TrkA抑制剂

本发明属于医学领域。特别地，本发明涉及抑制原肌球蛋白受体激酶A(TrkA)的化合物、包含这种化合物的组合物以及使用这种化合物治疗疼痛的方法。该化合物及其使用方法可以治疗伤害性/炎症性、神经性、可塑性或混合病因的急性或慢性疼痛。

美国专利申请公开号2013/0336964解释了TrkA和神经生长因子(NGF)在人类疼痛系统中的作用。因此，靶向和抑制TrkA可能有助于治疗疼痛。(参见例如WO2015/15148344；WO2015/143652；WO2015/143653；WO2015/143654；WO2015/159175；和WO2015/170208)。还开发了旨在结合和/或抑制TrkA并治疗疼痛的抗体。(参见例如美国专利号10,618,974、美国专利申请公开号2013/0336961、美国专利号7,601,818、WO2000/73344和WO2016/087677)。美国专利申请公开号2013/0336961中提供了人TrkA的蛋白质序列。

持续性疼痛是一个主要的健康问题，并导致生活质量的重大损失。持续性疼痛可以具有不同程度的严重程度，并且与多种病理学相关，例如背部损伤或退行性椎间盘疾病、偏头痛、关节炎、糖尿病性神经病变、癌症和其他疾病。目前使用对乙酰氨基酚、阿司匹林和其他(通常是非处方药)药物治疗轻度疼痛。使用皮质类固醇药物如皮质醇和泼尼松可以控制中度疼痛。现有治疗的有效性和/或耐受性问题是众所周知的，例如皮质类固醇表现出显着的副作用，包括体重增加、失眠和免疫系统减弱。中度或重度疼痛可以用吗啡和芬太尼等阿片类药物治疗，但阿片类药物的长期使用受到一些严重缺陷的限制，包括成瘾、耐受性和身体依赖性。鉴于使用阿片类药物并可以对阿片类药物上瘾的人越来越多，阿片类药物的潜在过度使用已被定性为“阿片类药物流行病”。

由于目前的疼痛疗法通常效果不佳和/或具有严重的不良副作用(如成瘾)，因此迫切需要开发针对新分子靶点的药物。具体而言，有需要开发新的疼痛治疗药剂的紧急医疗需要，这些药物不太可能上瘾和/或导致依赖性。此外，需要新的TrkA抑制剂，其可以提供一种或多种改进的药理学特性，例如安全性、效价、功效或耐受性，特别是用于治疗疼痛/慢性疼痛。迄今为止，还没有针对TrkA信号传导的药剂被批准用于治疗疼痛。因此，仍然需要可以抑制TrkA信号传导的药剂，例如替代的TrkA抑制剂。

本实施方式提供了一种可用于治疗疼痛的TrkA抑制剂化合物。具体地，本发明的一个实施方式提供下式的TrkA抑制剂化合物，(命名为“式I”)：：

除了式I的化合物，本发明的实施方式提供了式I化合物的一种或多种药学上可接受的盐，以及该盐作为TrKA抑制剂的用途。

本发明的一个实施方式还提供了包含式I化合物或其药学盐的药物组合物用于治疗疼痛的用途。药物组合物可以包括式I的化合物或药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

本发明的一个实施方式还提供了包含式I化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于治疗疼痛的用途。

本发明的一个实施方式还提供了一种在将其施用于患者时治疗疼痛的方法。具体地，本实施方式提供了一种治疗疼痛的方法，包括向有需要的患者施用有效剂量的式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。在另一个实施方式中，本发明方法提供了一种式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物，用于治疗起源于肌肉骨骼或神经性的急性或慢性疼痛。疼痛的具体非限制性实施例包括手术后疼痛、类风湿性关节炎疼痛、骨关节炎疼痛、神经性疼痛、糖尿病神经疼痛(DNP)、慢性下背痛(CLBP)，包括非神经根性(non-neuropathic)和神经根性疼痛下背痛(有时称为腰骶神经根病(LSR)或坐骨神经痛)，以及内脏痛，如慢性前列腺炎、间质性膀胱炎(膀胱痛)或慢性盆腔痛。

本发明的一个实施方式提供了用于治疗的式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。另一个实施方式提供一种用于治疗疼痛的式I化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方式中，疼痛是起源于肌肉骨骼或神经性的急性或慢性疼痛。疼痛的具体非限制性实施例包括手术后疼痛、类风湿性关节炎疼痛、骨关节炎疼痛、神经性疼痛、DNP和CLBP，包括非神经根性(非神经性)和神经根性下背痛(有时称为LSR或坐骨神经痛)，以及内脏痛(例如慢性前列腺炎、间质性膀胱炎(膀胱痛)或慢性盆腔痛)。

此外，本实施方式提供了式I的化合物或其药物组合物的药学上可接受的盐在制备用于治疗疼痛的药物中的用途。在一些实施方式中，疼痛可以是起源于肌肉骨骼或神经性的急性或慢性疼痛。疼痛的具体非限制性实施例包括手术后疼痛、类风湿性关节炎疼痛、骨关节炎疼痛、神经性疼痛、DNP和CLBP，包括非神经根性(非神经性)和神经根性下背痛(有时称为LSR或坐骨神经痛)，以及内脏痛，如慢性前列腺炎、间质性膀胱炎(膀胱痛)或慢性盆腔痛)。

本实施方式还提供了一种作为式I化合物的半琥珀酸盐的化合物。

此外，在一些实施方式中，式I化合物的半琥珀酸盐呈结晶。在一些实施方式中，半琥珀酸盐的特征在于X射线衍射光谱中的显著峰，衍射角2-θ为10.5°，与一个或更多个选自12.6和22.2的峰组合；衍射角的公差为0.2度。

本发明的一个实施方式还提供了包含式I的半琥珀酸盐的药物组合物用于治疗疼痛的用途。药物组合物可以包括式I的半琥珀酸盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

本发明的一个实施方式还提供了包含式I的半琥珀酸盐的药物组合物用于治疗疼痛的用途。

本发明的一个实施方式还提供了一种在将其施用于患者时治疗疼痛的方法。具体地，本实施方式提供了一种治疗疼痛的方法，包括向有需要的患者施用有效剂量的式I的半琥珀酸盐或其药物组合物。在另一个实施方式中，本方法提供了式I的半琥珀酸盐或其药物组合物，用于治疗起源于肌肉骨骼或神经性的急性或慢性疼痛。疼痛的具体非限制性实施例包括手术后疼痛、类风湿性关节炎疼痛、骨关节炎疼痛、神经性疼痛、糖尿病神经疼痛(DNP)、慢性下背痛(CLBP)，包括非神经根性(non-neuropathic)和神经根性疼痛下背痛(有时称为腰骶神经根病(LSR)或坐骨神经痛)，以及内脏痛，如慢性前列腺炎、间质性膀胱炎(膀胱痛)或慢性盆腔痛。

本发明的一个实施方式提供了用于治疗用途的式I的半琥珀酸盐或其药物组合物。另一个实施方式提供了用于治疗疼痛用途的式I的半琥珀酸盐。在一些实施方式中，疼痛是起源于肌肉骨骼或神经性的急性或慢性疼痛。疼痛的具体非限制性实施例包括手术后疼痛、类风湿性关节炎疼痛、骨关节炎疼痛、神经性疼痛、DNP和CLBP，包括非神经根性(非神经性)和神经根性下背痛(有时称为LSR或坐骨神经痛)，以及内脏痛(例如慢性前列腺炎、间质性膀胱炎(膀胱痛)或慢性盆腔痛)。

此外，本实施方式提供了式I的半琥珀酸盐或其药物组合物在制备用于治疗疼痛的药物中的用途。在一些实施方式中，疼痛可以是起源于肌肉骨骼或神经性的急性或慢性疼痛。疼痛的具体非限制性实施例包括手术后疼痛、类风湿性关节炎疼痛、骨关节炎疼痛、神经性疼痛、DNP和CLBP，包括非神经根性(非神经性)和神经根性下背痛(有时称为LSR或坐骨神经痛)，以及内脏痛，如慢性前列腺炎、间质性膀胱炎(膀胱痛)或慢性盆腔痛)。

有效剂量可以由本领域技术人员通过使用已知技术并通过观察在类似情况下获得的结果来确定。在确定对患者的有效剂量时，考虑了许多因素，包括但不限于：体重、年龄和一般健康状况；所涉及的特定疾病或病症；疾病或病症的程度或严重程度；个体患者的反应；施用的化合物；施用模式；所给制剂的生物利用度特征；所选剂量方案；合并用药的使用；以及其他相关情况。

本发明的化合物可以配制为通过使化合物生物可利用的任何途径施用的药物组合物。优选地，这类组合物用于口服施用。这类药物组合物和其制备方法是本领域已知的(参见，例如，雷明顿：药学科学与实践(Remington:The Science and Practice ofPharmacy),L.V.Allen编辑,第22版,制药出版社(Pharmaceutical Press),2012)。

本实施方式的化合物和药学上可接受的盐预期治疗一类疼痛，包括手术后疼痛、神经性疼痛、类风湿性关节炎疼痛和骨关节炎疼痛，包括例如非神经根性(非神经性)和神经根性CLBP、DNP和LSR。本发明的式I化合物及其药学上可接受的盐或药物组合物可以还用于治疗其他形式的疼痛。如在本文中可互换使用的“治疗(treatment)”和/或“治疗(treating)”和/或“治疗(treat)”旨在指所有过程，其中可以存在所述病症进展的减缓、中断、阻止、控制、停止或逆转，但并不一定表示完全消除了所有病症症状。治疗可以还包括预防疼痛。治疗包括施用式I的化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物，以治疗将受益于TrkA活性降低的人类疾病或病症，其中所述治疗提供：(a)抑制疾病的进一步发展，即阻止其发展；(b)缓解疾病，即导致疾病或病症消退或减轻其症状或并发症；和/或(c)预防症状疾病的发作。如本文所用，治疗明确包括降低疼痛的发生率，改善疼痛或疼痛的一种或多种症状，减轻疼痛或疼痛的一种或多种症状，延缓疼痛的发展。在某些情况下，治疗还包括治疗疼痛，但不一定要改变引起疼痛的潜在疾病或状况。

如本文所用，“减少疼痛的发生率”是指减少疼痛的持续时间和/或频率(包括，例如，延缓或增加个体术后疼痛的时间)。如本领域技术人员所理解的，个体可以在他们对治疗的反应方面有所不同，因此，“降低个体类风湿性关节炎疼痛或骨关节炎疼痛发生率的方法”反映了基于合理预期的化合物或药学上可接受的盐的给药可能导致该特定个体的发病率降低。

疼痛的治疗还包括减轻疼痛的严重程度以及减少对通常用于这种病症的其他药物和/或疗法(包括例如阿片类药物)的需要和/或用量(例如暴露于)。

“改善”疼痛或疼痛的一种或多种症状(例如类风湿性关节炎疼痛或骨关节炎疼痛)是指与不施用化合物或药学上可接受的盐相比，减轻或改善一种或几种疼痛症状。“改善”包括缩短或减少症状的持续时间。

“减轻”疼痛或疼痛的一种或多种症状(例如类风湿性关节炎疼痛或骨关节炎疼痛)是指减轻用本发明化合物或药学上可接受的盐治疗的个体或个体群体中的一种或多种不希望的术后疼痛临床表现的程度。

如本文所用，“延缓”疼痛的发展是指推迟、阻碍、减缓、延缓、稳定和/或推迟疼痛的进展，例如手术后疼痛、类风湿性关节炎疼痛或骨关节炎疼痛。这种延缓可以有不同的时间长度，这取决于疾病史和/或被治疗的个体。正如对本领域技术人员显而易见的那样，充分或显着的延缓实际上可以包括预防，即个体不会出现疼痛。与不使用该方法相比，“延缓”症状发展的方法可以是在给定时间范围内降低症状发展概率和/或在给定时间框架内降低症状程度的方法。这种比较通常基于临床研究，使用统计学上显着数量的受试者。

如本文所用，“疼痛”是指任何病因的疼痛，包括急性和慢性疼痛，以及具有炎症成分的任何疼痛。疼痛的例子包括手术后疼痛、术后疼痛(包括牙痛)、偏头痛、头痛和三叉神经痛、烧伤相关的疼痛、伤口或肾结石相关的疼痛、与创伤相关的疼痛(包括创伤性头部损伤)、神经性疼痛、与肌肉骨骼疾病相关的疼痛，例如类风湿性关节炎、骨关节炎，包括例如非神经根性(非神经性)和神经根性CLBP、DNP和LSR(坐骨神经痛)、强直性脊柱炎、血清阴性(非类风湿性)关节病、非关节风湿和关节周围疾病，以及与癌症相关的疼痛(包括“突破性疼痛”和与终末期癌症相关的疼痛)、周围神经病变和疱疹后神经痛。

具有炎症成分的疼痛(除了上述的一些)的例子包括风湿性疼痛、与粘膜炎相关的疼痛和痛经。如本文所定义的疼痛明确地包括肌肉骨骼和神经源性的慢性疼痛。疼痛还明确包括急性疼痛或突发性疼痛。用于测量疼痛水平的疼痛量表是众所周知的，例如在McConnell,S.等人的“The Western Ontario and McMaster UniversitiesOsteoarthritis Index(WOMAC):AReview of Its Utility and MeasurementProperties”,Arthritis Care&Research,45:453-461,2001和Haefeli等人的“PainAssessment”,European Spine Journal 2006Jan；15(Suppl 1):S17-S24。

“手术后疼痛”(可互换地称为“切口后”或“创伤后疼痛”)是指由外部创伤引起或导致的疼痛，例如个体组织的割伤、穿刺、切口、撕裂或伤口(包括所有手术过程中产生的疼痛，无论是侵入性的还是非侵入性的)。如本文所用，手术后疼痛不包括在没有外部物理创伤的情况下发生(产生或起源)的疼痛。在一些实施方式中，手术后疼痛是内部或外部(包括外周)疼痛，并且伤口、割伤、外伤、撕裂或切口可以意外(如外伤)发生或故意(如手术切口)发生。如本文所用，“疼痛”包括痛觉和疼痛感，并且可以使用疼痛评分和本领域众所周知的其他方法客观和主观地评估疼痛。如本文所用，术后疼痛包括异常性疼痛(即，对正常非伤害性刺激的反应增加)和痛觉过敏(即，对正常有害或不愉快刺激的反应增加)，其本质上可以是热疼痛或机械疼痛(触觉的)。在一些实施方式中，疼痛的特征在于热敏感性、机械敏感性和/或静息痛。在一些实施方式中，手术后疼痛包括机械诱发的疼痛或静息痛。在其他实施方式中，手术后疼痛包括静息痛。疼痛可以是原发性或继发性疼痛，这是本领域众所周知的。

如本文可互换使用的，术语“患者”、“受试者”和“个体”是指人，更具体地，是指有需要的患者。在某些实施方式中，患者还具有将受益于TrkA活性降低的疾病、病症或病状(例如，疼痛，例如，原发性或继发性头痛和/或偏头痛，包括慢性偏头痛)的特征。在另一个实施方式中，患者的特征还在于处于发展上述病症的风险或将受益于TrkA活性降低的病症中。

本发明化合物的药学上可接受的盐可以例如通过适当的游离碱形式的本发明化合物与适当的药学上可接受的酸在合适的溶剂中在本领域公知的标准条件下反应形成。参见例如Gould,P.L.,“Salt selection for basic drugs,”International Journal ofPharmaceutics,33:201-217(1986)；Bastin,R.J.,et al.“Salt Selection andOptimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities,”OrganicProcess Research and Development,4:427-435(2000)；and Berge,S.M.,et al.,“Pharmaceutical Salts,”Journal of Pharmaceutical Sciences,66:1-19,(1977)。

式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物可以通过本领域普通技术人员已知的各种方法制备，其中一些方法在下面的制备和实施例中说明。以下制备和实施例中每个步骤的产物可以通过本领域公知的常规方法回收，包括萃取、蒸发、沉淀、色谱、过滤、研制和结晶。在以下制备和实施例中，除非另有说明，所有取代基均如前所述。试剂和起始材料对于本领域普通技术人员来说是容易获得的。在不限制本发明范围的情况下，提供以下制备和实施例以进一步说明本发明的方面。此外，本领域普通技术人员了解，可以通过使用本领域技术人员可以制备的任何其他合适的起始材料或中间体来制备式I化合物。

某些缩写可以在本文中使用，除非另有说明，否则具有以下含义：“aa”是指氨基酸；“ACN”是指乙腈；“Ac”是指乙酰基；“hBDNF”是指人脑源性神经营养因子；“CAS#”是指化学文摘登记号；“DCM”是指二氯甲烷(methylene chloride/dichloromethane)；“DIPEA”是指N,N-二异丙基乙胺；“DMF”是指N,N-二甲基甲酰胺；“DMSO”是指二甲亚砜；“D-PBS”是指Dulbecco磷酸盐缓冲液；“EDTA”是指乙二胺四乙酸；“ESMS”和“ES/MS”是指电喷雾质谱；“Et”是指乙基；“Et

制备和实施例

以下制备和实施例进一步说明本发明并代表本发明各种化合物的典型合成。试剂和起始材料是容易获得的或可以由本领域普通技术人员容易地合成。应当理解，制备和实施例是通过说明而非限制的方式阐述的，并且本领域普通技术人员可以做出各种修改。

LC-ES/MS在

除非另有说明，制备反相色谱法在配备有质谱选择性检测器质谱仪和

NMR光谱在Bruker AVIII HD 400MHz NMR光谱仪上进行，使用残留溶剂[CDCl

2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯

将2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酸(5g，23mmol)溶解在MeOH(100mL)中，并加入浓H

2-氟-5-硝基-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯

将2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(5.1g，23nmol)溶解在浓H

5-氨基-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯

将2-氟-5-硝基-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(5.8g，21.7mml)溶解在MeOH(150mL)中，并用N

5-溴-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯

将CuBr

2-氟-5-(1-甲基吡唑-3-基)-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯

将1-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(1.0g，4.8mmol)和5-溴-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(1.3g，4.3mmol)悬浮在装有搅拌棒的微波小瓶中的含有1M K

2-氟-5-(1-甲基吡唑-3-基)-4-(三氟甲基)苯甲酸

将固体LiOH(1.0g，41mmol)加入2-氟-5-(1-甲基吡唑-3-基)-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(1.1g，3.7mmol)在EtOH(50mL)和H

5-溴-4-碘-吡啶-3-甲酸盐酸盐

在N

5-溴-4-碘-吡啶-3-甲酸甲酯

在50mL的RBF中加入5-溴-4-碘-吡啶-3-甲酸(2.8g，8.5mmol)、丙酮(23mL)、K

5-溴-4-(2-吡啶基)吡啶-3-甲酸甲酯

参考文献：Bioorg.Med.Chem.Lett.,2017,27(16),3817；Bioorg.Med.Chem.Lett.,2016,26(1),160.

25mL微波容器，含有5-溴-4-碘-吡啶-3-甲酸甲酯(710mg，2.1mmol)、CsF(630mg，4.1mmol)、LiCl(176mg，4.1mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(120mg，0.1mmol)被抽真空并用氮气吹扫(两次真空/氮气循环)。加入1,4-二恶烷(18mL，210.8mmol)，将氮气鼓泡通过混合物，并加入三丁基(2-吡啶基)锡烷(540μL，1.7mmol)。将密封的反应混合物在加热块中加热至125℃并加热过夜。将所得混合物在室温下搅拌48小时。粗混合物通过硅藻土过滤并用EtOAc冲洗，其滤液减压浓缩。所得残余物通过快速硅胶色谱纯化，用0至70％EtOAc在异己烷中洗脱，蒸发所需色谱馏分后得到标题化合物(140mg，23％产率)，其为金色油状物。ESMS(m/z):(

2-氟-5-(1-甲基吡唑-3-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺

将2-氟-5-(1-甲基吡唑-3-基)-4-(三氟甲基)苯甲酸(33.1g，115mmol)、NH

5-[[2-氟-5-(1-甲基吡唑-3-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰基]氨基]-4-(2-吡啶基)吡啶-3-甲酸甲酯

向25mL微波小瓶中装入2-氟-5-(1-甲基吡唑-3-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(282mg，1mmol)、CsCO

5-[[2-氟-5-(1-甲基吡唑-3-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰基]氨基]-4-(2-吡啶基)吡啶-3-甲酸

将5-[[2-氟-5-(1-甲基吡唑-3-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰基]氨基]-4-(2-吡啶基)吡啶-3-甲酸甲酯(40mg，0.07mmol)溶解在MeOH(5mL)中，并用2MNaOH水溶液(5mL，10mmol)处理，并将所得混合物搅拌30分钟。该反应用2M HCl水溶液酸化并用DCM萃取。分离有机层，通过疏水玻璃料干燥，并减压浓缩，得到淡黄色固体。水相另外用20％MeOH/DCM萃取，分离各层，有机提取物用MgSO

5-[[2-氟-5-(1-甲基吡唑-3-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰基]氨基]-4-(2-吡啶基)吡啶-3-甲酰胺

5-[[2-氟-5-(1-甲基吡唑-3-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰基]氨基]-4-(2-吡啶基)吡啶-3-甲酸(40mg，0.08mmol)溶解在无水DMF(2mL)中。HATU(58mg，0.2mmol)和NH

人类原肌球蛋白受体激酶(hTrkA、hTrkB、hTrkC)测定以检查hTrk激酶抑制剂

非磷酸化hTrk激酶结构域(hTrkA，aa:441-796，hTrkB，aa:526-838或hTrkC，aa:510-825)与荧光素标记的poly-GT底物(poly-GT，Invitrogen公司)的反应生成荧光素标记的磷酸化产物。铽标记抗体(Invitrogen)与磷酸化酪氨酸产物的结合使铽和荧光素接近，导致时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)增加。在抑制剂存在下，磷酸化产物的形成减少，TR-FRET值降低。

hTrk激酶活性的抑制：根据供应商说明，使用TR-FRET技术(Invitrogen)对人原肌球蛋白受体hTrk激酶的活性进行定量。简而言之，使用声学分配仪器Echo Access(Labcyte)在二甲亚砜中连续稀释用于剂量反应研究的化合物(1:2，20浓度)，并将其分配到ProxiPlate-384plus板(PerkinElmer)中。添加hTrkA、hTrkB或hTrkC的激酶结构域，并将板在室温(RT)下培养一小时。接下来添加ATP和poly-GT，并将板在RT下培养一小时。添加EDTA和铽标记的抗体，并将板在室温下培养一小时，然后使用

数据分析：将数据转换为％抑制，并使用四参数逻辑曲线拟合程序(GENEDATA

此过程中使用的内标是N-[5-[7-[(1S)-2-羟基-1-甲基乙基]吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羰基]-3-吡啶基]-2-[4-(三氟甲基)苯基]乙酰胺：

该内标在市场上以CAS登记号1402438-37-2的形式提供。该内标可以还使用美国专利号8,846,698的规定来制备。

人原肌球蛋白受体激酶(hTrk)抑制剂对人骨骨肉瘤上皮细胞SH2结构域蛋白募集的体外抑制作用

使用

细胞培养：表达hTrk受体和p75(

hTrk激酶活性的抑制：根据供应商说明，使用

数据分析：数据被转换成％抑制，并使用四参数逻辑曲线拟合程序(GENEDATA

表1.实施例1相对于hTrkA/B/C±SEM的相对IC

这些数据表明实施例1的化合物在体外是hTrkA的有效抑制剂和选择性抑制剂。

向烧瓶中加入16g实施例1的化合物(33.0mmol，1eq)。加入THF(288mL)和水(32mL)。将此混合物加热至55℃并获得溶液。抛光过滤溶液并用9:1v:v THF:水(2x16 mL)冲洗。在一个单独的烧瓶中，加入琥珀酸(3.9g，33.0mmol，1eq)和乙醇(80mL)。混合直至形成溶液。

将实施例1的化合物溶液转移到顶置搅拌和蒸馏头的烧瓶中，并用9:1v:v THF:水(16mL)冲洗。在EtOH中加入琥珀酸溶液。将溶液加热至回流并开始蒸馏。收集到300mL馏出物后，固体从混合物中结晶出来。加回EtOH(160mL)并搅拌。关闭加热。冷却至室温。过滤并用EtOH(4x16mL)冲洗。在50℃下真空干燥湿饼。分离白色固体，即实施例1化合物的半琥珀酸盐(16.58g，30.5mmol，92.5％产率)。

共晶形成物

下面描述半琥珀酸共晶的结晶过程。本领域技术人员将理解类似的方法可以用于使游离碱结晶(根据需要进行修改，如本领域技术人员将理解的)。

向烧瓶中加入实施例1的半琥珀酸共晶体(40.1g，72.2mmol，1eq)。加入DMSO(120mL)，加热至50℃以获得溶液。抛光过滤溶液并用DMSO(2x～2mL)冲洗。

向另一个烧瓶中加入琥珀酸(14.5g，123mmol，1.7eq)和EtOH(980mL)。混合直至形成溶液。

向结晶容器中加入DMSO(20mL)和部分EtOH(140mL)中的琥珀酸溶液。加热至50℃。加入实施例1化合物的半琥珀酸盐的晶种(1.4g)并搅拌。

在4小时内，将实施例1的化合物在DMSO中的溶液和琥珀酸在EtOH中的溶液以单独的进料流添加到结晶容器中，将结晶容器的温度保持在50℃。共同添加完成后，将混合物缓慢冷却至20℃。在20℃下搅拌，然后过滤并用琥珀酸在EtOH中的溶液冲洗(2mg/mL琥珀酸在EtOH中，4x70 mL冲洗)。在50℃下真空干燥湿饼。分离白色固体，即实施例1化合物的半琥珀酸共晶体(38.2g，70.3mmol，92％产率校正晶种量)。

NMR:1H NMR(400MHz,DMSO-d

质谱：实测值485.0m/z，理论值485.1

晶体固体的XRPD图案在Bruker D8 Endeavor X射线粉末衍射仪上获得，该衍射仪配备有CuKα

实施例1的半琥珀酸的已制备样品，其特征在于使用CuKα辐射的XRPD图样具有如下表A所述的衍射峰(2θ值)，特别是在10.5处的峰与选自12.6和22.2的组中的一个或多个峰的组合；衍射角的公差为0.2度。

表A.实施例1的结晶半琥珀酸的XRPD峰

以下两种分子由美国专利号9,815,846使用该专利中描述的方法和程序制成。具体而言，制备了美国专利号9,815,846的实施例89和141，并具有以下结构：

美国专利号9815846的实施例89

美国专利号9815846的实施例141

美国专利第9815846号中的这两种化合物进行了测定(其程序如上文所述)，以确定它们与Trk A、Trk B和Trk C的结合。数据如下表2所示(并与上述表1中的实施例1的数据进行比较)。

表2：与Trk A、Trk B和Trk C结合的比较IC50数据。

从表2中的数据可以看出，实施例1的化合物是Trk A的强效结合剂，对Trk A具有选择性。美国专利号9815846的实施例89对Trk A强效，但对Trk B和Trk C的选择性不如实施例1。美国专利号9815846的实施例141对Trk A的选择性与Trk B和Trk C相似，但对目标Trk A的选择性较弱。然而，应注意美国专利号9815846的实施例141的化合物(其中有两个吡啶环)很难通过合成方法获得，并且可能无法使用美国专利号9815846中概述的技术以千克规模制备这种分子。事实上，下面的文章显示了创建这种类型的双吡啶体系的难度：

Xinlan A.F.Cook,Antoine de Gombert,Janette McKnight,

此外，在审查美国专利第9815846号时，实施例152具有以下结构：

美国专利9815846的实施例152与实施例141的区别在于实施例141具有吡啶环，而实施例152具有苯环。如果比较美国专利9815846的表2中列出的这两种分子的Trk A的IC50值，实施例141(具有吡啶环)的列出值为14nM，而实施例152(具有苯环)具有列出值为0.069nM。因此，通过在实施例152中使用苯环(而不是实施例141的吡啶环)，对TrkA的效价有显著影响——超过200倍(例如，14除以0.069。为202.9)。然而，当与本实施例1的分子(与美国专利9815846的实施例141同样具有吡啶环)相比时，本实施例1具有良好的效价和选择性。