一株缓解结肠炎的长双歧杆菌婴儿亚种及应用

技术领域

本发明涉及一株缓解结肠炎的长双歧杆菌婴儿亚种及应用，属于微生物技术领域。

背景技术

炎症性肠病(IBD)是一种慢性肠道炎症性疾病，溃疡性结肠炎(UC)是IBD的主要形式之一，其主要特征是肠道屏障功能减弱和肠道免疫系统失调，UC患者最常见的症状为腹泻、直肠出血、里急外重、粘液流出、腹痛。溃疡性结肠炎的确切发病机制尚不清楚，目前认为涉及到几个因素，包括免疫反应失调、肠道微生物改变、遗传易感性和环境因素等。溃疡性结肠炎直接影响生活质量，选择合适的治疗方法对提高溃疡性结肠炎患者的生活质量至关重要。目前采用的常规治疗药物为：柳氮磺胺吡啶水杨酸制剂如美沙拉嗪等；皮质类固醇常用药为强的松或地塞米松，然而长期使用上述药物会产生副作用，包括导致高血压、糖尿病、骨质疏松等。

鉴于现有治疗方案存在的多种问题，替代传统方法的缓解结肠炎的方案显得尤为重要了，新的治疗方案包括针对细胞因子和粘附分子的生物制剂、益生元、益生菌，一些微生物代谢物如不饱和脂肪酸，短链脂肪酸等。而上述多种疗法的可行性也促使我们继续寻找应用更广泛、潜力更巨大，同时又具有缓解结肠炎作用的膳食补充剂。

发明内容

本发明提供了一种长双歧杆菌婴儿亚种在制备预防和/或治疗结肠炎的产品中的应用，所述长双歧杆菌婴儿亚种能够用于制备预防和/或治疗结肠炎的产品中。

本发明的第一个目的是提供一株长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longumsubsp.infantis)CCFM1210，所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62234，保藏日期为2022年1月23日。

所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210是从来源于江苏扬州的婴儿粪便样本中分离得到的，具有如下特性：

(1)在MRS固体培养基上的菌落呈现乳白色、表面光滑、圆形凸起；

(2)有助于预防和/或治疗结肠炎；

(3)有助于提高哺乳动物肠道内的短链脂肪酸含量。

本发明还提供了含有所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210的微生物制剂。

在一种实施方式中，所述微生物制剂是液体菌剂或固体菌剂。

在一种实施方式中，所述微生物制剂中长双歧杆菌婴儿亚种的活菌数不低于1×10

在一种实施方式中，所述微生物制剂的制备方法为：将所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210的种子液按照占培养基总质量2～4％的接种量接种到添加半胱氨酸的MRS培养基中，于37℃厌氧培养24～36h，得到培养液；将培养液离心，得到菌体；将菌体用生理盐水清洗3～4次后重悬，得到微生物制剂。

在一种实施方式中，所述微生物制剂还含有细胞保护剂；所述细胞保护剂包括但不限于脱脂乳、海藻糖、蔗糖中的一种或多种的混合。

在一种实施方式中，所述细胞保护剂包括130g/L脱脂乳、20g/L海藻糖和20g/L蔗糖。

本发明还提供所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210在制备治疗或缓解结肠炎的产品中的应用。

在一种实施方式中，所述结肠炎是溃疡性结肠炎。

在一种实施方式中，所述应用包括如下至少一种功能：

(1)缓解体重减轻；

(2)减轻结肠组织的损伤；

(3)抑制紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1和Occludin的减少；

(4)降低促炎细胞因子IL-1β和IL-6的浓度，增加抑炎细胞因子IL-10的浓度；

(5)增加肠道中丁酸的浓度；

(6)提高肠道菌群多样性，改善肠道菌群紊乱。

在一种实施方式中，所述产品中，长双歧杆菌婴儿亚种的活菌数为不低于1×10

在一种实施方式中，所述产品包括但不限于食品或药物。

在一种实施方式中，所述药物含有上述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210、药物载体和/或药用辅料。

在一种实施方式中，所述食品包括但不限于含有上述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210的发酵食品或发酵饮品；或使用含上述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210的微生物制剂生产得到的发酵食品。

本发明还提供所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210或所述微生物制剂在生产发酵食品中的应用。

有益效果：

(1)本发明所提供的长双歧杆菌婴儿亚种(B.longum subsp.infantis)CCFM1210分离自健康婴儿的肠道菌群，该菌株对人体无毒副作用，因此采用本发明提供的长双歧杆菌婴儿亚种(B.longum subsp.infantis)CCFM1210制备的药物，相对于用于治疗结肠炎的传统药物具有一定的优势，并且该菌株可用于制作益生菌制剂等，具有广阔的市场前景。

(2)采用本发明所提供的长双歧杆菌婴儿亚种(B.longum subsp.infantis)CCFM1210，能够显著降低DSS诱导结肠炎期间小鼠的疾病活动指数，减轻体重的下降和结肠的缩短，显著减轻结肠组织的损伤。

(3)长双歧杆菌婴儿亚种(B.longum subsp.infantis)CCFM1210干预能显著抑制紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1、Occludin的减少。

(4)长双歧杆菌婴儿亚种(B.longum subsp.infantis)CCFM1210干预显著降低了促炎细胞因子IL-1β和IL-6的浓度，显著增加抑炎细胞因子IL-10的浓度。

(5)长双歧杆菌婴儿亚种(B.longum subsp.infantis)CCFM1210干预显著增加了丁酸的浓度。

(6)长双歧杆菌婴儿亚种(B.longum subsp.infantis)CCFM1210干预显著提高了结肠炎小鼠肠道菌群的多样性，减轻了肠道菌群紊乱。

生物材料保藏

一株长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)CCFM1210，分类学命名为Bifidobacterium longum subsp.infantis，已于2022年1月23日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.62234，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。

附图说明

图1：不同组别小鼠DSS造模期间的体重变化；

图2：不同组别小鼠疾病活动指数DAI指数变化；

图3：不同组别小鼠结肠长度；

图4：不同组别小鼠结肠组织H&E染色；

图5：不同组别小鼠组织病理评分；

图6：不同组别小鼠结肠组织内髓过氧化物酶的含量；

图7：不同组别小鼠结肠组织内ZO-1的含量；

图8：不同组别小鼠结肠组织内Occludin的含量；

图9：不同组别小鼠结肠组织内Claudin-1的含量；

图10：不同组别小鼠结肠组织内IL-1β的含量；

图11：不同组别小鼠结肠组织内IL-6的含量；

图12：不同组别小鼠结肠组织内IL-10的含量；

图13：不同组别小鼠盲肠内容物中丁酸浓度；

图14：不同组别小鼠肠道菌群的chao1多样性指数；

图15：不同组别小鼠肠道菌群的香农多样性指数；

图16：不同组别小鼠肠道菌群的辛普森多样性指数；

图17：不同组别小鼠肠道菌群β多样性指数的主坐标分析；

图1～16中，“*”、“**”、“***”、“****”均表示与DSS组具有显著性差异，*越多，显著性差异越大，误差以Mean±SEM的形式展现。

具体实施方式

下述实施例中涉及的小鼠为6周龄雄性SPF(Specific pathogen free，无特定病原体)级C57BL/6N小鼠，购自维通利华实验动物技术有限公司；下述实施例中涉及的紧密连接蛋白ELISA试剂盒购自南京森贝伽生物科技有限公司，炎症因子ELISA试剂盒购自R&DSystems公司；下述实施例中涉及的葡聚糖硫酸钠(DSS)购自美国MP Biomedicals公司。长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)ATCC15697购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(保藏编号为CGMCC 1.2202)。

下述实施例中涉及的培养基如下：

MRS液体培养基：胰蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母粉5g/L、葡萄糖20g/L、无水乙酸钠5g/L、七水硫酸镁0.5g/L、一水硫酸锰0.25g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、三水磷酸氢二钾2.6g/L、Tween80 1mL/L、半胱氨酸盐酸盐0.5g/L。

MRS固体培养基：胰蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母粉5g/L、葡萄糖20g/L、无水乙酸钠5g/L、七水硫酸镁0.5g/L、一水硫酸锰0.25g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、三水磷酸氢二钾2.6g/L、Tween80 1mL/L、半胱氨酸盐酸盐0.5g/L，琼脂20g/L。

疾病活动指数(Disease activity index，DAI)的检测方法：

DAI评分参照Murthy的评分系统，包括体重变化，便血情况和粪便性状三个方面(具体评分标准如表1所示)。造模期间，每天测量小鼠体重，检测小鼠便血情况和粪便性状，根据表1进行评分，DAI＝体重变化分数+便血情况分数+粪便性状分数。粪便隐血情况用匹拉米洞法便隐血试剂测定，具体操作按照试剂说明书进行，若粪便肉眼可见有红褐色或鲜红色血液，则为肉眼血便。粪便性状分为三个等级：正常、松散和稀便，小鼠正常粪便成型，为颗粒状；若粪便粘度增加且易散，但不粘附于肛门则为松散；若粪便不成形或呈稀水样，且粘附于肛门，则为稀便。

表1疾病活动指数评分标准

结肠长度的检测方法：

小鼠处死后，取整段结肠(盲肠末端至肛门)，测量长度。

结肠组织病理学特征的检测方法：

取1cm远端结肠(距肛门1cm)用于后续的固定，包埋，切片和H&E染色。用Pannoramic MIDI数字切片扫描仪扫描H&E结肠切片，并采用Dieleman的评分系统对各组结肠组织切片进行组织损伤评分，组织损伤评分包括炎症程度、病变深度、隐窝破坏和病变范围四个方面(具体标准见表2)。

表2组织损伤评分标准

结肠组织生化指标的测定：

结肠组织按1：9加入PBS，利用高通量破碎仪破碎结肠组织得到匀浆，然后12000g、4℃离心15min，收集上清，得到结肠组织上清液。

结肠组织紧密连接蛋白含量通过ELISA试剂盒(南京森贝伽生物科技有限公司)检测；细胞因子IL-1β，IL-6和IL-10的浓度通过ELISA试剂盒(R&D Systems公司)检测；结肠组织上清中总蛋白的浓度利用BCA试剂盒(赛默飞世尔科技公司)检测。

丁酸浓度的检测：

对小鼠盲肠内容物中的丁酸进行提取，通过GC-MS进行检测(具体方法参考毛丙永.功能性低聚糖对肠道细菌的影响及机制.2015.江南大学,博士学位论文)。

肠道菌群多样性的分析：

通过FastDNA Spin Kit(美国MP生物医药公司)提取粪便中的基因组DNA，对提取得到的基因组DNA的V3-V4区进行特异性PCR扩增，16S rDNA测序，在线网站分析粪便菌群α多样性(Chao 1、Shannon和Simpson)和β多样性，基于加权UniFrac距离进行肠道菌群β多样性的主坐标分析。

实施例1：长双歧杆菌婴儿亚种(B.longum subsp.infantis)CCFM1210的筛选、鉴定、培养、观察和保存

1、筛选

取0.5g保存于30％(v/v)甘油中的来源于江苏扬州地区的健康婴儿粪便样本，梯度稀释后涂布于MRS固体培养基(含有0.5g/L半胱氨酸)上，37℃厌氧培养72h，观察并记录菌落形态；挑取乳白色、表面光滑、圆形凸起的菌落在MRS固体培养基(含有0.5g/L半胱氨酸)上划线，于37℃厌氧的条件下进行纯化培养，重复此操作3次，获得纯化后的单菌落；挑取纯化菌落接种至MRS液体培养基(含有0.5g/L半胱氨酸)中，37℃厌氧培养36h，得到菌株CCFM1210。

2、鉴定

提取筛选得到菌株的基因组，将菌株的16S rDNA进行扩增和测序(扩增得到的16SrDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示)，将获得的序列在NCBI-Blast中进行核酸序列比对，结果显示菌株为长双歧杆菌婴儿亚种，后经过基因组草图测序及系统发育分析进一步确认其为长双歧杆菌婴儿亚种，命名为长双歧杆菌婴儿亚种(B.longum subsp.infantis)CCFM1210。

3、保存

挑取长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210单菌落接入MRS液体培养基中，37℃厌氧培养36h，得到菌液；无菌条件下将菌液置于冻存管中6000r/min离心3min收集菌体；使用无菌PBS缓冲溶液洗涤，6000r/min离心3min得到洗涤后的菌体，重复此操作3次；用无菌30％(v/v)甘油重悬菌体，冻存管于-80℃冰箱保存。

实施例2：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210菌悬液的制备

(1)从冻存管中蘸取长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210的菌液在MRS固体培养基上划线，37℃厌氧培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃厌氧培养36h，得到活化液；将活化液按照1％(v/v)的接种量接入MRS液体培养基中，37℃厌氧培养24h，重复进行3次活化培养，得到活化后的菌液。

(2)将步骤(1)得到的活化后的菌液按照按1％(v/v)的接种量接种至MRS液体培养基中，37℃培养24h后得到发酵液，将发酵液离心收集菌体，用pH为7.4的PBS缓冲液洗涤两次后，用生理盐水重悬菌体，并调整至活菌数1×10

长双歧杆菌婴儿亚种ATCC15697菌悬液的制备参照上述相同的方法。

实施例3：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210对DSS诱导结肠炎小鼠症状的缓解作用

DSS诱导的小鼠结肠炎造模方法及长双歧杆菌婴儿亚种干预的处理步骤如下：

(1)配制2.7％的葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液：将DSS用无菌水配成浓度为2.7％(w/v)的葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液。

(2)取6周龄健康雄性C57BL/6N小鼠40只，随机分为5组，每组8只，5组分别为：空白对照组、DSS组、长双歧杆菌婴儿亚种ATCC15697干预组(ATCC15697+DSS)、长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210干预组(CCFM1210+DSS)和长双歧杆菌婴儿亚种FJND2M2干预组(FJND2M2+DSS)，其中，长双歧杆菌婴儿亚种ATCC15697和FJND2M2的菌悬液按照实施例2的方法制备；实验方案和各组小鼠的处理方式如表3所示。

(3)造模期间，每天检测各组小鼠体重(检测结果见图1)及疾病活动指数DAI(检测结果见图2)。造模结束后，将小鼠处死，取整段结肠(盲肠末端至肛门)，测量结肠长度(检测结果见图3)。

表3实验小鼠处理方案

由图1可知，造模第7天，DSS组小鼠体重下降了13.40％，而CCFM1210干预组，ATCC15697干预组和FJND2M2干预组小鼠体重分别降低了6.94％,11.5％和18.75％，说明FJND2M2的干预加剧了小鼠体重的下降，而ATCC15697和CCFM1210则可以缓解DSS造模引起的小鼠体重下降，并且CCFM1210的缓解作用优于ATCC15697。造模第7天，DSS组小鼠的DAI指数升高至9.25，ATCC15697干预组为9.5，FJND2M2干预组小鼠的DAI指数则高达11.00，而CCFM1210干预组小鼠的DAI指数显著低于模型组，仅为6.13(如图2)。空白对照组小鼠结肠长度平均为6.91cm，DSS组小鼠的结肠长度仅为5.00cm，ATCC 15697干预加剧了结肠长度的缩短，而CCFM1210的干预显著缓解了DSS引起的结肠长度缩短，达到了5.76cm(如图3)。

小鼠处死后，取远端结肠组织1cm进行固定，脱水，包埋，HE染色，观察不同组别小鼠结肠组织HE染色。由图4可以看出，DSS诱导和FJND2M2干预后，小鼠的结肠组织会出现明显的损伤，包括严重的炎症细胞浸润、隐窝和腺体结构的破坏，杯状细胞的消失以及粘膜下层水肿等；ATCC15697干预组结肠组织的损伤与DSS组相比更轻，但仍有较多的炎症细胞浸润和粘膜下层水肿；而CCFM1210干预组的结肠组织结构与空白组相似，腺体和隐窝较完整，杯状细胞较多，仅有少量的炎性细胞浸润和粘膜下层水肿。

组织病理学评分标准参考相关文献(具体参考J Agr Food Chem,2019,67(48):13282-13298)。组织病理学评分显示(图5)，DSS组的病理学评分达到10.63分，FJND2M2干预组的评分高于DSS组，为11.63，ATCC15697干预组为8.67分，与DSS组没有显著差异，而CCFM1210干预组的评分显著低于DSS组，仅为6.38分。

上述结果表明，本发明的长双歧杆菌婴儿亚种(B.longum subsp.infantis)CCFM1210对DSS诱导结肠炎小鼠的症状具有较好的缓解作用，且其缓解作用好于长双歧杆菌婴儿亚种ATCC15697。

实施例4：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210对结肠炎小鼠结肠髓过氧化物酶-水平的影响

造模方法同实施例3，将实施例3中的步骤(3)得到的造模结束后小鼠处死，取结肠组织按照结肠组织生化指标测定方法检测结肠组织上清中髓过氧化物酶(MPO)水平。

实验结果表明(如图6)，与空白对照组相比，DSS的摄入导致小鼠结肠MPO水平显著上升，达到73.11ng/mg蛋白；而CCFM1210的干预使结肠MPO水平下降至45.85ng/mg蛋白。这表明长双歧杆菌婴儿亚种(B.longum subsp.infantis)CCFM1210可显著降低结肠炎小鼠结肠髓过氧化物酶水平。

实施例5：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210对结肠炎小鼠肠道紧密连接蛋白含量的影响

造模方法同实施例3，将实施例3中的步骤(3)得到的造模结束后小鼠处死，取结肠组织按照结肠组织生化指标测定方法检测结肠组织上清中的紧密连接蛋白含量，包括紧密连接蛋白ZO-1，Occludin和Claudin-1。

实验结果表明(如图7-9)，与DSS组相比，CCFM1210干预能显著增加紧密连接蛋白ZO-1，Occludin和Claudin-1的浓度，ATCC15697和FJND2M2的干预也增加了上述蛋白的浓度，但不具有统计学意义。证明本发明的长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210干预能够使粘膜上皮屏障保持完整，改善了结肠炎小鼠结肠机械屏障。

实施例6：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210对结肠炎小鼠结肠中细胞因子水平的影响

造模方法同实施例3，将实施例3中的步骤(3)得到的造模结束后小鼠处死，取结肠组织按照结肠组织生化指标测定方法检测结肠组织上清中的生化指标，生化指标包括结肠组织中IL-1β、IL-6和IL-10的浓度。

由图10-12可知，DSS处理显著增加了结肠组织促炎细胞因子IL-1β和IL-6的浓度，分别达到了772.33pg/mg蛋白和44.36pg/mg蛋白，使抑炎细胞因子IL-10的浓度降低至5.12pg/mg蛋白。而长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210处理可以显著降低IL-1β和IL-6的浓度至444.47pg/mg蛋白和29.71pg/mg蛋白，并使IL-10的浓度显著增加至11.92pg/mg蛋白。ATCC15697和FJND2M2的干预也使小鼠结肠炎症因子水平呈现出相同的变化趋势，但仅有ATCC15697使得促炎细胞因子IL-1β的浓度显著下降。因此，长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210干预对结肠细胞因子水平具有显著影响。

实施例7：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210对结肠炎小鼠盲肠内容物中丁酸含量的影响

造模方法同实施例3中的步骤(1)-(3)；将实施例3中的步骤(3)得到的造模结束后小鼠处死，取盲肠内容物，称重，干燥，测定丁酸的含量。

短链脂肪酸是肠道菌群的代谢产物，参与宿主免疫调节并增强肠道屏障功能。其中，丁酸在缓解溃疡性结肠炎中发挥着尤其重要的作用。已有研究表明丁酸能够抑制促炎因子的表达，并促进紧密连接蛋白的表达，丁酸制剂的使用能够帮助缓解溃疡性结肠炎。由图13可知，与DSS组相比，长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210干预可以显著增加盲肠内容物中丁酸的含量，由DSS组的14.16μmol/g提高到20.61μmol/g。

实施例8：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210对结肠炎小鼠肠道菌群多样性的影响

造模方法同实施例3中的步骤(1)-(3)；收集实施例3中的步骤(3)得到的造模结束后小鼠粪便，提取粪便中的基因组DNA，16S rDNA测序，菌群α多样性和β多样性的分析结果见图14～17。

已有研究表明DSS造模会引起小鼠肠道菌群的紊乱，因此进一步评估了长双歧杆菌婴儿亚种的干预对结肠炎小鼠肠道菌群结构的影响。由图14可知，就Chao 1指数而言，空白对照组、长双歧杆菌婴儿亚种ATCC15697组和FJND2M2组与DSS组相比均不存在显著性差异(p>0.05)，但长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210能显著提高小鼠肠道群落的物种丰富度；由图15和图16可知，就香农多样性指数和辛普森多样性指数而言，DSS造模会降低样本中微生物的多样性，CCFM1210能显著提高小鼠粪便样本肠道菌群的多样性，而长双歧杆菌婴儿亚种ATCC15697组和FJND2M2组较模型组均不存在显著性差异(p>0.05)。

由图17可知，DSS组小鼠的肠道菌群与空白对照组小鼠不同；FJND2M2组小鼠的肠道菌群与造模组十分相似，而经过长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210的干预后，小鼠肠道菌群向空白对照组发生了移动，ATCC15697组也发生了一定的移动但变化不大。

上述结果表明，长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210可有效提高结肠炎小鼠肠道菌群的多样性，改善由DSS造模导致的肠道菌群紊乱。

实施例9：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210微生物制剂的制备

具体步骤如下：

(1)菌株的活化：从冻存管中蘸取长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1210的菌液在MRS固体培养基上划线，厌氧环境下37℃培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃厌氧培养24h进行活化，重复此操作3次，得到活化后的菌液。

(2)将步骤(1)得到的菌液按5％的接种量接种到MRS液体培养基中，37℃厌氧培养24h得到发酵液，将得到的发酵液在8000g下离心20min后收集菌泥，将菌泥用pH为7.4的PBS缓冲液洗涤3次后备用，调整活菌数1×10

可选地，制备固态微生物制剂可在完成上述步骤的情况下继续如下操作：

(3)冻干保护剂的配制：将130g/L脱脂乳、20g/L海藻糖和20g/L蔗糖和余量的水混合后得到冻干保护剂。

(4)向步骤(2)中得到的菌泥中添加步骤(3)配制好的冻干保护剂，其中冻干保护剂的重量为菌泥重量的2倍，混合均匀后进行真空冷冻干燥，最后将冻干得到的制剂真空包装。

虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

SEQUENCE LISTING

<110> 江南大学

<120> 一株缓解结肠炎的长双歧杆菌婴儿亚种及应用

<130> BAA211858A

<160> 1

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1432

<212> DNA

<213> Bifidobacterium longum subsp. infantis

<400> 1

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