLRLGISHLFVVSSPQIARQVLQVQDHVFSNRPTTIAIRYLTYGQSDLAFCNYGPFWRRMRKLYVMMLFSRKRAESWASVDEEVHKAVRSVAANVGKPLNVCKVAFSLTRDITFRAAFGSSSSSSNEGRLDEFLEIIQEFSKLFGEFNVADYVPSWLSWIDPQGINKRVEKARKSLDCFIESIINDHLDKKKTEKNVNVDEVTDMVDQLLAFYKEEVKVKDSETKINLDNIKGIIMDVMFGGTETVALAIEWVLTELLRSPENMKRVQDELATVVGLERWSVEDTHLEKLSFLKCVLKDTLRLHPPFPLLLHETVEEAEVSGYFIPKGSRVMVXTYALGRDPASWSDPEIFNPSRFLDPGAPDLKGNSFEFIPFGSGRRSCPGMQLGMYAFELAVAHLLHCFTWRLPDGVKFGDVDTIEGPGLTVAKANSLVAVPIKRLLCPMVLESHNV

SEQ ID No:19

>Eggplant_c18725_g1_i1|m.19489

MKEMVQKNINSILEALQANPMLLFLFIIPLFFLYLFSTSSRRRYPPGPRGWPLIGNMMIMDQLTHRGLAKLAEKYGGVMHLKMGYIHKIVISGPEEARQVLQVQDNIYSNRPATVAISYLTYDRADMAFADYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWDSVRDEVDSLIKIVTTNAGTSVNLGELVFGLTRDIIYRAAFGTSSAEGQEEFIKILQEFSKLFGAFNMVDFIPWLGWIGQQGLNVRLANARASLDGFIDSIIDDHIERKKANVTIDNGDRETDMVDELLAFYSEEATVNESEDNLQNAIRLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWVMAELVKNPEELKKVQQELANVVGLNRRVEESDLEKLTYLKCCLKETLRLHPPIPLLLHETAEESTIFGYHIPAGSHVVINSFAIGRDKNSWEDADSYKPSRFLKQGVPDFKGGNFEFLPFGSGRRSCPGMQLGLYALEMAVAHLLHCFTWELPDGMKPSELKMDDTFGLTAPLANRLVVVPSPRLLCTLY

SEQ ID No:20

>Eggplant_sm_67_3_v1_EVM112823_1_

MKEIIQNNTFFILTTKETNLMMPLYFIFPIFIFFFFTISRLNKKNFPPGPKGWPIIGNMMMMDQLTHHGLAKLAKKYGGILHLQMGYLQMTVVSSPAEAREVLQLQDTIFANRPTTIAVEYLSYARADMAFANYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWDSIRDEVESMTMAVATRVGSSVNIGELVFGVAKNIIYRAAFGTCSNRGQDELLNIMQEFSKLFGAFNLADFIPWLGWVDPQGLNKMIIKARASLDGFIDTIIDDHIQRKKTNNYNDEGNNNDMVDELLAFYGEKTKLNDSDDLTNALRLTRDNIKSIIMDIMFGATETVASAIEWAMAELMKSPEDLKMVQQELANVVGLHRKVEEMDFEKLIFLKCCIKETLRLRPPIPLLVHESVEDTTINNYYIPAKSRVIVNAWAIGRDKNSWDDPESFKPSRFLKEGVADFKGGDFEFLPFGSGRRSCPGMQMGLYAFEMTLAHLLHCFNWELPNGMKPSDIDMNDVFGLTVPKATRLVAVPTPRLLCQLY

SEQ ID No:21

>Potato_XP_006340697.1

MKEMVLNNINSTLEALQAQPMLLFFFIIPLFFLYLFSTSRRKRYPPGPLGWPLIGNMMMMDQLTHRGLAKLAQKYGGVFHLKMGYVHKIVISGPEEARQVLQVQDNIYSNRPKTVAISYLTYDRADMAFADYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWDSVRDEVDSMVKIVTTNTGTSINLGELVFCLTRNIIYRAAFGTSSDEGQDDFIKILQEFSKLFGAFNMADFIPWLRWIGQQGLNVRLAKARASLDGFIDSIIDDHIERKKANVINDDGYRESDMVDELLAFYSEETKVNESEDLQNSIRLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMAELMKSPEDLKKVQQELANVVGLNRKVDESDFEKLTYLKCCLKETLRLHPPIPLLLHETAEESTVSGYYIPAKSHVIINSFAIGRDKNSWEDPDSFKPSRFLKEGVPDFKGGNFEFLPFGSGRRSCPGMQLGLYALEMAVAHLLHCFTWELPDGMKPSELKMDDIFGLTAPLANRLVAVPTPRLLCNY

SEQ ID No:22

>Apple_XP_008372753.1

MDYLLQSLQPLQSMTPLLLIIPLLFLLPLIFRFRRPPPYPPGPKGLPLIGNMLLMDQLTHRGLAKLAKKYGGIFHLRMGFLHMVAISNPDVARQVLQVQDNIFSNRPATIAISYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWESVRDEVDSSVRTVTVHVGSAVNIGELVFSLTKNIIYRAAFGTSSQEGQDEFIGILQEFSKLFGAFNIADFIPSLGWVDPQGLNNRLAKARESLDRFIDTIIDDHMEKKRNGKGVSDGETDMVDELLAFYSEEAKVYESEDNLQNAIKLTRDNIKAIIMDVMFGGTXTVASAIEWAMSELMKSPEDLKRVQQELADVVGLDRRPEETDFEKLTYLKCALKETLRLHPPIPLLLHETSEDAVVAGYRIPKRSRVMINAWAIGRDKDSWEDAESFKPSRFLKEGVPDFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMQLGLYALEMAVAHLLHCFTWELPDGMKPSELDMNDVFGLTAPRASRLIAVPSKRVVCPL

SEQ ID No:23

>Apple_XP_008337913.1

MDSLLQSLQPLKSMTPLVFIIPLLFLLPLIFCFRRRPPYPPGPKGLPLFGNMLMMDQLTHRGLAKLAKQYGGIFHLRMGFLHMVAISNPDVARQVLQVQDNIFSNRPATIAISYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKLCVMKIFSRKRAESWESVRDEVDTAVRTVTVHVGSAVNIGELVFSLTKNIIYRAAFGTSSQEGQDEFIGILQEFSKLFGAFNIADFIPSLGWVDPQGLNNRLAKARESLDRFIDTIIDDHMEKKKKNNKGLNDGETDMVDDLLAFYSEEAKVNESEDNLQNAIKLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMSELMKNPEDLKRVQQELLNVVGLDRRPEEADFEKLTYLKCALKETLRLHPPIPLLLHETSEDAVVAGYHIPKKSRVMINAWAIGRDKDSWEDPESFKPSRFLKEGVPDFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMQLGLYALEMAVAHMLHCFTWELPDGMKPSELDMNDVFGLTAPRASRLVAVPSKRVVCPL

SEQ ID No:24

>Apple_XP_008391587.1

MELLHQALQSLQSSPMLLILLLLLLIISFIFLFNSRRKPPYPPGPKGWPIIGNMLMTDQLTHRGLAHLAKQYGGLLHLQMGVIHVMAVSTPDMAREILQSQDSLFANRPANVAISYLTYDRADMAFANYGPFWRRMRKICVINLFSRKRAESWASVREEVDEMVQTVAGKTGSPVNIGQLVFALTRNITYRAAFGSSSHEGQGEFVQILQEFSKLFGAFNMQDFLPWLGWVHAQGFQDRMARARKSLDVFIDKIIDDHMAKRKANMEKDDSEAADTDMVDELIAYFSDDAGKEGDDPNSGFKLTRDNIKALIMDVMFGGTETVASVIEWTMAELMKSPEDLKRVQQELTDVVGLNRRLQETDLENLTYLKCAVKESLRLHPPIPLLLHETVEDTSVAGYSFPAGSRVWINAWAIARDPTAWDEPETFKPSRFLEDSSPDFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMALGLYGLEMAVAHLLHCFAWELPGGMKPSELDMNDVFGLTAPKAVQLVAVPTYRLNCPL

SEQ ID No:25

>Pear_XP_009378215.1

MDSLLQSLQALQSMTPLLLIIPLLFLLPLIFRFRRPPPYPPGPKGLPLIGNMLLMDQLTHRGLAKLAKKYGGIFHLRMGFLHMVAISNPDVARQVLQVQDNIFSNRPATIAISYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWESVRDEVDSAVRTVTVHVGSAVNIGELVFSLTKNIIYRAAFGTSSQEGQDEFIGILQEFSKLFGAFNIADFIPSLGWVDPQGLNNRLAKARESLDRFIDTIIDDHMEKKRNGKGVSDSETDMVDELLAFYSEEAKVNESEDNLQSAIKLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMSELMKSPEDLKRVQQELADVVGLDRRPEETDFEKLTYLKCALKETLRLHPPIPLLLHETSEDAVVAGYRIPKRSRVMINAWAIGRDKDSWEDAESFKPSRFLKEGVPDFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMQLGLYALEMAVAHLLHCFTWELPDGMKPSELDMNDVFGLTAPRASRLIAVPSKRVVCPL

SEQ ID No:26

>Pear_XP_009338655.1

MDSLLQSLQPLQSMTPLLLIIPLLFLLPLIFRFRRPPPYPPGPKGLPLIGNMLLMDQLTHRGLAKLAKKYGGIFHLRMGFLHMVAISSPDVARQVLQVQDNIFSNRPATIAISYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWESVRDEVDSAVRTVTVHVGSAVNIGELVFSLTKNIIYRAAFGTSSQEGQDEFIGILQEFSKLFGAFNIADFIPSLGWVDPQGLNNRLAKARESLDRFIDTIIDDHMEKNRNGKGVSDSETDMVDELLAFYSEEAKVNESEDNLQSAIKLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMSELMKSPEDLKRVQQELADVVGLDRRPEETDFEKLTYLKCALKETLRLHPPIPLLLHETSEDAVVAGYRIPKRSRVMINAWAIGRDKDSWEDAESFKPSRFLKEGVPDFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMQLGLYALEMAVAHLLHCFTWELPDGMKPSELDMNDVFGLTAPRASRLIAVPSKRVVCPL

SEQ ID No:27

>Pear_AGR44939.1

MDSLLQSLQPLKSMTPLVFIIPLLFLLPLIFRFRRLPPYPPGPKGLPLIGNMLMMDQLTHRGLAKLAKQYGGIFHLRMGFLHMVAVSNPDVARQVLQVQDNIFSNRPATIAISYLTYDRADMAFAYYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWESVRDEVDSAVRTVTVHVGSAVNIGELVFSLTKNIIYRAAFGTSSQEGQDEFIAILQEFSKLFGAFNIADFIPSLGWVDPQGLNNRLAKARESLDRFIDTIIDDHMEKKKNNKGLNDGETDMVDELLAFYSEEAKVNESEDNLQSAIKLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMSELMKSPEDLKRVQQELADVVGLDRRPEETDFEKLTYLKCALKETLRLRPPIPLLLHETSEDAVVAGYRIPKRSRVMINAWAIGRDKDSWEDAESFKPSRFLKEGVPDFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMQLGLYALEMAVAHLLHCFTWELPDGMKPSELDMNDVFGLTAPRASRLIAVPSKRVVCPL

SEQ ID No:28

>Pear_XP_009346304.1

MDSLLQSLQPFTSMTPLVFIIPLLFLLPLIFRFRRLPPYPPGPKGLPLIGNMLMMDQLTHRGLAKLAKQYGGIFHLRMGFLHMVAVSNPDVARQVLQVQDNIFSNRPATIAISYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWESVRDEVDTAVRTVTVHVGSAVNIGELVFSLTKNIIYRAAFGTSSQEGQDEFIAILQEFSKLFGAFNIADFIPSLGWVDPQGLNNRLAKARESLDRFIDTIIDDHMEKKKNNNKGLNDGETDMVDDLLAFYSEEAKVNESEDNLQNAIKLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMSELMKSPEDLKRVQQELFNVVGLDRRPEEADFEKLTYLKCALKETLRLHPPIPLLLHETSEDAVVSGYHIPKQSRVMINAWAIGRDKDSWEDPESFKPSRFLKDGVPDFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMQLGLYALEMAVAHMLHCFTWELPDGMKPSELDMNDVFGLTAPRASRLVAVPSKRVVCPL

SEQ ID No:29

>Pear_XP_009378429.1

MELLRQALQSLQSSPMLLILLLLLVISLIFLFNSRRKLPYPPGPKGWPIIGNMLMTDQLTHRGLAHLAKQYGGLLHLQMGAIHVIAVSTPDTAREILQVQDSSFANRPANIALSYLTYDRADMAFANYGPFWRRMRKICVINLFSRKRAESWASVREEVNEMVQTVAGKTGSPVNIGQLVFALTRNITYRAAFGSRSHEGQGEFVKILQEFSKLFGAFNMQDFLPWLGWVHAQGFQDRMARARKSLDVFIDKIIDDHMAKRKANTENKDDSEAADTDMVDELIAYFSDDAGKEGDDPNSGFKLTRDNIKALIMDVMFGGTETVASVIEWTMAELMKSPEDLKRVQQELTDVVGLNRRLQETDLENLTYLKCAVKESLRLHPPIPLLLHETVEDTSVAGYSFPAGSRVWINAWAIARDPTAWDEPETFKPSRFLDDGSPDFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMALGLYGLEMAVAHLLHCFAWELPGGMKPSELDMNDVFGLTAPKAVQLVAVPTYRLNCPL

SEQ ID No:30

>Peach_XP_007199246.1

MDDLLLHQALESLQSSPMLFILLFLLIISWFVLFMSRRKLPYPPGPRGWPIIGNMLMMDQLTHRGLAQLAKQYGGLLHLQMGVLHIMVVSSPKVAREILQVQDSSFANRPANAAISYLTYDRADMAFANYGPFWRRMRKICVINLFSRKRAESWASVREEVEEMVRHVATKTSSPVNIGQLVFTLTKNITYRAAFGSSSHEGQGEFVKILQEFSKLFGAFNMQDFLPWLGWVHAQAFKDRMAKARRSLDVFIDKIIDDHMAKRNTNKAKKDDNEAETDMVDELIAFFSDDAAKESDDPNSTFRLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASVIEWTMAELMKSPEDLQKVQQELINVVGLNRRVQETDLENLTYLKCAVKESLRLHPPIPLLLHETAEETSVAGYSFPVGSRVYINAWAIARDPTAWDEPETFKPSRFLKDGSPDFKGSDFEFLPFGSGRRSCPGMQLGLYGLEMAVAHLLHCFAWELPEGMKPNELDMNDVFGLTAPKAVQLVAVPSYRLNCPL

SEQ ID No:31

>Peach_XP_007203643.1

MDSLLQALQPLQPMTLFFIIPFLFLSGLVFLYRSRRRSPYPPGPTGLPIIGNMLMMDQLTHRGLAKLAKQYGGIFHLRMGFLHMVGISNPDVARQVLQVQDNIFSNRPATIAISYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWDAVRDEVDTAVRTVAVQAGSAVNIGELVFSLTKNIIYRAAFGTSSEEGQDEFIGILQEFSKLFGAFNIADFIPCLGWVDPQGLNNRLARARQSLDRFIDSIIDDHIQKKKKKKSEGSNGGETDMVDELLAFYSDEAKVNESDDNLQNAINLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMAELMRNPEELKRVQQELADVVGLDRRPEEGDFEKLTYLKCALKETLRLHPPIPLLLHETAEDAEVAGYHIPKKSRVMINSWAIGRDKDSWEDAESFKPSRFLKEGVPDFKGSNFEFLPFGSGRRSCPGMQLGLYSLELAVGHLLHCFTWELPDGMKPSELDMNDVFGLTAPRASRLIAVPSKRVVCPL

SEQ ID No:32

>Banana_XP_009384541.1

MEWSEEVTPLHFMVCFALPLVLLYVVATRRRGKLPFPPGPPQLPVIGNMLMMDQLTHRGLAKLGEHYGGLCHLRLGFLHAFAVSTPEIARQVLQVQDNVFSNRPATIAISYLTYNRADMAFAHYGPFWRQMRKLCVMKLFSKKRAESWASVREEVDVAVRSLADRAGSAVNVGELLFNLTKNIIFRAAFGTQSHENQNEFISILQEFSKLFGSFNIGDFIPWLSWMDPQGINKRLKVARASLDRFIDKIIDEHMANRKEADASDADMVDDMLAFLDESGYRCQAGERDDLQGTLKLTRNNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMAELMKSPEDMKRVQQELAHVVGLDRKVHESDLDKLSFLKCVTKETLRLHPPIPLLLHETAEDCEVAGYTVPARSRVMINVWAIGRDKSSWEDADAFRPSRFTPGGCAASLDFKGNYFEFLPFGSGRRSCPGMQLGLHALELAVAQLIHCFTWTLPDGMKPSELDMGDVFGLTAPRAVRLAAVPAPRLSCPLY

SEQ ID No:33

>Banana_XP_009384087.1

MEWLEEVTSMRFVVCVVVPVTLLLAASTRWRRKLPFPPGPTPLPIVGNMLMMGQLTHRGLAKLSERFGGLCHLRLGFVHVFAVSTSEIARQVLQVQDAVFSNRFATIAITYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKLCVMKLFSKKRAVSWASVREEVDAAVRAVTDGAGAAVNLGELMFNLTKNITFRAAFGTQSHENQEEFIAILQEFSLLFGAFNIGDFIPWVSWMDLQGINKRFKVAREALDGFIDKIIEEHMANPKEADAEDSDMVDEMLAFFEESRDRTKENEADELQRTLRLTRNNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMAELMKNPEDMRRVQEELASVVGLHRKVRESDLDKLPHLKCAVKETLRLHPPIPILLHETAEDCQLTGYAVPARSRIMINVWAIGRDKSAWEDAEVFRPSRFAPGGEAAALDFKGGCFEFLPFGSGRRSCPGMQLGLHALELAVAQLTHCFSWELPDGMKPGELDMGDMFGLTAPRAVRLVAVPTPRLTCPLY

SEQ ID No:34

>Banana_XP_009411495.1

MVWVEEVTSMHLILLCLMLPLTLLLIVNIAARRRRRLPLPPGPTPLPIIGNMLLMNQLTHRGLARLAKLYGGLLHLRLGFVHHFVVSTPDVARQVLQVQDSVFSDRPATTAIVYLTYNRSDLAFAQCGPYWRQMRKLCVTKLFSRKHAESWLSIPEEVDAAVCTVAKHAGSAFNVRDLAFTLTKNIVFRSAFGKRSDENQEEYIAVVQEIATLLGAFSVGDFIPWLSWMDPQGINKRLRVARATLDLFIDRIIDEHMATDAANADMVGVMLAFLEESSHHHRQEEGDDLKGTLRLSRANIRAVMMDVMFGGTETVAIAIEWALADLLTSPDDLKRVQEELAMVVGLDRKVHESHLDKLSFLKCAIKETLRLHPPFPLLLHQTADHCEVAGYSIPARSPVMINVWAIGRDESAWKDADAYRPSRFAPGGDAAALDFKGNCFEFLPFGSGRRSCPGMQLGMHELELAVAQLLHCFTWALPDGMKPTELDMGDVFGLSAPKAVPLVAVPTPRLSCPLN

SEQ ID No:35

>Banana_XP_009403617.1

MDWFHQLSFMVASVFIPLALLSFFCMRSGRKLLLPPGPQPLPIIGNMLMMDQLTHRGLARLAERYGGLFHLRLGSLHAVVVSTPEMARLVLQVQDASFCNRPVTAAIAYLTYDRADMAFANYGPFWRQTRKLCVMKLFSRRRLQSWASVRQEVDSAVRFAARRSGSSVDVGDLAFTLAKNVTFMAAFGAQSHGNQGEFAGILQEYSKLFGEFNISDFLPWLRWMDLQGIDKRLKVARQAIDRYIDVIIDDHLANPKEADAQDADMVDGMLAFLGDSGDTNEGGDLHGDLSLTRSNIKAIIMDVMFGGTETVALGIEWAMAELLKSPEELKRTQQELASVVGLHRKVDDSDLDKLPYLKCAVKEMLRLHPPLPLLQHQATQDCELAGYFIPVGTRVFVNAWGIGRDRDAWKSPNAFRPSRFALGGDAAAFDFRGSCFELLPFGSGRRSCPGMQLGLYVLELAVAQLLHCFDWSLPAGTKPGDLDMGDVFGLTAPKAVRLMAVPTPRLTCPLL

SEQ ID No:36

>Wheat_A0A077RPS5

MATFAKIAMELLADPLMWLFLASLALVAMQRRRLGSAPFPPGPKPLPVIGNMTLVDQLTHRGLAALAKQFGGLLHLRFGWLHVLAVSTPEYAREVLHAQDGVFSNRPATIAVVYLTYGRDMAFAHNGAYWRQMRKLCVTKIFSRRRAETWLAVREGYGALAREVGRRSGEAVNLGELIFNLTVSVIFRAAFSTCDEDGLIEFIAILQEFSRLLGLFHIGDFFPWLAWVGRRGFNRRLSTARGALDRFIDKIVDEHMRRGKDPADPDADLVDGLLGFLADANPREDALRFTRDNVKAMIMDMLFGGPETVGSTTEWAMAEMMRSPDELERLQQELADVVGLDRAVEESDLDKLPFLRCVVKEALRMHPPIPVLLHEAAKDCVVGGYSIPRGSRVLVIAWAINRDCGAWKDGDTFRPARFIPGEGEAAGLDLKGSCYEFLPFGSGRRSCPAQGLGQHAVEFAVAQLAHGFNWKLPDGMKPAELDMGDIFGLTASRSTRLYAVPTPRLTCPV

SEQ ID No:37

>Wheat_W5A2I1

MAAYAKVGTEFLKDPLIWLFLASLAFVILQRRRLGSAPFPPGPKPLPVIGNMALVDQLTHRGLAALAKQYGGLLHLRLGRLHVYAVSTPEYAREVLHVQDAALSNRPATIAVVYLTYGRSDMAFAHNGAYWRQMRKLCVTKIFSRRRAETWLAVREGYGALACAVSRRCGEAVNLGELIFNLTVSVIFRAAFSTRDEDGLDEFIAILQEFSSLLGLFHIGDFFPWLGWVGRRGFNRRLRTARGALDKFIDRIIDEHMKRGKNAADPEADLVDGLLAFLAEANPISGKHREDALRFTRDNAKAMIMDMLFGGPETVGSMTEWAMAEMMRSPDDLRRLQRELANVVGLHRTVDETDLDKLPFLRCVVKEALRMHPPIPLLLHEAAKDCFVGGYSVPKGSRVLVNAWAINRDPGAWKDGDTFRPSRFMPGEGEAAELDLNGGCYEFLPFGSGRRSCPAQGLGQHAVEFAVAQLAHGFNWELPDGMKPAELDMGDIFGLTALRATRLYAVPTPRLTCPM

SEQ ID No:38

>Wheat_W5B6W3

MVGLAKIAMDWLQEPLSWLFVASFVFVVLQRHRQRLRGKAPPLPPGPSPLPIVGNMFMMDQLTHRGLAALARQYGGILHLRLGQVHAVVLSTPEYAQEVLQAQDVAFSNRPATVAAIYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKLCVMKLFSRRRAGTWLAVRDESAALVRAVARRSGESVNLGELIFNLTKNVTFRAAFGADAAGDAGKRDEFIAIMQEFSQLFGGSSIGDFIPWLGWVDQGLNVRARTARAALDEFIDKIIDEHMRRGKNPDDVDADMVDDMLAFLPEAKPKKDAGDDLQNSLHLTRDNIKAMIMDVMFGGTETVASGIEWAMTEMMHSPDDLRRLQQELADVVGLDRNVDESDLDKLPFLKCVIKETLRLHPPIPILHHENAEDCVVGGYSVPRGSSVMINVFAIGRDAKVWKDADTFRPSRFMTGEGEAARVDFKGSCFEFLPFGSGRRSCPGMALGIYSLEFAVAQLAHGFSWALPDGMKPSELDMTDIFGLTAPRATRLCAVPTPRLTYPLISDVDATHKGNT

SEQ ID No:39

>Wheat_A0A077RQ37

MVGLTKIAMEWLQDPLSWLFVASVVFVMLQRRRRRGRAPPLPPGPNPLPIVGNMSMMDQLTHRGLTALAKKYGGFLHLRLGKVHAFAVSTPEYAQEVLQVQDAAFSNRPASLAATYLTYDRADMAFAHHGPFWRQMRKLCVMKLFSRRRPETWLAVRNESAALVRAVARRSGETVNLGELIFNLAKNVTFRAAFGAGAAGDAGKQEEFIAILQEFSKLFVEFCIGDFIPWLSWADPQGINVRLRAARAALDQFIDKIIDEHMKRGRNPDDVDADMVDDMLAFLPEARTKKAAGDRGDDLQNTLRLTRDNIKAMIMDVMFGGTETVASAIEWAMSEMMHCPDDLRRLQQELADTVGLDQNVDESDLDKLPFLKCVIKETLRLHPPIPLLNHENAEDCVVGGYSVPRGSRVMINVFAIGRDASTWKDADAFRPSRFMEGEGEAAGVDFKGGCFEFLPFGSGRRSCPGMALGLYSLELIVAQLAHGFNLALPDGMAPSELDMRDVFGLTVPRATRLCVVPTPRLTCSLVADDDAAHQA

SEQ ID No:40

>Wheat_W5AC21

MVDLSMIDMEWLQEPLSWLFVASVIFVLLQRRRGKAPPLPPGPYSPPIVGNIFMMDQLTHRGFAALAKQYGGLLHLRLGKVHTFAVSTPEYAQQVLQAQDAAFSHRPATIATTYLTYDRADMVFARYGPFWRQMRKLCVMKLFSRRRPGTWLAVRDESAALVRAVARRSGEPVNLGDLIFNLSMNVTFRAAFGAEAAGDGDGRKQHEFIAIMQEFSKLFGAFSIGDFIPWLGWADPQGIKVRLRAARTALDEFIDKIIDEHIKRGRNPDDMDADMVDGMLAFLPEAKPDKAAGDDLHHTLRLNRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMAEMMHSPNDLLQLQQELADTVGIDRNVDEPDLNKLSFLKCVIKETLRLHPPIPLLHRENAEDCVLGGYSVPQGSSVNINVFAMGRDTKVWKDADTFRPSRFMEGEGEAAGVDFKGGCFQFLPFGSGRRSCPGMALGLYSLELVIAQLAHGFNWALPNGEKPSVLDMSDIFGLTAPRATRLWVVPTPRLTCPLVVDV

SEQ ID No:41

>Rice_Os03g0112900

MANGVAEYLLMDPWLVLWLVLASMAFALLHLRRRARRGAPPLPPGPRPLPIIGNMLMMDQLTHRGLAAMAARYGGLLHLRLGRVHMVVVSSPEHAREVLQVQDGDFSNRPASIAIAYLTYGRADMAFSHYGHFWRQVRKLSAVRLFSRRRAQSWRAVRDESAKLVGAIARRAGEAVDLGELIFGLTKDVIFRAAFGTRDGGGHGELEVLLQEFSKLFGAFNVGDFIPWLAWLDPHGINRRLRAARAALDSVIDRIIDEHVSNPAGDEDADMVDDMLAFLDEAGRDQTGGGGELQGTLRLTRDNIKAIIMDFVFGGTETVASAIEWAMAELLHSPGDLRRLQAELADVVGLGRGVEEGDLEKLPFLRCVAMETLRLHPPIPLLLHEAAADCVVGGYSVPRGARVVVNVWSVGRDAGAWKGDAGAFRPARFMAGGEAAGMDLRGGCFELLPFGSGRRACPAIVLGMYELELVVARLVHAFGWAPPGGVAPEELDMADGFGLTAPRAARLRAVPTPRLTCPM

SEQ ID No:42

>Rice_Os10g0512400

MADMVKFTMEWLQDPLSLAIVVTVAVLIMRMQRRRAAPFPPGPKPLPIVGNMAMMDQLTHRGLAALAKEYGGLMHLRLGRLHAFAVSTPEYAREVLQAQDGAFSNRPATTAIAYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKLCVVKLFSRRRAETWLAVRDESAALVRAVAASRGEAAVNLGELIFNLTKNVIFRAAFGTRDGEGHDEFIAILQEFSKLFGAFNIGDFIPWLSWADTNGINARLVAARTALDRFIDKIIDEHMERGKNPDDADADMVDDMLAFLAEAKPHAGKAAAAAAGAGDGADDLQNTLRLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMAEMMHSPDDLRRVQEELAAVVGLGRDVAESDLDKLPFLRCVIKETLRLHPPIPILLHETAADCLVAGYSVPRGSRVMVNVWAIARDRAAWGPDADAFRPSRFAAGAAAEGLDFRGGCFEFLPFGSGRRSCPGMALGLYALELAVARLAHGFNWSLPDGMKPSELDMSDIFGLTAPRATRLSAVATPRLTCPLY

SEQ ID No:43

>Maize_A0A0B4J2X1

MVTVAKIAMEWLQDPLSWVFLGTLALVVLQLRRRGKAPLPPGPKPLPIVGNMAMMDQLTHRGLAALAERYGGLLHLRLGRLHAFAVSTPEYAREVLQAQDGAFSNRPATIAIAYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKLCVMKLFSRRRAETWVAVRDECAALVRAVASGGGGGGEAVNLGELIFNLTKNVTFRAAFGTRDGEDQEEFIAILQEFSKLFGAFNVVDFLPWLSWMDLQGINRRLRAARSALDRFIDKIIDEHVRRGKNPDDADADMVDDMLAFFAEAKPPKKGPAAAADGDDLHNTLRLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMAEMMHSPDDLRRLQQELADVVGLDRNVNESDLDKLPFLKCVIKETLRLHPPIPLLLHETAGDCVVGGYSVPRGSRVMVNVWAIGRHRASWKDADAFRPSRFTPEGEAAGLDFKGGCFEFLPFGSGRRSCPGTALGLYALELAVAQLAHGFNWSLPDGMKPSELDMGDVFGLTAPRATRLYAVPTPRLNCPLY

SEQ ID No:44

>Maize_B4FWF9

MAAAVANIGMEWLQDPLSWVFLGTVCLVVLQQLRRRRGKAPLPPGPKPLPIVGNMGMMDQLTHRGLAALAETYGGLLHLRLGRLHAFAVSTPEYAREVLQAQDGAFSNRPATAAIAYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKLCVMKLFSRRRAETWAAVRDECAALVRAVAVGGGSGGEAVNLGELIFSLTKNVTFRAAFGTRDGEGQEEFIAILQEFSKLFGAFNVGDFLPWLGWMDLQGINRRLRAARSALDRFIDKIIDEHVRRGKSPDDADADMVDDMLAFFVEATPGKATGAAAAADGGDDLHNTLRLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMAEMMHSPDDLRRVQQELADVVGLDRNVSESDLDRLPFLRCVIKETLRLHPPIPLLLHETADDCVVAGYSVPRGSRVMVNVWAIGRHRASWKDADAFRPSRFAAPEGEAAGLDFKGGCFEFLPFGSGRRSCPGMALGLYALELAVAQLAHAFNWSLPDGMKPSEMDMGDIFGLTAPRATRLYAVPTPRLNCPLY

SEQ ID No:45

>Soybean_G3E7M3

MANLDLDPFQTSILILVPIALLVALLSRTRRRAPYPPGPKGLPIIGNMLMMEQLTHRGLANLAKHYGGIFHLRMGFLHMVAISDPVAARQVLQVQDNIFSNRPATIAISYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWQSVRDEVDAAVRAVASSVGKPVNIGELVFNLTKNIIYRAAFGSSSQEGQDEFIKILQEFSKLFGAFNIADFIPYLGCVDPQGLNSRLARARGALDSFIDKIIDEHVHKMKNDKSSEIVDGETDMVDELLAFYSEEAKLNNESDDLQNSIRLTKDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMAELMRSPEDQKRVQQELADVVGLDRRAEESDFEKLTYLKCALKETLRLHPPIPLLLHETAEDATVGGYFVPRKARVMINAWAIGRDKNSWEEPETFKPARFLKPGVPDFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMVLGLYALELAVAHLLHCFTWELPDGMKPSEMDMGDVFGLTAPRSTRLIAVPTKRVVCPLF

SEQ ID No:46

>Soybean_I1J8P0

MANLDLDPFQTSILILVPIALLVALLSRTRRRAPYPPGPKGLPIIGNMLMMEQLTHRGLANLAKHYGGIFHLRMGFLHMVAISDPVAARQVLQVQDNIFSNRPATIAISYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWQSVRDEVDAAVRAVASSVGKPVNIGELVFNLTKNIIYRAAFGSSSQEGQDEFIKILQEFSKLFGAFNIADFIPYLGCVDPQGLNSRLARARGALDSFIDKIIDEHVHKMKNDKSSEIVDGETDMVDELLAFYSEEAKLNNESDDLQNSIRLTKDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMAELMRSPEDQKRVQQELADVVGLDRRAEESDFEKLTYLKCALKETLRLHPPIPLLLHETAEDATVGGYLVPKKARVMINAWAIGRDKNSWEEPESFKPARFLKPGVPDFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMVLGLYALELAVAHLLHCFTWELPDGMKPSEMDMGDVFGLTAPRSTRLIAVPTKRVVCPLF

SEQ ID No:47

>Soybean_Q2LAL3

MDWQSMMGNLDPFQRTILILVPLTLLLLLLLSRTRPRPPYPPGPKGFPIIGNMFMMDQLTHRGLANLAKHYGGIFHLRMGFLHMVAISDPDAARQVLQVQDNIFSNRPATIAISYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWQSVRDEVDAAVRAVASSVGKPVNIGELVFNLTKNIIYRAAFGSSSQEGQDEFIKILQEFSKLFGAFNIADFIPYLGCVDPQGLNSRLARARGALDSFIDKIIDEHVHKMKNDKSSEIVDGETDMVDELLAFYSEEAKLNNESDDLQNSIRLTKDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMAELMRSPEDQKRVQQELADVVGLDRRAEESDFEKLTYLKCALKETLRLHPPIPLLLHETAEDATVGGYFVPRKARVMINAWAIGRDKNSWEEPETFKPARFLKPGVPDFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMVLGLYALELAVAHLLHCFTWELPDGMKPSEMDMGDVFGLTAPRSTRLIAVPTKRVVCPLF

SEQ ID No:48

>Soybean_K7MH28

MDLLLELKTALEPFRETLLFTIPLTLLLLGIVSRIRRKTAPYPPGPKGLPLIGNMNIMNQLTHKGLANLAKQYGGVLHLRIGFLHMVAISNAEAAREVLQVQDNIFSNRPATIAISYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKICVMKLFSRKRAESWNTVRDEVDFIIRSVTNNLGSPVNVGELVFNLTKNIIYRAAFGSSSQEGQDEFISILQEFSKLFGAFNVADFVPFLGWVDPQGLNKRLVKARASLDSFIDKIIDEHVQKRRSGHDGDEESDMVDELLNFYSHEAKLNDESDELLNSISLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASGIEWAMAELMRSPDDLRRVQQELADVVGLDRRVEESDLEKLVYLKCAVKETLRLHPPIPLLLHETAEDAAVCGYHVPKGSRVMINAWAIGRDKSAWEDAEAFKPSRFLNPHVPDFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMQLGLYTLELAMAHLLHCFTWELPDGMKPSELDTSDVFGLTAPRASRLVAVPFKRVLCPL

SEQ ID No:49

>Soybean_I1LHY5

MDWQSMMGNLDPFQRTILILVPLTLLLLLLLSRTRPRPPYPPGPKGFPIIGNMFMMDQLTHRGLANLAKHYGGIFHLRMGFLHMVAISDPDAARQVLQVQDNIFSNRPATIAISYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWQSVRDEVDSAVRAVANSVGKPVNIGELVFNLTKNIIYRAAFGSSSQEGQDDFIKILQEFSKLFGAFNIADFIPYLGRVDPQGLNSRLARARGALDSFIDKIIDEHVQKKNNYQSSEIGDGETDMVDELLAFYGEEAKLNNESDDNLQNSIRLTKDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWVMSELMRSPEDQKRVQQELADVVGLDRRVEESDFEKLTYLKCALKETLRLHPPIPLLLHETAEDATVGGYFVPRKARVMINAWAIGRDKNSWEEPETFKPARFLKPGVPDFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMVLGLYALELAVAHLLHCFTWELPDGMKPSEMDMGDVFGLTAPRSTRLIAVPTKRVVCPLF

SEQ ID No:50

>Artichoke_KVI02897.1

MDVLQLQGLLHPMPILFYVALPLLTFFLLSSFRRKPLPPGPRGWPLIGNMLMMDQLTHRGLASLADKYGGLLHLKMGFSHTVAVSSPEMARQVLQVQDNVFANRPATIAITYLTYDREDMAFANYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWDSVRDEVVSMIKITAASSGSAVNLGELVFGLTHDIIYRAAFGSISHEGKEEFIRILQEYTKLFGAFNLADFIPWLGFIDPAGLNTRLPKARGELDGFIDKIIDEHLRKEKKTGDDADNDMVDEMLAFYSEEGKVNEGEDLQNAIRLTRNNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWALTELMHTPEALKRAQQELADVVGLDRRVEESDFEKLTYFKCIIKETLRLHPPIPVLLHQSSEATEVAGYHIPKGTRVMVNAYAINRDKNAWKDPNTFNPSRFLENGAPDFKGSNYEFLPFGSGRRSCPGMQLGLYAMEMAVAHLLHSFTWQLPDGMKPSEIDMTDVFGLTAPKATRLVAVPTPRLLCPLY

SEQ ID No:51

>Artichoke_KVH92322.1

MDSIQIPISIYVIIALLTFSFLAWLRRKNLPPGPMGWPVIGNMLMMDQLTHRGLARLAEKYGGILHLKMGFRHTIAVSSPEIARQILQVQDNIFANRPATIAITYLTYDRVDMAFADYGPFWRQMRKLCVMKLFSRKRAESWDSVRDEVDSMVTTTATNSGLPVNLGELVFGLTHDIIYRAAFGSTSHEGKEEFIRILQEYTKLFGAFNLADFIPWLGFIDPAGLNTRLPAARAALDGFIDKIIDQHLAKEKKVGDENVDNDMVDEMLAFYSEEGKTNEAEDLQNAIKLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWAMTELMHTPEALKLVQQELTNVVGLDRRVEESDFEKLPYFKCVIKETLRLHPPIPVLLHQSSEATEVSGYHIPKGTRVMVNSYAINRDKNAWTDPNTFNPSRFLQNGAPDFRGSNYEFLPFGSGRRSCPGMQLGLYAMEMAVVHLLHCFNWELPDGMKPSEIDMGDVFGLTAPKAIRLVAVPTPRLLCPLY

SEQ ID No:52

>Radish_GSRAST00026355001

MESSISQTLGQVLDPTTGILIVVSIFIFIGLITRRRRPPYPPGPRGWPIIGNMSMMDQLTHRGLANLAKKYGGLCHLRMGFLHMYAVSSPDVAKQVLQVQDSVFSNRPATIAISYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKVCVMKVFSRKRAESWASVRDEVDKMIRSVSNNVGKSINVGEQIFALTRNITYRAAFGSACEKGQDEFIRILQEFSKLFGAFNVADFIPYFGWIDPQGINKRLVKARNDLDGFIDDIIDEHMKKKENQNTADDGEVVDTDMVDDLLAFYSEEAKLVSEATELQNSIKLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWALTELLRSPEDLKRVQQELAEVVGLDRHVEESDIEKLTFLKCTLKETLRLHPPIPLLLHETAEDTEIDGYFVPKKSRVMINAFAIGRDKNSWVDPETFRPSRFLEPGVPDFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMQLGLYALELAVAHILHCFTWKLPDGMKPSELDMSDVFGLTAPKATRLYAVPSTRLICAV

SEQ ID No:53

>Radish_GSRAST00007419001

MESSVSQTLSQVFDPTTTILIVVSVFIFIDLITRRRRSYPPGPRGWPIIGNMLMMDQLTHRGLANLAKKYGGLCHLRMGFLHMYAVSSPDVARQVLQVQDSIFSNRPATIAISYLTYDRADMAFAHYGPFWRQMRKVCVMKVFSRKRAESWASVRDEVDKMIRSVSSNVGKSINVGEQIFALTRNITYRAAFGSACEKGQDEFIRILQEFSKLFGAFNVADFIPYFGWIDPQGINKRLVKARNDLDGFIDDIIDEHMKKKENQNTVDDGDVDTDMVDDLLAFYSEEAKLVSETTDLQNSIKLTRDNIKAIIMDVMFGGTETVASAIEWALTELLRSPEDLKRVQQELAEVVGLDRHVEESDIEKLTFLKCTLKETLRLHPPIPLLLHETAEDTEIDGYFVPKKSRVMINAFAIGRDPKSWPDAETFRPSRFLEPGVADFKGSNFEFIPFGSGRRSCPGMQLGLYALELAVAHILHCFTWKLPDGMKPSELDMNDVFGLTAPRATRLFAVPSTRLICAV

SEQ ID No:54

>Radish_GSRAST00001088001

MESLLSQNLNHVIDPIPSALLITISLLVVVYLISQWLKPLYPPGPKGLPVIGNMLMVNQLTHHGLAKLANRYGGLFHLRMGFRHVFAITSPDVARQVLQVQDISFSNRPVTVAINYLTYDLADMAFAPYGPFWRQMRKVCVMKVFSRKRAESWASVREEVNNMVRSLSSNDVGKPVNVGDLIFTLTRNITYRAAFGAACETEQDEFIRILQEFSKLFGAFNIADFIPFLGWLDLQGINKRLVKARNDLDGFIDEVIDEHMKKRETINGDEDTDMVDDLLAFYSEDSSPNRSKNAVKLTRDNIKALVMDVMFGGTETMASGIEWALTELLRNPAELKRLQQELTEVVGLDQRVDDTHLEKLTFLKCTLKETMRLHPPIPLILHEAIEDTKLQGFSVPKGSRLMINAFAIARDPKLWVDPETFRPCRFMEPGMPDFMGTNFEFIPFGAGRRSCPGMQLGLYAMEVAVANIIHCFTWKLPDGMKPSELDMSDVMGLTAPRATRLIAVPDTRLICSVWP

SEQ ID No:55

>Radish_GSRAST00042054001

MDCLLCSPILYVVLIFLWYLVRVLVTRGNPFPPGPKGYPIIGNMKLKNQLNHRGLAELAKQYGGLLHLQMGKIHIVAASTAEMAREILQVQDVVFANRPANVAISYLTYNRADMAFANYGPLWRQMRKVCVMKLFSRKRAESWASVRDEINTMVQTLTKQTGSPVNVGELVFALTRNITYRAAFGSFARDGQDEFVKILQEFSKLFGAFDITEFLPWMKWFSNRDFSKRLENARKSLDGFIDRIIDAHIEKKNSRKQEDDGLEDDMVDELMAFYSGENGGKSNDSLSTFRLTRDNIKALVMDVMFGGTETVASAIEWAMTELMKNPHELVKLQQELADVIGLNRQFHESDLENLPYFRCAMKETLRLHPPIPLLLHEAAADSVVSGYSIPRDSRVMINVYAIGRDGSVWTEPDAFRPGRFMEDKAPDFKGSDFEFLPFGSGRRSCPGMQLGLYAMELAVAHMLHSFDWKLPEGVSSGDLDMTDMFGLTAPRATRLIAVPSYRLKCPMVI

SEQ ID No:56

>Radish_rs_Aokubi_v1_EVM13601

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SEQ ID No:57

>Onion_AC.SP3B.Locus_5396.1.10

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DNA

SEQ ID No:58

>Lettuce_LsF5H_1_1

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SEQ ID No:59

>Lettuce_LsF5H_2_1

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SEQ ID No:60

>Endive_ce_gene1

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SEQ ID No:61

>Endive_ce_gene2

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SEQ ID No:62

>Endive_ce_kethel_v0.1_EVM71979

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SEQ ID No:63

>Chicory_ci_vitessa_fr_v1_EVM170737

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SEQ ID No:64

>Chicory_ci_vitessa_fr_v1_EVM170780

ATGGTCCGGTGTTATCCCACTTATTTTATGCTGATGATGCAATTTTTGTAGGTGAATGGTCTTTGTCAAACATGAAGAATCTGTCCCGCATCCTTAAGTGTTTTCATGCTGCATCAGGACTTAAGGTCAATTTTAGTAAATCCAAAGTATTCGGCATTAGTGTGAACAATGATCTAGTCTCGAGGTGTGCTCGCGTCCTTGGTTGCGAGGCGGGCTGTTTTCCGTTCAAGTTTCTTGGAGTTCCTGTGGGGGCTAATATGAACCGAATAAAAAATTGGGACGTAATCGTGGACAAGTTCAATGCCAAATTATCATTGTGGAAAGCAAAAAACCTATCATTCGGCGGGAGGATCACACTAATTAAGGCAGTACTCAGCAGCTTACCTGTTTATTATTTTTCCATTTTTAAAGTGCCTGCAGGTATACTTAAGAAGCTTGAGCGGATACGAAGAAGCTTTTTGTGGGGTGGCGGGGGTCGAAATCATGGAATACCGTGGGTGGCTTGGAACACAGTCATCTGTGACAAGAGTTATGGCGGCCTTGGAGTCGGATCGCTACGTAGCCTCAACATTGGACTCATGTTAAAGCGGTGGTGGCGTCTCAAATGCAAACCGGAAACATTATGGTGCAGAATAATTAGTAGTATACACAACTTGGTGAGGAAACCGGCTCATCATCTTGCAAAGAGGTCGGCTACAGGTGCTTGGCTTAATATCGTCAACATCCATGGTGACCTAGAGGAGTTTGGATTCAGTTTTGACAGTTTATTCAGGAAGACAGTTGGTTCCGGCAACAATACTTTATTTTGGCATGATAAATGGCTGAATGATACACCTTTGAAAGATTCATATCCAGCCCTTTATGATTTAGACAAACGGAAAATGTGTTATGTTTCAGATAGAATCACGATGCAAGGGAGGCAGTGGGCTTGGAGATCTAATCCATGCGCTGCTGATGAGATTGACCAGATGTACAATTTGGACCAGGCTTTAAACAGTTATTATCCGTCCAATCGAGAAGATACCTGGAGGTGTGTGCTTAACAGTACAGGGTCGTTCACGGTGGGGGCAATTAGGGAAATTATCGATAATTATGGTGTTACAAGATCAAGTATAAATGTTCAATGGCTAAAAAAATACCATTAAAAGTAACATGTTTTGTATGGAGAGCCCTTTTAGGGAAAATCCCGTCAGCGGAGGCTTTGATTAGGAGGGGAGTACGGCTTGATTCCTCGATTTGTTCATTATGTAAATCAAATGTTGAATGCTACAATCATATTCTAGTTGGGTGCAGCTTTGCTAAGGAAGTGTGGGGGAAGATACTGCAGTGGTGTGGGGACCCAATCTCGATAGGAGAATCGGTGGAGGGACTGTTACAGAACGTGGCTTATTGGGGAAGGTGTCCGAAGAAAAGGAGACTCTTGACGGTTGTATCTTACGGTACGTTGTGGTGTCTTTGGAAGTCAATGAATGATCAGATCTTTAAAGGTGTATCTTGTAATTCTGACACAATTTGTGATCAAATTAAAGCGTTGCTGTATACATGGATAAAGTTTAGAGGTGGTAAGTTAGACATTAATCAGGAGGGGTGGAATTTATCTCCATTGAATACTTTGTAATTTGACTTTGTATCGGCTGTCCGGTCTTGCATCTCGCTGATCGGTTTTGCCTTTTATTTTATTTATAAATTGTGTTGCCGGTTCAAAAAAAAACTGTATGCATTTAATGTTGCATTAAATGCATAGATTAGATATTATATGTGTTAGGAAACATATTTGCAACAAAATACAAACTTAATGAATGATATTATAATAATTTCTAAAATTGTCATATTTGGTAAAGCACATGGACATAATTTGTAATTTATATAGTAATATCTATTTGAATTCCGGCCATTCAAACGGGGTGTGCCCGCTCAACTTGTATATAAACAACCCTTTATTTCACTCTTAAGGTAGCAACATTCAACCAGTTGCCACTTAACTCTCCATTTGAATCAATATGGATTCTCTTCAAATCCCTATACCAGTCTACGCTATAATCGCTATCTTAACCTTCTTCTTTCTGGCATGGCTCCGCCGTAAACCACTCCCGCCGGGCCCAATGGGGTGGCCAATCATCGGCAACATGTTGATGATGGACCAACTTACCCACCGTGGCTTAGCTAGTTTGGCGAAAAAATATGGTGGCATCCTCCATCTAAAAATGGGTTTCAGTCACACCATTGCCGTATCATCGCCGGAGATAGCTCGGCAAATACTTCAAGAAAAAGACAACATCTTTGCCAACCGGCCGGCCACCATCGCTATAACCTACCTTACCTACAACCGCGTAGACATGGCGTTTGCAAACTACGGACCTTTCTGGCGGCAGATGCGGAAGCTTTGTGTCATGAAGCTGTTTAGCCGTAAACGAGCGGAGTCATGGGACTCCGTCAGGGATGAGGTGGATACCATGGTGAAGGCCACCGCCATTAACTCCGGTTTGCCAGTAAACTTGGGTGAGCTCGTATTTGGGTTGACCCATGATATTATTTATCGGGCTGCTTTCGGGTCAATTTCCCATGAAGGTAAAGAAGAATTCATCAGAATCCTGCAAGAATACACCAAACTTTTTGGCGCATTCAACTTGGCTGATTTTATTCCAATGCTCGGTTTTATTGACCCGGCTGGGTTGAATACACGTTTACCGGCGGCCAGGGCGGCGTTGGATGGGTTCATCGACAAAATCATCGACGAGCATTTGAGTAAAGAAAAGAAAACCGGCGATGAAAATGTTGATAATGACATGGTTGACGAGATGTTGGCGTTTTACAGCGAGGACGGAAGAGTCAACGAAGGTGGAGACTTGCAGAACGCCATTAACCTGACTCGAGATAACATCAAAGCCATAATCATGGTACGTAATGTAATTCGAATAAATTAATTTCTATAGATCTTTATAATATTTAAAACTATTATTCTAAACAAAAGCAATACGTATATTTTGCAGGATGTGATGTTCGGTGGCACTGAGACGGTAGCTTCCGCTATAGAATGGACCATGACGGAGCTAATGCATACACCGGAAGCACTAAAGCGCGTTCAACAAGAGTTGACTAATGTTGTCGGTCTTGACCGCCGTGTCGAAGAGTCTGACTTCGAGAAGCTAACCTACTTCAAATGTGTCATCAAAGAAACCCTGCGGATGCACCCTCCGATCCCGGTTCTCCTCCACCAATCATCGGAGGCGACAGAAGTTTCCGGCTACCACATCCCTAAAGGGACACGTGTCATGGTTAACGCGTACGCCATAAATCGTGACAAAAACTCTTGGGAAGATCCCGACACTTTCAACCCATCCCGTTTTTTGCAAAACGGAGCTCCTGATTTTAGGGGAAGCAACTATGAATTTCTTCCGTTTGGTTCTGGTCGGAGGTCGTGTCCGGGAATGCAACTTGGGTTGTATGCGATGGAGATGGCGGTGGCCCACCTTCTTCATTGTTTCACGTGGGAACTACCCGACGGAATGAAACCGAGTGAAATCGACATGGGTGATGTGTTCGGACTCACCGCACCAAAAGCAATAAGGCTAGTGGCAGTGCCAACTCCGCGTTTATTATGTCCATTGTATTGAAATAATTGTATCTAAGTTTTTTATAGTTTCATTTTATACAAGATATAAATAATAACATGGAAATATTTTACTTATTGATCTCTGTTAATATATTCCCAAATCAATAAATCTAGTTCAAACTCAAAGTGTTTACGGGATTTTTTCTTGGCAGATTATGACGAATTGTAAAAGTCCGTGTAATCCAGGTGTAGTTTAGCCATGAAAAACTCAATGGTCAATATAAATGGCTAATTTTTACGAAATATCTCGATTCATGTACGTAATTATCGGTCGCTATTCTTATACTCTTCAATTTTCCACCAACTTTGAAACAGACATTAAATAACAAAAAAGGGCTATTTGTAATGGATTGGCGAAGGAAGTTTAGCTACGAAAATAACGACAATGTATTTATGATTAGCTAGTTAGCGATGGATGATATTAGCGACGGTTGCGACAAATTATATTGGTGATGGATGTTTTTCGAATGATGACCACCGTGTTAGCGAAGAATTTTAGGGTCTGTTTGGTAACATACAATCATGAAAGAATGTAATAGACAACGTAAAATGGAATGAAATGTAATAGAATAAATTATTACATTTAATTGACATGTTGATTGACTCGAATAAATGAAATGAGTCATTCGAACATATTATTTGTTATTAATATATAAAAAATAAAGTAAGGTAAATTTGATAATAAATTAATTCAAGTAATTTTATAAAATAAATTCTATTATATGAAGATATAACATACTTTATTTCGTTATATATATATATATATATATATATATATATANNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN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SEQ ID No:65

>Chicory_ci_vitessa_fr_v1_EVM158591

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SEQ ID No:68

>Celery_RZ_draft_99.605_EVM363634

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SEQ ID No:69

>Celery_RZ_draft_99.605_EVM348724

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SEQ ID No:70

>Celery_c17480_g1_i1|m.26831

ATGGAAACCAACACTACCGCCATGACAATTCTCTTCTTCATTCTTCCGCTGCTTAGTTTCTTTCTCTTGTCCAGCTTTCGACGTAAACGTTACCCTCCAGGCCCGAAAGGTTGGCCCATCATCGGCAACTTGTTGATGATGGACAAGCTATCTCATCGTGGACTGGCTAAACTTGCTGCTCAATATGGCGGCCTTGTCCACCTCCGTATGGGTTTTCTTCACATGTTCACCGTTTCGACTCCCGATATGGCCCGAGAAGTTCTTCAAATTCAAGACAACATTTTTGCCAACCGTCCTGCTACCATGAATATTAGCTACTTAACTTATGACCGAGCGGATATGGCTTTCGCAAATTACGGGCCGTTTTGGCGCCAAATGCGGAAAATATCGGTCATGAAGTTATTTAGCCGTAAAAGGGCAGAGTCGTGGGACTCTGTCCGTGAAGAGGTTGATGACATGGTGAAAATCGTGTTGTCGAAGACGGGGTGTTCGGTTAATATTGGAGAGCTTGTGTTCGGGTTAACTAGGAACATTATTTATCGGGCAGCTTTCGGGACGTTGTCGCACGAAGGCCAAGACGAGTTTATCAAGATATTGCAGGAGTTTTCGAAACTGTTTGGTGCATTCAATATCTGTGATTTTGTTCCGGGATTAACTTGGGCAGATCCGCAAGGGTTCATGGGTCGGGTGGTTAAAGCTAGAGCATCGCTTGATGGATTCATAGACTCAATAATAGATGCACACATTGAAAAAAAGAAGAGCAGTAAAAATGGTATTATCGACGAGGGAAACAGTGATATGGTGTATGAATTGCTGGATTTTTACGGTGAAGAAAAGGCTAAAGTCAGCGAGTTTGAAGATCAGAACAGCTCCTTGAAGCTCACAAGAGATAACATCAAAGCCATTATCATGGATGTAATGTTTGGTGGGACGGAGACGGTAGCATCTGCAATAGAGTGGGCCATGTCAGAGCTAATGAGGAGCCCAAAAGACCTCAAAAAAGTCCAACAAGAACTCGTCAATGTTGTTGGGCTTCACCGTCGTGTTGAAGAAAGTGATTTCGACAAGCTCACTTACCTCAAATGCTGCATAAAAGAGACTCTTAGACTCCACCCTCCCATCCCACTACTTTTACACGAGACGGCCCAAGATGCGGAGGTTGCTGGATATCACATTCCGGCAAGGTCTCGAGTCATCATAAACTCATGGGCCATCAACAGAGACCCAAACTCGTGGACTGACCCGGACACATTCAAGCCTTCTAGGTTTCTACAAGAGGGTATGCCTGACTTTAAAGGAAGCAACTTTGAGTTCATACCATTTGGGTCGGGTCGGAGGTCTTGTCCAGGCATGCAACTTGGACTTTATGCACTTGAGATAGCTGTGGCTCACCTTCTGCATTGTTTTAACTGGGAGTTACCTGATGGTATGAAGCCAAGTGAAGTTGATACTGATGATGTGTTTGGTCTCACTGCTCCGAGGGCGACTCGACTTGTGGCTGTGCCAACTCCACGCTTGTTGTGTCCTATCTCCTGA

SEQ ID No:71

>Brassica_Bo1g005770

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SEQ ID No:72

>Brassica_Bo7g117840

NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNCCAAGGGTTTAGGGTTTAGTGATTAGGATTTAGGGTTTAGTGTTATTAAAATTTAGTTTTTAATGTATGATTTAGGGTTTAAGATATTCCAACGGTTTAGAGTTTATCCAAAGTTTAAGGTTTAACGTTTAGGGTTTAGGATTTAGGGTATAGGGTTTAGTATTTTGCTGAAGACTTAACAATATTAATTAATTTATTTTTTTGTAACTATTTTTATGTATTTTTATTATTTTATTTTAAAAATATAATCTAATTTGGATATTTAATTTTATTTCTTTTTTTAAAAAATATCAAATATCAAATATTCAAACACTATTGGTTGGTTCAGAGGTGAACCCAAAAATTTGACCACAACTTGATTATAAAACCCACCTCTCTAATCACATCCCAAAATGGCGAACTTTGCCTGATAGACCTCTTACAGAAAAAGAAAAAGAAAAATCATGGAGTCTTCTGTATCACAAACACTAAGTCAAGTATTAGATCCCACAACGGCTATTCTCATCGTCGTCTCACTTTTCATATTCATCGGCCTCATCACACGACGGCGAAGGTCTTACCCACCCGGTCCACGTGGTTGGCCCATCATAGGAAATATGTTAATGATGGACCAACTCACCCACCGTGGTTTAGCCAACTTAGCTAAAAAATATGGCGGCTTGTGCCATCTCCGCATGGGCTTCCTCCATATGTATGCCGTCTCATCACCTGATGTGGCTCGACAAGTCCTCCAAGTCCAAGACAGCATCTTCTCGAACCGGCCGGCAACGATAGCTATAAGCTATTTGACTTATGACCGAGCCGACATGGCGTTCGCTCACTACGGACCGTTTTGGAGACAGATGAGGAAAGTGTGTGTCATGAAGGTGTTTAGCCGTAAACGTGCGGAGTCATGGGCTTCTGTTCGAGATGAAGTGGACAAAATGATCCGGTCGGTATCTAGTAACGTTGGTAAGTTAGCTATGTGCGGTAAAATATGTAAAAAGTAAAAACAACAAACAATGTTTCTCTCTTTTATACGTATTTTAACAGCCATACCAAAAAAAATGTAGGTAAGTCTATAAATGTCGGGGAGCAAATTTTCGCCCTGACCCGAAACATAACTTACCGGGCAGCGTTCGGGTCAGCTTGCGAAAAGGGACAAGACGAGTTCATAAGAATCTTACAAGAGTTCTCTAAACTTTTTGGAGCCTTCAACGTAGCAGATTTCATACCATATTTCGGGTGGATCGATCCACAAGGGATAAACAAGCGGCTCGTGAAGGCCCGTAATGATCTAGACGGATTTATTGACGATATCATCGACGAACATATGAAGAAGAAAGAGAATCAAAACACTGTTGATGATGGATATGTTGGTGATACCGATATGGTTGATGATCTTCTTGCTTTTTACAGTGAAGAGGCCAAATTAGTGAGCGAGACAACGGATCTTCAGAATTCTATCAAACTTACCCGTGACAATATCAAAGCAATCATCATGGTAATTTCTTTTTCAAAAGACCACTAGGCACATTCATTATTCTTAATGCGTCACACCATCGAACTTATCCATCAAACCACTAGATTCATATTTTTGTCTAAATGAGGAAGGTAACTTTCTGTATTTACAAGTAGTCCATATGATATTAGAGATTTTGCGTAAGCATTAGGGGAAAATGACGTCATTTACTGATGGTAAAAACTCATAAAAATATAAAGTTTTAGAAAAGACCTAAAATACGAAACATGTAAAAAACACGTACAAAGGTAATATAAATCACACGTAAATATAATCTGACCGTCTTTGAGCTAACAATTTATTTCTGTTTACATTTTAAAATCTAATTTGAATTGATTTATTGAATTTAATAGGACGTCATGTTCGGAGGAACGGAAACGGTAGCGTCGGCAATAGAGTGGGCCTTAACGGAGTTATTACGGAGCCCCGAGGATCTAAAACGGGTCCAACAAGAACTCGCAGAAGTTGTCGGACTTGACCGACGTGTGGAAGAATCAGACATCGAGAAGTTGACTTTTCTGAAATGCACACTCAAAGAAACCCTAAGGCTACACCCACCGATCCCACTCCTCCTCCACGAAACCGCAGAGGACACTGAGATCGATGGTTACTTCGTTCCCAAGAGATCTCGCGTTATGATCAACGCGTTCGCGATTGGACGTGACCCTAAATCTTGGCCTGACGCCGAAACGTTTAGACCGTCGAGGTTTTTAGAACCGGGAGTAGCTGATTTTAAAGGAAGTAACTTCGAGTTTATACCATTCGGGTCGGGTCGTAGATCGTGCCCGGGTATGCAACTCGGGTTATACGCGCTTGAGTTAGCCGTTGCTCATATATTACACTGCTTCACATGGAAATTACCTGATGGGATGAAACCGAGCGAGCTTGACATGAACGACGTGTTTGGTCTCACGGCTCCTAAAGCCACTCGTCTTTTCGCCGTGCCTAGCACACGCCTGATTTGTGCTGTCTAAGTTATGGTTCGTAGCACGTGGCGGGTGTAAAACCAAACGAAGGGTTGGTTCTTGGAAAGAGTTTGAAAAGTCAAATGTAGCACTGAACATTTGTGGATGTTATTATATGTATGTATGTGTATCACGTGTGGTCTGGATGAAAACATAAATGGCTCTTTGTTTCGATTTTCCTTTTCTTTTGTTGGGATTTTTCCTTGAATGAAATGTAACTGGTCAAATATAGTTTTTTTTTGTTTATCTACATTACCTTTGCATATTACGTAGGTAAACTATTAAGAGTATTGCATTCGTTAGAAATTTTATAACCTACCGACAAATTTCCATCACCATGAGTCTATGACTTAAAAGAGTTTGGCAACCTGTAAAACCAAGTTAAAGCTCGATTTGTATTTTAAACCAGAAGTTAACCCGCGCTACGCGCATAGTTATTTTGATTTTCAAATTTTAACTATATAGATATTCATTTGGACCTTGTATTCTGAACAACAACAAAATTTTGAATTGTATGTTTGAGTGAATACATATTTACTTAGAAAAAACAAAAAATTATATATATTTTTCATATAGATATTTGATAAAGTTTTTCATTTATTATATTGTATATTTACTTATTATTTAGTTTTTCTTATATTGTAGGGCAATTCTATCAAATAACATTTTTAAGTTTTTTCACAAAATAGCCATCAATAAAGAAAATGACCAAAATAGCCCCTTTTATTTTGAAAATTTATTTTAATTTTAATTTTTTTTAAATTTAAAACCATATCCTCAAAACTCCACCTCTTAACTCTAACCCTAAGTATATATTATTTAACCTTAGGATATAAATGTATTTTTACTCTTTAATAAAACTTCTTTTGGTCATTTTTCTTATTGAGAACTATTTTTGTGACAAAAATTTAAAAGGGTTATCTTAGGAAATTTCTCTATATTGTATATTTATTTATTCTAATTTTCTTACTTTTATA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SEQ ID No:73

>Brassica_Bo7g119430

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SEQ ID No:74

>Brassica_Bo3g093960

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SEQ ID No:75

>Brassica_XP_013607401.1

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SEQ ID No:76

>Eggplant_c18725_g1_i1|m.19489

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SEQ ID No:77

>Eggplant_sm_67_3_v1_EVM112823_1_

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SEQ ID No:78

>Potato_XP_006340697.1

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SEQ ID No:79

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SEQ ID No:83

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SEQ ID No:86

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SEQ ID No:88

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SEQ ID No:91

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SEQ ID No:93

>Wheat_A0A077RPS5

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SEQ ID No:94

>Wheat_W5A2I1

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SEQ ID No:95

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>Wheat_A0A077RQ37

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SEQ ID No:97

>Wheat_W5AC21

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SEQ ID No:98

>Rice_Os03g0112900

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SEQ ID No:99

>Rice_Os10g0512400

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SEQ ID No:100

>Maize_A0A0B4J2X1

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SEQ ID No:101

>Maize_B4FWF9

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SEQ ID No:102

>Soybean_G3E7M3

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SEQ ID No:103

>Soybean_I1J8P0

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SEQ ID No:104

>Soybean_Q2LAL3

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SEQ ID No:105

>Soybean_K7MH28

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SEQ ID No:106

>Soybean_I1LHY5

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SEQ ID No:107

>Artichoke_KVI02897.1

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SEQ ID No:108

>Artichoke_KVH92322.1

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SEQ ID No:109

>Radish_GSRAST00026355001

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SEQ ID No:110

>Radish_GSRAST00007419001

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SEQ ID No:114

>Onion_AC.SP3B.Locus_5396.1.10

ACTGGGAATCAAAGAAAAACAAAGAAGCAGACTCCAACGAGGGAAGCTAGATTCAAACACAAGAACTCTTCCCCTCGCATACACAAAGCTCAAAGAAACAAAACCAAAGCCATGATGGACATGCAATCCATCCTCATATTCACCCTCCCATTCGTCACCCTCCTCTTCCTGGTCATTACCAGCCGCCGCAGGCCCAAACTCCCGCTTCCGCCCGGCCCGCGCCCACTACCCATCATCGGCAACCTCAACCTCATCGACAAACTCACCCACCGTGGCCTGGCCCATCTGGCCAACCAATACGGTGGCATCTTCCACCTCAAGCTTGGGTCCGTCCACACCTTCTCCATCTCCACACCCGAAATCGCAAAGGAGGTCCTTCAAACCCAGGACCTGGCCTTCTCCAACCGCCCCGCCACCATCGCCATCACCTACCTCACCTACGACCGGGCCGACATGGCCTTCACCCACTACGGCCCATTCTGGCGCCAAATCCGCAAACTCTGCGTTATGAAGCTGTTCAGTCGAAAAAGAGCGGAATCATGGGCCTCCGTCCGAGAGGAGATAGAGAAGGCTGTATCGACCGCAGCCGCGGGCGCTGGGACTGTGGTCAACGTAGGGGAGCTGGTGTTCAATCTGACGAAGAATATAACGTTCAGGGCGGCGTTTGGAGCGAAGTCGGGCGAGGAGCAGGATGAGTTTCTGGGGATTTTGCAGGAGATATCAAAGCTGTTTGGAGCGTTTAATGTCGGGGATTTCGTACCGGGTTTGAGGTACTTGGATCCACAGGGGATAGGGAGGAGGATGAGGAAGGTGAGGAAGGAACTGGATGGATTTATTGACAGGATAATAGATGAGCATGTGCAGAATAGGAAGGAGGTGGATGATGTGGAGGCCGACATGGTGGATGAGATGTTGGCGTTTGTTGGACAAGGGAAGAGCATTGGTAGGGATTCTGATGAGTTGAGGCTTACTAGGAATAATATCAAGGCTATTATCATGGACGTAATGTTCGGAGGAACAGAGACAGTGGCCTCGGCAATAGAATGGGCAATGGCAGAGCTCCTTAAAAGCCCAGAAGATCTCAAAAGGCTCCAGCAAGAACTGACGTCGGTAGTGGGCCTGGACCGCAAAGTCCAGGACTCCGACCTCGACAAACTGCCGTACCTCAAATGCGTCATCAAGGAAACGCTGCGACTTCATCCACCGATCCCGCTTCTTCTTCACGAAACAGCGGAGGACTGCGAGATCCAGGGCTACTCGATCCCCAAAAAATCGAGGGTAATGATCAACGTGTGGGCGATCGGGCGCGACAAGTCCGCCTGGAAGGACGCGGACCAGTTCAAGCCGTCGAGATTCGTGAAGGGAGGGGAGTACGAGCAGGTGGATTTTAAGGGGAATTTCTTCGAGCTGCTGCCGTTTGGGGCGGGAAGGAGGTCGTGCCCGGGGATGCAGCTGGGGCTGTACGCGCTGGACCTGACGGTGGCGAATATGGCGCACTGTTTCGATTGGGAGTTGCCGGACGGGATGAAGCCAGGCGAGATGGATATGAGCGACGTGTTTGGGTTGACTGCGCCTAGGGCTGTGAGGCTTGCTGCTGTGCCTTCTCCTAGATTGACTTGTCGTATTTGATTTCAACATGTACATACGATTTGTGTTTATATATACGTTATAAAGTATACACAACGGTGATTGTTTGTATAATTGTAATGCTGTTCCATGGTGCGGACTAATAAAAATGTTCAATGAGAGGGTTTTGAAAGACGTATGGTGTATGTGAATTGTAAATTTATATAATTGTTACTTCGTCATTAATGAAACTTTTTCA

SEQ ID No:115

>Lettuce_LsF5H_1_1 CDS WT

ATGGAATCACTTCAAATCCCCATAGCATTCTACGCTATAATAGCTATCTTAACTTTCTTCTTTCTTTCATGGGTCCGCCGGAAACCACTCCCGCCGGGGCCAATGGGGTGGCCAATCATCGGCAACATGTTGATGATGGACCAACTTACCCACCGTGGCTTAGCCCGTTTGGCAGAAAAATACGGTGGTATCCTTCATCTAAAGATGGGTTTCAGCCACACCATTGCAGTGTCCTCGCCGGAGATGGCGAGGATAATACTTCAAGAAAAAGATAACATCTTTGCCAACCGTCCGGCAACCATCGCCATCACTTACCTGACTTACAACGGCGTAGATTTGGCTTTTGCTAATTATGGACCTTTCTGGCGACAAATGCGAAAGCTTTGTGTCATGAAGCTGTTCAGCCGGAAACGAGCGGAGTCATGGGACTCCGTCAGGGATGAGGTGGACACCATGGTGAAAGCCACCGCCATTAACTCCGGTACGCCGGTAAACTTGGGTGAGCTTGTTTTTGGGTTGACCCATGATATTATCTACCGAGCAGCTTTTGGGTCGATTTCACATGAAGGGAAAGAAGAGTTTATCAGAATCCTTCAAGAATACACCAAACTTTTTGGCGCATTCAATTTGGCTGACTTTATCCCGTTCCTCGGGTTTATTGATCCGGCGGGGTTGAACACACGTTTACCGGCGGCCAGGGCGGCGTTGGACGGATTCATTGACAAAATCATCGACGAGCATTTGCGTAAAGGAAAGAAAACCGGCGATGAAGGTTTGGATAACGATATGGTTGATGAGATGTTGGCGTTTTACAGCGAGGAAGGAAAAGTCAACGAAGGTGGTGATTTGCAAAACGCCATTAACCTTACTCGAGATAACATCAAAGCCATAATCATGGATGTAATGTTCGGTGGAACTGAGACAGTGGCGTCCGCCATAGAATGGGCCATGACGGAGCTAATGCATACACCGGAGGCACTAAAGCGCGTGCAACAGGAGATGGCAAATGTCGTCGGACTTGACCGGCGCGTGGAGGAGTCTGACTTGGAGAAGCTGACGTACTTCAAATGCGTCATCAAGGAAACCCTCCGACTACACCCTCCGATCCCAGTTCTCCTCCACCAGTCTTCGGAGGCGACAGAAGTTTCCGGCTACCATATACCTAAAGGAACACGTGTCATGGTGAACGCGTATGCTATTAATCGTGATAAGAACTCTTGGGAAGATCCGGATACGTTTAACCCGTCACGTTTTTTACAAAACGGAGCTCCGGATTTTAGAGGAAGCAACTATGAGTTTCTGCCATTTGGTTCTGGTCGGAGGTCGTGTCCGGGGATGCAACTAGGGTTGTATGCGATGGAGATGGCGGTGGCCCACCTTTTGCATTGTTTCACGTGGGAATTGCCGGATGGAATGAAGCCAAGTGAAATCGACATGGGTGATGTGTTTGGACTCACAGCACCAAAAGCAATAAGATTGGTAGCAGTGCCAACTCCGCGTTTATTATGCCCATTGTATTGA

SEQ ID No:116

>Lettuce_LsF5H_2_1 CDS WT

ATGGATCCTAAGTCCATCTTACTTTACGTTGTACTCCCTCTCTTAACCTTCTTCCTTCTCTCCCGATTACGCCGAAAACCTCTTCCGCCTGGTCCAAGAGGGTGGCCGCTGATCGGTAACATGTTAATGATGGACCAACTCACCCACCGTGGCCTTGCTCGTTTGGGAGAAAAATACGGTGGTCTTCTTCATCTGAAGATGGGTTTCAGCCATACCGTCGCTGTCTCGTCCCCCGAAATAGCCAGGCAAGTACTCCAAGTTCAAGACAACATCTTCGCCAACCGCCCGGCCACCATCGCCATTAGTTACCTCACCTACGACCGGCAAGACATGGCGTTCGCCAACTACGGTCCCTTTTGGCGTCAGATGCGTAAGCTTTGCGTCATGAAGCTGTTCAGCAGAAAGCGAGCTGAGTCTTGGGACTCCGTCAGAGACGAAGTTGTCTCCATGGTCAAAATCACCGCTGCAAGCTCCGGCACCGCTGTTAACCTTGGAGAGCTTGTTTTCGGGTTAACCCATGATATCATTTACCGAGCAGCTTTCGGGTCTATCTCTCATGAAGGAAAAGAAGAATTCATCAGAATTCTACAAGAATACACAAAGCTTTTTGGTGCTTTCAATTTGGCAGATTTTGTCCCGTGGCTTGGATTTATCGACCCTGCCGGACTGAATACCCGTTTACCGAAGGCCAGGGCGGCGCTTGACAGATTCATTGATAAAATCATCGACGAGCACCTTGCAAAAGAGAGGAAAACGGGCGATGAGGAAGATAATGATATGGTGGATGAGATGTTGGCTTTTTACAGTGAAGAAGGAAAGGTAAACGAAGGCGAGGATTTGCAGAACGCGATTAGACTCACCCGAAACAATATCAAAGCCATTATTATGGATGTAATGTTTGGTGGGACTGAAACTGTTGCTTCTGCTATCGAATGGGCTTTAACTGAGCTAATGCACACCCCAGAATCCTTAAAACGTGCACAACAAGAGCTCGCTGATGTTGTTGGCCTTGATCGTCGTGTAGAAGAATCAGATTTCGAGAAGCTAACTTACTTCAAATGTGTCATCAAAGAAACCTTACGTCTCCACCCTCCGATCCCTGTCCTTTTGCACCAATCATCAGAAGCCACGTCGGTTGCTGGCTACCACATACCTAAAGGGACACGTGTCATGGTTAACGCATTCGCCATTAATCGTGATAAGAACTCATGGAAGGATCCACACACGTTCAACCCATCACGTTTCTTGCAAGATGGGGCACCCGACTTTAAAGGAAGCAATTATGAGTTTCTTCCATTTGGATCTGGACGTAGATCATGTCCTGGAATGCAACTTGGATTGTACGCAATGGAGATGGCAGTGGCTCACCTTCTTCATTCATTCACATGGCAGTTGCCTGATGGAATGAAACCAAGTGAGATTGACATGAATGATGTGTTTGGACTCACTGCACCAAAAGCGATTCGACTTGTTGCTGTGCCAACTCCTCGGTTGTTGTGTCCGCTGTATTGA

SEQ ID No:174

>Lettuce_LsF5H_1_1 CDS突变1

ATGGAATCACTTCAAATCCCCATAGCATTCTACGCTATAATAGCTATCTTAACTTTCTTCTTTCTTTCATGGGTCCGCCGGAAACCACTCCCGCCGGGGCCAATGGGGTGGCCAATCATCGGCAACATGTTGATGATGGACCAACTTACCCACCGTGGCTTAGCCCGTTTGGCAGAAAAATACGGTGGTATCCTTCATCTAAAGATGGGTTTCAGCCACACCATTGCAGTGTCCTCGCCGGAGATGGCGAGGATAATACTTCAAGAAAAAGATAACATCTTTGCCAACCGTCCGGCAACCATCGCCATCACTTACCTGACTTACAACGGCGTAGATTTGGCTTTTGCTAATTATGGACCTTTCTGGCGATAAATGCGAAAGCTTTGTGTCATGAAGCTGTTCAGCCGGAAACGAGCGGAGTCATGGGACTCCGTCAGGGATGAGGTGGACACCATGGTGAAAGCCACCGCCATTAACTCCGGTACGCCGGTAAACTTGGGTGAGCTTGTTTTTGGGTTGACCCATGATATTATCTACCGAGCAGCTTTTGGGTCGATTTCACATGAAGGGAAAGAAGAGTTTATCAGAATCCTTCAAGAATACACCAAACTTTTTGGCGCATTCAATTTGGCTGACTTTATCCCGTTCCTCGGGTTTATTGATCCGGCGGGGTTGAACACACGTTTACCGGCGGCCAGGGCGGCGTTGGACGGATTCATTGACAAAATCATCGACGAGCATTTGCGTAAAGGAAAGAAAACCGGCGATGAAGGTTTGGATAACGATATGGTTGATGAGATGTTGGCGTTTTACAGCGAGGAAGGAAAAGTCAACGAAGGTGGTGATTTGCAAAACGCCATTAACCTTACTCGAGATAACATCAAAGCCATAATCATGGATGTAATGTTCGGTGGAACTGAGACAGTGGCGTCCGCCATAGAATGGGCCATGACGGAGCTAATGCATACACCGGAGGCACTAAAGCGCGTGCAACAGGAGATGGCAAATGTCGTCGGACTTGACCGGCGCGTGGAGGAGTCTGACTTGGAGAAGCTGACGTACTTCAAATGCGTCATCAAGGAAACCCTCCGACTACACCCTCCGATCCCAGTTCTCCTCCACCAGTCTTCGGAGGCGACAGAAGTTTCCGGCTACCATATACCTAAAGGAACACGTGTCATGGTGAACGCGTATGCTATTAATCGTGATAAGAACTCTTGGGAAGATCCGGATACGTTTAACCCGTCACGTTTTTTACAAAACGGAGCTCCGGATTTTAGAGGAAGCAACTATGAGTTTCTGCCATTTGGTTCTGGTCGGAGGTCGTGTCCGGGGATGCAACTAGGGTTGTATGCGATGGAGATGGCGGTGGCCCACCTTTTGCATTGTTTCACGTGGGAATTGCCGGATGGAATGAAGCCAAGTGAAATCGACATGGGTGATGTGTTTGGACTCACAGCACCAAAAGCAATAAGATTGGTAGCAGTGCCAACTCCGCGTTTATTATGCCCATTGTATTGA

SEQ ID No:175

>Lettuce_LsF5H_2_1 CDS突变2

ATGGATCCTAAGTCCATCTTACTTTACGTTGTACTCCCTCTCTTAACCTTCTTCCTTCTCTCCCGATTACGCCGAAAACCTCTTCCGCCTGGTCCAAGAGGGTGGCCGCTGATCGGTAACATGTTAATGATGGACCAACTCACCCACCGTGGCCTTGCTCGTTTGGGAGAAAAATACGGTGGTCTTCTTCATCTGAAGATGGGTTTCAGCCATACCGTCGCTGTCTCGTCCCCCGAAATAGCCAGGCAAGTACTCCAAGTTCAAGACAACATCTTCGCCAACCGCCCGGCCACCATCGCCATTAGTTACCTCACCTACGACCGGCAAGACATGGCGTTCGCCAACTACGGTCCCTTTTGGCGTCAGATGCGTAAGCTTTGCGTCATGAAGCTGTTCAGCAGAAAGCGAGCTGAGTCTTGGGACTCCGTCAGAGACGAAGTTGTCTCCATGGTCAAAATCATCGCTGCAAGCTCCGGCACCGCTGTTAACCTTGGAGAGCTTGTTTTCGGGTTAACCCATGATATCATTTACCGAGCAGCTTTCGGGTCTATCTCTCATGAAGGAAAAGAAGAATTCATCAGAATTCTACAAGAATACACAAAGCTTTTTGGTGCTTTCAATTTGGCAGATTTTGTCCCGTGGCTTGGATTTATCGACCCTGCCGGACTGAATACCCGTTTACCGAAGGCCAGGGCGGCGCTTGACAGATTCATTGATAAAATCATCGACGAGCACCTTGCAAAAGAGAGGAAAACGGGCGATGAGGAAGATAATGATATGGTGGATGAGATGTTGGCTTTTTACAGTGAAGAAGGAAAGGTAAACGAAGGCGAGGATTTGCAGAACGCGATTAGACTCACCCGAAACAATATCAAAGCCATTATTATGGATGTAATGTTTGGTGGGACTGAAACTGTTGCTTCTGCTATCGAATGGGCTTTAACTGAGCTAATGCACACCCCAGAATCCTTAAAACGTGCACAACAAGAGCTCGCTGATGTTGTTGGCCTTGATCGTCGTGTAGAAGAATCAGATTTCGAGAAGCTAACTTACTTCAAATGTGTCATCAAAGAAACCTTACGTCTCCACCCTCCGATCCCTGTCCTTTTGCACCAATCATCAGAAGCCACGTCGGTTGCTGGCTACCACATACCTAAAGGGACACGTGTCATGGTTAACGCATTCGCCATTAATCGTGATAAGAACTCATGGAAGGATCCACACACGTTCAACCCATCACGTTTCTTGCAAGATGGGGCACCCGACTTTAAAGGAAGCAATTATGAGTTTCTTCCATTTGGATCTGGACGTAGATCATGTCCTGGAATGCAACTTGGATTGTACGCAATGGAGATGGCAGTGGCTCACCTTCTTCATTCATTCACATGGCAGTTGCCTGATGGAATGAAACCAAGTGAGATTGACATGAATGATGTGTTTGGACTCACTGCACCAAAAGCGATTCGACTTGTTGCTGTGCCAACTCCTCGGTTGTTGTGTCCGCTGTATTGA

SEQ ID No:176

>Lettuce_LsF5H_2_1 CDS突变3

ATGGATCCTAAGTCCATCTTACTTTACGTTGTACTCCCTCTCTTAACCTTCTTCCTTCTCTCCCGATTACGCCGAAAACCTCTTCCGCCTGGTCCAAGAGGGTGGCCGCTGATCGGTAACATGTTAATGATGGACCAACTCACCCACCGTGGCCTTGCTCGTTTGGGAGAAAAATACGGTGGTCTTCTTCATCTGAAGATGGGTTTCAGCCATACCGTCGCTGTCTCGTCCCCCGAAATAGCCAGGCAAGTACTCCAAGTTCAAGACAACATCTTCGCCAACCGCCCGGCCACCATCGCCATTAGTTACCTCACCTACGACCGGCAAGACATGGCGTTCGCCAACTACGGTCCCTTTTGGCGTCAGATGCGTAAGCTTTGCGTCATGAAGCTGTTCAGCAGAAAGCGAGCTGAGTCTTGGGACTCCGTCAGAGACGAAGTTGTCTCCATGGTCAAAATCACCGCTGCAAGCTCCGGCACCGCTGTTAACCTTGAAGAGCTTGTTTTCGGGTTAACCCATGATATCATTTACCGAGCAGCTTTCGGGTCTATCTCTCATGAAGGAAAAGAAGAATTCATCAGAATTCTACAAGAATACACAAAGCTTTTTGGTGCTTTCAATTTGGCAGATTTTGTCCCGTGGCTTGGATTTATCGACCCTGCCGGACTGAATACCCGTTTACCGAAGGCCAGGGCGGCGCTTGACAGATTCATTGATAAAATCATCGACGAGCACCTTGCAAAAGAGAGGAAAACGGGCGATGAGGAAGATAATGATATGGTGGATGAGATGTTGGCTTTTTACAGTGAAGAAGGAAAGGTAAACGAAGGCGAGGATTTGCAGAACGCGATTAGACTCACCCGAAACAATATCAAAGCCATTATTATGGATGTAATGTTTGGTGGGACTGAAACTGTTGCTTCTGCTATCGAATGGGCTTTAACTGAGCTAATGCACACCCCAGAATCCTTAAAACGTGCACAACAAGAGCTCGCTGATGTTGTTGGCCTTGATCGTCGTGTAGAAGAATCAGATTTCGAGAAGCTAACTTACTTCAAATGTGTCATCAAAGAAACCTTACGTCTCCACCCTCCGATCCCTGTCCTTTTGCACCAATCATCAGAAGCCACGTCGGTTGCTGGCTACCACATACCTAAAGGGACACGTGTCATGGTTAACGCATTCGCCATTAATCGTGATAAGAACTCATGGAAGGATCCACACACGTTCAACCCATCACGTTTCTTGCAAGATGGGGCACCCGACTTTAAAGGAAGCAATTATGAGTTTCTTCCATTTGGATCTGGACGTAGATCATGTCCTGGAATGCAACTTGGATTGTACGCAATGGAGATGGCAGTGGCTCACCTTCTTCATTCATTCACATGGCAGTTGCCTGATGGAATGAAACCAAGTGAGATTGACATGAATGATGTGTTTGGACTCACTGCACCAAAAGCGATTCGACTTGTTGCTGTGCCAACTCCTCGGTTGTTGTGTCCGCTGTATTGA

SEQ ID No:177

>Lettuce_LsF5H_2_1 CDS突变4

ATGGATCCTAAGTCCATCTTACTTTACGTTGTACTCCCTCTCTTAACCTTCTTCCTTCTCTCCCGATTACGCCGAAAACCTCTTCCGCCTGGTCCAAGAGGGTGGCCGCTGATCGGTAACATGTTAATGATGGACCAACTCACCCACCGTGGCCTTGCTCGTTTGGGAGAAAAATACGGTGGTCTTCTTCATCTGAAGATGGGTTTCAGCCATACCGTCGCTGTCTCGTCCCCCGAAATAGCCAGGCAAGTACTCCAAGTTCAAGACAACATCTTCGCCAACCGCCCGGCCACCATCGCCATTAGTTACCTCACCTACGACCGGCAAGACATGGCGTTCGCCAACTACGGTCCCTTTTGGCGTCAGATGCGTAAGCTTTGCGTCATGAAGCTGTTCAGCAGAAAGCGAGCTGAGTCTTGGGACTCCGTCAGAGACGAAGTTGTCTCCATGGTCAAAATCACCGCTGCAAGCTCCGGCACCGCTGTTAACCTTGGAGAGCTTGTTTTCGGGTTAACCCATGATATCATTTACCGAGCAGCTTTCGGGTCTATCTCTCATGAAGGAAAAGAAGAATTCATCAGAATTCTACAAGAATACACAAAGCTTTTTGGTGCTTTCAATTTGGCAGATTTTGTCCCGTGGCTTGGATTTATCGACCCTGCCGGACTGAATACCCGTTTACCGAAGGCCAGGGCGGCGCTTGACAGATTCATTGATAAAATCATCGACGAGCACCTTGCAAAAGAGAGGAAAACGGGCGATGAGGAAGATAATGATATGGTGGATGAGATGTTGGCTTTTTACAGTGAAGAAGGAAAGGTAAACGAAGGCGAGGATTTGCAGAACGCGATTAGACTCACCCGAAACAATATCAAAGCCATTATTATGGATGTAATGTTTGGTGGGACTGAAACTGTTGCTTTTGCTATCGAATGGGCTTTAACTGAGCTAATGCACACCCCAGAATCCTTAAAACGTGCACAACAAGAGCTCGCTGATGTTGTTGGCCTTGATCGTCGTGTAGAAGAATCAGATTTCGAGAAGCTAACTTACTTCAAATGTGTCATCAAAGAAACCTTACGTCTCCACCCTCCGATCCCTGTCCTTTTGCACCAATCATCAGAAGCCACGTCGGTTGCTGGCTACCACATACCTAAAGGGACACGTGTCATGGTTAACGCATTCGCCATTAATCGTGATAAGAACTCATGGAAGGATCCACACACGTTCAACCCATCACGTTTCTTGCAAGATGGGGCACCCGACTTTAAAGGAAGCAATTATGAGTTTCTTCCATTTGGATCTGGACGTAGATCATGTCCTGGAATGCAACTTGGATTGTACGCAATGGAGATGGCAGTGGCTCACCTTCTTCATTCATTCACATGGCAGTTGCCTGATGGAATGAAACCAAGTGAGATTGACATGAATGATGTGTTTGGACTCACTGCACCAAAAGCGATTCGACTTGTTGCTGTGCCAACTCCTCGGTTGTTGTGTCCGCTGTATTGA

SEQ ID No:178

>Lettuce_LsF5H_2_1 CDS突变5

ATGGATCCTAAGTCCATCTTACTTTACGTTGTACTCCCTCTCTTAACCTTCTTCCTTCTCTCCCGATTACGCCGAAAACCTCTTCCGCCTGGTCCAAGAGGGTGGCCGCTGATCGGTAACATGTTAATGATGGACCAACTCACCCACCGTGGCCTTGCTCGTTTGGGAGAAAAATACGGTGGTCTTCTTCATCTGAAGATGGGTTTCAGCCATACCGTCGCTGTCTCGTCCCCCGAAATAGCCAGGCAAGTACTCCAAGTTCAAGACAACATCTTCGCCAACCGCCCGGCCACCATCGCCATTAGTTACCTCACCTACGACCGGCAAGACATGGCGTTCGCCAACTACGGTCCCTTTTGGCGTCAGATGCGTAAGCTTTGCGTCATGAAGCTGTTCAGCAGAAAGCGAGCTGAGTCTTGGGACTCCGTCAGAGACGAAGTTGTCTCCATGGTCAAAATCACCGCTGCAAGCTCCGGCACCGCTGTTAACCTTGGAGAGCTTGTTTTCGGGTTAACCCATGATATCATTTACCGAGCAGCTTTCGGGTCTATCTCTCATGAAGGAAAAGAAGAATTCATCAGAATTCTACAAGAATACACAAAGCTTTTTGGTGCTTTCAATTTGGCAGATTTTGTCCCGTGGCTTGGATTTATCGACCCTGCCGGACTGAATACCCGTTTACCGAAGGCCAGGGCGGCGCTTGACAGATTCATTGATAAAATCATCGACGAGCACCTTGCAAAAGAGAGGAAAACGGGCGATGAGGAAGATAATGATATGGTGGATGAGATGTTGGCTTTTTACAGTGAAGAAGGAAAGGTAAACGAAGGCGAGGATTTGCAGAACGCGATTAGACTCACCCGAAACAATATCAAAGCCATTATTATGGATGTAATGTTTGGTGGGACTGAAACTGTTGCTTCTGCTATCGAATGGGCTTTAACTGAGCTAATGCACACCCCAGAATCCTTAAAACGTGCACAACAAGAGCTCGCTGATGTTGTTGGCCTTGATCGTCGTGTAGAAGAATCAGATTTCGAGAAGCTAACTTACTTCAAATGTGTCATCAAAGAAACCTTACGTCTCCACCCTCCGATCCCTGTCCTTTTGCACCAATCATCAGAAGCCACGTCGGTTGCTGGCTACCACATACCTAAAGGGACACGTGTCATGGTTAACGCATTCGCCATTAATCGTGATAAGAACTCATGGAAGGATCCACACACGTTCAACCCATCACGTTTCTTGCAAGATGGGGCACCCGACTTTAAAGGAAGCAATTATGAGTTTCTTCCATTTGAATCTGGACGTAGATCATGTCCTGGAATGCAACTTGGATTGTACGCAATGGAGATGGCAGTGGCTCACCTTCTTCATTCATTCACATGGCAGTTGCCTGATGGAATGAAACCAAGTGAGATTGACATGAATGATGTGTTTGGACTCACTGCACCAAAAGCGATTCGACTTGTTGCTGTGCCAACTCCTCGGTTGTTGTGTCCGCTGTATTGA

SEQ ID No:179

>Lettuce_LsF5H_2_1 CDS突变6

ATGGATCCTAAGTCCATCTTACTTTACGTTGTACTCCCTCTCTTAACCTTCTTCCTTCTCTCCCGATTACGCCGAAAACCTCTTCCGCCTGGTCCAAGAGGGTGGCCGCTGATCGGTAACATGTTAATGATGGACCAACTCACCCACCGTGGCCTTGCTCGTTTGGGAGAAAAATACGGTGGTCTTCTTCATCTGAAGATGGGTTTCAGCCATACCGTCGCTGTCTCGTCCCCCGAAATAGCCAGGCAAGTACTCCAAGTTCAAGACAACATCTTCGCCAACCGCCCGGCCACCATCGCCATTAGTTACCTCACCTACGACCGGCAAGACATGGCGTTCGCCAACTACGGTCCCTTTTGGCGTCAGATGCGTAAGCTTTGCGTCATGAAGCTGTTCAGCAGAAAGCGAGCTGAGTCTTGGGACTCCGTCAGAGACGAAGTTGTCTCCATGGTCAAAATCACCGCTGCAAGCTCCGGCACCGCTGTTAACCTTGGAGAGCTTGTTTTCGGGTTAACCCATGATATCATTTACCGAGCAGCTTTCGGGTCTATCTCTCATGAAGGAAAAGAAGAATTCATCAGAATTCTACAAGAATACACAAAGCTTTTTGGTGCTTTCAATTTGGCAGATTTTGTCCCGTGGCTTGGATTTATCGACCCTGCCGGACTGAATACCCGTTTACCGAAGGCCAGGGCGGCGCTTGACAGATTCATTGATAAAATCATCGACGAGCACCTTGCAAAAGAGAGGAAAACGGGCGATGAGGAAGATAATGATATGGTGGATGAGATGTTGGCTTTTTACAGTGAAGAAGGAAAGGTAAACGAAGGCGAGGATTTGCAGAACGCGATTAGACTCACCCGAAACAATATCAAAGCCATTATTATGGATGTAATGTTTGGTGGGACTGAAACTGTTGCTTCTGCTATCGAATGGGCTTTAACTGAGCTAATGCACACCCCAGAATCCTTAAAACGTGCACAACAAGAGCTCGCTGATGTTGTTGGCCTTGATCGTCGTGTAGAAGAATCAGATTTCGAGAAGCTAACTTACTTCAAATGTGTCATCAAAGAAACCTTACGTCTCCACCCTCCGATCCCTGTCCTTTTGCACCAATCATCAGAAGCCACGTCGGTTGCTGGCTACCACATACCTAAAGGGACACGTGTCATGGTTAACGCATTCGCCATTAATCGTGATAAGAACTCATGGAAGGATCCACACACGTTCAACCCATCACGTTTCTTGCAAGATGGGGCACCCGACTTTAAAGGAAGCAATTATGAGTTTCTTCCATTTGGATCTGAACGTAGATCATGTCCTGGAATGCAACTTGGATTGTACGCAATGGAGATGGCAGTGGCTCACCTTCTTCATTCATTCACATGGCAGTTGCCTGATGGAATGAAACCAAGTGAGATTGACATGAATGATGTGTTTGGACTCACTGCACCAAAAGCGATTCGACTTGTTGCTGTGCCAACTCCTCGGTTGTTGTGTCCGCTGTATTGA

本发明还包括以下实施方案:

1.一种包含经修饰的F5H基因同源物的植物,其中所述基因同源物与其相应的野生型F5H基因同源物相比包含修饰,其中与不包含经修饰的F5H基因同源物的植物相比,所述植物中经修饰的F5H基因同源物的存在导致伤口诱导的表面变色的减少。

2.实施方案1的植物,其中野生型F5H基因序列由SEQ ID No:58至114中的任一序列表示。

3.实施方案1-2中任一项的植物,其中所述植物选自马铃薯(Solanumtuberosum),洋葱(Allium cepa),莴苣(Lactuca sativa),朝鲜蓟(Cynara cardunculusvar.Scolymus),水稻(Oryza sativa),玉米(Zea mays),桃(Prunus persica),茄子(Solanum melongena),菊苣(Cichorium intybus),苦苣(Cichorium endivia),芹菜(Apium graveolens),苹果(Malus domestica),香蕉(Musa acuminate),大豆(Glycinemax),梨(Pyrus x bretschneideri),小麦(Triticum aestivum),萝卜(Raphanussativus)和甘蓝(Brassica oleracea),其野生型F5H基因序列SEQ ID编号列于表2中。

4.实施方案1-2中任一项的植物,其中所述植物包含两种经修饰的F5H基因同源物。

5.实施方案4的植物,其中所述植物选自莴苣,朝鲜蓟,粳稻(Oryza sativaJaponica),玉米,桃,茄子,菊苣,苦苣,芹菜,苹果,香蕉,大豆,梨,小麦,萝卜和甘蓝,其野生型F5H基因序列SEQ ID编号列于表2中。

6.实施方案1-2中任一项的植物,其中所述植物包含三种经修饰的F5H基因同源物。

7.实施方案6的植物,其中所述植物选自菊苣,苦苣,芹菜,苹果,香蕉,大豆,梨,小麦,萝卜和甘蓝,其野生型F5H基因序列SEQ ID编号列于表2中。

8.实施方案1-2中任一项的植物,其中所述植物包含四种经修饰的F5H基因同源物。

9.实施方案8的植物,其中所述植物选自香蕉,大豆,梨,小麦,萝卜和甘蓝,其野生型F5H基因序列SEQ ID编号列于表2中。

10.实施方案1-2中任一项的植物,其中所述植物包含五种或更多种经修饰的F5H基因同源物。

11.实施方案10的植物,其中所述植物选自大豆,梨,小麦,萝卜和甘蓝,其野生型F5H基因序列SEQ ID编号列于表2中。

12.实施方案1-11中任一项的植物,其中与相应的野生型F5H1基因同源物产生的蛋白的表达相比,所述修饰导致F5H1蛋白同源物的蛋白表达的减少或不存在。

13.实施方案1-12中任一项的植物,其中与相应的野生型F5H1基因同源物产生的蛋白的活性相比,所述修饰导致F5H1蛋白同源物的蛋白活性的降低或不存在。

14.实施方案1-13中任一项的植物,其中所述修饰导致提前终止密码子。

15.实施方案1-5和12-14中任一项的植物,其中所述植物是莴苣植物并且包含被称为F5H1的第一经修饰的F5H基因同源物和任选地被称为F5H2的第二经修饰的F5H基因同源物,所述F5H1的野生型具有SEQ ID No.115,所述F5H2的野生型具有SEQ ID No.116。

16.实施方案15的植物,其中所述经修饰的F5H1基因同源物是纯合存在的,并且所述经修饰的F5H2基因同源物是杂合或纯合存在的。

17.实施方案15-16中任一项的植物,其中所述经修饰的F5H1基因包含提前终止密码子。

18.实施方案17的植物,其中所述植物是莴苣植物,并且所述提前终止密码子由SEQ ID No:115的第370位的突变C>T引起。

19.实施方案17的植物,其中所述植物是图4中列出的另一种植物,并且所述提前终止密码子是由对应于莴苣中SEQ ID No:115的第370位的位置的突变引起的。

20.实施方案15-19中任一项的植物,其中所述经修饰的F5H2基因编码具有一个或多个氨基酸取代的蛋白。

21.实施方案15-20中任一项的植物,其中所述植物是莴苣植物,并且所述经修饰的F5H2基因包含突变,所述突变导致SEQ ID No:2的编码的F5H2蛋白的第154位的苏氨酸至异亮氨酸的氨基酸取代,和/或SEQ ID No:2的编码的F5H2蛋白的第165位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代,和/或SEQ ID No:2的编码的F5H2蛋白的第308位的丝氨酸至苯丙氨酸的氨基酸取代,和/或SEQ ID No:2的编码的F5H2蛋白的第434位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代,和/或SEQ ID No:2的编码的F5H2蛋白的第436位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代。

22.实施方案21的植物,其中编码的F5H2蛋白的第154位的苏氨酸至异亮氨酸的氨基酸取代是SEQ ID No:116的第461位的C>T核苷酸变化的结果,编码的F5H2蛋白的第165位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代是SEQ ID No:116的第494位的G>A核苷酸变化的结果,编码的F5H2蛋白的第308位的丝氨酸至苯丙氨酸的氨基酸取代是SEQ ID No:116的第923位的C>T核苷酸变化的结果,编码的F5H2蛋白的第434位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代是SEQID No:116的第1301位的G>A核苷酸变化的结果,和编码的F5H2蛋白的第436位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代是SEQ ID No:116的第1307位的G>A核苷酸变化的结果。

23.实施方案20或22的植物,其中所述植物是图4中列出的另一种植物,并且所述氨基酸取代位于对应于莴苣中的位置的位置。

24.实施方案1-23中任一项的植物的一部分,其中所述部分是叶、植物的整个头部、果实、花序、种子、花球(curd)、茎、块茎、球茎或根,任选其是经加工的形式。

25.一种食品,其包含实施方案24的植物的一部分。

26.一种种子,其能够发育成实施方案1-23中任一项的植物。

27.实施方案1-23中任一项的植物的种子,其中所述种子在其基因组中包含经修饰的F5H基因同源物。

28.一种繁殖材料,其能够发育成和/或衍生自实施方案1-23中任一项的植物,其中所述繁殖材料选自小孢子、花粉、子房、胚珠、胚、胚囊、卵细胞、插枝、根、根尖、下胚轴、子叶、茎、叶、花、花药、种子、分生细胞、原生质体和细胞、或其组织培养物。

29.实施方案1-23中任一项所定义的经修饰的F5H基因同源物,其赋予植物减少的伤口诱导的表面变色。

30.实施方案1-23中任一项所定义的经修饰的F5H基因同源物用于开发表现出减少的伤口诱导的表面变色的植物的用途。

31.实施方案1-23中任一项的植物,其中F5H1蛋白的内源水平的降低是由于表2中列出的野生型F5H序列中的提前终止密码子。

32.产生表现出减少的伤口诱导的表面变色的植物的方法,其包括降低植物中F5H1蛋白的内源水平。

33.实施方案32的方法,其中通过突变野生型F5H1基因同源物来降低植物中F5H1蛋白的内源水平。

34.实施方案32或33的方法,其中所述突变通过CRISPR、化学试剂、辐射或其组合实现。

35.实施方案32的方法,其中降低植物中F5H1蛋白的内源水平通过由基因沉默或RNAi降低植物的F5H1基因同源物的表达来实现。

36.实施方案32-35中任一项的方法,其中野生型F5H1基因同源物具有其SEQ ID编号列于表2中的核苷酸序列和相应的氨基酸序列。

37.包含降低的F5H1表达的植物,其中所述降低是由实施方案32-36的方法之一引起的。

38.选择显示减少的伤口诱导的表面变色的植物的方法,其中所述方法包括筛选植物或植物群体中实施方案1-23中任一项的经修饰的F5H基因同源物的存在,任选地应用表型测试以鉴定显示减少的伤口诱导的表面变色的植物,和选择显示减少的伤口诱导的表面变色的植物。

39.一种分子标记,其用于在植物的基因组中检测引起所述植物或其部分中减少的伤口诱导的表面变色的突变,其中所述标记是任何F5H野生型序列中的突变,其野生型序列的SEQ ID编号如表2所示。

40.实施方案39的分子标记,其中所述突变是SEQ ID No:115的第370位的C>T的核苷酸变化。

41.实施方案39的分子标记,其中所述突变是由SEQ ID No:116的第461位的C>T变化引起的编码的蛋白的第154位的苏氨酸至异亮氨酸的氨基酸取代,和/或由SEQ ID No:116的第494位的G>A变化引起的编码的蛋白的第165位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代,和/或由SEQ ID No:116的第923位的C>T变化引起的编码的蛋白的第308位的丝氨酸至苯丙氨酸的氨基酸取代,和/或由SEQ ID No:116的第1301位的G>A变化引起的编码的蛋白的第434位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代,和/或由SEQ ID No:116的第1307位的G>A变化引起的编码的蛋白的第436位的甘氨酸至谷氨酸的氨基酸取代。

42.实施方案39-41中任一项的分子标记的用途,用于鉴定或开发显示减少的伤口诱导的表面变色的植物,或开发与实施方案1-23中任一项所定义的经修饰的F5H基因同源物相关的其他标记。

43.鉴定与植物的减少的伤口诱导的表面变色相关的分子标记的方法,其包括:

a)从植物和从所述植物的一个或两个亲本中分离DNA;

b)在对应于SEQ ID No:175、176、177、178或179的序列处或附近筛选所述DNA的区域中的分子标记,

c)确定所述标记与来自所述植物的一个或两个亲本的减少的伤口诱导的表面变色表型的共遗传。

44.用于产生显示减少的伤口诱导的表面变色的植物的方法,其包括:

(a)将包含实施方案1的经修饰的F5H基因同源物的植物与另一植物杂交;

(b)任选地进行一轮或多轮自交和/或杂交;和

(c)任选地在每轮自交或杂交后选择包含所述减少的伤口诱导的表面变色的植物。

45.实施方案44的方法,其中表型选择和/或通过使用分子标记选择所述植物。

46.产生杂种植物种子的方法,其包括使第一亲本植物与第二亲本植物杂交并收获所得的植物种子,其中所述第一亲本植物和/或所述第二亲本植物包含实施方案1中定义的经修饰的F5H基因同源物。

47.确定实施方案1的植物中经修饰的F5H基因同源物的存在的方法,其包括以下步骤:从所述植物获得核酸样品,将所述核酸与从包含野生型F5H基因同源物的参考植物获得的核酸样品进行比较,并检测两种核酸样品之间的多态性,其中检测的多态性指示所述经修饰的F5H基因同源物的存在。

48.实施方案47的方法,其中所述野生型F5H基因同源物是其SEQ ID编号列于表2中的任一序列。

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