用于合成放射性核素络合物的方法

技术领域

本发明涉及合成放射性核素络合物溶液，特别是其在商业生产用于诊断和/或治疗目的的放射性药物物质的用途。

背景技术

靶向药物递送的概念基于与非靶向细胞相比在靶细胞中过表达的细胞受体。如果药物具有与那些过表达的细胞受体的结合位点，则它允许以高浓度将其系统化施用后的药物递送至那些靶细胞，同时使其他不感兴趣的细胞不受影响。例如，如果肿瘤细胞的特征在于特异细胞受体的过表达，则与所述受体具有结合亲和力的药物将在静脉内输注后以高浓度积聚在肿瘤组织中，同时使正常组织不受影响。

该靶向药物递送概念也已用于放射医学中以选择性地将放射性核素递送至靶细胞以用于诊断或治疗目的。对于这种放射医学应用，靶细胞受体结合部分典型地与能够与放射性核素的金属离子形成强络合物的螯合剂连接。然后，将这种放射性核素络合物递送至靶细胞，随后放射性核素的衰变在靶位点释放高能电子、正电子或α颗粒以及γ射线。

这种放射性药物物质优选在屏蔽的密闭系统中产生；药物物质的制备、纯化和配制过程是连续过程的一部分。实际上，放射性核素的衰变不允许足够的时间进行任何中断。因此，优选在关键步骤不进行测试，并且在生产过程中不分离和控制合成中间体。

因此，期望提供用于生产这种放射性核素络合物的自动化合成方法。理想地，用于生产作为放射性药物物质的放射性核素络合物的自动化合成方法可以还具有以下优点：

-与高放射化学纯度相关的高标记产率，

-高标记产率且游离(未络合的)放射性核素水平最低，

-批量生产大量剂量。

本发明涉及用于合成由放射性核素和与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽形成的放射性核素络合物的方法，其特征在于，所述方法以如下顺序包括以下步骤：

a)向第一小瓶中提供放射性核素前体溶液，

b)将所述放射性核素前体溶液转移到反应器中，

c)向包含残留的放射性核素前体溶液的所述第一小瓶中提供反应缓冲液，

d)将所述反应缓冲液和残留的放射性核素前体溶液从所述第一小瓶转移到所述反应器中，

e)将包含所述与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽的溶液转移到所述反应器中，

f)使所述与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽与所述放射性核素在所述反应器中反应以获得所述放射性核素络合物，和，

g)回收所述放射性核素络合物。

本公开还涉及包含放射性核素络合物的水性药物溶液，该溶液可通过本文描述的方法获得或通过本文描述的方法直接获得。

附图说明

图1和图2显示实施例中描述的制备过程的主要步骤。

图3A和3B显示在改良之前和之后的制备过程中使用的盒的布置。

图4A：在TRACERlab MX合成模块中使用的最终盒安装。

图4B：在Trasis合成模块中使用的最终盒安装。

本公开涉及合成由放射性核素和与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽形成的放射性核素络合物，所述方法包括：

a)提供放射性核素前体，

b)提供与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽，

c)提供反应缓冲液，

d)在反应器中，将所述放射性核素前体和所述与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽与该反应缓冲液混合，

e)使与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽与所述放射性核素在反应器中反应以获得放射性核素络合物，

f)回收所述放射性核素络合物。

这种放射性核素络合物优选是作为诊断或治疗剂用于核医学中的放射性药物物质。

本公开的方法有利地适合于自动化。因此，在优选实施方案中，本公开的方法是自动化合成方法。术语“自动化合成”是指没有人工干预的情况下进行的化学合成。有利地，根据本公开的方法的合成可以在13-24mL的最终批次体积中提供比活性超过45GBq的放射性核素络合药物，即比活性浓度高于1875MBq/mL，例如1875-3500MBq/mL。例如，考虑到单剂量的

所述合成方法还可有利地提供超过60％的合成产率。

定义

如本文所用，术语“放射性核素前体溶液”是指包含用作起始原料的放射性核素的溶液。本公开的方法特别适合于使用金属性质的放射性核素，并且可用于医学中以用于诊断和/或治疗目的。这种放射性核素包括但不限于In、Tc、Ga、Cu、Zr、Y和Lu的放射性同位素，特别是：

在优选实施方案中，放射性核素前体溶液包含镥-177(

典型地，用于一批用于合成

如本文所用，术语“生长抑素受体结合肽”是指对生长抑素受体具有特异性结合亲和力的肽部分。这种生长抑素受体结合肽可以选自奥曲肽、octreotate、兰瑞肽、伐普肽和帕瑞肽，优选选自奥曲肽和octreotate。

如本文所用，术语“螯合剂”是指包含官能团的有机部分，所述官能团能够在方法的反应步骤中与放射性核素形成非共价键，从而形成稳定的放射性核素络合物。在本发明的上下文中，螯合剂可以是1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三乙酸(DO3A)、1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸(NOTA)或它们的混合物，优选DOTA。

这种螯合剂直接连接到生长抑素受体结合肽上，或通过接头分子连接，优选直接连接。连接键是细胞受体结合有机部分(和接头)与螯合剂之间的共价键或非共价键，优选地，该键是共价的。

根据本公开的合成方法的优选实施方案，与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽选自DOTA-OC、DOTA-TOC(依多曲肽)、DOTA-NOC、DOTA-TATE(oxodotreotide)、DOTA-LAN和DOTA-VAP，优选选自DOTA-TOC和DOTA-TATE，更优选DOTA-TATE。

特别优选的实施方案涵盖

例如，DOTA-TATE或DOTA-TOC肽溶液是包含0.8mg/mL-1.2mg/mL的DOTA-TATE或DOTA-TOC(例如，1mg/mL)的水溶液。在开始合成方法之前，可以通过将肽盐的干燥粉末溶解于无菌水中来获得肽溶液。典型地，用于一批的肽溶液可包含2或4mg(±5％)的DOTA-TATE或DOTA-TOC。

如本文所用，反应缓冲液是水溶液，优选至少包含抗辐射降解的稳定剂和pH为4.0-6.0，优选为4.5-5.5的缓冲液。

如本文所用，术语“抗辐射降解的稳定剂”是指保护有机分子免于辐射降解的稳定剂，例如当放射性核素发出的γ射线使有机分子的原子之间的键断裂并形成自由基时，这些自由基随后被稳定剂清除，这避免自由基经历任何其他可能导致不希望的、潜在的无效或甚至有毒分子的化学反应。因此，这些稳定剂也称为“自由基团清除剂”或简称为“自由基清除剂”。这些稳定剂的其他替代术语是“辐射稳定性增强剂”、“辐射稳定剂”或简称为“猝灭剂”。

存在于反应缓冲液中的稳定剂可以选自龙胆酸(2,5-二羟基苯甲酸)或其盐、抗坏血酸(L-抗坏血酸，维生素C)或其盐(例如抗坏血酸钠)、蛋氨酸、组氨酸、褪黑素、乙醇和硒甲硫氨酸，优选选自龙胆酸或其盐。在特定实施方案中，反应缓冲液不包含抗坏血酸，优选其包含龙胆酸而不是抗坏血酸作为稳定剂。

“pH为4.0-6.0，优选4.5-5.5的缓冲液”可以是乙酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液(例如柠檬酸盐+HCl或柠檬酸+磷酸氢二钠)或磷酸盐缓冲液(例如磷酸二氢钠+磷酸氢二钠)，优选所述缓冲液是乙酸盐缓冲液，优选地，所述乙酸盐缓冲液由乙酸和乙酸钠组成。

例如，反应缓冲液是在乙酸盐缓冲液中包含35-45mg/mL龙胆酸，例如39mg/mL龙胆酸的水溶液。在开始合成方法之前，可以通过将龙胆酸的干燥粉末(冻干物)溶解于无菌水中的乙酸盐缓冲液中来获得反应缓冲液。典型地，用于一批合成

合成方法的混合和反应步骤

在反应器小瓶中混合三种溶液后，开始放射性核素络合物的合成：

-放射性核素前体溶液，例如Lu-177氯化物溶液，

-反应缓冲液，例如包含龙胆酸的溶液，

-肽溶液，例如包含DOTA-TOC或DOTA-TATE，优选DOTA-TATE的溶液。

根据合成方法的一个优选实施方案，将上述三种溶液按如下顺序转移到反应器小瓶中：

1)放射性核素前体溶液，例如Lu-177氯化物溶液，

2)反应缓冲液，例如包含龙胆酸的溶液，和，

3)肽溶液，例如包含DOTA-TOC或DOTA-TATE，优选DOTA-TATE的溶液。

特别地，根据这种优选实施方案的有利方面，将反应缓冲液与放射性核素前体溶液混合，然后将其与肽溶液混合。

更具体地，发明人已经注意到高浓度放射性核素前体溶液的不完全转移对标记产率以及合成产率具有实质性影响。因此，在一个更优选实施方案中，所述合成方法以如下顺序包括以下步骤：

a.向第一小瓶中提供放射性核素前体溶液，

b.将所述放射性核素前体溶液转移到反应器中，

c.向包含残留的放射性核素前体溶液的所述第一小瓶中提供反应缓冲液，

d.将所述反应缓冲液和残留的放射性核素前体溶液从所述第一小瓶转移到所述反应器中，

e.将包含所述与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽的溶液转移到所述反应器中，

f.使与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽与所述放射性核素在所述反应器中反应以获得所述放射性核素络合物，

g.回收所述放射性核素络合物。

根据上述方案，反应缓冲液有利地用于冲洗包含放射性核素前体溶液的小瓶并确保放射性核素前体溶液在反应器中的完全(或几乎完全)转移，同时在标记时间保持相对较高的比活性浓度。典型地，在用于合成

合成方法的反应步骤包括放射性核素(例如镥-177)与螯合剂(例如用于DOTA-TOC或DOTA-TATE的DOTA)的螯合。发明人还表明，相对于放射性核素，摩尔过量的肽是优选的，以确保可接受的放射化学标记产率。因此，在另一个具体实施方案中，在反应步骤中与螯合剂(例如DOTA-TOC或DOTA-TATE)连接的生长抑素受体结合肽与放射性核素(例如镥-177)之间的摩尔比为至少1.2，优选1.5-3.5。

有利地，在本公开的合成方法的某些优选实施方案中，合成方法不包括任何纯化步骤以去除游离(非螯合的)镥-177，例如tC18固相萃取(SPE)纯化步骤。使用tC18柱以进行固相萃取(SPE)纯化步骤以除去游离(非螯合的)镥-177具有一些缺点。特别地，使用该柱可能需要用乙醇洗脱产物，这是不希望的(A.Mathur et al.,CancerBiother.Radiopharm.2017,32,266-273)。使用tC18柱也可去除稳定剂，然后需要再次添加稳定剂(S.Maus et al.Int.J.Diagnostic imagin2014,1,5-12)。

在某些实施方案中，特别是对于

在具体实施方案中，反应步骤的反应时间为2-15分钟，典型地为5或12分钟，和/或温度为80-100℃，优选90-95℃。

该方法可以进一步包括至少一个或多个冲洗步骤，以最佳回收反应步骤期间形成的放射性核素络合物。典型地，将一个或多个体积的水添加到反应器中，并以包含放射性核素络合物的最终体积回收。

优选地，反应步骤的混合物体积为4-12mL，并且在回收步骤之后的包含放射性核素络合物的最终体积(因此包括用于冲洗步骤的水的体积)为13-24mL。

合成

本公开的合成方法可以有利地用于合成

如本文所用，术语“母液”是指用于通过在配制缓冲液中稀释来制备最终药物产品的溶液。母液有利地使得能够制备至少5个治疗剂量的

在用于合成

a.向第一小瓶中提供放射性核素前体溶液，

b.将所述放射性核素前体溶液转移到反应器中，

c.向包含残留的放射性核素前体溶液的所述第一小瓶中提供反应缓冲液，

d.将所述反应缓冲液和残留的放射性核素前体溶液从所述第一小瓶转移到所述反应器中，

e.将包含所述与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽的溶液转移到所述反应器中，

f.使所述与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽与所述放射性核素在所述反应器中反应以获得所述放射性核素络合物，

g.回收所述放射性核素络合物。

并且使用以下溶液：

(i)所述放射性核素前体溶液是在1-2mL，典型地1.5mL体积中74GBq±20％的

(ii)所述包含与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽的溶液是在1.5-2.5mL，典型地2mL的体积中包含2mg±5％DOTA-TATE的溶液，

(iii)所述反应缓冲液在1.5-2.5mL，典型地2mL的体积中包含157mg±5％的龙胆酸，

并且所述反应步骤的pH值为4.5-5.5。

有利地，根据上述方法，在步骤g中回收的放射性核素络合物可以是水性浓缩母液，其在13-24mL的最终体积中包含比活性至少等于45.0GBq的

在合成

a.向第一小瓶中提供放射性核素前体溶液，

b.将所述放射性核素前体溶液转移到反应器中，

c.向包含残留的放射性核素前体溶液的所述第一小瓶中提供反应缓冲液，

d.将所述反应缓冲液和残留的放射性核素前体溶液从所述第一小瓶转移到所述反应器中，

e.将包含所述与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽的溶液转移到所述反应器中，

f.使所述与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽与所述放射性核素在所述反应器中反应以获得所述放射性核素络合物，

g.回收所述放射性核素络合物。

并且使用以下溶液：

(i)所述放射性核素前体溶液是在2-3mL，典型地2.5mL体积中148GBq±20％的

(ii)所述包含与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽的溶液是在3.5-4.5mL，典型地4mL的体积中包含4mg±5％DOTA-TATE的溶液，

(iii)所述反应缓冲液在3.5-5.5mL，典型地4mL的体积中包含314mg±5％的龙胆酸，

并且所述反应步骤的pH值为4.5-5.5。

有利地，根据上述方法，在步骤g中回收的放射性核素络合物可以是水性浓缩母液，其在19-24mL的最终体积中包含比活性至少等于59.0GBq的

上述特定方法使得合成产率可高于60％。

具有一次性试剂盒的合成模块

上述合成方法可以有利地自动化并且在具有一次性试剂盒的合成模块中实施。

例如，将一次性使用试剂盒安装在包含流体通路(管)、反应器小瓶和密封的试剂小瓶的合成模块的前部。一次性盒组件由专门选择的材料制成，以与过程中使用的试剂相容。特别地，将这些组件设计为使从与过程流体接触的表面的潜在浸出最小化，同时保持盒的机械性能和完整性。

优选地，合成方法是完全自动化的，并且合成在计算机辅助系统内进行。

典型的试剂盒可包括

(1)反应小瓶(反应器)，

(2)用于流入和流出流体的连接件，

(3)用于连接试剂小瓶的长钉，和，

(4)任选的固相柱。

技术人员可以适应用于制备放射性药物(如F-18标记的放射性药物)的市售试剂盒。

在特定实施方案中，合成模块和试剂盒包括以下：

(i)在第一位置，放置针状物以插入包含放射性前体溶液的所述第一小瓶的顶部，

(ii)在第二位置，放置针状物以插入包含所述溶液的小瓶的顶部，所述溶液包含与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽，

(iii)在第三位置，安装具有注射用水的袋，以进行冲洗步骤，

(iv)在第四位置，安装反应缓冲液，和，

(v)在第五位置，安装延长缆线，以将所述放射性核素络合物从所述合成模块转移到分配隔离器中。

实施例中描述了合成模块和试剂盒的具体实例。

本公开还涉及用于进行上文限定的方法的试剂盒，包括：

(i)第一容器，其包含反应缓冲液或所述反应缓冲液的冻干物，

(ii)第二容器，其包含肽溶液或肽溶液的冻干物，所述肽溶液包含与螯合剂连接的所述生长抑素受体结合肽，所述螯合剂优选为DOTA-TATE或DOTA-TOC，和

(iii)第三容器，其包含所述放射性核素前体溶液，优选镥-177氯化物溶液。

制备作为药物产品的放射性核素络合物

技术人员将能够使用上述合成方法将放射性核素络合物制备为药物产品。

在合成方法的特定实施方案中，合成方法还包括在配制缓冲液中稀释从上述合成方法回收的放射性核素络合物(典型地作为浓缩母液)的步骤。

如本文所用，词语“配制缓冲剂”是指用于获得“即用型”水性药物溶液的溶液。例如，

通过合成方法获得的水性药物溶液

本公开还涉及可通过本公开的上述合成方法获得或通过本公开的上述合成方法获得的水性药物溶液。

在特定实施方案中，可通过上述合成方法获得或通过上述合成方法获得获得的这种水性药物溶液是

在其他实施方案中，其进一步包括配制步骤，例如如之前段落所述，可通过上述合成方法获得或通过上述合成方法获得的这种水性药物溶液是用于输注

具体实施方式

1.用于合成由放射性核素和与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽形成的放射性核素络合物的方法，其特征在于，所述方法以如下顺序包括以下步骤：

a)向第一小瓶中提供放射性核素前体溶液，

b)将所述放射性核素前体溶液转移到反应器中，

c)向包含残留的放射性核素前体溶液的所述第一小瓶中提供反应缓冲液，

d)将所述反应缓冲液和残留的放射性核素前体溶液从所述第一小瓶转移到所述反应器中，

e)将包含所述与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽的溶液转移到所述反应器中，

f)使与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽与所述放射性核素在所述反应器中反应以获得所述放射性核素络合物，

g)回收所述放射性核素络合物。

2.根据实施方案1的方法，其中所述螯合剂选自DOTA、DTPA、NTA、EDTA、DO3A、NOC和NOTA，优选DOTA。

3.根据实施方案1或2的方法，其中所述生长抑素受体结合肽选自奥曲肽、octreotate、兰瑞肽、伐普肽和帕瑞肽，优选选自奥曲肽和octreotate。

4.根据实施方案1-3任一项的方法，其中所述与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽选自DOTA-OC、DOTA-TOC(依多曲肽)、DOTA-NOC、DOTA-TATE(oxodotreotide)、DOTA-LAN和DOTA-VAP，优选选自DOTA-TOC和DOTA-TATE，更优选DOTA-TATE。

5.根据实施方案1-4任一项的方法，其中所述放射性核素络合物是

6.根据实施方案5的方法，其中所述放射性核素前体溶液是

7.根据实施方案1-6任一项的方法，其中所述反应步骤f)的所述与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽与所述放射性核素之间的摩尔比为至少1.2，优选1.5-3.5。

8.根据实施方案1-7任一项的方法，其中所述反应缓冲液至少包含抗辐射降解的稳定剂，优选选自龙胆酸。

9.根据实施方案1-8任一项的方法，其中所述反应缓冲液包含乙酸钠。

10.根据实施方案1-9任一项的方法，其中所述反应步骤f在4.5-5.5的pH下进行。

11.根据实施方案1-10任一项的方法，其中所述反应缓冲液不包含抗坏血酸。

12.根据实施方案1-11任一项的方法，其中所述标记步骤f的反应时间为2-15分钟，典型地为5或12分钟，并且温度为80-100℃，优选90-95℃。

13.根据实施方案1-12任一项的方法，进一步包括至少一个或多个用于有效回收所述放射性核素络合物的冲洗步骤。

14.根据实施方案1-13任一项的方法，其中反应步骤的混合物体积为4-12mL，并且在回收步骤之后的包含放射性核素络合物的最终体积为13-24mL。

15.根据实施方案1-14任一项的方法，其中

(i)所述放射性核素前体溶液是在1-2mL，典型地1.5mL体积中74GBq±20％的

(ii)所述包含与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽的溶液是在1.5-2.5mL，典型地2mL的体积中包含2mg±5％DOTA-TATE的溶液，

(iii)所述反应缓冲液在1.5-2.5mL，典型地2mL的体积中包含157mg±5％的龙胆酸，

并且所述反应步骤的pH值为4.5-5.5。

16.根据实施方案1-14任一项的方法，其中

(i)所述放射性核素前体溶液是在2-3mL，典型地2.5mL体积中148GBq±20％的

(ii)所述包含与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽的溶液是在3.5-4.5mL，典型地4mL的体积中包含4mg±5％DOTA-TATE的溶液，

(iii)所述反应缓冲液在3.5-5.5mL，典型地4mL的体积中包含314mg±5％的龙胆酸，

并且所述反应步骤的pH值为4.5-5.5。

17.根据实施方案1-16任一项的方法，其中合成产率为至少60％。

18.根据实施方案1-17任一项的方法，其中所述在步骤g中回收的放射性核素络合物是水性浓缩母液，其包含比活性至少等于45.0GBq的

19.根据实施方案1-18任一项的方法，其中所述在步骤g中回收的放射性核素络合物是水性浓缩母液，其包含比活性至少等于59.0GBq的

20.根据实施方案1-19任一项的方法，其是自动化的并且在具有一次性试剂盒的合成模块中实施。

21.根据实施方案20的方法，其中所述合成模块包括：

a)一次性试剂盒，其包含所需的流体通路，和，

b)一次性试剂盒，其包含用于实施所述合成方法的试剂。

22.根据实施方案1-21任一项的方法，其中所述合成在计算机辅助系统内进行。

23.根据实施方案20-22任一项的方法，其中所述合成模块和试剂盒包括以下：

a)在第一位置，放置针状物以插入包含放射性前体溶液的所述第一小瓶的顶部，

b)在第二位置，放置针状物以插入包含所述溶液的小瓶的顶部，所述溶液包含与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽，

c)在第三位置，安装具有注射用水的袋，以进行冲洗步骤，

d)在第四位置，安装反应缓冲液，和，

e)在第五位置，安装延长缆线，以将所述放射性核素络合物从所述合成模块转移到分配隔离器中。

24.根据实施方案1-23任一项的方法，进一步包括以下步骤：

h.在配制缓冲液中稀释所述放射性核素络合物。

25.根据实施方案24的方法，其中所述放射性核素络合物是

26.根据实施方案24的方法，其中所述配制缓冲液是用于输注的溶液。

27.根据实施方案1-26任一项的方法，其中所述方法不包含任何纯化步骤以去除游离的(非螯合的)放射性核素，优选地，所述方法不包括tC18固相萃取(SPE)纯化步骤。

28.包含放射性核素络合物的水性药物溶液，所述溶液可通过实施方案1-27任一项的方法获得或通过实施方案1-27任一项的方法直接获得。

29.根据实施方案28的溶液，其是

30.根据实施方案29的溶液，其是比活性浓度高于1875MBq/mL，例如1875-3400MBq/mL的

31.根据实施方案28的溶液，其是用于输注

32.根据实施方案28的溶液，其是用于输注370MBq/mL±5％的

33.用于进行实施方案1-27任一项限定的方法的试剂盒，包括：

a)第一容器，其包含反应缓冲液或所述反应缓冲液的冻干物，

b)第二容器，其包含溶液，所述溶液包含所述与螯合剂连接的生长抑素受体结合肽，所述螯合剂优选为DOTA-TATE或DOTA-TOC，和

c)第三容器，其包含所述放射性核素前体溶液。

具体实施方式

实施例1：生产

1.1引言

放射性药物物质

药物物质合成步骤在自包含的封闭系统合成模块中进行，该模块由GMP兼容软件自动和远程控制，并自动监控和记录过程参数。

在合成模块的每次生产运行中，使用一次性使用的一次性试剂盒，其包含一个流体通路(管)，反应器小瓶和密封的试剂小瓶。在生产运行期间保护合成模块免受人工干预。将合成模块置于铅屏蔽的热室中，以提供过滤后的空气。

药物物质(

一般制备方法和相应步骤如图1和2所阐明。

1.2制备起始材料

制备方法中使用的药物物质的化学前体、放射性前体和中间体根据下表1制备。

表1

反应缓冲液冻干物的详细信息提供于下表2中：

表2

1.3制备合成模块和试剂盒

使用两种不同的Lu-177氯化物批次大小验证了制备方法：74.0GBq±20％(2Ci±20％)或148.0GBq±20％(4Ci±20％)。

使用安装在合成模块正面的一次性使用的一次性试剂盒进行合成，所述试剂盒包含流体通路(管)、反应器小瓶和密封的试剂小瓶。

表3总结了根据所选批次大小可在药物物质制备方法中使用的不同类型的设备和材料。

表3：用于药物物质制备方法的试剂盒和合成模块

1.4用于MiniAIO合成模块的试剂盒

试剂盒是即用型。

1.5用于TRACERlab MX合成模块的试剂盒

在开始合成药物物质之前，将一些改良引入试剂盒以使其适应

将待替换的部件在层流净化罩(A级)下组装，然后在C级环境中安装在合成模块上。

“用于改良TRACERlab MX试剂盒的试剂盒”包括2个用于替换原始试剂盒中的2个长钉的管、一个连接管以替换一个柱和一些塑料塞以关闭未使用的阀：

·第一根管替换试剂盒中位置3的长钉，

·第二根管替换试剂盒中位置5的长钉，

·连接管(较短)用于更换通常将歧管2与歧管3连接的第一tC18柱，

·从位置11和12去除氧化铝柱和第二tC-18柱。

·之前在tC18柱的位置12和位置13连接的管在位置12和另一端直接连接到延长缆线(用于将药物物质转移到A级分配热室中的延伸器)，

·位置9、10、11和13用塑料塞关闭。

1.6步骤1c：反应缓冲液冻干物溶解

在用于药物物质合成之前，将反应缓冲液冻干物(RBL)通过药物物质制备位点通过用注射用水(WFI)溶解而重构，以获得反应缓冲液。

在合成开始之前立即进行重构。

为溶解RBL：

重构后，反应缓冲液的组成如表4所示。

表4：重构后的反应缓冲液组成

1.7步骤1d：DOTA-Tyr

将DOTA-Tyr

为溶解DOTA-Tyr

-

-

1.8步骤3：将试剂盒和组件安装在合成模块上

将试剂盒组件安装在相应合成模块的前面。根据合成模块，将其他组件安装在相应的柱位置上。组装在C级环境中进行。

·

o位置1-左：无菌的Millex气体过滤器(疏水膜)，其连接到合成模块的进气口，

o位置4和14：将两个无菌的30mL注射器Luer Lock

o位置3：在管末端放置针头(该针头将插入小瓶顶部以抽吸DOTA-Tyr

o位置5：在管末端放置针头(该针头将插入小瓶顶部以抽吸

o位置12：连接延长缆线

盒的最终安装如图4A所示。

·

将所需组件安装在以下盒位置：

o位置1-上：放置针头(该针头将插入小瓶顶部以抽吸

o位置1左：将连接到位置1左的试剂盒的气体过滤器连接至进气口，

o位置4：放置针头(该针头将插入小瓶顶部以抽吸反应缓冲液)，

o位置5：放置针头(该针头将插入小瓶顶部以抽吸DOTA-Tyr

o位置6右：连接延长电缆以将药物物质从合成模块转移到分配隔离器(A级)中，

o位置6上：连接20mL无菌注射器Luer Lock。

盒的最终安装如图4B所示。

1.9步骤5：将起始材料安装在试剂盒上

根据使用的合成模块，将反应缓冲溶液、WFI和前体安装在相应的盒位置上。安装在C级环境中进行。

o位置3：将针插入小瓶顶部以抽吸DOTA-Tyr

o位置5：将针插入小瓶顶部以抽吸

o位置7：安装WFI袋，

o位置8：安装反应缓冲溶液小瓶。

盒的最终安装如图4A所示。

o位置1-上：将针插入小瓶顶部以抽吸

o位置3：安装WFI袋，

o位置4：将针插入小瓶顶部以抽吸反应缓冲液。还将通气过滤器插入到小瓶隔垫中，

o位置5：将针插入小瓶顶部以抽吸溶于WFI中的DOTA-Tyr

盒的最终安装如图4B所示。

1.10步骤6：将Lu-177氯化物溶液、反应缓冲溶液和DOTA-Tyr

通过按下合成模块PC控制软件程序上的“开始合成”按钮来启动合成。合成的第一步包括将标记所需的所有组分自动转移到盒反应器中。

将放射性和化学药物物质前体和反应缓冲溶液按以下顺序转移到反应器中：

1.Lu-177氯化物溶液

2.反应缓冲液

3.DOTA-Tyr

当阀(GE盒的位置5和6或MiniAIO盒的位置1和2)打开并且对反应器施加负压时，Lu-177氯化物溶液被吸入反应器。

Lu-177氯化物溶液高度浓缩，因此溶液不完全转移到反应器1中可影响标记收率。因此，在将Lu-177氯化物溶液转移到反应器之前，将反应缓冲液添加到Lu-177氯化物溶液小瓶中，以确保Lu-177氯化物溶液的完全转移。使用注射器将反应缓冲液转移到Lu-177氯化物样品瓶中(右侧(right)，对于TRACERlab MX合成模块，30mL注射器

启动药物物质合成的最后一步是将DOTA-Tyr

1.11步骤7：标记步骤

合成路线总结如下：

其中DHB＝龙胆酸(2,5-二羟基苯甲酸)

标记包括将Lu-177螯合到DOTA-Tyr

·使用TRACERlab MX(GE)合成模块进行12分钟(±0.5分钟)

·使用MiniAIO(TRASIS)合成模块5分钟(±0.5分钟)

在反应器中，DOTA-Tyr

1.12步骤8：药物物质的转移和首次过滤(预过滤)

一旦在合成模块中完成合成，将使用连接至延长无菌缆线的灭菌过滤器首次灭菌获得的

每次用3mL注射用水冲洗试剂盒和反应器3次，以回收残留在管线中的

在转移过程结束时，

·

·

在合成结束时控制并监控

实施例2：方法优化

该方法针对批量生产每批更大剂量的药物物质而工业化，并使用自动合成模块生产药物物质。该方法优化注意事项包括：

·DOTA-Tyr

·与高放射化学纯度相关的高标记产量，

·将游离的

从用于制备药物物质的现有技术的方法开始，对中间步骤进行了一些改变，尤其是改变赋形剂的添加顺序。

为了生产药物物质制剂并将必需的赋形剂(即确保药物物质溶液良好稳定性的赋形剂)整合到自动化的合成方法中，我们在本方法中修改反应混合物的制剂，即反应缓冲液。

与现有技术的组合物相比，反应缓冲液不包含肽。同样，已去除一些组分以仅在配制药物产品时才添加。具体地，抗坏血酸在标记反应时不添加，并可以包含在配方缓冲液中。进行此改变是因为发现抗坏血酸在标记期间使用的小反应体积中具有沉淀的很大可能性。为了在标记反应期间促进pH缓冲，反应缓冲液还包含低浓度的乙酸钠。研究表明，这些改变对药物产品的质量特性没有影响，但显著改进全合成的自动化，并具有良好的合成收率。

2.1药物物质合成的优化：反应物的摩尔比

为了避免标记后的纯化步骤，研究了DOTA-Tyr

对于74GBq的批次大小(2Ci的批次大小)，用2mg的DOTA-Tyr

进一步的测试表明，由于药物物质的所得放射化学纯度仍符合规格要求，因此合成时所允许的Lu-177的最低比活性为407GBq/mg(肽与Lu的摩尔比＝1.2)。

表5：用于药物物质合成的DOTA-Tyr

*比活性值是在合成时

为了确保有效的放射性标记，DOTA-Tyr

2.2研究化学物理性质和优化pH

使用药物物质

从反应缓冲液中省略龙胆酸，因为它不需要作为自由基清除剂。

冷药物物质的表征包括用于构象鉴定和纯度测定的RP-HPLC，以及用于测定分子量(身份)的质谱。

已确定在药物物质合成期间反应缓冲液的pH是控制和防止胶体形成的重要因素。当pH>7时，Lu可以转化为胶体形式的Lu(OH)

2.3优化合成参数

在工艺开发期间，已鉴定了合成

2.3.1标记产量

DOTA-Tyr

2.3.2反应时间

尽管标记反应是自发的，但活化能很高，因此，如果标记在室温(25℃)下发生，则反应时间可能会非常长。

通过测定在95℃下不同反应时间的放射化学纯度(以DOTA-Tyr

在2-15分钟验证了反应时间范围。根据不同的合成模块，选择的反应时间范围为5-12分钟。

2.3.3反应温度

已经在80℃-100℃测试了反应温度，标记时间为5分钟。

通常，低于90℃的温度不能确保定量的标签产量(考虑到安全界限)；而在高于95℃的温度下，溶剂蒸发造成的溶液损失成为一个问题，并且也不影响标记收率。80和100℃反应器温度对放射化学纯度的影响显示于表6中。

表6：反应温度对放射化学纯度的影响

温度范围验证为80-100℃。选定的反应温度固定在94℃，可接受的变化为±4℃(90-98℃)

2.3.4反应体积

针对37GBq(1Ci)-185GBq(5Ci)的活性范围测试反应体积(进入反应器的试剂溶液的体积)。对于这两个批次大小，试剂之间的化学计量比保持固定(1μg DOTA-Tyr

表7显示了反应体积对所得放射化学纯度的影响。所述表显示了使用放射性浓度为6.17GBq/mL(181.8mCi/mL)和16.82GBq/mL(454.5mCi/mL)的反应溶液的测试结果。

表7：反应体积对t

反应体积设置为：

2.3.5反应缓冲液pH

反应溶液的pH必须为：

·pH低于7(以防止形成Lu胶体)

·高于pH 3(低于pH 3，DOTA配体被质子化，并且形成金属络合物的效率不高)

设计药物物质起始材料(Lu-177、DOTA-Tyr

表8：反应缓冲液pH值对放射化学纯度的影响

从这些测试中获得的数据，用于标记的合适的pH范围已设定为4.0-5.5，而预期的反应器pH范围为4.2-4.7。

2.3.6反应缓冲液冻干物的制备方法

作为工业化方法的一部分，优选限制该方法中临时混合的材料的数量。因此，设计反应缓冲液从冻干物小瓶而不是起始组分重构。