一种贻贝进出水时间的测量方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种贻贝进出水时间的测量方法。

发明背景

贻贝亦称海虹(Mytilus edulis)，是软体动物门，瓣鳃纲，翼形亚纲，异柱目，贻贝科，贻贝属的双壳类软体动物，依靠足丝附着在礁石或者其他基质上，大部分是海产，少数生活在淡水。贻贝的产量丰富，营养价值高，味道鲜美，具有重要的经济价值。科研人员利用贻贝开展了一系列生理生化试验。在实验过程中，需要对贻贝呼吸相关的指标进行测量。贻贝的呼吸主要通过鳃水管(进水管) 和肛门水管(出水管)的滤水过程，进行气体交换，从而完成呼吸。因此，通过测量贻贝的进出水时间可以反应其滤水量，进而间接反应其呼吸状况。然而，目前并没有贻贝进出水时间的测量方法。因此，需要发明一种简单、准确测量贻贝进出水时间的方法。

发明内容

本发明提供了一种简单、准确测量贻贝进出水时间的方法，为科研人员在实验中更加快速、直接、准确的测定贻贝的滤水速率。贻贝的水管系统是贻贝的呼吸和摄食器官，通过测定它的进出水时间可以反应其滤水速率，进而间接地反应其呼吸和摄食状况。

一种贻贝进出水时间的测量方法，其通过摄像机录像技术与染色方法相结合，利用Adobe Premiere Pro软件计算得出贻贝进出水时间。

在一些实施方式中，一种贻贝进出水时间的测量方法，包括以下步骤：

1)打开摄像机录像按钮，在贻贝的腹缘后端1/3处注射固绿染液，当观察发现贻贝的背缘后端1/3处出现大量的固绿染液后，停止录像；

2)逐帧查看拍摄的视频，固绿染液接触贻贝贝壳的那一刻即为固绿染液进入贻贝水管系统的时间t

3)贻贝的进出水时间t＝t

贻贝的进出水时间和贻贝的呼吸相关，时间越短，贻贝呼吸状况越好，时间越长，贻贝呼吸状况越差。

在一些实施方式中，一种贻贝进出水时间的测量方法，进一步包括诱导贻贝吐沙步骤，即将鲜活的贻贝放入吐沙溶液中，静置3h，使其吐沙完全。

在一些实施方式中，所述吐沙溶液为植物油与氯化钠水溶液的混合溶液，所述氯化钠水溶液的质量溶度为6.25g/ml，所述植物油与氯化钠水溶液的体积比为1：40。

在一些实施方式中，所述步骤1)中固绿染液中固绿、乙醇、蒸馏水的重量体积比为0.1g固绿：95ml无水乙醇：5ml蒸馏水。

在一些实施方式中，一种贻贝进出水时间的测量方法，进一步包括待测贻贝的预处理：将吐沙完全的贻贝用海水冲洗3次，用于清除残留的吐沙溶液；处理完的贻贝放置于海水中适应5分钟。

本发明公开了一种简单、可靠、科学、准确的一种贻贝进出水时间的测量方法，本发明通过注射染色剂，结合摄像机录像技术及Adobe Premiere Pro软件计算得出贻贝进出水时间，本发明可以简单、快速、准确地的测量贻贝的进出水时间，该方法具备多种优点，适合于在本领域推广应用，其科研意义重大。

附图说明

图1为配制的固绿染液注射在贻贝腹缘后端的1/3处时的图片。

图2为到固绿染液从贻贝背缘后端1/3处出现大量流出时的图片。

图3为通过逐帧查看所拍摄的视频，将固绿染液刚接触贻贝的那一刻，到固绿染液从贻贝背缘后端1/3处成股流出那一刻的这个时间，通过精确计算每一帧，得到这个过程的时间的图片。

具体实施方式

下列实施例用于进一步解释说明本发明，但是，它们并不构成对本发明范围的限制或限定。

本发明所使用的溶剂没有特别的限制，可采用商购的常规溶剂。

实施例

a、吐沙溶液的配制：准备一个500ml的烧杯，用量筒量取400ml蒸馏水倒入烧杯中；再称取25g氯化钠加入蒸馏水中；然后，量取10ml植物油倒入烧杯中，使之充分搅拌均匀；

b、贻贝吐沙：将鲜活的厚壳贻贝，长69.33mm，宽26.13mm，高37.49mm，放入a中配制的吐沙溶液中，静置3h，使其吐沙完全；

c、固绿染液配置：取10ml烧杯，使用5ml移液管量取5ml浓度为95％的乙醇溶液，然后称取0.1g固绿放入烧杯中，使之充分混匀；再取100ml烧杯，加入5ml固绿乙醇溶液，使用50ml的移液管量取95ml浓度为95％的乙醇溶液倒入其中，并充分搅拌均匀；

d、待测贻贝的预处理：将步骤b中吐沙完全的厚壳贻贝用海水冲洗3次，用于清除残留的a溶液；之后取500*350(mm)规格的解剖盘，加入解剖盘体积4/5的海水，先将a中处理完的厚壳贻贝放置于海水中适应5分钟；

e、记录进、出水过程：将索尼FDR-AX700 4K HDR摄像机置于d中厚壳贻贝的正上方20cm处，打开录像按钮；之后，用5ml的注射管吸取2ml b中配制的固绿染液，注射在贻贝的腹缘后端1/3处(见图1)；当贻贝的背缘后端1/3 处出现大量的固绿染液(见图2)，停止录像；

f、计算时间：利用Adobe Premiere Pro软件，将拍摄的视频进行逐帧查看，其中，固绿染液接触贻贝贝壳的那一刻即为固绿染液进入贻贝水管系统的时间 t