牛AANAT和ASMT基因的SNP标记及应用

技术领域

本发明涉及牛遗传标记筛选技术领域，具体涉及牛褪黑素合成酶AANAT、ASMT基因中与血清及乳中褪黑素性状相关的SNP标记及应用。

背景技术

褪黑素(Melatonin，MT)，化学式为N-乙酰-5-甲氧基色胺，具有抗应激、抗炎症、提高机体免疫力、改善睡眠质量、调节情绪、繁殖等功能。在体内的分布具有昼夜、季节节律，在生物体中的含量水平随每天的时间变化而变化。褪黑素具有白天含量低，夜晚含量高的特点，其高峰值通常出现在午夜。褪黑素的合成前体是色氨酸，松果体细胞从血液中摄取色氨酸后，在羟化酶和脱羧酶的作用下生成血清素，然后在甲基化酶的作用下生成褪黑素。此过程需要羟基吲哚-O-甲基转移酶(ASMT)参与，松果体中AANAT水平和褪黑素水平基本保持一致并受到光照调控，后续研究表明，ASMT同样具有调节褪黑素周期性分泌的作用，因此认为AANAT和ASMT均对褪黑素合成起到限速作用。

单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)指的是由单个核苷酸——A、T、C或者G的改变而引起的DNA序列的多态性，包括碱基的插入、缺失、转化和变换等。SNP位点分布是均匀的，在非编码区比在编码区更常见，SNP造成包括人类在内的物种之间染色体基因组的多样性。

近年来，健康食品的发展趋势导致了奶制品的竞争加剧。为了满足消费者的需求，功能性牛奶已开发出含有更高生物活性化合物的产品。褪黑素牛奶作为一种天然褪黑素补充来源，在国外市场已经发售，具有很大的市场前景，深受消费者欢迎。牛本身体内褪黑素水平具有个体差异性，褪黑素合成酶基因AANAT、ASMT调控的合成酶影响牛褪黑素合成。本发明通过对牛AANAT、ASMT基因测序，对其发现的SNP位点与牛血清及乳中褪黑素做性状关联性分析，找到与牛褪黑素水平相关的SNP，为早期鉴定高褪黑素牛的分子标记辅助选择提供一种方案，为褪黑素功能乳开发的高褪黑素牛群选择奠定基础。

发明内容

本发明的目的是提供牛褪黑素合成酶AANAT、ASMT基因中与血清及乳中褪黑素性状相关的SNP标记及应用。

第一方面，本发明提供与褪黑素性状相关的SNP标记，所述SNP标记的序列如SEQID NO.1所示；所述SEQ ID NO.1所示的序列自5’端起第926位、第1710位、第1727位、第1754位、第1761位、第1816位、第1818位和/或第1820位碱基存在多态性。

作为本发明的实施方案，所述第926位碱基是C或T，第1710位碱基是T或C，第1727位碱基是T或C，第1754位碱基是C或T，第1761位碱基是T或C，第1816位碱基是A或G，第1818位碱基为G或A，和/或第1820位碱基为A或G。

作为本发明的实施方案，所述SNP标记位于牛褪黑素合成酶AANAT基因的部分编码区，其中所述第926位、第1710位、第1754位、第1761位和/或第1818位碱基的多态性与牛血清褪黑素相关，所述第1727位、第1816位和/或第1820位碱基的多态性与牛乳褪黑素相关。

作为本发明的实施方案，与牛血清褪黑素相关的5个SNP位点优势基因型分别为CC、CT、CC、TT和GG。

作为本发明的实施方案，与牛乳褪黑素相关的3个SNP位点优势基因型分别为TT、AA和AA。

第二方面，本发明提供与褪黑素性状相关的SNP标记，所述SNP标记的序列如SEQID NO.2所示；所述SEQ ID NO.2所示的序列自5’端起第1714位、第3942位、第10121位、第10383位、第10417位、第13734位、第19616位、第22438位和/或第23667位碱基存在多态性。

作为本发明的实施方案，所述第1714位碱基是T或C，第3942位碱基是T或C，第10121位碱基是T或C，第10383位碱基是G或A，第10417位碱基是G或A，第13734位碱基是T或C，第19616位碱基为C或T，第22438位碱基为T或C，和/或第23667位碱基为G或A。

作为本发明的实施方案，所述SNP标记位于牛褪黑素合成酶ASMT基因的非编码区，其中所述第1714位、第3942位、第19616位和/或第22438位碱基的多态性与牛血清褪黑素相关，所述第10121位、第13734位、第10383位、第10417位和/或第23667位碱基的多态性与牛乳褪黑素相关。

作为本发明的实施方案，与牛血清褪黑素相关的4个SNP位点优势基因型分别为TT、CC、GG和AG。

作为本发明的实施方案，与牛乳褪黑素相关的5个SNP位点优势基因型分别为CC、AA、AA、TT和GG。

第三方面，本发明提供用于检测所述SNP标记的试剂盒，所述试剂盒包括引物对。

优选地，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.3-34所示。

第四方面，本发明提供所述SNP标记或所述试剂盒在奶牛选育中的用途。

优选地，所述用途包括选育与褪黑素性状相关的奶牛，更优选地，所述用途为选育产褪黑素乳的奶牛。

本发明通过对荷斯坦奶牛褪黑素合成酶AANAT、ASMT基因进行Sanger测序，根据NCBI数据库公布的牛AANAT基因序列(登录号Gene ID:NC_037346.1)和牛ASMT基因序列(登录号Gene ID:NC_037328.1)设计引物对，通过检测发现牛褪黑素合成酶AANAT、ASMT基因中与血清及乳中褪黑素性状相关的SNP标记。

本发明的优点在于：

本发明为天然高褪黑素牛早期高褪黑素性状的标记辅助选育提供了一种新的分子育种标记，可作为选择辅助方案，筛选方法简单快速，为褪黑素功能乳研发的早期奶牛选育阶段奠定基础。

附图说明

图1为不同基因型碱基信号图。

具体实施方式

以下实施例仅用于说明本发明，但不能用来限制本发明的范围。

以下实施例中使用的试剂和材料均为市售商品。

实施例：

1.牛基因组DNA提取

血液样品未加抗凝剂，解冻后取血块和组织液的混合物先消化预处理，使用动物/血液DNA提取试剂盒(通用型)，具体步骤如下：

1.1将Spin Column置于Collection Tube中，加入250μl Buffer BL，12,000×g离心1min，活化硅胶膜。

1.2样品消化：取20μl Proteinase K至1.5ml离心管底部，然后加入200μl高纯水稀释后的组织碎片，涡旋振荡10s；再加入200μl Buffer gA1，旋涡振荡10s，56℃孵育1～3h或过夜，期间震荡3～5次。

1.3孵育结束后加入200μl无水乙醇，涡旋振荡混匀。

V无水乙醇≈(V样品+V Buffer gA1)/2

1.4将步骤3所得溶液全部转入Spin Column中，12,000×g离心1min，弃废液。

1.5向Spin Column中加入500μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000×g离心30s，弃废液。

1.6重复步骤1.5一次。

1.7向Spin Column中加入500μl Wash Buffer(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000×g离心30s，弃废液。

1.8将Spin Column放回Collection Tube中，12,000×g离心2min，开盖晾干1min。

1.9取出Spin Column，放入一个干净的1.5ml离心管中，在吸附膜的中央处加50～100μl TE Buffer(65℃预热5min洗脱效果更佳)，20～25℃放置2min，12,000×g离心2min。如果需要较多量DNA，可将得到的溶液重新加入Spin Column中，离心2min。

注意：洗脱体积越大，洗脱得率越高。若需得到较高浓度的DNA，可以适当减少洗脱体积，但最小体积应不少于50μl，体积过小会降低DNA洗脱得率，降低产量。

2.引物设计原则

2.1外围引物设计原则

引物长度在15bp-30bp，其有效长度一般不大于38，否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度，从而降低产物的特异性。GC含量应在40％-60％之间，最适Tm值在58℃-60℃。引物自身不能含有自身互补序列，否则会形成发夹样二级结构。引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体，尤应避免3’端的互补重叠。

3.引物设计合成

AANAT、ASMT基因序列设计SNP位点引物名称以RS登录号/基因名称/位点所在位置命名，外围扩增引物合成PAGE引物。

AANAT基因引物序列如下：

ASMT基因引物序列如下：

4.PCR扩增

提取的DNA样品稀释至20ng/μl后作为PCR模板，以1.1×T3 Super PCR Mix进行扩增，每个位点进行单一扩增，每对引物均按以下扩增体系和程序进行扩增，扩增体系及各组分如表1所示：

表1.扩增体系及各组分

以上扩增体系按照表2扩增程序扩增：

表2.扩增程序

5.电泳检测

将扩增好的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳(2μl样品+6μl溴酚蓝)，300V电压下12分钟，获取鉴定胶图，通过胶图确定目的条带大小。

条带符合且单一的送到测序部门进行Sanger测序。

6.SNP位点与性状关联性分析

采用R语言软件进行SNP位点与表型之间的关联性分析，所用模型如下：

Y

7.实验结果

7.1牛血清褪黑素与AANAT基因SNP关联性分析

7.1.1如表3所示，牛AANAT基因中的第926位、第1710位和第1818位碱基的SNP与血清褪黑素浓度有相关性(p＜0.1)；牛AANAT基因中的第1754位、第1761位碱基的SNP与血清褪黑素浓度具有显著相关性(p＜0.05)。

表3.AANAT基因SNP与血清褪黑素相关性

7.1.2牛AANAT基因SNP位点基因型频率和等位基因频率如表4所示。从表4中可以得出，检测到与血清褪黑素有相关性的5个SNP位点均检测到3种基因型，这5个SNP位点优势基因型分别为CC、CT、CC、TT和GG，优势基因为C、C、C、T和G。(见图1)

表4.AANAT基因SNP位点基因型频率和等位基因频率

7.1.3牛AANAT基因5个SNP不同基因型与牛血清褪黑素浓度关联性分析，统计分析结果如表5所示。AANAT-926bp、AANAT-1761bp和AANAT-1818bp纯和突变牛血清褪黑素显著提高(p＜0.05)；AANAT-1754bp杂合和纯和突变牛血清褪黑素显著提高(p＜0.05)；AANAT-1710bp杂合和纯和突变牛血清褪黑素显著降低(p＜0.05)。

表5.AANAT基因SNP与血清褪黑素浓度关联性分析

注：表中相同字母表示差异不显著，字母a、b表示差异显著，n为该种基因型的个体数量。

7.2牛生鲜乳褪黑素与AANAT基因SNP关联性分析

7.2.1如表6所示，牛AANAT基因中的第1816位和第1820位碱基的SNP与生鲜乳褪黑素浓度有相关性(p＜0.1)；牛AANAT基因中的第1727位碱基的SNP与生鲜乳褪黑素浓度具有显著相关性(p＜0.05)。

表6.AANAT基因SNP与生鲜乳褪黑素相关性

7.2.2牛AANAT基因SNP位点基因型频率和等位基因频率如表7所示。从表7中可以得出，检测到与生鲜乳褪黑素有相关性的3个SNP位点均检测到3种基因型，这3个SNP位点优势基因型分别为TT、AA和AA，优势基因为T、A和A。(见图1)

表7.AANAT基因SNP位点基因型频率和等位基因频率

7.2.3牛AANAT基因3个SNP不同基因型与牛生鲜乳褪黑素浓度关联性分析，统计分析结果如表8所示。AANAT-1727bp和AANAT-1820bp纯和突变牛生鲜乳褪黑素显著提高(p＜0.05)。

表8.AANAT基因SNP与生鲜乳褪黑素浓度关联性分析

注：表中相同字母表示差异不显著，字母a、b表示差异显著，n为该种基因型的个体数量。

7.3牛血清褪黑素与ASMT基因SNP关联性分析

7.3.1如表9所示，牛ASMT基因中的第1714位、第3942位和第19616位碱基的SNP与血清褪黑素浓度有相关性(p＜0.1)；牛ASMT基因中的第22438位碱基的SNP与血清褪黑素浓度具有显著相关性(p＜0.05)。

表9.ASMT基因SNP与血清褪黑素相关性

7.3.2牛ASMT基因SNP位点基因型频率和等位基因频率如表10所示。从表10中可以得出，检测到与血清褪黑素有相关性的4个SNP位点中有3个SNP检测到3种基因型，1个SNP检测到2种基因型。这4个SNP位点优势基因型分别为TT、CC、GG和AG，优势基因为T、C、G和G。(见图1)

表10.AANAT基因SNP位点基因型频率和等位基因频率

7.3.3牛ASMT基因4个SNP不同基因型与牛血清褪黑素浓度关联性分析，统计分析结果如表11所示。ASMT-22438bp纯和基因型牛血清褪黑素显著提高(p＜0.05)。

表11.ASMT基因SNP与血清褪黑素浓度关联性分析

注：表中相同字母表示差异不显著，字母a、b表示差异显著，n为该种基因型的个体数量。

7.4牛生鲜乳褪黑素与ASMT基因SNP关联性分析

7.4.1如表12所示，牛ASMT基因中的第10121位和第13734位碱基的SNP与生鲜乳褪黑素浓度有相关性(p＜0.1)；牛ASMT基因中的第10383位、第10417位和第23667位碱基的SNP与生鲜乳褪黑素浓度具有显著相关性(p＜0.05)。

表12.ASMT基因SNP与生鲜乳褪黑素相关性

7.4.2牛ASMT基因SNP位点基因型频率和等位基因频率如表13所示。从表13中可以得出，检测到与生鲜乳褪黑素有相关性的5个SNP位点均检测到3种基因型，这5个SNP位点优势基因型分别为CC、AA、AA、TT和GG，优势基因为C、A、A、T和G。(见图1)

表13.ASMT基因SNP位点基因型频率和等位基因频率

7.4.3牛ASMT基因5个SNP不同基因型与生鲜乳褪黑素浓度关联性分析，统计分析结果如表14所示。ASMT-10383bp和ASMT-10417bpGG基因型生鲜乳褪黑素浓度显著高于AA基因型(p＜0.05)，ASMT-13734bp、ASMT-23667bp纯和突变生鲜乳褪黑素浓度显著提高(p＜0.05)。

表14.ASMT基因SNP与生鲜乳褪黑素浓度关联性分析

注：表中相同字母表示差异不显著，字母a、b表示差异显著，n为该种基因型的个体数量。

结论：

综合上述实验结果，在本实施例的实验群体中褪黑素合成酶AANAT上具有与牛血褪黑素含量相关的SNP位点5个，其优势基因型分别为CC、CT、CC、TT和GG；与牛乳褪黑素含量相关的SNP位点3个，其优势基因型分别为TT、AA和AA。褪黑素合成酶ASMT上具有与牛血褪黑素含量相关的SNP位点，其优势基因型分别为TT、CC、GG和AG；与牛乳褪黑素相关的5个SNP位点，其优势基因型分别为CC、AA、AA、TT和GG。本发明的褪黑素合成酶SNP位点可以作为牛褪黑素性状的潜在遗传标记，以用于高褪黑素奶牛的标记辅助选择。

以上所述，仅是对本发明的一般性说明及具体实施方案的描述而已，并非是对本发明作其它形式的限制。任何熟悉本领域的技术人员均可以基于本申请公开的技术内容加以更改或变型为其等同实施例。在不背离本发明的构思和精神的前提下，对本发明进行的任何修改或变型均属于本发明技术方案的保护范围。

序列表

<110> 中国农业大学

<120> 牛AANAT和ASMT基因的SNP标记及应用

<130> CP11377ND

<160> 34

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1842

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

gaacattaga gctcctgcaa cacaggagtc ctggtaagtg gaaccctgga ccctgggctc 60

ctagaatttg agagcaggag tcccctgccc agggcttggg gacgggggag agaaggaggc 120

agagggcggg aaggggaatg tgcggctcac aggctttgta agggatggac ggccgcccct 180

aagaactgca caccaacagg acatcagcga gtgagaaagg ggcccaggga gccagagcag 240

gcacagggca ggaggaatcg atgctctagc ccctagactc cccgctccag gtcccctaca 300

agagaggcaa gaggcgccat cgccctggac ggccccctgg gagatgagga ccagccccct 360

gaccatcgcc cctctccagc aggtgtggag ggaccctcct tgtcacacag gccctttctg 420

aagttgggga ccccttgggt ggcagccgca cccaggatgt ccacgccgag catccactgc 480

ctgaaaccct cgcctctgca cctgccgtct gggatcccag ggtccccagg ccgccagcgg 540

cgccacacac tccccgccaa cgagttccgc tgcctcaccc cagaggacgc tgccggcgtg 600

tttgagattg agcgagaggg tgagcagctc cctggccccc cagggtcaag gattctgggg 660

aactctgctg ctgttgccct tgggggaaga ccttggagtc ctctgtcctt ggcagatggg 720

cccccagagt gtctgatggt atgttttgtg tgtgtacagg agcacactca tgtttcagga 780

gagtgggggg aagagcagcc ctgaatccca tgctttccca ggggaggcct ggggacccgg 840

ggagcccacc cagcatccac acagatgctc agtggactgg gggtcaccca ctcgtgcttc 900

ctgacacagc cttcatctct gtctccggca actgccccct gaatctggac gaggtccggc 960

acttcctgac cctgtgtccc gagctgtccc tgggctggtt cgtggagggc cgcctcgtgg 1020

ccttcatcat tggctccctg tgggacgagg agagacttac tcaggtgagg atggaggtga 1080

cctgcccagt cccgggaagg cctcaggaaa ggaggccacc acctcccgtg gaggcagaat 1140

gtgggggagg agcgggagcc tgggatccaa cacaggagct cacggtgagt cctctcccgg 1200

caagagagcc cagtcctctg gggctcaagg ctctgatgaa ggggaccaca gaggggcggg 1260

gtcatagctc ctaacctggg tagaaggggg ctgactgggg actcacgggg cagctgctct 1320

tggcccagcg ggggtggttt tggggtgcac agaggcgacc ctgactcgtg tccgcctctc 1380

gccccaggag tcgctgacac tgcacaggcc cgggggccgc acggcccacc tgcatgcgct 1440

ggccgtgcac cacagcttcc ggcagcaggg caagggctcc gtgctgctgt ggcgctacct 1500

gcagcacgcg ggcggccagc cggccgtgcg ccgggccgtg ctcatgtgcg aggacgcgct 1560

ggtgcccttc taccagaggt tcggcttcca tcccgcgggc ccgtgtgccg tcgtcgtggg 1620

ctcactgacc ttcacggaga tgcactgctc cctgcggggc cacgccgccc tgcgccggaa 1680

cagtgaccgc tgaccccctg gggagcccat ggtcgggagc tcctactcaa tccccggccg 1740

tccccttctc tgccctgcca tcccccctgc tctgcttggt ctgaagggag acggtgattc 1800

ccaggggatt gtggaatgga gagaatgggt gaaataaaga ga 1842

<210> 2

<211> 25769

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

cggcgtccag cttacagggt cagtagtgac atgctggcca tctgcccagg ttgctcatag 60

actggtgaag cccaaagcta agatagccgg ggtccctcca agccagaccg gcccagaagg 120

aagatgtgct cccaggaggg tgagggctac agtctcctga aggaatacgc caacggcttc 180

atggtctccc aggtaggaag aggctccacc ggctgaggtt ctgttgccgg aggtgaggag 240

gacaacaggc actcagtgct gagcgaggac gcggtctcct ccggggggcg cgagggtgcg 300

ctgggactct gggcgagtcc acgggcagaa gcttggccat cggggcctgg gggcccttct 360

agggatgtgt tggccctcac ggagtgggcg tctcagaacg acagttgtag gggcttccct 420

ggtagctcat ttggtaaaga tctgcctgca acgcaggagg tccaggttcc acacctgggt 480

cgggaagacc ccccggagga ggaaatggca acccgctcca ggattcttgc ctggagaatc 540

ctgtgggcag agaggcctgg ggggctacag cccatggggt caaaaatgag tcagacatga 600

cttactaacc cttttttcac tgtgttagtg aaacaggagt gcatacaatc ttattagaat 660

aaaacttaat ataaaccgag tattaagaaa taacatctca atagaaaaaa ggtgaatccg 720

gcgttgagga taaaactgaa taggacctca gcagaacaaa cagacttaat aaaatcgtgg 780

gtgggttggg aggctgggat tgagacatat acacacactg ttgatcgtgt gtataaaaca 840

ggacggatga gaacctgctg tacagctcag gaactctact cagacttctg tgctgacctg 900

ctgctgctaa gtcgcttcag tcgtgtccga ctctgtgcga ccccacagac ggcagcccat 960

caggctcccc cgtccctggg attctccagg caagaacact ggagtggggt gccatcgcct 1020

tctccactgt gctgacctac atgggaagga aattccaaaa taagagggga tatatgtata 1080

aacgatggct gattcccttt gctgcccagc agagactaat acaacattgt aaagctactg 1140

ctgtaaaatt aactttaaat atttcaatag aacgagagtg aatccagtgt taagagaata 1200

aatgtaaata caacctgagt ggaatgggag actgagtaaa actcagtaga aggacgtccc 1260

tgagggctca gtgactaaga ctcttgagtt cccaacgcag gggccccggg ttcgaccccc 1320

ggtcagggag ctagacccca cgtgccacga ctaagacctg gtggagacta agaaatataa 1380

gtaaaaataa tttaaaaaac tcaatagaat aaaatatgaa tacgacctta gtaggatggg 1440

ttcaaaacat ctcagacaag agggattgca actttactat aattagagtt aatacaacct 1500

cagtagaaag cgaacgctat attaattgga taaaacttaa tgcaacctca ggaggaaatt 1560

gataaaacct cgatagaacg agagcgcacc caactttcag agaataaaac gtcctccagc 1620

cttacagaat gagagtcaat accccgttaa cagaacaaga gctgaaacca tcttaataga 1680

atgtgactga agacaacctg cgtacgagga gagttaatga aatatgaatg gaaaaaaacc 1740

tgagtgcaac ctcgatggag tgagcgttta taatatctca atagaataag actgcaccca 1800

acgttaaggc aagaaaatgt actacgacca cttggaatag gagttcatga aatgttttta 1860

catagagagt gaacgagacc cgagcacagc gcttatacaa tcactgcagg gtaagtgtca 1920

gtcacttagt cgtgtccgac tctgcaaccc catggactgc agcccgccag gctcctctgc 1980

ccatgggatt ctccaggcaa gaatgctgga gtgagttgcc attttctcct ccaggggatc 2040

ttcccgaccc agggatcaaa ctcgggtctc cggcattgtc aggcagactc tttcctgtct 2100

gagccaccag ggaaacccca gatgcgcttg tctgctgaaa cccaggaata gggagtgaat 2160

aaaacctgaa tataggcgct ggtataatca tagcagggta agagatcatg ccaacttcac 2220

tgaacaagaa tcaacacaac tttaacaggg tgagaactga ttccgcgtta atagaatacg 2280

gctgaatacg accttcgtac aaggagagtc aataaaatcc taatagaaaa aaatctgaat 2340

gcactcttaa tggactgttc atgacatctc aatagaacaa gagtcattac aacttaatat 2400

aattagagtt aatattgagc tcactgcaag agctgatacc atcttaagag gataaagctt 2460

aatacaatct taatatagta ggacttggag cgacctatta aggataacaa ctaataaaac 2520

cttaagaaga gtagatacaa tctttacaga ataagagtta ataccgtctt aacagaacag 2580

gaatggatat ggccatttta atgtaaacat ttaattttat actggggtat agccaatgaa 2640

ccggagaagg caatggcacc ccactccagt gttcttgcct ggagaatccc agggacaggg 2700

gagcctggta ggctaccgtc tatggggtca cacagagtca gacacgactg aagtgactta 2760

gcatagcata gtcaatgaac aatgctgtga tggtttctgg tggacagcaa agggactcag 2820

ccagacatgt acatgtatcc attctccccc agctcccctc ccacccaggc tgccacacga 2880

cactgagcag aactccctgt gctgtccagc aggtccttgc tggttctcca tgttaaatac 2940

agcagtgtgt ccatgtccat cccagactcc ctgaccatcc tttctgccac caaccataag 3000

ttcattttct aagtctgtga gtctttctat tctgtaagtt gggttgtgtc atttctttac 3060

agatcccaca tgtaagggat gtcggatgat attttccctt ctctgtctga ctcaccctcc 3120

tgaagagtgt gagtcctcgg agaactaaag ctgactctgt cttcattgcc ccgaggttct 3180

ctttgctgcc tgtgagctgg gggtgtttga gctcctggca gaggccctgg agcccctgga 3240

ctcagcagca gtgtcttcac atctgggctc cagcccccag gggacagagc tgctactgaa 3300

cacctgtgtg tccctgaagc tgctgcaagc cgatgtgagg ggaggaaaag gtaagcaccc 3360

tggctgtttg gaagaaggcg ttttaaaggt gcactctcag cacagttttc tgttttattt 3420

ttctggaaag agccacagag taagtcttct cagcctggaa ggccggccac gaggtctctg 3480

cagatgacac tcatctctgc ctttggagca tcagagctgc tggagacaga cagatgggcg 3540

gggctgatcc taataaaact ttattggcca gacaggtggt ggaacaaaga tccaataaag 3600

gtttattgac taaacaggtg ttggaacagg gttccaataa agctttattg atcaaacagg 3660

tggtggaaca gggttccagt aaagctttat gggccaggca gggggtagaa catggtacca 3720

ataaagcttt attagccaga caggtggtgg aacaaggttc caataaagct ttattgacca 3780

aacagatgct ggaacaaggt tccaataaag ctttattgtc aacacaggtg gtggaacagg 3840

gtgacaataa agctttattg tcaacacagg tggtggaaca gggttccagt aaagctttat 3900

agaacagaca ggcggtgaaa cagagttaca ataaagctct ttagcagaac aggttgacgg 3960

aacaaggttc caataaagct ttattggcaa aaacagatgg ccaaaaccgg gtaccaaatt 4020

cgggttgtca tttgctgact gtggatcagg aagtttccag aggctggtgt ttgcactgaa 4080

accctgatga aatatccaag caacgagaca gaaatgtgac cgaaaagtta cacgggagta 4140

atttttccat catgctcaac tgcttctttt caagggttgc cctttgtgtt aagatcatat 4200

tcttgttttg gtattgaagc tgctttcctc ttacagaaga tggtccttgc cagtttttac 4260

ttttaatgcc ccttctttgc aaaattaaaa attgtaagcc ctatatcagt cacttagatt 4320

tttttttttt tagaatcttg agaatctgtg aaattgcaaa gtgtagggac cactgcctgg 4380

cagaataggg gtgggtggga gggcagtggt agaggtgggt gatgggcttt ctccttgaag 4440

caaggacttg cgtccccgtt ggatttatgg ggtgcaaaca gagaaagtga gttaacttga 4500

acaggaggac gttgtttggg ggttgacggt actcagatgg ctgtgggctt gggaatcaag 4560

cagtcacacc ctgtgagtaa gctttgcagc cccctccctt tcccccactg gcacccccag 4620

cgcgggctgc ggtccagcca ggacacacct gcggaggatg gcggacgttc aaggggaagc 4680

tcctgggggc gggaggagcc tgctgtacct gcagaccctc gggtaggcac atcaggatgt 4740

gggctaacct gccgggctgg agacgctggg atgctcggct cagagaccag gttacaggac 4800

ctccggctgc aacgctgttg ccctggggac cccttggagc cccgcaagca ttcggcaggt 4860

acagattggg cagaaacagt gagcgcattc agtgcagtcc agtcgctccg tcgtgtccca 4920

ctctttgcga ccccatagac agcagcacgc caggcttccc tgtcctcctc catctagaat 4980

ttgctccaac tcatgtccat cgagtccgtg atgccatcca accatctcac cctctgtcgt 5040

ccccttctcc tcccaccctt aatctttccc agcatcaggg tcttttccaa ggagtcagtt 5100

ctttgcagca ggtaaggcca aaggattgga gccccacgga catgtatcac gtgtcgtcta 5160

cggggtcgca aagagtcgga ggcgactgag ggattgagca acactggggc tcgctggccc 5220

tttccgtttg ctacatcgga tctttccgtg ggatttacga gggctgaaag cggcaggcag 5280

gacacgcagc ccctgcacca caggccagcc ggtccttcgg gacgagggtc cagctgtcgg 5340

ggtgccgacc gtcccaggca agaatcacgt ctgcagtcag gaagttgcca gcataactgt 5400

tggcatcttg gcgatgcctg ggtgtctaac tttattcccc cgccccttct gtttgttttc 5460

agctgtgtat gcaaacacgg agctcgccag cacctacctg gtgagaggca gccccaggtc 5520

ccagcgggac atgctgctgt acgcgggcag gaccgcttac gtctgctggc gccacctggc 5580

ggaggcagtc aggtgcgtgt cagccgcgcc cgcgagtccc cagggccgcc tgcgggctgg 5640

cttccgggcg tgccaggaag caacgtgtta ggtttcttat gcgcgcgggt ctccaagctc 5700

ccggatctag gtttcttagc gcgcgggtct ccaaactccc ggatctaatg cctgatggtg 5760

tgaggtggag ctgatggagt aataatagaa atacagggaa gagtcactgc aaggactgat 5820

gctgaagctc caacactttg gccatttgat gtgaaaaact gacccactgg caaagaccgt 5880

gatgctgggc aggactgaag gcgggaggag aagggggcga cagaggatga gctggttgga 5940

tggcatcacc gactccatgg acatgggttt gagcaagctc cgggagttgg tgatggagag 6000

ggaggcctgg cgtgctgcag tccgtggggt cgcaaagagt cggacacgac tgagcgactg 6060

gactgaacgg aactgcaaag tggaaagcga ttcctgagta gtcttgggtt actcgtttcc 6120

cgcagaggcc gtctgtggtg ccagggtaag gtctgtgaat gcaaggccgt atgaacggag 6180

tgcagtgacg tctcggggcc tgagtgacgg tctcctcctc gttttcaggg aagggaggaa 6240

ccagtatctg aaagccttcg ggatcccgtc cgaggagctc ttctctgcca tctacaggtg 6300

acgccgccca cccactccca tagcgtcctg cttgagagtt acatttgtgt atttctcatt 6360

gaaggataat ccctttgcag aattgtgtgg gtttctgcca cacatccgca tgcatcagcc 6420

atcggttggc ctgcgtcccc tccctcttga acctccctcc cacctccctc ccacctccct 6480

cccacctccc acccctctag gttgtcccag agccccggtt tgagctccct gagtcatccc 6540

gcagattccc atgggctatc tgcatcgcac atggtgatgt acgtctctcc gtacctccca 6600

ccttctcctt ctccctacct ccccgggtct gtaagtctgg tatgtctgca tctccactga 6660

tgccctgcaa atgcattcac gagtaccgtc tttctagatt ccatatgtat gtctcagtat 6720

acgatatttg tttttctgac ttgcttccct ctgtgtaaca ggctccaggt tcctccacct 6780

cattagaact gactcaaagg cgttcctttt tgtggcggag taatattcca tcgtatacat 6840

gtaccacaga gtctttattc atttgtctgt cgatgggcat ctaggttgct tgaaatgtga 6900

cagcagtcgt gttgatttac aatgttccat taatttccgc tctacagtga agggattcgg 6960

ttatgcaaat atacacgatt tcattttgta acaactgagt aatatcccac cctatatatg 7020

caccacatct tctttctcca ttcctctgtt gatggacatt gaggttgctt ccatgtcttt 7080

gctgttgaga atagtgttgt gatgaatcct gggggggtgc gtgtcttttc taattatggt 7140

tttctccagg tgtatgcccc agcggcggga ccacaggatc gtgcgatagc tctctctcta 7200

gtttttaaag aacattcaat accattttcc ataatacctg gacaagtaca cattcccacc 7260

aaaactgcag agggctcctt tttctccacg agctctccaa cacttaatgt ttgcagagtt 7320

tttgataatg gcagttctga ccggtgcgag atgatttacc tgttgtaggt ttgatttgcg 7380

tttccctaat actcagaacc ccactccagt cctcttgcct ggaaaaccgc atggatggag 7440

gagcctggta ggctgcagtc catggggttg ctaagagtca gacgtgactg agcgacttca 7500

ctttcacttt tcactttcat gcactggaga aggaaatggc aacccactcc agtgttcttg 7560

ccaggacaat cccagggacg ggggagcctg gtgggctgcc gtctatgggg tcacacagag 7620

ttggacacga ctgaagcgac ttagcagcag cagcagagtt gagtttccac ctggtggttt 7680

tttttttttt ttttttcagg tattccagag tttgattcag ttatacatag aggtttattc 7740

ttttttaggt ttttgttttt ctcacagagg tagttacatc atgctcagtg acttccgtgt 7800

gcaattcagc acagactttt ggatcatcaa ttctgtatat atgagtgtgt acatgttcat 7860

tcctaaccct tcatttgtca ctttcatata acattttttt tttttttggt agtcataagt 7920

tcctttgagc ttccctggta gctcagctgg taaagaatcc tcctgcaatg ttggagaccc 7980

cggttcgatt cctgggttgg gaagattccc ctggagaacg gataggctac ccactccagg 8040

attcttgggc ttccctggtg gctcagctgg taaagaatcc acctgcaatg ctgggagacc 8100

tgggtttgat ccctgggtca ggaagatccc ctggagaagg gaaaggccac tcactctagt 8160

attctggcct ggagaatccc atggactgta tagtccttgg ggtcgcaaag agttggacac 8220

gactgagcaa ctttcacaca taagtttctt tactccgttt cagagtctgg ctctgttatg 8280

taaattagtt cgtttgtgtg aacacccaga gccccccgtc atggttatat gatagctgtc 8340

tttctctgac ttccgtcact tggtaccgga gtcactcggt ccatccaggc tgctggcagc 8400

ggccttattc cgttctgctc tgcgggtgag ccgtattctt gcacagagag atctgccttt 8460

gttttcctgt caggggacgt ttcggtggat tcggtgtctt ggccaatgtg cattgtgctg 8520

ccctgaaaac aggaaggcgt gtgttatttt gaaacatgac tttttttctg gatctgagcc 8580

cagaggtggg attactggat tgtacggttt ctggatgctg aagttttgta aggaacctcc 8640

atgccgtttg ccacgtttgc tgcacgagtc tagcttccca ccaagactgc gggaggattc 8700

cgcttgccgc ctgccctttg cagcacttga tctttgtaga tctttctgaa gatggccatt 8760

ctgatctgtt cgaagggatg cgtcattgca ctttcgattt gcttctaata attactgatg 8820

ctgagcatct ttttatgggc ctgatgccaa cctgtatgcc ttcttggacg agatatccat 8880

tttgatcttt ggcatatata tatatatata tttttttttt tttccttctt gggttgtctg 8940

tgtttgtcat attgaaatgc atgagctcct cataagtttt ggagttgaat ttcttgtgag 9000

tgtcttcatt tgcaaatact tttttttttt tgcagtctga acactatctg tttctttcgt 9060

tcagggcttt ctttgttgaa caaatgctct tcaggtagat gaggtcctgt tttctttttg 9120

ttgattattc attatactaa aatatatagt tcagctcagt cactcggtcg tgtccgactc 9180

tgtgacccca cgaactgcag cacaccaagc ctccctgtct atcaccaact cccggagtcc 9240

acccaaaccc atgtccatcc agtcggtgat gccatccagc catctcatcc tctgtcgtcc 9300

ccttctcctc ctgccccgaa tccctcccag catcagggtc ttttccaatg agtcaactct 9360

tcgcatcagg tggccaaagt actggagttt cagctttagc atcagtcctt ccaatgaaca 9420

ctcaggactg atctccttta ggatggactg gttggatctc cttgcagtcc aagggactct 9480

caagagtcta ggctcctctg tccatgggat ttcccaggca agtatactgg agtgggttgc 9540

caatcacttc tccaggggat ctttccatga cccagggatg gaacgcaggt cttctggggt 9600

cttcctgacc ccgggattga gccttgtggg tctccgcacc gcaggcggat cctctaccct 9660

ctgagccgcc ggggaagccc gtgtgttacg gtagagcacg gctgctttcc cgcattgcgt 9720

tagtttcagg ggtgcgggaa cttgattcat ttatacacag acatccgtcc attctgtctc 9780

aggctctctt tcccgtctag gtaattagcg tctgttcagt agagttccct gtggtgttca 9840

gcaggtgttt ttgatcatca catcatatat gggaactgga atatgtccat tccaaactct 9900

gaaataaccc catccccatt acagcttgtg tgtgtgtgtg tgcgtgtgtg tgtgtgtgtg 9960

tgtgtgacat ttataggtaa tttctctcag tttcagagtc tgtctctgtt gtgtaattag 10020

ttcgtccgct tgaatatcta caatccaggt gtaggaggca tctcaggacc tttgtctccc 10080

cgtctctgac ttccttccct ccccgtgtgt gacggccact tggtcggggc atgctgctct 10140

ccgtggcctt attctgtcct ctgtgtggct gagttgtgct ccaggggaga ggtgggcccc 10200

actctgtctt cattttcctg tcgacagaca tttcggtcga ttcgctttcg tggcctttgt 10260

caatcacgcc gtcctgaaga caggggtgcg tgtgtcattt cgcatcgtga tgtttctctg 10320

gatctaagcc cacaggtggg actgctgggt cgtacgtttt ctggagggtt agtgttctaa 10380

gggcgctcct tgctgttttt cacaattcct gccctgcttt agttccctag caaacgtgta 10440

ggaggatttc ctttttttct ccgccctttg ttagcacgtg ttcttggtag aatgtctcga 10500

tgatggtcgt gctgaccggt gtgaggagat ccctcattgt ctttgagtac cttctaataa 10560

ttagtgatgc tgagtgactt ttcgtgagtg gaatggccct ctgtatgcct tcttggaagg 10620

aatatgtatt tttatctttg gacccttttt atctctgatg ttttgtggtt ttgatatgag 10680

acgtgtgagc tgtttgtagc aattggaggt gaatttcttg tgtgtatctt ggttagaaaa 10740

aatttctttt ccattctgag agtctctttc tctatcgttt tcgatgtcgt cagttgtcaa 10800

aatgcattta aggtctgtgc ccacatgctc ttttcttatt tttggctcat tgttcatttt 10860

ctgtgtggtg gatccaaatg aacctcttca cgattgttca agagggttgt gaagtaaaag 10920

tcgctctgtc gggtctgact ctgcgacccc atggactgca gcacgccagg cctccgtgtc 10980

caccaccatc tcccagagct tgctcaaatt catgcccatg gagtcggtga tgccatccaa 11040

cggtctcatc ctctgtcgtc cccttctcct cctgccctca atttaatgac agcaagcgca 11100

gcttttatat gtgtcgttac aaagcccagc cacgaggtgg cagaatttct ccagaaactg 11160

ttttttttta accccttttt gtagtagaaa tgttagttta ctttggagaa cgcttcattc 11220

ctccgatatt gtatttgttt caagggtaca ggaacttgga tttccttata catagatgtt 11280

tatctcttct ttatttttcc accatatagg tggttagagt gtgttcagta gacgccgttt 11340

tgctattcag taggtcattt tggatcatct gtttgattat attataatct ggtggctcgg 11400

tggataaaga atctgcctgc aatgcaggag attagggctt gatccccagg ttgggaagat 11460

cccctggagg agggcatggc agcccactcc agtgtccttg cctggggaat cccacggaca 11520

gaggagcctg atgggctaca gtccacgggg tcgcagagag tcggacacga ctgagccact 11580

cagcatgaac aaatgtgtgt gttatcagca aactctaaat ggatccatca tcactaactt 11640

ttctcgtttt tataagcgta agtttctttt ctctgttcca acgtctgttt ctattgggta 11700

aagcagtttg tatccattgt tagattccag ccacaagtgg tctccttctc cctgtctgcc 11760

tggcttctct agggctgatc atctctgctt ccttctctca cactggacat ggcattctct 11820

cctgctcgtt cgtgggtgac ttgatggttc gtcgtgtctg tgaggccccc tcttctttac 11880

ccgttcacct gtccccgaac actcaggctg tttccgtgtc gtggttattt tcctggcgcg 11940

gctgtgatct cccgagtgta cctatgtttt ggaaaccctg gggcttctct ggctctgtgc 12000

ccatggtcgg ggtgagcgtg tcctaagatg cttctctgtt ttcttttctg aaggaccccc 12060

atactcttct ccctcctgca tggaccgatt cccactccca gcaacagtgc agggaggctc 12120

tctcccctcc acaccctctt cagtgtttat tttggagatt ttgtgatatg cccattctca 12180

caagatgggc aaggtgtatg gtgatacctc acgagacttt taagtggcct ctctctaata 12240

agcagtgatg ctcagcacgt tttcatgtcc ctaatgcaat ctttctgcct tctggaagac 12300

atacccattt caatctatgt cccctttatt tcttgttttt tgtgtgtctg tgtgtgtgtc 12360

tgtgtgtgtg tgtttttgac acagagccgc acaagctgtt tctgtgtttc ggacacaagt 12420

tttccgtggg tatcttggtt tgcaaagatt gtttgccatt ctgagcatta tcttttcatg 12480

tgggattccc cgtgctgtgc aaattctttt gcggttaact agattctgtt tcggagaagg 12540

caatggcacc ccactccagt actcttacct ggaaaatccc ctggacggag gagcctggta 12600

ggctgcagtc catggggtcg ttcagagtcg gacacgactg agcgacttca ctttcacttt 12660

tcactttcat gcattggagg aggaaatggc aacccactcc agtgttcttg cctggagaat 12720

cccagggacg ggggagcctg gtgggctgcc gtccatgggg tcggacagag tcggacacga 12780

ctgaagcgac ttagcagcag cagcagatcc tgttttctta ctttgggtgt atatttccct 12840

actctgagtg gacggcaagg ctgtcctgac tgtattttcg tgcagaagct cacattctgt 12900

gtcctccgat ttagacctcg gtctttcctg aagtgcgtct tagtgtacgg tcttggggaa 12960

tattcccgtt tccttctggc tttcattgtt tcaggcgccc cctacgctgt cccccgtgac 13020

gcccgtcacc tgtttggatt cccagcagcc caggaggagg gccccgtgct cttccaccgc 13080

gtctgcggca ttgggtgtgt gtagagggtt tgaccatgag cattctcagc tgtgtgaggc 13140

gatacctcgc tggaatttga tctgcctctc ccttataatt cctggtgccg agcacttttc 13200

atggatctaa tgcaacctct atagttgctt gcaagaaata tgcatttcca tctctggccc 13260

cccttttttt tttttccatg ggttggttgt gtttttgaca ttgaggtgta ggagctgttt 13320

gtatgttctg gagatgaatt tctggcaggt atctttgttt gaaaatgatc ctccccccca 13380

caattttaag gatttctctt tccttgagga tgtcctggct gtggaaatgc ttttaaggtt 13440

aattaggtcc tgttttcgtt ttgggtttag ttttcattct tctaagtgaa aatcactcag 13500

tcgtgtctga ctgtctgcga ccccgtggac tatacagtcc atggaatcct ccaggccaga 13560

atactggaat gggtagcctt tcccttctcc agggcatctt cccgacccag gaaaggaacc 13620

cagctctccc gcattgcagg cagattcttt accagctgag ccaccaggga agcccaagaa 13680

tactggaggt gggtagcctc tcccttctcc gggggatctt cccaacccag gaatcgaacc 13740

aggggtctcc cgcattgcag gattctttag ctgctgagtt accagggaag ccccattatt 13800

ccaaggggtg aatgtcaaaa tgtgtcccgc atgtacctcc cctaagaatt tcatagaacc 13860

tgtccttcca tctaggtctt aggctatttg cagattcttg ctgtgtgtgg tgttagggac 13920

tgttctgatt gccttgtctc tctctctccc ttttaattgt ctgaggagca tccagactgt 13980

tgtccatagt gctaggcacc atttgcgttc ccgggtggta ggaggagaat tctgtttcct 14040

ccacagactc ttcagcacgg agtgtttgtg gacttgttta cagcggccat tctgaccggt 14100

gccaagtgat tctgcattga aatctggttt gcctctcgct aataatccct gatgctgcgc 14160

gttcttcacc ccaggaaagt ggttctgtta tgctaagtgc accgggcttc tttctccttt 14220

tgcggctgag tcatattcca cggtgtgtgg ataccacggc ttcctcatct gagtcgtatt 14280

ccacgccttg ctcatctgcg cctctgtcgg tggacagctt gattgcttcc acatcttgaa 14340

catcgtgacg agtgttgcta tgatcatcaa ggtgcgtgca ttttttcaaa ttatggtttt 14400

ctccaggtat atgcctcgag gtgagattgc tgggccatga gtgcagtgca gtcgctcagt 14460

cgtgtccgac cctttgcgac cccatgaatc gcagcacgcc agccctccct gtccatcacc 14520

agctcccgga attcactcaa actcacgtcc atcgagtcag tgatggcatc cagccaactt 14580

atcctctgtc gtccccttct cctcctgccc ccaatccctc ccagcatcag ggtcttttac 14640

aatgagttaa ctcttcgcat gaggtggcca aagtactgga gtttcagctt tagcatcatt 14700

ccttccaaag aaatcccagg gctgatctcc ttcagaatgg actggttgga tctccttgca 14760

gtccaaggga ctctcaagag tcttctccaa caccacagtt caaaagcatc aattcttcgg 14820

cgctcagctt tctttatcgt ccaactctca catccataca tgaccactgg caaaaccata 14880

gacatgacta gacagacctt tgttggcaaa gtagtatctc tggtttttaa tatgctatct 14940

aggttggtaa taactttcct tccaaggagt aagcgtcttt taatttcatg gctgcagtca 15000

ccatctgcag tgatttggag ccccccccaa aataaagtct gacactgttt ccactgtttc 15060

cccatctatt tcccatgaag tgatgggacc agatgccatg atcttagttt tctgaacgtt 15120

gagctttaag ccaacttttt cactctcctc tttcaccttc atcaagaggc tttttagttc 15180

ctcttcactt tctgctgtaa gggtggtgtc atctgcttat ctgaggtcac tgatatttct 15240

cccagcaatc ttgattccag cctgtgcttc ctccagccca gcgtttctca tgatgtactc 15300

gcatagaagt taaataagca gggtgacaat atacagcctt ggcggactcc tttccctgtt 15360

tggaaccagt ctgttgttcc tttccctaat gtttgactgt gttgagatca ttttatgtga 15420

tatgttttta acgagtgcaa gttaaaggta cctgttgacg ttgacttcgt gatcatctgc 15480

ccagttttga gttcttgttc actgaacacc cctaggagac tcctaggagg gcagaagtac 15540

ttggagccct gcagagcttg ggaatattaa cgtgaatgtg aagtcgctca gtcgtgtccc 15600

atggactgta gcctaccagg ctcctctgtc cgtgggattt tccaggccat agtactggag 15660

tggattgcca tttccttctc caagggatct tcccaaccca gggatggaac ccgggtctac 15720

cgcatcgtag acagacactt taccgtctga gccaccaggg aagtctggga atattaagtg 15780

ccggtcaaca cagcttttat agtcgctgtt accaaacatg gccacaagag ggcagcatta 15840

ctccatgcga tgcttttgct tttttccgtt tgttctttgg ctgtttcttt acattggagc 15900

agagttgacg gtcagtgata ggtttgtttc aagtgtacag gaagttggtt cagtgagaca 15960

cagccacggc tatattctct tttcggttct ttcccccata taaggtgatt cctgggtgtt 16020

ccctagactg ccccatgcta ctcaacagat ccattttcat catctgtgac atatatgttc 16080

aagcctggga aaatcccatg gatacagcag cctggtgggc aatggtccat cggggcagaa 16140

agacttggac acgactggag tgctcgagga tgcgtgccca aatggcattt gttattagcc 16200

aactcaattt ttcctttctc cctttctttt ttttctaaat tttttataat cattacttgg 16260

ttttcagagt ttaggtcttt cctgttcgct cagactgtaa agaatccgcg tgcaatggtg 16320

gagatctgtg ttcaaactct gggtcgtgaa gatcccctgg aggagggctg ccatggcaac 16380

ccactccagt gttcttgcct ggagaacctc atggacagag gagcctggcg ggctacagtc 16440

tgtgcggtcg cagaggggca gacaggactg agtgactaac gctttctaag tttgtgagtg 16500

tgtttgtgtt ggtaaaatgg ttgatttgcc taaatttcta gcacgtacct gtcggtggta 16560

taggatctgc ctttctctct ctgagttcct ttccttagca taagagtcac tcggtccatc 16620

caggctgcta tcaatggcat taatctgttc tttttcttgg ctgagtaata ttccagtaga 16680

aaagttaggc actccttgga tctgtccaga atgagcgggg aaatcctttt tcttttgggg 16740

cgggctgtgg aaagagacaa gcctggggct ttgtaggcag caccagcgtc agctgtgggt 16800

gactcgtcag atgacgtgtg acgccacagg ggtcagacct tgctggtgac tccgtgacga 16860

cgtgtcagac gatgctggtg gcttcatgac tgtctgaagt gtgtgtggct gctcccaggc 16920

tggggcagga aatgcaccaa caattaagga gggagggtgg tcactgctga gggtcctgag 16980

acccggggca ggctgtgcac cccgtgcatt cttccctgcc tccttacctc cccactgcct 17040

ccaaaaccat agagcagcct ctgcagaggg tgagagacga caggcggccc ccaggagacc 17100

ctcaccgccc cactctcccg cccatcctgc agcgtcgttg gctccttctc acctctgtcc 17160

cctcccgaga gcctcctccc ccctcctccc gggacccagc tccccctcca cttgtctcca 17220

cgtccctgaa tccatcatgc ccagccccct cccccagcct gtgtggacaa cactcaccgg 17280

cctccagcct ccagcctccc gcattgcaca gctgatccgg ttgcctggcg ctccaccccg 17340

gtgggtgaag gacccgggtc ttcgctcagc tcgggggccc ctgggttgtt gctcagggtg 17400

atacctactg gactccacaa ggttctcatg ggctcatctc gtcgtgttcc aggtccgagg 17460

acgaaaggct gcagttcatg cagggtctgc aggacgtgtg gaggctggag ggggcgacgg 17520

tgctggccgc cttcgacctg tcccccttcc cgctcatctg cgacctgggg ggtgagtgtc 17580

cgccccggac cctggagctg cgtttggaac cctctttgta gaccctaggg cttccctggt 17640

gtctcagatg ctaaggaatc tgcctgcatt gcaggactcc tgggttcgat ccctgggtcg 17700

ggaagatccc ctggaggagg gcatggcaac ccactccagg attcttgcct ggagactccc 17760

atggacagag gagcctgggg ggctacggtc cacggggtca cacagagttg aacacagctg 17820

atgtgactta gcacaggcac acatattgag tagaattccc tgcgctgcac actagaaact 17880

tgtcaagtat cagagtgatt catagcagcg tgcccacgtc cgtcccagtc tcctcacgta 17940

tccctccgct cggtcccctt tggtgtgttt ctttcccgtg tctgagactc tgtttctgtt 18000

ttgcgcagaa gttcattagt atcacatttt aggttccacg aatgagtgac gtcacgtggt 18060

atttgtctct ctctctctga cgaacgtcac ttggtccgat cacctctagg tccgtccgca 18120

tcgtggcgat ggcatcgctg tgttcttttt cacggctgcg taatattcca ctgtgtatgt 18180

gtgcgacatc ttctccatcc ataggtctgt tgatggacct ttaggttgag gttattttat 18240

aaaagtggat tccttgactc tgagatgttc acactgctgg catctggagg gaggtctcca 18300

tgtctcaccc gggtgtcccc tggaaatgtc tcccacaggg agacatgggc acgtcttcct 18360

gtggcatctg cccaggggct tcctctgcct ggctgttgtc tgttcttggg cggacgaggg 18420

gaagccgtca ggtcagagtc tacatggaag gtggatgtgt gggttggtgc agccaggaag 18480

ttgccttaga tacagggctt tgtacgtgag cctgtcacca tggagaccag actgtgggta 18540

ccgcccaagt ctgggggctg tcacagccca cattctcttg caggcggttc tggggctctg 18600

gccaaggcgt gcgtgtccct gtacccggga tgtcgggcca ttgtgttcga catcccagga 18660

gtggtgcaga tcgccaagag acatttctca gcctcggagg acgagcgcat cagcttccat 18720

gaaggtgggt gtctggaaca ctgtctgtgt ccgcagggaa acacgtgggt cctggtgggc 18780

tggggagatg gagccagtgg gtgttcagca tggctttctg gaccatccaa atacaccccc 18840

ttaagatgga gcttccaggg ggctcagtgg taaagaatcc gcctgccagg gcagaatacg 18900

caagagatgc aggttcgatc cccgagtcgg gaagatcccc tggagacaga aatggcgacc 18960

cactccagta ttcttgcctg gggaatcccc atggacagag gagcctggcg gggctacagt 19020

ccatggggtc atgaaagagt cggacacgac tgagcacccg ggcatttaaa cctagaactg 19080

tgatgcagga tgggtgggaa atgtgggagg gtattgtttt cttgcagtta attctttcct 19140

gagtgttgta ctgagttcag tgtgtctcct cacccagagt ttgtaaacag gactttagga 19200

aataaggtgt ttgcagaggt gatggagtga agggtctgag atgaggatcc tcctggatgg 19260

gggtggccct aaaccccagt gacacggtcc ttataagaca gagaagagga gacacacgga 19320

cacagaggag aagccacgtg gagacggagg aagagatggg agggaggcgg ccaccagccg 19380

cctggagctg gatggacacc tggagccccc agaagctgga agaggcgggg aggaccctcc 19440

cctggagcct ctgcagggag ctcagccctg ggacacctga cctcagacgt ctggtctcca 19500

gggctgggag aggacagatg tcctggtctc tgggcacttc ttacggccgt cccgggaaac 19560

tcacgtaggt atttacaacc agctcgtgtg cgagtggcaa tgagcgacgt gggttgaagg 19620

caaggtgagg ggacagttat cgactgaaaa gacagaagct tctcagatgt cccaaggctc 19680

agaaaccaca gcagctttgc ggaccgctgc gagggacttg tggttgcctt ggaaatgggg 19740

ggcgcggttc ccagctgcgg gccgtcactt aggtaccgag gtctgagctg cagacaccgt 19800

gtacctccat gtgtagacac aactggctgt ttgtgactct ttttctctgc tgtgtcagga 19860

ggaacacagc aggtgggggt atcatttctg tccactctga gatctgccaa gaactcccta 19920

ttattatgat tattgttatt attttggcca ttggatgcag cttgtgggat cttagttccc 19980

tgacctggga ttgaacctat tttcttggta atgaaaccat ggagtcctaa acgctggaca 20040

gcaggggaat taattcctta ttttattttt ttaaaaagtt cacctccaag ttcagggcat 20100

ctcaagggac aggccgccag cattccatcc agggccgtat gcggggggac tctgactgac 20160

ccgggtgaag ggtcagctcc tttccaatga ctctgcgtcc gacaggcaga tttgaaggtg 20220

accagaatgt gccagactgt gttcttaaag gacgggatgc tgcctttatt taaaattctg 20280

aaatgtagac catcaggaag ttttcttttt ttggggggtg cggaacgggg ggctttatgc 20340

tggatttttt taaactgttg aattaaaata tactgaatct gagtgactga gtttggggag 20400

ccccctttga ttttgtgctc agaaggagga cctcggtgtg aagttaacca cctctagggc 20460

atcttcttgg aaatacacac gctgacggtg tcagttctgt gcctcacccg ggaaatgggg 20520

tgaagaagga gcctttgggg gacttccttg atggcccaag tggctaagac tctgagcttc 20580

caggacaggg ggctctggtt ccactcctgg tccaggagct gagttcctgc atgctggaag 20640

acccagtgca agaaagaaag aaaggggtgg gggaaggaag gctgagaaag acaaaagaga 20700

agaaagaaaa agagcagaag gaaaaagaaa gcaggaaaga cactacaggt cccattggtt 20760

tttaaaaaag aaaaagaagc aggctgtgga agctgggaaa accagatgga cgtgaaatga 20820

agtggttagt tgctcggtcg tgttcaactc tttgcaatgc acggactgta gctgccaggc 20880

tcctctgtcc atggggatgc tccagtcaag aatgctggag tgggttgcca ttcccttctc 20940

cagggggaat cttcccaacc cagggatcaa accctggtgt cctgcattgg caggggattc 21000

ttgaccatct gagccccctg ggaagcccag gagggttggg accgctgctt taagggtgct 21060

atttacacga gactttctga aatcaagtaa aaataaaacc gttcgcccag agctgacgcg 21120

gaaagggggc gtaaagggag tattgcatcg ttcagaatcg tctcatcgtc acacggagac 21180

gtcttctgtt tcgggaggtc agcagctggg ggcatctggg gccaggtctg tgtgtatgag 21240

tgacccggcc acacggggcg taggtgtcct cacttggaat tgaggcaggc tgacaagggg 21300

tcccctcgcc tgtgttgcag gggatttctt caaagacgcc ctcccggagg cggacctgta 21360

tatcctggcc agggtcctgc atgactggac cgatgccaag tgctcccacc tgctgcagag 21420

agtctatcgg gcctgcagga caggtaggtg gcggggacgc cgggcgccgg gcccgcgggt 21480

ccactcaggg cagagggacg ggtgtctcga cgcgacgagg gctcgcaaat cccgtcacgg 21540

ggacatagac gcgcctctgc gtgtgaggag gccggagttc cggccggcct ctggaggctg 21600

ccctcctttt cgagacacca ccacgtcacg ggctccctca tatcgtctct tcatcgccac 21660

actcttccat tccccccacc ctgaagttgc ggttctcaaa gtacagtgtc attttcagaa 21720

gtgaagtcgt ttctggaggg ttgtgtctag agcccttccg tgggggagct ctaggaagtg 21780

tgttgagcaa aagtgaatta tttatgtttc aatgcacact gacattactt gatggtgact 21840

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aagtttattt ttaccgattc atttctttag ctgtgctgga tcttagccac ggcgctggag 21960

atcttccatc ttcgtcgtgg gatacgggat cctttgtcat ggcttgcaaa ctcttagctg 22020

tggcaggcgg gatctagtcc cctggccagg cgtggaacct gggtcccctg ctttgagtgt 22080

acagagtctt agccagcgga cccctgagga cgtccttcat tgaaccctag tatcattatt 22140

attattagtt tgtacagaca ggaaaattgc caaggaacag atacatatgt atctgtagcc 22200

tggagaatcc catggacaga ggagcctggc gggcagcagt ccatggggtc ccacagactc 22260

agacacgact caagcgactc agcccacagc acgcacggct gattccctct gctgtgtggc 22320

agaaacgaac gcaacattgt caagaagctg taggtccata aaaaattagt taaaagaaaa 22380

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tgctgtgtgg gctctggttt gcttcccgta tttcagtttg gtagctcagt cgtgtccaac 22560

tctttgcaac cccatggact gcagcacgtc aggcctccct gtccctcacc agcttccgga 22620

gttcactcaa actcacgtcc attgagttgg tgatgccatc cagccgtctc atcctctgtc 22680

gcccccttct cctcccgcct tcaatctttc ccagcatcag ggtcttttcc aatgagtcag 22740

ctcttcgcat caggtggcca aaggattgga gcccacacac atatatatac acaaatccca 22800

ggtggtgcga gtggtaaaga actcagctgc cagtgtagga aatgtaggag actctgattc 22860

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cctggagaat cccatggaca gaggagcctg gagggctaca gtccatgggg tcgcaaagag 22980

ctggacacga ctgagcgacc ggacatgcac atatataata cataaagcat gtcatattta 23040

catttaaaat ttatatgtta agcgtttact tttaaatagt aaatgaatga atggatgtca 23100

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tcatgaaaaa tgtttaaatg taaaaattta aaatattaaa atactatata tttacagtaa 23220

aagtatatta catttgtgta tgtagttaca ttatgggctg taaaagttga tcagtcatgc 23280

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tatgtatcgg cacactcaga tgttgcgtgc atggtacaga cacgaccttc cagacagcgc 23700

agctaggaga atcccccaca tctggaggca aagctctttt cctcacgttc tcgctgcttg 23760

gaggtcccat ctccgcctct ccccacgagc ctcctactga tggtcagccc cactgtgtct 23820

gcatcgctgc aaattactat caataacgca cggatcttac tttgacatca cggggaggga 23880

gtgtgggcat tcctagccac gagatccatt gtccaaaaag gacccaggac ttggtgactt 23940

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atcgatggtc cttcctcccc gcctccctcc cgtctctgcc tctgtgtcca cctggtttct 24240

cctctggctc tgtctgtctc tttttccgtt tctcataagg accctgtcct tgcatggcaa 24300

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gtctatgggg tgggaaagag tcagacacgg ctgaagcgac tgagcccgct cctggttacc 24420

agccagaggc gggtggacag tgtttgtaga cacagccctg cttaatcgtg tgctctgtcc 24480

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gttctaggtc aggctctgtc ccgcgggggg tcctaggtca ggctctgtcc cgcggggggt 24600

cctagattag ggtccatctt gcaggggagg gtgggagatg cccggagctg tgggctaacc 24660

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caaattgttt aagtttgaaa aagcagaaaa gaattgctgg tctgttttgc accatagagt 25680

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ataaatatag cgtcatgaac taccatcaa 25769

<210> 3

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ctgacacagc cttcatctct gtct 24

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<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

tatttcaccc attctctcca ttcc 24

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

aggagtcgct gacactgcac 20

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

tatttcaccc attctctcca ttcc 24

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

cacccagcat ccacacagat 20

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

cggcgtccag cttacaggg 19

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

cttcttccaa acagccaggg 20

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ggaggaaaag gtaagcaccc t 21

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catcctgatg tgcctacccg 20

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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gctggagaca gacagatggg 20

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gtaccgtcaa cccccaaaca 20

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ggctcagaga ccaggttaca 20

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cgctcactgt ttctgcccaa 20

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ttgggcagaa acagtgagc 19

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gatgtagcaa acggaaaggg c 21

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acatcggatc tttccgtggg 20

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gcaggacgct atgggagtg 19

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ccatagcgtc ctgcttgaga 20

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