一种甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量测定方法

技术领域

本发明涉及检测农药含量的方法，具体涉及一种使用高效液相色谱同时测定甲氨基阿维菌素苯甲酸盐中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和苯甲酸含量的方法。

背景技术

甲氨基阿维菌素苯甲酸盐是一种新型、半合成的高效杀虫杀螨剂，具有高效、低毒、无残留等特点，对鳞翅目昆虫具有非常突出的杀虫活性。在农药领域有广泛的应用。

甲氨基阿维菌素苯甲酸盐以生物农药阿维菌素作为起始原料，经一系列保护、氧化、氨化、还原、脱保护最终与苯甲酸成盐。苯甲酸是有效成分的一部分，为保证甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的质量，国家标准(GB/T 20694-2019)及行业标准(NY/T 3773-2020)均对甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和苯甲酸这两项指标进行了制定。国家标准及行业标准分别规定了甲氨基阿维菌素苯甲酸盐中苯甲酸及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量的测定方法，即分别用甲醇+水+冰乙酸＝50:50:0.1测定苯甲酸含量，以甲醇+乙腈+氨水溶液(水+氨水＝300+1)＝35:50:15测定甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的含量。

而关于甲氨基阿维菌素苯甲酸盐中苯甲酸及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量的同时测定方法未见报道，为使检测更加快捷、简便，探索同时测定苯甲酸和甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量的方法显得尤为必要。

发明内容

本发明提供了一种同时测定甲氨基阿维菌素苯甲酸盐中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐及苯甲酸含量的测定方法，该检测方法简单、快速、准确，重现性好。

为了解决上述问题，本发明采用的技术方案如下：

一种甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量测定方法，采用高效液相色谱的方法进行测定，同时测定出甲氨基阿维菌素苯甲酸盐原药或制剂中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和苯甲酸的含量。

本发明技术方案的进一步改进在于：所述的测定方法按下述步骤进行：

(1)制定色谱条件：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相A为0.03-0.5％的三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈，流速为0.6-1.4mL/min梯度洗脱，流动相A的比例为60-5％，流动相B的比例为40-95％，柱温为20-40℃；检测波长为220-260nm；进样量1-100μL；

(2)甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样溶液的制备：称取甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样约0.05g于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得标样溶液1；

(3)苯甲酸标样溶液的制备：称取苯甲酸标样约0.05g于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度；准确移取上述溶液10mL于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得标样溶液2；

(4)样品溶液的制备：称取与步骤(2)等量的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的样品于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得样品溶液；

(5)测定方法：按照步骤(1)所述色谱条件分别进样标样溶液1、标样溶液2和样品溶液，分别计算样品中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐及苯甲酸的含量。

本发明技术方案的进一步改进在于：步骤(1)中梯度洗脱的程序为

本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤(1)中流动相A为0.1％三氟乙酸水溶液。

本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤(1)中的流速为1.0mL/min，柱温为35℃。

本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤(1)中的检测波长为245nm。

本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤(1)中的进样量5μL。

本发明技术方案的进一步改进在于：甲氨基阿维菌素苯甲酸盐试样中的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的含量按下式计算：

式中:

A

A

m

m

P—标样中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B

本发明技术方案的进一步改进在于：甲氨基阿维菌素苯甲酸盐试样中的苯甲酸的含量按下式计算：

式中:

A

A

m

m

p

由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术效果如下：在此液相条件下，苯甲酸及甲氨基阿维菌素B

附图说明

图1是苯甲酸紫外光谱图；

图2是甲氨基阿维菌素B

图3是甲氨基阿维菌素B

图4是苯甲酸标样色谱图；

图5是甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样色谱图；

图6是甲氨基阿维菌素苯甲酸盐样品色谱图；

图7是苯甲酸线性图；

图8是甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B

具体实施方式

以下实施例说明本发明，但不以任何方式限制本发明。

(1)甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样溶液的制备：称取甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样0.05g(精确至0.0002g)于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得标样溶液1。

(2)苯甲酸标样溶液的制备：称取苯甲酸标样0.05g(精确至0.0002g)于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度；准确移取上述溶液10mL于另一于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得标样溶液2。

(3)样品溶液的制备：称取含与标样溶液等量的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的样品，即2.3％甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂约2.2g于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得样品溶液。

(4)色谱条件：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相A为0.03％-0.5％的三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈，梯度系统程序见表1；流速为0.6-1.4mL/min；柱温为20-40℃；检测波长为220-260nm；进样量1-100μL。

(5)测定法：按照步骤(4)所述色谱条件测定，即得。

进一步地，所述步骤(4)色谱条件为：仪器为Agilent1260高效液相色谱仪，配有DAD(二极管阵列)检测器，自动进样器；色谱柱为C18填料液相色谱柱，规格250mm×4.6mm(i.d.)，5μm不锈钢柱；流速为1.0mL/min；柱温为35℃；检测波长为245nm；进样量5μL。

表1梯度洗脱程序

试剂：三氟乙酸(色谱纯)、甲醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、水：新蒸二次蒸馏水、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样、苯甲酸标样、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐试样：河北威远生物化工有限公司。

苯甲酸及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐紫外光谱检测：利用二极管阵列(DAD)检测器，开启紫外全波长对苯甲酸标样溶液及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样溶液分别进行光谱扫描，如图1所示，苯甲酸在228nm附近处有较强的吸收；如图2和图3所示，甲氨基阿维菌素B

峰纯度检测：称取甲氨基阿维菌素苯甲酸盐样品2.1954g，测定各峰峰纯度,得苯甲酸峰纯度为999.990,甲氨基阿维菌素B

试样中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的甲氨基阿维菌素含量按下式计算

式中:

A1—标样溶液中甲氨基阿维菌素B

A2—试样溶液中甲氨基阿维菌素B

m1—甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样的质量，g；

m2—试样的质量，g；

P—标样中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B

试样中甲氨基阿维菌素B

式中:

A

A

m

m

p

10—标样稀释倍数。

线性关系考察

制备不同浓度的苯甲酸标样溶液进行液相色谱测定，得苯甲酸结果如下

制备不同浓度的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样溶液进行液相色谱测定，得甲氨基阿维菌素苯甲酸盐结果如下

如图7和图8所示，苯甲酸在0.0051mg/mL～0.1010mg/mL范围内，线性方程Y＝2.95629+5658.60374X,相关系数R＝0.9996；甲氨基阿维菌素苯甲酸盐在0.0501mg/mL～1.0032mg/mL范围内，线性方程Y＝8997.54288X-52.82427,相关系数R＝0.99916；其线性相关系数R均大于0.99，说明线性关系良好。

精密度试验

称取同一批次甲氨基阿维菌素苯甲酸盐试样6份，按照步骤(4)中所述方法进行检测，分别计算苯甲酸及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的精密度结果如下：

根据NY/T 2887-2016《农药产品质量分析方法确认指南》中3.2.1c)中要求，RSD的可接受标准为：％RSD＜0.67×2

回收率试验

称取空白样品，向其分别添加苯甲酸标样及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样，分别按照步骤(4)中所述方法进行检测，分别计算苯甲酸及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的回收率结果如下

按照NY/T 2887-2016《农药产品质量分析方法确认指南》中3.3.1c)中要求，有效成分1％～10％，回收率要求在97％～103％，由表4结果可知，甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(有效成分含量2.3％)平均回收率99.7％；有效成分＜1％，回收率要求在95％～105％，由表4结果可知，苯甲酸(有效成分含量0.2％)平均回收率99.5％，均在各自要求范围内，说明回收率合格。

实施例

称取5批次甲氨基阿维菌素苯甲酸盐试样，分别按照甲维盐国标的方法及本申请中所述方法进行检测，分别计算苯甲酸及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的含量如下，结果对比满意。