一种枸橼酸钠溶液中丙酮二羧酸含量的测定方法

技术领域

本发明属于化学制药技术领域，具体涉及一种枸橼酸钠溶液中丙酮二羧酸含量的测定方法。

背景技术

丙酮二羧酸是有机合成中的重要中间体，可用在工业合成格拉司琼、内型降托品以及香豆素等化合物，其衍生物可用来合成雷尼酸锶等抗骨质疏松的药物。由于它们反应活性良好，一直是有机合成中研究的热点。其合成方法已有大量的研究成果，丙酮二羧酸的合成方法多采用枸橼酸钠为原料，经浓硫酸或过氧化氢氧化脱羧而得到。

但丙酮二羧酸含量测定方法却鲜有提及，由于在氧化、光照及高温条件下，枸橼酸钠会不同程度的降解，其主要的降解产物为丙酮二羧酸，传统的方法采用氢氧化钠滴定法，但生成的丙酮二羧酸钠为强碱弱酸盐，用酚酞指示剂判断终点，会影响结果的准确判断，因此目前急需发明一种更为准确快捷的方法来测定丙酮二羧酸含量。

本发明中采用高效液相法，对枸橼酸钠溶液中的丙酮二羧酸含量进行了有效控制，并对方法进行了验证，各验证指标均良好，方法可靠性高。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种枸橼酸钠溶液中丙酮二羧酸含量的测定方法，以确保枸橼酸钠的主要降解产物得到有效控制，同时也可作为以枸橼酸钠或柠檬酸为原料，合成丙酮二羧酸过程中的产物含量控制方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种枸橼酸钠溶液中丙酮二羧酸含量的测定方法，包括1)系统适用性溶液的制备：取丙酮二羧酸对照品、枸橼酸对照品各适量，用流动相溶解并稀释制成每1ml中约含枸橼酸和丙酮二羧酸各100μg的溶液；

2)供试品溶液的制备：精密量取2.5％枸橼酸钠溶液2ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀；

3)对照品溶液的制备：取丙酮二羧酸对照品适量，用流动相溶解并稀释制成每1ml中约含丙酮二羧酸100μg的溶液；

4)按照高效液相色谱法测定，精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；采用外标法以丙酮二羧酸峰的峰面积计，记录计算结果；

优选的，色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters Xselect HSST3，4.6mm×250mm)；以0.02～0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至2.50～2.90)-甲醇(100～95：0～5)为流动相；检测波长为210～220nm；流速为每分钟0.5～1.0ml；柱温为20～35℃；进样体积20μl。

优选的，系统适用性溶液色谱图中，出峰顺序为丙酮二羧酸、枸橼酸，枸橼酸峰与丙酮二羧酸峰间的分离度应不小于2.0。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明通过高效液相色谱法对枸橼酸钠溶液中的丙酮二羧酸进行含量测定，从而对枸橼酸钠溶液的主要降解产物进行控制，有利于控制枸橼酸钠溶液的工艺条件和贮藏条件，同时也能将合成丙酮二羧酸过程中产率准确获得。

附图说明

图1为本发明的流动相色谱图；

图2为本发明的枸橼酸对照品色谱图；

图3为本发明的丙酮二羧酸对照品色谱图；

图4为本发明的系统适用性图谱；

图5本发明的供试品溶液图谱。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1至图5，本发明提供一种技术方案：一种枸橼酸钠溶液中丙酮二羧酸含量的测定方法，包括1)系统适用性溶液的制备：取丙酮二羧酸对照品、枸橼酸对照品各适量，用流动相溶解并稀释制成每1ml中约含枸橼酸和丙酮二羧酸各100μg的溶液；

2)供试品溶液的制备：精密量取2.5％枸橼酸钠溶液2ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀；

3)对照品溶液的制备：取丙酮二羧酸对照品适量，用流动相溶解并稀释制成每1ml中约含丙酮二羧酸100μg的溶液；

4)按照高效液相色谱法测定，精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；采用外标法以丙酮二羧酸峰的峰面积计，记录计算结果；

本实施例中，优选的，色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(WatersXselect HSS T3，4.6mm×250mm)；以0.02～0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至2.50～2.90)-甲醇(100～95：0～5)为流动相；检测波长为210～220nm；流速为每分钟0.5～1.0ml；柱温为20～35℃；进样体积20μl。

本实施例中，优选的，系统适用性溶液色谱图中，出峰顺序为丙酮二羧酸、枸橼酸，枸橼酸峰与丙酮二羧酸峰间的分离度应不小于2.0。

方法验证过程：

步骤1：检测波长的确定；

枸橼酸对照品溶液：取枸橼酸对照品适量，用水配制成含枸橼酸100μg/ml的溶液。

丙酮二羧酸对照品溶液：取丙酮二羧酸对照品适量，用水配制成含丙酮二羧酸100μg/ml的溶液。

分别取上述溶液，用紫外分光光度计进行全波长扫描。

扫描结果为，在210～220nm波长下，两种图谱吸光度差异最大，此波长段适合于分离。

步骤2：专属性；

枸橼酸对照品溶液：取枸橼酸对照品适量，用水配制成含枸橼酸10μg/ml的溶液。

丙酮二羧酸对照品溶液：取丙酮二羧酸对照品适量，用水配制成含丙酮二羧酸100μg/ml的溶液。

分别对流动相、枸橼酸对照品溶液、丙酮二羧酸对照品溶液，照上述色谱条件进样，记录色谱图，流动相色谱图见附图1、枸橼酸对照品色谱图见附图2、丙酮二羧酸对照品色谱图见附图3，由图谱可知在此色谱条件下各峰间均无干扰，专属性良好。

步骤3：检出限；

以信噪比3:1为标准，测得丙酮二羧酸的检出限为0.3μg/ml。

步骤4：定量限；

以信噪比10:1为标准，测得丙酮二羧酸的检出限为1.0μg/ml。

步骤5：耐用性；

溶液稳定性：取丙酮二羧酸对照品溶液和供试品溶液于0h、4h、8h分别进样，实验结果如下：

表1耐用性考察结果表

由上表可知，丙酮二羧酸溶液在4h时与0h相比数据基本一致，说明4h内稳定，而8h时与0h和4h相比，数据均有明显的下降，说明不稳定，因此本实验时对照品溶液和供试品溶液均需要临用新制。

步骤6：样品检测

分别取2.5％枸橼酸钠溶液三批(RY210605、RY210606、RY210607)，按照确定的方法进行实验，按外标法进行计算，结果如表2；系统适用性图谱见附图4，供试品溶液图谱见附图5。

表2样品检测结果表

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。