二天油在制备治疗呼吸道病毒感染的产品中的应用

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及二天油在制备治疗呼吸道病毒感染的产品中的应用。

背景技术

二天油为驱风兴奋药，常用于伤风感冒、舟车晕眩或中暑，其主要成分为薄荷脑、薄荷油、冰片。

对于二天油而言，文献：周燕文, 蒋伟哲, 蔡光明,等. 二天油治疗伤风感冒有效性及安全性研究[J]. 广西中医药大学学报, 2003, 6(002):1-3.公开了二天油对感冒初期相关症状，如头痛、鼻塞、流涕、喷嚏等方面的缓解作用，但并未公开其在制备治疗呼吸道病毒感染的产品中的应用，同时，该文献也指出，二天油只能针对感冒初期的鼻咽部卡他症状有效，而对于感冒后期、严重的、由病毒或合并细菌感染的感冒还应采用针对性的药物治疗。

而对于二天油中关键组分，如薄荷油，现有技术（如文献：Schuhmacher A，Reichling J，Schnitzler P． Virucidal effect of peppermint oil on the envelopedviruses herpes simplex virus type 1 and type 2 in vitro [J]． Phytomedicine，2003，10(6－7):504－510.）也仅是公开有了薄荷油对单纯疱疹病毒的两种亚型（HSV21、HSV22）具有抑制作用，并无任何薄荷油抑制新冠病毒等的相关记载。

目前，其他现有技术也并无任何二天油在制备治疗呼吸道病毒感染的产品中的应用的相关研究。

针对此问题，进一步拓展二天油的作用领域，研究其在制备治疗呼吸道病毒感染的产品的应用十分必要。

发明内容

本发明针对现有技术存在的问题，提供了二天油在制备治疗呼吸道病毒感染的产品中的应用。

本发明提供了二天油在制备治疗呼吸道病毒感染的产品中的应用，所述二天油在产品中的浓度≤0.25mg/mL。

进一步地，所述呼吸道病毒包括流感病毒、人冠状病毒和呼吸道合胞病毒中的一种或多种。

优选地，所述呼吸道病毒包括流感病毒FM1株、人冠状病毒HCOV-229E株和呼吸道合胞病毒中的一种或多种。

进一步地，所述呼吸道病毒为人冠状病毒HCOV-229E株。

进一步地，所述二天油在产品中的浓度为0.032-0.25mg/mL。

优选地，所述二天油在产品中的浓度为0.0625-0.25mg/mL。

进一步优选地，所述二天油在产品中的浓度为0.125-0.25mg/mL。

在一些具体的实施方式中，当呼吸道病毒为流感病毒FM1株时，所述二天油在产品中的浓度为0.0625-0.25mg/mL，当呼吸道病毒为人冠状病毒HCOV-229E株时，所述二天油在产品中的浓度为0.032-0.25mg/mL，当呼吸道病毒为呼吸道合胞病毒时，所述二天油在产品中的浓度为0.125-0.25mg/mL（不包括0.125mg/mL）。

进一步地，所述产品包括药物。

进一步地，所述药物的成分包括二天油和药学上可接受的辅料。

进一步地，所述药物的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸剂、凝胶剂、膏剂、贴剂。

进一步地，所述二天油的成分包括薄荷脑、薄荷油、冰片。

本发明所取得的技术效果是：

本发明中的二天油对流感病毒FM1株、人冠状病毒HCOV-229E株体外培养A549细胞病变有明显的抑制作用，同时，对呼吸道合胞病毒致体外培养hep-2细胞病变有抑制作用，综合治疗指数提示二天油抗病毒效果更为明显。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。

值得说明的是，本发明中使用的原料均为普通市售产品，因此对其来源不做具体限定。

实施例1

1 试验材料

1.1细胞株：人肺癌细胞A549，人喉癌上皮细胞hep-2购自北京北纳创联生物技术研究院，本室传代，液氮保存备用。

1.2病毒株：甲型H1N1流感病毒（FM1株）、人冠状病毒229E（HCOV-229E）、呼吸道合胞病毒（RSV株），购自美国标准生物品收藏中心（ATCC）。本室传代，-80℃冰箱保存备用。

1.3受试药物

由广州白云山星群（药业）股份有限公司提供。二天油，样品批号：SE220722A，样品性状：棕红色澄清液体。

阳性对照药：利巴韦林颗粒，四川百利药业有限责任公司生产，生产批号为200202。试验前用高纯水配成5mg/mL母液，过滤除菌后备用。

1.4试验试剂

表1 试验试剂情况

1.5试验仪器

表2 试验仪器情况

2 试验方法及结果

2.1培养细胞

按常规方法用0.25%胰酶将A549细胞消化，1000rpm/min离心，5min。弃去胰酶，加入DMEM细胞培养液10ml，将细胞吹打均匀，接种于96孔细胞培养板中，100ul/孔，将培养板置37℃、5%CO

按常规方法用0.25%胰酶将hep-2细胞消化，1000rpm/min离心，5min。弃去胰酶，加入DMEM细胞培养液10ml，将细胞吹打均匀，接种于96孔细胞培养板中，100ul/孔，将培养板置37℃、5%CO

2.2药物制备

二天油溶液：取10份量二天油加10份量吐温-80，超声处理均匀混合，加灭菌水180份，超声溶解即得（不用再次除菌）。试验前用细胞培养液1960μl、二天油溶液 40μl混匀，即为二天油母液，母液浓度1mg/ml。

利巴韦林颗粒：试验前用高纯水配成5mg/mL母液，过滤除菌后备用。

药物试验时以母液浓度作为起始浓度，细胞毒性试验时用细胞维持液做2倍倍比稀释，共设8个稀释度。药效试验时在TC

2.3 二天油对体外培养A549、hep-2细胞毒性试验

将二天油以母液浓度作为起始浓度，用细胞维持液做2倍倍比稀释，共设8个稀释度，加到已长成单层的A549、hep-2细胞培养板中，100μL/孔，每个稀释度做3个复孔，同时设正常细胞对照。将培养板置37℃、5%CO

细胞病变按6级标准判断：

-：细胞生长正常，无病变出现；

±：细胞病变少于整个单层的10%；

+：细胞病变约占整个单层细胞的25%以下；

++：细胞病变约占整个单层细胞的50%以下；

+++：细胞病变约占整个单层细胞的75%以下；

++++：细胞病变约占整个单层细胞的75%以上。

表3 二天油对体外培养A549细胞的毒性作用

注：细胞病变打分：“+”=1, “++”=2, “+++”=3, “++++”=4，3个复孔分别打分。

表3结果显示：二天油的最大无毒浓度（TC

表4 二天油对体外培养hep-2细胞的毒性作用

注：细胞病变打分：“+”=1, “++”=2, “+++”=3, “++++”=4，3个复孔分别打分

表4结果显示：二天油的最大无毒浓度（TC

2.4 二天油对流感病毒FM1株、HCOV-229E病毒株致体外培养A549细胞病变的抑制作用

取已长成单层的A549细胞培养板，倒掉培养液，分别接种100TCID

细胞病变按6级标准判断：

-：细胞生长正常，无病变出现；

±：细胞病变少于整个单层的10%；

+：细胞病变约占整个单层细胞的25%以下；

++：细胞病变约占整个单层细胞的50%以下；

+++：细胞病变约占整个单层细胞的75%以下；

++++：细胞病变约占整个单层细胞的75%以上。

表5 二天油在体外培养A549细胞上对呼吸道病毒的抑制作用

注：细胞病变打分：“+”=1, “++”=2，“+++”=3，“++++”=4，3个复孔分别打分；

IC50单位：(二天油：mg/ml)。

表5结果显示：二天油对流感病毒FM1株、人冠状病毒HCOV-229E株细胞病变均有不同程度的抑制作用，其中二天油对流感病毒FM1株、人冠状病毒HCOV-229E株的IC

2.5 二天油对RSV病毒致体外培养hep-2细胞病变的抑制作用

取已长成单层的hep-2细胞培养板，倒掉培养液，分别接种100TCID

细胞病变按6级标准判断：

-：细胞生长正常，无病变出现；

±：细胞病变少于整个单层的10%；

+：细胞病变约占整个单层细胞的25%以下；

++：细胞病变约占整个单层细胞的50%以下；

+++：细胞病变约占整个单层细胞的75%以下；

++++：细胞病变约占整个单层细胞的75%以上。

表6 二天油在体外培养hep-2细胞上对呼吸道病毒的抑制作用

注：细胞病变打分：“+”=1，“++”=2，“+++”=3，“++++”=4，3个复孔分别打分；IC50单位：(二天油：mg/ml)。

表6结果显示：二天油对呼吸道合胞病毒（RSV）细胞病变均有不同程度的抑制作用，其中二天油对RSV的IC

综合考虑治疗指数（TI）值，二天油对流感病毒FM1株、人冠状病毒HCOV-229E株体外培养A549细胞病变有明显的抑制作用，治疗指数（TI）分别为7.89、16.14；二天油对呼吸道合胞病毒致体外培养hep-2细胞病变有抑制作用，治疗指数（TI）为2.0。综合结果可见二天油抗病毒作用更优。

3 结论

二天油对流感病毒FM1株、人冠状病毒HCOV-229E株体外培养A549细胞病变有明显的抑制作用，同时，对呼吸道合胞病毒致体外培养hep-2细胞病变有抑制作用，综合治疗指数提示二天油抗病毒效果较为明显。

最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。