一种Actetrophenone A化合物及其制备和应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体的说是一种Actetrophenone A化合物及其制备和在作为抗植物病毒制剂中的应用。

背景技术

植物病毒病是由植物病毒寄生而引起的病害，是农业生产中一类种类繁多、发生普遍、危害严重的病害，有―植物癌症之称。据报道，全世界每年因植物病毒病引起的经济损失高达600亿美元，仅在粮食作物上的损失就有200亿美元之多。自1982年发现第一种植物病毒——烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)以来，目前世界上的植物病毒种类已有1000多种。植物病毒是一种寄生在植物细胞甚至是细胞核内的专性寄生物，在寄主细胞内进行核酸(RNA或DNA)的复制和蛋白质外壳的合成，组成新的病毒粒子。受到植物病毒浸染的植物通常会表现出变色，坏死，畸形等症状。植物病毒既可以通过昆虫，螨类，土壤真菌，线虫等介体传播，也可以依靠花粉，种子等非介体传播。植物病毒种类多，侵染繁殖快，传播途径广等特点使得植物病毒病害的防治异常困难，一旦流行必定会造成严重损失。

发明内容

本发明目的在于提供一种Actetrophenone A化合物及其制备和在作为抗植物病毒制剂中的应用。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种Actetrophenone A化合物，化合物的化学式为C

化合物的制备方法，将活化后的海洋链霉菌KCB-132于ISP2培养基中发酵培养，纯化后即为式一所示化合物。

进一步的说：

1)将海洋链霉菌KCB-132划线接种于ISP2固体培养基上，28℃培养直至长出白色的孢子，取孢子体接种到ISP2液体培养基，28℃，150-220rpm/min，摇床培养10d收获发酵物。将发酵液经大孔吸附树脂洗脱，而后减压浓缩得总浸膏；

2)总浸膏经硅胶柱层析，以体积比为0:100-100:0的甲醇/二氯甲烷为洗脱液进行梯度洗脱，收集洗脱液体积比3:97的甲醇/二氯甲烷的洗脱组分，将收集的洗脱组分进行ODS反相柱层析，收集含55％有机醇的洗脱液的洗脱部分，浓缩，进行HPLC制备得到化合物Actetrophenone A。

所述海洋链霉菌KCB-132于2020年5月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No:19782；该菌株已在申请号为2020105708712专利中公开并以提供保藏证明，公众可以获得该菌株。

所述步骤1)中萃取是采用的有机溶剂为乙酸乙酯和/或正丁醇；优选为乙酸乙酯；

所述大孔吸附树脂洗脱采用的洗脱液为有机醇。其中，有机醇为甲醇、乙醇中的一种，优选为乙醇。

所述ODS反相柱层析的洗脱液为有机醇和水；其中，有机醇和水的体积比为0:100-100:0，所述有机剂为甲醇、乙醇或乙腈，优选为甲醇。

所述大孔吸附树脂柱，为弱极性或非极性的大孔吸附树脂，优选弱极性。

一种化合物的应用，所述化合物在作为抗植物病毒制剂中的应用。

所述植物病毒为烟草花叶病毒、番茄黄花曲叶病毒、黄瓜花叶病毒等。

本发明所具有的优点：

1.本发明制备所得的Actetrophenone A类化合物来源于海洋链霉菌KCB-132的发酵产物，采用微生物发酵的方法制备该化合物具有高效环保的特点；

2.本发明制备所得的Actetrophenone A类化合物具有显著抗植物病毒活性，且该化合物为尚未被报道的新化合物，对花叶病毒的抑制率可达75％以上，可进一步探索其作用机制，以期开发为新型抗植物病毒制剂或其先导化合物。

附图说明

图1为本发明实施例提供的Actetrophenone A正离子质谱图(HR-ESI-MS)。

图2为本发明实施例提供的Actetrophenone A

图3为本发明实施例提供的Actetrophenone A

图5为本发明实施例提供的Actetrophenone A

图6为本发明实施例提供的Actetrophenone A HMBC谱(溶剂：DMSO-d

图7为本发明实施例提供的Actetrophenone A NOESY谱(溶剂：DMSO-d

图8为本发明实施例提供的Actetrophenone A HSQC谱(溶剂：DMSO-d

图9为本发明实施例提供的Actetrophenone A X单晶衍射图。

具体实施方式

下面的实施例用以解释本发明，但是并非对本发明实质内容的限制。实施例1Actetrophenone A的制备

1)发酵培养

将上述获得海洋链霉菌KCB-132划线接种于ISP2固体培养基上，28℃培养5d，按照10％的接种量接种到ISP2液体培养基中，28℃，150-220rpm/min，摇床培养10d收获发酵物。过滤发酵物获得发酵液和菌丝体，发酵液经大孔吸附树脂柱(12nm，50μm)，100％乙醇洗脱，用旋转蒸发仪减压浓缩(真空度100mbar，转速100rpm)得总浸膏。

所述ISP2液体培养基为葡萄糖0.4％，酵母粉0.4％，麦芽浸粉1％。固体培养基在此基础上添加2％的琼脂。

2)粗提物分离纯化

总浸膏经正相硅胶(200-300目，54-75μm)柱层析，以二氯甲烷：甲醇进行梯度洗脱，流速5ml/min，以体积比为100:0至0：100(二氯甲烷：甲醇(v/v))。收集洗脱液体积比97:3(二氯甲烷：甲醇)的洗脱组分，将收集的洗脱组分进行ODS(C-18，50μm)反相柱层析，以水：甲醇(v/v)体积比100:0至0:100进行梯度洗脱，流速2ml/min，收集45：55(水：甲醇)洗脱部分，浓缩，进行HPLC制备，以甲醇：水作为流动相，洗脱速率为1ml/min，收集保留时间t

实施例2.Actetrophenone A的结构确证

1.仪器与材料

Jasco P-1020数字式旋光仪，Agilent TOF/6500高分辨率质谱，岛津UV-2401型可见-紫外分光光度计，核磁为Bruke Avance III 500NMR spectrometer。

2.化合物结构鉴定

Actetrophenone A：浅棕色粉末，易溶于二甲亚砜、甲醇，丙酮、氯仿，微溶于水，UV(Acetonitrile)λmax(logε)200(2.5),219(2.6),274(2.9),298(2.5),324(2.6),343(2.3)nm；HRESIMS[M+H]+at m/z 309.1122(calculated 309.1127)。

Actetrophenone A的核磁数据见表一，图1是Actetrophenone A正离子质谱图(HR-ESI-MS)。图2是Actetrophenone A

表1：Actetrophenone A的核磁数据(1H NMR 500MHz，13C NMR 125MHz)。

据此确定该化合物结构。

实施例3.Actetrophenone A抗植物病毒活性初步测评

1)化合物对烟草花叶病毒的防治

选取健康的、长势一致的4～5叶期的普通烟K326。试验共设5个处理：Actetrophenone A600倍稀释液、400倍稀释液、200倍稀释液、阳性对照的200倍稀释液、清水空白对照。在施药1d后将200目的石英砂均匀撒在烟苗叶片上，通过机械摩擦的方式接种病毒(100μg/mL)。每处理设30株烟苗，并重复3次。药后每隔7d计算病情指数。

表2化合物对烟草花叶病毒的防治效果

注，阳性对照为8％宁南霉素水剂

2)化合物对化合物对番茄黄化曲叶病毒病毒或黄瓜花叶病毒病毒的防治效果的防治

分别选取普通番茄和黄瓜作为研究对象，并按照上述实验设置测定化合物对番茄黄化曲叶病毒和黄瓜花叶病毒的防治效果，具体结果见表3和表4。

表3化合物对番茄黄化曲叶病毒病毒的防治效果

注，阳性对照为8％宁南霉素水剂

表4化合物对黄瓜花叶病毒病毒的防治效果

注，阳性对照为8％宁南霉素水剂

由上述防效数据可见，Actetrophenone A具有较好的抑制植物病毒活性。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。