一种盐酸溴己新固体微球及其制备方法

技术领域

本发明属于兽用药品制剂技术领域，具体涉及一种盐酸溴己新固体微球及制备方法。

背景技术

盐酸溴己新是一种用于急慢性支气管炎、哮喘及呼吸道堵塞病治疗的化学药物，外观为白色或类白色结晶性粉末，无臭，无味，在水中极微溶解，熔点约为239℃，该温度下药物也开始分解。该药主要作用于支气管腺体，通过三个方面来起到化痰作用。第一是药物进入机体后能促使管腔粘膜分泌细胞中的溶酶体释出，使痰中粘多糖纤维分化裂解，痰液由粘稠态逐渐变为稀薄状态而易于咳出。第二是该药对粘液腺以及杯状细胞中的酸性糖蛋白有抑制合成的作用，使之转化为粘性较低的小分子糖蛋白，最终使痰液的粘性降低，流动性增强，易于排出体外。第三是该药能刺激胃粘膜，反射性地引起呼吸道腺体分泌增加，使痰液得到稀释而易咳出。另外，该药还可以促进呼吸道黏膜表面的纤毛运动，促使痰液的移动和排出，从而改善肺的功能和防御能力。痰液排出后因堵塞而造成的呼吸困难症状就会很快缓解，利用疾病的康复。

呼吸道病是畜禽饲养过程中的常见病和多发病，发病原因多样，包括病毒、支原体、细菌、真菌、寄生虫等病原体感染，管理不善带来的应激反应，滥用药物造成的毒副作用，饲料饮水不合格引发的中毒等。无论是哪种原因引发，发病动物只要表现痰多，长期咳嗽，气喘，呼吸不畅，气管堵塞等症状，最终就会造成机体缺氧。缺氧严重时，全身器官和组织细胞有氧代谢发生障碍，病畜禽表现出畏寒怕冷，采食量下降，机体衰竭，免疫力出现低下，容易继发感染等。这些症状都与气管因痰液堵塞致使气流不畅有关，通过药物治疗痰液顺利排出后，症状就能快速缓解，机体也会逐渐进入康复期。

目前用于呼吸道祛痰的药物种类较多，但大多为人用药，批准用于兽医临床的并不多，盐酸溴已新就是其中一种，但该药目前只有一个1％的可溶性粉剂上市批准文号，大大限制了其在动物疾病诊疗上的推广，而可溶性粉剂饮水用药时药物有个吸收和运输分布过程，一则效果较慢，二则药物进入体内后不全在呼吸系统发挥作用，使得其生物利用度不高，同时，对于严重发病的动物，饮水量出现下降时更是无法满足用药需求。另外，盐酸溴己新本身水溶性较差，即便是可溶性粉剂，实际养殖过程中需要浓配集中饮水时，也会出现无法完全溶解的状况。对于使用加药器脉冲式给药的大型养殖场，现有技术制备的可溶性粉剂根本无法满足高浓度均匀溶解需求，大大限制了该品的推广。

发明内容

针对现有技术的缺陷与不足，本发明提供了一种盐酸溴己新药物的微球制剂，同时提供其制备方法是本发明的第二个发明目的，该制剂的药物粒径处于微米级别，可进行雾化吸入给药，雾化后药物在空气中均匀悬浮，吸入后能长久粘附在呼吸道粘膜表面，药物随载体的逐渐溶解而释放，起到长效祛痰的功效。同时，雾化吸入式的给药方式使得药物直达靶器官气管和肺，使其又具备了速效特征，总体使得本发明具备了即速效、又长效的特点，显著提升了药物的生物利用度。该微球制剂也能满足饮水给药需求，混入水中后药物能在8h内持续保持均匀悬浮，不沉淀，不聚集，确保了用药的均匀性。

为实现上述发明目的，采取以下技术方案：

一种盐酸溴己新固体微球，每100g该微球的重量组成为：盐酸溴己新0.01～5.0g、聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯10.0～30.0g、聚乙二醇20000 5.0～15.0g、聚乙二醇8000 10.0～20.0g、泊洛沙姆188 1.0～5.0g、黄原胶0.5～1.5g、田菁胶0.1～3.0g、余量为果糖。

优选的，每100g该微球的重量组成为：盐酸溴己新1.0～4.0g、聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯15.0～25.0g、聚乙二醇20000 6.0～14.0g、聚乙二醇8000 11.0～19.0g、泊洛沙姆1882.0～4.0g、黄原胶0.8～1.2g、田菁胶0.5～2.5g、余量为果糖。

进一步优选地，每100g该微球的重量组成为：盐酸溴己新2.5g、聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯20.0g、聚乙二醇20000 10.0g、聚乙二醇8000 15.0g、泊洛沙姆188 3.0g、黄原胶1.0g、田菁胶1.5g、果糖47.0g。

所述的盐酸溴己新固体微球的制备方法，包括以下步骤：

1)取无水乙醇加热至65～70℃，加入盐酸溴己新混合，得盐酸溴己新乙醇溶液，所述无水乙醇加入量为盐酸溴己新重量的4-6倍；本步骤将盐酸溴己新溶解在热乙醇中，形成热乙醇溶液。但是温度不能超过或接近乙醇的沸点78℃，控制在65～70℃即可。无水乙醇用量为药物重量的4～6倍即可，过少溶解效果不好，流动性也差，过多则浪费，同时延长步骤2)的挥干时间。

2)将聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯、聚乙二醇20000和聚乙二醇8000混合，并加热至65～70℃，体系由固态转变为粘稠半固态或液态，依次加入步骤1)的盐酸溴己新乙醇溶液、泊洛沙姆188混合，之后将体系升温至78～85℃，直至体系中乙醇完全挥发，得混合体系A；

3)将混合体系A先超声脱气，再在减压条件下循环研磨，边研磨边加入黄原胶和田菁胶的水溶液，同时对体系进行冷却，直至体系转变为粘稠、浑浊、均一的体系，得混合体系B；水溶液中，水的重量为黄原胶和田菁胶总重量的30-50倍；

本步骤中，混合体系A在78～85℃之间时为液体状态，故而可以在胶体磨中进行循环研磨，但是该体系是粘稠的液体，其中含有较多泡沫，故而先超声脱气，在减压条件下气泡更充分破裂，这样制得的产品更均匀。黄原胶和田菁胶同样使用液体水溶液，是为了达到液体混合液体更加均匀分散的目的。

黄原胶和田菁胶的水用量为二者总重量的30-50倍，浓度过高则粘度太大，浓度过低则不利于真空干燥。本工艺制备过程需要在液体环境中形成微球，冷却的过程是药物在液体体系中析出固化，并成为球体的过程。

4)将混合体系B进行低温真空干燥，得类白色或淡黄色的固体粉末，加入余量的果糖，混合即得，低温干燥的温度为4℃。

优选的，步骤3)中，超声脱气时，超声比采用28KHz频率；循环研磨采用胶体磨研磨。

本发明产品在应用时，可以雾化吸入的方式给药，将本品混入水中，搅拌均匀后置于雾化机中，对全舍进行喷雾，药物经鼻孔吸入，可粘附在鼻腔、喉头、气管、支气管等粘膜表面，通过载体的缓慢溶解而逐渐释放药物，对呼吸道粘膜产生持续性作用，药效更持久。与现有技术制备的盐酸溴己新可溶性粉相比，本发明能起到即速效，又长效的作用，可显著改善病畜禽的呼吸道症状，且减少用药次数，降低用药成本。同时，本发明也可通过饮水方式用药，以浓配方式混入水中后能保持8h内持续均匀悬浮而不沉淀(如图4所示)，不对水线造成堵塞，适用于通过加药器脉冲式给药的集约化养殖生产线，省时省力，管理成本降低。

本发明制备的微球在电镜下观察，其粒径在100～500nm之间(如图1所示)。

本发明组方中，各组分在其中起到的效果为：

1)选用的盐酸溴己新作为主成分，是因为该药能在短时间内使痰液变稀，同时通过呼吸道表面纤毛移动使痰液易于排出，能在最短时间内改善呼吸道堵塞和呼吸困难的症状，是为数不多的用于畜禽呼吸道病治疗的药物。

2)选用聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯、聚乙二醇20000和聚乙二醇8000作为本发明的成分，一方面是因为上述三种成分对呼吸道粘膜无刺激性的副作用，雾化吸入后安全性非常高。另一方面是该成分制备的盐酸溴己新微球具有较好的缓释性能，吸入后不会被粘膜快速吸收，进而起到粘膜部位缓释长效的作用。再者，经过实验室考察，上述三种成分作为载体时制备的固体微球储存稳定性非常好，易于产品的临床推广。如果使用常用的聚乳酸为材料，后期放置过程中产品容易变黄。使用聚乙二醇6000、聚乙二醇4000替代聚乙二醇20000和聚乙二醇8000时，环境温度40℃，相对湿度高于75％时容易结块，甚至成为膏状。具体见实验例2。

3)采用泊洛沙姆188为本发明的成分，是因为其能很好地降低微球形成过程中的界面张力，利于形成粒径更小的球体，从而利于雾化吸入，也可增强饮水使用时药物在水溶液中的悬浮性，从而确保均匀饮水给药。

4)采用黄原胶和田菁胶为本发明的成分，一是二者混合在制备过程中可形成较高的体系粘度和悬浮力，且粘度和悬浮力受温度和pH值的影响较小，有助于形成形状规则的微球。二是当本发明用于加药器脉冲式给药时，在水中能防止药物微球粒子出现聚团现象。如果将黄原胶和田菁胶成分去除，则药物在溶水后短时间内会发生粒子团聚(如图3)，导致药物出现絮状沉淀、析出等不稳定现象。将黄原胶和田菁胶单独使用，或将其任一种配合成阿拉伯胶或明胶使用，或者阿拉伯胶和明胶配合使用，则制备的微球形状不规则，呈椭圆形或不规则形。见实验例3。

5)采用果糖作为稀释性辅料，是由于果糖能维持本发明药物的性状，尤其是高温高湿环境下，药物能够长时间保持固体粉末状，不会出现结块、软化、变色等状况(见实验例1)。另外，果糖水溶性良好，安全性高，原料易采购。

除了组方优势之外，本发明的工艺可操作性强，制造成本低，有利于该药的大面积推广，市场前景广阔。

与现有技术制备的可溶性粉剂相比，本发明通过组方和工艺的改进，达到的技术效果为：

1)本发明的盐酸溴己新固体微球(实施例1为例)，电子显微镜下观察其为球状，粒径分布在100～500nm之间，形状规则(如图1)，现有技术制备的盐酸溴己新可溶性粉，电子显微镜下观察则为大小不均，形状不规则的块状体(如图2)。

2)本发明的盐酸溴己新固体微球，按照不同浓度比例溶解稀释，悬浮性非常好，分布均一(如图4)，溶解后能在8h内持续保持均匀的体系，非常适用于采用加药器脉冲式给药的养殖场，而现有技术制备的盐酸溴己新可溶性粉剂浓配后，在2h内就形成沉淀，无法满足应用需求。

3)本发明的盐酸溴己新固体微球采用雾化吸入的方式给药，药物能较长时间粘附在呼吸道粘膜表面，通过载体的逐步溶解而将药物释放，并直接在呼吸道局部发挥作用，药效时间明显延长，药物的生物利用度显著提升。现有技术制备的盐酸溴己新可溶性粉剂则无法做到雾化方式给药。

4)本发明的药物性质稳定，适合在较宽的温度区间下存放，对运输和储存条件要求不高，制备工艺可操作性强，易于生产转化，市场前景更加良好。

附图说明

图1是本发明实施例1制备的固体微球透射电镜照片。可见该微球粒径分布在100～500nm之间，形状为规则的球形；

图2是现有技术制备的盐酸溴己新可溶性粉透射电镜照片。可见其为大小不均，形状不规则的块状体；

图3是如果将黄原胶和田菁胶成分在本配方中去除，则药物溶水后短时间内会发生粒子团聚，该图是团聚后的电镜透射观察照片；

图4是现有技术制备的可溶性粉剂1:10/1:50/1:100/1:200溶解于水的初始外观(左上)和静置8h后的外观(左下)；本发明实施例1制备的样品1:10/1:50/1:100/1:200溶解于水的初始外观(右上)和静置8h后的外观(右下)。

具体实施方式

以下将通过具体实施例进一步说明本发明，但这些具体实施方案不以任何方式限制本发明的保护范围。

实施例1

一种盐酸溴己新固体微球，每100g该微球的重量组成为：盐酸溴己新2.5g、聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯20g、聚乙二醇20000 10g、聚乙二醇8000 15g、泊洛沙姆188 3.0g、黄原胶1.0g、田菁胶1.5g、余量为果糖。

其制备方法，包括以下步骤：

1)取12.5g无水乙醇加热至68℃，加入2.5g盐酸溴己新药物原料进行搅拌溶解，得盐酸溴己新的乙醇溶液，备用；

2)将20g聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯、10g聚乙二醇20000和15g聚乙二醇8000混合均匀，并加热至68℃，体系由固态转变为液态。将步骤1)获得的盐酸溴己新乙醇溶液缓缓加入混合，完毕后再加入3g泊洛沙姆188混合均匀，之后再将该体系升温至80℃，待其中的乙醇完全挥发，得混合体系A；

(c)将混合体系A于28KHz频率的超声波中进行超声脱气，之后加入胶体磨中进行循环研磨，对整个制备环境进行抽气减压，边研磨边加入黄原胶和田菁胶的水溶液(取1.0g黄原胶、1.5g田菁胶，将二者溶解于100g水中得到)，同时对体系进行冷却，最终转变为粘稠、浑浊、均一的体系，设为混合体系B；

(d)将混合体系B于4℃温度下进行低温真空干燥，恒重后，最终获得类白色或淡黄色的固体粉末，加入47.0g果糖，混合均匀即得本发明的盐酸溴己新固体微球(图1展示的是以实施例1为例制备得到的微球的电子显微镜照片，其他实施例得到的产品与实施例1基本一致，因此不再展示，仅展示实施例1说明)。

实施例2

一种盐酸溴己新固体微球，每100g该微球的重量组成为：盐酸溴己新0.01g、聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯10g、聚乙二醇20000 5.0g、聚乙二醇8000 10g、泊洛沙姆188 1.0g、黄原胶0.5g、田菁胶0.1g、余量为果糖。

其制备方法，包括以下步骤：

1)取无水乙醇加热至65℃，加入盐酸溴己新混合，得盐酸溴己新乙醇溶液，所述无水乙醇加入量为盐酸溴己新重量的4倍；

2)将聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯、聚乙二醇20000和聚乙二醇8000混合，并加热至65℃，体系由固态转变为粘稠半固态或液态，依次加入步骤1)的盐酸溴己新乙醇溶液、泊洛沙姆188混合，之后将体系升温至78℃，直至体系中乙醇完全挥发，得混合体系A；

3)将混合体系A先超声脱气，再在减压条件下循环研磨，边研磨边加入黄原胶和田菁胶的水溶液，同时对体系进行冷却，直至体系转变为粘稠、浑浊、均一的体系，得混合体系B；水溶液中，水的重量为黄原胶和田菁胶总重量的30倍；超声脱气时，超声比采用28KHz频率；循环研磨采用胶体磨研磨。

4)将混合体系B进行低温真空干燥，得类白色或淡黄色的固体粉末，加入余量的果糖，混合即得，低温干燥的温度为4℃。

实施例3

一种盐酸溴己新固体微球，每100g该微球的重量组成为：盐酸溴己新5g、聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯30g、聚乙二醇20000 15g、聚乙二醇8000 20g、泊洛沙姆188 5g、黄原胶1.5g、田菁胶3g、余量为果糖。

其制备方法，包括以下步骤：

1)取无水乙醇加热至70℃，加入盐酸溴己新混合，得盐酸溴己新乙醇溶液，所述无水乙醇加入量为盐酸溴己新重量的6倍；

2)将聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯、聚乙二醇20000和聚乙二醇8000混合，并加热至70℃，体系由固态转变为粘稠半固态或液态，依次加入步骤1)的盐酸溴己新乙醇溶液、泊洛沙姆188混合，之后将体系升温至85℃，直至体系中乙醇完全挥发，得混合体系A；

3)将混合体系A先超声脱气，再在减压条件下循环研磨，边研磨边加入黄原胶和田菁胶的水溶液，同时对体系进行冷却，直至体系转变为粘稠、浑浊、均一的体系，得混合体系B；水溶液中，水的重量为黄原胶和田菁胶总重量的50倍；超声脱气时，超声比采用28KHz频率；循环研磨采用胶体磨研磨。

4)将混合体系B进行低温真空干燥，得类白色或淡黄色的固体粉末，加入余量的果糖，混合即得，低温干燥的温度为4℃。

实施例4

本实施例的一种盐酸溴己新固体微球及其制备方法，与实施例1不同之处在于，每100g该微球的重量组成为：盐酸溴己新1g、聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯15g、聚乙二醇200006g、聚乙二醇8000 11g、泊洛沙姆188 2g、黄原胶0.8g、田菁胶0.5g、余量为果糖。其余同实施例1。

实施例5

本实施例的一种盐酸溴己新固体微球及其制备方法，与实施例1不同之处在于，每100g该微球的重量组成为：盐酸溴己新4g、聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯25g、聚乙二醇2000014g、聚乙二醇8000 19g、泊洛沙姆188 4.0g、黄原胶1.2g、田菁胶2.5g、余量为果糖。其余均同实施例1。

实施例6

本实施例的一种盐酸溴己新固体微球及其制备方法，与实施例1不同之处在于，每100g该微球的重量组成为：盐酸溴己新0.5g、聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯12g、聚乙二醇200005.5g、聚乙二醇8000 10.5g、泊洛沙姆188 1.5g、黄原胶0.6g、田菁胶0.3g、余量为果糖。其余均同实施例1。

实施例7

本实施例的一种盐酸溴己新固体微球及其制备方法，与实施例1不同之处在于，每100g该微球的重量组成为：盐酸溴己新2g、聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯18g、聚乙二醇200007g、聚乙二醇8000 13g、泊洛沙姆188 2.5g、黄原胶0.9g、田菁胶1g、余量为果糖。其余均同实施例1。

实施例8

本实施例的一种盐酸溴己新固体微球及其制备方法，与实施例1不同之处在于，每100g该微球的重量组成为：盐酸溴己新3g、聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯23g、聚乙二醇2000012g、聚乙二醇8000 16g、泊洛沙姆188 3.5g、黄原胶1.1g、田菁胶2.0g、余量为果糖。其余均同实施例1。

实施例9

本实施例的一种盐酸溴己新固体微球及其制备方法，与实施例1不同之处在于，每100g该微球的重量组成为：盐酸溴己新4.5g、聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯28g、聚乙二醇2000014.5g、聚乙二醇8000 19.5g、泊洛沙姆188 4.5g、黄原胶1.3g、田菁胶2.8g、余量为果糖。其余均同实施例1。

实施例10

本实施例的一种盐酸溴己新固体微球及其制备方法，与实施例1不同之处在于，每100g该微球的重量组成为：盐酸溴己新3.5g、聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯22g、聚乙二醇2000013g、聚乙二醇8000 17g、泊洛沙姆188 3.6g、黄原胶1.4g、田菁胶2.75g、余量为果糖。其余均同实施例1。

试验例1-6：

试验例1本发明的产品稳定性试验

对本发明的实施例1-10进行取样，参考药学稳定性考量方法，分别将不同的样置于-20℃、4℃、25℃和40℃的恒温环境中进行冷冻、冷藏、长期和加速稳定性试验，并于试验开始的第1d、15d、30d、60d、90d和180d时取出进行观察，详细记录药物外观性状改变情况。

结果表明：各实施例得到的样品在不同温度储存条件下均无结块、变色等情况发生，外观性状和试验前相同，电镜下观察微球形状维持良好，没有发现破裂的状况，具有很好的稳定性。

试验例2组方筛选稳定性验证试验

本发明选择聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯、聚乙二醇20000和聚乙二醇8000作为组合，主要是考虑到其安全性和制备的产品具有缓释性特征，但同样满足上述两个特征的微球常用材料还有聚乳酸、聚乙二醇6000和聚乙二醇4000。本试验按照实施例1的重量占比和工艺，用聚乳酸替代聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯，用聚乙二醇6000替代聚乙二醇20000，用聚乙二醇4000替代聚乙二醇8000，最终也能制备出样品，但该样品在温度40℃和相对湿度75％的环境中不到72h就开始结块，颜色加深，一周后甚至变为膏状，导致临床无法使用。

结果表明：用制备微球常用的聚乳酸、聚乙二醇6000和聚乙二醇4000制备的样品不如实施例1制备的样品稳定。

试验例3组方筛选优化验证试验

本发明选择黄原胶和田菁胶作为组合，是因为二者混合物在制备过程中可形成较高的体系粘度和悬浮力，且粘度和悬浮力受温度和pH值的影响较小，有助于形成形状规则的微球。当将药物用于加药器脉冲式给药时，在水中能防止药物微球粒子出现聚团现象，如果将黄原胶和田菁胶成分去除，则药物在溶水后短时间内会发生粒子团聚(如图3)而不稳定。

如果将黄原胶和田菁胶单独使用，或将其任一一种配合性质类似的阿拉伯胶或明胶使用，或将阿拉伯胶和明胶配合使用，参照实施例1的重量配比和工艺进行制备，样品通过电镜观察，发现制备的微球形状不规则，呈椭圆形或不规则形。

结果表明：黄原胶和田菁胶组合在本发明中是一个最优的组合方案。

试验例4安全性试验

以下通过临床试验验证本发明使用的安全性。

本发明的盐酸溴己新固体微球临床推荐雾化吸入和饮水两种用药方法，为了确保临床给药的安全性，本试验分别通过喷雾和饮水两种方法来验证。

2.1雾化吸入给药安全性试验

选择单栋存栏6000只的白羽肉鸡舍四栋，鸡日龄均为25天，平均体重为1251g，且都为艾维因品种，饲养条件相同，由同一饲养员进行管理。将该四栋鸡舍分别标记为1号舍、2号舍、3号舍和4号舍，其中1号舍、2号舍和3号舍分别为高剂量、正常量和低剂量药物试验组，将实施例1制备的本发明药物分别按照40mg/kg、20mg/kg和10mg/kg体重的剂量(相当于盐酸溴己新药物实际用量为1.0mg/kg、0.5mg/kg和0.25mg/kg)取药，再将药物以1：50倍的比例用水稀释，置于雾化机中对全舍进行雾化给药。为了减小试验误差，每天中午11:00左右定时用药，连用10天。4号舍为对照舍，采用等量的生理盐水进行喷雾，用药时间和周期均和试验组相同。试验期间每天对鸡群进行观察，并记录各组鸡的采食、饮水、呼吸、死亡等情况。实验结束后各组随机选取5只鸡解剖观察，以判断本发明的雾化给药法对鸡的安全性。

实验结果：

A.实验结束后各组实验鸡均未出现死亡，饮水、采食等行为都正常，各组之间无差异；

B.各组选取的5只鸡剖检后，鼻腔、咽喉、气管、支气管和肺均未见到显著的病理病变，其他器官也正常，各组之间无差异，表明本发明喷雾使用安全。

结果表明：本发明的盐酸溴己新固体微球采用雾化吸入的方法给药，安全性良好。

2.2饮水给药安全性试验

随机选取400只70日龄的青年鸡，将其分为4组，每组100只，其中第1、2、3组为试验组，分别按照40mg/kg、20mg/kg和10mg/kg体重的剂量(相当于盐酸溴己新药物实际用量为1.0mg/kg、0.5mg/kg和0.25mg/kg)将药物以1:50的比例溶解于水中进行集中饮用，第4组为对照组，直接饮用自来水。每日用药1次，连用10天。试验期间每天对鸡群进行观察，记录各组鸡的采食、饮水、呼吸、死亡等情况。实验结束后各组随机选取3只鸡进行解剖观察，以判断本发明饮水给药法对鸡的安全性。

实验结果：

A.实验结束后各组实验鸡均未出现死亡，且饮水、采食等行为都正常，各组之间无差异；

B.各组选取的3只鸡剖检后，各器官均未见到显著的病理病变，各组之间无差异，表明本发明饮水使用安全。

结果表明：本发明的盐酸溴己新固体微球采用饮水的方法给药，安全性良好。

试验例5浓配条件下不同药物浓度在水中的分布对比试验

对于规模化和集约化饲养程度较高的养殖场，很多采用加药器在水线中脉冲式给药的方法进行用药，这就需要药物能进行浓配稀释，即在高浓度的条件下药物必须在水中均匀分布，根据不同动物用药习惯，高浓度的范围一般为1:10～1:200之间。

将本发明实施例1制得的样品，分别以1:10、1:50、1:100和1:200的比例用水进行稀释，搅拌均匀后观察状态，室温下放置1h、2h、4h和8h时再观察记录，以判断药物分布的均匀性。再用同等剂量和稀释度的现有技术制备的盐酸溴己新可溶性粉作为对比，结果如表2。不同稀释浓度下药物的试验前最初外观和试验结束后的外观如图4。

表2实施例1盐酸溴己新固体微球样品不同稀释浓度下的性状评估

表2和图4显示的结果表明，本发明实施例1的1:10、1:50、1:100和1:200水稀释样品在8h内一直能保持良好的均一状态，无沉淀生成，能够确保均匀给药，而现有技术制备的盐酸溴己新可溶性粉水稀释样品在1～2h时就出现了沉淀，8h时四个稀释浓度都出现了大量分层和沉淀，无法满足浓配方式给药的需求。

用同样方法对实施例2～10进行取样评估，结果表明本发明在8h内都能均匀分布，能满足临床浓配饮水的需求。

试验例6临床药效试验

在同一鸡场挑出同批次、同品种，且呼吸道症状发病程度相似的发病鸡250只作为试验对象，平均体重1568g，将所有鸡饲养在同一栋舍中，并随机分为五组，每组50只，其中1、2、3、4组为试验组，第5组为对照组。第1组以盐酸溴己新计按照0.5mg/kg体重的剂量(实施例1制得的样品为例)，用水以1:50倍的比例稀释进行喷雾给药(为了减少雾化过程对其他组鸡造成干扰影响，喷雾过程中对该组鸡用塑料布进行必要的隔离，防止雾滴扩散其他组而影响结果)；第2组按照盐酸溴己新0.5mg/kg的剂量集中饮用本发明的固体微球产品(以实施例1为例)；第3组按照盐酸溴己新0.5mg/kg的剂量集中饮用现有技术制备的盐酸溴己新可溶性粉；第4组按0.05％的浓度饮用同样具体祛痰止咳功效的氯化铵，第5组为对照组不使用任何药物。所有组鸡由同一个饲养员进行管理，试验周期为10天，期间观察各组鸡的死亡情况、呼吸道症状改善情况，并做好详细记录。结果见表3。

评价标准：

死亡：试验期间病鸡出现死亡，记-1分；

无效：指用药后，病鸡虽然没有出现死亡，但症状表现也未发生改善，记0分；

转归：指用药期间病鸡呼吸道症状减轻，虽未完全康复，但比之前有所好转，记1分；

治愈：指试验结束后，病鸡呼吸道症状完全消失，与正常健康鸡表现无差异，2分；

治愈率：指用药后，治愈的病鸡数与本组试验鸡总数的比值×100％；

总有效率：指用药后转归和治愈的病鸡数总和与本组试验鸡总数的比值×100％。

表3本发明的盐酸溴己新固体微球临床药效对比试验

试验结果：

第1组使用本发明实施例1制备的盐酸溴己新固体微球进行喷雾治疗，1只出现死亡，3只无效，8只转归，38只治愈，治愈率76％，总有效率为92％，得83分；

第2组使用本发明实施例1制备的盐酸溴己新固体微球饮水治疗，3只出现死亡，3只无效，10只转归，34只治愈，治愈率68％，总有效率88％，得75分；

第3组使用现有技术制备的盐酸溴己新可溶性粉饮水治疗，5只出现死亡，9只无效，11只转归，25只治愈，治愈率50％，总有效率72％，得56分；

第4组使用同样功能的氯化铵溶液饮水治疗，5只出现死亡，10只无效，16只转归，19只治愈，治愈率38％，总有效率70％，得49分；

第5组不使用任何药物治疗，12只出现死亡，10只无效，8只依靠自身抵抗力出现了转归，20只自行痊愈，治愈(痊愈)率40％，总有效率56％，得36分。

结果表明：

1)第1、2、3组和第4组相比，用盐酸溴己新治疗的鸡在治愈率、总有效率和得分上显著高于常规药物氯化铵，表明盐酸溴己新在鸡呼吸道病治疗方面效果更具优势。

2)第1、2组和第3组相比，尽管都是用盐酸溴己新进行治疗，但本发明的固体微球无论是喷雾给药，还是饮水给药，在治愈率、总有效率和得分方面都优于现有技术制备的可溶性粉剂。

3)第1组和第2组相比，本发明的盐酸溴己新固体微球使用方法不同，在治疗效果上总体表现差异不大，临床可根据实际鸡舍情况，结合天气状况，使用方法便利性等进行用药。

试验结论：本发明的盐酸溴己新固体微球在治疗鸡呼吸道疾病方面有显著的效果，优于现有技术可溶性粉剂和同功效产品氯化铵。