作为A2A/A2B抑制剂的咪唑并嘧啶和三唑并嘧啶

技术领域

本发明提供调节腺苷受体诸如亚型A2A和A2B的活性且可用于治疗与腺苷受体的活性相关的疾病的咪唑并嘧啶和三唑并嘧啶化合物，所述疾病包括例如癌症、炎性疾病、心血管疾病和神经变性疾病。

背景技术

腺苷是可通过许多免疫细胞类型调节免疫反应的细胞外信号传导分子。腺苷首先被Drury和

腺苷在各种其他生理功能中起重要作用。腺苷当连接至三个磷酸酯基团时参与合成核酸；核苷形成细胞能量系统的完整组分ATP。腺苷可通过酶促分解细胞外ATP来生成，或者也可通过穿过受损浆膜自损伤神经元和神经胶质细胞释放(Tautenhahn,M.等人Neuropharmacology,2012,62,1756-1766)。腺苷在外周和中枢神经系统中通过对定位于细胞膜上的特异性受体起作用来产生各种药理作用(Matsumoto,T.等人，Pharmacol.Res.,2012,65,81-90)。已描述用于细胞外腺苷生成的替代性路径。这些路径包括通过CD38、CD203a和CD73的协同动作由烟酰胺二核苷酸(NAD)而不是ATP产生腺苷。腺苷的不依赖于CD73的产生也可通过其他磷酸酯诸如碱性磷酸酶或前列腺特异性磷酸酶发生。

人类中的腺苷受体存在四种已知亚型，包括A1、A2A、A2B和A3受体。A1和A2A是高亲和力受体，而A2B和A3是低亲和力受体。腺苷及其激动剂可经由这些受体中的一种或多种起作用且可调节负责增加环状AMP(cAMP)的酶腺苷酸环化酶的活性。不同受体对这种酶具有不同刺激和抑制作用。增加的cAMP的细胞内浓度可抑制免疫和炎性细胞的活性(Livingston,M.等人，Inflamm.Res.,2004,53,171-178)。

A2A腺苷受体可在外周和CNS中发送信号，其激动剂被探索为抗炎药物且拮抗剂被探索用于神经变性疾病(Carlsson,J.等人，J.Med.Chem.,2010,53,3748-3755)。在大部分细胞类型中，A2A亚型抑制细胞内钙水平，而A2B加强这些水平。A2A受体通常似乎抑制来自免疫细胞的炎性反应(Borrmann,T.等人，J.Med.Chem.,2009,52(13),3994-4006)。

A2B受体在胃肠道、膀胱、肺中及肥胖细胞上高度表达(Antonioli,L.等人，NatureReviews Cancer,2013,13,842-857)。A2B受体尽管结构上与A2A受体紧密相关且能够活化腺苷酸环化酶，但在功能上不同。已假设这种亚型可利用除腺苷酸环化酶之外的信号转导系统(Livingston,M.等人，Inflamm.Res.,2004,53,171-178)。在全部腺苷受体中，A2B腺苷受体是被认为在生理条件下保持沉默且在由于细胞外腺苷水平增加而活化的低亲和力受体(Ryzhov,S.等人，Neoplasia,2008,10,987-995)。A2B腺苷受体的活化可分别通过活化Gs和Gq蛋白来刺激腺苷酸环化酶和磷脂酶C。还描述了与丝裂原活化蛋白激酶的偶合(Borrmann,T.等人，J.Med.Chem.,2009,52(13),3994-4006)。

在免疫系统中，腺苷信号传导的参与可以是防止组织发生过量免疫反应的关键性调节机制。腺苷可通过许多免疫细胞类型负性调节免疫反应，这些细胞类型包括T-细胞、天然杀伤细胞、巨噬细胞、树突细胞、肥胖细胞和骨髓衍生性抑制细胞(Allard,B.等人，Current Opinion in Pharmacology,2016,29,7-16)。

在肿瘤中，这种路径被肿瘤微环境截取且破坏免疫系统的抗肿瘤能力，从而促使癌症进展。在肿瘤微环境中，腺苷主要通过CD39和CD73由细胞外ATP生成。多种细胞类型可通过表达CD39和CD73来生成腺苷。这是肿瘤细胞、T效应细胞、T调节性细胞、肿瘤相关性巨噬细胞、骨髓衍生性抑制细胞(MDSC)、内皮细胞、癌症相关性成纤维细胞(CAF)和间充质基质/干细胞(MSC)的情况。肿瘤微环境中的缺氧、炎症和其他免疫抑制信号传导可诱导CD39、CD73的表达和随后的腺苷产生。因此，实体肿瘤中的腺苷水平与正常生理状况相比异常高。

A2A主要在骨髓衍生性细胞上表达，这些细胞包括T效应细胞、T调节性细胞和天然杀伤细胞。阻断A2A受体可预防暂时灭活T细胞的下游免疫抑制信号。A2B受体主要在单核细胞衍生性细胞上表达，这些细胞包括树突细胞、肿瘤相关性巨噬细胞、骨髓衍生性抑制细胞(MDSC)和间充质基质/干细胞(MSC)。在临床前模型中阻断A2B受体可抑制肿瘤生长，阻断转移且增加肿瘤抗原呈递。

在ADORA2A/ADORA2B(A2A/A2B)阻断的安全性曲线方面，A2A和A2B受体敲除小鼠全部是有活力的，未显示生长异常，并且是可育的(Allard,B.等人，Current Opinion inPharmacology,2016,29,7-16)。A2A KO小鼠仅在用LPS攻击时展示促炎性细胞因子的水平增加且在基线时无炎症证据(Antonioli,L.等人，Nature Reviews Cancer,2013,13,842-857)。A2B KO小鼠展示正常血小板、红血细胞和白细胞计数，但在幼稚A2B KO小鼠中在基线(TNF-α、IL-6)时炎症增加(Antonioli,L.等人，Nature Reviews Cancer,2013,13,842-857)。在LPS处理之后检测到TNF-α和IL-6的产生增加。A2B KO小鼠也展示介导炎症以及白血球粘附/滚动的血管粘附分子增加；肥胖细胞活化增强；对IgE介导的过敏反应的敏感性增加以及在缺血下血管渗漏和中性粒细胞流入增加(Antonioli,L.等人，Nature ReviewsCancer,2013,13,842-857)。

总之，需要开发新的腺苷受体选择性配体，诸如亚型A2A和A2B的配体，以用于治疗疾病，诸如癌症、炎性疾病、心血管疾病和神经变性疾病。本申请涉及这种需要和其他需要。

发明内容

本发明尤其涉及式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中本文定义组成成员。

本发明进一步提供包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载剂的药物组合物。

本发明进一步提供抑制腺苷受体活性的方法，所述方法包括使所述受体与式(I)化合物或其药学上可接受的盐接触。

本发明进一步提供治疗与腺苷受体异常表达相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

本发明进一步提供用于本文所述的任何方法的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

本发明进一步提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于制备用于本文所述的任何方法的药剂的用途。

具体实施方式

化合物

本发明尤其涉及式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐；其中：

X为N或CR

R

R

R

Cy

条件是当X为N且Cy

条件是Cy

条件是Cy

条件是Cy

Cy

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

或者，连接至同一N原子的任何R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

其中任何上述取代基的任一个杂芳基任选包含任一个成环氮上的N-氧化物。

在一些实施方案中，

X为N或CR

R

R

R

Cy

条件是当X为N且Cy

Cy

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

其中任何上述取代基的任一个杂芳基任选包含任一个成环氮上的N-氧化物。

在一些实施方案中，

X为CR

R

R

R

Cy

条件是Cy

条件是Cy

条件是Cy

Cy

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

或者，连接至同一N原子的任何R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

其中任何上述取代基的任一个杂芳基任选包含任一个成环氮上的N-氧化物。

在一些实施方案中，

X为CR

R

R

R

Cy

Cy

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

其中任何上述取代基的任一个杂芳基任选包含任一个成环氮上的N-氧化物。

在一些实施方案中：

X为N；

R

R

Cy

条件是当Cy

Cy

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

其中任何上述取代基的任一个杂芳基任选包含任一个成环氮上的N-氧化物。

在一些实施方案中：

X为N；

R

R

Cy

Cy

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

其中任何上述取代基的任一个杂芳基任选包含任一个成环氮上的N-氧化物。

在一些实施方案中，

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

在一些实施方案中，

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

在一些实施方案中，每个R

在一些实施方案中，每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

在一些实施方案中，每个R

每个R

在一些实施方案中：

X为N；

R

R

Cy

条件是当Cy

条件是Cy

条件是Cy

条件是Cy

Cy

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

其中任何上述取代基的任一个杂芳基任选包含任一个成环氮上的N-氧化物。

在一些实施方案中：

X为N；

R

R

Cy

条件是当Cy

Cy

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

其中任何上述取代基的任一个杂芳基任选包含任一个成环氮上的N-氧化物。

在一些实施方案中：

X为N；

R

R

Cy

Cy

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

每个R

或者，连接至同一N原子的任何R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

或者，连接至同一B原子的任何R

每个R

其中任何上述取代基的任一个杂芳基任选包含任一个成环氮上的N-氧化物。

在一些实施方案中，式(I)化合物为式(II)化合物：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，式(I)化合物为式(III)化合物：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

其中每个R

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，任选取代的Cy

在一些实施方案中，任选取代的Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，任选取代的Cy

在一些实施方案中，任选取代的Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

其中所述5-10元杂芳基和5-10元杂环烷基各自包含作为成环杂原子的一个、两个或三个氮原子，其中所述一个或两个氮原子中的一个任选为N-氧化物，且其中成环碳原子任选被氧代基取代；且

其中所述C

在一些实施方案中，Cy

其中所述5-10元杂芳基和5-10元杂环烷基各自包含作为成环杂原子的一个或两个氮原子，其中所述一个或两个氮原子中的一个任选为N-氧化物，且其中成环碳原子任选被氧代基取代；且

其中所述C

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，Cy

在一些实施方案中，任选取代的Cy

在一些实施方案中，任选取代的Cy

在一些实施方案中，任选取代的Cy

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

其中所述C

在一些实施方案中，R

其中所述C

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，任选取代的R

在一些实施方案中，任选取代的R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，每个R

在一些实施方案中，每个R

在一些实施方案中，每个R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，每个R

在一些实施方案中，每个R

在一些实施方案中，每个R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，X为CR

在一些实施方案中，X为CR

在一些实施方案中，

X为CR

R

R

R

Cy

Cy

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

其中任何上述取代基的任一个杂芳基任选包含任一个成环氮上的N-氧化物。

在一些实施方案中，

X为CR

R

R

R

Cy

Cy

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

在一些实施方案中，

X为CR

R

R

R

Cy

Cy

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

在一些实施方案中，

X为N；

R

R

Cy

Cy

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

在一些实施方案中，

X为N；

R

R

Cy

Cy

在一些实施方案中，

X为N；

R

每个R

R

每个R

每个R

每个R

每个R

Cy

每个R

Cy

每个R

每个R

每个R

在一些实施方案中，

X为N；

R

每个R

R

每个R

每个R

每个R

每个R

Cy

每个R

Cy

每个R

每个R

每个R

在一些实施方案中，

X为N；

R

R

Cy

Cy

在一些实施方案中，

X为N；

R

R

Cy

Cy

在一些实施方案中，所述化合物是前述化合物中的一种的(S)-对映异构体或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述化合物是前述化合物中的一种的(R)-对映异构体或其药学上可接受的盐。

进一步预期，为了清晰起见描述在单独实施方案的内容中的某些本发明特征也可组合提供在单一实施方案中。相反地，为了简洁起见描述于单一实施方案的内容中的各种本发明特征也可分别地或以任何合适的子组合提供。

在本说明书中的各处，描述二价连接取代基。具体的意图是各二价连接取代基包括连接取代基的正向形式和反向形式两者。例如，-NR(CR'R″)

术语“n-元”，其中n为通常描述一个部分中的成环原子数目，其中所述成环原子数目为n。例如，哌啶基为6元杂环烷基环的实例，吡唑基为5元杂芳基环的实例，吡啶基为6元杂芳基环的实例，且1,2,3,4-四氢-萘为10元环烷基的实例。

如本文所用，短语“任选取代的”意指未取代的或取代的。取代基被独立地选择，且取代可在任何化学上可及的位置处。如本文所用，术语“取代的(substituted)”意指氢原子被移除且置换为取代基。单一二价取代基(例如，氧代基)可置换两个氢原子。应了解指定原子上的取代受原子价限制。

如本文所用，短语“各‘变量’独立地选自”意指基本上与其中“在每次出现时‘变量’选自”相同。

在整篇定义中，术语“C

如本文所用，单独或与其他术语组合使用的术语“C

如本文所用，“C

如本文所用，“C

如本文所用，单独或与其他术语组合使用的术语“C

如本文所用，术语“氨基”是指式-NH

如本文所用，单独或与其他术语组合使用的术语“芳基”是指芳族烃基，其可为单环或多环(例如，具有2个、3个或4个稠合环)。术语“C

如本文所用，“卤基”是指F、Cl、Br或I。在一些实施方案中，卤基为F、Cl或Br。在一些实施方案中，卤基为F或Cl。在一些实施方案中，卤基为F。在一些实施方案中，卤基为Cl。

如本文所用，“C

如本文所用，单独或与其他术语组合使用的术语“C

如本文所用，术语“硫基”是指式-SH的基团。

如本文所用，术语“氨基甲酰基”是指式-C(O)NH

如本文所用，单独或与其他术语组合使用的术语“羰基”是指-C(O)-基团。

如本文所用，“环烷基”是指包括环化烷基和烯基的非芳族环状烃。环烷基可包括单环或多环(例如，具有2、3或4个稠合环)基团、螺环和桥接环(例如，桥接双环烷基)。环烷基的成环碳原子可任选被氧代基或硫离子基(例如，C(O)或C(S))取代。环烷基的定义中还包括一个或多个芳族环稠合到环烷基环(即，具有与环烷基环共用的键)的部分，例如环戊烷、环己烷等的苯并或噻吩基衍生物。含有稠合芳族环的环烷基可通过任何成环原子(包括所述稠合芳族环的成环原子)连接。环烷基可具有3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个成环碳(即，C

如本文所用，“杂芳基”是指具有至少一个选自N、O、S和B的杂原子环成员的单环或多环(例如，具有2、3或4个稠合环)芳族杂环。在一些实施方案中，杂芳基环具有独立选自N、O、S和B的1、2、3或4个杂原子环成员。在一些实施方案中，杂芳基部分中的任何成环N可为N-氧化物。在一些实施方案中，杂芳基为具有独立选自N、O、S和B的1、2、3或4个杂原子环成员的5-10元单环或双环杂芳基。在一些实施方案中，杂芳基为具有独立选自N、O、S和B的1、2或3个杂原子环成员的5-6元单环杂芳基。在一些实施方案中，杂芳基为五元或六元杂芳基环。五元杂芳基环为具有含5个环原子的环的杂芳基，其中一个或多个(例如，1、2或3个)环原子独立地选自N、O、S和B。在一些实施方案中，杂芳基含有3至14、4至14、3至7、或5至6个成环原子。在一些实施方案中，杂芳基具有1至4个成环杂原子、1至3个成环杂原子、1至2个成环杂原子或1个成环杂原子。当杂芳基含有不止一个杂原子环成员时，这些杂原子可相同或不同。例示性杂芳基包括但不限于吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、吡咯、吡唑、唑基、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、呋喃、噻吩、三唑、四唑、噻二唑、喹啉、异喹啉、吲哚、苯并噻吩、苯并呋喃、苯并异噁唑、咪唑并[1,2-b]噻唑、嘌呤、三嗪、噻吩并[3,2-b]吡啶、咪唑并[1,2-a]吡啶、1,5-萘啶、1H-吡唑[4,3-b]吡啶等。

五元杂芳基为具有五个成环原子的杂芳基，其中一个或多个(例如，1、2或3个)成环原子独立地选自N、O、B和S。例示性五元环杂芳基为噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、异噻唑基、异噁唑基、1,2,3-三唑基、四唑基、1,2,3-噻二唑、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-三唑基、1,2,4-噻二唑、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-三唑基、1,3,4-噻二唑基、1,3,4-噁二唑基和1,2-二氢-1,2-氮杂硼。

六元杂芳基环为具有含六个成环原子的环的杂芳基，其中一个或多个(例如1、2或3个)环原子独立地选自N、O、S和B。例示性六元环杂芳基为吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基和哒嗪基。

如本文所用，“杂环烷基”是指具有至少一个非芳族环(饱和或部分饱和环)的单环或多环杂环，其中杂环烷基的成环碳原子的一个或多个被选自N、O、S和B的杂原子置换，且其中杂环烷基的成环碳原子和杂原子可以任选被一个或多个氧代基或硫醚(例如，C(O)、S(O)、C(S)或S(O)

例示性杂环烷基包括吡咯烷基、吡咯烷-2-酮、1,3-异噁唑烷-2-酮、吡喃基、四氢吡喃、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、吗啉基、硫代吗啉代、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、哌啶基、吡咯烷基、异噁唑烷基、异噻唑烷基、吡唑烷基、噁唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基、氮杂环庚烷基、1,2,3,4-四氢异喹啉、苯并氮呯(benzazapene)、氮杂双环[3.1.0]己基、二氮杂双环[3.1.0]己基、氧杂双环[2.1.1]己基、氮杂双环[2.2.1]庚基、二氮杂双环[2.2.1]庚基、氮杂双环[3.1.1]庚基、二氮杂双环[3.1.1]庚基、氮杂双环[3.2.1]辛基、二氮杂双环[3.2.1]辛基、氧杂双环[2.2.2]辛基、氮杂双环[2.2.2]辛基、氮杂金刚烷基、二氮杂金刚烷基、氧杂-金刚烷基、氮杂螺[3.3]庚基、二氮杂螺[3.3]庚基、氧杂-氮杂螺[3.3]庚基、氮杂螺[3.4]辛基、二氮杂螺[3.4]辛基、氧杂-氮杂螺[3.4]辛基、氮杂螺[2.5]辛基、二氮杂螺[2.5]辛基、氮杂螺[4.4]壬基、二氮杂螺[4.4]壬基、氧杂-氮杂螺[4.4]壬基、氮杂螺[4.5]癸基、二氮杂螺[4.5]癸基、二氮杂螺[4.4]壬基、氧杂-二氮杂螺[4.4]壬基等。在一些实施方案中，杂环烷基为吡咯烷基、吡咯烷-2-酮、1,3-异噁唑烷-2-酮、吡喃基、四氢吡喃、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、吗啉基、硫代吗啉代、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、哌啶基、吡咯烷基、异噁唑烷基、异噻唑烷基、吡唑烷基、噁唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基或氮杂环庚烷基。

在一些实施方案中，杂环烷基含有3至14个成环原子、4至14个成环原子、3至7个成环原子或5至6个成环原子。在一些实施方案中，杂环烷基具有1至4杂原子、1至3个杂原子、1至2个杂原子或1个杂原子。在一些实施方案中，杂环烷基为具有1或2个独立地选自N、O、S和B的杂原子且具有一个或多个氧化环成员的单环4-6元杂环烷基。在一些实施方案中，杂环烷基为具有1、2、3或4个独立地选自N、O、S和B的杂原子且具有一个或多个氧化环成员的单环或双环4-10元杂环烷基。

如本文所用，“烷基连接基团”为二价直链或支链烷基连接基团(“亚烷基”)。例如，“C

在某些场合，定义或实施方案是指特定环(例如，氮杂环丁烷环、吡啶环等)。除非另外指示，否则这些环可连接至任何环成员，条件是不超过原子的价数。例如，氮杂环丁烷环可在所述环的任何位置处连接，而吡啶-3-基环在3-位置处连接。

如本文所用，术语“氧代基(oxo)”是指作为二价取代基的氧原子(即，＝O)，当连接至碳时形成羰基(例如，C＝O或C(O))，或连接至氮或硫杂原子时形成亚硝基、亚砜或砜基团。

如本文所用，术语“独立地选自”意指变量或取代基的每次出现在每次出现时独立地选自可适用列表。

本文所述的化合物可为非对称的(例如，具有一个或多个立体中心)。除非另外指示，否则意指所有立体异构体，诸如对映异构体和非对映异构体。含有非对称取代的碳原子的本发明化合物可以光学活性或外消旋形式分离。关于如何由光学活性起始材料制备光学活性形式的方法在本领域中是已知的，诸如通过拆分外消旋混合物或通过立体选择性合成。烯烃、C＝N双键等的许多几何异构体也可存在于本文所述的化合物中，且所有这样的稳定异构体都涵盖在本发明中。描述了本发明化合物的顺式和反式几何异构体且可将其以异构体混合物形式或以分离的异构体形式分离。在一些实施方案中，所述化合物具有(R)-构型。在一些实施方案中，所述化合物具有(S)-构型。本文提供的式(例如，式(I)、(II)等)包括这些化合物的立体异构体。

化合物的外消旋混合物的拆分可通过本领域中已知的多种方法中的任一种来进行。例示性方法包括使用手性拆分酸进行分步重结晶，所述酸为光学活性、成盐有机酸。用于分步重结晶方法的合适拆分剂为例如光学活性酸，诸如酒石酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、杏仁酸、苹果酸、乳酸的D和L形式，或各种光学活性樟脑磺酸，诸如β-樟脑磺酸。其他适用于分步结晶方法的拆分剂包括立体异构纯形式的α-甲基苯甲胺(例如，S和R形式，或非对映异构纯形式)、2-苯基甘氨醇、去甲麻黄碱、麻黄碱、N-甲基麻黄碱、环己基乙胺、1,2-二氨基环己烷等。

外消旋混合物的拆分也可通过在填充有光学活性拆分剂(例如，二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸)的管柱上洗脱来进行。合适的洗脱溶剂组合物可由本领域技术人员确定。

本文所提供的化合物还包括互变异构体形式。互变异构体形式由单键与相邻双键交换并伴随质子迁移而产生。互变异构体形式包括质子转移互变异构体，其为具有相同经验式和总电荷的异构体质子化状态。例示性质子转移互变异构体包括酮-烯醇对、酰胺-亚胺酸对、内酰胺-内酰亚胺对、烯胺-亚胺对和其中质子可占据杂环系统的两个或多个位置的环形式，例如1H-咪唑和3H-咪唑、1H-1,2,4-三唑、2H-1,2,4-三唑和4H-1,2,4-三唑、1H-异吲哚和2H-异吲哚、2-羟基吡啶和2-吡啶酮以及1H-吡唑和2H-吡唑。互变异构体形式可处于平衡状态或通过适当取代而在空间上锁定为一种形式。

所有化合物及其药学上可接受的盐可连同诸如水和溶剂的其他物质一起存在(例如，水合物和溶剂合物)或可分离。

在一些实施方案中，化合物制备可涉及添加酸或碱以影响例如对所要反应的催化作用或诸如酸加成盐的盐形式的形成。

在一些实施方案中，本文所提供的化合物或其盐是大体上分离的。“大体上分离的”意指化合物自其形成或检测时所处的环境至少部分或大体上分离。部分分离可包括例如本文所提供的化合物富集的组合物。大体上分离可包括含有至少约50重量％、至少约60重量％、至少约70重量％、至少约80重量％、至少约90重量％、至少约95重量％、至少约97重量％或至少约99重量％的本文所提供的化合物或其盐的组合物。用于分离化合物及其盐的方法在本领域中是常规的。

如本文所用的术语“化合物”意指包括所描绘结构的所有立体异构体、几何异构体、互变异构体和同位素。除非另外规定，否则由名称或结构鉴别为一种特定互变异构体形式的本文化合物意欲包括其他互变异构体形式。

短语“药学上可接受”在本文中用于指在合理医学判断范畴内适合与人类和动物的组织接触使用而无过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，符合合理的效益/风险比的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。

本申请还包括本文所述的化合物的药学上可接受的盐。如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所公开化合物的衍生物，其中母体化合物通过使现有酸或碱部分转化成其盐形式而改性。药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基(诸如胺)的无机酸或有机酸盐；酸性残基(诸如羧酸)的碱盐或有机盐；等。本发明的药学上可接受的盐包括由例如无毒无机酸或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐。本发明的药学上可接受的盐可通过常规化学方法自含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，这样的盐可通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的适当碱或酸在水或有机溶剂或两者的混合物中反应来制备；通常，如醚、乙酸乙酯、醇(例如，甲醇、乙醇、异丙醇或丁醇)或乙腈(ACN)的非水性介质是优选的。合适的盐的清单发现于Remington’s Pharmaceutical Sciences,第17版,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985,第1418页和Journal of PharmaceuticalScience,66,2(1977)中，其各自以引用的方式全文并入本文中。

合成

如本领域技术人员应了解，本文所提供的化合物(包括其盐和立体异构体)可使用已知有机合成技术制备且可根据众多可能的合成途径中的任一种来合成。

方案1

式10化合物可经由方案1中列出的合成途径制备。可商购获得的起始材料1可经历使用适当试剂诸如N-溴琥珀酰亚胺(NBS)的卤化反应，诸如亲电芳族取代(S

方案2

或者，式10化合物可经由方案2中列出的合成途径制备。可商购获得的起始材料11可经历在标准铃木交叉偶合条件下(例如，在钯催化剂和合适碱存在下)或在标准施蒂勒交叉偶合条件下(例如，在杂钯催化剂存在下)或在标准根岸交叉偶合条件下(例如，在钯催化剂存在下)与式9加合物进行的偶合反应，以得到式12衍生物，在所述式9加合物中，M为硼酸、硼酸酯或适当取代的金属[例如，M为B(OR)

方案3

化合物18可经由方案3中列出的合成途径(途径A)制备。化合物10可首先经历使用适当试剂诸如N-溴琥珀酰亚胺(NBS)的卤化反应，诸如亲电芳族取代(S

方案4

化合物10c可经由方案4中所列出的合成途径以化合物10a开始制备，所述化合物10a可如方案1或方案2中所述制备。使用适当试剂诸如氢氧化锂(LiOH)对化合物10a进行酯水解可递送羧酸10b，其接着可使用适当偶合试剂(诸如HATU、BOP或PyBOP)与胺19偶合，以得到化合物10c。

方案5

或者，化合物10c可使用方案5中列出的合成途径制备。可商购获得的起始材料20可经历在标准铃木交叉偶合条件下(例如，在钯催化剂和合适碱存在下)或在标准施蒂勒交叉偶合条件下(例如，在杂钯催化剂存在下)或在标准根岸交叉偶合条件下(例如，在钯催化剂存在下)与式9加合物进行的偶合反应，以得到式21衍生物，在所述式9加合物中，M为硼酸、硼酸酯或适当取代的金属[例如，M为B(OR)

方案6

化合物10c也可使用方案6中列出的合成途径制备。化合物22(如方案5中所述制备)可首先经历在标准铃木交叉偶合条件下(例如，在钯催化剂和合适碱存在下)或在标准施蒂勒交叉偶合条件下(例如，在杂钯催化剂存在下)或在标准根岸交叉偶合条件下(例如，在钯催化剂存在下)与式7加合物进行的偶合反应，以得到式27衍生物，在所述式7加合物中，M为硼酸、硼酸酯或适当取代的金属[例如，M为B(OR)

方案7

化合物10d可使用方案7中列出的合成途径制备。可商购获得的起始材料29与式3a的羰基加合物在高温下缩合，可生成式30的双环化合物。化合物30接着可经历在标准铃木交叉偶合条件下(例如，在钯催化剂和合适碱存在下)或在标准施蒂勒交叉偶合条件下(例如，在杂钯催化剂存在下)或在标准根岸交叉偶合条件下(例如，在钯催化剂存在下)与式9加合物的偶合反应，以得到式31衍生物，在所述式9加合物中，M为硼酸、硼酸酯或适当取代的金属[例如，M为B(OR)

方案8

式40化合物可经由方案8中列出的合成途径合成。起始材料34首先经历在标准铃木交叉偶合条件下(例如，在钯催化剂和合适碱存在下)或在标准施蒂勒交叉偶合条件下(例如，在杂钯催化剂存在下)或在标准根岸交叉偶合条件下(例如，在钯催化剂存在下)与试剂9进行的交叉偶合反应，以生成化合物35，在所述化合物35中，M为硼酸、硼酸酯或适当取代的金属[例如，M为B(OR)

方案9

式47化合物可经由方案9中列出的合成途径合成。起始材料1与胺41的选择性亲核芳族取代(S

方案10

式10-7化合物可经由方案10中列出的合成途径合成。高级中间体10-1(可使用方案8中所列出的合成程序制备)首先经历卤化反应(使用合适试剂，诸如亚硫酰氯)，以生成化合物10-2(Hal为卤化物，诸如F、Cl、Br或I)。化合物10-2接着可经历在标准铃木交叉偶合条件下(例如，在钯催化剂和合适碱存在下)或在标准施蒂勒交叉偶合条件下(例如，在杂钯催化剂存在下)或在标准根岸交叉偶合条件下(例如，在钯催化剂存在下)与式10-3试剂进行的交叉偶合反应，以得到化合物10-4，在所述式10-3试剂中，M为硼酸、硼酸酯或适当取代的金属[例如，M为B(OR)

方案11

式11-2化合物可经由方案11中列出的合成途径合成。中间体10-2(其可使用方案10中所列出的合成程序制备，Hal为卤化物，诸如F、Cl、Br或I)可经历与式11-1试剂的亲核取代反应(S

使用方法

本发明的化合物可调节腺苷受体诸如亚型A2A和A2B受体的活性。因此，本文所述的化合物、盐或立体异构体可用于抑制腺苷受体(例如，A2A和/或A2B受体)的方法中，这些方法通过使所述受体与任一种或多种本文所述的化合物、盐或组合物接触来进行。在一些实施方案中，这些化合物或盐可用于通过施用有效量的本文所述的化合物或盐而抑制需要所述抑制的个体/患者中的腺苷受体活性的方法中。在一些实施方案中，调节为抑制。在一些实施方案中，所述接触是在活体内。在一些实施方案中，所述接触是离体或活体外。

本文所述的化合物或盐可为选择性的。“选择性的”意指化合物分别以与至少一种其他受体、激酶等相比更强的亲和力或效力结合或抑制腺苷受体。本发明的化合物也可为腺苷受体(例如，A2A和A2B腺苷受体)的双重拮抗剂(即，抑制剂)。

本发明的另一方面涉及治疗个体(例如，患者)的腺苷受体相关疾病或病症的方法，其是通过向需要这样的治疗的个体施用治疗有效量或剂量的一种或多种本发明的化合物或其药物组合物来进行。腺苷受体相关疾病或病症可包括直接或间接与腺苷受体的表达或活性(包括过度表达和/或异常活性水平)关联的任何疾病、病症或病状。

本发明的化合物可用于治疗与腺苷受体的活性相关的疾病，包括例如癌症、炎性疾病、心血管疾病、神经变性疾病、免疫调节病症、中枢神经系统疾病和糖尿病。

基于腺苷(例如A2A、A2B)受体在多种免疫抑制机制中的强制作用，开发抑制剂可增强免疫系统以抑制肿瘤进展。腺苷受体抑制剂可单独或与其他疗法组合用于治疗膀胱癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌(N SCLC)、肺转移)、黑色素瘤(例如，转移性黑色素瘤)、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胰脏癌、食道癌、前列腺癌、肾癌、皮肤癌、甲状腺癌、肝癌、子宫癌、头颈癌和肾细胞癌(Antonioli,L.等人，Nature Reviews Cancer,2013,13,842-857)。还参见https://globenew swire.com/news-release/2017/04/04/954192/0/en/Corvus-Pharmaceutical s-Announces-Interim-Results-from-Ongoing-Phase-1-1b-Study-Demonstr ating-Safety-and-Clinical-Activity-of-Lead-Checkpoint-Inhibitor-CPI-444-in-Patients-with-Adva.html；Cekic C.等人，J Immunol,2012,188:198-205；Iannone,R.等人，Am.J.Cancer Res.2014,4:172-181(研究显示A2A和CD73两者阻断增强在B16F10鼠类黑色素瘤模型中抗CTLA-4mAb疗法的抗肿瘤活性)；Iannone,R.等人，Neoplasia,2013,15:1400-1410及Beavis PA.等人，Proc Natl Acad Sci.USA,2013,110:14711-14716(研究显示A2A和CD73阻断在具有高CD73表达的4T1乳腺肿瘤模型中减少转移)。在一些实施方案中，前列腺癌为转移性去势抗性前列腺癌(mCRPC)。在一些实施方案中，结肠直肠癌为结肠直肠癌(CRC)。

在一些实施方案中，所述疾病或病症为肺癌(例如，非小细胞肺癌)、黑色素瘤、胰脏癌、乳腺癌、头颈鳞状细胞癌、前列腺癌、肝癌、结肠癌、子宫内膜癌、膀胱癌、皮肤癌、子宫癌、肾癌、胃癌或肉瘤。在一些实施方案中，肉瘤为Askin氏肿瘤、葡萄状肉瘤、软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、恶性血管内皮瘤、恶性神经鞘瘤、骨肉瘤、腺泡状软组织肉瘤、血管肉瘤、叶状囊肉瘤、隆突性皮肤纤维肉瘤、硬纤维瘤、促结缔组织增生性小圆细胞瘤、上皮样肉瘤、骨外软骨肉瘤、骨外骨肉瘤、纤维肉瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、血管外皮细胞瘤、血管肉瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉瘤、恶性外周神经鞘膜瘤(MPNST)、神经纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、滑膜肉瘤或未分化多形性肉瘤。

在一些实施方案中，疾病或病症为间皮瘤或腺癌。在一些实施方案中，疾病或病症为间皮瘤。在一些实施方案中，疾病或病症为腺癌。

MDSC(骨髓衍生性抑制细胞)为来自骨髓谱系的免疫细胞异源群组(源自骨髓干细胞的细胞家族)。MDSC在病理情况诸如慢性感染和癌症中由于造血作用改变而强烈扩增。MDSC不同于其他骨髓细胞类型，其中这些细胞具有强免疫抑制活性而非免疫刺激性质。类似于其他骨髓细胞，MDSC与其他免疫细胞类型相互作用以调控其功能，这些其他免疫细胞类型包括T细胞、树突细胞、巨噬细胞和天然杀伤细胞。在一些实施方案中，本文所述的化合物等可用于与具有高MDSC浸润的癌症组织(例如，肿瘤)相关的方法中，这些癌症包括具有高基底水平的巨噬细胞和/或MDSC浸润的实体肿瘤。

在一些实施方案中，本发明的化合物可用于治疗肺部炎症，包括博来霉素诱导型肺纤维化和与腺苷脱氨酶缺乏症相关的损伤(Baraldi等人，Chem.Rev.,2008,108,238-263)。

在一些实施方案中，本发明的化合物可用作炎性疾病诸如过敏反应(例如，A2B腺苷受体依赖性过敏反应)及其他腺苷受体依赖性免疫反应的治疗。可通过本发明的化合物治疗的其他炎性疾病包括呼吸病症、败血症、再灌注损伤和血栓形成。

在一些实施方案中，本发明的化合物可用作心血管疾病诸如冠状动脉疾病(心肌梗塞、心绞痛、心脏衰竭)、脑血管疾病(中风、短暂性脑缺血发作)、外周动脉疾病和主动脉粥样硬化及动脉瘤的治疗。动脉粥样硬化为许多类型的心血管疾病的潜在病因。动脉粥样硬化在具有脂纹的青春期开始，其在成年期进展成斑块，且最终导致引起血管闭塞的栓塞事件，从而引起临床上显著的发病率和死亡率。A2B腺苷受体和A2A腺苷受体的拮抗剂可有利于预防动脉粥样硬化斑块形成(Eisenstein,A.等人，J.Cell Physiol.,2015,230(12),2891-2897)。

在一些实施方案中，本发明的化合物可用作以下项的治疗：运动活动的病症；由纹状黑质多巴胺系统的变性造成的缺乏症；及帕金森病；抑郁症的一些激励症状(Collins,L.E.等人，Pharmacol.Biochem.Behav.,2012,100,498-505.)。

在一些实施方案中，本发明的化合物可用作糖尿病及相关病症诸如胰岛素抵抗的治疗。糖尿病影响腺苷的产生及刺激IL-6和CRP产生的A2B腺苷受体(A2BR)的表达、胰岛素抵抗以及A

据信本文提供的化合物例如式(I)化合物或其任何实施方案可具有令人满意的药理学曲线和有希望的生物药剂学性质，诸如毒理学曲线、代谢和药物代谢动力学性质、溶解度和渗透性。应了解适当生物药剂学性质的确定在本领域技术人员的知识范围内，例如确定细胞中的细胞毒性或对某些靶标或通道的抑制以确定潜在毒性。

可互换使用的术语“个体”或“患者”是指任何动物，包括哺乳动物，优选小鼠、大鼠、其他啮齿动物、兔、狗、猫、猪、牛、绵羊、马或灵长类动物，且最优选为人类。

短语“治疗有效量”是指在组织、系统、动物、个体或人类中引发研究人员、兽医、医学医生或其他临床医师所寻求的生物反应或医学反应的活性化合物或药剂的量。

如本文所用，术语“治疗(treating或treatment)”是指以下中的一者或多者：(1)抑制疾病；例如在正经历或显示疾病、病状或病症的病理或症状的个体中抑制疾病、病状或病症(即，遏制病理和/或症状的进一步发展)；和(2)改善疾病；例如在正经历或显示疾病、病状或病症的病理或症状的个体中改善疾病、病状或病症(即，逆转病理和/或症状)，诸如降低疾病的严重性。

在一些实施方案中，本发明的化合物可用于预防或降低发展本文提及的任何疾病的风险；例如，在可易患疾病、病状或病症但尚未经历或显示所述疾病的病理或症状的个体中预防或降低发展所述疾病、病状或病症的风险。

在一些实施方案中，本文提供的A2A和A2B双重抑制剂可与一种或多种免疫检查点抑制剂组合用于治疗如本文所述的癌症。在一个实施方案中，与如本文所述的一种或多种免疫检查点抑制剂的组合可用于治疗黑色素瘤。本发明的化合物可与一种或多种免疫检查点抑制剂组合使用。例示性免疫检查点抑制剂包括针对诸如CD20、CD28、CD40、CD122、CD96、CD73、CD47、GITR、CSF1R、JAK、PI3Kδ、PI3Kγ、TAM、精氨酸酶、HPK1、CD137(也称为4-1BB)、ICOS、B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、LAG3、TIM3、VISTA、TIGIT、PD-1、PD-L1和PD-L2的免疫检查点分子的抑制剂。在一些实施方案中，所述免疫检查点分子为选自CD27、CD28、CD40、ICOS、OX40、GITR和CD137的刺激检查点分子。在一些实施方案中，免疫检查点分子为选自A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、IDO、KIR、LAG3、PD-1、TIM3、TIGIT和VISTA的抑制性检查点分子。在一些实施方案中，本文所提供的本发明的化合物可与选自KIR抑制剂、TIGIT抑制剂、LAIR1抑制剂、CD160抑制剂、2B4抑制剂和TGFRβ抑制剂的一种或多种药剂组合使用。

在一些实施方案中，本文提供的A2A和A2B双重抑制剂可与免疫检查点分子例如OX40、CD27、OX40、GITR和CD137(也称为4-1BB)的一种或多种激动剂组合使用。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是抗PD1抗体、抗PD-L1抗体或抗CTLA-4抗体。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是PD-1的抑制剂，例如抗PD-1单克隆抗体。在一些实施方案中，抗PD-1单克隆抗体是纳武单抗、派姆单抗(也称为MK-3475)、得瓦鲁单抗(durvalumab)

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是PD-L1的抑制剂，例如抗PD-L1单克隆抗体。在一些实施方案中，抗PD-L1单克隆抗体是BMS-935559、MEDI4736、MPDL3280A(也称为RG7446)或MSB0010718C。在一些实施方案中，抗PD-L1单克隆抗体是MPDL3280A或MEDI4736。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂为PD-1和PD-L1的抑制剂，例如抗PD-1/PD-L1单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗PD-1/PD-L1为MCLA-136。

在一些实施方案中，抑制剂为MCLA-145。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是CTLA-4的抑制剂，例如抗CTLA-4抗体。在一些实施方案中，抗CTLA-4抗体为伊匹单抗、曲美木单抗、AGEN1884或CP-675,206。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是LAG3的抑制剂，例如抗LAG3抗体。在一些实施方案中，抗LAG3抗体为BMS-986016、LAG525或INCAGN2385。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂为TIM3的抑制剂，例如抗TIM3抗体。在一些实施方案中，抗TIM3抗体为INCAGN2390、MBG453或TSR-022。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是GITR的抑制剂，例如抗GITR抗体。在一些实施方案中，抗GITR抗体为TRX518、MK-4166、INCAGN1876、MK-1248、AMG228、BMS-986156、GWN323或MEDI1873。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂为OX40的激动剂，例如OX40激动剂抗体或OX40L融合蛋白。在一些实施方案中，抗OX40抗体为MEDI0562、MOXR-0916、PF-04518600、GSK3174998或BMS-986178。在一些实施方案中，OX40L融合蛋白是MEDI6383。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂为CD20的抑制剂，例如抗CD20抗体。在一些实施方案中，抗CD20抗体为奥妥珠单抗(obinutuzumab)或利妥昔单抗。

本发明的化合物可与双特异性抗体组合使用。在一些实施方案中，双特异性抗体的结构域中的一种靶向PD-1、PD-L1、CTLA-4、GITR、OX40、TIM3、LAG3、CD137、ICOS、CD3、肿瘤特异性抗原(例如，CD70)或TGFβ受体。

在一些实施方案中，本发明的化合物可与一种或多种代谢酶抑制剂组合使用。在一些实施方案中，所述代谢酶抑制剂为IDO1、TDO或精氨酸酶的抑制剂。IDO1抑制剂的实例包括epacadostat、NLG919、BMS-986205、PF-06840003、IOM2983、RG-70099和LY338196。

如全文提供的，这些额外化合物、抑制剂、药剂等可与本发明化合物组合于单一或连续剂型中，或者其可以单独剂型同时或依序施用。

癌细胞生长和存活可受多个信号传导路径影响。因此，组合在靶标中展现不同偏好的不同酶/蛋白质/受体抑制剂(其调节这些靶标的活性)来治疗这样的病状是适用的。靶向不止一种信号传导路径(或给定信号传导路径中所涉及的不止一种生物分子)可降低细胞群中出现抗药性的可能性和/或降低治疗的毒性。

本发明的化合物可与一种或多种用于治疗诸如癌症的疾病的酶/蛋白质/受体抑制剂或一种或多种疗法组合使用。可用组合疗法治疗的疾病和适应症的实例包括如本文所述的那些。

本发明的化合物可与一种或多种额外药剂诸如化学治疗剂、免疫肿瘤治疗剂、代谢酶抑制剂、趋化因子受体抑制剂和磷酸酶抑制剂以及靶向疗法诸如Bcr-Abl、Flt-3、EGFR、HER2、JAK、c-MET、VEGFR、PDGFR、c-Kit、IGF-1R、RAF和FAK激酶抑制剂组合使用。所述一种或多种额外药剂可同时或依序施用到患者。

例如，如本文所公开的化合物可与以下激酶的一种或多种抑制剂组合用于治疗本文所述的癌症及其他疾病或病症：Akt1、Akt2、Akt3、TGF-βR、PKA、PKG、PKC、CaM-激酶、磷酸化酶激酶、MEKK、ERK、MAPK、mTOR、EGFR、HER2、HER3、HER4、INS-R、IGF-1R、IR-R、PDGFαR、PDGFβR、CSFIR、KIT、FLK-II、KDR/FLK-1、FLK-4、flt-1、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、c-Met、Ron、Sea、TRKA、TRKB、TRKC、FLT3、VEGFR/Flt2、Flt4、EphA1、EphA2、EphA3、EphB2、EphB4、Tie2、Src、Fyn、Lck、Fgr、Btk、Fak、SYK、FRK、JAK、ABL、ALK和B-Raf。可与本发明的化合物组合用于治疗本文所述的癌症及其他疾病和病症的抑制剂的非限制性实例包括FGFR抑制剂(FGFR1、FGFR2、FGFR3或FGFR4，例如INCB54828、INCB62079和INCB63904)、JAK抑制剂(JAK1和/或JAK2，例如芦可替尼(ruxolitinib)、巴瑞替尼(baricitinib)或INCB39110)、IDO抑制剂(例如，epacadostat、NLG919或BMS-986205)、LSD1抑制剂(例如，INCB59872和INCB60003)、TDO抑制剂、PI3K-δ抑制剂(例如，INCB50797和INCB50465)、Pim抑制剂、CSF1R抑制剂、TAM受体酪氨酸激酶(Tyro-3、Axl和Mer)、组蛋白脱乙酰酶抑制剂(HDAC)诸如HDAC8抑制剂、血管生成抑制剂、白介素受体抑制剂、溴端和外端家族成员抑制剂(例如，溴结构域抑制剂或BET抑制剂，诸如INCB54329和INCB57643)以及腺苷受体拮抗剂或其组合。

用于组合疗法的例示性抗体包括但不限于曲妥珠单抗(Trastuzumab)(例如，抗HER2)、雷珠单抗(Ranibizumab)(例如，抗VEGF-A)、贝伐单抗(Bevacizumab)(商品名阿伐斯汀(Avastin)，例如抗VEGF)、帕尼单抗(Panitumumab)(例如，抗EGFR)、西妥昔单抗(Cetuximab)(例如，抗EGFR)、利妥星(Rituxan)(抗CD20)和针对c-MET的抗体。

以下药剂中的一种或多种可与本发明的化合物组合使用且作为非限定性清单提呈：细胞生长抑制剂、顺铂、阿霉素(doxorubicin)、泰索帝(taxotere)、紫杉醇(taxol)、依托泊苷(etoposide)、伊立替康(irinotecan)、camptostar、拓扑替康(topotecan)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)、埃博霉素(epothilones)、他莫昔芬(tamoxifen)、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤(methoxtrexate)、替莫唑胺(temozolomide)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、SCH 66336、R115777、L778,123、BMS214662、IRESSA

本发明的化合物可进一步与例如通过化学疗法、辐射疗法、肿瘤靶向疗法、辅助疗法、免疫疗法或外科手术治疗癌症的其他方法组合使用。免疫疗法的实例包括细胞因子治疗(例如，干扰素、GM-CSF、G-CSF、IL-2)、CRS-207免疫疗法、癌症疫苗、单克隆抗体、过继性T细胞转移、Toll受体激动剂、STING激动剂、溶瘤病毒疗法和免疫调节小分子，包括沙利度胺或JAK1/2抑制剂等。这些化合物可与一种或多种抗癌药物(诸如化学治疗剂)组合施用。例示性化学治疗剂包括以下任一种：阿巴瑞克(abarelix)、阿地白介素(aldesleukin)、阿仑单抗(alemtuzumab)、阿利维A酸(alitretinoin)、别嘌醇(allopurinol)、六甲蜜胺(altretamine)、阿那曲唑(anastrozole)、三氧化二砷、天门冬酰胺酶(asparaginase)、氮杂胞苷(azacitidine)、贝伐单抗(bevacizumab)、蓓萨罗丁(bexarotene)、巴瑞替尼(baricitinib)、博来霉素(bleomycin)、硼替佐米(bortezombi)、硼替佐米(bortezomib)、静脉用白消安(busulfan intravenous)、口服白消安(busulfan oral)、卡普睾酮(calusterone)、卡培他滨(capecitabine)、卡铂(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、西妥昔单抗(cetuximab)、苯丁酸氯芥(chlorambucil)、顺铂(cisplatin)、克拉屈滨、氯法拉滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素、达肝素钠(dalteparin sodium)、柔红霉素、地西他滨(decitabine)、地尼白介素(denileukin)、地尼白介素-白喉连接物(denileukin diftitox)、右丙亚胺(dexrazoxane)、多烯紫杉醇、阿霉素、屈他雄酮丙酸酯、依库珠单抗(eculizumab)、表柔比星、厄洛替尼、雌莫司汀、磷酸依托泊苷、依托泊苷、依西美坦、柠檬酸芬太尼(fentanyl citrate)、非格司亭(filgrastim)、氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟维司群、吉非替尼、吉西他滨、吉妥珠单抗奥唑米星(gemtuzumabozogamicin)、乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、乙酸组氨瑞林(histrelin acetate)、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、伊达比星、异环磷酰胺、甲磺酸伊马替尼(imatinibmesylate)、干扰素α2a(interferon alfa 2a)、伊立替康、二甲苯磺酸拉帕替尼(lapatinibditosylate)、来那度胺(lenalidomide)、来曲唑(letrozole)、亚叶酸(leucovorin)、乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)、左旋咪唑、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺(meclorethamine)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、美法仑、巯基嘌呤、甲氨蝶呤(methotrexate)、甲氧沙林(methoxsalen)、丝裂霉素C(mitomycin C)、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、苯丙酸诺龙(nandrolone phenpropionate)、奈拉滨(nelarabine)、若莫单抗(nofetumomab)、奥拉帕尼(olaparib)、奥沙利铂(oxaliplatin)、太平洋紫杉醇、帕米膦酸盐(pamidronate)、帕尼单抗(panitumumab)、培门冬酶(pegaspargase)、乙二醇化非格司亭(pegfilgrastim)、培美曲塞二钠(pemetrexeddisodium)、喷司他丁(pentostatin)、胍血生(pipobroman)、普卡霉素(plicamycin)、丙卡巴肼(procarbazine)、喹吖因(quinacrine)、拉布立酶(rasburicase)、利妥昔单抗(rituximab)、鲁索替尼(ruxolitinib)、卢卡帕尼(rucaparib)、链脲佐菌素、他莫昔芬、替莫唑胺、替尼泊苷、睾内酯、沙利度胺(thalidomide)、硫鸟嘌呤、噻替派、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、维甲酸(tretinoin)、尿嘧啶氮芥、戊柔比星(valrubicin)、长春花碱、长春新碱、长春瑞宾、沃雷诺司(vorinostat)、尼拉帕尼(niraparib)、维利帕尼(veliparib)、他拉唑帕尼(talazoparib)和唑来膦酸盐(zoledronate)。

化学治疗剂的额外实例包括蛋白酶体抑制剂(例如，硼替佐米(bortezomib))、沙利度胺、来那度胺(revlimid)；及DNA损伤剂，诸如美法仑、阿霉素、环磷酰胺、长春新碱、依托泊苷、卡莫司汀等。

例示性Bcr-Abl抑制剂包括甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate，GLEEVAC

例示性合适Flt-3抑制剂包括米哚妥林(midostaurin)、来他替尼(lestaurtinib)、利尼伐尼(linifanib)、舒尼替尼(sunitinib)、舒尼替尼、马来酸盐、索拉非尼(sorafenib)、奎扎替尼(quizartinib)、克莱拉尼(crenolanib)、帕克替尼(pacritinib)、坦度替尼(tandutinib)、PLX3397和ASP2215以及其药学上可接受的盐。其他例示性合适Flt-3抑制剂包括如WO 03/037347、WO 03/099771和WO 04/046120中公开的化合物及其药学上可接受的盐。

例示性合适RAF抑制剂包括达拉菲尼(dabrafenib)、索拉非尼(sorafenib)和维罗非尼(vemurafenib)及其药学上可接受的盐。其他例示性合适RAF抑制剂包括如WO 00/09495和WO 05/028444中公开的化合物及其药学上可接受的盐。

例示性合适FAK抑制剂包括VS-4718、VS-5095、VS-6062、VS-6063、BI853520和GSK2256098及其药学上可接受的盐。其他例示性合适FAK抑制剂包括如WO 04/080980、WO04/056786、WO 03/024967、WO 01/064655、WO 00/053595和WO 01/014402中公开的化合物及其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，本发明的化合物可与一种或多种其他激酶抑制剂(包括伊马替尼(imatinib))组合使用，特定地，用于治疗对伊马替尼或其他激酶抑制剂具有抗性的患者。

在一些实施方案中，本发明的化合物可在癌症治疗中与化学治疗剂组合使用，且如与对单独化学治疗剂的反应相比可改善治疗反应，而不加剧其毒性效应。在一些实施方案中，本发明的化合物可与本文所提供的化学治疗剂组合使用。例如，用于治疗多发性骨髓瘤的额外药剂可包括不限于美法仑、美法仑加泼尼松[MP]、阿霉素、地塞米松和万珂(硼替佐米)。用于治疗多发性骨髓瘤的其他额外药剂包括Bcr-Abl、Flt-3、RAF和FAK激酶抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是烷化剂、蛋白酶体抑制剂、皮质类固醇或免疫调节剂。烷化剂的实例包括环磷酰胺(CY)、美法仑(MEL)和苯达莫司汀(bendamustine)。在一些实施方案中，蛋白酶体抑制剂是卡非佐米(carfilzomib)。在一些实施方案中，皮质类固醇是地塞米松(DEX)。在一些实施方案中，免疫调节剂是来那度胺(LEN)或泊马度胺(POM)。累加或协同效应为组合本发明的PI3K抑制剂与另一药剂的所要结果。

在一些实施方案中，本发明的化合物可与JAK或PI3Kδ的抑制剂组合使用。

这些药剂可与本发明化合物组合于单一或连续剂型中，或者这些药剂可以单独剂型同时或依序施用。

本发明的化合物可与一种或多种其他抑制剂或一种或多种疗法组合用于治疗感染。感染的实例包括病毒感染、细菌感染、真菌感染或寄生虫感染。

在一些实施方案中，诸如地塞米松的皮质类固醇与本发明的化合物组合施用到患者，其中与连续相反，间歇施用地塞米松。

如本文所述的式(I)或任何式的化合物、如权利要求中任一项所述和本文所述的化合物或其盐可与另一种免疫原剂诸如癌细胞、纯化的肿瘤抗原(包括重组蛋白、肽和碳水化合物分子)、细胞和用编码免疫刺激细胞因子的基因转染的细胞组合。可使用的肿瘤疫苗的非限制性实例包括黑色素瘤抗原的肽，诸如gp100、MAGE抗原、Trp-2、MARTI和/或酪氨酸酶的肽，或经转染以表达细胞因子GM-CSF的肿瘤细胞。

如本文所述的式(I)或任何式的化合物、如权利要求中任一项所述和本文所述的化合物或其盐可与疫苗接种方案组合用于治疗癌症。在一些实施方案中，肿瘤细胞被转导以表达GM-CSF。在一些实施方案中，肿瘤疫苗包括来自涉及人类肿瘤的病毒，诸如人类乳头状瘤病毒(HPV)、肝炎病毒(HBV和HCV)及卡波西疱疹肉瘤病毒(KHSV)的蛋白。

在一些实施方案中，如本文所述的式(I)或任何式的化合物、如权利要求中任一项所述和本文所述的化合物或其盐可与树突细胞免疫接种组合以活化强效抗肿瘤反应。

本发明的化合物可与将表达Feα或Feγ受体的效应细胞靶向肿瘤细胞的双特异性大环肽组合使用。本发明的化合物也可与活化宿主免疫反应的大环肽组合。

在一些其他实施方案中，本发明的化合物与其他治疗剂的组合可在骨髓移植或干细胞移植之前、期间和/或之后施用到患者。本发明的化合物可与骨髓移植组合用于治疗各种造血来源的肿瘤。

如本文所述的式(I)或任何式的化合物、如权利要求中任一项所述和本文所述的化合物或其盐可与疫苗组合用于刺激对病原体、毒素和自身抗原的免疫反应。这种治疗方法可特别适用的病原体的实例包括目前无有效疫苗的病原体或常规疫苗不完全有效的病原体。这些病原体包括但不限于HIV、肝炎(A、B和C)、流感病毒、疱疹病毒、贾第虫属、疟疾、利什曼虫、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌。

引起可通过本发明的方法治疗的感染的病毒包括但不限于人类乳头瘤病毒、流行性感冒、肝炎A、B、C或D病毒、腺病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒、人类巨细胞病毒、严重急性呼吸综合征病毒、埃博拉病毒、麻疹病毒、疱疹病毒(例如，VZV、HSV-1、HAV-6、HSV-II和CMV、爱泼斯坦巴尔病毒)、黄病毒、埃可病毒、鼻病毒、柯萨奇病毒、玉米病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、细小病毒、痘苗病毒、HTLV病毒、登革热病毒、乳头瘤病毒、软疣病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、JC病毒和虫媒病毒脑炎病毒。

引起可通过本发明的方法治疗的感染的致病细菌包括但不限于衣原体、立克次体细菌、分枝杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌和淋球菌(conococci)、克雷伯氏菌、变形杆菌、沙雷菌、假单胞菌、军团菌、白喉、沙门氏菌、杆菌、霍乱、破伤风、肉毒中毒、炭疽、鼠疫、钩端螺旋体病和莱姆病细菌。

引起可通过本发明的方法治疗的感染的致病真菌包括但不限于念珠菌属(白色念珠菌、克鲁斯念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌等)、新型隐球菌、曲菌(熏烟色曲菌、黑曲菌等)、毛霉目属(毛霉属、犁头霉属、根霉属)、申克氏孢子丝菌、皮炎芽生菌、巴西副球孢子菌、粗球孢子菌和荚膜组织浆菌。引起可通过本发明的方法治疗的感染的致病寄生虫包括但不限于溶组织内阿米巴、结肠小袋绦虫、福氏耐格里阿米巴、棘阿米巴属、贾第鞭毛虫、隐孢子虫、卡氏肺孢子虫、间日疟原虫、巴贝斯虫、布氏锥虫、克氏锥虫、杜氏利甚曼原虫、弓形虫和巴西日本血吸虫。

本领域技术人员已知用于安全和有效施用这些化学治疗剂中的大多数的方法。另外，这些治疗剂的施用描述在标准文献中。例如，多种化学治疗剂的施用描述于“Physicians'Desk Reference”(PDR，例如1996年版,Medical Economics Company,Montvale,NJ)中，其公开内容以引用的方式并入本文中，如同全文阐述一般。

药物制剂和剂型

当用作药剂时，本发明的化合物可以药物组合物的形式施用。这些组合物可以制药领域中熟知的方式制备，且视需要局部治疗或全身性治疗和欲治疗的区域而定，可通过多种途径施用。施用可为局部(包括经皮、表皮、眼部和粘膜，包括经鼻内、阴道和直肠递送)、经肺(例如，通过吸入或吹入粉剂或气雾剂，包括通过喷雾器；气管内或鼻内)、口服或肠胃外。肠胃外施用包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内肌肉内或注射或输注；或颅内，例如鞘内或脑室内施用。肠胃外施用可呈单一单次剂量形式，或可例如通过连续灌注泵达成。用于局部施用的药物组合物和制剂可包括经皮贴片、软膏剂、洗剂、乳膏剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉剂。常规药物载剂，水性、粉末或油性基质，增稠剂等可为必需或可需的。

本发明还包括药物组合物，其含有与一种或多种药学上可接受的载剂(赋形剂)组合的本发明化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。在一些实施方案中，所述组合物适用于局部施用。在制备本发明组合物时，所述活性成分通常与赋形剂混合，由赋形剂稀释或封入呈例如胶囊、药囊、纸或其他容器形式的载剂中。当赋形剂充当稀释剂时，其可为充当活性成分的媒介物、载剂或介质的固体、半固体或液体材料。因此，所述组合物可呈以下形式：片剂、丸剂、粉剂、口含锭、药囊、扁囊剂、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆、气雾剂(呈固体形式或于液体介质中)、含有例如高达10重量％活性化合物的软膏剂、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌可注射溶液和无菌封装粉剂。

在制备制剂时，活性化合物可在与其他成分组合之前进行研磨以提供适当粒径。如果活性化合物大体上不可溶，则可将其研磨至小于200目的粒径。如果活性化合物大体上可溶于水，则粒径可通过研磨来调整以提供制剂中大体上均一的分布，例如约40目。

本发明的化合物可使用已知研磨程序(诸如湿磨)进行研磨以获得适于片剂形成和其他制剂类型的粒径。本发明化合物的精细分散(纳米微粒)制剂可通过本领域中已知的工艺制备，例如参见国际申请第WO 2002/000196号。

合适赋形剂的一些实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、褐藻酸盐、黄蓍、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。所述制剂可额外包括：润滑剂，诸如滑石、硬脂酸镁和矿物油；湿润剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂，诸如羟基-苯甲酸甲酯和羟基-苯甲酸丙酯；甜味剂；及调味剂。本发明的组合物可通过使用本领域已知的程序配制成在向患者施用之后提供活性成分的快速、持续或延缓的释放。

所述组合物可配制成单位剂型，各剂含有约5mg至约1000mg(1g)，更通常约100mg至约500mg活性成分。术语“单位剂型”是指适合作为用于人类个体和其他哺乳动物的单位剂量的物理离散单元，各单元含有经计算以产生所要治疗效果的预定量的活性材料以及合适的药物赋形剂。

在一些实施方案中，本发明的组合物含有约5mg至约50mg活性成分。本领域的普通技术人员应了解这体现含有约5mg至约10mg、约10mg至约15mg、约15mg至约20mg、约20mg至约25mg、约25mg至约30mg、约30mg至约35mg、约35mg至约40mg、约40mg至约45mg或约45mg至约50mg活性成分的组合物。

在一些实施方案中，本发明的组合物含有约50mg至约500mg活性成分。本领域的普通技术人员应了解这体现含有约50mg至约100mg、约100mg至约150mg、约150mg至约200mg、约200mg至约250mg、约250mg至约300mg、约350mg至约400mg、约450mg至约500mg活性成分的组合物。

在一些实施方案中，本发明的组合物含有约500mg至约1000mg活性成分。本领域的普通技术人员应了解这体现含有约500mg至约550mg、约550mg至约600mg、约600mg至约650mg、约650mg至约700mg、约700mg至约750mg、约750mg至约800mg、约800mg至约850mg、约850mg至约900mg、约900mg至约950mg或约950mg至约1000mg活性成分的组合物。

本文所述的化合物的类似剂量可用于本发明的方法和用途中。

活性化合物可在广泛剂量范围内有效且通常以药学有效量施用。然而，应了解实际施用的化合物的量通常将由医师根据相关情形来确定，这些情形包括欲治疗的病状、所选的施用途径、施用的实际化合物、个别患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重性等。

为了制备固体组合物，诸如片剂，将主要活性成分与药物赋形剂混合以形成含有本发明化合物的均质混合物的固体预配制组合物。当将这些预配制组合物称作均质时，活性成分通常均匀分散在组合物中，使得所述组合物可容易地再分成同等有效单位剂型，诸如片剂、丸剂和胶囊。然后将此固体预制剂再分成上述类型的单位剂型，这些单位剂型含有例如约0.1mg至约1000mg本发明的活性成分。

本发明的片剂或丸剂可包覆包衣或另外混配以提供提供延长作用的优势的剂型。例如，所述片剂或丸剂可包含内部剂量和外部剂量组分，后者呈包覆前者的包膜形式。两种组分可由用于抵抗胃中的崩解且允许内部组分完整进入十二指肠或延迟释放的肠溶层分离。多种材料可用于这样的肠溶层或包衣，这样的材料包括多种聚合酸和聚合酸与诸如虫胶、十六醇和乙酸纤维素的材料的混合物。

可并有本发明的化合物和组合物以便经口或通过注射施用的液体形式包括水溶液、适合调味的糖浆、水性或油性悬浮液和用可食用油(诸如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油)调味的乳液，以及酏剂及类似药物媒介物。

用于吸入或吹入的组合物包括在药学上可接受的水性或有机溶剂中的溶液和悬浮液，或其混合物，以及粉剂。这些液体或固体组合物可含有如上文所述的合适的药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，这些组合物通过经口或经鼻呼吸途径施用以达成局部或全身性作用。组合物可通过使用惰性气体雾化。雾化溶液可直接自雾化装置呼吸，或雾化装置可连接到面罩、帷罩或间歇式正压呼吸机。溶液、悬浮液或粉剂组合物可经口或经鼻自以适当方式递送制剂的装置施用。

局部制剂可含有一种或多种常规载剂。在一些实施方案中，软膏剂可含有水和一种或多种选自例如液体石蜡、聚氧乙烯烷基醚、丙二醇、白凡士林(white Vaseline)等的疏水性载剂。乳膏剂的载剂组成可基于水与甘油和一种或多种其他组分(例如，单硬脂酸甘油酯、PEG-单硬脂酸甘油酯和十六基硬脂醇)的组合。可使用异丙醇和水，适当时与其他组分(诸如甘油、羟乙基纤维素等)组合来配制凝胶剂。在一些实施方案中，局部制剂含有至少约0.1重量％、至少约0.25重量％、至少约0.5重量％、至少约1重量％、至少约2重量％或至少约5重量％的本发明的化合物。局部制剂可适当地封装于例如100g的管中，这些管任选缔合有治疗所选适应症(例如，牛皮癣或其他皮肤病状)的说明书。

施用到患者的化合物或组合物的量将视所施用物、施用目的(诸如预防或疗法)、患者状态、施用方式等而变化。在治疗应用中，组合物可以足以治愈或至少部分遏制疾病及其并发症的症状的量施用到已罹患所述疾病的患者。有效剂量将取决于所治疗的疾病状况，以及主治临床医师视诸如疾病严重性、患者年龄、体重和一般状况等因素所作的判断。

施用到患者的组合物可呈上述药物组合物形式。这些组合物可通过常规灭菌技术来灭菌，或可无菌过滤。水溶液可被封装以原样使用，或冻干，冻干制剂在施用之前与无菌水性载剂组合。化合物制剂的pH通常将在3与11之间、更优选为5至9且最优选为7至8。应了解某些前述赋形剂、载剂或稳定剂的使用将导致形成药学盐。

本发明的化合物的治疗剂量可根据例如治疗所欲达成的特定用途、化合物的施用方式、患者的健康和状况以及处方医师的判断而变化。药物组合物中本发明化合物的比例或浓度可视许多因素而变化，这些因素包括剂量、化学特征(例如，疏水性)和施用途径。例如，本发明的化合物可在含有约0.1w/v％至约10w/v％化合物的生理缓冲水溶液中提供以用于肠胃外施用。一些典型剂量范围为每日约1μg/kg至约1g/kg体重。在一些实施方案中，剂量范围为每日约0.01mg/kg至约100mg/kg体重。剂量可能视诸如疾病或病症的类型和进展程度、特定患者的总体健康状态、所选化合物的相对生物功效、赋形剂的配方和其施用途径的变量而定。有效剂量可自源于活体外或动物模型测试系统的剂量-反应曲线外推。

本发明的组合物还可包括一种或多种额外药剂，诸如化学治疗剂、类固醇、消炎化合物或免疫抑制剂，其实例列于本文中。

标记的化合物和测定方法

本发明的另一方面涉及本发明的标记的化合物(放射性标记的、荧光标记的等)，其不仅将适用于成像技术，而且适用于活体外测定和活体内测定两者，这些测定用于定位和定量组织样品(包括人类)中的A2A和/或A2B受体，且用于通过抑制标记的化合物的结合来鉴别A2A和/或A2B拮抗剂。本发明的化合物的一个或多个原子的取代也可适用于生成经分化的ADME(吸收、分布、代谢和分泌。)因此，本发明包括含有这些标记或取代的化合物的腺苷受体(例如，A2A和/或A2B)测定。

本发明还包括同位素标记的本发明的化合物。“同位素”或“放射性标记的”化合物为其中一个或多个原子由具有不同于自然界中通常发现(即，天然存在)的原子质量或质量数的原子质量或质量数的原子置换或取代的本发明的化合物。可并入本发明的化合物中的适合的放射性核素包括但不限于

本文呈现的化合物的一种或多种组成原子可以被天然或非天然丰度的原子的同位素置换或取代。在一些实施方案中，所述化合物包含至少一个氘原子。例如，本文呈现的化合物中的一个或多个氢原子可被氘置换或取代(例如，C

在一些实施方案中，连接至如本文所述的任何“烷基”、“烯基”、“炔基”、“芳基”、“苯基、“环烷基”、“杂环烷基”或“杂芳基”取代基或“-C

用于将同位素包括到有机化合物中的合成方法为本领域已知的(DeuteriumLabeling in Organic Chemistry，Alan F.Thomas(New York,N.Y.,Appleton-Century-Crofts,1971；The Renaissance of H/D Exchange，Jens Atzrodt、Volker Derdau、Thorsten Fey和Jochen Zimmermann,Angew.Chem.Int.2007版,7744-7765；The OrganicChemistry of Isotopic Labelling by James R.Hanson,Royal Society of Chemistry,2011)。同位素标记的化合物可用于各种研究诸如NMR光谱、代谢实验和/或测定中。

用诸如氘的较重同位素进行的取代可提供由于较大代谢稳定性(例如，活体内半衰期增加或剂量需求减少)所致的某些治疗性优势，且因此在某些情形下可能是优选的。(参见例如A.Kerekes等人，J.Med.Chem.2011,54,201-210；R.Xu等人，J.LabelCompd.Radiopharm.2015,58,308-312)。具体地，在一个或多个代谢位点处的取代可提供一种或多种治疗优势。

并入本发明放射性标记的化合物中的放射性核素将取决于所述放射性标记的化合物的特定应用。例如，对于活体外腺苷受体标记和竞争测定，并入

应了解“放射性标记的”或“标记的化合物”为已并有至少一种放射性核素的化合物。在一些实施方案中，放射性核素选自由

本发明还可包括用于将放射性同位素并入本发明的化合物中的合成方法。本领域中熟知用于将放射性同位素并入有机化合物中的合成方法，且本领域的普通技术人员将容易地识别可应用于本发明的化合物的方法。

本发明的标记的化合物可用于筛选测定中以鉴定/评估化合物。例如，可通过追踪标记以监测标记的新近合成或鉴别的化合物(即，测试化合物)在与腺苷受体接触时的浓度变化来评估其结合腺苷受体的能力。例如，可评估测试化合物(标记的)的降低已知会结合腺苷受体的另一化合物(即，标准化合物)的结合的能力。相应地，测试化合物与所述标准化合物竞争结合于腺苷受体的能力直接地与其结合亲和力相关。相反，在一些其他筛选测定中，标准化合物是标记的且测试化合物是未标记的。因此，监测标记的标准化合物的浓度以评价标准化合物与测试化合物之间的竞争，且因此确定测试化合物的相对结合亲和力。

试剂盒

本发明还包括适用于例如治疗或预防腺苷受体相关疾病或病症(诸如癌症、炎性疾病、心血管疾病或神经变性疾病)的药物试剂盒，其包括含有包含治疗有效量的本发明的化合物的药物组合物的一个或多个容器。这些试剂盒可在必要时还包括各种常规药物试剂盒组分中的一种或多种，诸如具有一种或多种药学上可接受的载剂的容器、额外容器等，如本领域技术人员应容易了解。指示欲施用组分的数量、施用准则和/或混合这些组分的准则的呈插页或标签形式的说明书也包括于试剂盒中。

本发明将借助于特定实例更详细地加以描述。提供以下实例以达成说明性目的，且不欲以任何方式限制本发明。本领域技术人员应容易了解可改变或修改以生成基本上相同结果的多种非关键性参数。已根据至少一种本文所述的测定发现实施例的化合物抑制腺苷受体(例如，A2A和/或A2B)的活性。

实施例

在Waters质量定向分级分离系统上执行一些所制备的化合物的制备型LC-MS纯化。基本设备设置、协议和用于操作这些系统的控制软件已详细描述于文献中(参见例如“Two-Pump At Column Dilution Configuration for Preparative LC-MS”,K.Blom,J.Combi.Chem.,4,295(2002)；“Optimizing Preparative LC-MS Configurations andMethods for Parallel Synthesis Purification”,K.Blom,R.Sparks,J.Doughty,G.Everlof,T.Haque,A.Combs,J.Combi.Chem.,5,670(2003)；以及“Preparative LC-MSPurification:Improved Compound Specific Method Optimization”,K.Blom,B.Glass,R.Sparks,A.Combs,J.Combi.Chem.,6,874-883(2004))。分离的化合物通常经历在以下条件下用于杂质分析的分析性液相色谱质谱(LCMS)：仪器：Agilent 1100系列，LC/MSD，管柱：Waters Sunfire

一些所制备的化合物也如实施例中所指示以制备型规模通过具有MS检测器的反相高效液相色谱(RP-HPLC)或快速色谱(硅胶)来分离。如下为典型制备型反相高效液相色谱(RP-HPLC)管柱条件：

pH＝2纯化：Waters Sunfire

pH＝10纯化：Waters XBridge

在制备规模下通过手性高效液相色谱在以下条件下将一些外消旋化合物分离成对映纯的样品：仪器：Agilent 1100制备型HPLC；管柱：Phenomenex Lux Cellulose-4，21.2x 250mm，5μm；以等度流动相己烷中的45％EtOH以20mL/分钟的流速洗脱。

实施例1.3-(5-氨基-8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：5-溴-2,6-二氯嘧啶-4-胺

向0℃的2,6-二氯嘧啶-4-胺(Combi-Blocks，目录号OR-0412)(10g，61mmol)在DMF(50mL)中的溶液中添加N-溴琥珀酰亚胺(11g，61mmol)。在室温下搅拌反应混合物16小时，之后添加水(100mL)。通过过滤收集所得沉淀物，然后干燥以得到所要产物(13.1g，88％)，所述产物未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤2：8-溴-5,7-二氯咪唑并[1,2-c]嘧啶

将2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(11mL，70mmol)添加至5-溴-2,6-二氯嘧啶-4-胺(2.0g，8.2mmol)在MeCN(25mL)中的混合物中。在120℃下搅拌所得混合物1小时，然后冷却至室温且在减压下浓缩。将残余物用EtOAc湿磨，得到呈HBr盐形式的所要产物(2.4g，84％)，所述产物未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤3：8-溴-7-氯咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

向8-溴-5,7-二氯咪唑并[1,2-c]嘧啶氢溴酸盐(2.2g，6.3mmol)在THF(30mL)中的溶液中添加浓氢氧化铵(57mL，14M)。在室温下搅拌反应混合物16小时，之后在减压下移除挥发物。通过过滤收集所得固体，用水(100mL)洗涤，然后干燥以得到所要产物(0.75g，48％)，所述产物未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤4：7-氯-8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

将[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)(7.3mg，10摩尔％)添加至8-溴-7-氯咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺(25mg，0.10mmol)、2,6-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(35mg，0.15mmol)和碳酸钠(32mg，0.30mmol)在THF(0.36mL)和水(0.07mL)中的混合物中。将混合物用氮气吹扫，然后在70℃下搅拌16小时。使反应混合物冷却至室温且在减压下浓缩。通过硅胶管柱快速色谱，用0至15％MeOH/DCM洗脱来纯化粗产物，以得到所要产物，所述产物未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤5：3-(5-氨基-8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-7-基)苄腈

向微波小管中添加7-氯-8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺(40mg，0.15mmol)、(3-氰基苯基)硼酸(64mg，0.44mmol)、磷酸三钾(120mg，0.59mmol)、DMF(2.4mL)、水(0.60mL)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)(11mg，10摩尔％)。将反应溶液用氮气吹扫，然后将微波小管密封且在120℃微波反应器中加热20分钟。使反应混合物冷却至室温，通过硅藻土塞用50％EtOAc/DCM过滤，然后在减压下浓缩。通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化粗产物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例2.7-(2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

用与对实施例1所述类似的程序，用(2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)硼酸置换步骤5中的(3-氰基苯基)硼酸来制备此化合物。通过制备型LCMS(pH＝10，MeCN/具有NH

实施例3.8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-3-(吗啉代甲基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

向8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺(用与实施例1所述类似的程序，用苯基硼酸置换步骤5中的(3-氰基苯基)硼酸来制备)(25mg，0.08mmol)和吗啉(9.5μL，0.16mmol)的混合物中添加(二乙酰氧基碘)苯(51mg，0.16mmol)。在50℃下搅拌反应混合物2小时，且通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例4.7-(3-甲氧基苯基)-8-(吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

将[1,1'-双(二环己基膦)二茂铁]二氯钯(II)(6.1mg，10摩尔％)添加至8-溴-7-氯咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺(实施例1步骤3中制备)(20mg，0.08mmol)、吡啶-4-基硼酸(12mg，0.10mmol)和碳酸铯(79mg，0.24mmol)在叔丁醇(0.45mL)和水(0.09mL)中的混合物中。将溶液用氮气吹扫，在75℃下搅拌2小时，且冷却至室温。然后添加碳酸铯(53mg，0.24mmol)、[1,1'-双(二环己基膦)二茂铁]二氯钯(II)(3.1mg，5摩尔％)和(3-甲氧基苯基)硼酸(18mg，0.12mmol)。在105℃下搅拌反应混合物4小时，且冷却至室温。通过硅藻土塞用50％EtOAc/DCM过滤反应物且在减压下浓缩。通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例5.7,8-二(吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

用与对实施例4所述类似的程序，用吡啶-4-基硼酸置换(3-甲氧基苯基)硼酸来制备此化合物。通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例6.7-(2-甲基呋喃-3-基)-8-(吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

用与对实施例4所述类似的程序，用4,4,5,5-四甲基-2-(2-甲基呋喃-3-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷置换(3-甲氧基苯基)硼酸来制备此化合物。另外，在105℃下搅拌反应混合物20小时。通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例7.7-(2-氟苯基)-8-(吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

用与对实施例4所述类似的程序，用(2-氟苯基)硼酸置换(3-甲氧基苯基)硼酸来制备此化合物。通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例8.7-(苯并呋喃-2-基)-8-(吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

用与对实施例4所述类似的程序，用苯并呋喃-2-基硼酸置换(3-甲氧基苯基)硼酸来制备此化合物。通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例9.7-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-8-(2-甲基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

步骤1：7-氯-8-(2-甲基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

将[1,1'-双(二环己基膦)二茂铁]二氯钯(II)(110mg，10摩尔％)添加至8-溴-7-氯咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺(实施例1步骤3中制备)(370mg，1.5mmol)、2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(490mg，2.2mmol)和碳酸铯(1.5g，4.5mmol)在叔丁醇(8.3mL)和水(1.7mL)中的混合物中。将溶液用氮气吹扫，然后在75℃下搅拌5小时。使反应混合物冷却至室温且通过硅藻土塞用EtOAc过滤。使滤液在减压下浓缩。通过硅胶管柱快速色谱，用0-10％MeOH/DCM洗脱来纯化粗产物，以得到所要产物，所述产物未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤2：7-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-8-(2-甲基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

向微波小管中添加7-氯-8-(2-甲基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺(43mg，0.17mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(100mg，0.50mmol)、磷酸三钾(140mg，0.66mmol)、DMF(1.3mL)、水(0.33mL)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)(12mg，10摩尔％)。将反应溶液用氮气吹扫，然后将微波小管密封且在120℃微波反应器中加热20分钟。使反应混合物冷却至室温，且通过硅藻土塞用50％EtOAc/DCM过滤，然后在减压下浓缩。通过制备型LCMS(pH＝10，MeCN/具有NH

实施例10.8-(2-甲基吡啶-4-基)-2,7-二苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

步骤1：2-甲氧基-6-苯基嘧啶-4-胺

将双(二-叔丁基(4-二甲基氨基苯基)膦)二氯钯(II)(0.89g，5摩尔％)添加至6-氯-2-甲氧基嘧啶-4-胺(Ark Pharm,Inc，目录号AK-25131)(4.0g，25mmol)、苯基硼酸(4.6g，38mmol)和碳酸铯(16g，50mmol)在甲苯(130mL)和水(13mL)中的混合物中。将溶液用氮气吹扫，然后在115℃下搅拌16小时。使反应混合物冷却至室温，通过硅藻土塞用DCM过滤，且在减压下浓缩。将水(100mL)添加至残余物中且通过过滤收集所得固体，然后干燥以得到所要产物(5.0g，99％)，所述产物未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤2：5-溴-2-甲氧基-6-苯基嘧啶-4-胺

向0℃下的2-甲氧基-6-苯基嘧啶-4-胺(5.1g，25mmol)在DMSO(51mL)、MeCN(27mL)和水(1.7mL)中的溶液中添加N-溴琥珀酰亚胺(4.5g，25mmol)。在室温下搅拌反应混合物2小时，之后添加水(100mL)。通过过滤收集所得沉淀物，然后干燥以得到所要产物(5.2g，73％)，所述产物未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤3：2-甲氧基-5-(2-甲基吡啶-4-基)-6-苯基嘧啶-4-胺

将[1,1'-双(二环己基膦)二茂铁]二氯钯(II)(0.41g，10摩尔％)添加至5-溴-2-甲氧基-6-苯基嘧啶-4-胺(1.5g，5.4mmol)、2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(1.8g，8.0mmol)和碳酸铯(3.5g，11mmol)在叔丁醇(20mL)和水(3.9mL)中的混合物中。将溶液用氮气吹扫，然后在120℃下搅拌1.5小时。使反应混合物冷却至室温，通过硅藻土塞用DCM过滤，且在减压下浓缩。将水(100mL)添加至残余物中且通过过滤收集所得固体，然后干燥以得到所要产物(1.02g，65％)，所述产物未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤4：8-(2-甲基吡啶-4-基)-2,7-二苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-5(6H)-酮

向乙酸(1.4mL)中的2-甲氧基-5-(2-甲基吡啶-4-基)-6-苯基嘧啶-4-胺(100mg，0.34mmol)中添加2-溴-1-苯基乙烷-1-酮(170mg，0.86mmol)。在120℃下搅拌反应混合物20小时。在冷却至室温后，在减压下移除挥发物。将所得固体用Et

步骤5：5-氯-8-(2-甲基吡啶-4-基)-2,7-二苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶

向0℃下的8-(2-甲基吡啶-4-基)-2,7-二苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-5(6H)-酮乙酸酯(150mg，0.34mmol)和POCl

步骤6：8-(2-甲基吡啶-4-基)-2,7-二苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

用与对实施例1步骤3所述类似的程序，用5-氯-8-(2-甲基吡啶-4-基)-2,7-二苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶置换8-溴-5,7-二氯咪唑并[1,2-c]嘧啶氢溴酸盐来制备此化合物。通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例11.5-氨基-8-(2-甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯

用与对实施例10所述类似的程序，用3-溴-2-氧代基丙酸乙酯置换步骤4中的2-溴-1-苯基乙烷-1-酮来制备此化合物。通过制备型LCMS(pH＝10，MeCN/具有NH

实施例12.5-(5-氨基-7-苯基-8-(吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-基)异噁唑-3-甲酸甲酯

步骤1：5-(5-氧代基-7-苯基-8-(吡啶-4-基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-基)异噁唑-3-甲酸乙酯

向2-甲氧基-6-苯基-5-(吡啶-4-基)嘧啶-4-胺(用与实施例10步骤1-3所述类似的程序，用吡啶-4-基硼酸置换步骤3中的2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶来制备)(50mg，0.18mmol)在2-丙醇(0.54mL)中的混合物中添加5-(2-溴乙酰基)异噁唑-3-甲酸乙酯(Combi-Blocks，目录号SS-6738)(71mg，0.27mmol)。在110℃下搅拌反应混合物4小时。在冷却至室温后，在减压下移除挥发物。将所得固体用EtOAc洗涤，通过过滤收集，然后干燥以得到呈HBr盐形式的粗产物，所述产物未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤2：5-(5-氯-7-苯基-8-(吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-基)异噁唑-3-甲酸乙酯

向5-(5-氧代基-7-苯基-8-(吡啶-4-基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-基)异噁唑-3-甲酸乙酯氢溴酸盐(72mg，0.14mmol)在MeCN(0.53mL)中的搅拌溶液中添加POCl

步骤3：5-(5-氨基-7-苯基-8-(吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-基)异噁唑-3-甲酸甲酯

向5-(5-氯-7-苯基-8-(吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-基)异噁唑-3-甲酸乙酯(70mg，0.16mmol)在THF(0.70mL)和MeOH(0.10mL)中的溶液中添加浓氢氧化铵(1.4mL，14M)。在室温下搅拌反应混合物16小时，之后在减压下移除挥发物。通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例13.3-(4-乙氧基苯基)-8-(2-甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

步骤1：8-(2-甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-5(6H)-酮

向2-甲氧基-5-(2-甲基吡啶-4-基)-6-苯基嘧啶-4-胺(来自实施例10步骤3)(400mg，1.4mmol)在2-丙醇(4.2mL)中的混合物中添加2-氯乙醛(2.0mL，水中的7M)。在110℃下搅拌反应混合物4小时。在冷却至室温后，在减压下移除挥发物。将所得残余物用EtOAc湿磨，得到呈HCl盐形式的标题化合物(395mg，85％)，所述化合物未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤2：8-(2-甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

用与对实施例10步骤5-6所述类似的程序，用8-(2-甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-5(6H)-酮置换步骤5中的8-(2-甲基吡啶-4-基)-2,7-二苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-5(6H)-酮来制备此化合物。通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

步骤3：3-溴-8-(2-甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

在0℃下向8-(2-甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺2,2,2-三氟乙酸酯(31mg，0.08mmol)和碳酸氢钠(14mg，0.17mmol)在MeOH(0.31mL)和水(0.31mL)中的混合物中逐滴添加溴(5.8μL，0.11mmol)。在室温下搅拌反应混合物16小时。在减压下浓缩所得溶液以得到粗产物，所述产物未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤4：3-(4-乙氧基苯基)-8-(2-甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺

向微波小管中添加3-溴-8-(2-甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-胺(3mg，0.01mmol)、(4-乙氧基苯基)硼酸(4mg，0.02mmol)、磷酸三钾(7mg，0.03mmol)、DMF(2.4mL)、水(0.60mL)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)(2mg，25摩尔％)。将反应溶液用氮气吹扫，然后将微波小管密封且在120℃微波反应器中加热20分钟。使反应混合物冷却至室温，且通过硅藻土塞用50％EtOAc/DCM过滤，然后在减压下浓缩。通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化粗产物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例14.5-氨基-8-(2-甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

步骤1：5-氨基-8-(2-甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸

向5-氨基-8-(2-甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯(实施例11中制备)(66mg，0.18mmol)在THF(0.90mL)中的搅拌溶液中添加单水合氢氧化锂(15mg，0.36mmol)和水(0.90mL)。在50℃下搅拌所得混合物16小时。在冷却至室温后，添加1N HCl(0.38mL)和水(0.9mL)以得到通过过滤移出的沉淀物。浓缩滤液以得到粗产物，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。对于C

步骤2：5-氨基-8-(2-甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

向5-氨基-8-(2-甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸(48mg，0.14mmol)在DMF(0.87mL)中的溶液中添加HATU(63mg，0.17mmol)和三乙胺(39μL，0.28mmol)。在室温下搅拌反应混合物30分钟，置换添加氯化铵(8.0mg，0.15mmol)且在室温下继续搅拌溶液1.5小时。将混合物用EtOAc(5.0mL)稀释且用饱和碳酸氢钠水溶液(5.0mL)和盐水(5.0mL)洗涤。将有机层经Na

实施例15.5-氨基-8-(1-氨基甲酰基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-N-乙基-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

步骤1：2-(甲基硫基)-6-苯基嘧啶-4-胺

向6-氯-2-(甲基硫基)嘧啶-4-胺(Combi-Blocks，目录号ST-1384)(10.0g，56.9mmol)、苯基硼酸(8.33g，68.3mmol)和双(二-叔丁基(4-二甲基氨基苯基)膦)二氯钯(II)(1.01g，1.42mmol)在1,4-二噁烷(50mL)和水(10mL)中的混合物中添加碳酸铯(37.1g，114.0mmol)。将反应混合物用氮气吹扫，然后在100℃下搅拌12小时。在冷却至室温后，将反应混合物用EtOAc稀释，用盐水洗涤，经Na

步骤2：5-溴-2-(甲基硫基)-6-苯基嘧啶-4-胺

向2-(甲基硫基)-6-苯基嘧啶-4-胺(2.5g，11.5mmol)在DMF(50mL)中的搅拌溶液中添加N-溴琥珀酰亚胺(2.05g，11.5mmol)。在室温下搅拌所得混合物2小时，之后添加水(200mL)。自所述溶液中沉淀淡黄色固体，将其过滤且干燥，以获得所要产物。对于C

步骤3：8-溴-5-(甲基硫基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯

向5-溴-2-(甲基硫基)-6-苯基嘧啶-4-胺(3.69g，12.5mmol)在1,2-二甲氧基乙烷(40mL)中的溶液中添加3-溴-2-氧代基丙酸乙酯(4.69mL，37.4mmol)。将混合物加热至110℃达12小时。在冷却至室温后，将反应混合物用饱和NaHCO

步骤4：8-溴-5-(2,4-二甲氧基苄基氨基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯

在500mL圆底烧瓶中，将8-溴-5-(甲基硫基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯(2.1g，5.35mmol)溶解于100mL DCM中。在0℃下通过加料漏斗向此溶液中添加逐滴添加DCM(30mL)中的3-氯过氧苯甲酸(mCPBA)(2.28g，10.2mmol)。在添加后，使反应混合物升温至室温且搅拌4小时。然后通过添加饱和NaHCO

步骤5：8-溴-5-(2,4-二甲氧基苄基氨基)-N-乙基-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

向MeOH(20mL)、THF(20mL)和水(10mL)中的8-溴-5-(2,4-二甲氧基苄基氨基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯(1.80g，3.5mmol)中分批添加LiOH(0.34g，14.1mmol)。在45℃下搅拌反应混合物2小时，冷却至室温且在减压下浓缩。将所得残余物溶解于DMF(30mL)中，随后添加乙胺(THF中的2M溶液，3.52mL，7.04mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(1.84mL，10.6mmol)和(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷鏻六氟磷酸酯(PyBOP)(3.66g，7.04mmol)。在室温下搅拌反应混合物过夜，之后添加100mL水。收集所得固体且干燥，以得到呈黄色固体的所要产物。对于C

步骤6：4-(5-(2,4-二甲氧基苄基氨基)-2-(乙基氨基甲酰基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-8-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯

将8-溴-5-(2,4-二甲氧基苄基氨基)-N-乙基-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺(20.0mg，0.039mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(14.5mg，0.047mmol)、XPhos Pd G2(2.0mg，2.5μmol)和Cs

步骤7：5-氨基-8-(1-氨基甲酰基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-N-乙基-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

在10mL反应小瓶中，4-(5-(2,4-二甲氧基苄基氨基)-2-(乙基氨基甲酰基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-8-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(20.0mg，0.033mmol)溶解于1mL TFA中。在70℃下搅拌反应混合物10分钟，冷却至室温，浓缩，且用饱和NaHCO

实施例16.5-氨基-8-(1-氨基甲酰基哌啶-4-基)-N-乙基-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

在10mL反应小瓶中，将5-氨基-8-(1-氨基甲酰基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-N-乙基-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺TFA盐(实施例15中制备)(10.0mg，0.020mmol)和氢氧化钯炭(10重量％，3.7mg，2.3μmol)溶解于1mL MeOH中。然后在50℃下在1个大气压的H

实施例17.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-3-(2-羟基乙氧基)-8-(2-甲氧基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

步骤1：3-(6-氨基-2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)苄腈

将双(二-叔丁基(4-二甲基氨基苯基)膦)二氯钯(II)(1.0g，5摩尔％)添加至6-氯-2-(甲基硫基)嘧啶-4-胺(Combi-Blocks，目录号ST-1384)(5.0g，29mmol)、(3-氰基苯基)硼酸(8.4g，57mmol)和碳酸铯(37g，114mmol)在甲苯(100mL)和水(10mL)中的混合物中。将混合物用氮气吹扫，然后在115℃下搅拌16小时。使反应混合物冷却至室温，通过硅藻土塞用DCM过滤，且在减压下浓缩。将水(200mL)添加至残余物中且通过过滤收集所得固体，然后干燥以得到所要产物(6.5g，94％)，所述产物未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤2：3-(6-氨基-5-溴-2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)苄腈

向0℃下的3-(6-氨基-2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)苄腈(6.5g，27mmol)在DMSO(55mL)、MeCN(30mL)和水(1.8mL)中的溶液中添加N-溴琥珀酰亚胺(4.8g，27mmol)。在室温下搅拌反应混合物2小时，之后添加水(200mL)。通过过滤收集所得沉淀物，然后干燥以得到所要产物(8.6g，99％)，所述产物未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤3：8-溴-7-(3-氰基苯基)-5-(甲基硫基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯

向3-(6-氨基-5-溴-2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)苄腈(2.0g，6.2mmol)在DME(26mL)中的溶液中添加3-溴-2-氧代基丙酸乙酯(2.3mL，19mmol)。在110℃下搅拌反应混合物3小时，之后在减压下移除挥发物。通过过滤收集所得固体，将其用Et

步骤4：8-溴-7-(3-氰基苯基)-5-(2,4-二甲氧基苄基氨基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯

向0℃下的8-溴-7-(3-氰基苯基)-5-(甲基硫基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯氢溴酸盐(1.4g，3.4mmol)在DCM(170ml)中的溶液中逐滴添加mCPBA(1.6g，6.4mmol，70％)在DCM(15mL)中的溶液。在室温下搅拌所述溶液2小时。在完成起始材料消耗后，添加DCM(15mL)中的(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(1.02mL，6.8mmol)且搅拌悬浮液2小时。然后用饱和NaHCO

步骤5：7-(3-氰基苯基)-5-(2,4-二甲氧基苄基氨基)-8-(2-甲氧基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯

将[1,1'-双(二环己基膦)二茂铁]二氯钯(II)(230mg，10摩尔％)添加至8-溴-7-(3-氰基苯基)-5-(2,4-二甲氧基苄基氨基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯(1.7g，3.1mmol)、2-甲氧基吡啶-4-基硼酸(570mg，3.7mmol)和碳酸铯(1.7g，5.2mmol)在叔丁醇(13mL)和水(2.6mL)中的混合物中。将反应混合物用氮气吹扫，且在120℃下搅拌3小时。然后使反应混合物冷却至室温，通过硅藻土塞用DCM过滤，且在减压下浓缩。通过管柱色谱，用0-100％EtOAc/己烷洗脱来纯化所得物质，以得到所要产物(370mg)。对于C

步骤6：5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(2-甲氧基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

向7-(3-氰基苯基)-5-(2,4-二甲氧基苄基氨基)-8-(2-甲氧基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯(370mg，0.65mmol)中添加乙胺(3.3mL，MeOH中的2M)。在85℃下在密封小瓶中搅拌溶液16小时，冷却至室温且在减压下移除挥发物。将TFA(2.0mL)添加至残余物且在100℃下在密封小瓶中搅拌混合物10分钟。然后使反应混合物冷却至室温，且在减压下移除挥发物。通过管柱色谱法，用含有0.5％三乙胺的0-10％MeOH/DCM洗脱来纯化产物。对于C

步骤7：5-氨基-3-溴-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(2-甲氧基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

向0℃的5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(2-甲氧基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺(110mg，0.27mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液中添加N-溴琥珀酰亚胺(47mg，0.27mmol)。在室温下搅拌反应混合物2小时，之后添加水(1.0mL)。通过过滤收集所得沉淀物，且干燥以得到所要产物，所述产物未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤8：5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-3-(2-羟基乙氧基)-8-(2-甲氧基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

向反应小瓶中添加碘化铜(I)(1.2mg，6.1μmol)、3,4,7,8-四甲基-1,10-邻二氮杂菲(2.9mg，0.01mmol)、5-氨基-3-溴-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(2-甲氧基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺(30mg，0.06mmol)和碳酸铯(30mg，0.09mmol)。将反应小瓶用氮气冲洗且装备橡胶隔膜。添加甲苯(0.2mL)和乙烷-1,2-二醇(0.17mL，3.1mmol)且用聚四氟乙烯衬帽置换橡胶隔膜。将反应混合物在110℃下搅拌24小时，冷却至室温，用乙酸乙酯(2mL)稀释，且通过硅胶塞过滤。将滤液浓缩且通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例18.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(2-甲氧基吡啶-4-基)-3-甲基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

在氮气下向5-氨基-3-溴-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(2-甲氧基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺(在实施例17步骤7中制备)(40mg，0.08mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷(3.3mg，4.1μmol)的复合物在1,4-二噁烷(0.50mL)中的混合物中逐滴添加甲苯中的二甲基锌(0.27mL，1.2M)。将所得混合物在90℃下搅拌过夜，冷却至室温，用DCM(5mL)稀释，且通过硅藻土塞过滤。在减压下浓缩滤液且通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化粗物质，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例19.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(2-甲氧基吡啶-4-基)-3-(吡啶-2-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

将双(三苯基膦)氯化钯(II)(4.3mg，6.1μmol)添加至5-氨基-3-溴-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(2-甲氧基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺(在实施例17步骤7中制备)(30mg，0.06mmol)和2-(三丁基锡烷基)吡啶(0.05mL，0.12mmol)在DMF(0.5mL)中的混合物中。将反应混合物用氮气吹扫，然后在100℃下搅拌5小时。在冷却至室温后，用DCM(5mL)稀释混合物，且通过硅藻土塞过滤。在减压下浓缩滤液且通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化粗物质，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例20.5-氨基-3-溴-8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-N-乙基-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

步骤1：5-(2,4-二甲氧基苄基氨基)-8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯

将[1,1'-双(二环己基膦)二茂铁]二氯钯(II)(400mg，10摩尔％)添加至8-溴-5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯(在实施例15步骤4中制备)(2.7g，5.3mmol)、(2,6-二甲基吡啶-4-基)硼酸(1.2g，7.9mmol)和碳酸铯(3.4g，11mmol)在叔丁醇(20mL)和水(3.8mL)中的混合物中。将混合物用氮气吹扫，然后在120℃下搅拌1.5小时。使反应混合物冷却至室温，通过硅藻土塞用DCM过滤，且在减压下浓缩。通过管柱色谱，用0-20％MeOH/DCM洗脱来纯化所得物质，以得到所要产物(2.8g，99％)。对于C

步骤2：5-(2,4-二甲氧基苄基氨基)-8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸

向5-(2,4-二甲氧基苄基氨基)-8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯(1.0g，1.9mmol)在THF(3.9mL)中的溶液中添加氢氧化锂(0.18g，7.4mmol)和水(3.9mL)。将所得混合物在50℃下搅拌16小时。在冷却至室温后，添加水(2.0mL)且将pH用1N HCl调节至pH 2。通过过滤收集所得沉淀物，用水洗涤且干燥以得到粗产物，所述产物未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤3：5-氨基-8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-N-乙基-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

向5-(2,4-二甲氧基苄基氨基)-8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸(0.95g，1.9mmol)在DMF(17mL)中的溶液中添加三乙胺(0.78mL，5.6mmol)。将溶液搅拌5分钟，置换添加BOP(1.2g，2.8mmol)和乙胺(9.3mL，2M于THF中)。然后在室温下将反应混合物搅拌30分钟，用水(20mL)淬灭，且用EtOAc(5x30 mL)萃取。将合并的有机层用水(50mL)和盐水(30mL)洗涤，用MgSO

步骤4：5-氨基-3-溴-8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-N-乙基-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

向0℃的5-氨基-8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-N-乙基-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺(700mg，1.8mmol)在DMSO(3.6mL)/MeCN(1.9mL)/水(0.12mL)中的溶液中添加N-溴琥珀酰亚胺(320mg，1.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，在此时添加水(20mL)且通过过滤收集所要产物。通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例21.5-氨基-3-氰基-8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-N-乙基-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

向微波小管中添加DMF(0.30mL)中的氰化铜(I)(8.7mg，0.10mmol)和5-氨基-3-溴-8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-N-乙基-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺(在实施例20中制备)(30mg，0.06mmol)。将小管用氮气冲洗且密封，之后在180℃微波反应器中加热10分钟。在冷却至室温后，将反应混合物用NH

实施例22.8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-N-乙基-5-(乙基氨基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

步骤1：5-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-2-(甲基硫基)-6-苯基嘧啶-4-胺

将[1,1'-双(二环己基膦)二茂铁]二氯钯(II)(510mg，10摩尔％)添加至5-溴-2-(甲基硫基)-6-苯基嘧啶-4-胺(在实施例15步骤2中制备)(2.0g，6.8mmol)、(2,6-二甲基吡啶-4-基)硼酸(1.5g，10mmol)和碳酸铯(4.4g，14mmol)在叔丁醇(25mL)和水(5.0mL)中的混合物中。将混合物用氮气吹扫，然后在120℃下搅拌2小时。使反应混合物冷却至室温且通过硅藻土塞过滤。在减压下浓缩滤液且通过硅胶管柱快速色谱用0-100％EtOAc/己烷洗脱来纯化，以得到所要化合物(440mg，20％)。对于C

步骤2：8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-5-(甲基硫基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯

向5-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-2-(甲基硫基)-6-苯基嘧啶-4-胺(800mg，2.5mmol)在DME(10mL)中的溶液中添加3-溴-2-氧代基丙酸乙酯(0.93mL，7.4mmol)。在110℃下搅拌反应混合物2小时，之后在减压下移除挥发物。将所得残余物用DCM(20mL)稀释，用饱和NaHCO

步骤3：8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-N-乙基-5-(乙基氨基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

将8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-5-(甲基硫基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯(100mg，0.24mmol)悬浮于乙胺溶液(1.2mL，MeOH中的2M)中且加热回流16小时。在冷却至室温后，在减压下移除溶剂且通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化所得物质，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例23.4-(5-氨基-2-(乙基氨基甲酰基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-8-基)-2,6-二甲基吡啶1-氧化物

步骤1：4-(2-(乙氧基羰基)-5-(甲基磺酰基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-8-基)-2,6-二甲基吡啶1-氧化物

向0℃的8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-5-(甲基硫基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯(在实施例22步骤2中制备)(50mg，0.12mmol)在DCM(10mL)中的混合物中添加mCPBA(88mg，0.36mmol)。在室温下搅拌所得溶液3小时，然后在减压下移除挥发物。将所得残余物溶于EtOAc(20mL)中，用饱和Na

步骤2：4-(5-氨基-2-(乙氧基羰基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-8-基)-2,6-二甲基吡啶1-氧化物

向4-(2-(乙氧基羰基)-5-(甲基磺酰基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-8-基)-2,6-二甲基吡啶1-氧化物(54mg，0.12mmol)在乙腈(1.0mL)中的溶液中添加浓氢氧化铵(0.09mL，14M)。在室温下搅拌反应混合物30分钟，之后在减压下移除挥发物。通过制备型LCMS(pH＝10，MeCN/具有NH

步骤3：4-(5-氨基-2-(乙基氨基甲酰基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-8-基)-2,6-二甲基吡啶1-氧化物

将4-(5-氨基-2-(乙氧基羰基)-7-苯基咪唑并[1,2-c]嘧啶-8-基)-2,6-二甲基吡啶1-氧化物(15mg，0.03mmol)悬浮于乙胺溶液(1.0mL，甲醇中的2M)中且加热回流1小时。在冷却至室温后，在减压下移除溶剂且通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例24.3-(5-氨基-8-(1-乙基-6-氧代基-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：3-(8-溴-5-(2,4-二甲氧基苄基氨基)-2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-7-基)苄腈

向MeOH(2mL)、THF(2mL)和水(1mL)中的8-溴-7-(3-氰基苯基)-5-(2,4-二甲氧基苄基氨基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯(在实施例17步骤4中制备)(100mg，0.186mmol)中添加LiOH(17.9mg，0.75mmol)。在45℃下搅拌反应混合物2小时，且在减压下移除溶剂。将所得残余物溶解于DMF(3mL)中，随后添加氮杂环丁烷-3-醇(27.3mg，0.37mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(98μL，0.56mmol)和HATU(142mg，0.37mmol)。在室温下搅拌反应混合物过夜，之后添加10mL水。收集沉淀的固体且干燥，以得到呈黄色固体的所要产物。对于C

步骤2：3-(5-氨基-8-(1-乙基-6-氧代基-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-7-基)苄腈

将3-(8-溴-5-(2,4-二甲氧基苄基氨基)-2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-7-基)苄腈(20mg，0.048mmol)、1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮(14.5mg，0.058mmol)、XPhos Pd G2(2.0mg，2.5μmol)和Cs

实施例25.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-8-(1-乙基-6-氧代基-1,6-二氢吡啶-3-基)-N-(1-(2-羟乙基)-1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

用与对实施例24所述类似的程序，用2-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)移除(AstaTech产品清单#50515)置换步骤1中的氮杂环丁烷-3-醇。通过制备型LC-MS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例26.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

步骤1：5-氨基-7-氯咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯

将6-氯嘧啶-2,4-二胺(2g，13.8mmol)和3-溴-2-氧代基丙酸乙酯(2.6mL，20.8mmol)在DME(50ml)中的溶液在70℃下搅拌过夜。完成后，将反应物冷却反应至室温且通过过滤收集固体。将粗固体溶解于热甲醇(25mL)中且通过将所述溶液缓慢冷却至室温来重结晶所要产物。将所述产物过滤，用EtOAc洗涤，且干燥，以得到所要产物。对于C

步骤2：5-氨基-7-(3-氰基苯基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯

将5-氨基-7-氯咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.60g，2.49mmol)、(3-氰基苯基)硼酸(0.44g，2.99mmol)、XPhos Pd G2(0.098g，0.125mmol)和碳酸钠(0.53g，4.99mmol)在1,4-二噁烷(50mL)和水(5.0mL)中的混合物用氮气吹扫，然后在100℃下搅拌1小时。在冷却至室温后，将反应混合物用EtOAc稀释，用盐水过滤，经Na

步骤3：5-氨基-8-溴-7-(3-氰基苯基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯

在0℃下向5-氨基-7-(3-氰基苯基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯(2.3g，7.48mmol)在DMF(50ml)中的溶液中缓慢添加N-溴琥珀酰亚胺(1.33g，7.48mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液。然后在室温下搅拌反应混合物2小时，之后添加水(100mL)。通过过滤收集所得淡黄色固体且干燥以获得所要产物(2.3g，80％)。对于C

或者，可使用以下程序制备此化合物：向8-溴-7-(3-氰基苯基)-5-(甲基硫基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯(在实施例17步骤3中制备)(2.40g，5.75mmol)在DCM(100mL)中的溶液中添加mCPBA(77％，1.93g，8.63mmol)在DCM(30mL)中的溶液，将此溶液经通过加料漏斗的无水硫酸镁在室温下干燥30分钟。然后将反应混合物搅拌4小时，且通过经插管鼓泡NH

步骤4：5-氨基-8-溴-7-(3-氰基苯基)-N-乙基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

向5-氨基-8-溴-7-(3-氰基苯基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酸乙酯(1.00g，2.59mmol)在MeOH(20mL)、THF(20mL)和水(10mL)中的混合物中添加LiOH(124mg，5.18mmol)。在室温下搅拌反应混合物2小时，且在减压下移除溶剂。将所得残余物溶解于DMF(30mL)中，随后添加乙胺溶液(2.1mL，25.9mmol，水中的70％)、三乙胺(1.08mL，7.77mmol)和BOP(2.29g，5.18mmol)。在室温下搅拌反应混合物过夜，之后添加100mL水。通过过滤收集所得固体且干燥，以得到呈黄色固体的所要产物(0.77g)。对于C

步骤5：5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

将5-氨基-8-溴-7-(3-氰基苯基)-N-乙基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺(10.0mg，0.026mmol)、吡啶-4-基硼酸(4.8mg，0.039mmol)、XPhos Pd G2(2.0mg，2.51μmol)和Na

实施例27.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(3-甲基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

用与对实施例26所述类似的程序，用3-甲基吡啶-4-基硼酸置换步骤5中的吡啶-4-基硼酸来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例28.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(3-氟吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

用与对实施例26所述类似的程序，用3-氟吡啶-4-基硼酸置换步骤5中的吡啶-4-基硼酸来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例29.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(3-氯吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

用与对实施例26所述类似的程序，用3-氯吡啶-4-基硼酸置换步骤5中的吡啶-4-基硼酸来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例30.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(3-甲氧基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

用与对实施例26所述类似的程序，用3-甲氧基吡啶-4-基硼酸置换步骤5中的吡啶-4-基硼酸来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例31.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(3-氰基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

用与对实施例26所述类似的程序，用4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)烟碱腈置换步骤5中的吡啶-4-基硼酸来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例32.5-氨基-8-(4-氨基甲酰基苯基)-7-(3-氰基苯基)-N-乙基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

用与对实施例26所述类似的程序，用(4-氨基甲酰基苯基)硼酸置换步骤5中的吡啶-4-基硼酸来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例33.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

用与对实施例26所述类似的程序，用3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶置换步骤5中的吡啶-4-基硼酸来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例34.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

用与对实施例26所述类似的程序，用5-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑置换步骤5中的吡啶-4-基硼酸来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例35.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

用与对实施例26所述类似的程序，用1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑置换步骤5中的吡啶-4-基硼酸来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例36.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(1-异丙基-1H-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

用与对实施例26所述类似的程序，用1-异丙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑置换步骤5中的吡啶-4-基硼酸来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例37.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(1-丙基-1H-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

用与对实施例26所述类似的程序，用1-丙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑置换步骤5中的吡啶-4-基硼酸来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化产物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例38.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-N-乙基-8-(嘧啶-4-基)咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

将5-氨基-8-溴-7-(3-氰基苯基)-N-乙基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺(在实施例26步骤4中制备)(50mg，0.13mmol)、4-(三丁基锡烷基)嘧啶(96mg，0.260mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(15.0mg，0.013mmol)、氯化铜(I)(15.4mg，0.156mmol)和氯化锂(6.6mg，0.156mmol)在THF(2mL)中的混合物脱气且密封。在80℃下搅拌反应混合物12小时，冷却至室温且在减压下浓缩。通过制备型LC-MS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化所得残余物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例39.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-8-(2,3-二氢-[1,4]二噁英并[2,3-b]吡啶-8-基)-N-乙基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

将5-氨基-8-溴-7-(3-氰基苯基)-N-乙基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺(在实施例26步骤4中制备)(72mg，0.19mmol)、(2,3-二氢-[1,4]二噁英并[2,3-b]吡啶-8-基)硼酸(33.8mg，0.19mmol)、碳酸铯(122mg，0.37mmol)和[1,1'-双(二环己基膦)二茂铁]二氯钯(II)(14.1mg，0.019mmol)在二噁烷(2.0mL)和水(0.2mL)中的混合物在120℃下在微波照射下搅拌1小时。然后使反应混合物冷却至室温，且通过制备型LC-MS(pH＝2,MeCN/具有TFA的水)直接纯化，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例40.5-氨基-7-(3-氰基苯基)-8-环丙基-N-乙基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺

将5-氨基-8-溴-7-(3-氰基苯基)-N-乙基咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-甲酰胺(在实施例26步骤4中制备)(72mg，0.19mmol)、环丙基硼酸(32.1mg，0.37mmol)、碳酸铯(122mg，0.37mmol)和[1,1'-双(二环己基膦)二茂铁]二氯钯(II)(14.1mg，0.019mmol)在二噁烷(2.0mL)和水(0.2mL)中的混合物在80℃下在微波照射下搅拌1小时。然后使反应混合物冷却至室温，且通过制备型LC-MS(pH＝2,MeCN/具有TFA的水)直接纯化，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例41.3-(5-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：3-(2-氨基-6-氯嘧啶-4-基)苄腈

将4,6-二氯嘧啶-2-胺(2.5g，15.2mmol)、(3-氰基苯基)硼酸(2.02g，13.7mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(1.06g，0.92mmol)和碳酸钠(3.23g，30.5mmol)在1,4-二噁烷(60mL)和水(5mL)中的混合物用氮气脱气，然后将所得混合物加热且在60℃下搅拌两天。在冷却至室温(r.t.)之后，将混合物浓缩，用水稀释，且用DCM(30mL x 3)萃取。将合并的有机层经MgSO

步骤2：2-(吡啶-2-基)乙酰肼

在室温下将肼(4.15mL，132mmol)添加至2-(吡啶-2-基)乙酸甲酯(10g，66.2mmol)的乙醇(66mL)溶液中。将混合物加热且在85℃下搅拌4小时，然后冷却至室温。在静置时形成白色固体，经由过滤收集所述白色固体且未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤3：3-(5-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

在室温下将2-(吡啶-2-基)乙酰肼(2.62g，17.34mmol)添加至3-(2-氨基-6-氯嘧啶-4-基)苄腈(4.00g，17.34mmol)的乙醇(35mL)溶液中。在回流加热且搅拌2小时后，将反应混合物冷却至室温，且浓缩。将所得残余物溶于N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(20mL)中且在120℃下搅拌7小时。然后将混合物冷却至室温，倒入冰中，且将其在室温下搅拌1小时。通过过滤收集所得固体，且将其溶于20mL 1N HCl溶液中。将所得混合物在室温下搅拌1小时，过滤，且通过添加饱和NaHCO

步骤4：3-(5-氨基-8-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

向-30℃下的3-(5-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(2g，6.11mmol)在DMF(12mL)中的混合物中分批添加NBS(1.09g，6.11mmol)。使反应混合物缓慢升温至0℃，形成均匀溶液。在0℃下搅拌1小时，将反应混合物用饱和NaHCO

步骤5：3-(5-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将Pd(Ph

实施例42.3-(5-氨基-8-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将3-(5-氨基-8-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(来自实施例41步骤4)(50mg，0.123mmol)、1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(54.7mg，0.246mmol)、氯(2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯基)]钯(II)(9.68mg，0.012mmol)和碳酸钠(13.0mg，0.123mmol)在1,4-二噁烷(1119μL)和水(112μL)中的混合物在100℃下搅拌1小时。使所得混合物冷却至室温，浓缩，且通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例43.3-(5-氨基-8-(1-丙基-1H-吡唑-5-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例42所述类似的程序，用1-丙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑置换1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例44.3-(5-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-8-(喹啉-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例42所述类似的程序，用5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹啉置换1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例45.3-(5-氨基-8-(5-氟嘧啶-4-基)-2-(羟基(苯基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：3-(5-氨基-8-溴-2-(羟基(苯基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41步骤1至步骤4所述类似的程序，用2-羟基-2-苯基乙酰肼置换步骤3中的2-(吡啶-2-基)乙酰肼来制备此化合物。对于C

步骤2：5-氟-4-(三甲基锡烷基)嘧啶

在氮气气氛下将Pd(Ph

步骤3：3-(5-氨基-8-(5-氟嘧啶-4-基)-2-(羟基(苯基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41步骤5所述类似的程序，用5-氟-4-(三甲基锡烷基)嘧啶置换4-(三丁基锡烷基)嘧啶且用3-(5-氨基-8-溴-2-(羟基(苯基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈置换3-(5-氨基-8-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例46.3-(5-氨基-8-(5-氟嘧啶-4-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41所述类似的程序，用5-氟-4-(三甲基锡烷基)嘧啶(来自实施例45步骤2)置换4-(三丁基锡烷基)嘧啶来制备此化合物。通过制备型HPLC(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例47.3-(5-氨基-2-((2-羟乙基氨基)(苯基)甲基)-8-(吡啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：3-(5-氨基-8-溴-2-(氯(苯基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

在室温下将亚硫酰氯(87μL，1.19mmol)添加至3-(5-氨基-8-溴-2-(羟基(苯基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(来自实施例45步骤1)(10mg，0.024mmol)中。在搅拌30分钟后，浓缩反应混合物且所得残余物未经进一步纯化即用于下一步骤中。对于C

步骤2：3-(5-氨基-8-溴-2-((2-羟乙基氨基)(苯基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将2-氨基乙-1-醇(4.35mg，0.071mmol)添加至3-(5-氨基-8-溴-2-(氯(苯基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(10mg，0.024mmol)的DMF(237μL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜，浓缩，且未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤3：3-(5-氨基-2-((2-羟乙基氨基)(苯基)甲基)-8-(吡啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将3-(5-氨基-8-溴-2-(((2-羟乙基)氨基)(苯基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(10mg，0.022mmol)、吡啶-4-基硼酸(6.0mg，0.043mmol)、氯(2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯基)]钯(II)(1.70mg，2.15μmol)和碳酸钠(2.3mg，0.022mmol)在1,4-二噁烷(196μL)和水(19.6μL)中的混合物加热且在100℃下搅拌1小时。然后使所得混合物冷却至室温，浓缩，通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例48.3-(5-氨基-2-(环己基甲基)-8-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：3-(5-氨基-8-溴-2-(环己基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41步骤1至步骤4所述类似的程序，用2-环己基乙酰肼置换步骤3中的2-(吡啶-2-基)乙酰肼来制备此化合物。对于C

步骤2：3-(5-氨基-2-(环己基甲基)-8-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例42所述类似的程序，用3-(5-氨基-8-溴-2-(环己基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈置换3-(5-氨基-8-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例49.3-(5-氨基-2-(2-氟苄基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41所述类似的程序，用2-(2-氟苯基)乙酰肼置换步骤3中的2-(吡啶-2-基)乙酰肼来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例50.3-(5-氨基-2-((2-氟苯基)(羟基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41所述类似的程序，用2-(2-氟苯基)-2-羟基乙酰肼置换步骤3中的2-(吡啶-2-基)乙酰肼来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例51.3-(5-氨基-2-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：2-(6-甲基吡啶-2-基)乙酰肼

用与对实施例41步骤2所述类似的程序，用2-(6-甲基吡啶-2-基)乙酸乙酯置换2-(吡啶-2-基)乙酸甲酯来制备此化合物。对于C

步骤2：3-(5-氨基-2-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41所述类似的程序，用2-(6-甲基吡啶-2-基)乙酰肼置换步骤3中的2-(吡啶-2-基)乙酰肼来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例52.3-(5-氨基-8-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：2-(3-氟吡啶-2-基)乙酰肼

在室温下将Hunig氏碱(169μL，0.967mmol)添加至2-(3-氟吡啶-2-基)乙酸(100mg，0.645mmol)、肼羧酸叔丁酯(102mg，0.774mmol)和BOP(428mg，0.967mmol)的DMF(2149μL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌2小时，浓缩，且通过硅胶管柱快速色谱，用DCM中的0至10％MeOH洗脱来纯化。然后将纯化的中间体2-(2-(3-氟吡啶-2-基)乙酰基)肼羧酸叔丁酯用TFA(0.5mL)处理，在室温下搅拌过夜，浓缩且用醚稀释。通过过滤收集所得白色沉淀物，且未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤2：3-(5-氨基-8-溴-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41步骤1至步骤4所述类似的程序，用2-(3-氟吡啶-2-基)乙酰肼置换步骤3中的2-(吡啶-2-基)乙酰肼来制备此化合物。对于C

步骤3：3-(5-氨基-8-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例42所述类似的程序，用3-(5-氨基-8-溴-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈置换3-(5-氨基-8-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例53.3-(5-氨基-8-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-2-((3-甲氧基吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例52所述类似的程序，用2-(3-甲氧基吡啶-2-基)乙酸置换步骤1中的2-(3-氟吡啶-2-基)乙酸来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例54.3-(5-氨基-2-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苄基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：3-(5-氨基-2-(2-溴苄基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41步骤1至步骤3所述类似的程序，用2-(2-溴苯基)乙酰肼置换步骤3中的2-(吡啶-2-基)乙酰肼来制备此化合物。对于C

步骤2：3-(5-氨基-2-(2-溴苄基)-8-碘-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

在室温下将NIS(153mg，0.679mmol)添加至3-(5-氨基-2-(2-溴苄基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(250mg，0.617mmol)的DMF(3084μL)溶液中。在50℃下搅拌1小时后，使反应混合物冷却至室温，用水稀释且通过过滤收集所得沉淀物。将棕色固体溶解于DCM中且通过硅胶管柱快速色谱，用DCM中的0至50％EtOAc洗脱来纯化，以得到所要产物。对于C

步骤3：3-(5-氨基-2-(2-溴苄基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41步骤5所述类似的程序，用3-(5-氨基-2-(2-溴苄基)-8-碘-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈置换3-(5-氨基-8-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈来制备此化合物。通过硅胶管柱快速色谱，用DCM中的0至15％MeOH洗脱来纯化最终物质，以得到所要产物。对于C

步骤4：3-(5-氨基-2-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苄基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将3-(5-氨基-2-(2-溴苄基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(10mg，0.021mmol)、(1-甲基-1H-吡唑-4-基)硼酸(5.2mg，0.041mmol)、PdCl

实施例55.3-(5-氨基-2-(苯并[d]异噁唑-3-基甲基)-8-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：3-(5-氨基-2-(苯并[d]异噁唑-3-基甲基)-8-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与实施例41步骤1至步骤4所述类似的程序，用2-(苯并[d]异噁唑-3-基)乙酰肼代替步骤3中的2-(吡啶-2-基)乙酰肼来制备此化合物。对于C

步骤2：3-(5-氨基-2-(苯并[d]异噁唑-3-基甲基)-8-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

向小瓶中装入3-(5-氨基-2-(苯并[d]异噁唑-3-基甲基)-8-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(24mg，0.054mmol)、(1-乙基-1H-吡唑-5-基)硼酸(17mg，0.12mmol)、XPhos Pd G2(4.3mg，0.0054mmol)、K

实施例56.3-(5-氨基-8-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-2-((1-甲基-1H-吲唑-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：5-氨基-8-溴-7-(3-氰基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2-甲酸乙酯

用与实施例41步骤1至步骤4所述相同的程序，用2-肼基-2-氧代基乙酸乙酯代替步骤3中的2-(吡啶-2-基)乙酰肼来制备此化合物。对于C

步骤2：3-(5-氨基-8-溴-2-(羟基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

向0℃下的5-氨基-8-溴-7-(3-氰基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2-甲酸乙酯(77mg，0.20mmol)在THF(5mL)中的溶液中逐滴添加LiBH

步骤3：3-(5-氨基-8-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-2-(羟基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

向来自先前步骤的粗制3-(5-氨基-8-溴-2-(羟基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈中添加(1-乙基-1H-吡唑-5-基)硼酸(47mg，0.34mmol)、XPhos Pd G2(13mg，0.017mmol)、K

步骤4：3-(5-氨基-2-(氯甲基)-8-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将3-(5-氨基-8-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-2-(羟基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(40mg，0.11mmol)溶解于MeCN(2mL)中。在室温下将SOCl

步骤5：3-(5-氨基-8-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-2-((1-甲基-1H-吲唑-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

向小瓶中装入3-(5-氨基-2-(氯甲基)-8-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(16mg，0.042mmol)、1-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑(32mg，0.12mmol)、XPhos Pd G2(3.3mg，0.0042mmol)、Cs

实施例57.3-(5-氨基-2-((3-羟基氮杂环丁烷-1-基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：3-(5-氨基-2-(羟基甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41步骤5所述类似的程序，用3-(5-氨基-8-溴-2-(羟基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(实施例56步骤2)置换3-(5-氨基-8-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈来制备此化合物。对于C

步骤2：甲磺酸(5-氨基-7-(3-氰基苯基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2-基)甲酯

在0℃下将甲磺酰氯(11.3μL，0.145mmol)添加至3-(5-氨基-2-(羟基甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(50mg，0.145mmol)和吡啶(23.5μL，0.290mmol)在DCM(4.0mL)中的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，用饱和NaHCO

步骤3：3-(5-氨基-2-((3-羟基氮杂环丁烷-1-基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

在90℃下搅拌甲磺酸(5-氨基-7-(3-氰基苯基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2-基)甲酯(10.0mg，0.024mmol)、氮杂环丁烷-3-醇盐酸盐(3.9mg，0.036mmol)和DIPEA(8.3μL，0.047mmol)在DMF(0.5mL)中的混合物，直至完成。然后使反应混合物冷却至室温，且通过制备型LC-MS(pH 10，乙腈/具有NH

实施例58.3-(5-氨基-8-(3-甲基吡啶-4-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与实施例42所述类似的程序，用3-甲基吡啶-4-基硼酸代替1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例59.3-(5-氨基-8-(2-甲氧基-6-甲基吡啶-4-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与实施例42所述类似的程序，用2-甲氧基-6-甲基吡啶-4-基硼酸代替1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例60.3-(5-氨基-8-(吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与实施例42所述类似的程序，用3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡唑并[1,5-b]哒嗪代替1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例61.3-(5-氨基-8-(4-甲基噁唑-5-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噁唑

在室温下在N

步骤2：3-(5-氨基-8-(4-甲基噁唑-5-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与实施例42所述类似的程序，用4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噁唑代替1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例62.3-(5-氨基-8-(4-(羟基甲基)-2-甲基噁唑-5-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：4-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-2-甲基噁唑

向(2-甲基噁唑-4-基)甲醇(1.0g，8.84mmol)和咪唑(0.90g，13.3mmol)在DCM(20ml)中的溶液中添加TBSCl(1.5g，9.7mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，且浓缩。然后将所得残余物用Et

步骤2：4-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-2-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噁唑

用与实施例61步骤1所述类似的程序，用4-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-2-甲基噁唑代替3-甲基噁唑来制备此化合物。对于C

步骤3：3-(5-氨基-8-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-2-甲基噁唑-5-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与实施例42所述类似的程序，用4-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-2-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噁唑代替1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑来制备此化合物。来自此步骤的粗物质未经进一步纯化即用于下一步骤。对于C

步骤4：3-(5-氨基-8-(4-(羟基甲基)-2-甲基噁唑-5-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将来自前一个步骤的粗物质用TFA(0.5mL)处理且在100℃下搅拌0.5小时。将反应混合物冷却至室温，用MeOH稀释，且通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例63.3-(5-氨基-8-(4-(甲氧基甲基)-2-甲基噁唑-5-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：4-(甲氧基甲基)-2-甲基噁唑

在0℃下向(2-甲基噁唑-4-基)甲醇(113mg，1.0mmol)于THF(10ml)中的溶液中添加NaH(48mg，60重量％，1.2mmol)。在搅拌0.5小时后，添加碘甲烷(170mg，1.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，用Et

步骤2：4-(甲氧基甲基)-2-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噁唑

用与实施例61步骤1所述类似的程序，用4-(甲氧基甲基)-2-甲基噁唑代替3-甲基噁唑来制备此化合物。对于C

步骤3：3-(5-氨基-8-(4-(甲氧基甲基)-2-甲基噁唑-5-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与实施例42所述类似的程序，用4-(甲氧基甲基)-2-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噁唑代替1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例64-65.(S)-3-(5-氨基-2-(羟基(苯基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(实施例64)和(R)-3-(5-氨基-2-(羟基(苯基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(实施例65)

用与对实施例41所述类似的程序，用2-羟基-2-苯基乙酰肼(Alfa Aesar-L11653)置换步骤3中的2-(吡啶-2-基)乙酰肼来制备这些化合物。首先通过手性HPLC使用Phenomenex Lux Cellulose-4管柱(21.2x 250mm，5μm粒度)用等度流动相己烷中的45％EtOH以20mL/分钟的流速洗脱来分离两种对映异构体。峰1(实施例64)和峰2(实施例65)的保留时间分别为9.47分钟和14.42分钟。在其分离后，通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)单独纯化对映异构体，以得到呈TFA盐形式的两种所要产物。对于两种产物，对于C

或者，可用与对实施例41所述类似的程序，用(S)-(-+)-扁桃酸甲酯(Sigma-Aldrich-251542)置换步骤2中的2-(吡啶-2-基)乙酸甲酯来制备实施例64。通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化粗物质，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

可用与对实施例41所述类似的程序，用(R)-(-)-扁桃酸甲酯(Sigma-Aldrich-251550)置换步骤2中的2-(吡啶-2-基)乙酸甲酯来制备实施例65。通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化粗物质，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例66.3-(5-氨基-2-苯甲酰基-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

向3-(5-氨基-2-(羟基(苯基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(来自实施例64)(370mg，0.87mmol)在乙腈(7.2mL)和DMF(1.4mL)中的溶液中添加四乙腈三氟甲磺酸铜(I)(65mg，0.17mmol)、4,4'-二甲氧基-2,2'-联吡啶(38mg，0.17mmol)、9-氮杂双环[3.3.1]壬烷N-氧基(5.8mg，0.04mmol)和1-甲基-1H-咪唑(28μL，0.35mmol)。将反应混合物在室温下与空气相通地搅拌30分钟，然后在减压下移除挥发物。通过制备型LCMS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化粗物质，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例67.3-(5-氨基-8-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-2-(1-苯基环丙基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：3-(5-氨基-8-溴-2-(1-苯基环丙基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

在0℃下向3-(5-氨基-2-(1-苯基环丙基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(用与对实施例41步骤1至步骤4所述类似的程序，用1-苯基环丙烷-1-碳酰肼置换步骤3中的2-(吡啶-2-基)乙酰肼来制备)(380mg，1.1mmol)在DMF(2.1mL)中的溶液中缓慢添加NBS(190mg，1.1mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌30分钟，之后添加水(10mL)。通过过滤收集所得固体且干燥，以获得所要产物。对于C

步骤2：3-(5-氨基-8-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-2-(1-苯基环丙基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将3-(5-氨基-8-溴-2-(1-苯基环丙基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(20mg，0.046mmol)、1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(10mg，0.046mmol)、XPhos Pd G2(7.0mg，9.3μmol)和Na

实施例68.2-((7-(3-氰基苯基)-2-(羟基(苯基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-基)氨基)烟碱腈

步骤1：2-((8-溴-7-(3-氰基苯基)-2-(羟基(苯基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-基)氨基)烟碱腈

在0℃下向3-(5-氨基-8-溴-2-(羟基(苯基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(来自实施例45步骤1)(50mg，0.12mmol)在THF(0.60mL)中的溶液中缓慢添加氢化钠(7.1mg，0.18mmol，60重量％)。然后将反应混合物在室温下搅拌30分钟，之后添加2-氟烟碱腈(23mg，0.19mmol)。然后将反应混合物在回流下搅拌2小时，用水(5mL)淬灭，且用EtOAc(5x 5mL)萃取。用水和盐水洗涤合并的有机层，用MgSO

步骤2：2-((7-(3-氰基苯基)-2-(羟基(苯基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-基)氨基)烟碱腈

将2-((8-溴-7-(3-氰基苯基)-2-(羟基(苯基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-基)氨基)烟碱腈(25mg，0.05mmol)、4-(三丁基锡烷基)嘧啶(17μL，0.05mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(5.6mg，4.9μmol)、碘化铜(I)(1.9mg，9.8μmol)和氟化铯(15mg，0.10mmol)在二噁烷(0.50mL)中的混合物在微波反应器中加热且在140℃下搅拌60分钟。然后使反应混合物冷却至室温，通过硅藻土塞(用DCM洗涤)过滤，且浓缩。通过制备型LC-MS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化所得残余物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例69.3-(5-氨基-2-((氰基(苯基)甲基)氨基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：6-氯-N

向2,6-二氯嘧啶-4-胺(5.0g，31mmol)在2-丙醇(31mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(6.4mL，37mmol)和双(4-甲氧基苄基)胺(7.9g，31mmol)。将所得溶液在100℃下搅拌16小时，使其冷却至室温，用水(100mL)稀释，且用EtOAc(100mL)萃取。将有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，且浓缩以得到粗产物，所述产物未经进一步纯化即用于下一步骤中。对于C

步骤2：7-氯-N

在室温下将O-碳异硫氰酸乙酯(3.1mL，26mmol)添加至6-氯-N

步骤3：3-(2-氨基-5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将氯(2-二环己基膦-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯基-2-基)钯(II)(330mg，0.42mmol)添加至(3-氰基苯基)硼酸(460mg，3.2mmol)、7-氯-N

步骤4：3-(2-氨基-5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-8-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

在0℃下向3-(2-氨基-5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(330mg，0.66mmol)在DMF(1.4mL)中的溶液中缓慢添加NBS(120mg，0.66mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌30分钟，之后添加水(10mL)。通过过滤收集所得固体且干燥，以获得所要产物。对于C

步骤5：3-(2-氨基-5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将3-(2-氨基-5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-8-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(350mg，0.61mmol)、4-(三丁基锡烷基)嘧啶(210μL，0.67mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(70mg，0.060mmol)、碘化铜(I)(23mg，0.12mmol)和氟化铯(180mg，1.2mmol)在二噁烷(4.7mL)中的混合物在微波反应器中加热且在140℃下搅拌30分钟。然后使反应混合物冷却至室温，通过硅藻土塞(用DCM洗涤)过滤，且浓缩。通过硅胶管柱色谱，用0-20％MeOH/DCM洗脱来纯化所得物质，以得到所要产物。对于C

步骤6：3-(5-氨基-2-((氰基(苯基)甲基)氨基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将3-(2-氨基-5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(20mg，0.04mmol)和苯甲醛(7.2μL，0.070mmol)在DCM(0.20mL)和甲醇(0.20mL)中的混合物加热且在100℃下搅拌5分钟。使反应混合物冷却至室温且添加三甲基甲硅烷基氰化物(19μL，0.14mmol)。在100℃下搅拌30分钟后，使反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，且浓缩。然后将三氟乙酸(1.0mL)添加至所得残余物中且将混合物在100℃下搅拌30分钟，使其冷却至室温，且浓缩。通过制备型LC-MS(pH＝2，MeCN/具有TFA的水)纯化所得残余物，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例70.3-(5-氨基-8-(吡啶-4-基)-2-(四氢呋喃-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：3-(5-氨基-8-溴-2-(四氢呋喃-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41步骤1至步骤4所述类似的程序，用四氢呋喃-3-碳酰肼置换步骤3中的2-(吡啶-2-基)乙酰肼来制备此化合物。对于C

步骤2：3-(5-氨基-8-(吡啶-4-基)-2-(四氢呋喃-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将3-(5-氨基-8-溴-2-(四氢呋喃-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(15mg，0.039mmol)、吡啶-4-基硼酸(10mg，0.078mmol)、氯(2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯基)]钯(II)(3.1mg，3.89μmol)和碳酸钠(12.4mg，0.117mmol)在1,4-二噁烷(1.0mL)和水(0.2mL)中的混合物用N

实施例71.3-(5-氨基-2-(苯基(吡啶-2-基氧基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：3-(5-氨基-8-溴-2-(苯基(吡啶-2-基氧基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

向3-(5-氨基-8-溴-2-(羟基(苯基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(来自实施例45步骤1)(110mg，0.261mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加亚硫酰氯(0.057mL，0.783mmol)。将反应溶液在室温下搅拌1小时，且浓缩。将所得残余物溶解于DMF(1mL)中，且添加碳酸钾(108mg，0.783mmol)和吡啶-2-醇(49.7mg，0.522mmol)。然后将反应混合物在90℃下搅拌2小时，冷却至室温，用水淬灭，且用DCM萃取。将合并的有机层经MgSO

步骤2：3-(5-氨基-2-(苯基(吡啶-2-基氧基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

向3-(5-氨基-8-溴-2-(苯基(吡啶-2-基氧基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(15mg，0.030mmol)、4-(三丁基锡烷基)嘧啶(22.2mg，0.060mmol)和氯化锂(5.1mg，0.120mmol)在1,4-二噁烷(100μL)中的混合物中添加二氯双(三苯基膦)-钯(II)(2.1mg，3.01μmol)和氯化铜(I)(11.9mg，0.120mmol)。将所得混合物用N

实施例72.3-(5-氨基-2-(2-氟-6-(((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲基)苄基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：3-(5-氨基-2-(羟基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

在室温下将2-羟基乙酰肼(2.34g，26.01mmol)添加至3-(2-氨基-6-氯嘧啶-4-基)苄腈(4.00g，17.34mmol)(实施例41步骤1)的乙醇(35mL)溶液。在回流加热且搅拌2小时后，将反应混合物冷却至室温，且浓缩。将所得残余物溶于N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(20mL)中且在120℃下搅拌7小时。然后将混合物冷却至室温，倒入冰中，且将其在室温下搅拌1小时。通过过滤收集所得固体，且将其溶于20mL 1N HCl溶液中。将所得混合物在室温下搅拌1小时，过滤，且通过添加饱和NaHCO

步骤2：3-(5-氨基-8-溴-2-(羟基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

向-30℃下的3-(5-氨基-2-(羟基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(1.0g，3.76mmol)在DMF(12mL)中的混合物中分批添加NBS(0.67g，3.76mmol)。使反应混合物缓慢升温至0℃，形成均匀溶液。在0℃下搅拌1小时，将反应混合物用饱和NaHCO

步骤3：3-(5-氨基-2-(羟基甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将四(三苯基膦)钯(0)(0.067g，0.058mmol)添加至4-(三丁基锡烷基)嘧啶(0.321g，0.869mmol)、3-(5-氨基-8-溴-2-(羟基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(0.20g，0.579mmol)、CsF(0.176g，1.159mmol)和碘化铜(I)(0.022g，0.116mmol)在1,4-二噁烷(5.0mL)中的混合物中。将反应混合物用N

步骤4：3-(5-氨基-2-(氯甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

在室温下向3-(5-氨基-2-(羟基甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(0.1g，0.290mmol)在乙腈(10ml)中的混合物中添加亚硫酰氯(0.212mL，2.90mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时，浓缩，且通过快速色谱用DCM中的0％至5％甲醇洗脱来纯化以得到所述产物。对于C

步骤5：3-(5-氨基-2-(2-氟-6-(羟基甲基)苄基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将3-(5-氨基-2-(氯甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(0.2g，0.55mmol)、(2-氟-6-(羟基甲基)苯基)硼酸(0.141g，0.827mmol)、氯(2-二环己基膦-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯基-2-基)钯(II)(0.551mmol)和Na

步骤6：3-(5-氨基-2-(2-(氯甲基)-6-氟苄基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

在室温下向3-(5-氨基-2-(2-氟-6-(羟基甲基)苄基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(0.2g，0.290mmol)在乙腈(10ml)中的混合物中添加亚硫酰氯(0.212mL，2.90mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时，浓缩，且通过快速色谱用DCM中的0％至5％甲醇洗脱来纯化以得到所述产物。对于C

步骤7：3-(5-氨基-2-(2-氟-6-(((3R,4R)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-基)甲基)苄基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将3-(5-氨基-2-(2-(氯甲基)-6-氟苄基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(10mg，0.021mmol)、(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐(4.51mg，0.032mmol)和Cs

实施例73.1-(2-((5-氨基-7-(3-氰基苯基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2-基)甲基)-3-氟苄基)哌啶-4-甲酸

步骤1：1-(2-((5-氨基-7-(3-氰基苯基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2-基)甲基)-3-氟苄基)哌啶-4-甲酸甲酯

用与对实施例72所述类似的程序，以相同规模，用哌啶-4-甲酸甲酯置换步骤7中的(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐来制备此化合物。对于C

步骤2：1-(2-((5-氨基-7-(3-氰基苯基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2-基)甲基)-3-氟苄基)哌啶-4-甲酸

将来自前一个步骤的产物用水(2.0mL)中的LiOH(2.5mg，0.106mmol)处理，且在室温下搅拌1.5小时。将所述混合物用甲醇(5mL)稀释且通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例74.N-(2-((5-氨基-7-(3-氰基苯基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2-基)甲基)-3-氟苄基)-N-甲基甲烷磺酰胺

用与对实施例72所述类似的程序，用N-甲基甲烷磺酰胺置换步骤7中的(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化所述产物，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例75.3-(5-氨基-2-(2-((2,5-二氧代基咪唑烷-1-基)甲基)-6-氟苄基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例72所述类似的程序，用乙内酰脲置换步骤7中的(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化所述产物，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例76.3-(5-氨基-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(峰1)

步骤1：2-(2,6-二氟苯基)-2-羟基乙酸甲酯

在0℃下将浓硫酸(1.42mL，27mmol)添加至2,6-二氟扁桃酸(5g，27mmol)的甲醇(45mL)溶液中。在室温下搅拌混合物4小时，之后浓缩。向所得浆料中添加饱和NaHCO

步骤2：3-(5-氨基-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41所述类似的程序，用2-(2,6-二氟苯基)-2-羟基乙酸甲酯置换步骤2中的2-(吡啶-2-基)乙酸甲酯来制备此化合物。通过手性SFC使用Phenomenex LuxCellulose-1管柱(21.2x 250mm，5μm粒度)用等度流动相CO

实施例77.3-(5-氨基-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(峰2)

用与对实施例76所述相同的程序制备此化合物。通过手性SFC使用PhenomenexLux Cellulose-1管柱(21.2x 250mm，5μm粒度)用等度流动相CO

实施例78.3-(5-氨基-2-((5-(吡啶-2-基)-1H-四唑-1-基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将3-(5-氨基-2-(氯甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(10mg，0.028mmol)(来自实施例72步骤4)、2-(1H-四唑-5-基)吡啶(8.1mg，0.055mmol)和Cs

实施例79.3-(2-((5-(1H-吡唑-1-基)-1H-四唑-1-基)甲基)-5-氨基-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例78所述类似的程序，用5-(1H-吡唑-1-基)-1H-四唑置换2-(1H-四唑-5-基)吡啶来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化所述产物，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例80.3-(5-氨基-8-(嘧啶-4-基)-2-((5-(噻唑-4-基)-1H-四唑-1-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例78所述类似的程序，用4-(1H-四唑-5-基)四唑置换2-(1H-四唑-5-基)吡啶来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化所述产物，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例81.3-(5-氨基-2-((5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例78所述类似的程序，用5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑置换2-(1H-四唑-5-基)吡啶来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化所述产物，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例82.3-(5-氨基-8-(4-乙基噁唑-5-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例42所述类似的程序，用4-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噁唑置换1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例83.3-(5-氨基-8-(1-乙基-1H-1,2,3-三唑-5-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41步骤5所述类似的程序，用1-乙基-5-(三甲基锡烷基)-1H-1,2,3-三唑置换4-(三丁基锡烷基)嘧啶来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例84.3-(5-氨基-8-(4-甲基噁唑-5-基)-2-((3-甲基吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：3-(5-氨基-8-溴-2-((3-甲基吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41步骤3至步骤4所述类似的程序，用2-(3-甲基吡啶-2-基)乙酰肼置换步骤3中的2-(吡啶-2-基)乙酰肼来制备此化合物。对于C

步骤2：3-(5-氨基-8-(4-甲基噁唑-5-基)-2-((3-甲基吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例61步骤2所述类似的程序，用3-(5-氨基-8-溴-2-((3-甲基吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈置换3-(5-氨基-8-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例85.3-(5-氨基-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-8-(4-(羟基甲基)-2-甲基噁唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例62步骤3至步骤4所述类似的程序，用3-(5-氨基-8-溴-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈置换步骤3中的3-(5-氨基-8-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例86.3-(5-氨基-2-(2-((1,1-二氧桥基异噻唑烷-2-基)甲基)-6-氟苄基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例72所述类似的程序，用1,2-噻唑烷1,1-二氧化物置换步骤7中的(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化所述产物，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例87.3-(5-氨基-2-(2-氟-6-((3-甲基-2,5-二氧代基咪唑烷-1-基)甲基)苄基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例72所述类似的程序，用1-甲基咪唑烷-2,4-二酮置换步骤7中的(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-醇盐酸盐来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化所述产物，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例88.3-(5-氨基-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41步骤5所述类似的程序，用3-(5-氨基-8-溴-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(实施例52步骤2)置换3-(5-氨基-8-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例89.3-(5-氨基-8-(4-甲基噁唑-5-基)-2-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：2-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)乙酸乙酯

将2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶(500mg，3.10mmol)的THF(10.3ml)溶液冷却至-78℃，随后逐滴添加正丁基锂(1.49mL，3.72mmol)。在10分钟后，一次性添加碳酸二乙酯(0.564mL，4.65mmol)。将所述混合物在-78℃下搅拌30分钟。然后将所述混合物用NH

步骤2：3-(5-氨基-8-溴-2-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41步骤1至步骤4所述类似的程序，用2-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)乙酸乙酯置换步骤2中的2-(吡啶-2-基)乙酸甲酯来制备此化合物。对于C

步骤3：3-(5-氨基-8-(4-甲基噁唑-5-基)-2-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例42所述类似的程序，用3-(5-氨基-8-溴-2-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈置换3-(5-氨基-8-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈且用4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噁唑(实施例61步骤1)置换1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例90.3-(5-氨基-8-(4-甲基噁唑-5-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-氟苄腈

步骤1：3-(5-氨基-8-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-氟苄腈

用与对实施例41步骤1至步骤4所述类似的程序，用(3-氰基-2-氟苯基)硼酸置换步骤1中的(3-氰基苯基)硼酸来制备此化合物。对于C

步骤2：3-(5-氨基-8-(4-甲基噁唑-5-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-氟苄腈

用与对实施例42所述类似的程序，用3-(5-氨基-8-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-氟苄腈置换3-(5-氨基-8-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈且用4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噁唑(实施例61步骤1)置换1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例91.3-(5-氨基-2-((3-(羟基甲基)吡啶-2-基)甲基)-8-(4-甲基噁唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-甲基吡啶

在室温下将TBS-Cl(918mg，6.09mmol)添加至(2-甲基吡啶-3-基)甲醇(750mg，6.09mmol)和咪唑(415mg，6.09mmol)的CH

步骤2：2-(3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)吡啶-2-基)乙酸乙酯

将3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-甲基吡啶(500mg，2.106mmol)的THF(7.0ml)溶液冷却至-78℃，随后添加正丁基锂(1095μL，2.74mmol)。在-78℃下搅拌1小时后，一次性添加碳酸二乙酯(765μL，6.32mmol)。然后使混合物缓慢升温至室温且搅拌过夜。将混合物用NH

步骤3：3-(5-氨基-2-((3-(羟基甲基)吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41步骤1至步骤3所述类似的程序，用2-(3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)吡啶-2-基)乙酸乙酯置换步骤2中的2-(吡啶-2-基)乙酸甲酯来制备此化合物。然后将对应产物溶于3mL THF中且用3mL 6N HCl溶液处理。将所述混合物在室温下搅拌3小时。将所述混合物用水稀释且用DCM(x 3)萃取。将合并的有机层经MgSO

步骤4：3-(5-氨基-8-溴-2-((3-(羟基甲基)吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41步骤4所述类似的程序，用3-(5-氨基-2-((3-(羟基甲基)吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈置换3-(5-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈来制备此化合物。将所得粗混合物用水稀释且用DCM(x 3)萃取。将合并的有机层经MgSO

步骤5：3-(5-氨基-2-((3-(羟基甲基)吡啶-2-基)甲基)-8-(4-甲基噁唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例42所述类似的程序，用3-(5-氨基-8-溴-2-((3-(羟基甲基)吡啶-2-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈置换3-(5-氨基-8-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈且用4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噁唑(实施例61步骤1)置换1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化最终物质，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例92.3-(5-氨基-2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-8-(4-甲基噁唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙酸甲酯

在0℃下将乙酰氯(0.355mL，4.99mmol)添加至MeOH(3ml)中，然后搅拌20分钟。向此混合物中添加2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙酸(140mg，0.999mmol)，然后在室温下搅拌混合物过夜。移除溶剂且残余物直接用于下一步骤中。对于C

步骤2：2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙酰肼

在室温下将肼(0.061mL，1.946mmol)添加至2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙酸乙酯(0.15g，0.973mmol)在乙醇(1.5mL)中的溶液中，然后加热反应混合物并在100℃下搅拌2小时。在冷却至室温后，将所得混合物部分浓缩，直至呈现固体。向此混合物中添加乙醚(1.0mL)且通过过滤收集所得固体，用乙醚冲洗，且干燥，以得到呈白色固体的所要产物，所述产物未经进一步纯化即用于下一个步骤中。对于C

步骤3：3-(5-氨基-2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例41步骤3所述类似的程序，用2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙酰肼置换2-(吡啶-2-基)乙酰肼来制备此化合物。对于C

步骤4：3-(5-氨基-8-溴-2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

在-30℃下将NBS(35.6mg，0.200mmol)添加至3-(5-氨基-2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(66.0mg，0.200mmol)在DMSO(0.4ml)/CH

步骤5：3-(5-氨基-2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-8-(4-甲基噁唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

首先将3-(5-氨基-8-溴-2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(10.0mg，0.024mmol)、4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噁唑(10.22mg，0.049mmol)、CsF(18.56mg，0.122mmol)和氯(1-叔丁基茚基)[2-(二环己基膦)-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基]钯(II)(1.355mg，2.443μmol)在二噁烷(0.5mL)/水(0.1mL)中的混合物用氮气吹扫，然后加热并在105℃下搅拌2小时。然后使反应混合物冷却至室温，且浓缩。将所得混合物用乙腈/水稀释且用制备型LCMS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化，以得到呈其TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例93.3-(5-氨基-2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-8-(噁唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与实施例92步骤5中所述类似的程序，用5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噁唑置换4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噁唑来制备此化合物。对于C

实施例94.3-(5-氨基-2-((3-甲基吡啶-2-基)甲氧基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

步骤1：3-(5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-溴-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

在氮气下在50℃下向溴化铜(II)(91mg，0.407mmol)和亚硝酸叔丁酯(0.054mL，0.407mmol)在乙腈(3mL)中的混合物中逐滴添加乙腈(3mL)中的3-(2-氨基-5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(100mg，0.203mmol)(来自实施例69步骤5)。在50℃下将混合物搅拌2小时。在冷却至室温后，添加1NNH

步骤2：3-(5-氨基-2-((3-甲基吡啶-2-基)甲氧基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将氢化钠(矿物油中的60％，3.8mg，0.095mmol)、3-(5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-溴-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(20mg，0.032mmol)和(3-甲基吡啶-2-基)甲醇(9.1μL，0.095mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的悬浮液加热且在110℃下在氮气下搅拌过夜。然后使反应混合物冷却至室温，浓缩且添加TFA(1.0mL)。然后将所得混合物在110℃下搅拌30分钟，使其冷却至室温，用乙腈稀释，过滤且通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化，以得到呈TFA盐形式的所要产物。对于C

实施例95.3-(5-氨基-2-((6-甲基吡啶-2-基)甲氧基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

用与对实施例94所述类似的程序，用(6-甲基吡啶-2-基)甲醇置换步骤2中的(3-甲基吡啶-2-基)甲醇来制备此化合物。通过制备型LC-MS(pH 2，乙腈/具有TFA的水)纯化所述粗品，以得到呈TFA盐形式的产物。对于C

实施例96.2-((5-氨基-7-(3-氰基苯基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2-基)甲氧基)苄腈

将3-(5-氨基-2-(氯甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(20mg，0.055mmol)(来自实施例72步骤4)、Cs

实施例97.3-(5-氨基-2-(((3-甲基吡啶-2-基)甲基)氨基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈

将原甲酸三乙酯(0.029mL，0.176mmol)、3-(2-氨基-5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苄腈(20mg，0.035mmol)(来自实施例69步骤5)和3-甲基吡啶甲醛(12.8mg，0.105mmol)在EtOH(1mL)中的混合物在120℃下搅拌过夜。然后将反应混合物冷却至0℃且添加NaBH

实施例A.腺苷A2A受体环状AMP GS测定

将表达人类腺苷A2A受体的稳定转染的HEK-293细胞(Perkin Elmer)维持在具有10％FBS和400μg/ml遗传霉素的MEM培养基(Life Technologies)中。在测定前18至24小时，自培养物移除遗传霉素。将利用FRET(荧光共振能量转移)技术的cisbio cAMP-GS Dynamic试剂盒用于测量细胞中的cAMP积累。将适当浓度的本发明的化合物与10000个细胞/孔在白色96孔半面积板(Perkin Elmer)中混合，在室温(RT)下轻微振摇30分钟。将4nM的激动剂CGS21680(R&D Technologies)添加至各孔中，在室温下轻微振摇60分钟。将检测试剂d2-标记的cAMP(受体)和抗cAMP穴状化合物(供体)添加至各孔中，在室温下轻微振摇60分钟。在Pherastar(BMG Labtech)上读取板，计算荧光比率665/620且通过使用GraphPad Prism将对照百分比相对于log化合物浓度的曲线拟合来执行EC

实施例B.腺苷A2B受体环状AMP GS测定

将表达人类腺苷A2B受体的稳定转染的HEK-293细胞(Perkin Elmer)维持在具有10％FBS和100μg/ml遗传霉素的MEM培养基(Life Technologies)中。在测定前18至24小时，自培养物移除遗传霉素。将利用FRET(荧光共振能量转移)技术的cisbio cAMP-GS Dynamic试剂盒用于测量细胞中的cAMP积累。将适当浓度的本发明的化合物与10000个细胞/孔在白色96孔半面积板(Perkin Elmer)中混合，在室温下轻微振摇30分钟。将12nM的激动剂NECA(R&D Technologies)添加至各孔中，在室温下轻微振摇60分钟。将检测试剂d2-标记的cAMP(受体)和抗cAMP穴状化合物(供体)添加至各孔中，在室温下轻微振摇60分钟。在Pherastar(BMG Labtech)上读取板，计算荧光比率665/620且通过使用GraphPad Prism将对照百分比相对于log化合物浓度的曲线拟合来执行EC

实施例C.A2A

在最终体积为10μL的黑色低容量384孔聚苯乙烯板(Greiner784076-25)中进行测定。首先在DMSO中连续稀释测试化合物且将100nl添加至板孔中，之后添加其他反应组分。DMSO的最终浓度为1％。将

实施例D.A2B过滤结合测定

在最终体积为550μL的深孔聚丙烯板(Greiner 786201)中进行测定。首先在DMSO中连续稀释测试化合物，然后将5.5ul添加至板孔中，之后添加其他反应组分。DMSO的最终浓度为3％。将过表达人类腺苷受体A2B的HEK293细胞膜(Perkin Elmer ES-113-M400UA)以50mM HEPES pH 7.0、5mM MgCl

实施例E.A1和A3 SPA结合测定

在最终体积为50μL的白色384孔聚苯乙烯板(Greiner 781075)中进行两种测定。首先在DMSO中连续稀释抑制剂且将100nL添加至板孔中，之后添加其他反应组分。DMSO的最终浓度为2％。

将麦胚凝集素涂布的硅酸钇SPA珠粒(Perkin Elmer RPNQ0023)和过表达各种人类腺苷受体的CHO-K1细胞膜在50mM HEPES pH7.0、5mM MgCl

表1.A

除本文所述的那些修改之外，本发明的各种修改也将为本领域技术人员根据以上描述显而易知。这些修改也意欲落入所附权利要求的范围内。本申请中引用的各参考文献，包括所有专利、专利申请和出版物均以全文引用的方式并入本文中。