艾叶精油在制备治疗肝损伤药物中的应用

技术领域

本发明涉及制药技术，属药物制剂领域，特别涉及艾叶精油在制备治疗肝损伤药物中的应用。

背景技术

肝是机体生物转化的最主要器官，对于维持机体的生命活动发挥着重要作用。因此肝损伤会对机体造成严重伤害，轻则引发脂肪肝，持续性加重将诱导肝纤维化和肝硬化，最终导致肝衰竭或肝癌，严重危及人体生命健康。双酚A(BPA)是工业中用于合成聚碳酸酯(PC)和环氧树脂的主要成分。在日常生活中，BPA广泛用于饮料容器、医疗器械、家用产品粘合剂和食品包装材料，饮食被认为是人体接触的主要途径。研究表明，BPA通过产生包括过氧化氢和超氧阴离子在内的活性氧引起氧化应激，从而对代谢器官肝脏造成严重损害。大量研究证明BPA可以显著降低还原型谷胱甘肽(GSH)水平的消耗，同时影响脂质代谢以诱导脂质过氧化物积累，其诱导的氧化应激对肝损伤的发生发展有显著的相关性。近年来，随着人民生活水平的提高和饮食结构的改变，肝损伤的发生率呈逐年上升趋势。因此，逆转肝组织代谢失调是有效治疗肝损伤的潜在途径之一，选用中药宝库中毒副作用小的成分发展新型的具有靶向作用的高效低毒的治疗肝损伤药物具有重要作用和意义。

艾叶为菊科植物艾的干燥叶。夏季花未开时采摘，除去杂质，晒干。主产于湖北、安徽、山东、河北，早在我国西周初年的《诗经》中就记载，具有散寒去湿，活血化瘀，疏经通络，固本扶阳的功效。根据报道，在民间以泡脚、艾灸、煎服、沐浴等方式使用，也可以做成食物食用，如青团、艾草膏被广泛使用。研究表明，艾叶有显著的抗炎活性，而抗炎的活性主要来自于其中的挥发油成分，即艾叶精油，其具有良好的抗菌，抗炎和抗氧化等活性。

基于以上现状，研发一种以艾叶精油作为药效成分用于预防和/或肝损伤的药物，目前未见相关报道。

发明内容

基于发明人的偶然发现，本发明提供以艾叶精油作为唯一有效成分或主要有效成分用于制备治疗肝损伤药物的新用途。

为实现以上目的，本发明技术方案如下：

将艾叶精油应用在制备治疗肝损伤药物中，艾叶精油在小鼠中的应用量按4.68mg/kg体重量灌胃给药。

主要以雄性C57小鼠为实验对象，通过BPA诱导肝损伤模型，艾叶精油灌胃给药进行干预，验证艾叶精油在治疗肝损伤中的药效。结果表明：与模型对照组相比，艾叶精油给药组小鼠血清中天门冬转移酶，碱性磷酸酶和谷丙转氨酶等肝功能酶均呈现逐下降趋势，肝脏组织中的黄嘌呤氧化酶活性降低，谷胱甘肽过氧化物酶4活性显著升高；与生理盐水组相比，艾叶精油给药组小鼠的肝功能酶的水平无明显变化。因此，艾叶精油具有治疗肝损伤的作用，可用于制备治疗肝损伤的药物。

作为治疗肝损伤药物，其包含艾叶精油，可以为仅含艾叶精油的单一组分药物，也可以为含艾叶精油的药物组合物。其中，含艾叶精油的药物组合物包括艾叶油以及与艾叶油同时施用后对治疗肝损伤有积极作用的药物成分和/或使艾叶油稳定性提高的药学上可接受的成分和/或制药学上可接受的辅助成分。

本发明所提供的治疗肝损伤药物，其剂型可以为粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液或悬浮液等。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明将艾叶精油用于制备治疗肝损伤的药物，其可降低小鼠血清中肝功能酶的水平，抑制肝脏组织中黄嘌呤氧化酶活性，提高肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶4活性，治疗肝损伤效果显著，且具有用量小等优点。为艾叶精油开拓了新的用途，更为改善目前治疗肝损伤药物副作用大的现状提供了新的方向。

附图说明

图1为艾叶精油降低小鼠血清中肝功能酶水平作用示意图。

图2为艾叶精油抑制小鼠肝脏中黄嘌呤氧化酶作用示意图。

图3为艾叶精油上调小鼠肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶4的作用示意图。

具体实施方式

为了更好的说明本发明的目的、技术方案、优点，下面将结合具体实施方式对本发明进一步详细说明，但本发明不限于以下实施例。

下述实施方式中，未特别说明的生物化学试剂均为本领域常规试剂，可以按照本领域常规方法配制而得或商购获得，规格为分析纯级即可，百分含量没特别说明均为质量百分含量。

试验方法

药物来源：药物艾叶精油购自南阳蓝海森源医药科技有限公司，纯度＞9g％；药物甘草酸二铵和双酚A购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，纯度≥98％。

药物配制：艾叶精油使用0.5％CMC-Na配制成0.6mg/mL浓度的混悬液；双酚A使用玉米油配制成140mg/mL的混悬液；甘草酸二铵使用0.5％CMC-Na配制成28mg/mL的混悬液。

动物饲养：健康雄性C57小鼠36只，体重为18-20g，由江苏集萃药康生物科技股份有限公司提供，许可证号：SCXK(苏)2018-0008。饲养环境SPF级，设独立进回风净化笼具(Individal Ventilation Cages，IVC)，恒温(22±2℃)，恒湿(55±15％)，每12小时明暗交替，每5只小鼠一笼，饮用高压灭菌水，小鼠自由进食、水。

给药方式：艾叶精油(4.68mg/kg)、甘草酸二铵(140mg/kg)、双酚A(700mg/kg)、生理盐水采用灌胃的给药方式。

实施例1艾叶精油对双酚A诱导的肝损伤的影响

健康雄性C57BL/6JGpt小鼠36只，体重为18-20g，由江苏集萃药康生物科技股份有限公司提供。小鼠于河南省郑州大学药学院SPF级动物房适应性饲养一周，采用随机数字表法分为4组，每组9只小鼠，具体如下：

1、正常对照组；

2、模型对照组；

3、艾叶精油组；

4、阳性对照药组

适应期结束之后开始给药，每天上午灌胃两次。首先，模型对照组，艾叶精油组，阳性对照药组采用双酚A灌胃(700mg/kg)，正常对照组给予等量的生理盐水灌胃；1h后，艾叶精油组给予艾叶精油灌胃(4.68mg/kg)，阳性对照组给与甘草酸二铵灌胃(140mg/kg)，模型对照组和正常对照组给予等量的0.5％CMC-Na灌胃。连续七天，并且每天称量、记录小鼠体重。

第七天上午两次灌胃结束1h后，进行颈动脉取血。将所得血液室温静置半小时，于3000rpm离心5min，吸取上清液，得到血清。使用全自动生化分析仪(BX4000)测定血清中肝功能酶(ALT、AST、ALP)的水平。摘取小鼠肝脏，并用PBS溶液清洗，滤纸吸干水分，于-80℃冰箱保存。

称取50mg肝脏组织，并使用提前于冰箱中预冷的生理盐水(0.9％)进行匀浆，于4℃条件下12000rpm离心10min，取上清液，参照试剂盒说明书(微量法法，货号A002-1-1)以及(微量法，货号A001-2-1)测定黄嘌呤氧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶4的酶活力。

统计分析方法：

实验结果用均值±SE表示，两个样本平均数比较用t检验。

结果如表1及图1所示，与正常对照组相比，模型对照组小鼠血清中肝功能酶水平显著升高(P＜0.05)，表明肝损伤造模成功。艾叶精油组中小鼠血清的肝功能酶水平与模型对照组相比呈显著降低趋势，与正常对照组水平相似，表明艾叶油对肝损伤具有良好的治疗效果。

结果如表2及图2所示，与正常对照组相比，模型对照组中小鼠肝脏中XOD的活性显著性升高(P＜0.05)，艾叶精油组中小鼠肝脏中XOD活性与模型对照组相比，由30.31±4.12降低至14.44±1.83(P＜0.05)，表明艾叶精油通过抑制XOD的活性从而对肝损伤发挥良好的保护作用。

结果如表3及图3所示，与正常对照组相比，模型对照组中小鼠肝脏中GPX4的活性显著性降低(P＜0.05)，艾叶精油组中小鼠肝脏中GPX4活性与模型对照组相比，由0.95±0.049升高至1.35±0.096(P＜0.05)，表明艾叶精油通过上调GPX4的活性从而对肝损伤发挥良好的保护作用。

表1艾叶精油对BPA诱导肝损伤小鼠血清中肝功能酶水平的影响

注：#：与正常对照组相比，P＜0.05：##：与正常对照组相比，P＜0.01*：与模型对照组相比，P＜0.05，**：与模型对照组相比，P＜0.01。

表2艾叶精油对BPA诱导肝损伤小鼠肝脏XOD活性的影响

注：#：与正常对照组相比，P＜0.05：##：与正常对照组相比，P＜0.01*：与模型对照组相比，P＜0.05，**：与模型对照组相比，P＜0.01。

表3艾叶精油对BPA诱导肝损伤小鼠肝脏GPX4活性的影响

注：*：组间相比，P＜0.05：**：组间相比，P＜0.01：***：组间相比，P＜0.001。