新的儿茶酚衍生物或其盐,其制备方法以及包含其的药物组合物
文献发布时间:2023-06-19 10:03:37
技术领域
本发明涉及新的儿茶酚衍生物或其药学上可接受的盐、其制备方法以及包含其的药物组合物。更具体地,本发明涉及具有被烷基氨基取代的烷基部分和/或N-烷基取代的噻吩-(硫代)甲酰胺部分的新的儿茶酚衍生物或其药学上可接受的盐、其制备方法和包含其的药物组合物。本发明的儿茶酚衍生物或其药学上可接受的盐具有优异的自噬诱导活性。
背景技术
自噬(autophagy),也称为自吞噬作用(autophagocytosis),是细胞的自然调节机制,可分解不必要或功能失调的组分。它允许细胞组分的有序降解和循环利用。在自噬过程中,消耗性细胞质成分从被称为自噬体的双膜囊泡中的其余细胞中分离出来。然后,自噬体与可用的溶酶体融合,最终囊泡中的内容物被降解并循环利用。通常描述三种自噬形式:大自噬、小自噬和分子伴侣介导的自噬(CMA)。在疾病中,自噬被视为对应激的适应性反应,可促进细胞存活。但在其他情况下,它似乎会促进细胞死亡和发病。在饥饿的极端情况下,细胞成分的分解通过维持细胞能量水平来促进细胞存活。
同时,当自噬减少时,错误折叠的蛋白质的积累等可能引起各种疾病。例如,据报道,自噬的诱导可以治疗神经退行性疾病,例如亨廷顿氏病(HD)、帕金森氏病(PD)、阿尔茨海默氏病(AD)、朊病毒病、多发性硬化症和肌萎缩性脊髓侧索硬化症(卢伽雷氏病(LouGehrig′s disease))(例如,韩国专利第10-1731908号)。并且,据报道,自噬的诱导可以治疗肝脏疾病,例如肝纤维化、肝硬化、肝炎和脂肪肝疾病(例如,韩国特许公开第10-2017-0022790号)。另外,据报道自噬的诱导可以治疗代谢疾病,例如糖尿病、高脂血症、肥胖症和炎症(例如,韩国特许公开第10-2018-0007307号)。此外,据报道,自噬的诱导可以抑制与败血症相关的过度免疫反应(例如,韩国特许公开第10-2012-0131401号)。
因此,期望诱导自噬的物质可有效地用于预防、改善或治疗与自噬相关的各种疾病,例如神经变性疾病、肝脏疾病、代谢疾病、败血症等。
发明内容
技术问题
本发明人发现,具有被烷基氨基取代的烷基部分和/或N-烷基取代的噻吩-(硫代)甲酰胺部分的某些儿茶酚衍生物或其药学上可接受的盐具有优异的自噬诱导活性,因此在用于预防、改善或治疗与自噬有关的各种疾病方面是有用的。
因此,本发明提供了所述儿茶酚衍生物或其药学上可接受的盐、其制备方法、包含其的药物组合物及其用途。
解决技术问题的技术方案
根据本发明的一方面,提供了一种新的儿茶酚衍生物或其药学上可接受的盐。
根据本发明的另一方面,提供了一种制备所述儿茶酚衍生物或其药学上可接受的盐的方法。
根据本发明的又另一方面,提供了一种药物组合物,其包含所述儿茶酚衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成分。
根据本发明的又另一方面,提供了一种在有需要的哺乳动物中治疗自噬相关疾病的方法,该方法包括向哺乳动物施用有效量的所述儿茶酚衍生物或其药学上可接受的盐。
根据本发明的又另一方面,提供了所述儿茶酚衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于预防、改善或治疗自噬相关疾病的药物中的用途。
发明的有益效果
本发明的化合物,即具有被烷基氨基取代的烷基部分和/或N-烷基取代的噻吩-(硫代)甲酰胺部分的儿茶酚衍生物或其药学上可接受的盐具有优异的自噬诱导活性。因此,本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以有效地用于预防、改善或治疗与自噬相关的各种疾病,包括神经退行性疾病、肝脏疾病、代谢性疾病、败血症等。特别地,根据本发明的儿茶酚衍生物或其药学上可接受的盐具有能够渗透血脑屏障的分子结构,即烷基取代的胺部分,从而能够用于预防、改善或治疗脑血流相关的疾病,例如神经退行性疾病,诸如亨廷顿氏病(HD)、帕金森氏病(PD)、阿尔茨海默氏病(AD)、朊病毒病、多发性硬化症、卢伽雷氏病等。
附图说明
图1示出了根据测试例2的总结的实验方法,以评估在肝损伤模型中通过口服给药改善肝功能的活性。
图2示出了根据测试例3的总结的实验方法,以评估在肝损伤模型中通过口服给药改善肝功能的活性。
图3示出了通过对测试例3中获得的组织样本进行苏木精和曙红(H&E)染色而获得的结果。比例尺:左黑线为100μm,右黑线为100μm。
图4示出了通过对测试例3中获得的组织样本进行马氏三色染色(Masson′strichrome staining)而获得的结果。比例尺:左黑线为100μm,右黑线为100μm。
具体实施方式
如本文所用,术语“烷基”是指直链或支链脂肪族烃基。例如,C
术语“羟基”是指-OH基团。术语“烷氧基”是指通过用烷基取代羟基的氢原子形成的基团。例如,C
术语“卤素”是指氟、溴、氯或碘基团。
术语“氨基”是指-NH
本发明提供了具有优异的自噬诱导活性的化合物或其盐,即式1的化合物或其药学上可接受的盐:
<式1>
其中,
Y为O或S,
(1)当Y为O时,
R
R
R
R
(2)当Y为S时,
R
R
R
在本发明的化合物或其药学上可接受的盐中,Y可以为O。优选地,当Y为O时,R
在本发明的实施方案中,提供了一种化合物或其药学上可接受的盐,其中:
Y为O,
R
R
R
R
在本发明的另一实施方案中,提供了一种化合物或其药学上可接受的盐,其中:
Y为O,
R
R
R
R
在本发明的又另一实施方案中,提供了一种化合物或其药学上可接受的盐,其中:
Y为O,
R
R
R
在本发明的化合物或其药学上可接受的盐中,Y可以为S。优选地,当Y为S时,R
在本发明的实施方案中,提供了一种化合物或其药学上可接受的盐,其中:
Y为S,
R
R
R
R
在本发明的另一实施方案中,提供了一种化合物或其药学上可接受的盐,其中:
Y为S,
R
R
R
优选地,本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以是选自以下的一种或多种:
N-(4-甲基哌嗪)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-(4-甲基哌嗪)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-(4-甲基哌嗪)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-硫代甲酰胺盐酸盐;
N-(4-甲基哌嗪)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-硫代甲酰胺盐酸盐;
N-(2-(二异丙基氨基)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-(2-(二异丙基氨基)乙基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-(2-(二异丙基氨基)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-硫代甲酰胺盐酸盐;
N-(2-(二异丙基氨基)乙基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-硫代甲酰胺盐酸盐;
N-异丙基-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-异丙基-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-硫代甲酰胺盐酸盐;
N-异丙基-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-硫代甲酰胺;
N-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-(2-(4-吗啉)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-(2-(1-哌啶)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-(2-(1-哌啶)乙基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-(2-(1-吡咯烷)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-((4-(二甲基氨基)四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-((4-(二甲基氨基)四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-(4-(1-甲基)哌啶基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-(2-(2-(1-甲基)吡咯烷)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-(2-(2-(1-(甲基)吡咯烷)乙基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;
N-((S)-2-(1-乙基)吡咯烷甲基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐;和
N-((S)-2-(1-乙基)吡咯烷甲基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐。
更优选地,本发明的化合物可以为N-((4-(二甲基氨基)四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺或其药学上可接受的盐(例如盐酸盐);或N-((4-(二甲基氨基)四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺或其药学上可接受的盐(例如盐酸盐)。
本发明的式1的化合物可以是药学上可接受的盐形式,例如酸加成盐形式。特别地,本发明的化合物具有烷基取代的胺部分,因此,与常规化合物(例如,韩国特许公开第10-2017-0022790号中公开的化合物)不同,可以容易地以酸加成盐形式(例如,以盐酸盐的形式)分离。即,与常规化合物(例如,韩国特许公开第10-2017-0022790号中公开的化合物)不同,本发明的酸加成盐形式的化合物可以通过酸/碱后处理工艺容易地制备,并且可以容易地应用于规模化工艺,而无需进行柱色谱法处理。而且,本发明的酸加成盐形式的化合物具有优异的水溶性,因此可以容易地配制并在口服给药时提供优异的生物利用度。酸加成盐可以衍生自无机酸或有机酸,例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、乙酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、顺丁烯二酸、丙二酸、草酸、富马酸、葡糖酸、葡糖二酸(saccharicacid)、苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、扑酸(pamoic acid)等,但不限于此。可以通过使式1的化合物与无机酸或有机酸在常规溶剂(例如水、醇、四氢呋喃、丙酮或它们的混合物)中反应来制备酸加成盐。
式1的化合物或其药学上可接受的盐可以具有包含不对称碳的取代基,因此为外消旋混合物(RS)的形式或旋光异构体的形式,例如(R)或(S)异构体。因此,除非另有说明,否则式1的化合物或其药学上可接受的盐包含外消旋混合物(RS)和旋光异构体,例如(R)或(S)异构体。而且,取决于取代基,式1的化合物或其药学上可接受的盐可以呈顺式或反式几何异构体的形式。因此,除非另有说明,否则式1的化合物或其药学上可接受的盐包含顺式和反式几何异构体。而且,式1的化合物或其药学上可接受的盐可以是一种或多种非对映异构体或其混合物的形式。因此,除非另有说明,否则式1的化合物或其药学上可接受的盐包括非对映异构体和它们的混合物。
根据本发明的式1的化合物或其药学上可接受的盐可以是无水形式、水合物形式或溶剂化物形式。另外,根据本发明的式1的化合物或其药学上可接受的盐可以是无定形或结晶形式。所述无定形或结晶形式也可以是水合物形式或溶剂化物形式。水合物或溶剂化物可以包含相对于式1的化合物或其药学上可接受的盐以非化学计量或化学计量计的水或有机溶剂。
在本发明的范围内,本发明还包括制备式1的化合物或其药学上可接受的盐的方法。
例如,其中Y为O的式1的化合物或其药学上可接受的盐(即,式1a的化合物或其药学上可接受的盐)可以通过如以下反应方案1所示来制备:将式4的化合物用式5的化合物酰化,将式2的化合物与式3的化合物偶联,以制备式1a的化合物:
<反应方案1>
在反应方案1中,R
式4和式5的化合物是已知化合物,可商购获得。酰化可以通过使用酰化剂来进行,所述酰化剂例如为1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)、二环己基碳二亚胺(DCC)、1,1′-羰基二咪唑(CDI)、N-乙氧基羰基-2-乙氧基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)。酰化还可以通过使式4的化合物与亚硫酰氯、草酰氯、氯化磷等反应以制备酰氯,然后使式5的化合物与其反应来进行。酰化可在常规有机溶剂(例如二氯甲烷)中进行。
偶联可以在催化剂(例如四(三苯基膦)钯(0))和碱(例如碳酸钠)的存在下进行。式2的化合物与式3的化合物之间的反应可以以1:2至2:1的摩尔比进行,优选以约1:1的摩尔比进行。偶联可以在水、C
另外,其中Y为S的式1的化合物或其药学上可接受的盐(即,式1b的化合物或其药学上可接受的盐)可以通过如以下反应方案2所示来制备:将式2的化合物进行硫酰胺化以制备式6的化合物;将式6的化合物与式3的化合物偶联以制备式1b的化合物:
<反应方案2>
在反应方案2中,R
在反应方案2中,可以如反应方案1中所述制备式2的化合物。硫酰胺化可以通过使式2的化合物与P
并且,其中Y为S的式1的化合物或其药学上可接受的盐(即,式1b的化合物或其药学上可接受的盐)可以通过如以下反应方案3所示来制备:将式1a的化合物进行硫酰胺化反应来制备式1b的化合物:
<反应方案3>
在反应方案3中,R
在反应方案3中,可以如反应方案1中所述制备式1a的化合物。另外,可以如反应方案2中所述进行硫酰胺化,使用式1a的化合物代替式2的化合物。
本发明的儿茶酚衍生物,即式1的化合物或其药学上可接受的盐,具有优异的自噬诱导活性。因此,本发明的式1的化合物或其药学上可接受的盐可有效地用于预防、改善或治疗与自噬相关的各种疾病,包括神经退行性疾病、肝脏疾病、代谢性疾病、败血症等。
因此,在本发明的范围内,本发明包括用于诱导自噬的药物组合物,其包含治疗有效量的式1的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。
与自噬相关的疾病包括但不限于可以通过自噬的诱导来预防、改善或治疗的各种疾病。例如,本发明的药物组合物可以是用于预防、改善或治疗以下疾病的药物组合物:神经退行性疾病,选自亨廷顿氏病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、朊病毒病、多发性硬化症和卢伽雷氏病;肝脏疾病,选自肝纤维化、肝硬化、肝炎和脂肪肝疾病;代谢性疾病,选自糖尿病、高脂血症、肥胖症和炎症;或败血症。
本发明的药物组合物可以包含药学上可接受的载体,例如稀释剂、崩解剂、甜味剂、润滑剂或调味剂。可以根据常规方法将药物组合物配制成口服剂型,例如片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂或糖浆剂;或肠胃外剂型,例如外用溶液、外用混悬剂、外用乳剂、凝胶(例如软膏)、吸入剂、喷雾剂、注射剂。剂型可以是各种形式,例如用于单次给药或多次给药的剂型。
本发明的药物组合物可以包含,例如,稀释剂(例如乳糖、玉米淀粉等);润滑剂(例如硬脂酸镁);乳化剂;悬浮剂;稳定剂;和/或等渗剂。如果需要,该组合物还包含甜味剂和/或调味剂。
本发明的组合物可以口服或肠胃外给药,包括吸入、静脉内、腹膜内、皮下、脑室内、直肠和局部给药途径。因此,本发明的组合物可以配制成各种形式,例如片剂、胶囊、水溶液或悬浮液。在用于口服给药的片剂的情况下,通常使用诸如乳糖、玉米淀粉和润滑剂(例如硬脂酸镁)等载体。在用于口服给药的胶囊的情况下,乳糖和/或干燥的玉米淀粉可以用作稀释剂。当需要口服给药的水悬浮液时,可以将活性成分与乳化剂和/或悬浮剂组合。如果需要,可以使用某些甜味剂和/或调味剂。对于肌内、腹膜内、皮下和静脉内给药,通常制备活性成分的无菌溶液,并且应适当调节和缓冲溶液的pH。对于静脉内给药,应控制溶质的总浓度以使制剂等渗。本发明的组合物可以是含有药学上可接受的载体(例如生理盐水)且pH值为7.4的水溶液形式。可以通过局部推注将溶液引入患者的肌内血流中。
本发明的儿茶酚衍生物,即式1的化合物或其药学上可接受的盐,可以以每天约0.0001mg/kg至约100mg/kg、优选每天约0.001mg/kg至约100mg/kg的治疗有效量施用给受试者患者。可以每天一次或多次通过口服或肠胃外途径进行给药。当然,可以根据患者的年龄、状况、体重、易感性、疾病程度、给药途径、给药时间等来改变剂量。取决于给药方法,根据本发明的药物组合物可以包含0.001至99重量%、优选0.01至60重量%的量的式1的化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明的范围内,本发明还包括在有需要的哺乳动物中诱导自噬的方法,该方法包括向该哺乳动物施用治疗有效量的式1的化合物或其药学上可接受的盐。例如,本发明包括预防、改善或治疗以下疾病的方法:神经退行性疾病,选自亨廷顿氏病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、朊病毒病、多发性硬化症和卢伽雷氏病;肝脏疾病,选自肝纤维化、肝硬化、肝炎和脂肪肝疾病;代谢性疾病,选自糖尿病、高脂血症、肥胖症和炎症;或败血症。
在本发明的范围内,本发明还包括式1的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于在有需要的哺乳动物中诱导自噬的药物中的用途。例如,本发明包括式1的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防、改善或治疗以下疾病的药物中的用途:神经退行性疾病,选自亨廷顿氏病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、朊病毒病、多发性硬化症和卢伽雷氏病;肝脏疾病,选自肝纤维化、肝硬化、肝炎和脂肪肝疾病;代谢性疾病,选自糖尿病、高脂血症、肥胖症和炎症;或败血症。
提供以下实施例和测试例仅用于说明目的,并不旨在限制本发明的范围。
以下实施例中制备的化合物的分析如下:使用Bruker 400MHz波谱仪进行核磁共振(NMR)波谱分析,并以ppm为单位分析其化学位移。柱色谱在硅胶(Merck,70-230目)上进行。除非另有说明,否则所有起始原料都是可商购获得的,无需进一步纯化即可使用。所有反应和色谱级分在250nm硅胶板上通过薄层色谱(TLC)进行分析,并通过紫外或碘(I
实施例1:N-(4-甲基哌嗪)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
将5-溴噻吩-2-甲酸(6.21g)、二氯甲烷(30ml)和二甲基甲酰胺(0.25ml)的混合物搅拌10分钟。将亚硫酰氯(2.64ml)加入混合物中,然后在搅拌下回流3小时。将反应混合物冷却至室温,然后减压浓缩。向所得浓缩物中加入二氯甲烷(45ml),然后将其冷却至0~10℃。将K
向N-(4-甲基哌嗪)-5-溴-噻吩-2-甲酰胺(8.66g)中,加入四(三苯基膦)钯(0)(3.48g)和1,2-二甲氧基乙烷(51ml)。向混合物中加入碳酸钠(9.36g)的纯水(51ml)溶液,然后将其在室温下搅拌30分钟。向反应混合物中加入(4-羟基-3-甲氧基苯基)-(四甲基-1,3-氧杂)硼烷(8.25g)的乙醇(51ml)溶液,然后在约80℃下搅拌5小时。将反应混合物冷却至室温,然后过滤以除去不溶物。所得不溶物用乙醇(40ml)洗涤,然后将所得洗涤溶液与滤液合并。将得到的滤液在减压下浓缩以除去溶剂。在搅拌下向所得残余物中加入纯水(200ml)和6N盐酸(10ml)。将所得溶液用氯仿洗涤两次(分别为100ml和50ml),然后使用氢氧化钠(约3.0g)将其pH调节至pH 8~9。将该溶液用氯仿萃取两次(分别为100ml和50ml)。合并的萃取物用无水硫酸钠干燥,然后真空浓缩。向所得浓缩液中加入丙酮(30ml)。将混合物搅拌1小时,然后过滤。所得固体用丙酮(5ml)洗涤,在30℃下真空干燥3小时,得到N-(4-甲基哌嗪)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺(8.68g,产率:87.0%)。将干燥的固体(1.50g)溶解在甲醇(10ml)和氯仿(3ml)的混合溶剂中,然后向其中加入2N盐酸的乙醇溶液(1.5ml)。将混合物在减压下浓缩。向所得浓缩物中加入丙酮(10ml)。将混合物搅拌1小时,然后过滤。所得固体用丙酮(5ml)洗涤,然后真空干燥,得到1.52g标题化合物。(产率:91.6%,总产率:80.0%)
在10%MeOH的氯仿中TLC R
实施例2:N-(4-甲基哌嗪)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
向以与实施例1相同的方法制备的N-(4-甲基哌嗪)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺(3.32g)、2-二乙基氨基乙基氯盐酸盐(1.72g)和甲苯(50ml)的混合物中,加入氢氧化钠(0.80g)。将反应混合物在约85℃下搅拌4小时,然后冷却至室温。向反应混合物中加入纯水(50ml),然后搅拌30分钟。分离的有机层用饱和碳酸钠溶液洗涤,然后用1N盐酸(50ml)萃取。萃取物用乙酸乙酯(20ml)洗涤,然后用氢氧化钠(约2.0g)将其pH调节至7~8。将该溶液用二氯甲烷萃取两次(分别为50ml和30ml)。将得到的萃取物用无水硫酸钠干燥,然后真空浓缩,得到4.0g的粗产物,即N-(4-甲基哌嗪)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺(产率:89.5%)。向所得残余物中加入4N盐酸的乙醇溶液(6.0ml)和丙酮(60ml)。将混合物在室温搅拌1小时,然后过滤。所得固体用丙酮(5ml)洗涤,然后真空干燥,得到4.08g标题化合物。(产率:87.4%,总产率:78.2%)
在10%MeOH的氯仿中TLC R
实施例3:N-(4-甲基哌嗪)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-硫代甲酰胺盐酸盐的制备
将以与实施例1相同的方法制备N-(4-甲基哌嗪)-5-溴-噻吩-2-甲酰胺(2.92g)、甲苯(15ml)和四氢呋喃(15ml)的混合物搅拌10分钟。将Lawesson试剂(4.25g)加入混合物中,然后在50℃下搅拌5小时。将反应混合物冷却至室温,然后过滤以除去不溶物。将乙酸乙酯(200ml)加入到所得滤液中,然后分别用纯水(200ml)和2N盐酸(25ml)的混合溶液以及纯水(200ml)和2N盐酸(15ml)的混合溶液萃取。合并的萃取物用乙酸乙酯(200ml)洗涤,然后用氢氧化钠(约4.3g)将其pH调节至9~10。将该溶液用氯仿萃取三次(分别为100ml、50ml和50ml)。所得的萃取物用无水硫酸钠干燥,然后真空浓缩,得到2.47g中间体,即N-(4-甲基哌嗪)-5-溴-噻吩-2-硫代甲酰胺。
(产率:80.0%)
向N-(4-甲基哌嗪)-5-溴-噻吩-2-硫代甲酰胺(2.47g)中加入四(三苯基膦)钯(0)(1.04g)和1,2-二甲氧基乙烷(15ml)。向混合物中加入碳酸钠(2.81g)的纯水(15ml)溶液,然后将其在室温下搅拌30分钟。向反应混合物中加入(4-羟基-3-甲氧基苯基)-(四甲基-1,3-氧杂)硼烷(2.48g)的乙醇(15ml)溶液,然后在约80℃下搅拌5小时。将反应混合物冷却至室温,然后过滤以除去不溶物。所得滤液用乙醇(15ml)洗涤,然后减压浓缩以除去溶剂。在搅拌下,向所得残余物中加入纯水(60ml)和6N盐酸(3ml)。将所得溶液用氯仿洗涤两次(分别为30ml和15ml),然后使用氢氧化钠(约1.0g)将其pH调节至pH 8~9。将该溶液用氯仿萃取两次(分别为30ml和50ml)。所得的萃取物用无水硫酸钠干燥,然后真空浓缩。向所得浓缩物中加入丙酮(10ml)。将混合物搅拌1小时,然后过滤。将得到的固体(即,N-(4-甲基哌嗪)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-硫代甲酰胺)溶解在甲醇(50ml)和氯仿(15ml)的混合溶剂中,然后向其中加入2N盐酸的乙醇溶液(5ml)。将混合物在减压下浓缩。向所得浓缩液中加入丙酮(50ml)。将混合物搅拌1小时,然后过滤。所得固体用丙酮(5ml)洗涤,然后真空干燥,得到2.49g标题化合物。(产率:80.0%)
在10%MeOH的氯仿中TLC R
实施例4:N-(4-甲基哌嗪)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-硫代甲酰胺盐酸盐的制备
将以与实施例2相同的方法制备的N-(4-甲基哌嗪)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺(4.0g)、甲苯(15ml)和四氢呋喃(15ml)的混合物搅拌10分钟。将Lawesson试剂(4.04g)加入到反应混合物中,然后将其在50℃下搅拌5小时。将反应混合物冷却至室温,然后过滤以除去不溶物。向所得滤液中加入氯仿(100ml),然后用纯水(60ml)和2N盐酸(40ml)的溶液萃取。用氯仿(30ml)洗涤所得的萃取物,然后使用氢氧化钠(约4.4g)将其pH调节至pH 8~9。将该溶液用氯仿萃取三次(分别为100ml、50ml和50ml)。所得的萃取物用无水硫酸钠干燥,然后真空浓缩。向得到的残余物中加入4N盐酸的乙醇溶液(6.0ml)和丙酮(60ml)。将混合物在室温搅拌1小时,然后过滤。所得固体用丙酮(5ml)洗涤,然后真空干燥,得到4.0g标题化合物。(产率:83.0%)
在10%MeOH的氯仿中TLC R
实施例5:N-(2-(二异丙基氨基)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例1相同的步骤,用2-(二异丙基氨基)乙胺代替N-甲基哌嗪,制备标题化合物。(产率:80.0%)
在10%MeOH的氯仿中TLC R
实施例6:N-(2-(二异丙基氨基)乙基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
向N-(2-(二异丙基氨基)乙基)-5-溴-噻吩-2-甲酰胺(4.00g)(按照与实施例5相同的步骤制备的中间体)、四(三苯基膦)钯(0)(1.39g)和1,2-二甲氧基乙烷(20ml)的混合物中加入碳酸钠(3.80g)的纯水(20ml)溶液。将得到的混合物在室温搅拌30分钟,然后向其中加入(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)-(四甲基-1,3-氧杂)硼烷(4.19g)的乙醇(20ml)溶液。将反应混合物在约80℃下搅拌5小时,冷却至室温,然后过滤以除去不溶物。所得滤液用乙醇(40ml)洗涤,然后减压浓缩以除去溶剂。在搅拌下向所得残余物中加入2N盐酸(70ml)。将所得溶液用乙酸乙酯(50ml)洗涤两次,然后使用氢氧化钠(约6.0g)将其pH调节至pH 8~9。将该溶液用二氯甲烷萃取两次(分别为100ml和50ml)。合并的萃取物用无水硫酸钠干燥,然后真空浓缩。向所得浓缩液中加入2N盐酸的乙醇溶液(1.0ml)。将混合物在减压下浓缩。向所得浓缩物中加入丙酮(60ml)。将混合物搅拌1小时,然后过滤。所得固体用丙酮(5ml)洗涤,然后真空干燥,得到5.53g标题化合物。(产率:83.0%)
在10%MeOH的氯仿中TLC R
实施例7:N-(2-(二异丙基氨基)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-硫代甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例4相同的步骤制备标题化合物,使用与实施例5相同的步骤制备的N-(2-(二异丙基氨基)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺。(产率:75.0%)
在10%MeOH的氯仿中TLC R
实施例8:N-(2-(二异丙基氨基)乙基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-硫代甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例4相同的步骤制备标题化合物,使用与实施例6相同的步骤制备的N-(2-(二异丙氨基氨基)乙基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺。(产率:80.0%)
在10%MeOH的氯仿中TLC R
实施例9:N-异丙基-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例2相同的步骤,用异丙胺代替N-甲基哌嗪制备标题化合物。(产率:73.0%)
在10%MeOH的氯仿中TLC R
实施例10:N-异丙基-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-硫代甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例4相同的步骤,使用与实施例9相同的方法制备的N-异丙基-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺,制备标题化合物。(产率:70.0%)
在10%MeOH的氯仿中TLC R
实施例11:N-异丙基-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-硫代甲酰胺的制备
按照与实施例1相同的步骤,使用异丙胺代替N-甲基哌嗪,制备中间体(即,N-异丙基-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺)(3.5g)。(产率:85.0%)。向其中加入甲苯(50ml),然后搅拌10分钟。将Lawesson试剂(5.0g)加入混合物中,然后在约80℃下搅拌5小时。将反应混合物冷却至室温,然后过滤以除去不溶物。将得到的滤液真空浓缩。所得残余物用柱色谱法纯化(乙酸乙酯/己烷=1/3,体积/体积),然后减压浓缩。将得到的浓缩物在乙酸乙酯和己烷(1/3(体积/体积),10ml)的混合溶剂中搅拌1小时,然后过滤。所得固体用己烷(5ml)洗涤,然后在40℃下干燥5小时以获得2.4g标题化合物。(产率:65.0%)。
在10%MeOH的氯仿中TLC R
实施例12:N-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例1相同的步骤,用2-(二乙基氨基)乙胺代替N-甲基哌嗪,制备标题化合物。(产率:34.8%)
在10%MeOH的氯仿中TLC R
实施例13:N-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
向氢氧化钠(0.96g)在纯水(10ml)和四氢呋喃(50ml)的混合溶剂中的溶液中加入按照与实施例12相同的步骤制备的N-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺(2.21g))和2-二乙基氨基乙基氯盐酸盐(0.99g)。将反应混合物在约70℃下搅拌4小时,冷却至室温,然后分离为水层和有机层。所得有机层减压浓缩,然后用1N盐酸(20ml)萃取。用乙酸乙酯(20ml)洗涤所得的萃取物,然后使用氢氧化钠(约0.9g)将其pH调节至pH 8~9。将该溶液用二氯甲烷萃取两次(分别为50ml和30ml)。将得到的萃取物用无水硫酸钠干燥,然后真空浓缩,得到粗产物N-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺。向所得残余物中加入乙醇(15ml)。向所得溶液中加入1N盐酸的乙醚溶液(15ml)。将混合物加热1小时,然后浓缩。向所得残余物中加入丙酮(50ml)。将混合物在室温搅拌30分钟,然后过滤。所得固体用丙酮(5ml)洗涤,然后真空干燥,得到2.20g标题化合物。(产率:73.3%)
在20%MeOH的氯仿中TLC R
实施例14:N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例1相同的步骤,用2-(二甲基氨基)乙胺代替N-甲基哌嗪制备标题化合物。(产率:64.5%)
在10%MeOH的氯仿中TLC R
实施例15:N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例13相同的方法制备标题化合物,使用以与实施例14相同的步骤制备的N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺代替N-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺。(产率:54.7%)
在20%MeOH的氯仿中TLC R
实施例16:N-(2-(4-吗啉)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例1相同的步骤,用4-(2-氨基乙基)吗啉代替N-甲基哌嗪,制备标题化合物。(产率:16.8%)
在10%MeOH的氯仿中TLC R
实施例17:N-(2-(1-哌啶)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例1相同的步骤,用1-(2-氨基乙基)哌啶代替N-甲基哌嗪,制备标题化合物。(产率:52.7%)
在10%MeOH的氯仿中TLC R
实施例18:N-(2-(1-哌啶)乙基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例13相同的步骤,使用以与实施例17相同的步骤制备的N-(2-(1-哌啶)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺代替N-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺,制备标题化合物。(产率:82.6%)
在20%MeOH的氯仿中TLC R
实施例19:N-(2-(1-吡咯烷)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例1相同的步骤,用1-(2-氨基乙基)吡咯烷代替N-甲基哌嗪制备标题化合物。(产率:20.9%)
在10%MeOH的氯仿中TLC R
实施例20:N-((4-(二甲基氨基)四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例1相同的步骤,用4-(氨基甲基)-N,N-二甲基四氢-2H-吡喃-4-胺代替N-甲基哌嗪制备标题化合物。(产率:48.4%)
在10%MeOH的氯仿中TLC R
实施例21:N-((4-(二甲基氨基)四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例13相同的步骤,使用以与实施例20相同的方法制备的N-((4-(二甲基氨基)四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺代替N-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺制备标题化合物。(产率:72.3%)
在20%MeOH的氯仿中TLC R
实施例22:N-(4-(1-甲基)哌啶基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例1相同的步骤,用4-氨基-1-甲基哌啶代替N-甲基哌嗪,制备标题化合物。(产率:63.4%)
在20%MeOH的氯仿中TLC R
实施例23:N-(2-(2-(1-(甲基)吡咯烷)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例1相同的步骤,用2-(2-氨基乙基)-1-甲基-吡咯烷代替N-甲基哌嗪,制备标题化合物。(产率:55.6%)
在20%MeOH的氯仿中TLC R
实施例24:N-(2-(2-(1-(甲基)吡咯烷)乙基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例13相同的步骤,使用以与实施例23相同的步骤制备的N-(2-(2-(1-(甲基)吡咯烷)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺代替N-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺,制备标题化合物。(产率:60.9%)
在20%MeOH的氯仿中TLC R
实施例25:N-((S)-2-(1-乙基)吡咯烷甲基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
按照与实施例1相同的步骤,用(S)-2-(氨基甲基)-1-乙基-吡咯烷代替N-甲基哌嗪,制备标题化合物。(产率:42.1%)
在20%MeOH的氯仿中TLC R
实施例26:N-((S)-2-(1-乙基)吡咯烷甲基)-5-(4-(2-二乙基氨基)乙氧基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺盐酸盐的制备
根据与实施例13相同的步骤,使用以与实施例25相同的方法制备的N-((S)-2-(1-乙基)吡咯烷甲基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺代替N-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺,制备标题化合物。(产率:37.6%)
在20%MeOH的氯仿中TLC R
测试例1:自噬诱导活性
根据厂商说明书,使用自噬检测试剂盒(ab139484,Abcam)在Hela细胞(韩国细胞系库)中测量本发明化合物的自噬诱导活性。具体地,将含有10%胎牛血清(FBS)的100μLEBSS(Earle平衡盐溶液,WELGENE(LB002-03))添加到96孔板的每个孔中。将Hela细胞(1×10
通过用测试化合物(100nM)和阳性对照(雷帕霉素,500nM)处理Hela细胞然后如上所述孵育4小时而获得的吸光度值示于下表1中。并且,通过将测试化合物(10nM或100nM)和阳性对照(雷帕霉素,500nM)处理Hela细胞并如上所述孵育24小时而获得的吸光度值示于下表2中。
表1吸光度(孵育4小时)
表2吸光度(孵育24小时)
从上表1中的结果可以看出,当在测试化合物处理后孵育4小时时,根据本发明的化合物即使在1/5浓度下也表现出自噬诱导活性,等于或高于阳性对照(雷帕霉素)。特别地,从表2的结果中可以看出,当在测试化合物处理后孵育24小时时,与阳性对照(即雷帕霉素)相比,根据本发明的化合物即使在1/50和1/5的浓度下,也表现出优异的(即至少五倍)自噬诱导活性。因此,根据本发明的化合物表现出优异的自噬诱导活性,从而能够有效地用于预防、改善或治疗与自噬相关的各种疾病,包括神经退行性疾病、肝脏疾病、代谢性疾病,败血症等。
测试例2:在肝损伤模型中通过口服施用评价肝功能改善活性(1)
将本发明的化合物口服施用给二甲基亚硝胺(DMN)诱导的肝损伤雄性SD大鼠,持续3周,以评价肝功能改善的活性。具体地,将7周龄的雄性SD大鼠(Orient Bio,韩国)在室温下置于实验室环境中7天。观察全身症状,然后仅将健康动物用于实验。将大鼠分为9组(每组n=5),即正常对照组、仅施用DMN的组、以及施用本发明的化合物(实施例2、5、6、9、10、20或21的化合物)和DMN两者的组。将DMN溶解在纯水中,然后以10mg/kg的剂量腹膜内施用连续3周(每周3次,共4周)。在第一周肝损伤诱导完成后的第3天收集血样,然后测量ALT(丙氨酸转氨酶)值和AST(天冬氨酸转氨酶)值,以确认其肝损伤。施用本发明的化合物3周,即从第一周肝损伤诱导完成后的第4天至DMN施用期。将本发明的七种化合物溶解在纯水或玉米油中,然后使用口服探头(oral sonde)以25mg/kg每天一次的剂量持续3周口服施用。在第0天(完成第一周肝损伤诱导后第3天)以及在施用测试化合物后的第7、14和21天收集血液样品。将收集的血液注入包含促凝血剂(clot activator)的真空管中,然后使其在室温下静置约20分钟,以使每个血液样品凝固。离心10分钟后,将所得血清进行血液生化测试。实验方法总结在图1中。
通过进行如上所述的血液生化试验获得的血清ALT和AST值示于下表3和表4中。
表3
表4
从表3和表4的结果可以看出,在3周后,施用DMN的组中的血清ALT和AST值分别增加了约2倍和约1倍。然而,在同时施用本发明化合物和DMN的组中,在施用后3周的ALT值是101.18~126.10U/L(即,与施用DMN的组相比,降低了约19~35%);施用后3周的AST值是195.10~250.76U/L(即,与施用DMN的组相比,降低了约17~35%)。因此,可以确认本发明的化合物具有对包括肝纤维化在内的肝损伤的有效改善活性。
测试例3:在肝损伤模型中通过口服施用评价肝功能改善活性(2)
将本发明的化合物口服施用给二甲基亚硝胺(DMN)诱导的肝损伤雄性SD大鼠,持续4周,以评估肝功能改善的活性。具体地,将7周龄的雄性SD大鼠(Orient Bio,韩国)在室温下置于实验室环境中7天。观察全身症状,然后仅将健康动物用于实验。将大鼠分为3组(每组n=10),即正常对照组、仅施用DMN的组、以及施用本发明的化合物(实施例21的化合物)和DMN两者的组。将DMN溶解在纯水中,然后以10mg/kg的剂量腹膜内施用连续3周(每周3次,共4周)。在第四周肝损伤诱导完成后收集血样,然后测量ALT(丙氨酸转氨酶)值和AST(天冬氨酸转氨酶)值,以确认其肝损伤。从第四周肝损伤诱导完成后的第1天开始,施用本发明的化合物4周。将本发明的化合物(实施例21的化合物)溶于纯水中,然后使用口服探头以25mg/kg每天一次的剂量持续4周口服施用。在第0天(完成第四周肝损伤诱导后的第1天)和施用测试化合物后的第7、14、21和28天收集血液样品。将收集的血液注入包含凝块活化剂的真空管中,然后使其在室温下静置约20分钟,以使每个血液样品凝固。离心10分钟后,将所得血清进行血液生化测试。另外,在最后一次施用后24小时,为了进行肝切除术而进行尸体解剖并固定以制备其组织标本。用组织标本制备载玻片后,在其上进行苏木精和曙红(H&E)染色,以显微镜观察肝组织的损伤和肝组织中炎性细胞浸润。另外,还对其进行了马氏三色染色,以显微镜观察肝组织中胶原纤维的沉积。实验方法总结在图2中。
通过进行如上所述的血液生化试验获得的血清ALT和AST值示于下表5和表6中。
表5
表6
从表5和表6的结果可以看出,在4周后,施用DMN的组中的血清ALT和AST值分别增加了约3-4倍和约2.2倍。然而,在同时施用本发明的化合物(实施例21的化合物)和DMN的组中,在施用后3周和4周的ALT值分别为44.48U/L和48.33U/L(即与施用DMN的组相比,分别降低了30%和26%);施用后3周和4周的AST值分别为112.06U/L和110.45U/L(即,与施用DMN的组相比,分别降低了22%和30%)。因此,可以确认本发明的化合物具有对包括肝纤维化在内的肝损伤的有效改善活性。
另外,通过如上所述进行苏木精和曙红(H&E)染色和马氏三色染色获得的结果分别示于图3和图4中。根据图3的结果,测量对肝组织的损伤程度和肝组织中炎性细胞浸润的程度。并且,根据图4的结果,测量肝组织中胶原纤维沉积的程度。其结果示于下表7。
表7
从图3和表7的结果可以看出,4周后,与正常对照组相比,在施用DMN的组中,对肝组织的损伤和肝组织中炎性细胞浸润分别增加了约16倍和约4倍。然而,在同时施用本发明的化合物(实施例21的化合物)和DMN的组中,对肝组织的损伤和肝组织中炎性细胞浸润分别为276.0个细胞/1000个细胞和85.33个细胞/mm
而且,从图4和表7的结果可以看出,4周后,与正常对照组相比,施用DMN的组在肝组织中的胶原纤维沉积增加了约11倍。然而,在同时施用本发明的化合物(实施例21的化合物)和DMN的组中,肝组织中胶原纤维的沉积为10.98%/mm
因此,可以确认本发明的化合物具有对包括肝纤维化在内的肝损伤的有效改善活性。
- 新的儿茶酚衍生物或其盐,其制备方法以及包含其的药物组合物
- 新4-甲氧基吡咯衍生物或其盐以及包含它们的药物组合物