一种浸润式药物复合羊膜及其制备方法与使用方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其是涉及一种药物复合羊膜、一种药物复合羊膜的制作工艺及其应用。

背景技术

眼表包括结膜上皮、角膜上皮及泪膜。临床上眼表疾病主要指角膜和结膜的病变，又称为眼表泪液疾病。严重眼表疾病可造成视力严重减退或丧失，眼表重建术旨在恢复视功能。如在眼烧伤的早期，特别是眼表严重碱烧伤，若早期不能实施有效的治疗，局部激活胶原酶及中性量向酶等会导致眼表组织进行性溶解，甚至角膜穿孔。

羊膜是胎膜与羊水接触的部分，由滋养细胞分化而来，厚度在0.02mm -0.05mm，呈半透明状，有韧性、无血管、无神经、无淋巴管。羊膜分为五层：上皮细胞层、基底膜、实质层、纤维母细胞层和海绵层。上皮层为单层立方细胞，亦可呈假复层，电镜下可见羊膜上皮细胞表面0.6μm微绒毛。基底膜为无细胞的网状纤维。实质层薄而致密，与其下的纤维母细胞层连接较松，羊膜实质层类似于生物支架和生物分子筛，含有IV，V型完全胶原和层粘连素，既可作为生物支架或生物敷料，替代和修复基底膜，用于眼表重建，为角膜细胞移行、生长提供良好支架，又由于其保持一定的生物半通透性，移植后可阻止细胞穿透羊膜向病灶浸润，阻止细菌等微生物穿过、防止创面感染，减少创面水分挥发和免疫隔离作用，特别是由于羊膜含有许多适宜浓度的细胞因子，如EGF, TGF-β、bFGF-β、1FN,IL-1aorβ、IL-4、IL-6、IL-8、endothelin-1(ET-1)等，这些因子具有促进上皮分化、迁移，避免上皮凋亡的作用。羊膜免疫原性很低，至少在正常环境中，羊膜不表达HLA-A，B，C，DR抗原和β2球蛋白，移植后也不发生急性免疫排斥反应。总之，羊膜具有促进上皮修复、抑制瘢痕形成、抑制角膜新生血管形成、抑制免疫反应等作用，因此羊膜覆盖术和羊膜移植术被广泛应用于治疗眼表疾病，并获得了良好的临床疗效。但是目前临床应用的羊膜覆盖术中固定羊膜的手段主要是手术缝合，此举必然创伤眼表，由于羊膜菲薄，容易破碎穿孔，因此，为达到治疗目的往往需要多次手术。

申请人的在先申请“CN201620957026.X，羊膜镜”、“CN201610740372.7，羊膜镜及其保存方法”已经公开一种无须手术即可将羊膜固定在眼睑的装置及羊膜的保存方法，中国发明专利“201910427807.6，一种羊膜或微液滴包载药物的复合敷料及其制备方法”和中国发明专利“200610071377.1，药物羊膜及其制备方法”则公开了药物复合在羊膜上的方法，但是这两方法具有各自的局限性，并不能将药物复合羊膜的优势发挥出来。

发明内容

本发明针对现有技术中的不足，提供了一种浸润式药物复合羊膜及其制备方法与使用方法，本复合羊膜载有药物，具有长久的均匀药物缓释功能，由于本复合羊膜可植入到人体内或贴敷在人体表面，因此本复合羊膜可以代替部分手术治疗，减少病患痛苦与就医成本，还可以作为手术治疗时的治疗手段之一，或者作为手术治疗后的恢复手段，本复合羊膜尤其适用于眼科疾病和皮肤疾病。

为了解决上述技术问题，本发明通过下述几个技术方案得以解决。

一种浸润式药物复合羊膜的制备方法，包括：步骤A：取新鲜羊膜，对新鲜羊膜表面进行清洗，步骤B：对新鲜羊膜进行脱水，步骤C：将脱水后的新鲜羊膜放入到药液中，步骤D：当脱水后的新鲜羊膜复原后将新鲜羊膜从药液中取出。

上述技术方案中，优选的，以质量百分比计，采用具有49.9％以上甘油的脱水液对新鲜羊膜进行脱水。

上述技术方案中，优选的，可使用抗生素溶液对新鲜羊膜进行杀菌处理。

上述技术方案中，优选的，所述的药液是可溶于注射用水药物的水溶液。

一种浸润式药物复合羊膜的制备方法，包括：步骤A：取冻干羊膜，将冻干羊膜放入到药液中，步骤B：当冻干羊膜复温、复原后将冻干羊膜从药液中取出。

上述技术方案中，优选的，所述的药液是可溶于注射用水药物的水溶液。

一种浸润式药物复合羊膜的制备方法，包括：步骤A：取新鲜羊膜，对新鲜羊膜表面进行清洗和杀菌，步骤B：对新鲜羊膜进行交联，步骤C：新鲜羊膜交联后在最高4℃时保存至少12小时，步骤D：对交联后的新鲜羊膜进行脱水，步骤E：将脱水后的新鲜羊膜放入到药液中，步骤F：当脱水后的新鲜羊膜复原后将新鲜羊膜从药液中取出。

上述技术方案中，优选的，以质量百分比计，采用具有49.9％以上甘油的溶液对新鲜羊膜进行脱水。

上述技术方案中，优选的，所述的药液是可溶于注射用水药物的水溶液。

上述技术方案中，优选的，可使用生理盐水对新鲜羊膜进行清洗，抗生素溶液对新鲜羊膜进行杀菌处理。

上述技术方案中，优选的，所述的交联包括药物交联、辐射交联。

一种浸润式药物复合羊膜的制备方法，包括：步骤A：取新鲜羊膜，对新鲜羊膜表面进行清洗和杀菌，步骤B：对新鲜羊膜进行交联，

步骤C：新鲜羊膜交联后在最高4℃时保存至少12小时，步骤D：对交联后的新鲜羊膜进行冻干处理形成冻干羊膜进行存储，步骤E：需要时将冻干羊膜放入到药液中，步骤F：当冻干羊膜复温、复原后将冻干羊膜从药液中取出。

上述技术方案中，优选的，所述的药液是可溶于注射用水药物的水溶液。

上述技术方案中，优选的，可使用生理盐水对新鲜羊膜进行清洗，抗生素溶液对新鲜羊膜进行杀菌处理。

上述技术方案中，优选的，所述的交联包括药物交联、辐射交联。

一种浸润式药物复合羊膜，由上述任意一种浸润式药物复合羊膜的制备方法制备而成。

一种浸润式药物复合羊膜的使用方法，可将一种浸润式药物复合羊膜缝合在创伤面，或将一种浸润式药物复合羊膜敷设在创伤面，或将一种浸润式药物复合羊膜作为活性细胞的载体，或将一种浸润式药物复合羊膜作为移植器官的包裹物。

羊膜已经广泛的应用于治疗眼表以及各种灼伤、烧伤类疾病，更进一步的在肌腱治疗、骨科治疗领域也开始大范围应用羊膜。现有的羊膜主要分为两种，一种为新鲜羊膜，既刚剥离母体的羊膜，这类羊膜需要马上使用；另一种为冻干羊膜，这类羊膜是新鲜羊膜经过脱水、灭菌、低温冷冻后的羊膜，可长期存储。在本申请中，这两种羊膜使用时无较大差别。

本申请的羊膜是一种复合药物羊膜，其机理是羊膜基底膜富含胶原纤维和网状纤维，交织排列成网状，网孔间隙约0.5—15.0pln，能容纳大量药物分子，可吸附药液作为“药库”。羊膜可自行降解，能在较长时间内逐步释放药物，维持局部有效的药物浓度，成为良好的膜控半定量释药系统。因此可以将通透性差的药物制成药物羊膜，覆盖于眼表或者皮肤表面使其在眼部或者患处持续释放，或者将具有毒性的药物直接作用于患处，减少体内代谢循环。

现有的药物羊膜只是将药物的有效成分涂抹在羊膜的表面，在制造过程中并不将药物与羊膜深度复合，而是让羊膜与患处接触后，再利用羊膜的溶解性与吸液性让药物与羊膜复合以达到缓释的目的。但是羊膜溶解的程度和部位是随机的，因此这类缓释也是随机的、不定性的，其缓释曲线是不平稳的，在使用中并不能获得良好的效果。不仅如此现有的药物羊膜制备复杂，要么需要将药品制成纳米颗粒、干燥粒子，要么需要其他敷料进行辅助。因此这类药物羊膜无法获得推广。本申请中的浸润式药物复合羊膜则直接把药液浸润到羊膜内，举例而论，可以把本申请中的浸润式药物复合羊膜看做为充盈有药液的海绵，此海绵会逐渐发生溶解，但只有溶解掉的部分才会泄露药液。虽然羊膜溶解的程度和部位是随机的，但是羊膜每日溶解率是大致稳定的，因此采用本申请中浸润式的药物羊膜才能稳定的进行缓释，这类缓释不同病患程度不同，但是每个病患平均每日缓释程度是大致稳定的。

本申请中羊膜在吸收药液后需要马上使用，通过手术或者其他方式作用在病患处，一般而言不能长时间保存。本申请中羊膜吸取药液的原理是利用了脱水后羊膜的吸液性，羊膜本身含水率高且结构丰富，脱水后再吸液的过程中可以充分将液体吸纳到内部。在本申请中另一个核心点是吸液效果，理论上在吸液的过程中只需要根据羊膜大小配置药液浓度和吸液时间，实际上这是一个经验学科，必须综合药品种类性质、温度、湿度等其他参数共同得出最佳的药液浓度和浸泡时间。因此在实际应用前，必须编制药液手册，医护人员需要根据手册进行操作。

理论上本申请中的羊膜可以浸泡在任何药品的水溶液内，但优选的，直接使用药品的注射液为佳，因为药品的注射液可以直接浸泡，没有注射液的药品需要重新配置成溶液。一般而言，不会将本申请中的羊膜浸泡在悬浊液和乳浊液中，特殊情况除外。另外本申请中的羊膜可以浸泡在复合药液中，既具有多种不同药品的溶液，同时溶液的基底不仅为水。对于具体的药物可以是抗组胺类、抗生素类、营养素类、麻醉类、激素类、细胞毒药类、抗变态反应类、神经系统类药物、循环系统类药物、血液系统类药物、专科类药物、生物药物等。常见的可为5-氟尿嘧啶、妥布霉素、重组牛碱性成纤维细胞生长因子等。

在本申请中可对羊膜进行交联后再浸泡药液，羊膜交联是最近广泛应用的对羊膜进行改性的方法，交联的主要方式包括药物交联，如京尼平、戊二醛、栀子素等；辐射交联，如电子束、紫外线-核黄素等。基本交联的原理是诱导胶原纤维的氨基之间发生化学交联反应，从而增加胶原纤维的机械强度和抵抗蛋白酶的消化能力，交联后的羊膜韧性增加、抗拉力强，延长了羊膜在人体内的时间。同时新鲜羊膜与冻干羊膜交联后的效果也不尽相同，因为新鲜羊膜活性细胞和细胞因子更多，交联效果更好。交联后的羊膜浸泡药液后能延长在人体内的时间，让羊膜发挥更好的作用。

具体实施方式

青光眼是不可逆致盲眼病，手术是青光眼的主要治疗方法之一。青光眼手术主要为小梁切除术，小梁切除术是在角膜缘建立一条新的房水引流通道，将房水由前房引流至球结膜下间隙由周围组织吸收。巩膜板层覆盖引流口，限制房水过多流出，在一定程度上减少术后低眼压浅前房以及伴随而来的并发症。小梁切除术长期降眼压效果取决于滤过道纤维化的程度和发生时间。滤过道纤维瘢痕化是导致手术失败及难治性青光眼发生的一个主要原因。虽然抗代谢药如5-氟尿嘧啶(5-FU)，丝裂霉素(MMC)的应用提高了手术成功率，但是这些药物可影响结膜瓣的完整性，导致如低眼压、薄壁滤过泡、伤口渗漏、晚期滤过泡感染及眼内炎等并发症。实施例1-实施例4应用在青光眼手术中。

实施例1，一种浸润式药物复合羊膜，此浸润式药物复合羊膜的制备方法为：步骤A：取新鲜羊膜，新鲜羊膜为HbsAg、HIV、HBV、BCV及梅毒检查均为阴性的健康孕妇剖腹产所获得的胎盘在无菌条件剥离而得，同时对绒毛进行剔除，然后对新鲜羊膜表面进行清洗，清洗液可采用生理盐水。如果需要杀菌，则在清洗后将新鲜羊膜置于含庆大霉素40u/ml及二性霉素2.5mg/L的生理盐水中浸泡15min。步骤B：对新鲜羊膜进行脱水，将新鲜羊膜放置到具有49.9％以上甘油的脱水液浸泡至少10分钟。步骤C：将脱水后的新鲜羊膜放入到药液中，药液为5-氟尿嘧啶标准品(批号：08052897)，5-Fu注射液(标示量为10mL；0.25g，上海旭东海普药业有限公司)，浸泡时间至少3分钟，优选在3分钟-5分钟为宜。步骤D：当脱水后的新鲜羊膜复原后将新鲜羊膜从药液中取出。

实施例2：一种浸润式药物复合羊膜，此浸润式药物复合羊膜的制备方法为：步骤A：取冻干羊膜，对冻干羊膜羊膜进行裁剪，然后将冻干羊膜放入到药液中，其中冻干羊膜由江西省瑞济医疗器械有限公司提供，此羊膜通过冷冻干燥技术、钴60辐照灭菌，无乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病等致病原。药液为5-氟尿嘧啶标准品(批号：08052897)，5-Fu注射液(标示量为10mL；0.25g，上海旭东海普药业有限公司)，浸泡前需要将冻干羊膜复温，浸泡时间至少3分钟，优选在3分钟-5分钟为宜。步骤B：当冻干羊膜复温、复原后将冻干羊膜从药液中取出。

实施例3：一种浸润式药物复合羊膜，此浸润式药物复合羊膜的制备方法为：包括：步骤A：取新鲜羊膜，新鲜羊膜为HbsAg、HIV、HBV、BCV及梅毒检查均为阴性的健康孕妇剖腹产所获得的胎盘在无菌条件剥离而得，同时对绒毛进行剔除，然后对新鲜羊膜表面进行清洗，清洗液可采用生理盐水，清洗后将新鲜羊膜置于含庆大霉素40u/ml及二性霉素2.5mg/L的生理盐水中浸泡15min进行杀菌。步骤B：对新鲜羊膜进行交联，交联采用紫外线-核黄素交联法。让0.1％核黄素制剂(0.1％；Sigma Aldrich Inc.St.Louis,MO)完全、充足地浸泡羊膜组织10min，然后对羊膜组织进行UV-A灯照射(ALL-1；Sunvision Meditech Co.Ltd,China，波长365nm,辐照度3.0mW/cm

实施例4：一种浸润式药物复合羊膜，此浸润式药物复合羊膜的制备方法为：步骤A：新鲜羊膜为HbsAg、HIV、HBV、BCV及梅毒检查均为阴性的健康孕妇剖腹产所获得的胎盘在无菌条件剥离而得，同时对绒毛进行剔除，然后对新鲜羊膜表面进行清洗，清洗液可采用生理盐水，清洗后将新鲜羊膜置于含庆大霉素 40u/ml及二性霉素2.5mg/L的生理盐水中浸泡15min进行杀菌。步骤B：对新鲜羊膜进行交联，交联采用紫外线-核黄素交联法。让0.1％核黄素制剂(0.1％； Sigma Aldrich Inc.St.Louis,MO)完全、充足地浸泡羊膜组织10min，然后对羊膜组织进行UV-A灯照射(ALL-1；Sunvision Meditech Co.Ltd,China，波长365nm,辐照度3.0mW/cm

其中实施例1至实施例4中采用HPLC法测定羊膜浸泡5-氟尿嘧啶溶液吸收量。

仪器为Waters高效液相色谱仪(Waters2695)KFP-486GE/F，Empower工作站，Waters2996紫外检测器，干燥器，梅特勒-托利多AX205 Delta Range电子天平(瑞士梅特勒公司)，XW-80A型旋涡混合器(上海精科实业有限公司)。药品为5-氟尿嘧啶标准品(批号：08052897)，5-Fu注射液(标示量为10mL；0.25g，上海旭东海普药业有限公司)，生物羊膜(江西瑞济生物工程技术有限公司)，甲醇为色谱纯(美国J.T.Baker公司生产)批号为LOTH02E73，水为市售娃哈哈纯净水。

色谱柱：Diamonsil(钻石)C

标准溶液的制备：精密称量5-氟尿嘧啶标准品0.0103g，置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解至刻度得1mg/mL母液。然后从中精密量取1ml置于另一10mL 容量瓶中，用流动相(甲醇-水2:98)稀释至刻度，得100μg/mL标准溶液。

标准曲线的制备：取标准溶液用流动相稀释，分别配置2，5，10，20，50， 100μg/mL标准品系列溶液，分别进样20μL，连续进样5次。以5-氟尿嘧啶的峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，得直线方程为 Y＝6.37*10

精密度实验：取5-氟尿嘧啶对照品，分别制成低、中、高3种不同浓度(5，20，80μg/mL)的对照品溶液，各连续进五次。同样方法做三天，记录5-氟尿嘧啶峰面积，并计算峰面积的RSD％值。结果见表1。

表1氟尿嘧啶精密度实验结果(

样品测定：取生物羊膜(面积为4mm×5mm)放入2mL5-氟尿嘧啶注射液(标示量为10mL；0.25g)中浸泡，其中生物羊膜的数量为20个，10个浸泡3分钟， 10个浸泡5分钟。将羊膜取出后，植入生理盐水中2秒，取出，加流动相1mL，漩涡混匀2分钟，离心，取上清液，进样20μL，记录峰面积。记录峰面积带入上述方程中，求得羊膜吸收的量。结果见表2。

表2羊膜吸收的氟尿嘧啶的量

流动相的选择：根据5-氟尿嘧啶的物理和化学性质(即5-Fu在水中略溶，在乙醇中微溶，在氯仿中几乎不溶，在稀盐酸或氢氧化钠溶液中微溶)初步选定流动相为甲醇-水

氟尿嘧啶的提取：对5-氟尿嘧啶的提取应用乙酸乙酯提取，离心取上清液，吹干后复溶。本实验发现，当羊膜在注射液中浸泡后，用流动相提取的效果比乙酸乙酯提取的效果好，峰面积更大，故本次试验5-氟尿嘧啶的提取用流动相，此法简便，省时。

羊膜吸收量与浸泡时间：上述实验所得结果，浸泡3min的羊膜吸收5-氟尿嘧啶的量比浸泡5min的羊膜吸收的5-氟尿嘧啶的量少，说明羊膜吸收量与浸泡时间相关。

通过上述实验，表明本申请中浸润式药物复合羊膜完全可根据所要浸泡药液本身浓度和浸泡时间得到符合要求药液浓度的羊膜。

其中实施例3和实施例4采用紫外线-核黄素交联法，交联后羊膜低应力区弹性模量E

将上述实施例1至述实施例4中的浸润式药物复合羊膜应用在健康同种系新西兰大白兔小梁切除+巩膜瓣下放置羊膜联合术中。

将50只(100眼)健康同种系新西兰大白兔进行小梁切除术+巩膜瓣下放置羊膜。随机10只(20眼)放置实施例1中浸润式药物复合羊膜为实施例1组，随机10只(20眼)放置实施例2中浸润式药物复合羊膜为实施例2组，随机 10只(20眼)放置实施例3中浸润式药物复合羊膜为实施例3组，随机10只 (20眼)放置实施例4中浸润式药物复合羊膜为实施例4组，随机10只(20 眼)放置冻干羊膜作为对比例为对比组，对比组冻干羊膜由江西省瑞济医疗器械有限公司提供，此羊膜通过冷冻干燥技术、钴60辐照灭菌，无乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病等致病原。分别在术后1d、3d、7d、14d、21d、28d行眼压测定,观察眼前节反应,并空气栓塞法处死兔,滤过泡周围组织应用免疫组化方法检测二组在眼球壁手术区组织中转化生长因子(transforming growth factor,TGF-β

其中，实验动物为健康成年同种系新西兰大耳白兔20只，体重2-3kg，雌雄兼用，无眼疾，常规喂养。动物麻醉为肌肉注射盐酸氯胺酮50mg/Kg；盐酸氯丙嗪10mg/Kg；硫酸阿托品0.015mg/Kg混合液(若术中麻醉欠佳，可追加上述混合液)全麻下手术，1％丁卡因结膜表面麻醉3次，每次眼球接触操作后用0.25％的氯霉素冲洗结膜囊。

其中，手术过程为全麻生效后，无菌生理盐水冲洗术眼，常规消毒铺无菌巾，选取颞上象限施术。开睑器开睑，于眼球颞上方角巩膜缘后2mm处作以穹隆部为基底的结膜瓣，钝性分离球结膜及Tenon's囊，制作3×4mml/2厚度的巩膜瓣，分离至角膜透明区内1mm，穿刺进入前房，缓慢放出房水，剪除约1×2mm 相当于小梁的深层巩膜组织，并行虹膜根部切除，在巩膜瓣下放置上皮层朝上 4×5mm大小的羊膜(既实施例1、实施例2、实施例3、实施例4和对比例中羊膜)， 10-0尼龙线将巩膜瓣两角各缝合一针，球结膜缝合1-2针。注意使Tenon's囊及球结膜均达到水密状态。术毕球结膜下注射庆大霉素1万单位+地塞米松1mg，术后每天三次点地新(地塞米松+新霉素)眼药水、0.25％氯霉素眼药水。

其中，术后临床观察指标包括：1、毒副作用及并发症，包括：结膜漏、角膜混浊、角膜溃疡、浅前房、前房炎症、低眼压。2、浅前房深度，浅前房深度分级：浅I级：全部有极浅的前房，周边前房呈裂隙状小于1/5角膜厚度；浅Ⅱ级：可分a、b两型，Ⅱa级：仅虹膜小环以内有极浅前房，Ⅱb级：仅瞳孔区内有极浅前房；浅Ⅲ级：虹膜、晶体全部与角膜相贴，前房完全消失。3、前房炎症，前房炎症反应观察见表3。

表3-前房炎症分级、

其中，术后临床观察指标还包括：滤过泡。滤过泡的早期观察指标：弥散程度、泡壁厚度、颜色、血管充盈程度、新生血管情况、滤过泡的高度。滤过泡后期(2周后)的观察指标：根据Krofeld分型法，滤过泡的形态功能分为四型:I型(微小囊泡型):薄壁、无血管、多呈微囊状.II型(扁平弥散型):扁平、弥散、苍白状、相对壁厚。Ⅲ型(瘢痕型):无滤过泡，结膜充血微隆起，结膜下广泛粘连，在巩膜表面多血管外观。IV(包裹型):局部圆顶状隆起，呈囊状增生，成为致密的球筋膜空腔。I,II型为功能性滤过泡。III,IV型无功能滤过泡。

其中，术后临床观察指标还包括：眼压。术前眼压(基础眼压)：行青光眼手术前的眼压。术后眼压：分别于术后各观察组的第1，3，7,14，21，28天对各组兔眼用Schiotz眼压计测量眼压，并进行统计学比较。

还需进行电镜及病理学检查，于术后7、14、21、28天行中央角膜内皮细胞计数，用耳前静脉空气栓塞法分别处死A、B、C组各2只兔子，立即剜除眼球，放入福尔马林液中固定48h以上，常规行脱水、石蜡包埋、二甲苯透明、垂直角膜缘方向包埋，巩膜瓣中心4μm厚连续切片，常规组织HE染色，树脂封片，光镜(OLYMDUS显微镜)观察手术区域炎症细胞和成纤维细胞的增生情况，每张切片随机选择5个视野，在高倍镜下(×400)，分别记数成纤维细胞、炎症细胞数量，其平均数代表每个高倍视野(0.2mm

对眼压、每个高倍视野(0.2mm

术后结论：角膜反应情况：五组均未发现角膜水肿混浊现象。

前房深度检查：所有观察组7天内前房深浅均正常，见表4。

表4-前房深度检查

前房内炎症反应：术中实施例1组出现1例前房出血，术后7天基本吸收，对比组B组出现1例前房出血，术后7天基本吸收。其余组前房安静，无明显渗出。五组前房安静，无明显渗出，见表5。

表5-兔眼术后前房内炎症反应

滤过泡的形成：处死前观察滤过泡，实施例1组-实施例4组远远优于对比组，并出现了统计学差异，实施例3组和实施例4组优于实施例1组和实施例2 组，但无统计学差异。

表6-各对照组兔处死前滤过泡形成情况

眼压测定：依观察时间顺序分别于术后第1、3、7、14、21、28天应用Icare 眼压计测量各观察组兔眼的术后眼压。五组之间没有出现明显的低眼压，但术后第1天和术后第28天出现统计学差异。如表7和表8。

表7-各组手术前后及不同时间点眼压比较

表8-实验兔眼术后眼压(mmHg)

在术后各观察点，对比组和实施例3组术后1-21天可见手术区炎性细胞(主要是中性粒细胞、淋巴细胞)浸润数量差异无统计学意义，但术后28天差异具有统计学意义实施例3组明显小于对比组。对比组于术后第21天轻度瘢痕形成，纤维组织增生，结缔组织胶原化，术后28天滤过通道基本关闭；术后第28天实施例3组轻度瘢痕形成，纤维组织增生，结缔组织胶原化，滤过通道基本保持通畅；对比组巩膜瓣下羊膜在14天基本溶解并吸收，实施例3组在21天仍有13眼可见羊膜组织，28天有4眼可见羊膜组织。见表10和表9，表10和表 9中A为对比组，B为实施例3组。

表9-实验兔眼手术区域炎性细胞(中性粒细胞+淋巴细胞)计数(个/高倍视野·0.2mm

表10-实验兔眼手术区域成纤维细胞计数(个/高倍视野·0.2mm2)

综上所述实验，在小梁切除术中，实施例1组至实施例4组相比对比组能够有效减轻滤过通道的瘢痕生成,有效延长滤过通道通畅时间。实施例3组和实施例4组相比实施例1组和实施例2组羊膜溶解速度显著降低，可以较长时间的维持滤过通道的畅通。本申请中浸润式药物复合羊膜应用于青光眼手术时，远优于单独的小梁切除术，也优于小梁切除术+普通羊膜，相比现有技术表现出了实质性进步和显著的特点。

实施例5，一种浸润式药物复合羊膜，与实施例1或实施例2或实施例3或实施例4的区别为药液为妥布霉素注射液，用于眼表灼伤后恢复。

实施例6，一种浸润式药物复合羊膜，与实施例3或实施例4的区别为交联方法采用药物交联法，交联药物为京尼平。

实施例7，一种浸润式药物复合羊膜，与实施例1或实施例2或实施例3或实施例4的区别为药液为头孢哌酮钠注射液，用于皮肤烧伤后恢复。

实施例8，一种浸润式药物复合羊膜，与实施例1或实施例2或实施例3或实施例4的区别为药液为青霉素钠注射液，用于皮肤烧伤后恢复。

实施例9，一种浸润式药物复合羊膜，与实施例3或实施例4的区别为交联方法采用电子束交联法。

实施例7，一种浸润式药物复合羊膜，与实施例1或实施例2或实施例3或实施例4的区别为药液为生长性细胞因子。