一种阿托伐他汀钙的检测方法
文献发布时间：2024-04-18 20:01:30
技术领域
本发明属于药物分析领域，具体涉及一种阿托伐他汀钙的检测方法。
背景技术
阿托伐他汀钙为他汀类血脂调节药，是一种竞争性、选择性HMG-CoA还原酶抑制剂，能阻断HMG-CoA还原成羟甲戊酸，从而大大降低总胆固醇和低密度脂蛋白的含量。
阿托伐他汀钙分子结构上存在两个手性中心，存在四种立体构型，其中如式Ⅰ所示的立体构型，即活性成分(3R,5R)-7-[2-(4-氟苯基)-5-异丙基-3-苯基-4-(苯胺基甲酰基)吡咯-1-基]-3,5-二羟基庚酸钙盐，其对映异构体为(3S,5S)-7-[2-(4-氟苯基)-5-异丙基-3-苯基-4-(苯胺基甲酰基)吡咯-1-基]-3,5-二羟基庚酸钙盐(阿托伐他汀钙已知杂质VIII)，由于它们的结构非常接近，给活性成分的测定分析带来了很大的困难。
现有技术中关于阿托伐他汀钙异构体的分析检测方法，主要涉及阿托伐他汀钙原料药对映异构体的分析方法，当阿托伐他汀钙制剂成品中尤其是涉及阿托伐他汀钙已知降解杂质IV存在的情况下，现有技术方法并不能满足制剂成品中阿托伐他汀钙对映异构体的检测。
发明内容
本发明旨在提供一种阿托伐他汀钙的检测方法，以解决现有技术存在的不足。该方法采用非手性色谱柱和手性色谱柱串接进行HPLC分析，该方法具有专属性强、分离效果好、检测限低、灵敏度高、操作简便等优点。具体的，本发明采用以下技术方案：
一种阿托伐他汀钙的检测方法，该方法采用非手性色谱柱和手性色谱柱串接分析；
在一些具体实施方式中，所述的检测方法采用非手性色谱柱在前，串接手性色谱柱；
在一些具体实施方式中，所述的检测方法采用手性色谱柱在前，串接非手性色谱柱；
在一些具体实施方式中，所述的检测方法中非手性色谱柱为硅胶柱、氰基柱、氨基柱中的一种，优选为氰基柱；
在一些具体实施方式中，所述的检测方法中非手性色谱柱为氰基柱，优选为MACHEREY-NAGEL NUCLEOSIL 100-5CN，4.6×250mm，5μm或性能相当的色谱柱；
在一些具体实施方式中，所述的检测方法中手性色谱柱为CHIRALPAK AD-H，4.6×250mm，5μm或性能相当的手性色谱柱；
在一些具体实施方式中，所述的检测方法中色谱柱的柱温为23～42℃，优选为25～35℃；
在一些具体实施方式中，所述的检测方法中流动相采用正己烷-乙醇-乙酸系统，其中正己烷-乙醇-乙酸体积比为(85～95):(5～15):(0.1～1)，优选为(90～95):(5～10):(0.1～0.5)，更优选为92：8：0.3；
在一些具体实施方式中，所述的检测方法中流动相的流速为0.5～2mL/min，优选为0.5～1.5mL/min，更优选为0.8～1.2mL/min；
在一些具体实施方式中，所述的检测方法中进样量为5～50μL，优选为10～25μL，更优选为20μL；
在一些具体实施方式中，所述的检测方法中检测器为紫外检测器，检测波长为240～250nm，优选为244～248nm，更优选为246nm；
在一些具体实施方式中，一种阿托伐他汀钙的检测方法，其分析方法组分包括阿托伐他汀钙、阿托伐他汀钙杂质Ⅷ、阿托伐他汀钙杂质IV。
本发明的有益效果在于：提供一种阿托伐他汀钙的检测方法，色谱柱采用非手性色谱柱和手性色谱柱串接进行HPLC分析，该方法具有专属性强、分离效果好、检测限低、灵敏度高、操作简便等优点，为阿托伐他汀钙研究提供可靠的分析检测方法。
附图说明
图1为实施例1阿托伐他汀钙杂质Ⅳ的谱图；
图2为实施例1阿托伐他汀钙杂质Ⅷ的谱图；
图3为实施例1阿托伐他汀钙API、杂质Ⅳ、杂质Ⅷ的混合谱图；
图4为对比例1阿托伐他汀钙杂质Ⅳ的谱图；
图5为对比例1阿托伐他汀钙杂质Ⅷ的谱图；
图6为对比例1阿托伐他汀钙API的谱图；
图7为对比例2阿托伐他汀钙杂质Ⅳ的谱图；
图8为对比例2阿托伐他汀钙杂质Ⅷ的谱图；
图9为对比例2阿托伐他汀钙API的谱图；
图10为对比例3阿托伐他汀钙杂质Ⅳ的谱图；
图11为对比例3阿托伐他汀钙杂质Ⅷ谱图；
图12为对比例3阿托伐他汀钙杂质API谱图；
具体实施方式
现在结合对比例及实施例对本发明作进一步详细的说明。
实施例1
仪器与条件
高效液相色谱仪：安捷伦高效液相色谱仪
非手性氰基色谱柱和手性色谱柱串联：
非手性氰基色谱柱：MACHEREY-NAGEL EC250/4NUCLEOSIL 100-5CN，4.0×250mm，5μm
手性色谱柱：CHIRALPAK AD-H，4.6×250mm，5μm
流动相：正己烷：乙醇：冰醋酸＝92：8：0.3
流速：1.0ml/min
检测波长：246nm
柱温：30℃
进样体积：20μl
实验步骤
溶剂：取等体积的正己烷和乙醇于容量瓶中，混合均匀，待用；
杂质Ⅳ溶液：取杂质Ⅳ对照品约7.5mg，精密称定，置50ml量瓶，加甲醇5ml使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制得杂质Ⅳ贮备液。精密量取杂质Ⅳ贮备液1ml，置100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制得杂质Ⅳ溶液。
杂质Ⅷ溶液：取杂质Ⅷ对照品约5.6mg，精密称定，置50ml量瓶，加甲醇5ml使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制得杂质Ⅷ贮备液。精密量取杂质Ⅷ贮备液2ml，置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制得杂质Ⅷ溶液。
100％加样溶液：取阿托伐他汀钙75mg，精密称定，置50ml量瓶，加甲醇5ml超声使溶解，精密加入杂质Ⅷ贮备液2ml、杂质Ⅳ贮备液0.5ml，再用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
取上述溶液各20μl，分别注入高效液相色谱仪，采用上述色谱条件记录色谱图，由图1、图2、图3可知，杂质Ⅳ的出峰时间为54.106min，杂质Ⅷ的出峰时间为47.393min；而阿托伐他汀钙API的出峰时间为52.437min；在此色谱条件下，采用非手性氰基柱串联手性柱，杂质Ⅳ、杂质Ⅷ及阿托伐他汀钙API的混合溶液出峰互不干扰，可以得到有效分离，杂质Ⅷ(阿托伐他汀钙对映异构体)可以被有效检测分析出来。
实施例2
仪器与条件
高效液相色谱仪：安捷伦高效液相色谱仪
非手性氰基色谱柱和手性色谱柱串联：
非手性氰基色谱柱：MACHEREY-NAGEL EC250/4NUCLEOSIL 100-5CN，4.0×250mm，5μm
手性色谱柱：CHIRALPAK AD-H，4.6×250mm，5μm
流动相：正己烷：乙醇：冰醋酸＝92：8：0.3
流速：1.0ml/min
检测波长：246nm
柱温：30℃
进样体积：20μl
实验步骤
具体配制过程：
溶剂：取等体积的正己烷和乙醇于容量瓶中，混合均匀，待用；
精密量取杂质Ⅷ对照品液2ml，置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制得杂质Ⅷ检测限溶液(0.08μg/ml)，取上述溶液20μl，注入高效液相色谱仪，采用上述色谱条件记录色谱图，杂质Ⅷ的峰高约为噪音的3倍，符合检测限的条件，因此，在此色谱条件下，阿托伐他汀钙制剂成品中阿托伐他汀对应异构体在0.08μg/ml的浓度下即可被检测出，该检测方法灵敏度极高。
对比例1
仪器与条件
高效液相色谱仪：安捷伦高效液相色谱仪
手性色谱柱：CHIRALPAK AD-H，4.6×250mm，5μm
流动相：正己烷：乙醇：冰醋酸＝92：8：3
流速：1.0ml/min
检测波长：246nm
柱温：30℃
进样体积：20μl
实验步骤
具体配制过程：
溶剂：取等体积的正己烷和乙醇于容量瓶中，混合均匀，待用；
杂质Ⅳ定位溶液：取杂质Ⅳ对照品约7.5mg，精密称定，置50ml量瓶，加甲醇5ml使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制得杂质Ⅳ贮备液。精密量取杂质Ⅳ贮备液1ml，置100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制得杂质Ⅳ溶液。
杂质Ⅷ定位溶液：取杂质Ⅷ对照品约5.6mg，精密称定，置50ml量瓶，加甲醇5ml使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制得杂质Ⅷ贮备液。精密量取杂质Ⅷ贮备液2ml，置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制得杂质Ⅷ溶液。
供试品溶液：取阿托伐他汀钙片适量，研细，取本品细粉约1125mg，精密称定，置50ml量瓶中，加5ml甲醇超声使溶解，再用溶剂稀释至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，取续滤液，即得。
取上述溶液各20μl，分别注入高效液相色谱仪，采用上述色谱条件(药典方法)记录色谱图，由图4、图5、图6可知，杂质Ⅳ的出峰时间为21.224min，杂质Ⅷ的出峰时间为22.464min；供试品溶液中API的出峰时间为33.302min；在此色谱条件下，杂质Ⅳ及杂质Ⅷ的出峰时间比较接近，使用药典方法不能有效分离，且杂质Ⅳ为降解杂质，杂质含量可能随稳定性放置逐渐增大。
对比例2
仪器与条件
高效液相色谱仪：安捷伦高效液相色谱仪
非手性硅胶色谱柱和手性色谱柱串联：
非手性硅胶色谱柱：Agela Technologies Venusil HILIC，4.6×250mm，5μm
手性色谱柱：CHIRALPAK AD-H，4.6×250mm，5μm
流动相：正己烷：乙醇：冰醋酸＝80：20：0.3
流速：1.0ml/min
检测波长：246nm
柱温：30℃
进样体积：20μl
实验步骤
具体配制过程：
溶剂：取等体积的正己烷和乙醇于容量瓶中，混合均匀，待用；
杂质Ⅳ溶液：取杂质Ⅳ对照品约7.5mg，精密称定，置50ml量瓶，加甲醇5ml使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制得杂质Ⅳ贮备液。精密量取杂质Ⅳ贮备液1ml，置100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制得杂质Ⅳ溶液。
杂质Ⅷ溶液：取杂质Ⅷ对照品约5.6mg，精密称定，置50ml量瓶，加甲醇5ml使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制得杂质Ⅷ贮备液。精密量取杂质Ⅷ贮备液2ml，置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制得杂质Ⅷ溶液。
供试品溶液：取阿托伐他汀钙片适量，研细，取本品细粉约1125mg，精密称定，置50ml量瓶中，加5ml甲醇超声使溶解，再用溶剂稀释至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，取续滤液，即得。
取上述溶液各20μl，分别注入高效液相色谱仪，采用上述色谱条件，记录色谱图，由图7、图8、图9可知，杂质Ⅳ的出峰时间为22.267min，杂质Ⅷ的出峰时间为49.408min；供试品溶液中API的出峰时间为49.809min；在此色谱条件下，杂质Ⅷ和API的出峰时间比较接近，使用非手性柱硅胶柱串联手性柱不能有效分离杂质Ⅷ和API。
对比例3
仪器与条件
高效液相色谱仪：安捷伦高效液相色谱仪
非手性氨基色谱柱和手性色谱柱串联：
非手性氨基色谱柱：Welch Ultimate XB-NH
手性色谱柱：CHIRALPAK AD-H，4.6×250mm，5μm
流动相：正己烷：乙醇：冰醋酸＝60：40：0.3
流速：1.0ml/min
检测波长：246nm
柱温：30℃
进样体积：20μl
实验步骤
具体配制过程：
溶剂：取等体积的正己烷和乙醇于容量瓶中，混合均匀，待用；
杂质Ⅳ溶液：取杂质Ⅳ对照品约7.5mg，精密称定，置50ml量瓶，加甲醇5ml使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制得杂质Ⅳ贮备液。精密量取杂质Ⅳ贮备液1ml，置100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制得杂质Ⅳ溶液。
杂质Ⅷ溶液：取杂质Ⅷ对照品约5.6mg，精密称定，置50ml量瓶，加甲醇5ml使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制得杂质Ⅷ贮备液。精密量取杂质Ⅷ贮备液2ml，置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制得杂质Ⅷ溶液。
供试品溶液：取阿托伐他汀钙片适量，研细，取本品细粉约1125mg，精密称定，置50ml量瓶中，加5ml甲醇超声使溶解，再用溶剂稀释至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，取续滤液，即得。
取上述溶液各20μl，分别注入高效液相色谱仪，采用上述色谱条件，记录色谱图，由图10、图11、图12可知，杂质Ⅳ的出峰时间为8.068min，杂质Ⅷ的出峰时间为40.796min；供试品溶液中API的出峰时间为40.510min；在此色谱条件下，杂质Ⅷ和API的出峰时间比较接近，使用非手性柱氨基柱串联手性柱不能有效分离杂质Ⅷ和API。