一种高抗性鱼胶原蛋白肽的制备方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种高抗性鱼胶原蛋白肽的制备方法。

背景技术

鱼胶原蛋白（分子结构图见图1）又称鱼胶原，是由三条肽链相互缠绕形成的纤维状蛋白质（螺旋结构图见图2），是一种糖蛋白，含有大量的甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸及糖，广泛存在于鱼的鱼鳞、骨、软骨及肌腱等组织中，是机体含量最多的一类蛋白质。现已发现的胶原种类为19种，其中Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原和Ⅲ型胶原是构成胶原纤维的主要成分，起支持器官、保护机体的功能，是重要的结构蛋白质。

随着自由基生命科学研究的不断进展，氧化应激损伤和抗氧化保护作用的理论已经越来越受到人们的普遍关注，诸如像动脉硬化、糖尿病、老年痴呆症、白内障以及衰老等均被公认为与氧化应激损伤及自由基代谢失调有关，适当摄入具有高抗氧化的物质可以降低体内自由基水平，防止脂质过氧化，帮助机体抵御疾病，不过，目前使用的合成抗氧化剂对人体健康存在着潜在的危险，因此寻找安全低毒的抗氧化剂已成为当前的主要课题。

研究表明，鱼胶原蛋白中含有大量的疏水性氨基酸，该类氨基酸具有良好的抗氧化能力，本发明利用鱼皮鱼骨提取的鱼胶原蛋白为原料，通过建立全仿生消化模型，制备高抗性的胶原蛋白活性肽，对人们的生理健康具有极其重要

的意义。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种高抗性鱼胶原蛋白肽的制备方法，通过建立全仿生消化模型，能够最大限度的保持所提取胶原蛋白活性肽的生物活性，同时通过辐照处理，大大提高了鱼胶原蛋白肽抗氧化生物活

性的稳定性，为人们提供一种安全有效的高抗性鱼胶原蛋白活性肽。本发明的技术方案是：

一种高抗性鱼胶原蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：

S1向鱼胶原蛋白粉加入5-50倍的水，加热至37.5℃，搅拌，使鱼胶原蛋白粉充分溶于水中；

S2向步骤S1所得待水解胶原蛋白液中加入唾液仿生液，水解10-100min；S3将步骤S2所得唾液相液中加入胃液仿生液，水解10-100min；

S4将步骤S3所得胃液相液中加入十二指肠仿生液，水解10-100min；S5在步骤S4进行到结束前30min时，加入活性炭；

S6将步骤S6所得水解液升温至85℃以上，保持30min；

S7将步骤S7所得钝化酶活水解液过滤，去除活性炭；

S8将步骤S8所得鱼胶原蛋白水解液通入超滤系统，超滤过膜；

S9将步骤S9所得超滤透过液通入纳滤系统，纯化浓缩鱼胶原蛋白水解液；S10将步骤S10所得鱼胶原蛋白水解液于温度为-45～-35℃，真空度为30-40Pa条件下冷冻干燥8-10小时，进行辐照处理，即得高抗性鱼胶原蛋白肽。

进一步地，步骤S1所述的鱼胶原蛋白粉是由鱼皮或鱼骨提取的。

进一步地，步骤S2所述唾液仿生液的组成为（500ml仿生液）500ml0.02mol/L的磷酸盐或碳酸盐缓冲液，含0.05gNaOH，1.50-2.00gKCL，0.2g尿素，290mgα-淀粉酶，15mg尿酸和25mg黏蛋白，用HCL调整PH值为6.6-7.0。

进一步地，步骤S3所述胃液仿生液的组成为（500ml仿生液）500ml0.02mol/L的氯化钾-盐酸缓冲液，含0.5g氯化钙，0.6g葡萄糖，0.33g氨基葡萄糖盐酸盐，1.0g牛血清蛋白，2.5g胃蛋白酶和3g黏蛋白，用HCL调整PH值为1.22.5。

进一步地，步骤S4所述十二指肠仿生液的组成为（500ml仿生液）500ml0.01mol/L碳酸氢钠-磷酸氢钾缓冲液或碳酸盐缓冲液，5.0g氯化钠，0.05g氯化镁，0.1g尿素，0.2g氯化钙，1.0g牛血清蛋白，9g胰蛋白酶，1.5g脂肪酶，用HCL调整PH值为7.8-8.2。

进一步地，步骤S5所述活性炭规格为木质粉末活性炭（药用级）。

进一步地，步骤S8所述的超滤系统的工作参数为：选用10000Da聚醚砜材质超滤，操作压力0.25Mpa，料液温度55摄氏温度，PH6.0。

进一步地，步骤S9所述的纳滤系统的工作参数为：选用500Da聚酰胺材质卷式纳滤膜操作压力6bar,料液温度45摄氏温度，PH6.0。

进一步地，所述步骤S10所述辐照处理为在常温常压下用辐射源为60Co-γ射线进行辐照处理，辐照剂量为30-33kGy，辐照剂量率为0.4-1kGy/h。

更进一步地，所述步骤S10所述辐照剂量为32kGy，辐照剂量率为0.5kGy/h。与现有技术相比，本发明具有以下优势：

(1)本发明通过建立全仿生消化模型，最大限度的保持了鱼胶原蛋白肽的生物活性，制备的产品更安全有效。(2)本发明中在鱼胶原蛋白肽的分离纯化中，通过分子量级分离，保证了产品的纯度。

(3)本发明对鱼胶原蛋白肽进行辐照处理，使得制得的鱼胶原蛋白肽性质稳定，能够长时间保持生物活性，大大提高了鱼胶原蛋白肽的品质。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1为胶原蛋分子结构图；

图2为胶原蛋白三螺旋结构图。

具体实施方式

以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明

实施例1

一种高抗性鱼胶原蛋白肽的制备方法

所述高抗性鱼胶原蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：

S1向鱼胶原蛋白粉加入10倍的水，加热至37.5℃，搅拌，使鱼胶原蛋白粉充分溶于水中；

S2向步骤S1所得待水解胶原蛋白液中加入唾液仿生液，水解10-100min；S3将步骤S2所得唾液相液中加入胃液仿生液，水解10-100min；

S4将步骤S3所得胃液相液中加入十二指肠仿生液，水解10-100min；S5在步骤S4进行到结束前30min时，加入活性炭；

S6将步骤S6所得水解液升温至85℃以上，保持30min；

S7将步骤S7所得钝化酶活水解液过滤，去除活性炭；

S8将步骤S8所得鱼胶原蛋白水解液通入超滤系统，超滤过膜；

S9将步骤S9所得超滤透过液通入纳滤系统，纯化浓缩鱼胶原蛋白水解液；S10将步骤S10所得鱼胶原蛋白水解液于温度为-45～-35℃，真空度为30-40Pa条件下冷冻干燥8-10小时，进行辐照处理，即得高抗性鱼胶原蛋白肽。

实施例2

一种高抗性鱼胶原蛋白肽的制备方法

所述高抗性鱼胶原蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：

S1向鱼胶原蛋白粉加入15倍的水，加热至37.5℃，搅拌，使鱼胶原蛋白粉充分溶于水中；

S2向步骤S1所得待水解胶原蛋白液中加入唾液仿生液，水解10-100min；

S3将步骤S2所得唾液相液中加入胃液仿生液，水解10-100min；

S4将步骤S3所得胃液相液中加入十二指肠仿生液，水解10-100min；

S5在步骤S4进行到结束前30min时，加入活性炭；

S6将步骤S6所得水解液升温至85℃以上，保持30min；

S7将步骤S7所得钝化酶活水解液过滤，去除活性炭；

S8将步骤S8所得鱼胶原蛋白水解液通入超滤系统，超滤过膜；

S9将步骤S9所得超滤透过液通入纳滤系统，纯化浓缩鱼胶原蛋白水解液；S10将步骤S10所得鱼胶原蛋白水解液于温度为-45～-35℃，真空度为30-40Pa条件下冷冻干燥8-10小时，进行辐照处理，即得高抗性鱼胶原蛋白肽。

实施例3

一种高抗性鱼胶原蛋白肽的制备方法

所述高抗性鱼胶原蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：

S1向鱼胶原蛋白粉加入18倍的水，加热至37.5℃，搅拌，使鱼胶原蛋白粉充分溶于水中；

S2向步骤S1所得待水解胶原蛋白液中加入唾液仿生液，水解10-100min；

S3将步骤S2所得唾液相液中加入胃液仿生液，水解10-100min；

S4将步骤S3所得胃液相液中加入十二指肠仿生液，水解10-100min；

S5在步骤S4进行到结束前30min时，加入活性炭；

S6将步骤S6所得水解液升温至85℃以上，保持30min；

S7将步骤S7所得钝化酶活水解液过滤，去除活性炭；

S8将步骤S8所得鱼胶原蛋白水解液通入超滤系统，超滤过膜；

S9将步骤S9所得超滤透过液通入纳滤系统，纯化浓缩鱼胶原蛋白水解液；S10将步骤S10所得鱼胶原蛋白水解液于温度为-45～-35℃，真空度为30-40Pa条件下冷冻干燥810小时，即得高抗性鱼胶原蛋白肽。

鱼胶原蛋白肽活性（清除自由基活性）检测1、试验材料：实施例1-3制得的鱼胶原蛋白肽；2、试验方法：将实施例1-3制得的鱼胶原蛋白肽分别在第1天、第30

天、第60天检测其残留胶原蛋白肽活性（清除自由基活性）。

实施例鱼胶原蛋白肽的提取率和生物活性（清除自由基活性）结果见表1、表2和表3

表1（第一天）

表2（第30天）

表3（第60天）

从以上结果可以看出，实施例2提取率最高，为85.67%。经过辐照之后的胶原蛋白具有很好的稳定性，在存放60天时其活性仍在90％以上，其实施例2的活性最高，为94.3％，实施例2为本发明最佳实施例。

以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。