胰岛素预混制剂和产品、其制备方法及其使用方法

优先权声明

本申请要求2019年5月6日提交的题为“胰岛素预混制剂和产品、其制备方法及其使用方法”的美国临时专利申请系列号62/843,881和2019年6月17日提交的题为“胰岛素预混制剂和产品、其制备方法及其使用方法”的美国临时专利申请系列号62/862,573的优先权和利益，每个所述临时申请的全部内容通过参考并入本文并作为依据。

序列表

本申请含有以ASCII格式电子提交并整体通过参考并入本文的序列表。

技术领域

本公开总的来说涉及一种可药用胰岛素预混制剂，其含有约0.1单位/mL至约10.0单位/mL的胰岛素和低浓度的A-21脱酰胺胰岛素杂质。本公开还涉及制造和使用此类胰岛素预混制剂的方法。所述可药用胰岛素预混制剂可以被无菌装填在容器、优选为柔性容器中，以形成无菌药用胰岛素预混产品。所述胰岛素预混产品可以是一次性使用的预混物，其是无菌、稳定的即用型水性溶液，用于静脉内(IV)给药例如静脉内输注。本公开还涉及制造和使用此类胰岛素预混产品的方法。

背景技术

胰岛素是由个体的胰岛β细胞产生的初级多肽激素。胰岛素负责控制葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的细胞摄取、利用和储存，同时抑制糖原、蛋白质和脂肪的分解。人胰岛素的经验分子式为C

在健康个体中，基础血糖水平倾向于保持恒定。个体胰腺的胰岛素分泌与血糖水平严格偶联。因此，血糖和胰岛素水平受到调节，以在维持相对正常的葡萄糖生产和利用的同时最小化葡萄糖浓度的变化。

然而，在具有代谢障碍例如糖尿病的个体中，所述个体生产胰岛素的能力可能降低或完全没有这种能力，或具有胰岛素抗性。因此，对于患有糖尿病的个体来说，使用胰岛素控制血糖是管理血糖水平的根本。

此外，在重症监护病房(ICU)中的危重病个体中，即使没有糖尿病病史，胰岛素给药对于应对高血糖这种由个体的肝脏和肌肉组织中的胰岛素抗性引起的常见现象也是至关重要的。胰岛素抗性通常被认为是对手术、创伤或败血症引起的应激的适应性反应，目的是为大脑、红细胞和伤口愈合提供葡萄糖。如果ICU患者的血糖水平得不到控制，会发生严重的有害医疗后果，例如对患者的暂时和永久性伤害、长期住院、需要医疗干预，甚至是患者死亡。例如，2005USP MedMarx年度报告报告了与胰岛素有关的严重有害医疗错误。一名患者入院接受肾移植。在手术前安排并开始胰岛素输注。术后，患者在没有胰岛素输注的情况下被送入ICU。患者的血糖升高至443mg/dL，并记录到其他显著的电解质异常，这导致患者在ICU停留时间延长，并重新开始透析。

因此，现在医院的普遍做法是向每位ICU患者静脉内给药胰岛素，以将血糖水平稳定在约80-150mg/dL之间。在血糖水平稳定后，通常给药维持剂量的胰岛素。

胰岛素只能在医疗监督下以低浓度例如约0.01-10.0单位/mL静脉内给药到患者，所述浓度根据胰岛素浮动计算指南计算的速率滴定，以控制患者、包括ICU患者的血糖水平。剂量应该在患者的代谢需要、血糖监测结果和血糖控制目标的基础上个体化确定。

随着患有糖尿病的美国人的数量和ICU患者的数量越来越多，胰岛素成为医院中最广泛使用的药物之一。然而，与医院中胰岛素的给药特别是通过静脉内(IV)输注给药相关的用药错误由来已久。在2007年，USP MedMarx年度报告显示，胰岛素是在2005日历年中涉及用药错误数量最多的产品，并且也是有害医疗错误数量最多的产品，占所有报告的有害用药错误的11％以上。

造成胰岛素医疗错误的主要因素之一是在医院分配或给药胰岛素期间错误的胰岛素剂量。目前，市场上有不同类型和品牌的浓缩胰岛素商业产品可用，它们具有不同的浓度，例如100单位/mL、200单位/mL和500单位/mL。然而，没有胰岛素浓度约为0.01-10.0单位/mL的一次性使用、无菌、稳定的即用型IV输注系统可用。在医院中，胰岛素浓度约为0.01-10.0单位/mL的IV输注系统必须通过用渗涨度调节剂溶液稀释浓缩的胰岛素商业产品来制备。这通常涉及在即将开始向患者输注之前，通过将胰岛素从小容积小瓶容器转移到装有渗涨度调节剂溶液或稀释剂的柔性塑料容器中来制备IV输注系统。此外，该制剂在室温下仅稳定约24-48小时。由于沟通错误、使用错误类型的胰岛素、测量错误、交叉污染和由于暴露于光、空气和高温而造成的胰岛素降解，在该制备过程中会发生医疗错误。这种在医院内制备胰岛素IV输注系统的做法在很大程度上造成胰岛素医疗错误，例如错误的剂量或错误的胰岛素类型。由于报告的胰岛素医疗错误的数量大，胰岛素给药指南推荐所有胰岛素浓度为0.01-10.0单位/mL(或U/mL)的IV输注系统必须在药房制备。

因此，对胰岛素浓度为0.1-10.0U/mL，用于IV输注的一次性使用、无菌、稳定的即用型预混产品，存在着需求。

此外，根据《可注射药物手册》(Handbook on Injectable Drugs)(第20版，ASHP关于IV相容性和稳定性的指导(ASHP’s Guide to IV Compatibility and Stability)，第768页)，胰岛素在静脉内输注溶液容器的表面例如玻璃和塑料(包括聚氯乙烯(PVC)、乙烯-乙酸乙烯酯(EVA)、聚乙烯(PE)和其他聚烯烃)、管路和滤器上的吸附已被证实。整个输注装置的损失范围估计值最高达到约80％，尽管已报告使用不同测试方法、设备和程序得到不同的结果。20％至30％左右的吸附估计值是常见的。

根据《可注射药物手册》(第20版，ASHP关于IV相容性和稳定性的指导)，在过去，已尝试不同方法来减少胰岛素的吸附。一种方法是向输注溶液添加人白蛋白。然而，人白蛋白阻止吸附的程度是不确定的。其他添加剂例如维生素、电解质和药物也被认为具有类似的作用。避免或最小化吸附的其他推荐方法包括向胰岛素溶液添加少量患者血液，以及在给药前用胰岛素溶液储存或冲洗给药装置以使IV输注套装饱和。

然而，根据《可注射药物手册》(第20版，ASHP关于IV相容性和稳定性的指导)，不论是否试图阻止胰岛素吸附，向输注溶液添加一定量的胰岛素并准确地知道该量中被实际给药到患者的比例，似乎是不可能的。因此，监测患者对治疗的反应并在该反应的基础上做出适合的调整是至关重要的。

因此，对不吸附或吸收到IV输注柔性容器，胰岛素浓度为0.1-10.0U/mL，用于IV输注的一次性使用、无菌、稳定的即用型预混产品，存在着需求。

发明内容

本申请人制备了一种可药用胰岛素预混制剂，其含有约0.1单位/mL至约10.0单位/mL的胰岛素和低浓度的A-21脱酰胺胰岛素杂质。例如，当使用适合的反相高效液相色谱(HPLC)或UHPLC方法例如在USP胰岛素专论中提供的并被调整以用于低浓度胰岛素制剂的方法测量时，所述胰岛素预混制剂可能具有以总胰岛素的重量计低于约5.0％、更优选地低于约4.0％的A-21脱酰胺胰岛素杂质。

所述胰岛素预混制剂还可以包含至少一种渗涨度调节剂和至少一种缓冲剂。所述胰岛素预混制剂与个体的体液或血液等渗。所述制剂的渗透压重量摩尔浓度优选地在约280至约320mOsmo/kg的个体的体液或血液的等渗范围内。本公开还涉及制造和使用此类胰岛素预混制剂的方法。所述可药用胰岛素预混制剂可以被无菌装填在柔性容器中，以形成药用胰岛素预混产品。所述胰岛素预混产品可以是一次性使用的预混物，其是用于静脉内给药例如静脉内输注的无菌、稳定的即用型水性溶液。本公开还涉及制造和使用此类胰岛素预混产品的方法。例如，所述胰岛素预混产品可用于在具有代谢障碍的个体例如患有糖尿病的个体或重症监护室(ICU)中已被处方胰岛素的个体中控制血糖。

本申请人发现，所述胰岛素预混产品在新鲜制备时以及在2℃至8℃的冷藏温度下储存24个月然后在室温(23℃-27℃)下另外储存30天的保质期期间，均出人意料地稳定，即使在没有任何添加的防腐剂、任何添加的锌、任何添加的表面活性剂或任何其他添加的稳定赋形剂的情况下。本申请人没有在所述胰岛素预混产品中添加任何锌、任何防腐剂或任何表面活性剂。相反，目前市场上可用的浓缩胰岛素商业产品具有添加的锌、添加的防腐剂和添加的甘油/丙三醇。根据包装说明书，一种浓缩胰岛素商业产品具有量为21μg/mL的锌、量为3mg/mL的间甲酚和16mg/mL的甘油。相反，本文中公开的胰岛素预混产品基本上不含间甲酚、甘油或添加的锌。所述胰岛素预混产品的锌含量经测量为0.13-0.16μg/mL，其来自于胰岛素原材料，并且明显低于商业产品的锌含量。

所述胰岛素预混制剂和产品优选地具有约6.5-7.2、更优选地约6.6-7.0的pH值。直至保质期结束，所述胰岛素预混物的pH值稳定在6.5-7.2。

本申请人发现，所述胰岛素预混制剂在新鲜制备时以及直至其保质期结束，具有出人意料低浓度的A-21脱酰胺胰岛素杂质。在新鲜制备时以及直至其保质期结束，所述胰岛素预混产品还基本上不含或含有极低浓度的胰岛素二聚体、六聚体或任何其他高分子量蛋白(HMWP)。当使用适合的孔径排阻层析(SEC)方法例如在USP胰岛素专论中提供的并被调整以用于低浓度胰岛素制剂的方法测量时，胰岛素二聚体、六聚体或任何其他高分子量蛋白(HMWP)的总浓度以总胰岛素的重量计不超过约4.0％，不超过约3.0％，不超过2.0％，更优选地不超过约1.7％，或甚至不超过1.1％。

本申请人还发现，所述预混产品中的胰岛素出人意料地不粘附于常用柔性容器，这将由吸附或吸收到柔性容器造成的胰岛素损失降至最低，并显著提高了用于给药的胰岛素剂量的准确性。

此外，本文中公开和制备的胰岛素预混产品是一次性使用预混物，并且不需进一步稀释即可立即静脉内给药到需要的个体。因此，本文中公开的胰岛素预混产品消除了在即将开始胰岛素IV输注之前，在药房或医院中从浓缩胰岛素商业产品稀释来制备胰岛素浓度为0.1-10.0单位/mL的胰岛素IV输注系统的必要性。因此，所述胰岛素预混产品会显著减少分配和给药胰岛素中的医疗错误，并显著提高在全国医院中使用胰岛素的安全性和效率。

附图说明

图1示出了具有21个氨基酸的A-链(SEQ ID NO：1)和30个氨基酸的B-链(SEQ IDNO：2)的人胰岛素的序列。

图2示出了用于本文中公开的胰岛素预混产品的柔性塑料容器的特征。

图3是根据本公开所述的制造可药用胰岛素预混制剂的方法的实施方式的非限制性实例的流程图。

图4-9示出了本文公开的实施例1中的实验研究的测试结果。图4示出了含有PBS(磷酸盐缓冲液)的胰岛素(1.0单位/mL)制剂在玻璃安瓿(样品ID：玻璃-PBS-2mM)和PL2501

图10-17示出了本文公开的实施例2中的实验研究的测试结果。

图18-19示出了本文公开的实施例3中的实验研究的测试结果。

图20-25示出了本文公开的实施例4中的实验研究的测试结果。

图26-27示出了本文公开的实施例5中的实验研究的测试结果。

图28-40示出了本文公开的实施例6中的实验研究的测试结果。

图41示出了本文公开的实施例7中的实验研究的测试结果。图41显示的反相HPLC层析图示出了一种胰岛素预混制剂样品的胰岛素与A-21脱酰胺胰岛素杂质的分离，以及用于含量定量的A-21脱酰胺胰岛素杂质的峰面积。提供该图仅仅是出于说明性目的。本领域技术人员应该理解，在使用不同的HPLC系统、柱、流动相分离等时，峰保留时间可能变化。

具体实施方式

在下文中提供了一些定义。然而，定义可能位于下面的“实施方式”部分中，并且上述标题“定义”并不意味着那些“实施方式”中的公开内容不是定义。

当在本公开和权利要求书中使用时，术语“预混物”是不需进一步稀释即可适用于直接给药、包括IV输注到患者的即用型水性溶液。优选地，所述预混溶液作为无菌溶液供应，并且如本文中所述在其保质期内稳定。

当在本公开和权利要求书中使用时，术语“无菌”被理解为是指不含任何细菌或其他活微生物。

当在本公开和权利要求书中使用时，术语“等渗”被理解为是指具有与个体的体液或血液相同的渗透压重量摩尔浓度，通常为约280至约320mOsm/kg。

当在本公开和权利要求书中使用时，术语“新鲜制备”被理解为是指在样品制造后的30天内，在此期间所述样品储存在2℃至8℃的冷藏温度下。

当在本公开和权利要求书中使用时，术语“胰岛素预混产品是稳定的”被理解为是指胰岛素浓度在新鲜制备时的原始浓度的±10％以内，当通过反相HPLC测量时A-21脱酰胺胰岛素杂质以总胰岛素的重量计低于约4.0％，当通过SEC测量时高分子量蛋白(HMWP)的含量以总胰岛素的重量计低于约2.0％，并且pH在约6.5-7.2内。

当在本公开和权利要求书中使用时，术语胰岛素预混制剂或产品的“保质期”被理解为是指在2℃至8℃的冷藏温度下储存24个月然后在23℃至27℃的室温下储存30天，并且在整个储存期间基本上不暴露于光。

当在本公开和权利要求书中使用时，术语“甘油”和“丙三醇”可互换。

适合于本公开的胰岛素的非限制性实例包括人胰岛素、重组人胰岛素、人胰岛素类似物、胰岛素衍生物、活性胰岛素代谢物或其组合。

当在本公开和权利要求书中使用时，“重组人胰岛素”在结构上与天然人胰岛素一致，并通过重组DNA技术生产。在一个实施方式中，所述重组人胰岛素通过微生物合成方法制造。在另一个实施方式中，所述重组人胰岛素利用巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)(酵母菌)作为生产生物体，通过重组DNA技术制造。

当在本公开和权利要求书中使用时，“胰岛素类似物”是天然存在的胰岛素即人胰岛素或动物胰岛素的类似物，区别在于将相应的原本一致的天然存在的胰岛素的至少一个天然存在的氨基酸残基用其他氨基酸残基替换和/或在其中添加或移除至少一个氨基酸残基。所述添加和/或替换的氨基酸残基也可以是自然界中不存在的氨基酸残基。

当在本公开和权利要求书中使用时，“渗涨度调节剂”是添加到可注射制剂以防止给药后注射部位处的渗透压冲击，从而降低局部刺激的赋形剂。用于渗涨度调节的典型赋形剂包括盐水、甘油、甘露糖醇、右旋糖和海藻糖。渗涨度是一种依数性质，主要取决于溶液中溶解的粒子的数量。因此，待添加的渗涨度调节剂的量取决于具体制剂。通常，280至320mOsm/kg的渗透压重量摩尔浓度被认为是等渗的。

除非另有表述，否则本文中表述的所有百分率以组合物的总重量计。当在本文中提及pH时，值对应于使用标准设备在约25℃下测量的pH。

当在本文中使用时，“约”、“大约”和“基本上”被理解为是指在数值的一定范围内的数字，例如所指称数字的-10％至+10％、优选为所指称数字的-5％至+5％、更优选为所指称数字的-1％至+1％、最优选为所指称数字的-0.1％至+0.1％的范围。

本文中的所有数值范围应该被理解为包括所述范围内的所有全整数或分数。此外，这些数值范围应该被解释为为针对该范围内的任何数字或数字子集的权利要求提供支持。例如，1至10的公开应该被解释为支持1至8、3至7、1至9、3.6至4.6、3.5至9.9等的范围。

当在本公开和权利要求书中使用时，除非上下文另有明确叙述，否则没有具体数量的指称包括复数指称物。因此，例如，对“组分”的指称包括两种或更多种组分。

短语“包含”应该被包含性而不是排他性地解释。同样地，术语“包括”、“含有”和“具有”均应被解释为包含性的，除非这种解释被上下文明确禁止。此外，就此而言，这些术语规定了所陈述特点的存在，但不排除另外的或其他特点的存在。

然而，本文公开的组合物和方法可能缺少本文中未具体公开的任何要素。因此，使用术语“包含”的实施方式的公开是：(i)具有所鉴定的组分或步骤以及另外的组分或步骤的实施方式的公开，(ii)“基本上由所鉴定的组分或步骤组成”的实施方式的公开，和(iii)“由所鉴定的组分或步骤组成”的实施方式的公开。本文中公开的任何实施方式可以与本文中公开的任何其他实施方式组合。

当在“X和/或Y”的情形中使用时，术语“和/或”应该被解释为“X”或“Y”或“X和Y”。同样地，“X或Y中的至少一者”应该被解释为“X”或“Y”或“X和Y”。例如，“磷酸二氢钠或磷酸氢二钠中的至少一者”应该被解释为“磷酸二氢钠”或“磷酸氢二钠”或“磷酸二氢钠和磷酸氢二钠两者”。

当在本文中使用时，术语“实例”和“例如”特别是在后面跟有项目清单时，仅仅是示例性和说明性的，并且不应被视为排他性或详尽的。

“对象”或“个体”是哺乳动物，优选为人类。当在本文中使用时，“有效量”是在个体中预防缺陷、治疗疾病或医学病症，或者更通常来说减轻症状、控制疾病进展或为个体提供营养、生理或医学益处的量。

术语“治疗”包括预防性治疗(其阻止和/或减缓目标病理性状况或障碍的发展)和治愈性、治疗性或疾病改善性治疗两者，后者包括治愈、减缓已诊断的病理状况或障碍、减轻其症状和/或停止其进展的治疗性措施；和有患病风险或疑似患病的患者以及患病或被诊断为患有疾病或医学病症的患者的治疗。术语“治疗”并不一定暗示对象被治疗直至完全恢复。术语“治疗”还指在未患疾病但可能容易发展到不健康状况的个体中维持和/或促进健康。术语“治疗”还打算包括一种或多种主要预防或治疗措施的加强或其他方式的增强。作为非限制性实例，治疗可以由患者、护理人员、医生、护士或其他医疗保健专业人员进行。

当在本文中使用时，术语“单位剂型”是指是指适合作为单位剂量用于人类和动物对象的物理上分立的单元，每个单元含有与可药用稀释剂、载体或介质缔合的预定量的本文公开的组合物，其量足以产生所需效果。所述单位剂型的规格取决于所使用的特定化合物、待实现的效果以及与宿主中的每种化合物相关的药效学。

当在本文中使用时，术语“mM”是指水性溶液的摩尔浓度单位,，其是mmol/L。例如，1.0mM等于1.0mmol/L。

当在本文中使用时，术语“可药用”是指物质在给药到对象时不引起实质性的不利过敏或免疫反应。

术语“实质上没有”、“基本上不含”或“实质上不含”在用于指称特定组分时，是指存在的任何所述组分占少于约3.0重量％，例如少于约2.0重量％、少于约1.0重量％、优选地少于约0.5重量％或更优选地少于约0.1重量％。

本公开总的来说涉及一种可药用胰岛素预混制剂，其包含约0.1-10.0U/mL的胰岛素。所述胰岛素预混制剂是水性溶液，可以被无菌装填到柔性容器中以形成可药用胰岛素预混产品。所述胰岛素预混产品优选为无菌、稳定的即用型水性溶液。所述胰岛素预混产品优选为一次性使用产品。所述胰岛素预混产品优选为透明且无色的。所述胰岛素产品可以被给药到需要的个体，用于改善的血糖控制疗法。所述个体可以是哺乳动物，优选为人类，包括成人和儿童。所述个体可以是具有代谢障碍的个体，包括重症监护室(ICU)中的个体或患有糖尿病例如I型和II型糖尿病的个体。

本发明的一个方面是一种可药用胰岛素预混制剂。所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例可以包含以所述制剂的体积计浓度为约0.1-10.0U/mL、优选地约0.5-5.0U/mL、更优选地约0.5-2.0U/mL、最优选地约1.0U/mL的胰岛素。本文公开的预混制剂中的胰岛素浓度优选为用于直接给药到患者的终浓度，其优选地不需通过添加尚未存在于所述胰岛素预混制剂中的任何额外成分进行任何进一步稀释。

胰岛素的非限制性实例可以包括人胰岛素、重组人胰岛素、人胰岛素类似物、胰岛素衍生物、活性胰岛素代谢物或其组合。所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例可以包含水以形成水性溶液。

所述胰岛素预混制剂的非限制性实例在新鲜制备时是稳定的，并且优选地具有在2℃至8℃的冷藏温度储存24个月然后在23℃至27℃的室温下储存30天的保质期，在所述整个储存期间基本上不暴露于光。

所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例在新鲜制备时并且直至保质期结束可以优选地具有约6.5-7.2、更优选地约6.6-7.0、最优选地约6.8的pH值。本申请人发现，所述胰岛素预混制剂的pH值是影响所述制剂的稳定性的主要因素之一。本申请人发现，本文所公开的具有约6.5-7.2、优选地约6.6-7.0的pH值的胰岛素预混制剂，在新鲜制备时及其在柔性容器或玻璃容器中储存的保质期中出人意料地表现出高稳定性。此外，本申请人发现，在关于浓缩胰岛素产品例如100.0U/mL胰岛素的USP专论中发表的pH范围(约7.0-7.8)，对于所述具有低胰岛素浓度例如约0.1-10.0U/mL的胰岛素预混制剂来说不是优选的pH范围。尽管用于所述两种不同浓度产品的pH范围交叠，但用于所述胰岛素预混制剂(约0.1-10.0U/mL胰岛素)的理想pH优选地低于浓缩胰岛素溶液(100.0U/mL)市售产品的理想pH。

所述胰岛素预混制剂的非限制性实例优选地具有低浓度的杂质。例如，所述胰岛素预混制剂在新鲜制备时和直至其保质期结束，具有以总胰岛素的重量计低于约8.0％、优选地低于约5.0％、更优选地低于约4.0％的A-21脱酰胺胰岛素杂质。在新鲜制备时，所述胰岛素预混制剂中的A-21脱酰胺胰岛素杂质以总胰岛素的重量计可能低于约5.0％，优选地低于约4.0％，更优选地低于约3.0％，最优选地低于约2.5％或甚至低于2.0％。A-21脱酰胺胰岛素杂质的量使用适合的反相HPLC或UHPLC方法测量，例如在USP胰岛素专论中提供的方法，其被调整以用于低浓度胰岛素制剂。本领域技术人员应该理解，所述A-21脱酰胺胰岛素杂质的重量百分率可以根据HPLC层析图中A-21脱酰胺胰岛素杂质的峰面积相对于总胰岛素峰面积的百分率来计算。

所述胰岛素预混制剂的非限制性实例在新鲜制备时和在其保质期结束时，可以优选地基本上不含或具有非常低浓度的胰岛素二聚体、六聚体或任何其他高分子量蛋白(HMWP)。在一个实施方式中，在新鲜制备时和在其保质期结束时，所述胰岛素二聚体、六聚体和任何其他HMWP的总量以总胰岛素的重量计低于约4.0％、低于约3.0％、优选地低于约2.0％、最优选地低于约1.7％或甚至低于约1.1％。所述胰岛素二聚体、六聚体或任何其他HMWP的总量使用适合的孔径排阻层析(SEC)方法来测量，例如在USP胰岛素专论中提供的方法，其被调整以用于低浓度胰岛素制剂。

所述胰岛素预混制剂的非限制性实例在新鲜制备时和在其保质期结束时(其中基本上不暴露于光)优选地具有以总胰岛素的重量计超过约90％，优选地超过约95％，更优选地超过约98％，最优选地超过约99％的单体形式的胰岛素。

所述胰岛素预混制剂的非限制性实例优选地具有低浓度的每一种未知相关物质。在一个实施方式中，所述胰岛素预混制剂在新鲜制备时及其保质期中具有以总胰岛素的重量计低于约5.0％、优选地低于约4.0％、更优选地低于约3.0％的总未知相关物质。在新鲜制备时，当通过反相HPLC测量时，所述总未知相关物质以总胰岛素的重量计优选地低于约2.0％或甚至低于约1.5％。所述胰岛素预混制剂优选地基本上不含任何可见颗粒物。

所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例还可以包含至少一种渗涨度调节剂。所述至少一种渗涨度调节剂可以是氯化钠(NaCl)和右旋糖中的一者或两者。在一个实施方式中，所述至少一种渗涨度调节剂优选是氯化钠。以总制剂的重量计，氯化钠的浓度优选为约0.8％-1.0％，更优选为约0.855％-0.945％，最优选为约0.9％。在另一个实施方式中，所述至少一种渗涨度调节剂优选是右旋糖。右旋糖的浓度优选为约4.0％-11.0％。在一个实施方式中，所述至少一种渗涨度调节剂优选为以制剂的重量计约5.0％的右旋糖。在又一个实施方式中，所述至少一种渗涨度调节剂优选为以制剂的重量计约5.51％的右旋糖。在又一个实施方式中，所述至少一种渗涨度调节剂优选为以制剂的重量计约10.0％的右旋糖。

所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例还可以包含至少一种缓冲剂。所述至少一种缓冲剂优选地选自磷酸二氢钠(单水合物)、磷酸氢二钠(无水)、磷酸三钠、柠檬酸盐、组氨酸、磷酸盐、色氨酸、马来酸盐、碳酸盐及其混合物。

所述至少一种缓冲剂的浓度的非限制性实例是以制剂的总体积计约0.1-50.0mM、优选地约1.0-10.0mM、更优选地约3.0-7.0mM、最优选地约5.0mM的浓度。

所述至少一种缓冲剂的非限制性实例优选为磷酸二氢钠与磷酸氢二钠的组合。磷酸二氢钠与磷酸氢二钠的摩尔比可以是约1:0.1至约1:10，优选为约1:1至约1:5，更优选为约1:1至约1:4。在一个实施方式中，磷酸二氢钠与磷酸氢二钠的摩尔比是约2.1:2.9。在另一个实施方式中，磷酸二氢钠与磷酸氢二钠的摩尔比是约1:3.44。

所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例还可以包含一种或多种氨基酸例如精氨酸、甘氨酸和赖氨酸，以及一种或多种钾盐例如氯化钾。所述胰岛素预混制剂中每种所述赋形剂的浓度以制剂的体积计为约0.1mM至约10.0mM，优选为约1.0mM至约5.0mM。

所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例还可以包含牺牲性蛋白质例如白蛋白，其量以制剂的体积计为约0.1-10.0mg/mL，优选为约0.5-5.0mg/mL，更优选为约0.5-2.0mg/mL。

所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例可以含有一种或多种防腐剂，例如苯酚、甲酚、间甲酚、山梨酸盐、对羟基苯甲酸酯和适用于静脉内给药的任何其他添加的防腐剂。

优选地，所述可药用胰岛素预混制剂基本上不含添加的苯酚、甲酚、间甲酚、对羟基苯甲酸酯或任何其他添加的防腐剂。

所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例可以含有一种或多种表面活性剂，例如聚乙二醇、烷基羧酸盐-脂肪酸盐、月桂基硫酸钠、十二烷基硫酸钠、磷脂酰胆碱(卵磷脂)、聚山梨酸酯、失水山梨糖醇单月桂酸酯和适合于静脉内给药的任何其他表面活性剂。

优选地，所述可药用胰岛素预混制剂基本上不含任何添加的表面活性剂。

所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例可以含有一种或多种抗氧化剂，例如维生素E、维生素C、丁基羟基茴香醚(BHA)、丁基羟基甲苯(BHT)、亚硫酸盐和适合于静脉内给药的任何其他抗氧化剂。

优选地，所述可药用胰岛素预混制剂基本上不含任何添加的抗氧化剂。

所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例可以含有添加的锌。优选地，所述可药用胰岛素预混制剂含有低于约0.30μg/mL、优选地低于约0.21μg/mL、更优选地低于0.16μg/mL的制剂的锌。

所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例优选地含有低于0.21μg/mL的锌。

所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例优选地含有低于0.16μg/mL的锌。

所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例优选地基本上不含添加的锌。

所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例优选地基本上不含锌。

所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例优选地基本上不含任何添加的锌、任何添加的防腐剂、任何添加的甘油和任何添加的表面活性剂。此外，本申请人发现，本文所公开的可药用胰岛素预混制剂出人意料地在其保质期内(在约5℃储存24个月，然后在约25℃储存30天，并且在整个储存时间内基本上不暴露于光)稳定，即使在没有任何添加的锌、任何添加的防腐剂、任何添加的甘油或任何添加的表面活性剂的情况下。在一个实施方式中，不向所述胰岛素预混制剂添加锌、防腐剂、甘油或表面活性剂。本文所公开和制备的胰岛素预混制剂中的锌含量可能为约0.13-0.16μg/mL，其来自于胰岛素原材料。相反，可商购的浓缩胰岛素产品含有添加的锌、防腐剂(例如间甲酚)和甘油。例如，一种浓缩胰岛素商业产品具有量为21μg/mL的锌、量为3mg/mL的间甲酚(防腐剂)和量为16mg/mL的甘油。

所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例可以含有甘油/丙三醇。

优选地，所述可药用胰岛素预混制剂基本上不含添加的甘油/丙三醇。

所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例在新鲜制备时以及在2℃至8℃的冷藏温度下储存24个月然后在23℃-27℃的室温下另外储存30天的保质期内出人意料地稳定，即使在没有任何添加的防腐剂、任何添加的抗氧化剂、任何添加的锌、任何添加的表面活性剂或任何其他添加的稳定赋形剂的情况下。因此，本文所公开和制备的可药用胰岛素预混制剂可以无需任何添加的防腐剂、任何添加的抗氧化剂、任何添加的锌、任何添加的表面活性剂或任何其他添加的稳定赋形剂。然而，在某些实施方式中，可以在所述胰岛素预混制剂中添加一种或多种赋形剂例如防腐剂、抗氧化剂、锌、表面活性剂或任何其他添加的稳定赋形剂。

所述可药用胰岛素预混制剂的非限制性实例优选地不吸附或吸收到适合于IV输注的常用柔性容器。因此，由于本文所公开的胰岛素预混制剂对于适合于IV输注的常用柔性容器来说在柔性容器上基本上不吸收或低吸收，可以防止胰岛素损失。

所述柔性容器的非限制性实例可以是具有与胰岛素溶液接触的内表面的柔性塑料容器，其中所述内表面可以由塑性材料或塑性材料的层制成。用于与胰岛素溶液接触的内表面的优选塑性材料包括聚乙烯(PE)、直链低密度聚乙烯(LLDPE)、聚氯乙烯(PVC)、聚丙烯(PP)、共聚物和修饰的聚合物或共聚物。例如，所述柔性容器的内表面可以由柔性PE或LLDPE制成。常用柔性容器的内表面的非限制性实例的特征描述在图2中。

在一个实施方式中，所述柔性容器是旨在用于静脉内药物输注的100ml

在另一个实施方式中，本申请人发现，本文所公开的胰岛素预混制剂出人意料地不吸附或吸收到所述柔性容器的内表面，不论测试的柔性容器的类型如何，以及是否添加氨基酸例如精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、牺牲性蛋白质例如白蛋白或钾盐例如KCl。因此，本文所公开的胰岛素预混制剂可以显著减少由胰岛素吸附或吸收到柔性容器造成的胰岛素损失，并因此减少在医院中将胰岛素给药到需要的患者时的医疗错误。

在某些实施方式中，所述可药用胰岛素预混制剂还可以包含pH调节剂例如氢氧化钠(NaOH)和盐酸(HCl)。

本公开的另一方面是一种制造可药用胰岛素预混制剂的方法。所述方法的非限制性实例优选地包括：1)将胰岛素添加到水，并混合直至均匀以形成水性溶液，其中胰岛素的浓度为约0.1-10.0U/mL。

所述制造可药用胰岛素预混制剂的方法的非限制性实例优选地还包括将所述水性溶液的pH调整到约6.5-7.2。

所述制造可药用胰岛素预混制剂的方法的非限制性实例优选地还包括向水添加至少一种渗涨度调节剂并混合直至均匀。

所述制造可药用胰岛素预混制剂的方法的非限制性实例优选为图3中示出的方法。尽管所述方法的某些实施方式包括所有描绘的步骤，但所述方法的其他实施方式省略了一个或所有描绘的步骤，并且除非另有指明，否则每个步骤都是任选的。本公开不限于图3中示出的所述方法的特定实施方式。

在所述制造可药用胰岛素预混制剂的方法的一个实施方式中，所述方法包括：1)指定终体积，并在室温下用水装填容器至所述终体积的约70％-99％，优选地所述终体积的约90％；2)使用酸或酸性缓冲剂将pH调整到约2.0-5.0；3)以约0.1-10.0U/mL总制剂的浓度添加胰岛素并混合直至溶解；4)测试pH并将其调整到优选为约6.5-7.2，更优选为约6.6-7.0，最优选为约6.8，如果需要的话使用NaOH和/或HCl；5)用水将得到的溶液补足至所述终体积并混合直至均匀；以及6)将所述溶液无菌过滤，以形成所述可药用胰岛素预混制剂。

所述渗涨度调节剂的非限制性实例包括氯化钠(NaCl)、右旋糖及其组合。在一个实施方式中，所述渗涨度调节剂优选为NaCl。NaCl的浓度以总制剂的重量计优选为约0.8％-1.0％，更优选为约0.855％-0.945％，最优选为约0.9％。在另一个实施方式中，所述渗涨度调节剂优选为右旋糖，并且右旋糖的浓度以总制剂的重量计为约4.0％-11.0％，例如约5.0％、约5.51％或约10％。

所述制造可药用胰岛素预混制剂的方法的非限制性实例优选地还包括添加至少一种缓冲剂并混合直至均匀。就此而言，所述方法的某些实施方式可以不包括添加缓冲剂，但优选实施方式包括添加至少一种缓冲剂。所述至少一种缓冲剂的浓度以制剂的体积计优选为约0.1mM至约20.0mM，优选为约1.0mM至约10.0mM，更优选为约3.0mM至约7.0mM，最优选为约5.0mM。

所述至少一种缓冲剂的非限制性实例选自磷酸二氢钠(单水合物)、磷酸氢二钠(无水)、磷酸三钠、柠檬酸盐、组氨酸、磷酸盐、色氨酸、马来酸盐、碳酸盐及其混合物。优选地，所述至少一种缓冲剂是磷酸二氢钠与磷酸氢二钠的组合。总磷酸二氢钠与磷酸氢二钠的摩尔比优选为约1:0.1至约1:10，更优选为约1:1至约1:5，最优选为约1:1至1:4。在一个实施方式中，磷酸二氢钠与磷酸氢二钠的摩尔比优选为约2.1:2.9。在另一个实施方式中，磷酸二氢钠与磷酸氢二钠的摩尔比优选为约1:3.44。

所述制造可药用胰岛素预混制剂的方法的非限制性实例优选地可以包括根据本领域中已知的方法进行的用于药物制品的无菌制造和容器装填和密封技术，包括但不限于将水性溶液通过滤器。

所述制造可药用胰岛素预混制剂的方法的非限制性实例优选地可以排除添加任何锌。

所述制造可药用胰岛素预混制剂的方法的非限制性实例优选地可以排除添加任何防腐剂，例如苯酚、甲酚、间甲酚、对羟基苯甲酸酯或任何其他添加的防腐剂。

所述制造可药用胰岛素预混制剂的方法的非限制性实例优选地可以排除添加任何表面活性剂。

所述制造可药用胰岛素预混制剂的方法的非限制性实例优选地排除添加任何甘油/丙三醇。

所述制造可药用胰岛素预混制剂的方法的非限制性实例优选地排除添加锌、添加任何防腐剂、添加任何表面活性剂或添加甘油。此外，本申请人发现，本文所公开的可药用胰岛素预混制剂出人意料地在约5℃储存24个月然后在约25℃储存30天(并且基本上不暴露于光)后稳定，即使在没有任何添加的锌、任何添加的防腐剂、任何添加的甘油或任何添加的表面活性剂的情况下。相反，目前市场上可商购的浓缩胰岛素产品含有添加的锌、防腐剂(例如间甲酚)和甘油。例如，一种浓缩胰岛素商业产品具有量为21μg/mL的锌、量为3mg/mL的间甲酚(防腐剂)和量为16mg/mL的甘油。

所述制造可药用胰岛素预混制剂的方法的非限制性实例优选地使用盐酸(HCl)作为调节所述水性溶液的pH值的酸。

所述制造可药用胰岛素预混制剂的方法的非限制性实例优选地使用磷酸二氢钠作为调节所述水性溶液的pH值的酸性缓冲剂。

在一个实施方式中，所述制造可药用胰岛素预混制剂的方法使用磷酸二氢钠作为酸性缓冲剂，在添加胰岛素之前将所述水性溶液的pH调整到约2.0-5.0，如图3中所示。本申请人发现，图3中所示方法中的不同成分的添加和混合顺序可以减少混合时间，确保胰岛素的完全和快速溶解，最小化使用NaOH和/或HCl的pH调整，并减少杂质例如脱酰胺胰岛素的形成，同时对胰岛素的稳定性没有负面影响。在酸性水性溶液中胰岛素具有更高溶解度并且溶解更快。此外，胰岛素在pH碱性的水性溶液中不稳定。因此，优选地首先调节所述水性溶液以将所述溶液的pH值降低到约2.0-5.0并因此确保胰岛素的完全和快速溶解。因此，本文中公开的添加和混合顺序可以减少混合时间，确保胰岛素的稳定性，并减少杂质的形成。

在图3中所示的制造可药用胰岛素预混制剂的方法中，这些步骤的至少一部分可以任选地在约2-8℃、例如大约5℃下进行，或者另外地或可选地在环境条件，即约25℃的温度和约1.0atm的压力下进行。优选地，对于一些或所有混合步骤来说，混合使用恒定的低速搅拌进行，以将发泡降至最低。优选地，在添加下一种成分之前将每种成分混合直至完全均匀。

此外，就此而言，低速搅拌与上文公开的指定混合顺序一起，将混合期间的泡沫形成降至最低，从而防止胰岛素被截留在泡沫中，因此提高了所述胰岛素预混制剂中胰岛素浓度的准确度。

所述制造可药用胰岛素预混制剂的方法的非限制性实例优选地还包括将所述胰岛素预混制剂储存在容器中，例如在约5℃的温度下储存长达约24个月的时间段，然后在约25℃下储存长达约30天的时间段。所述储存温度优选地不低于0℃。在储存时胰岛素优选地避免暴露于光。本文公开的胰岛素预混制剂可以基本上不被这种储存改变(例如外观、颜色、pH、胰岛素浓度和/或杂质)。因此，通过本文公开的方法制备的可药用胰岛素预混制剂当无菌装填在容器中时，具有在约2-8℃下约24个月然后在约25℃下约30天的保质期。所述容器可以是玻璃容器或柔性容器例如塑料瓶或袋。

本公开的另一方面是一种可药用胰岛素预混产品，其包含约0.1-10.0U/mL的胰岛素。

所述可药用胰岛素预混产品的非限制性实例包含上文中所公开和制备的可药用胰岛素预混制剂和柔性容器组件，其中所述胰岛素预混制剂被无菌装填在所述柔性容器组件中。

所述柔性容器组件的非限制性实例可以包含柔性容器和任选的一个或多个端口组件。

所述柔性容器的非限制性实例可以具有约1.0mL-1000.0mL、优选地约10.0-500mL、更优选地约50.0-300.0mL、最优选地约100.0mL的容积。所述柔性容器可以是柔性塑料容器。所述柔性容器具有接触所述胰岛素预混制剂的内表面，其中所述内表面优选地由塑性材料或塑性材料层制成。所述塑性材料优选地选自聚乙烯(PE)、直链低密度聚乙烯(LLDPE)、聚氯乙烯(PVC)、聚丙烯(PP)、共聚物和修饰的聚合物或共聚物。例如，所述柔性容器的内表面可以是PE。在一个实施方式中，所述柔性容器是100ml

本公开的另一方面是一种可药用胰岛素预混产品，其包含在柔性容器组件中的可药用胰岛素预混制剂，其中所述可药用胰岛素预混制剂在上文中公开和制备。

所述可药用胰岛素预混产品的非限制性实例可以在柔性容器组件中包含约0.1-10.0U/mL、优选地约0.5-5.0U/mL、更优选地约0.5-2.0U/mL、最优选地约1.0U/mL的胰岛素。

所述可药用胰岛素预混产品的非限制性实例优选地还包含至少一种渗涨度调节剂。

所述可药用胰岛素预混产品的非限制性实例优选地还包含至少一种缓冲剂。

所述可药用胰岛素预混产品的非限制性实例优选地具有约6.5-7.2、优选地6.6-7.0、更优选地约6.8的pH值。

所述可药用胰岛素预混产品的非限制性实例在新鲜制备时和产品的保质期期间，优选地具有以总胰岛素的重量计低于约8.0％、更优选地低于约5.0％、最优选地低于约4.0％的A-21脱酰胺胰岛素杂质。在新鲜制备时，所述胰岛素预混产品中的A-21脱酰胺胰岛素杂质以总胰岛素的重量计优选地低于约4.0％，更优选地低于约3.0％，最优选地低于约2.5％或甚至低于约2.0％。本文所公开的A-21脱酰胺胰岛素杂质的含量使用适合的反相HPLC方法测量，例如在USP胰岛素专论中提供的方法，其被调整以适用于低浓度制剂。

优选地，本文所公开和制备的可药用胰岛素预混产品基本上不含任何添加的锌、任何添加的防腐剂或任何添加的表面活性剂，并且可以具有改进的稳定性和低浓度的杂质。

在某些实施方式中，所述柔性容器组件可以包含柔性容器以及优选和任选的一个或多个端口组件。

在某些实施方式中，所述柔性容器可以具有约1.0-1000.0ml、优选地约10.0-500.0ml、50.0-300.0ml、更优选地约100.0ml的容积。所述柔性容器可以具有接触所述胰岛素预混溶液的内表面层，其中所述内表面层由塑性材料包括PE、LLDPE、PVC、PP、共聚物和修饰的聚合物或共聚物制成。例如，所述柔性容器是具有PE内表面的100ml

优选地，本文所公开和制备的可药用胰岛素预混产品中的胰岛素不吸附或吸收到上文中公开的柔性容器。正如在文献中公知的，胰岛素倾向于结合到容器，包括玻璃容器和特别是柔性塑料容器，例如聚乙烯(PE)和聚氯乙烯(PVC)容器。当将含有胰岛素的溶液放置在塑料容器中时，据报道结合到塑料的分数在约5％至约80％的范围内。然而，本申请人发现，本文所公开和制备的可药用胰岛素预混产品中的胰岛素出人意料地不吸附或吸收到任何所测试的常用柔性容器，包括PE和PVC容器。所测试的适合的柔性容器的非限制性实例的特征示出在图2中。

本公开的另一方面是一种制造可药用胰岛素预混产品的方法。所述方法包括：1)将胰岛素添加到水并混合直至均匀，以形成胰岛素浓度为约0.1-10.0U/mL的水性溶液；2)将所述水性溶液的pH调整到约6.5-7.2；3)将柔性容器组件灭菌；和4)将所述水性溶液无菌装填到柔性容器组件。

所述制造可药用胰岛素预混产品的方法的非限制性实例可以包括：1)如上在制备上文中所公开的可药用胰岛素预混制剂的方法中所公开的所有步骤；2)将柔性容器组件灭菌；和3)将如上所公开和制备的可药用胰岛素预混制剂无菌装填在灭菌的柔性容器组件中。

所述柔性容器组件的非限制性实例可以包括柔性容器。在一个实施方式中，所述柔性容器组件还可以包含至少一个端口组件。

所述柔性容器的非限制性实例可以是具有与胰岛素溶液接触的内表面的柔性塑料容器，其中所述内表面可以由塑性材料或塑性材料层制成。用于与胰岛素溶液接触的内表面的优选塑性材料包括聚乙烯(PE)、直链低密度聚乙烯(LLDPE)、聚氯乙烯(PVC)、聚丙烯(PP)、共聚物和修饰的聚合物或共聚物。例如，所述柔性容器的内表面可以由柔性PE或LLDPE制成。常用柔性容器的内表面的非限制性实例的特征描述在图2中。

在一个实施方式中，所述柔性容器是旨在用于静脉内药物输注的100ml

在另一个实施方式中，本申请人发现，本文所公开的胰岛素预混制剂出人意料地不吸附或吸收到所述柔性容器的内表面，不论测试的柔性容器的类型如何，以及是否添加氨基酸例如精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、牺牲性蛋白质例如白蛋白或钾盐例如KCl。因此，本文所公开的胰岛素预混制剂可以显著减少由胰岛素吸附或吸收到柔性容器造成的胰岛素损失，并因此减少在医院中将胰岛素给药到需要的患者时的医疗错误。

在另一个实施方式中，当储存在柔性容器中时，所述可药用胰岛素制剂的胰岛素损失以总胰岛素的重量计少于约8.0％，优选地少于约7.0％，更优选地少于约6.0％，最优选地少于约5.0％，或甚至少于约4.0％、少于约3.0％或少于约2.0％，其中胰岛素损失由胰岛素吸附或吸收到所述柔性容器和胰岛素降解的组合造成，并且所述储存条件是在2℃至8℃的冷藏温度下1个月、3个月、6个月、12个月或24个月。

在另一个实施方式中，当储存在柔性容器中时，所述可药用胰岛素制剂的胰岛素损失以总胰岛素的重量计少于约8.0％，优选地少于约7.0％，更优选地少于约6.0％，最优选地少于约5.0％，或甚至少于约4.0％，其中胰岛素损失由胰岛素吸附或吸收到所述柔性容器和胰岛素降解的组合造成，并且所述储存条件是在2℃至8℃的冷藏温度下24个月，然后在23℃至27℃的室温下1个月。

在又一个实施方式中，当储存在柔性容器中时，所述可药用胰岛素制剂的胰岛素损失以总胰岛素的重量计少于约5.0％，优选地少于约4.0％，更优选地少于约3.0％，最优选地少于约2.0％，或甚至少于约1.0％，其中胰岛素损失由胰岛素吸附或吸收到所述柔性容器和胰岛素降解的组合造成，并且所述储存条件是在2℃至8℃的冷藏温度下1个月、3个月、6个月和12个月。

在又一个实施方式中，当储存在柔性容器中时，所述可药用胰岛素制剂的胰岛素基本上不吸附或吸收到所述柔性容器。

在又一个实施方式中，当储存在柔性容器中时，所述可药用胰岛素制剂的胰岛素损失以总胰岛素的重量计少于约8.0％，优选地少于约7.0％，更优选地少于约6.0％，最优选地少于约5.0％，或甚至少于约4.0％、少于约3.0％、少于约2.0％或少于约1.0％，其中胰岛素损失仅由胰岛素吸附或吸收到所述柔性容器造成，并且所述储存条件是在2℃至8℃的冷藏温度下1个月、3个月、6个月、12个月或24个月。

在另一个实施方式中，当储存在柔性容器中时，所述可药用胰岛素制剂的胰岛素损失以总胰岛素的重量计少于约8.0％，优选地少于约7.0％，更优选地少于约6.0％，最优选地少于约5.0％，或甚至少于约4.0％、少于约3.0％或少于约2.0％，其中胰岛素损失仅由胰岛素吸附或吸收到所述柔性容器造成，并且所述储存条件是在2℃至8℃的冷藏温度下24个月，然后在23℃至27℃的室温下1个月。

在本公开中，在不同储存条件和时间段下胰岛素吸收和/或吸附到所述柔性容器的百分率通过下述步骤计算：1)在制造之后但在装填到柔性容器中之前测量生产罐中的胰岛素预混制剂的胰岛素浓度(放罐胰岛素浓度)；2)测量在不同储存条件和时间段下柔性容器中的胰岛素浓度；3)测量在不同储存条件和时间段下柔性容器中的A-21脱酰胺杂质的浓度和其他胰岛素相关物质的浓度；4)用所述放罐胰岛素浓度减去在不同储存条件和时间段下柔性容器中的胰岛素、A-21杂质和其他胰岛素相关物质的浓度，以得到吸附和/或吸收到所述柔性容器的胰岛素浓度；以及5)用所述在不同储存条件和时间段下吸附和/或吸收到柔性容器的胰岛素浓度除以所述放罐胰岛素浓度。

本公开的另一方面是一种在重症监护室(ICU)中的个体中控制血糖的方法，所述个体在入住ICU之前具有或不具有糖尿病病史。所述方法包括向所述个体给药有效量的可药用胰岛素预混产品，其中所述可药用胰岛素预混产品如上所公开和制备。所述个体可以是有需要的哺乳动物，优选为人类，包括成人和儿童。

所述给药有效量的可药用胰岛素预混产品的方法的非限制性实例可以包括肠胃外给药。

肠胃外给药的非限制性实例优选地可以包括静脉内给药，例如IV注射和IV输注。

优选地，所述静脉内给药是在室温例如约25℃下的IV输注。

本公开的另一方面是一种治疗患有代谢障碍的个体的方法，所述方法包括向所述个体给药有效量的可药用胰岛素预混产品，其中所述可药用胰岛素预混产品如上所公开和制备。代谢障碍的非限制性实例优选地可以包括糖尿病，例如I型和II型糖尿病。

所述有效量的可药用胰岛素预混产品的给药的非限制性实例可以包括肠胃外给药。

肠胃外给药的非限制性实例优选地可以包括静脉内给药，例如IV注射和IV输注。

优选地，所述静脉内给药是在室温例如约25℃下的IV输注。

优选地，所述静脉内给药是在医学监督下用于在危重病看护病房的个体中进行血糖控制或用于患有代谢障碍包括糖尿病的个体的治疗，其中监测血糖和钾浓度以避免低血糖和低血钾。

优选地，所述胰岛素预混制剂或产品的静脉内(IV)给药还包括在所述IV给药之前用约50.0-5000.0ml本文所公开和制备的可药用胰岛素预混制剂冲洗IV给药套件和/或塑料管路的步骤。所述冲洗步骤是为了最小化由胰岛素在所述IV给药套件和/或塑料管路上的吸附或吸收造成的胰岛素损失。

实施例

下面的非限制性实例支持了将所述可药用胰岛素预混制剂或产品用于对ICU中的个体进行血糖控制或用于患有代谢障碍包括I型和II型糖尿病的个体的治疗这一概念。

实施例1

一项研究调查了缓冲液和储存条件对不同胰岛素预混制剂的稳定性的影响。重组人胰岛素通过微生物合成方法制造。将测试品和对照品在约5℃和约25℃两种温度下储存长达25.5个月(110周)，并在约40℃下储存长达24周。

样品按照图3中示出的方法制备，对于8.0升的每个1.0U/mL胰岛素批料来说采用下述混合程序：(1)在玻璃烧杯中装入大约6.4升(80％容量)蒸馏水；(2)添加0.3g重组人胰岛素并出现浑浊；(3)逐渐添加0.1N HCl并调整到约3.0的pH，缓慢搅拌直至胰岛素完全溶解；(4)逐滴添加0.1N NaOH，以调整到约7.4的pH；(5)添加剩余的赋形剂并搅拌直至溶解；和(6)添加蒸馏水至8.0L。

将所述制备的样品以约7.4(目标)的pH无菌装填到压热灭菌的50ML安瓿中。用于所述研究的所有对照品每升具有9.0g NaCl和0.037g重组人胰岛素(27.1U/mg)、根据需要用于调整pH的NaOH和HCl以及分别的下述成分。

1.样品ID：玻璃-PBS-2mM，每升具有如下所示的配方：

Na

2.样品ID：玻璃-精氨酸-2mM，每升具有如下所示的配方：

L-精氨酸＝0.35g(最终溶液中2mM精氨酸)

3.样品ID：玻璃-PBS-2mM-(KCl-4mM)，每升具有如下所示的配方：

KCl＝0.30g；Na

将用于所述研究的测试品以目标pH 7.4无菌装填到100ml

1.样品ID：PL2501-PBS-2mM。每升配方与样品ID玻璃-PBS-2mM相同。

2.样品ID：PL2501-精氨酸-2mM。每升配方与样品ID玻璃-精氨酸-2mM相同。

3.样品ID：PL2501-PBS-2mM-(KCl-4mM)。每升配方与样品ID玻璃-PBS-2mM-(KCl-4mM)相同。

测试结果被记录并示出在图4-6和图7A-9B中。图7A和7B是分成两个部分的一张图，并且图7B是图7A的后续部分，其中图7A和7B显示了在玻璃安瓿中与在PL2501

测试结果包括在5±3℃和25±2℃的储存温度下长达约25.5个月(110周)内，通过本领域中已知的适合的标准方法分析的胰岛素浓度、相关物质、高分子量蛋白(HMWP)、仪器颗粒物，以及在40±2℃下储存长达24周的结果。

所述实验数据证实，在本研究中测试的包括磷酸盐(PBS)制剂(参见图4和图7A和7B)、精氨酸制剂(图5和图8A和8B)以及PBS和KCl制剂(参见图6和图9A和9B)在内的所有具有1.0单位/mL的胰岛素预混制剂，当在PL 2501

USP 34/NF 29规定，适用于胰岛素人体注射液的限度是以每mL中的US胰岛素人体单位计95.0％至105.0％的效价。在USP限度中，高分子量蛋白(HMWP)以总胰岛素的重量计不超过1.7％，而所有三种制剂在PL 2501

实施例2

一项研究调查了pH对浓度为1.0单位/mL的胰岛素制剂在标称储存(约5℃)和加速储存(约25℃)后的稳定性的影响。在本研究中使用的胰岛素是在结构上与常规人胰岛素一致的多肽激素，并利用巴斯德毕赤酵母(酵母菌)作为生产生物体通过重组DNA技术制造。

用于本研究的设计的配方如下所示：1.0U/mL胰岛素；0.9％NaCl；2.1mM磷酸二氢钠；2.9mM磷酸氢二钠；和满足列出的成分的浓度要求的水。样品制备遵照本说明书的图3中示出的方法，包括下述混合程序：1)装填玻璃烧杯至最终批料体积的90％；2)添加NaCl并混合直至溶解，以形成以总制剂的重量计0.9％的盐溶液；3)添加2.1mM磷酸二氢钠并混合直至溶解；4)添加量为1.0U/mL的胰岛素并混合直至溶解；5)添加量为2.9mM的磷酸氢二钠并混合直至溶解；和6)根据需要用NaOH和/或HCl调整pH。

所述测试品由分别在四种设计pH值6.5、6.8、7.0和7.2(样品的实测pH为6.44、6.79、6.97和7.22)下的胰岛素注射液产品的单元构成。对照品是直接从混合罐取出并储存在玻璃容器中的样品和储存在玻璃安瓿中的过滤溶液的样品两者。测试品(在

将测试品在标称产品储存条件(约5℃)以及为了提供加速稳定性数据在高温条件(约25℃)下长期储存。按照测试时间表定期从长期储存中取出测试品单元的平行样并测试。对照溶液直接从混合罐取出。

测试结果呈现在图10-13(在约25℃下加速储存)和图14-17(在约5℃下标称储存)中。

因此，实验结果证实，得到的具有约6.5-7.2的pH的胰岛素预混制剂在新鲜制备时以及在约5℃储存长达24个月期间出人意料地稳定，并且令人吃惊的是甚至在约25℃储存30天或甚至长达2个月期间稳定。在新鲜制备时、在约5℃储存24个月时和在约25℃储存2个月时，所有测试样品均满足低于总胰岛素的4.0重量％的A-21脱酰胺胰岛素杂质要求。因此，实验结果清楚地证实，在本研究中制备的具有6.5-7.2的pH的胰岛素预混制剂在约5℃储存24个月后均稳定。此外，在本研究中制备的具有6.5-7.2的pH的胰岛素预混制剂在约25℃储存30天和甚至长达2个月后均稳定。

实施例3

进行了一项研究以调查将胰岛素添加到混合罐以制备胰岛素预混制剂的不同手段。考虑了下述实验因素：1)胰岛素在具有不同pH值的0.9重量％NaCl水性溶液中的溶解度；2)泡沫产生和消散，因为它与胰岛素浓度相关；3)胰岛素添加，因为它与泡沫产生相关；和4)将胰岛素作为固体或含有未溶解胰岛素的浆液直接添加到混合罐中而不完全预先溶解胰岛素的可行性。

用于本研究的胰岛素是使用巴斯德毕赤酵母(酵母菌)作为生产生物体制造的重组人胰岛素。本申请人发现，在泡沫出现时和在使用不同混合顺序时，分批罐中可能存在潜在的均匀性问题。本研究评估了可以被执行以潜在地减轻溶解问题，以减少混合时间并提高得到的产品的稳定性的不同胰岛素添加程序。

向含有0.9重量％NaCl和0.32g/L磷酸氢二钠的水性溶液(pH碱性溶液)添加7.7g胰岛素药物，如果添加的胰岛素完全溶解，总理论计算浓度为700U/mL。在添加并混合后，存在大量未溶解的胰岛素，实际胰岛素浓度未测试。同样地，为获得700U/mL的总理论计算浓度，向所述水性溶液添加7.7g胰岛素药物，但同时添加量为0.01N的HCl。在添加后，将上清液过滤并分析胰岛素浓度，以确定胰岛素在pH酸性溶液中的溶解度限度。这组实验产生胰岛素浆液(碱性pH条件)和胰岛素浓缩液(酸性pH条件)，对它们作为潜在胰岛素添加介质的用途进行检查。

实验结果证实，胰岛素在0.01N盐酸中的溶解度限度为约637U/mL，这指示了在酸性条件下制备的胰岛素浓缩液的最高浓度。胰岛素在水(中性pH条件)或磷酸氢二钠(碱性pH条件)中的溶解度未测量，但目测远低于在0.01N HCl溶液中的溶解度。从所述实验结果清楚地看出，胰岛素在酸性溶液中溶解快得多，并且将胰岛素作为低于溶解度限度的浓缩液或作为含有未溶解胰岛素的浆液添加到批料是可行的。因此，对于制造最终胰岛素预混产品的方法，在添加粉末形式的胰岛素之前选择将水性溶液的pH调整到约2.0-5.0的步骤，以便将胰岛素快速溶解在所述溶液中，因此减少混合时间并实现产品的一致性。

测试溶液是在约5℃下储存的3000mL胰岛素制剂测试溶液。将所述测试溶液从容器内的不同位置取样6次用于胰岛素浓度测试，此时不存在泡沫。然后将同样的测试溶液用顶置式混合机以600rpm混合5分钟以产生泡沫，然后如上所述取样用于胰岛素浓度测试。将同样的测试溶液再次以600rpm混合另外5分钟以产生更多泡沫，然后如上所述取样用于胰岛素浓度测试。

在下述条件下获得所述测试溶液的三个200mL部分并分析每个部分的胰岛素浓度和相关物质：1)无泡沫；2)在泡沫产生(600rpm 5分钟)后立即；和3)在产生的泡沫(600rpm5分钟)完全消散后。

测试结果示出在图18-19中。当在胰岛素制剂中产生泡沫时，一部分胰岛素被截留在泡沫中。从无泡沫条件到有泡沫条件，胰岛素浓度的差异仅为约-1％(图18-19)。当产生更多泡沫时，所述差异约为-4％。当在胰岛素制剂中产生泡沫时，尽管测量到的胰岛素少约2％(图19)，但胰岛素层析图(脱酰胺的百分率)没有可察觉的变化。当泡沫平息时，胰岛素浓度似乎返回到初始(无泡沫)值。

所述实验结果证实，作为胰岛素制剂中泡沫产生的结果，实测胰岛素浓度降低，而对所述制剂的层析图没有影响。在泡沫产生完全平息后，实测胰岛素浓度返回到初始值。然而，等待泡沫平息对制造过程来说将花费较长时间，因此是不太理想的。

正如上文提到的，将胰岛素作为固体、含有未溶解胰岛素的浆液或含有完全溶解的胰岛素的浓缩液添加到批料都是可行的。理想情况下，在添加胰岛素之前首先将水性溶液的pH调整到约2.0-5.0，以确保胰岛素更快溶解。混合顺序对于胰岛素在水性溶液中的快速溶解和泡沫减少来说是重要的。在添加胰岛素之前将水性溶液的pH调整到约2.0-5.0将所述过程中的泡沫形成降至最低，减少了总混合时间，并进一步确保最终产品的胰岛素浓度的一致性。此外，使用低速混合对于最小化混合过程中的泡沫形成是有利的。

实施例4

进行了一项研究以调查胰岛素在不同类型的适合于IV输注的柔性容器上的吸收/吸附。本研究进一步确定了pH和不同赋形剂(精氨酸、甘氨酸、赖氨酸和人血清白蛋白)的添加对胰岛素吸收/吸附到不同类型的柔性容器的影响。

将胰岛素制剂(1.0单位/mL)装填到各种不同类型的柔性容器和玻璃安瓿中，以评估在目测检查、pH值、胰岛素浓度和杂质方面的变化。本研究进一步评估了在不同pH值下不同赋形剂对胰岛素吸附或吸收到柔性容器的影响。

本研究中的对照品是装填到玻璃安瓿中的预混胰岛素制剂。生产了大约5-10个安瓿的每种制剂。测试品是装填到不同类型的100ml柔性袋中的胰岛素预混制剂。测试的不同袋类型的描述示出在图2中。

按照图3中示出的混合程序制备了1.0U/mL胰岛素预混注射液的制剂样品，其中掺有或未掺有1.0mg/mL人白蛋白。在将胰岛素预混制剂装填到柔性容器后一周之内，测量不同塑料容器中的胰岛素浓度。进行的所有测试的实验结果概述在图20-22中。

正如在文献中公知的，胰岛素倾向于结合到容器，包括玻璃器皿容器和特别是柔性塑料容器，例如聚乙烯(PE)和聚氯乙烯(PVC)容器。当将含有胰岛素的溶液置于塑料容器中时，结合到塑料的分数据报道在约5％至约80％的范围内。

然而，本申请人令人吃惊地发现，本文中公开和制备的任一可药用胰岛素预混制剂或产品中的胰岛素出人意料地不吸附或吸收到适合于IV输注的常用柔性容器，包括PE和PVC容器。测试的柔性容器的特征示出在图2中。接触胰岛素溶液的内表面的塑性材料包括PE、LLDPE、PVC、PP、共聚物和修饰的聚合物或共聚物。所述实验结果证实，本文中公开和制备的任一可药用胰岛素预混制剂或产品中的胰岛素出人意料地不吸附或吸收到所述柔性容器，不论所测试的接触胰岛素的内表面的塑性材料的类型如何。

实施例5

进行了一项研究以调查成分的添加和混合顺序对胰岛素预混制剂中胰岛素的溶解度和胰岛素的稳定性的影响。将图3中详述的制造方法用于本研究。

所述制剂含有以总制剂计约1.0U/mL的胰岛素，以总制剂的重量计0.9％的氯化钠，和以总制剂计总量为5.0mM的磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的组合，并根据需要添加氢氧化钠(NaOH)和盐酸(HCl)以调整所述制剂的pH值，添加水以满足所列成分的浓度要求。测试的磷酸二氢钠与磷酸氢二钠的摩尔比分别是2.1:2.9、2.2:2.8、2.3:2.7、2.4:2.6、2.5:2.5和2.6:2.4。

用于本研究的测试品是胰岛素在添加有各种不同摩尔比的磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的正常盐水中的溶液。这些测试品使用如下所述的几种添加顺序一式三份制备：

1.对于18份制剂中的每一者来说，在适合的容器中各装入450mL水(终体积的约90％)。

2.添加NaCl并混合至溶解(对于18份制剂中的每一者来说，500mL溶液的目标量＝4.5g)。记录pH。这些溶液的pH在5.54–5.94的范围内。

3.以2.1:2.9、2.2:2.8、2.3:2.7、2.4:2.6、2.5:2.5和2.6:2.4的摩尔比添加磷酸二氢钠(单水合物)和磷酸氢二钠(无水)。将溶液混合至溶解并记录pH。所有溶液的pH值在约6.61至约6.78的范围内，如图26中所示。

4.添加胰岛素(对于每个制剂来说500mL溶液的目标量＝18.74mg)并将溶液混合。

使用目测检查来确定胰岛素是否溶解。30分钟后，胰岛素尚未溶解，则溶液制备被终止。

1.在适合的容器中装入450mL水(终体积的约90％(对于3份制剂中的每一者来说目标终体积＝500mL))。

2.添加NaCl并混合至溶解(对于3份制剂中的每一者来说，500mL溶液的目标量＝4.5g)。这些溶液的pH为5.16–5.75。

3.添加胰岛素(500mL溶液的目标量＝18.74mg)并混合至溶解。

使用目测检查来确定胰岛素是否溶解。30分钟后，胰岛素尚未溶解，则溶液制备被终止。

1.在适合的容器中装入450mL水(终体积的约90％(对于3份制剂中的每一者来说目标终体积＝500mL))。

2.添加NaCl并将溶液混合至溶解(对于3份制剂中的每一者来说，500mL溶液的目标量＝4.5g)。

3.向每份溶液添加磷酸二氢钠(单水合物)(对于3份制剂中的每一者来说，500mL溶液的目标量＝172.5mg)并混合至溶解。测量并记录pH，其是约4.76–4.78。

4.添加胰岛素(500mL溶液的目标量＝18.74mg)并混合至溶解。使用目测检查来确定胰岛素是否溶解。25分钟后，胰岛素已经溶解。

5.向所述溶液添加磷酸氢二钠(无水)(对于3份制剂中的每一者来说，500mL溶液的目标量＝177.5mg)。将它们混合至溶解并测量pH。这些溶液的pH经测量为约6.62–6.65。

6.向所述溶液添加水至100％体积(500mL)并测量pH。最终pH为6.65–6.66。

1.在适合的容器中装入450mL水(终体积的约90％(对于3份制剂中的每一者来说目标终体积＝500mL))。

2.添加NaCl并将溶液混合至溶解(对于3份制剂中的每一者来说，500mL溶液的目标量＝4.5g)。pH为6.16–6.28。

3.向每份溶液添加磷酸氢二钠(无水)(对于3份制剂中的每一者来说，500mL溶液的目标量＝177.5mg)并混合至溶解。pH为8.31–8.51。

4.添加胰岛素(500mL溶液的目标量＝18.74mg)并混合至溶解。使用目测检查来确定胰岛素是否溶解。10分钟后，胰岛素已经溶解。

5.向每份溶液添加磷酸二氢钠单水合物(对于3份制剂中的每一者来说，500mL溶液的目标量＝172.5mg)并混合至溶解。pH为6.61–6.63。

6.向所述溶液添加水至100％体积(500mL)并测量pH。最终pH为6.64–6.65。

所述实验数据证实，在室温(约25℃)下，胰岛素可以在30分钟内溶解在pH低于约5.0或pH约为8.31–8.51的水性溶液中。然而，胰岛素在pH碱性溶液中不稳定，因此使用酸性溶液溶解胰岛素是优选的路线。成分的添加顺序影响混合时间和使用NaOH或HCl调整pH(到约6.5-7.2的pH范围内)的必要性。对于测试品#3来说，最终产品的pH约为6.65-6.66，其在提供稳定制剂的6.5-7.2的pH范围内，因此对使用NaOH或HCl调整pH的需要降至最低。

在本研究中收集的数据的基础上，示例性制剂的优选混合顺序如下：1)将罐用水装填至最终批料体积的90％；2)添加氯化钠并混合至溶解；3)添加磷酸二氢钠并混合至溶解；4)添加胰岛素并混合至溶解；5)添加磷酸氢二钠并混合至溶解；6)测试pH，并且如果需要的话使用NaOH/HCl调整pH至约6.5-7.2；和7)添加水至最终批料体积的100％并混合直至均匀。

为了在调整最少的情况下实现接近6.5-7.2的优选pH范围的中心或6.8的pH，使用的磷酸二氢钠(单水合物)与磷酸氢二钠(无水)的优选摩尔比是2.1:2.9。这个比例等于0.290:0.412(mg/mL)的磷酸二氢钠：磷酸氢二钠。优选地在添加胰岛素之前添加磷酸二氢钠(而不是磷酸氢二钠)，以使胰岛素溶液的pH保持等于或低于所述优选pH范围。胰岛素溶液在pH碱性介质中不稳定，因此使用酸性溶液溶解胰岛素是优选的路线。

进行了进一步研究以评估在添加胰岛素之前使用HCl调整水性溶液的pH值的影响。

用于本研究的测试品是胰岛素在添加有各种不同摩尔比的磷酸二氢钠单水合物和无水磷酸氢二钠的pH～3(3.0±0.3)的正常盐水中的溶液。用于本研究的对照品是胰岛素在未添加任何磷酸盐的正常盐水中的溶液。

制备胰岛素在正常盐水中的pH～3(3.0±0.3)的储用溶液并等分成较小的部分。向所述等分试样以各种不同比率添加磷酸二氢钠和磷酸氢二钠，以获得测试品。混合过程如下所述：1)将适合的容器用水装填至终体积的约90％(对于3份制剂中的每一者来说，450mL被用作所述90％)；2)添加NaCl并混合至溶解(对于3份制剂中的每一者来说，500mL溶液的目标量＝4.5g)；3)使用0.1N HCl将pH调整到～3(3.0±0.3)；4)添加胰岛素并混合直至溶解(对于3份制剂中的每一者来说，500mL溶液的目标量＝18.8mg)；5)添加水至100％体积并混合直至均匀；6)将溶液等分成5份(对于3份制剂中的每一者来说，目标为各100mL；总共有15份等分试样)。磷酸盐按照图27添加。

测量作为测试品和对照品制备的溶液的pH。pH测量结果提供在图27中。为每种测试品和对照品计算与6.8的目标pH值的平均差异(n＝3)。所述差异提供在图27中。

在本研究的结果的基础上，预测1.175:3.825mmol/L的磷酸二氢钠：磷酸氢二钠的摩尔比是用于需要6.8的目标pH的将来胰岛素研究的适合比例。就磷酸盐的mg/mL而言，该比例是每mL溶液0.162mg磷酸二氢钠和0.543mg磷酸氢二钠。这个比例可以在胰岛素作为酸性浓缩液添加的情况下使用。

实施例6

在本实施例中，将来自于两项独立研究的数据合并，以演示一种优选制剂是如何被发现的。第一项研究是实验设计(DOE)研究。DOE方法被用于同时检查多种变量的影响，以便可以建立关于所研究的制剂的“知识空间”。一旦“知识空间”已被确定，就可以使用预测建模来提出将继续进一步研究的优化制剂。对于DOE研究来说，pH在6.5–9之间变化，氨基酸稳定剂在0–10mM之间变化。磷酸盐缓冲液强度保持恒定在5mM，并且NaCl浓度保持恒定在0.9％。使用的氨基酸稳定剂是甘氨酸、赖氨酸和精氨酸。制备了25种不同制剂，并研究了它们在各种不同温度下的降解行为，以便建立制剂行为的预测模型。

在本实施例中进一步描述从25℃数据产生的模型。对数据进行分析以优化测定(胰岛素浓度)随时间的下降和A-21脱酰胺杂质的形成两者。一旦模型已被建立，就可以进行网格搜索以定位预测对于这些参数中的每一者来说产生最稳定制剂的参数。对测定损失的网格搜索结果示出在图28中。对A-21脱酰胺杂质形成的最小化的网格搜索结果示出在图29中。还为该模型产生了组合响应表面，如图30和图31中所示。总的来说，这项研究表明最佳目标pH将在6.5–6.9左右，其中pH 6.8对于减少A-21脱酰胺杂质的形成来说是优选的。本文所公开的A-21胰岛素杂质的含量通过反相HPLC测量。

本实施例中的第二项研究是传统的长期制剂可行性研究。在这项研究中测试几种不同制剂，以帮助确定所述制剂中的最适pH、磷酸盐水平和精氨酸水平。pH范围为7.0–7.8，精氨酸水平范围为0–5mM，磷酸盐水平为2或5mM。这项研究与上述DOE研究平行进行，因此理想pH范围的结果尚未知道。在

在约5℃下直至23个月的时间段收集的实验数据显示，当在约5℃下在

在约25℃下直至6个月的时间段收集的实验数据显示，当在约25℃下储存超过3个月时，那些样品已有降解。图35-37中的实验结果清楚地表明，具有7.0的pH的制剂在约25℃下6个月的储存时间内显示出更好的稳定性。例如，与分别具有7.4和7.8的pH的制剂相比，具有7.0的pH的制剂具有少得多的HMWP，更少的蛋白质片段化以及更少的总相关物质。

在约5℃或约25℃的温度下，在

因此，所述实验数据表明，就缺少蛋白质吸附、聚集和降解而言，所述胰岛素制剂与

此外，图38-39中的实验数据表明，在本研究中使用的范围内，精氨酸水平对胰岛素预混制剂的稳定性没有有意义的影响。基于这项研究的结果，精氨酸赋形剂不显著提高制剂稳定性。因此，精氨酸对于这些制剂的稳定化来说似乎不是必需的。

实施例7

进行了一项研究以调查胰岛素预混制剂在2℃至8℃的冷藏温度下储存24个月然后在23℃至27℃的室温下储存30天后的长期稳定性。

所述制剂含有以总制剂计约1.0U/mL的胰岛素，总制剂的约0.9重量％的氯化钠，摩尔比为2.1:2.9且总量为约5.0mM的磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的组合，以及将制剂的pH值调整到约6.8所需的氢氧化钠和/或盐酸。制造了总共3个不同批次的生产样品，并在不同的储存条件和时间段下测试。

如本说明书的图3中所示的制备方法包括下述混合程序：1)将罐装填至最终批料体积的90％；2)添加NaCl并混合直至溶解，以形成以总制剂的重量计0.9％的盐溶液；3)添加2.1mM磷酸二氢钠并混合直至溶解；4)以1.0U/mL的量添加胰岛素并混合直至溶解；5)以2.9mM的量添加磷酸氢二钠并混合直至溶解；6)根据需要使用NaOH和/或HCl调整pH，以形成胰岛素预混制剂；和7)添加水至最终批料体积并混合直至均匀，以形成所述胰岛素预混制剂。

总测试时间段包括在2℃至8℃的冷藏温度下储存24个月然后在23℃至27℃的室温下储存30天。在所述储存期间的不同时间间隔从所述储存取样用于测试。原始样品(对照)、在2℃至8℃储存24个月后的样品和在2℃至8℃储存24个月然后在23℃至27℃的室温下储存30天后的样品的实验结果示出在图40中。

在这项研究中，胰岛素、A-21脱酰胺胰岛素杂质和胰岛素相关化合物使用C18柱，通过反相高效液相色谱(HPLC)或UHPLC来分离和测量。检测使用UV在214nm波长处进行。分析方法从USP专论中为胰岛素提供的分析方法调整以适应于低浓度制剂，所述专论含有执行这种分析的详细说明。胰岛素相关化合物定量使用样品进样中的响应百分比(峰的曲线下面积)来进行。HPLC峰面积通过HPLC软件(例如Empower)中可用的标准积分程序来确定。将由此确定的峰面积与标准溶液的峰面积进行比较，以便进行定量。

在图41中提供了HPLC层析图的一个实例，以说明胰岛素和A-21脱酰胺胰岛素峰的分离以及A-21脱酰胺胰岛素杂质含量的测量。提供这个实例仅仅是出于说明的目的。本领域技术人员应该理解，当使用不同的HPLC系统、柱、流动相制备物等时，峰保留时间可能迁移。

在本研究和本说明书中所公开和制备的A-21胰岛素杂质的含量都基于通过反相HPLC方法使用UV在214nm检测波长下测量的峰的曲线下面积。A-21脱酰胺胰岛素峰的身份，根据它的保留时间与USP胰岛素专论中提供的系统适用性解决方案中A-21脱酰胺胰岛素峰的保留时间的匹配来确认。

还使用适合的孔径排阻层析(SEC)方法例如在USP胰岛素专论中提供的方法测量了胰岛素二聚体、六聚体或任何其他高分子量蛋白(HMWP)的浓度，所述方法已被调整以用于本研究中的低浓度胰岛素制剂。对于所述样品来说，胰岛素二聚体、六聚体或任何其他高分子量蛋白(HMWP)的总浓度以总胰岛素的重量计不超过1.1％。

所述实验结果证实，对于所有4个不同批次的样品来说，胰岛素预混制剂在整个储存期间非常稳定。例如，正如图40中所示，所有4个批次的样品的pH值在整个储存期间保持恒定在6.8-6.9左右，这在6.5-7.2的pH限度之内。对于所有4个批次的样品来说，直至储存期结束胰岛素浓度的变化不超过3.0％，这在新鲜制备时的原始胰岛素浓度的±10％的限度之内。对于所有测试样品来说，在整个储存期间A-21脱酰胺胰岛素杂质以总胰岛素的重量计低于1.5％(通过反相HPLC测量)。此外，对于所有4个不同批次的样品来说，在整个储存期间通过SEC测量的胰岛素二聚体、六聚体或任何其他高分子量蛋白(HMWP)的总浓度以总胰岛素的重量计不超过1.1％。

此外，图40中的测试结果还证实产品中的胰岛素基本上不吸收或吸附到柔性容器即

图40中的实验结果进一步证实，所述胰岛素预混产品的胰岛素向柔性容器的吸附和/或吸收(除了第2批次之外)，在所述预混产品新鲜制备时低于2.0％，在所述预混产品在2℃至8℃的冷藏温度下储存24个月后低于2.0％；并且在所述预混产品在2℃至8℃的冷藏温度下储存24个月然后在23℃至27℃的室温下储存1个月后低于3.0％。第2批次的胰岛素预混产品的胰岛素向柔性容器的吸附和/或吸收，经测量在所述预混产品新鲜制备时低于4.0％，在所述预混产品在2℃至8℃的冷藏温度下储存24个月后低于4.0％；并且在所述预混产品在2℃至8℃的冷藏温度下储存24个月然后在23℃至27℃的室温下储存1个月后低于4.0％。

在这里，当所述胰岛素预混制剂在生产罐中制造时，在装填到柔性容器中之前，测量了放罐前生产罐中的胰岛素浓度(放罐胰岛素浓度)。在不同储存条件和时间段下吸附和/或吸收到柔性容器的胰岛素的浓度，通过用所述放罐胰岛素浓度减去在不同储存条件和时间段下柔性容器中的胰岛素浓度、A-21脱酰胺杂质的浓度和其他胰岛素相关物质的总浓度来计算。然后通过用吸附和/或吸收到柔性容器的胰岛素的浓度除以放罐胰岛素浓度来计算吸附或吸收到柔性容器的胰岛素的百分率。

因此，所述实验结果清楚地证实，本文所公开和制备的胰岛素预混制剂和产品在2℃至8℃的冷藏温度下储存24个月然后在23℃至27℃的室温下储存30天内出人意料地稳定，即使在没有任何添加的防腐剂、任何添加的锌、任何添加的甘油、任何添加的表面活性剂或任何添加的稳定赋形剂的情况下。即使在2℃至8℃的冷藏温度下储存24个月然后在23℃至27℃的室温下储存1个月后，吸附和/或吸收到柔性容器的胰岛素也非常低，以总胰岛素的重量计低于3.0％。

对于本领域技术人员来说，对本文公开的当前优选实施方式的各种不同改变和修改是显而易见的。这些改变和修改可以在不背离本发明主题内容的精神和范围且不削弱其预期优点的情况下进行。因此，打算将这些变化和修改用权利要求书涵盖。

序列表

<110> 巴克斯特国际公司

<120> 胰岛素预混制剂和产品、其制备方法及其使用方法

<130> P50170US01 2019-08259

<140> US 16/681,392

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<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 21

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 1

Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gln Leu

1 5 10 15

Glu Asn Tyr Cys Asn

20

<210> 2

<211> 30

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr

1 5 10 15

Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr

20 25 30