小柴胡组合物在制备抗冠状病毒的抗病毒制剂中的应用

技术领域

本发明涉及中药组合物的新应用技术领域，具体而言，涉及小柴胡组合物在制备抗冠状病毒的抗病毒制剂中的应用。

背景技术

小柴胡颗粒为和解剂，具有解表散热，疏肝和胃之功效。主治外感病，邪犯少阳证，症见寒热往来、胸胁苦满、食欲不振、心烦喜呕、口苦咽干。

冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征 (MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。现有技术对于新型冠状病毒所致疾病没有特异治疗方法。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供小柴胡组合物在制备抗冠状病毒的抗病毒制剂中的应用。本发明实施例提供的小柴胡组合物对冠状病毒有明显的抑制效果，特别对新型冠状病毒的抑制效果优异，继而可以用于治疗冠状病毒导致的肺炎或者急性呼吸综合征等疾病。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明提供一种小柴胡组合物在制备抗冠状病毒的抗病毒制剂中的应用，以重量份计，所述小柴胡组合物是通过提取包含6-10份柴胡、2-4份姜半夏、2-4份黄芩、2-4份党参、2-4份甘草、2-4份生姜和 2-4份大枣的中药原料得到的提取物。例如，8份柴胡、3份姜半夏、3份黄芩、3份党参、3份甘草、3份生姜和3份大枣；或者，6份柴胡、2份姜半夏、2份黄芩、2份党参、2份甘草、2份生姜和2份大枣；或者，10份柴胡、4份姜半夏、4份黄芩、4份党参、4份甘草、4份生姜和4份大枣。

上述原料仅为小柴胡组合物提供活性成分的原料，该小柴胡组合物还可以包括药学上可接受的辅料，包括但不限于湿润剂、润滑剂、崩解剂、包衣、矫味剂以及填充剂等。

小柴胡组合物中柴胡疏邪透表，使半表之邪得从外宣，黄芩清热，使半里之邪得从内彻；半夏开结痰，降浊气以止呕；党参补气扶正，甘草和中；更加生姜和大枣以助少阳生发之气，使邪不内传。

在可选的实施方式中，以重量份计，所述小柴胡组合物是通过提取8 份柴胡、3份姜半夏、3份黄芩、3份党参、3份甘草、3份生姜和3份大枣得到的提取物。

在可选的实施方式中，所述小柴胡组合物的制备包括：制备所述柴胡、所述黄芩、所述党参、所述甘草和所述大枣的水提物；制备所述姜半夏和所述生姜的醇提物；而后将所述水提物和所述醇提物混合得到。

在可选的实施方式中，所述水提物的制备包括：将所述柴胡、所述黄芩、所述党参、所述甘草和所述大枣和水混合后进行煎煮，而后进行固液分离。

需要说明的是，固液分离得到的液体即为所需的水提物，本发明实施例提供的煎煮为现有的煎煮方式，且煎煮可以是将上述原料分别与水混合进行煎煮而后混合煎煮液，也可以是将上述原料混合后再与水混合进行煎煮，得到水提物。

在可选的实施方式中，所述醇提物的制备包括：将所述姜半夏和所述生姜与醇类溶剂进行浸渍后，进行渗漉，并收集漉液。

上述漉液可以是将姜半夏和生姜分别与醇类溶剂混合制备对应单一原料的漉液，而后混合得到所需的混合漉液，也可以是将姜半夏和生姜混合后再与醇类溶剂混合进行渗漉。

在可选的实施方式中，所述醇类溶剂为一元醇溶剂，优选为乙醇。

需要说明的是，乙醇仅为本发明实施例的举例，其他能够进行提取的醇类溶剂，也在本发明实施例保护的范围内，例如，还可以采用甲醇。

在可选的实施方式中，所述冠状病毒为COVID-19病毒。

在可选的实施方式中，在细胞模型中，所述小柴胡组合物的有效浓度为2.5μg/mL～50μg/mL。

第二方面，本发明实施例提供一种上述小柴胡组合物在制备治疗冠状病毒导致的疾病的药物中的应用；

优选地，所述疾病包括肺炎和呼吸综合征。

第三方面，本发明实施例提供一种上述小柴胡组合物在制备治疗新型冠状病毒导致的肺炎的药物中的应用。

本发明具有以下有益效果：本发明实施例提供的小柴胡组合物对冠状病毒有明显的抑制效果，特别对新型冠状病毒的抑制效果优异，继而可以用于治疗冠状病毒导致的肺炎或者急性呼吸综合征等疾病。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明实验例1提供的检测结果。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实验例1

本实施例提供一种小柴胡组合物的制备方法，包括：

称取80份柴胡、30份姜半夏、30份黄芩、30份党参、30份甘草、30 份生姜和30份大枣。

将柴胡、黄芩、党参、甘草和大枣混合，而后加入12倍量水，煎煮两次，且每次煎煮的时间为1.5h，而后合并每次的固液分离得到的煎煮液，浓缩至相对密度为1.05-1.15(50℃)。

将生姜和姜半夏混合，而后与70％的乙醇溶液混合，浸渍24小时，而后以1-3ml/min速度进行渗漉，并收集漉液，浓缩至相对密度为1.05-1.15 (50℃)。

将上述水提物醇提物混合，并浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃), 干燥,得到小柴胡组合物。

实验例1小柴胡组合物抗新型冠状病毒体外药效学试验

供试药：小柴胡组合物(北京汉典制药有限公司提供，批号190401)；细胞系：稳定表达ACE2受体的细胞株HEK293，由国科赛赋河北医药技术有限公司药理药效中心提供；COVID-19假病毒(批号：LV-nCov1-2)，由广州派真生物技术有限公司提供。

方法：D1，取对数生长期的HEK293-ACE2细胞，调整细胞浓度为6.25 ×10

试验结果：药物作用48h后显示：阳性对照组RLU/RLUc值(实验组荧光值与阴性对照组平均荧光强度比值)为0.05±0.01，供试品按浓度从高到低(50μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、5μg/mL和2.5μg/mL)RLU/RLUc 比值依次为0.14±0.05、0.08±0.00、0.13±0.05、0.25±0.15和 0.16±0.02；与阴性对照组相比，供试品各剂量组与阳性对照组RLU/RLUc 比值均有显著性差异(P<0.001或P<0.01)，参见图1。

从上述结果可以看出，本试验条件下，该小柴胡组合物在浓度为2.5 μg/mL-50μg/mL时，对COVID-19假病毒的抑制率可以达到50％以上，表明其对COVID-19假病毒感染稳定表达ACE2受体的细胞株HEK293有很好的抑制作用。

实验例2小柴胡组合物对新型冠状病毒肺炎的临床治疗作用

药物：小柴胡颗粒；生产企业：北京汉典制药有限公司；规格：每袋装5g。

设计方案遵循原则及依据：以新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第6版) 为依据，制定入选标准和排除标准。

受试者人群：1、符合新冠肺炎轻、普通型西医诊断者；

2、符合中医辨证为伤寒少阳证者；

3、年龄在17-65岁之间，含边界数值；

新冠肺炎轻、普通型西医诊断者：

轻型：临床症状轻微、影像学未见肺炎表现；普通型：具有发热、呼吸道症状，影像学可见肺炎表现。

伤寒少阳证者：

主证：往来寒热；次证：胸胁苦满，默默不欲饮食，心烦，喜呕，口苦，咽干，目眩；舌脉：舌苔薄白，脉弦。

排除标准：1、合并肝肾功能等原发性疾病，肝肾功能异常大于2倍及以上，精神病患者；

2、妊娠或者准备妊娠，以及哺乳期妇女；

3、对该药成分过敏者以及严重过敏体质者。

用药：温开水冲服，一次1袋(5g)，一日2次；合并用药：干扰素500万U雾化、利巴韦林0.5g静滴。

疗程：14天(注：如果服用该小柴胡组合物3天后临床症状以及中医证候减轻后，可继续服用该小柴胡组合物并观察至最长14天，否则需要立即停止本方，改用其他治疗方法)。

分组：处于伦理学考虑，本观察未设阳性药组和安慰剂组，仅对符合轻、普通型(伤寒少阳证)的患者进行了给药前后临床观察。

主要观察指标：1、中医证候积分变化(0天、开始服用该小柴胡组合物后3天、7天、14天)；

2、新型冠状病毒肺炎影像学(肺部CT)变化；

3、实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性转阴率。

次要观察指标：血常规：WBC、淋巴细胞计数。

安全性指标：血常规、尿常规、便常规、心电图、肝肾功能以及不良事件发生的情况等。

观察起止时间：本观察符合入组条件的3例患者分别于2020年3月 3日、3月6日、2月28日给药，分别于3月5日、3月11日、3月 7日结束观察。

历史用药情况：3例患者未有历史用药情况。

该小柴胡组合物按一次1袋，一日2次给药新型冠状病毒肺炎轻、普通型(伤寒少阳证)患者2-8天后，患者伤寒少阳证症候得到明显改善，发热、口苦、咽干、咳嗽、舌红苔白脉浮数等症状明显好转，双肺炎症好转。观察期间未出现不良反应事件。

鉴于实验进行期间(2020年3月)核酸检测试剂盒假阴性率较高，认为胸部CT片检测结果更有意义。另外，雾化治疗适用于上呼吸道感染，而 COVID--19主要是下呼吸道感染；利巴韦林也并不针对新冠病毒，所以二者治疗作用有限，起主要治疗作用的药物应该是该小柴胡组合物。

具体地病例如下：

需要说明的是：CT检测日期和出院日期不代表给药治疗的时间窗，给药治疗时在CT检测以后，出院日期之前。

田某(住院号：xxxx)，男，32岁。因发热、咳嗽2天入院。发热，口苦，纳差，舌红苔白腻脉滑数。2020-2-25就诊查胸部CT示双肺下叶感染性病变，病毒性肺炎不排除。血常规：LYM％：19.0％。ESR：62mm/h、CRP： 29.56mg/L。新型冠状病毒核酸检测阳性。

入院诊断

中医诊断：春温(邪郁少阳)

西医诊断：1、病毒性肺炎

2、肺部感染

入院后持续高热，咳嗽。给予干扰素针雾化，静滴利巴韦林针。3月3 日加用该中药组合物5g，每日2次后体温逐渐正常，咳嗽减轻。3月5日复查胸部CT示双肺下叶感染性病变较前吸收。复查血常规：NEU：6.47*10

汪某(住院号：xxxx)，女，35岁。因咳嗽10天，发热1天入院。发热，咽干，纳差，舌红苔薄黄、脉数。2020-3-6日胸部CT示：左肺下叶感染性病变，病毒性肺炎不排除。血常规：RBC：1.68*10

入院诊断：

中医诊断：春温(邪郁少阳)

西医诊断：1、病毒性肺炎

2、肺部感染

3、贫血

2020-3-6日入院后给予干扰素针雾化，静滴利巴韦林针。同时予该中药组合物5g，每日2次口服，2日后体温逐渐正常，咳嗽减轻。3月11日复查胸部CT示：左肺下叶感染性病变，病变较前(3月6日)吸收好转。复查血常规：RBC：1.3*10

张某某(住院号：xxx)，女，57岁。因发热、咳嗽2天入院。发热，口苦，咽干，纳差，舌红苔薄黄、脉浮数。2020-2-2胸部CT示：胸部CT：右肺中叶少许炎症。查血常规：白细胞计数:2.84×10

入院诊断

中医诊断：春温(邪郁少阳)

西医诊断：1、病毒性肺炎

2、肺部感染

入院后给予干扰素针雾化，静滴利巴韦林针。2月28日给予中药组合物5g，每日2次口服，体温逐渐正常，咳嗽消失。3月2日复查中性粒细胞计数:1.74×10

综上可知，采用该小柴胡组合物对于新冠病毒引起的肺炎等有良好的治疗效果。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。