肾损伤的预防和／或治疗用医药组合物以及自噬活化剂

技术领域

本发明涉及肾损伤的预防和/或治疗用医药组合物以及自噬活化剂。

背景技术

伴随着老龄化和生活方式病的增加，慢性肾脏病(CKD)和终末期肾脏病(ESRD)/透析患者数量逐年增加，在医疗层面和社会层面都成为问题。在这种情况下，近年来，作为肾脏病学的新领域，找到肾脏与癌的联系的肿瘤学(Onconephrology)受到瞩目。仅在日本，作为抗癌药，含铂药剂(铂制剂)的处方笺数就超过每年100万件。特别是顺铂，被广泛用于头颈部、肺、睾丸、卵巢、膀胱癌等各种恶性肿瘤的治疗。但是，顺铂存在肾损伤等副作用，特别是由于低用量也会引发肾损伤，因此主要由于肾毒性而使给药量受限。顺铂的一部分从肾小球被过滤，一部分从近端肾小管分泌并排泄到尿中，因此皮质深层的顺铂浓度也会达到其他内脏器官的数倍。肾损伤见于肾的近端肾小管，在临床上有时会引起急性肾小管坏死的病情。由此，在使用顺铂时频发急性肾损伤(AKI)，尚未确立令人满意的预防和治疗方法。因此，由于给予顺铂而引起的AKI反复发生，转化成CKD，如果陷入肾功能不能充分恢复的状况，迫使减少顺铂的给药量，则恶性肿瘤的治疗难以继续，癌症患者的生命预后恶化。

另外，自噬是溶酶体中细胞质成分分解的总称。对肾脏疾病的自噬进行了研究，有报道称在缺血再灌注损伤所引起的AKI、给予顺铂所引起的AKI、衰老或肥胖所引起的CKD中，自噬起到保护性作用(非专利文献1～3)。更重要的是，尽管在CKD中自噬的作用更重要，但如果自噬的溶酶体系后期阶段停滞，则无法充分对抗疾病、病情恶化，因此倡导“自噬停滞”的概念(非专利文献4～6)。还探索着解除自噬停滞的食品成分，有报道称二十碳五烯酸(EPA)能够恢复自噬而减轻肾脂肪毒性(非专利文献7)。不仅是肾脏疾病，帕金森症、糖尿病等非常多的疾病中都有关于自噬不全的报道，探索、开发使自噬亢进的药剂成为全世界范围的需求。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：Kimura T,Takabatake Y,Takahashi A,Kaimori JY,Matsui I,Namba T,Kitamura H,Niimura F,Matsusaka T,Soga T,Rakugi H,Isaka Y.Autophagyprotects the proximal tubule from degeneration and acute ischemic injury.J AmSoc Nephrol.2011May；22(5):902-13.doi:10.1681/ASN.2010070705.Epub 2011Apr14.PMID:21493778；PMCID:PMC3083312.

非专利文献2：Takahashi A,Kimura T,Takabatake Y,Namba T,Kaimori J,Kitamura H,Matsui I,Niimura F,Matsusaka T,Fujita N,Yoshimori T,Isaka Y,RakugiH.Autophagy guards against cisplatin-induced acute kidney injury.Am JPathol.2012Feb；180(2):517-25.doi:10.1016/j.ajpath.2011.11.001.PMID:22265049.

非专利文献3：Namba T,Takabatake Y,Kimura T,Takahashi A,Yamamoto T,Matsuda J,Kitamura H,Niimura F,Matsusaka T,Iwatani H,Matsui I,Kaimori J,KiokaH,Isaka Y,Rakugi H.Autophagic clearance of mitochondria in the kidney copeswith metabolic acidosis.J Am Soc Nephrol.2014Oct；25(10):2254-66.doi:10.1681/ASN.2013090986.Epub2014Apr 3.PMID:24700866；PMCID:PMC4178439.

非专利文献4：Yamamoto T,Takabatake Y,Kimura T,Takahashi A,Namba T,Matsuda J,Minami S,Kaimori JY,Matsui I,Kitamura H,Matsusaka T,Niimura F,Yanagita M,Isaka Y,Rakugi H.Time-dependent dysregulation of autophagy:Implications in aging and mitochondrial homeostasis in the kidney proximaltubule.Autophagy.2016May3；12(5):801-13.doi:10.1080/15548627.2016.1159376.Epub2016Mar 17.PMID:26986194；PMCID:PMC4854554.

非专利文献5：Yamamoto T,Takabatake Y,Takahashi A,Kimura T,Namba T,Matsuda J,Minami S,Kaimori JY,Matsui I,Matsusaka T,Niimura F,Yanagita M,IsakaY.High-Fat Diet-Induced Lysosomal Dysfunction and Impaired Autophagic FluxContribute to Lipotoxicity in the Kidney.J Am Soc Nephrol.2017May；28(5):1534-1551.doi:10.1681/ASN.2016070731.Epub 2016Dec 8.PMID:27932476；PMCID:PMC5407727.

非专利文献6：Takabatake Y,Yamamoto T,Isaka Y.Stagnation of autophagy:Anovel mechanism of renal lipotoxicity.Autophagy.2017Apr3；13(4):775-776.doi:10.1080/15548627.2017.1283084.Epub 2017Feb 6.PMID:28165842；PMCID:PMC5388212.

非专利文献7：Yamamoto T,Takabatake Y,Minami S,Sakai S,Fujimura R,Takahashi A,Namba-Hamano T,Matsuda J,Kimura T,Matsui I,Kaimori JY,Takeda H,Takahashi M,Izumi Y,Bamba T,Matsusaka T,Niimura F,Yanagita M,IsakaY.Eicosapentaenoic acid attenuates renal lipotoxicity by restoring autophagicflux.Autophagy.2020Jun 28:1-14.doi:10.1080/15548627.2020.1782034.Epub aheadof print.PMID:32546086.

发明内容

发明所要解决的技术问题

本发明所要解决的技术问题在于提供一种急性肾损伤、例如给予含铂药剂等所引起的肾损伤的预防和/或治疗用医药组合物以及自噬活化剂。

用于解决技术问题的技术手段

为了解决上述技术问题，本发明的发明人进行了深入研究，结果发现后述的通式(1)所示的化合物、通式(2)所示的化合物、其盐或它们的前药能够减轻急性肾损伤、例如给予含铂药剂等所引起的肾损伤，并且能够使细胞的自噬活化，从而完成了本发明。代表性的本发明如下所示。

项1.一种急性肾损伤的预防和/或治疗用医药组合物，其含有通式(1)所示的化合物、其盐或其前药。

[式中，

A为可以被取代的苯环，

B为可以被取代的芳基或可以被取代的杂芳基，

X为氧原子或硫原子，

Y为氮原子或碳原子，

在

R

p为0、1或2，

或者(R

项2.如项1所述的医药组合物，其中，在通式(1)中，B为可以被取代的单环的芳基或者可以被取代的单环或双环的含氮杂芳基。

项3.如项1或2所述的医药组合物，其中，在通式(1)中，A为可以被选自下列A－1)～A－16)中的至少1种基团取代的苯环：

A－1)卤素、

A－2)羟基、

A－3)硝基、

A－4)氰基、

A－5)羧基、

A－6)可以被取代的氨基、

A－7)可以被取代的环状氨基、

A－8)可以被取代的低级烷基、

A－9)可以被取代的低级烷氧基、

A－10)低级烷氧基羰基、

A－11)低级烷基磺酰基、

A－12)可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基、

A－13)可以被取代的环状氨基羰基、

A－14)可以被低级烷基取代的氨磺酰基、

A－15)可以被取代的环状氨基磺酰基、

A－16)四唑基。

项4.如项1～3中任一项所述的医药组合物，其中，在通式(1)中，B为单环的芳基或者单环或双环的杂芳基，单环的芳基可以被选自下列B－1)～B－16)中的至少1种基团取代，单环或双环的杂芳基可以被选自下列B－1)～B－17)中的至少1种基团取代：

B－1)卤素、

B－2)羟基、

B－3)硝基、

B－4)氰基、

B－5)羧基、

B－6)可以被取代的氨基、

B－7)可以被取代的环状氨基、

B－8)可以被取代的低级烷基、

B－9)可以被取代的低级烷氧基、

B－10)低级烷氧基羰基、

B－11)低级烷基磺酰基、

B－12)可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基、

B－13)可以被取代的环状氨基羰基、

B－14)可以被低级烷基取代的氨磺酰基、

B－15)可以被取代的环状氨基磺酰基、

B－16)四唑基、

B－17)氧代基。

项5.如项1～4中任一项所述的医药组合物，其中，在通式(1)中，苯并异噁唑或苯并异噻唑骨架的4位被取代。

项6.如项1～3中任一项所述的医药组合物，其中，在通式(1)中，B为被取代的吡啶基或被取代的苯基，与Y键合的吡啶或苯环上的碳原子的至少邻位的碳原子被取代。

项7.如项1～4中任一项所述的医药组合物，其中，在通式(1)中，A为可以被选自卤素、低级烷氧基和可以被卤素取代的低级烷基中的至少1种基团取代的苯环，

B为吡啶基或苯基，可以分别被选自下列B－1)、B－5)、B－8)、B－10)、B－12)和B－13)中的至少1种基团取代：

B－1)卤素、

B－5)羧基、

B－8)可以被取代的低级烷基、

B－10)低级烷氧基羰基、

B－12)可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基、

B－13)可以被取代的环状氨基羰基，

R

或者(R

项8.如项1～4和7中任一项所述的医药组合物，其中，通式(1)所示的化合物为通式(1A)所示的化合物。

[式中，

Z为氮原子或CH，

Y为氮原子或碳原子，

在

R

p为0、1或2，

或者(R

R

R

项9.如项8所述的组合物，其中，在通式(1A)中，R

R

R

R

R

项10.如项1～4中任一项所述的医药组合物，其中，上述通式(1)所示的化合物为以下结构所示的化合物011、化合物021、化合物031、化合物041、化合物061、化合物071、化合物081、化合物091、化合物101、化合物111、化合物121、化合物131、化合物141、化合物151、化合物161、化合物171、化合物191、化合物221、化合物281、化合物311、化合物321、化合物331、化合物341、化合物351、化合物361、化合物371、化合物381、化合物391、化合物401或化合物431。

项11.一种急性肾损伤的预防和/或治疗用医药组合物，其含有通式(2)所示的化合物、其盐或其前药。

[式中，

A为可以被取代的苯环，

B为可以被取代的芳基或可以被取代的杂芳基，

Y为氮原子或碳原子，

在

R

p为0、1或2，

或者(R

项12.如项1～11中任一项所述的医药组合物，其为口服给药用的医药组合物。

项13.如项1～12中任一项所述的医药组合物，上述急性肾损伤为给予含铂药剂而引起的肾损伤。

项14.如项13所述的医药组合物，其中，上述含铂药剂为顺铂。

项15.一种自噬活化剂，其含有通式(1)所示的化合物、其盐或其前药。

[式中，

A为可以被取代的苯环，

B为可以被取代的芳基或可以被取代的杂芳基，

X为氧原子或硫原子，

Y为氮原子或碳原子，

在

R

p为0、1或2，

或者(R

项16.一种自噬活化剂，其含有通式(2)所示的化合物、其盐或其前药。

[式中，

A为可以被取代的苯环，

B为可以被取代的芳基或可以被取代的杂芳基，

Y为氮原子或碳原子，

在

R

p为0、1或2，

或者(R

发明效果

通式(1)所示的化合物、通式(2)所示的化合物、其盐或它们的前药具有预防和/或治疗急性肾损伤、例如因给予含铂药剂等而引起的肾损伤的作用、以及使细胞自噬活化的作用。本发明的医药组合物和自噬活化剂即使通过口服给药也表现上述作用，这是非常罕见的。

附图说明

图1是试验例1中被PAS染色后的肾皮质的切片试样的显微镜照片(400倍)。左上的照片是溶媒(vehicle)给予组的照片，左下是试验化合物给药组的照片，右上是顺铂给药组的照片，右下是顺铂和试验化合物给药组的照片。

图2是表示试验例1中得到的肾小管损伤的分值(PAS Injury Score)的图表。

图3是表示试验例1中得到的肌酸酐浓度和尿素氮(BUN)浓度的图表。图3中，Cre表示肌酸酐浓度，BUN表示尿素氮浓度。

图4是试验例2中得到的p53被染色后的肾皮质的切片试样的显微镜照片(200倍)。左上的照片是溶媒给予组的照片，左下是试验化合物给药组的照片，右上是顺铂给药组的照片，右下是顺铂和试验化合物给药组的照片。图4中的箭头是指p53阳性细胞。

图5是表示试验例2中得到的p53阳性细胞数(平均值)的图表。

图6是试验例2中得到的p62被染色后的肾皮质的切片试样的显微镜照片(400倍)。左上的照片是溶媒(vehicle)给予组的照片，左下是试验化合物给药组的照片，右上是顺铂给药组的照片，右下是顺铂和试验化合物给药组的照片。图6中的圆圈是指p62阳性点。

图7是表示试验例2中得到的p62阳性点数(平均值)的图表。

图8是试验例3中得到的GFP-LC3转基因小鼠的肾皮质的切片试样的显微镜照片(2400倍)。左上的照片是对照组(仅给予顺铂)、左下是氯喹给药组的照片，右上是试验化合物给药组的照片，右下是氯喹和试验化合物给药组的照片。

图9是表示试验例3中得到的GFP阳性点数。

图10是表示试验例4中的电泳结果。

图11是表示试验例4中得到的LC3-II蛋白质量。

图12是表示从试验例4中得到巴佛洛霉素(Bafilomycin)A1处置时的LC3-II蛋白质量扣除了巴佛洛霉素A1非处置时的LC3-II蛋白质量后的差量。

具体实施方式

本发明的一个实施方式是含有以下通式(1)所示的化合物、其盐或其前药的急性肾损伤的预防和/或治疗用医药组合物。

通式(1)

[式中，

A为可以被取代的苯环，

B为可以被取代的芳基或可以被取代的杂芳基，

X为氧原子或硫原子，

Y为氮原子或碳原子，

在

R

p为0、1或2，

或者(R

在本发明中，作为“可以被取代的苯环”的取代基，例如可以列举卤素；羟基；硝基；氰基；羧基；可以被取代的氨基；可以被取代的环状氨基；可以被取代的低级烷基；可以被取代的低级烷氧基；低级烷氧基羰基；低级烷基磺酰基；可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基；可以被取代的环状氨基羰基；可以被低级烷基取代的氨磺酰基；可以被取代的环状氨基磺酰基；四唑基等。取代基为单独1种或2种以上均可。

在本发明中，作为“芳基”，例如可以列举单环或双环的芳基，具体可以列举苯基、萘基等。

在本发明中，“可以被取代的芳基”中的芳基的定义如上。作为可以被取代的芳基的取代基，例如可以列举卤素；羟基；硝基；氰基；羧基；可以被取代的氨基；可以被取代的环状氨基；可以被取代的低级烷基；可以被取代的低级烷氧基；低级烷氧基羰基；低级烷基磺酰基；可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基；可以被取代的环状氨基羰基；可以被低级烷基取代的氨磺酰基；可以被取代的环状氨基磺酰基；四唑基；氧代基等。取代基为单独1种或2种以上均可。

在本发明中，“氧代基”是由“＝O”表示的基团。

在本发明中，作为“杂芳基”，例如可以列举单环或双环的含氮杂芳基，具体可以列举在环上包含1个以上(例如1～3个、1个或2个、1个)氮原子、还可以包含1个以上(例如1～3个、1个或2个、1个)作为其他杂原子的硫原子或氧原子的单环或双环的含氮杂芳基。作为具体的杂芳基，可以列举吡咯基、咪唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、呋咱基(furazanyl)、噁二唑基、噻二唑基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、吲唑基、喹啉基、异喹啉基、嘌呤基、酞嗪基、蝶啶基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并呋咱基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、异噁唑并[4,5－d]哒嗪基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基等。优选为单环的含氮杂芳基或苯并咪唑基。

在本发明中，“可以被取代的杂芳基”中的杂芳基的定义如上。作为可以被取代的杂芳基的取代基，例如可以列举卤素；羟基；硝基；氰基；羧基；可以被取代的氨基；可以被取代的环状氨基；可以被取代的低级烷基；可以被取代的低级烷氧基；低级烷氧基羰基；低级烷基磺酰基；可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基；可以被取代的环状氨基羰基；可以被低级烷基取代的氨磺酰基；可以被取代的环状氨基磺酰基；四唑基；氧代基等。取代基为单独1种或2种以上均可。

在本发明中，作为“低级烷基”，例如可以列举直链状、支链状或包含环状结构的C1～C8烷基，优选为C1～C6烷基、更优选为C1～C4烷基、特别优选为C1～C3烷基。具体而言，作为直链状或支链状的低级烷基，可以列举甲基、乙基、1－丙基、2－丙基、1－丁基、2－丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、新戊基、正己基、异己基、3－甲基戊基等，作为包含环状结构的低级烷基，可以列举环丙基、环丙基甲基、环丁基、环丁基甲基、环戊基、环戊基甲基、环己基、环己基甲基、环己基乙基等。优选列举甲基、乙基、2－丙基、叔丁基、环丙基等。

在本发明中，作为“卤素”，可以列举氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等，优选列举氟原子、氯原子。

在本发明中，“可以被取代的氨基”是指可以被取代的非环状氨基，作为其取代基，可以列举低级烷基(例如甲基、乙基、丙基等)、C1～C8酰基(例如乙酰基、丙酰基等)、芳基(例如苯基等)或杂芳基。取代基为单独1种或2种以上均可。作为优选的可以被取代的氨基，例如可以列举氨基、甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基、环己基氨基、乙酰基氨基、苯甲酰基氨基、苯基氨基等。

在本发明中，“环状氨基”例如是成环原子具有氮原子、还可以包含1个以上(例如1～3个、1个或2个、1个)氧原子的5～7元的环状氨基，例如可以列举吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基等，优选列举吡咯烷基、吗啉基等。

在本发明中，“可以被取代的环状氨基”中的环状氨基的定义如上。作为环状氨基的取代基，例如可以列举低级烷基、低级烷氧基、氨基、羟基、硝基、氰基、羧基、氧代基等。环状氨基可以被选自上述取代基中的至少1种基团取代。作为取代基的数量，例如可以列举0、1个、2个、3个，优选0、1个、2个。作为可以被取代的环状氨基，具体可以列举吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、4－甲基哌啶基、吗啉基、2－吡咯烷酮基等，优选列举吡咯烷基、吗啉基等。

在本发明中，“可以被取代的低级烷基”中的低级烷基的定义如上。作为低级烷基的取代基，例如可以列举：羟基；氨基；C1～C8烷基氨基(例如甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、叔丁基氨基等)；C1～C8烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、1－丙氧基、2－丙氧基、叔丁氧基等)；卤素(例如氟原子、氯原子、溴原子等)；卤代C1～C8烷氧基(例如三氟甲氧基等)；脂肪族杂环基(例如吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、4－甲基－1－哌嗪基等)；芳基(例如苯基、1－萘基等)；杂芳基(例如吡啶基、噻吩基、呋喃基等)；羧基；C1～C8烷氧基羰基(例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、1－丙氧基羰基、2－丙氧基羰基、叔丁氧基羰基等)；可以被低级烷基取代的氨基甲酰基(例如氨基甲酰基、甲基氨基羰基、二甲基氨基羰基、二乙基氨基羰基等)；环状氨基羰基(例如吡咯烷基羰基、哌啶基羰基、吗啉基羰基等)等。作为优选的取代基，可以列举甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、甲氧基、乙氧基、2－丙氧基、叔丁氧基羰基、羟基、氟原子、氯原子、三氯甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、吗啉基羰基、苯基、吡啶基等。可以被取代的低级烷基可以被选自上述取代基中的至少1种基团取代，作为取代基的数量，例如可以列举0、1个、2个、3个，优选0、1个、2个。

在本发明中，“被卤素取代的低级烷基”是指烷基的氢全部被卤素取代。被卤素取代的低级烷基中的卤素和低级烷基的定义如上。优选取代烷基的卤素为同种卤素。作为被卤素取代的低级烷基，优选三氯甲基或三氟甲基，更优选三氟甲基。

在本发明中，作为“低级烷氧基”，例如可以列举直链状、支链状或包含环状结构的C1～C8烷氧基，优选C1～C6烷氧基、更优选C1～C4烷氧基、特别优选C1～C3烷氧基。具体而言，作为直链状或支链状的烷氧基，可以列举甲氧基、乙氧基、1－丙氧基、2－丙氧基、1－丁氧基、2－丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、新戊氧基、正己氧基、异己氧基、3－甲基戊氧基等。作为包含环状结构的烷氧基，可以列举环丙氧基、环丙基甲氧基、环丁氧基、环丁基甲氧基、环戊氧基、环戊基甲氧基、环己氧基、环己基甲氧基、环己基乙氧基等。优选列举甲氧基、乙氧基、2－丙氧基、叔丁氧基、环丙氧基等。

在本发明中，“可以被取代的低级烷氧基”中的低级烷氧基的定义如上。作为低级烷氧基的取代基，例如可以列举：羟基；氨基；C1～C8烷基氨基(例如甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、叔丁基氨基等)；C1～C8烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、1－丙氧基、2－丙氧基、叔丁氧基等)；卤素(例如氟原子、氯原子、溴原子等)；卤代C1～C8烷氧基(例如三氟甲氧基等)；脂肪族杂环基(例如吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、4－甲基－1－哌嗪基等)；芳基(例如苯基、1－萘基等)；杂芳基(例如吡啶基、噻吩基、呋喃基等)；羧基；C1～C8烷氧基羰基(例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、1－丙氧基羰基、2－丙氧基羰基、叔丁氧基羰基等)；可以被低级烷基取代的氨基甲酰基(例如氨基甲酰基、甲基氨基羰基、二甲基氨基羰基、二乙基氨基羰基等)；环状氨基羰基(例如吡咯烷基羰基、哌啶基羰基、吗啉基羰基等)等。作为优选的取代基，可以列举甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、甲氧基、乙氧基、2－丙氧基、叔丁氧基羰基、羟基、氟原子、氯原子、三氟、吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、羧基、甲氧基羰基、吗啉基羰基、苯基、吡啶基等。可以被取代的低级烷氧基可以被选自上述取代基中的至少1种基团取代，作为取代基的数量，例如可以列举0、1个、2个、3个，优选0、1个、2个。

在本发明中，“低级烷氧基羰基”中的低级烷氧基的定义如上。低级烷氧基羰基是在羰基上键合有上述的低级烷氧基的基团。作为低级烷氧基羰基，例如可以列举直链状、支链状或包含环状结构的C1～C8烷氧基羰基。具体而言，作为直链状或支链状的烷氧基羰基，可以列举甲氧基羰基、乙氧基羰基、1－丙氧基羰基、2－丙氧基羰基、1－丁氧基羰基、2－丁氧基羰基、异丁氧基羰基、叔丁氧基羰基等。作为包含环状结构的C1～C8烷氧基羰基，可以列举环丙氧基羰基、环丙基甲氧基羰基、环丁氧基羰基、环丁基甲氧基羰基、环戊氧基羰基、环戊基甲氧基羰基、环己氧基羰基、环己基甲氧基羰基、环己基乙氧基羰基等。作为优选的低级烷氧基羰基，可以列举甲氧基羰基、乙氧基羰基、2－丙氧基羰基、环丙氧基羰基等。

在本发明中，“低级烷基磺酰基”中的低级烷基的定义如上。低级烷基磺酰基是在磺酰基上键合有上述的低级烷基的基团。作为低级烷基磺酰基，例如可以列举直链状、支链状或包含环状结构的C1～C8烷基磺酰基等，具体而言，作为直链状或支链状的烷基磺酰基，可以列举甲磺酰基、乙磺酰基、1－丙基磺酰基、2－丙基磺酰基、1－丁基磺酰基、2－丁基磺酰基、异丁基磺酰基、叔丁基磺酰基等。作为包含环状结构的C1～C8烷基磺酰基，可以列举环丙基磺酰基、环丙基甲基磺酰基、环丁基磺酰基、环丁基甲基磺酰基、环戊基磺酰基、环戊基甲基磺酰基、环己基磺酰基、环己基甲基磺酰基、环己基乙基磺酰基等。优选列举甲磺酰基、乙磺酰基、2－丙磺酰基、环丙磺酰基等。

在本发明中，在“可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基”中，低级烷基和低级烷基磺酰基的定义如上。可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基包括“可以被低级烷基取代的氨基甲酰基”和“可以被低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基”。

“可以被低级烷基取代的氨基甲酰基”是在氨基甲酰基上可以键合有1个或2个上述低级烷基的基团。在键合有2个低级烷基的情况下，该低级烷基可以相同也可以不同。作为可以被低级烷基取代的氨基甲酰基，例如可以列举氨基甲酰基、或者被直链状、支链状或包含环状结构的C1～C8烷基取代的氨基羰基等。作为可以被低级烷基取代的氨基甲酰基，具体可以列举氨基甲酰基、甲基氨基羰基、乙基氨基羰基、丙基氨基羰基、2－丙基氨基羰基、二甲基氨基羰基、二乙基氨基羰基、乙基甲基氨基羰基、甲基丙基氨基羰基、二环己基氨基羰基等。

“可以被低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基”是在氨基甲酰基上可以键合有1个或2个上述低级烷基磺酰基的基团。在键合有2个低级烷基磺酰基的情况下，该低级烷基磺酰基可以相同也可以不同。作为可以被低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基，例如可以列举氨基甲酰基、或者被直链状、支链状或包含环状结构的C1～C8烷基磺酰基取代的氨基羰基等。作为直链状或支链状的C1～C8烷基磺酰基氨基羰基，例如可以列举甲磺酰基氨基羰基、乙磺酰基氨基羰基、1－丙基磺酰基氨基羰基、2－丙基磺酰基氨基羰基、1－丁基磺酰基氨基羰基、2－丁基磺酰基氨基羰基、异丁基磺酰基氨基羰基、叔丁基磺酰基氨基羰基等。作为包含环状结构的C1～C8烷基磺酰基氨基羰基，例如可以列举环丙基磺酰基氨基羰基、环丙基甲基磺酰基氨基羰基、环丁基磺酰基氨基羰基、环丁基甲基磺酰基氨基羰基、环戊基磺酰基氨基羰基、环戊基甲基磺酰基氨基羰基、环己基磺酰基氨基羰基、环己基甲基磺酰基氨基羰基、环己基乙基磺酰基氨基羰基等。作为优选的可以被低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基，可以列举氨基甲酰基、甲磺酰基氨基羰基、乙磺酰基氨基羰基、2－丙基磺酰基氨基羰基、环丙基磺酰基氨基羰基等。

在本发明中，“可以被取代的环状氨基羰基”中的可以被取代的环状氨基的定义如上。可以被取代的环状氨基羰基是在羰基上键合有上述的可以被取代的环状氨基的基团。作为可以被取代的环状氨基羰基，具体可以列举吡咯烷基羰基、哌啶基羰基、哌嗪基羰基、4－甲基哌啶基、吗啉基羰基、2－吡咯烷酮基羰基等，优选列举吡咯烷基羰基、吗啉基羰基等。

在本发明中，“可以被低级烷基取代的氨磺酰基”中的低级烷基的定义如上。可以被低级烷基取代的氨磺酰基是在氨磺酰基上可以键合有1个或2个上述低级烷基的基团。在键合有2个低级烷基时，该低级烷基可以相同也可以不同。作为可以被低级烷基取代的氨磺酰基，例如可以列举：氨磺酰基；被直链状、支链状或包含环状结构的C1～C8烷基取代的氨基磺酰基等。具体可以列举氨磺酰基、甲基氨基磺酰基、乙基氨基磺酰基、丙基氨基磺酰基、2－丙基氨基磺酰基、二甲基氨基磺酰基、二乙基氨基磺酰基、乙基甲基氨基磺酰基、甲基丙基氨基磺酰基、二环己基氨基磺酰基等。

在本发明中，“可以被取代的环状氨基磺酰基”中的可以被取代的环状氨基的定义如上。可以被取代的环状氨基磺酰基是在磺酰基上键合有上述的可以被取代的环状氨基的基团。作为可以被取代的环状氨基磺酰基，具体可以列举吡咯烷基磺酰基、哌啶基磺酰基、哌嗪基磺酰基、4－甲基哌啶基磺酰基、吗啉基磺酰基、4－哌啶酮基磺酰基等，优选列举吡咯烷基磺酰基、吗啉基磺酰基等。

在本发明中，

在通式(1)所示的化合物中，A为可以被取代的苯环。A的取代基例如包含选自下列A－1)～A－16)中的至少1种，在存在多个取代基时，彼此可以相同也可以不同。

A－1)卤素、

A－2)羟基、

A－3)硝基、

A－4)氰基、

A－5)羧基、

A－6)可以被取代的氨基、

A－7)可以被取代的环状氨基、

A－8)可以被取代的低级烷基、

A－9)可以被取代的低级烷氧基、

A－10)低级烷氧基羰基、

A－11)低级烷基磺酰基、

A－12)可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基、

A－13)可以被取代的环状氨基羰基、

A－14)可以被低级烷基取代的氨磺酰基、

A－15)可以被取代的环状氨基磺酰基、

A－16)四唑基。

A中的取代基的数量例如为0～5个、0～4个、0～3个，优选0、1个或2个，更优选0或1个。在存在多个取代基时，彼此可以相同也可以不同。

作为A的取代基的其他例，可以列举选自上述A－1和A－3～A－16中的至少1种、选自从上述A－1和A－3～A－16中除甲氧基外的基团中的至少1种等。

优选的A的取代基为选自卤素；低级烷氧基；可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基；和可以被卤素取代的低级烷基中的至少1种，更优选的A的取代基为选自卤素；低级烷氧基；氨基甲酰基；和可以被卤素取代的低级烷基中的至少1种，更进一步优选的A的取代基为选自卤素、甲氧基、乙氧基、氨基甲酰基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氟乙基、二氟乙基和三氟乙基中的至少1种，进一步优选为选自卤素、甲氧基、乙氧基、氨基甲酰基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氟乙基、二氟乙基和三氟乙基中的至少1种，特别优选为选自氯原子、氟原子和三氟甲基中的至少1种。

在通式(1)所示的化合物中，A的取代基可以与苯并异噁唑或苯并异噻唑骨架的4位、5位、6位和7位的任意碳原子键合，优选与4位、5位和6位的碳原子的至少1个、更优选4位和/或5位的碳原子、特别优选4位的碳原子键合。其中，在本发明中，构成苯并异噁唑或苯并异噻唑骨架的原子的位置序号如下。

[式中，A和X同上。]

在通式(1)所示的化合物中，特别优选的A是在苯并异噁唑或苯并异噻唑骨架的4位的碳原子上键合有卤素、低级烷氧基或可以被卤素取代的低级烷基，并且5位、6位和7位的碳原子未被取代的苯环。

在通式(1)所示的化合物中，B为可以被取代的芳基或可以被取代的杂芳基。可以被取代的芳基或可以被取代的杂芳基的定义如上。作为芳基，例如可以列举苯基或萘基，优选苯基。作为杂芳基，优选作为成环原子不含其他杂原子的单环的含氮杂芳基或苯并咪唑基。作为成环原子不含其他杂原子的单环的含氮杂芳基，优选作为成环杂原子包含1个氮原子的5元或6元的杂芳基，例如可以列举吡咯基、吡啶基，优选吡啶基，更优选2－吡啶基。作为苯并咪唑基，优选苯并咪唑－3－基。

在B为单环的芳基的情况下，B可以被选自下列B－1)～B－16)中的至少1种基团取代。在B为单环或双环的杂芳基的情况下，B可以被选自下列B－1)～B－17)中的至少1种基团取代。

B－1)卤素、

B－2)羟基、

B－3)硝基、

B－4)氰基、

B－5)羧基、

B－6)可以被取代的氨基、

B－7)可以被取代的环状氨基、

B－8)可以被取代的低级烷基、

B－9)可以被取代的低级烷氧基、

B－10)低级烷氧基羰基、

B－11)低级烷基磺酰基、

B－12)可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基、

B－13)可以被取代的环状氨基羰基、

B－14)可以被低级烷基取代的氨磺酰基、

B－15)可以被取代的环状氨基磺酰基、

B－16)四唑基、

B－17)氧代基。

B中的取代基的数量例如为0或至少1个、0～5个、0～4个，优选为0～3个，更优选为0、1个或2个。在存在多个取代基时，彼此可以相同也可以不同。

作为B的取代基，优选列举选自卤素；羧基；可以被取代的低级烷基；低级烷氧基羰基；可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基；和可以被取代的环状氨基羰基中的至少1种，具体可以列举选自卤素、羧基、甲基、乙基、1－丙基、2－丙基、羟甲基、羧甲基、三氯甲基、三氟甲基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、甲基氨基羰基、二甲基氨基羰基、乙基甲基氨基羰基、甲磺酰基氨基羰基、吡咯烷基羰基和吗啉基羰基中的至少1种。

作为B的取代基，更优选列举选自卤素；羧基；低级烷基；被卤素取代的低级烷基；低级烷氧基羰基；和可以被低级烷基取代的氨基甲酰基中的至少1种，具体可以列举选自卤素、羧基、甲基、乙基、三氯甲基、三氟甲基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、异丙氧基羰基、单甲基氨基羰基和二甲基氨基羰基中的至少1种。

作为B的取代基，特别优选列举选自氯原子、氟原子、甲基、羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、甲基氨基羰基和二甲基氨基羰基中的至少1种。

在通式(1)所示的化合物中，在Y为氮原子时，B优选为可以被取代的苯基或可以被取代的吡啶基，在Y为碳原子时，B优选为可以被取代的苯基、可以被取代的吡啶基或2－氧代基苯并咪唑－3－基，更优选为可以被取代的苯基或可以被取代的吡啶基。

在通式(1)所示的化合物中，在B为被取代的吡啶基或被取代的苯基时，优选与Y键合的吡啶或苯环上的碳原子的邻位的碳原子的1个或2个、优选1个被取代。与该邻位的碳原子键合的取代基只要是上述的B的取代基即可，优选为卤素，更优选为氯原子或氟原子，更进一步优选为氯原子。

另外，在通式(1)所示的化合物中，在B为被取代的吡啶基或被取代的苯基时，优选与Y键合的吡啶或苯环上的碳原子的对位的碳原子未被取代或被羧基取代。

另外，在通式(1)所示的化合物中，在B为被取代的吡啶基或被取代的苯基时，优选与Y键合的吡啶或苯环上的碳原子的间位的全部碳原子不被取代。

在通式(1)所示的化合物中，在B为被取代的吡啶基或被取代的苯基时，更优选与Y键合的吡啶或苯环上的碳原子的邻位的碳原子的1个或2个、优选1个被氯原子或氟原子取代，间位的碳原子不被取代，对位的碳原子不被取代或者被羧基、甲氧基羰基或乙氧基羰基取代。

在Y为氮原子且B为被取代的2－吡啶基时，特别优选与Y键合的吡啶环上的碳原子的邻位的碳原子被氯原子或氟原子取代，间位的全部碳原子不被取代，对位的碳原子不被取代或被羧基取代。

在Y为氮原子且B为被取代的苯基时，特别优选与Y键合的苯环上的碳原子的邻位的2个碳原子中的1个被氯原子或氟原子取代，构成该苯基的其他的全部碳原子不被取代。

在Y为碳原子且B为被取代的2－吡啶基时，特别优选与Y键合的吡啶环上的碳原子的邻位的碳原子被氯原子或氟原子取代，间位的全部碳原子不被取代，对位的碳原子不被取代或者被羧基、甲氧基羰基或乙氧基羰基取代。

在Y为碳原子且B为被取代的苯基时，特别优选与Y键合的苯环上的碳原子的邻位的2个碳原子中的1个被氯原子或氟原子取代，另1个邻位的碳原子不被取代，间位的全部碳原子不被取代，对位的碳原子不被取代，或者被羧基、甲氧基羰基或乙氧基羰基取代。

在通式(1)所示的化合物中，X为氧原子或硫原子，优选为氧原子。

在通式(1)所示的化合物中，Y为氮原子或碳原子，优选为氮原子。

在通式(1)所示的化合物中，Y为氮原子或碳原子，优选为氮原子。

在Y为碳原子时为单键或双键，在Y为氮原子时为单键。/>

在通式(1)所示的化合物中，R

在R

在2个R

在2个R

作为2个R

[式中，Y和

2个R

作为饱和稠杂环，例如可以列举吡嗪环或哌啶环与环戊烷环或环己烷环的稠环。作为饱和稠杂环的具体例，可以列举八氢环戊吡啶、八氢环戊吡嗪、十氢喹啉、十氢喹喔啉等。

优选的R

在通式(1)所示的化合物中，p为0、1或2。

在通式(1)所示的化合物中，(R

通式(1)所示的化合物、其盐或其前药中，优选以下通式(1A)所示的化合物、其盐或其前药。本发明也包括含有以下通式(1A)所示的化合物、其盐或其前药的急性肾损伤的预防和/或治疗用医药组合物。

[式中，

Z为氮原子或CH。

Y为氮原子或碳原子。

在

R

p为0、1或2。

或者(R

R

R

在通式(1A)所示的化合物中，Z为氮原子或CH。在Y为氮原子时，Z优选为氮原子。

在通式(1A)所示的化合物中，Y为氮原子或碳原子。

在通式(1A)所示的化合物中，R

作为R

2个R

通式(1A)中的含有Y的环被R

[式中，*表示与异苯并噁唑的3位的碳原子键合的一侧，R

作为R

在通式(1A)中，(R

在通式(1A)所示的化合物中，优选R

在通式(1A)所示的化合物中，R

R

通式(1)所示的化合物、其盐或其前药的具体例例如包括化合物011、化合物021、化合物031、化合物041、化合物051、化合物061、化合物071、化合物081、化合物091、化合物101、化合物111、化合物121、化合物131、化合物141、化合物151、化合物161、化合物171、化合物181、化合物191、化合物201、化合物211、化合物221、化合物231、化合物241、化合物251、化合物261、化合物271、化合物281、化合物291、化合物301、化合物311、化合物321、化合物331、化合物341、化合物351、化合物361、化合物371、化合物381、化合物391、化合物401、化合物411、化合物421或化合物431，优选包括下列化合物、其盐或其前药。

/>

作为通式(1)所示的化合物、其盐或其前药，优选为化合物011、化合物021、化合物031、化合物041、化合物061、化合物071、化合物081、化合物091、化合物101、化合物111、化合物121、化合物131、化合物141、化合物151、化合物161、化合物171、化合物191、化合物221、化合物281、化合物311、化合物321、化合物331、化合物341、化合物351、化合物361、化合物371、化合物381、化合物391、化合物401或化合物431、其盐或其前药，更优选为化合物011、化合物021、化合物031、化合物041、化合物061、化合物071、化合物081、化合物091、化合物101、化合物111、化合物121、化合物131、化合物141、化合物151、化合物161、化合物171、化合物191、化合物321、化合物351、化合物361、化合物371、化合物381、化合物401或化合物431、其盐或其前药，进一步优选为化合物011、化合物031、化合物041、化合物061、化合物071或化合物191、化合物361、化合物371、化合物381、化合物401或化合物431、其盐或其前药，特别优选为化合物011、化合物031、化合物041、化合物061、化合物071或化合物191、化合物361、化合物371、化合物381或化合物401、其盐或其前药。

本发明的一个实施方式包括含有以下通式(2)所示的化合物、其盐或其前药的急性肾损伤的预防和/或治疗用医药组合物。该化合物的结构与通式(1)所示的化合物类似，因此该化合物、其盐或其前药具有预防和/或治疗急性肾损伤的效果。并且，该化合物、其盐或其前药能够使自噬活化。并且，该化合物或其盐还能够成为通式(1)所示的化合物的中间体化合物。

[式中，A、B、Y、R

通式(2)所示的化合物中的A、B、Y、R

在通式(2)中，优选与构成肟结构的碳原子键合的A环(苯环)的碳原子的邻位的碳原子具有取代基。只要没有特别说明，该取代基与通式(1)中的A环(苯环)上的取代基相同。因此，该取代基例如可以为选自上述A－1)～A－16)中的至少1种的基团。

另外，通式(2)中，氮原子与羟基之间的键由波浪线、即以下所示的线表示，由此表示通式(2)所示的化合物可以为由于其部分结构“＞C＝N－OH”而存在的几何异构体的E体、Z体以及它们的混合物的任意种。这在由波浪线表示的通式(2)以外的化合物中也是同样的。

通式(2)所示的化合物、其盐或其前药中，优选以下通式(2A)所示的化合物、其盐或其前药。

[式中，Z、Y、R

通式(2A)所示的化合物中的Z、Y、R

通式(2)所示的化合物、其盐或其前药中，优选以下通式(2B)所示的化合物、其盐或其前药。另外，以下通式(2B)所示的化合物或其盐作为制造通式(1)所示的化合物的中间体化合物是优选的。

[式中，A、B、Y、R

G

通式(2B)所示的化合物中的A、B、Y、R

作为G

G

作为G

作为G

优选的G

通式(2)所示的化合物、其盐或其前药例如包括下列化合物、其盐或其前药。

作为通式(2)所示的化合物、其盐或其前药，优选化合物062、化合物202、化合物362或化合物372、其盐或其前药，更优选化合物202的(E)异构体、化合物362的(E)异构体、化合物362的(Z)异构体或者化合物372的(Z)异构体、其盐或其前药。

上述化合物例如可以通过将以下详细阐述的制造方法1～3、以此为基准的方法、公知的方法等适当变更、组合等制造。用作原料化合物的化合物分别可以以盐的形态使用。但以下所示的方法仅仅是例示，基于熟悉有机合成的工作人员的知识，也可以适当利用其他的方法制造。另外，在将非市售品的1,2－苯并异噻唑或其衍生物或者1,2－苯并异噁唑或其衍生物用作原料化合物时，可以参考以下出版物中记载的方法制造、采购。

Advances in heterocyclic chemistry,Heterocyclic Chemistry in the 21stCentury:A Tribute to Alan Katritzky,Elsevier,Cambridge(2017)。R.A.Shastri,Review on Synthesis of 3-Substituted 1,2-Benzisoxazole Derivatives,Chem.Sci.Trans.,2016:5；8-20。

在制造的各反应中，可以根据需要对官能团进行保护。保护基及其保护和脱保护的技术可以适当应用公知的方法，例如T.W.Greene and P.G.M.Wuts,“Protective Groupsin Organic Synthesis”,3rd Ed.,John Wiley and Sons,inc.,New York(1999)中记载的方法。

[制造方法1]

在一个实施方式中，通式(1)所示的化合物可以按照以下的反应工序式－1所示的合成方案制造。即，通式(1)所示的化合物能够由通式(3)所示的化合物和通式(4)所示的化合物制造。

反应工序式－1

式中，A、B、Y、R

G

在反应工序式－1中，A、B、Y、R

作为G

G

作为G

作为G

优选的G

通式(3)所示的化合物与通式(4)所示的化合物的反应例如可以在不活泼溶剂中、在存在或不存在碱的条件下进行。还可以根据需要进一步在反应体系内添加活化剂。通式(3)所示的化合物和通式(4)所示的化合物是公知的化合物，可以按照公知的方法制造。

作为不活泼溶剂，可以列举二乙基醚、四氢呋喃(THF)、二噁烷、二甲氧基甲烷等醚系溶剂、甲苯、苯、二甲苯等芳香族烃系溶剂、二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、四氯化碳等卤代烃系溶剂、丙酮等酮系溶剂、二甲基亚砜、N,N－二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈等非质子溶剂、吡啶等。这些溶剂可以将2种以上以适当的比例混合使用。

作为碱，例如可以列举：氢化钠、氢化钾等金属氢化物、氢氧化钾、氢氧化钠等金属氢氧化物、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铯等金属碳酸盐、三乙胺、乙基二异丙胺等烷基胺类、甲醇钠、叔丁醇钾等金属醇盐。

相对于通式(4)所示的化合物1摩尔，碱的使用量通常为1摩尔以上、优选1～5摩尔、更优选1～2摩尔。

相对于通式(4)所示的化合物1摩尔，通式(3)所示的化合物的使用量通常为0.2摩尔以上、优选0.2～2摩尔、更优选0.2～1.5摩尔。

反应温度通常为－50℃～180℃、优选－30℃～180℃、更优选－10℃～180℃。为了促进反应，可以使用微波，作为此时的反应温度，例如为80℃～180℃、优选100℃～180℃。反应时间通常为10分钟～48小时、优选10分钟～24小时。

[制造方法2]

在一个实施方式中，通式(1B)所示的化合物可以按照以下的反应工序式－2所示的合成方案制造。即，通式(1B)所示的化合物可以由通式(5)所示的化合物和通式(6)所示的化合物制造。

反应工序式－2

[式中，A、B、X、R

在反应工序式－2中，A、B、X、R

作为G

G

作为G

作为G

优选的G

通过使通式(5)所示的化合物与通式(6)所示的化合物偶联，能够得到通式(1B)所示的化合物。通式(5)所示的化合物和通式(6)所示的化合物是公知的化合物，可以按照公知的方法制造。

该反应例如可以在不活泼溶剂中在存在碱的条件下进行。

作为不活泼溶剂，可以列举二乙基醚、四氢呋喃(THF)、二噁烷、二甲氧基甲烷等醚系溶剂、甲苯、苯、二甲苯等芳香族烃系溶剂、二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、四氯化碳等卤代烃系溶剂、丙酮等酮系溶剂、二甲基亚砜、N,N－二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈等非质子溶剂、吡啶等。这些溶剂可以将2种以上以适当的比例混合使用。

作为碱，例如可以列举：氢化钠、氢化钾等金属氢化物、氢氧化钾、氢氧化钠等金属氢氧化物、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铯等金属碳酸盐、三乙胺、乙基二异丙胺等烷基胺类、甲醇钠、叔丁醇钾等金属醇盐。

相对于通式(5)所示的化合物1摩尔，通式(6)所示的化合物的使用量通常为0.5摩尔以上、进而为1摩尔以上、优选为0.9～2摩尔、更优选为0.9～1.5摩尔。

相对于通式(5)所示的化合物1摩尔，碱的使用量通常为1摩尔以上、优选为1～5摩尔、更优选为1～2摩尔。

反应温度通常可以列举30℃～比溶剂的沸点高10℃的温度，优选列举80℃～比溶剂的沸点高10℃的温度。为了促进反应，可以使用微波，作为此时的反应温度，例如为80℃～180℃、优选100℃～180℃。反应时间通常为10分钟～48小时、优选10分钟～24小时。

另外，通式(5)所示的化合物与通式(6)所示的化合物的反应还可以利用Buchward反应进行，例如在钯催化剂、膦配体、碱的存在下使通式(5)所示的化合物与通式(6)所示的化合物在溶剂中反应。

作为钯催化剂，例如可以列举Pd(OAc)

作为膦配体，例如可以列举BINAP((2,2′-双(二苯膦)-1,1′-联萘)、Xphos(2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯)等双齿膦配体。

作为碱，可以列举t－BuONa(叔丁醇钠)等的强碱。

在该反应中，相对于通式(5)所示的化合物1摩尔，通式(6)所示的化合物的使用量通常为0.5摩尔以上、进而为1摩尔以上、优选为0.9～2摩尔、更优选为1～1.5摩尔。

相对于通式(5)所示的化合物1摩尔，钯催化剂的使用量通常为0.005～1摩尔、优选为0.01～0.2摩尔。

相对于钯催化剂1摩尔，膦配体的使用量通常为0.5～5摩尔、优选为1～2摩尔。

相对于通式(5)所示的化合物1摩尔，碱的使用量通常为0.5摩尔以上、进而为1摩尔以上、优选为1～2摩尔。

反应温度通常为40℃～150℃、优选为80℃～110℃，反应时间通常为1～24小时、优选为3～12小时。

[制造方法3]

在一个实施方式中，通式(1)或(2)所示的化合物可以按照以下的反应工序式－3所示的合成方案制造。即，通式(1C)所示的化合物可以通过将通式(7)所示的化合物转化成通式(8)所示的化合物，再与通式(4)所示的化合物反应制造通式(2B)所示的肟化合物，再将其闭环而制造。并且，本领域技术人员可以理解，通过在反应工序式－3所示的反应中，使用适当的对应的具有可以被取代的苯环A的化合物来代替通式(7)或(8)所示的化合物，能够制造通式(2)所示的化合物。另外，通式(7)所示的化合物是公知的化合物，可以按照公知的方法制造。

反应工序式-3

[式中，A、B、Y、R

G

在反应工序式－3中，A、B、Y、R

作为G

工序1、即将通式(7)所示的化合物转化成通式(8)所示的化合物的工序例如可以使卤化剂与通式(7)所示的化合物在不活泼溶剂中反应。

作为该反应中的不活泼溶剂，可以列举二乙基醚、四氢呋喃(THF)、二噁烷、二甲氧基甲烷等醚系溶剂、甲苯、苯、二甲苯等芳香族烃系溶剂、二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、四氯化碳等卤代烃系溶剂、丙酮等酮系溶剂、二甲基亚砜、N,N－二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈等非质子溶剂、吡啶等。这些溶剂可以将2种以上以适当的比例混合使用。

作为卤化剂，例如可以列举N－溴琥珀酰亚胺、N－氯琥珀酰亚胺等通常的卤化剂。

相对于通式(7)所示的化合物，卤化剂的使用量通常为等摩尔～过量摩尔、优选为1～5倍摩尔、更优选为1～2倍摩尔。

反应温度通常为－30～150℃、优选为－10～100℃、更优选为－10～40℃。反应时间通常为10分钟～48小时、优选为10分钟～24小时、更优选为30分钟～18小时。

工序2、即、使通式(8)所示的化合物与通式(4)所示的化合物反应合成通式(2B)所示的化合物的工序，例如可以在不活泼溶剂中在存在碱的条件下进行。

作为该反应中的不活泼溶剂，可以列举二乙基醚、四氢呋喃(THF)、二噁烷、二甲氧基甲烷等醚系溶剂、甲苯、苯、二甲苯等芳香族烃系溶剂、二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、四氯化碳等卤代烃系溶剂、丙酮等酮系溶剂、二甲基亚砜、N,N－二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈等非质子溶剂、吡啶等。这些溶剂可以将2种以上以适当的比例混合使用。

作为碱，例如可以列举氢化钠、氢化钾等金属氢化物、氢氧化钾、氢氧化钠等金属氢氧化物、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铯等金属碳酸盐、三乙胺、乙基二异丙胺等烷基胺类、甲醇钠、叔丁醇钾等金属醇盐。

相对于通式(4)所示的化合物1摩尔，通式(8)所示的化合物的使用量通常为0.5摩尔以上、0.8摩尔以上、优选为0.9～2摩尔、更优选为0.9～1.5摩尔。

相对于通式(4)所示的化合物1摩尔，碱的使用量通常为1摩尔以上、优选为1～5倍摩尔、更优选为1～2倍摩尔。

反应温度通常为－20℃～比溶剂的沸点高10℃的温度、优选为0℃～40℃。反应时间通常为10分钟～48小时、优选为10分钟～24小时、更优选为30分钟～18小时。

工序3、即、使通式(2B)所示的化合物闭环转化成通式(1)所示的化合物的工序例如可以在不活泼溶剂中在存在碱的条件下进行。

通式(2B)所示的化合物存在作为几何异构体的(E)体和(Z)体，从闭环反应时所需的加热较少的观点考虑，优选(E)体。

作为该反应中的不活泼溶剂，可以列举二乙基醚、四氢呋喃(THF)、二噁烷、二甲氧基甲烷等醚系溶剂、甲苯、苯、二甲苯等芳香族烃系溶剂、二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、四氯化碳等卤代烃系溶剂、丙酮等酮系溶剂、二甲基亚砜、N,N－二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈等非质子溶剂、吡啶等。这些溶剂可以将2种以上以适当的比例混合使用。

作为碱，例如可以列举氢化钠、氢化钾等金属氢化物、氢氧化钾、氢氧化钠等金属氢氧化物、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铯等金属碳酸盐、三乙胺、乙基二异丙胺等烷基胺类、甲醇钠、叔丁醇钾等金属醇盐。

相对于通式(2B)所示的化合物1摩尔，碱的使用量通常为1摩尔以上、优选为1～5倍摩尔、更优选为1～2倍摩尔。

反应温度通常为50℃～比溶剂的沸点高10℃的温度、优选为80℃～比溶剂的沸点高10℃的温度。为了促进反应，可以使用微波，作为此时的反应温度，例如为80℃～180℃、优选为100℃～180℃。反应时间通常为10分钟～8小时、优选为10分钟～2小时。

本发明的通式(1)或(2)所示的化合物、其中间体化合物及其起始原料化合物可以按照上述的合成方法制造，并且，也可以基于本说明书的实施例中记载的合成方法，参考本申请提出时已知或公知的技术(例如B.R.Kiran et al.,SYNTHESIS,EVALUATION OFANALGESIC AND ANTI-INFLAMMATORY ACTIVITIES OF SUBSTITUTED 1,2-BENZOXAZOLONEAND 3-CHLORO-1,2-BENZOXAZOLE DERIVATIVES,International Journal ofPharmaceutical Sciences and Research,2015；6:2918-2925.)来制造。

上述反应式分别表示的起始原料化合物和中间体化合物，在供于反应之前可以根据需要使用公知的方法利用适当的保护基保护官能团，在反应结束后，使用公知的方法将该保护基脱保护。

按照上述反应式得到的目的化合物分别可以进行分离和精制。例如，在将反应混合物冷却之后，为了分离粗制反应产物，进行过滤、浓缩、提取等分离步骤，之后，将粗制反应产物供于色谱柱、重结晶等通常的精制手段，由此，由反应混合物进行分离和精制。

上述反应式分别表示的起始原料化合物和通式(1)或(2)所示的化合物包括与溶剂加合了的溶剂合物(例如水合物、乙醇合物等)的形态的化合物。

通式(1)或(2)所示的化合物、上述各反应式中得到的中间体化合物和起始原料化合物中，在双键、环、稠环的异构体(E、Z、顺式体、反式体)、由于存在手性碳等而形成的异构体(R体、S体、α体、β体、对映异构体、非对映异构体)、具有旋光性的光学活性体(D、L、d、l体)、通过色谱分离而形成的极性体(高极性体、低极性体)、平衡化合物、旋转异构体、它们的任意比例的混合物、外消旋混合物存在几何异构体、立体异构体、光学异构体等异构体的情况下，包括所有的异构体。例如，光学异构体可以利用公知的各种分割法(例如利用结晶化的光学分割、利用色谱直接进行光学分割的方法等)进行拆分。

通式(1)或(2)所示的化合物的盐包括所有的药学上可接受的盐。药学上可接受的盐没有特别限制，例如可以列举：钠盐、钾盐等碱金属盐；钙盐、镁盐等碱土金属盐；锌盐等无机金属盐；三乙胺、三乙醇胺、三羟基甲基氨基甲烷、氨基酸等有机碱盐；盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐等无机酸盐；乙酸盐、碳酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、抗坏血酸盐等有机酸盐等。这些盐可以按照常规方法制造。

各种异构体可以通过公知的拆分法进行分离。例如，外消旋化合物可以通过通常的光学分割法(例如利用结晶化的光学分割、利用色谱直接进行光学分割的方法等)得到立体上单一的异构体。另外，光学活性的化合物还可以通过使用适当的光学活性的原料来制造。

上述反应式分别表示的起始原料化合物、中间体化合物和目的化合物可以以适当的盐的形态使用。

在本发明的通式(1)或(2)所示的化合物、其盐或其前药中，1个或多个原子可以被1个或多个同位素原子取代。作为同位素原子的示例，可以列举氘(2H)、氚(3H)、13C、14N、18O等。

本发明的医药组合物是将通式(1)或(2)所示的化合物、其盐或其前药制成通常的医药组合物的形态的制剂，使用该化合物、其盐或其前药和药学上可接受的载体进行制备。作为该载体，可以列举通常使用的填充剂、增量剂、粘合剂、赋湿剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂等的稀释剂或赋形剂。

本发明的前药是指由于生物体内的反应(例如酶反应、胃酸的反应)而转化成通式(1)或(2)所示的化合物的化合物。例如，在通式(1)或(2)所示的化合物具有羧基的情况下，是该羧基转化成酯的化合物。作为该酯，可以列举甲酯、乙酯、1－丙酯、2－丙酯、新戊酰氧基甲酯、乙酰氧基甲酯、环己基乙酰氧基甲酯、1－甲基环己基羰氧基甲酯、乙氧基羰氧基－1－乙酯、环己氧基羰氧基－1－乙酯等。

作为本发明的医药组合物，可以根据治疗目的从各种形态中选择，作为其代表的形态，可以列举片剂、丸剂、散剂、液体制剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、胶囊剂、栓剂、注射剂(液体制剂、混悬剂等)、软膏剂、吸入剂、滴耳剂等。这些之中，优选口服给药用的制剂、局部(优选为耳腔内)给药用的制剂和注射剂，更优选口服给药用的制剂。

作为成型为片剂所使用的载体，可以广泛使用公知的载体，例如可以列举：乳糖、白糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸钙、高岭土、结晶纤维素等赋形剂；水、乙醇、丙醇、单糖浆、葡萄糖液、淀粉液、明胶溶液、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、虫胶等粘合剂；藻酸钠、干淀粉、琼脂粉末、昆布多糖粉末、碳酸钙、碳酸氢钠、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯类、十二烷基硫酸钠、硬脂酸单甘油酯、淀粉、乳糖等崩解剂；季胺碱、十二烷基硫酸钠等促吸收剂；硬脂精、可可脂、氢化油等崩解抑制剂；甘油、淀粉等保湿剂；淀粉、乳糖、高岭土、膨润土、胶态硅酸等吸附剂；精制滑石、硬脂酸盐、硼酸粉末、聚乙二醇等润滑剂等。

另外，片剂可以为根据需要实施了通常的包衣的片剂，例如可以为糖衣剂、明胶包衣片、肠溶包衣片、薄膜包衣片或双层片、多层片。

作为成型为丸剂所使用的载体，可以广泛使用公知的载体，例如可以列举：葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、硬化植物油、高岭土、滑石等赋形剂；阿拉伯胶粉、黄耆胶粉、明胶、乙醇等粘合剂；昆布多糖、琼脂等崩解剂等。

作为成型为栓剂所使用的载体，可以广泛使用公知的载体，例如可以列举聚乙二醇、可可脂、高级醇、高级醇的酯类、明胶、半合成甘油酯等。

在制备成注射剂的情况下，优选液体制剂、乳剂和混悬剂经过杀菌，并且与血液等渗。作为制备成这些液体制剂、乳剂和混悬剂时所使用的稀释剂，可以广泛使用公知的稀释剂，例如可以列举水、乙醇、丙二醇、聚氧化异硬脂醇、乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯类等。其中，在注射剂的情况下，为了制备等渗性的溶液，医药制剂中可以含有充分量的食盐、甘油、葡萄糖等，还可以含有通常的溶解助剂、缓冲剂、无痛剂等，可以根据需要进一步含有着色剂、保存剂、香料、矫味剂、甜味剂等、其他的医药品。

软膏剂有糊剂、乳膏剂或凝胶等形态，在制备成这些形态时，作为稀释剂，例如可以使用白色凡士林、石蜡、甘油、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土等。

吸入剂是以通过将有效成分以气溶胶的形态吸入而应用于支气管或肺为目的的制剂，包括粉末吸入剂、吸入液体制剂、吸入气溶胶剂等。粉末吸入剂是指以粉末状固体颗粒的气溶胶的形态吸入的制剂，通常通过将有效成分制成微细的颗粒，根据需要与乳糖等添加剂混合并均匀化而制造。吸入液体制剂是指利用喷雾器等应用的液态的吸入剂，通常通过在有效成分中添加溶剂和适当的等渗剂、pH调节剂等并混合而制造。吸入气溶胶剂是将一定量的有效成分与容器内所填充的喷射剂一起喷雾的定量喷雾式吸入剂。吸入气溶胶剂通常通过在有效成分中添加溶剂和适当的分散剂、稳定剂等，制成溶液或悬浊液，与液态的喷射剂一起填充到耐压性的容器中，再安装定量阀而制造。

本发明的医药组合物可以根据需要含有着色剂、保存剂、香料、矫味剂、甜味剂等、其他的医药品。

本发明的医药组合物中所含的通式(1)或(2)所示的化合物、其盐或其前药的量没有特别限定，可以从宽范围内适当选择，在医药组合物中通常为0.5～90重量％、1～85重量％、优选为1～80重量％。

本发明的医药组合物的给药方法没有特别限制，可以按照与各种制剂形态、患者年龄、性别、疾病的状况、其他条件相应的方法给药。例如在片剂、丸剂、液体制剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂和胶囊剂的情况下口服给药。另外，在注射剂的情况下，单独给药或与葡萄糖、氨基酸等通常的辅助液混合后静脉内给药，另外，还可以根据需要单独在肌肉内、皮内、皮下、腹腔内等给药。在栓剂的情况下在直肠内给药。在吸入剂的情况下经鼻给药。在滴耳剂的情况下经耳给药。优选的给药方法有口服给药、注射给药(包括皮下给药、肌肉内给药、静脉内给药和骨髄腔内给药)、经耳给药，更优选口服给药。

本发明的医药组合物的给药量考虑用法、患者的年龄、性别、疾病的程度、其他条件选择即可，作为有效成分的通式(1)或(2)所示的化合物、其盐或其前药通常每1日对于体重1kg的给药量为0.01～100mg、优选0.1～50mg，每1日分成1次～数次，或者以2日、3日、4日、5日、6日、1周、2周或4周为1次的间隔给药。给药量因各种条件而变动，有时比上述范围少的给药量就足够了，还有时需要超出上述范围的给药量。

另外，本发明的医药组合物还能够作为与其他药剂组合的并用剂。作为其他药剂，可以列举具有减轻急性肾损伤、例如因给予含铂药剂等而引起的肾损伤的作用的药剂。

本发明的急性肾损伤的预防和/或治疗方法包括对需要预防和/或治疗急性肾损伤的患者给予有效量的通式(1)或(2)所示的化合物、其药学上可接受的盐或其前药的步骤。

通式(1)或(2)所示的化合物、其盐或其前药具有预防和/或治疗急性肾损伤的作用(换言之，减轻急性肾损伤的作用)。通式(1)或(2)所示的化合物、其盐或其前药还具有自噬活化作用。因此，预防和/或治疗急性肾损伤的作用可以是通过自噬活化作用而获得的预防和/或治疗急性肾损伤的作用。急性肾损伤可以为肾前性、肾性和肾后性的任一种。作为急性肾损伤，可以列举肾移植时的肾脏缺血再灌注损伤、因大量出血等引起的伴随循环血液量减少的肾前性急性肾损伤、因给予药剂(例如抗癌剂(例如含铂制剂等)、抗炎症剂等)引起的药剂性的肾性急性肾损伤、尿路梗阻那样的肾后性急性肾损伤等，特别适合于因给予含铂药剂引起的急性肾损伤。含铂药剂可以是以顺铂为代表的铂系配合物系的化疗法药剂。含铂药剂例如包括顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂，优选顺铂、奈达铂，特别优选顺铂。

本发明的一个实施方式包括含有通式(1)或(2)所示的化合物、其盐或它们的前药的自噬活化剂。通式(1)所示的化合物、其盐或其前药可以具有自噬活化作用，通式(2)所示的化合物、其盐或其前药的结构与通式(1)所示的化合物类似，因而也可以具有自噬活化作用。因此，通式(1)或(2)所示的化合物、其盐或它们的前药能够有效地用作自噬活化剂。

通式(1)或(2)所示的化合物、其盐或它们的前药还能够有效地用作通过自噬活性增强能够改善的疾病的预防和/或治疗用医药组合物。作为通过自噬活性增强能够改善的疾病，例如可以列举老化相关性肾脏疾病(例如肾脏老化、伴随年龄增长而发生的肾功能下降等)、糖尿病肾病、肥胖相关性肾病(例如肥胖相关性肾小管病等)、帕金森病、亨廷顿舞蹈症、牛皮癣等。

另外，通式(1)或(2)所示的化合物难以被肝脏代谢。并且，PBS溶解性高，因而有利于制剂化，并且膜透过性高，因而在生物利用率方面也是有利的。由此，通式(1)或(2)所示的化合物在药物动力学方面很出色。因此，与现有的自噬活化剂相比、或者与现有的因给予含铂药剂而引起的肾损伤的预防和/或治疗剂相比，能够以少量长时间地发挥自噬活性、或者因给予含铂药剂而引起的肾损伤的预防和/或治疗活性。

本发明的自噬活性化方法包括对需要自噬活化处理的患者给予有效量的通式(1)或(2)所示的化合物、其药学上可接受的盐或其前药的步骤。

本发明包括通过自噬活性增强能够改善的疾病的预防或治疗方法，其包括向需要预防或治疗通过自噬活性增强能够改善的疾病的患者给予有效量的通式(1)或(2)所示的化合物、其药学上可接受的盐或其前药的步骤。

本发明包括通式(1)或(2)所示的化合物、其药学上可接受的盐或其前药在制造通过自噬活性增强能够改善的疾病的预防或治疗剂中的用途。

实施例

下面参照参考例和实施例对本发明进行具体说明，但本发明不限定于这些。

[制造例]

按照国际公开第2021/079962号的实施例1～43中记载的方法，制造以下：

化合物011、化合物021、化合物031、化合物041、化合物051、化合物061、化合物071、化合物081、化合物091、化合物101、化合物111、化合物121、化合物131、化合物141、化合物151、化合物161、化合物171、化合物181、化合物191、化合物201、化合物211、化合物221、化合物231、化合物241、化合物251、化合物261、化合物271、化合物281、化合物291、化合物301、化合物311、化合物321、化合物331、化合物341、化合物351、化合物361、化合物371、化合物381、化合物391、化合物401、化合物411、化合物421和化合物431的通式(1)所示的化合物、以及

化合物012、化合物052、化合物062、化合物072、化合物082、化合物092、化合物102、化合物112、化合物132、化合物192、化合物202、化合物212、化合物282、化合物342、化合物362、化合物372、化合物412的通式(2)所示的化合物。

5－氯－6－(4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物011)

(E)－5－氯－6－(4－((2－氟－6－(三氟甲基)苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物012(E))和其Z异构体(化合物012(Z))

5－氯－N－甲基－6－(4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酰胺(化合物021)

(S)－5－氯－6－(3－甲基－4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物031)

(R)－5－氯－6－(3－甲基－4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物041)

5－氯－6－(4－(4－(甲氧基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物051)

5－氯－6－(4－((2－氟－6－甲氧基苯基(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物052)

4－氯－3－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物061)

(E)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2,6－二氯苯基)甲酮肟(化合物062(E))和其Z异构体(化合物062(Z))

4－氯－3－(4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物071)

(E)－(4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)(2,6－二氯苯基)甲酮肟(化合物072(E))和其Z异构体(化合物072(Z))

5－氯－6－(4－(4－氯苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物081)

5－氯－6－(4－((2,6－二氯苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物082)

5－氯－6－(4－(4－氯苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)N,N－二甲基烟酰胺(化合物091)

(E)－5－氯－6－(4－((2,6－二氯苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)－N,N－二甲基烟酰胺(化合物092(E)和其Z异构体(化合物092(Z))

3－氯－4－(4－(4－氯苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)苯甲酸(化合物101)

3－氯－4－(4－((2,6－二氯苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)苯甲酸甲酯(化合物102)

5－氯－3－(4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物111)

(E)－4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)(2,5－二氯苯基)甲酮肟(化合物112(E))和其Z异构体(化合物112(Z))

5－氯－6－(4－(5－氯苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物121)

5－氯－6－(4－(5－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物131)

5－氯－6－(4－((2－氯－5－(三氟甲基)苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物132)

3－(4－(吡啶－2－基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物141)

3－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物151)

3－(4－(2,3－二甲基苯基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物161)

3－(4－(2,4－二氯苯基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物171)

3－(4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噻唑(化合物181)

5－氯－6－(8－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)－3,8－二氮杂双环[3,2,1]辛烷－3－基)烟酸(化合物191)

5－氯－6－(8－((2－氟－6－(三氟甲基)苯基(羟基亚氨基)甲基)－3,8－二氮杂双环[3,2,1]辛烷－3－基)烟酸(化合物192)

7－氯－3－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物201)

(E)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2,3－二氯苯基)甲酮肟(化合物202(E))和其Z异构体(化合物202(Z))

6－氯－3－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物211)

(E)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2,4－二氯苯基)甲酮肟(化合物212(E))和其Z异构体(化合物212(Z))

5－氯－6－(4－(4－氯苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)吡啶－3－基)(吗啉基)甲酮(化合物221)

5－氯－6－(4－(4－氯苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)－N－(甲基磺酰基)烟酰胺(化合物231)

5－氯－6－(4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸甲酯(化合物241)

(5－氯－6－(4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)吡啶－3－基)甲醇(化合物251)

3－(4－(3－甲基吡啶－2－基)哌嗪－1－基)－4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑(化合物261)

4－甲氧基－3－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物271)

1－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌啶－4－基)－1,3－二氢－2H－苯并[d]咪唑－2－酮(化合物281)

1－(1－((2－氟－6－(三氟甲基)苯基(羟基亚氨基)甲基)哌啶－4－基)－1,3－二氢－2H－苯并[d]咪唑－2－酮(化合物282)

2－(2－氧代基－3－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌啶－4－基)－2,3－二氢－1H－苯并[d]咪唑－1－基)乙酸叔丁酯(化合物291)

2－(2－氧代基－3－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌啶－4－基)－2,3－二氢－1H－苯并[d]咪唑－1－基)乙酸(化合物301)

3－(4－(2－氯吡啶－3－基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物311)

3－(4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物321)

3－(4－(3,5－二氯苯基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物331)

5－氯－6－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌啶－4－基)烟酸甲酯(化合物341)

5－氯－6－(1－((2－氟－6－(三氟甲基)苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌啶－4－基)烟酸甲酯(化合物342)

5－氯－6－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌啶－4－基)烟酸(化合物351)

3－(4－(2－氯苯基)－3,6－二氢吡啶－1(2H)－基)－4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑(化合物361)

E－(4－(2－氯苯基)－3,6－二氢吡啶－1(2H)－基)(2－氟－6－(三氟甲基)苯基)甲酮肟(化合物362(E))和其Z异构体(化合物362(Z))

5－氯－6－(2－氧代基－4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸乙酯(化合物371)

(Z)－5－氯－6－(4－((2－氟－6－(三氟甲基)苯基)(羟基亚氨基)甲基)－2－氧代基哌嗪－1－基)烟酸乙酯(化合物372(Z))

5－氯－6－(2－氧代基－4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物381)

3－氯－4－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)－1,2,3,6－四氢吡啶－4－基)苯甲酸甲酯(化合物391)

3－氯－4－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)－1,2,3,6－四氢吡啶－4－基)苯甲酸甲酯(化合物401)

3－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)－4－碘苯并[d]异噁唑(化合物411)

(E)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2－氟－6－碘苯基)甲酮肟(化合物412(E))和其Z异构体(化合物412(Z))

3－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)－4－氰基苯并[d]异噁唑(化合物421)

3－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑－4－甲酰胺(化合物431)

在以下的试验例中，关于组织学染色的定量分析，均由2名肾脏内科专业医生在盲检下对各组织进行至少10片的高倍率视野的评价。

[试验例1]化合物011对于因给予顺铂而引起的肾损伤的作用

(试验方法)

使用野生型雄性小鼠作为受试动物。使小鼠自由摄取水和标准小鼠用饲料。

将顺铂(Sigma-Aldrich)以1mg/mL浓度溶于生理盐水，制备顺铂溶解液。

对8周龄小鼠向腹腔内以顺铂给予量达到15mg/kg体重的量给予顺铂溶解液。对照组向腹腔内给予等量的生理盐水。

使化合物011(试验化合物)悬浮在PBS中，制备试样液。

从给予顺铂的前一天开始连续3天口服给予试验化合物的给药量达到10mg/kg体重的量的试样液。对照组口服给予等量的PBS。

在给予顺铂3天后将小鼠在麻醉下解剖，取血液和肾脏。

另外，除了不给予顺铂以外，对小鼠同样处置，取血液和肾脏。因此，小鼠被分成4组。

(组织学的解析)

利用PBS(pH7.4)对小鼠进行心脏灌流。将取出的肾脏切片，利用4％PFA(多聚甲醛)进行后固定，进行石蜡包埋、或者利用OC包埋剂冷冻，制成肾皮质的切片试样。

将4组切片试样用PAS(Periodic acid-Schiff，过碘酸-希夫)染色，用光学显微镜(400倍)观察(图1)。

因给予顺铂，观察到肾小管细胞坏死、肾小管上皮的扁平化、扩张以及形成圆柱，确认肾小管受到显著损伤(图1的右上的照片(顺铂给药组))。给予试验化合物明显地减少了因顺铂引起的肾小管损伤(图1的右下的照片(顺铂和试验化合物给药组)。给予试验化合物与给予溶媒(图1的左上的照片(溶媒给予组))相比未见明显变化(图1的左下的照片(试验化合物给药组))。

使用经PAS染色的切片试样定量地评价肾小管损伤。更详细而言，对4组切片试样进行至少10片的高倍率视野(200倍)观察，基于受到损伤的肾小管的比例，以10个等级评价肾小管损伤的分值(PAS Injury Score，平均值)。肾小管损伤定义为细胞坏死、肾小管扩张和形成圆柱。

将结果示于图2。在图2的棒状图中，生理盐水(Normal saline)表示给予了不含顺铂的生理盐水(溶媒)的组，顺铂(Cisplatin)表示给予了溶解有顺铂的生理盐水的组。其他图中所示的棒状图中也同样。

因给予顺铂，肾小管损伤显著增加，但通过给予试验化合物，肾小管损伤明显减少。

(生化学解析)

从由小鼠采集的血液获得血浆，测定肌酸酐浓度和尿素氮浓度(对于各组n＝2～4)。肌酸酐浓度的测定使用生物测定系统肌酸酐检测分析试剂盒(BioAssay SystemsCreatinine Assay Kit，DICT-500)，尿素氮浓度的测定使用BUN-test-Wako。将结果示于图3。在图3中，生理盐水表示给予了不含顺铂的生理盐水的组，顺铂表示给予溶解有顺铂的生理盐水的组。另外，图3中Cre表示肌酸酐浓度，BUN表示血清尿素氮浓度。

给予试验化合物通常几乎不会使肌酸酐浓度和血清尿素氮浓度发生变化。而给予顺铂会使肌酸酐浓度和血清尿素氮浓度显著升高。但是，给予试验化合物明显抑制了它们的升高。由此能够确认通过试验化合物，能够减轻因顺铂而引起的肾功能下降。

[试验例2]化合物011对于(1)因给予顺铂而引起的DNA受损和(2)给予顺铂后因自噬而分解的基质量的作用

(组织学的解析)

与试验例1同样取小鼠的肾脏。对于肾脏，进行0.01mmol/L柠檬酸缓冲液(pH6.0)中120℃×10分钟的利用高压釜的抗原失活、和PBS中利用1.5％牛血清白蛋白进行60分钟阻断，之后，利用石蜡包埋切片制备4组肾皮质的切片试样。

将切片与p53或p62的一次抗体在4℃孵育过夜。

对于各组(n＝2～4)，以200倍(p53)或400倍(p62)的视野计量p53阳性细胞数或p62阳性点数，算出平均值。

将使用了p53的显微镜照片(200倍)示于图4，将p53阳性细胞数(平均值)示于图5，将使用了p62的显微镜照片(400倍)示于图6，将p62阳性点数(平均值)示于图7。图4中箭头是指p53阳性细胞。图6中用圆圈围成p62阳性点。

已知p53是抑癌基因，对应于细胞应激的程度，在细胞周期停止、凋亡、DNA修复等方面发挥作用，p53的出现被评价为核DNA严重受损。另外，p62是因自噬而选择性地分解的基质，p62的出现被评价为自噬不能使基质充分分解的状态，即，自噬不完全状态。给予试验化合物明显地减少了因给予顺铂而出现的p53和p62。由此可以确认给予试验化合物能够抑制DNA损伤、能够抑制自噬障害。

[试验例3]化合物011对于自噬流(autophagy flux)的作用

受试动物为自噬监控(autophagy monitor)小鼠(GFP-LC3转基因小鼠)的8周龄雄性小鼠。使小鼠自由摄取水和标准小鼠用饲料。

对小鼠向腹腔内以顺铂给予量达到15mg/kg体重的量给予顺铂溶解液。

使试验化合物(化合物011)悬浮在PBS中，制备试样液。

从给予顺铂的前一天开始连续3天口服给予试验化合物的给药量达到10mg/kg体重的量的试样液。

在给予顺铂2天后将小鼠在麻醉下解剖，摘取肾脏。

另外，在对小鼠实施麻醉6小时前，向腹腔内以50μg/g体重的量给予作为溶酶体抑制剂的氯喹溶解液。另外也准备不给予氯喹溶解液的组。氯喹溶解液通过将氯喹(Sigma-Aldrich)以5mg/mL的浓度溶解在蒸馏水中而制备。

(组织学的解析)

通过定量GFP-LC3点(GFP阳性点)来评价自噬流。

将肾脏的切片用近端肾小管细胞的标记LRP2/MEGALIN进行免疫染色(红)，用DAPI进行对照染色(蓝)。

以10片高倍率视野(600倍)定量各组(n＝5)的每个近端肾小管的GFP-LC3点(绿色)数，利用平均值进行评价。

将切片的显微镜照片(2400倍)示于图8，将GFP-LC3点数示于图9。显微镜照片的绿色反映细胞内未被分解的自噬体。

LC3是与自噬体膜结合的蛋白质。在肾小管中出现LC3点＝自噬体(结合了LC3的自噬体膜)在正常情况下是少量的。在自噬因各种应激而被诱导时，LC3点增加。通常认识是在GFP-LC3转基因小鼠中，GFP-LC3点的增加意味着自噬体的增加，表明自噬被活化。但在疾病病情中，正确的自噬活性评价法仍很复杂，在解释上需要注意。例如，自噬体数或LC3的增加并不是无条件地表明自噬活化，还有可能表明基质分解时的“溶酶体”的功能障害等的、自噬的后半段中的结块(block)(瓶颈，bottleneck)。

本发明的发明人为了解决上述问题，到目前为止，确立了通过给予溶酶体抑制药氯喹并比较是否给予时的GFP-LC3点数来评价自噬活性的方法(非专利文献5-7)。具体而言，在对于自噬活性高的状态给予氯喹时，GFP-LC3点有意地增加。相对于此，在对于自噬活性低、或者停滞状态即使给予氯喹，GFP-LC3点也不会比给予前增加。

在对GFP-LC3转基因小鼠给予顺铂时，观察到大量的GFP-LC3点(自噬体增加)(图8左上)，但即使在给予顺铂第2日给予氯喹，也未观测到GFP-LC3点的增加(图8左下)。这表明自噬因给予顺铂而被诱导，但自噬流已经停滞。另一方面，在试验化合物给药组(图8右上)中，在给予顺铂2日后GFP-LC3点减少。这暗示了自噬流的停滞解除。实际上，在试验化合物和氯喹给药组(图8右下)中，GFP-LC3点有意地增加，由此表明自噬流的停滞被解除、自噬亢进。

由以上情况可以确认，通过给予试验化合物，因顺铂引起的自噬流的停滞被解消、自噬亢进。

[试验例4]化合物011对于肺肿瘤细胞的自噬活性的作用

(蛋白质印迹)

在加入了DMEM培养基的6孔板上播种人肺肿瘤细胞A549细胞(1.0×10

制备含有巴佛洛霉素A1(最终浓度250nM，也记作Baf)的DMEM培养基(Baf(+))和不含巴佛洛霉素A1的DMEM培养基(Baf(-))。并且，还制备在含Baf的DMEM培养基中加入了DMSO或化合物011(试验化合物)的培养基、和在不含Baf的DMEM培养基中加入了DMSO或加入了化合物011(试验化合物)的培养基，总共准备6种培养基。DMSO的最终浓度为0.1％、试验化合物的最终浓度为10μM。另外，再准备含有Baf的Earle's平衡盐溶液(EBSS，饥饿(starvation))和不含Baf的EBSS。在清洗后的加入了细胞的各孔中加入3mL的6种培养基和2种EBSS的任一种，培养6小时。用PBS对细胞进行3次清洗后，在4℃加入RIPA缓冲液，在冰上静置30分钟后，从孔中迅速且小心地回收细胞。回收后，进行离心(15000rpm、4℃、30分钟)，回收上清液，得到蛋白质溶液。

在蛋白质溶液中加入样品缓冲液进行改性，利用15％聚丙烯酰胺凝胶进行电泳后，向硝基纤维素膜转印。利用封闭缓冲液进行封闭。作为一次抗体使用LC3抗体(1000倍稀释)和β-肌动蛋白抗体(10000倍稀释)；作为二次抗体，使用兔抗体(2000倍稀释)和小鼠抗体(2000倍稀释)，利用发光试剂(ELC Western Blotting Detection Reagents(AmershamBioscience))检出。解析使用Image J。

将电泳的结果示于图10。在图10中，营养素(nutrient)表示不含DMSO和试验化合物的DMEM培养基组，DMSO表示含有DMSO的DMEM培养基组，饥饿(starvation)表示EBSS组，011表示试验化合物组。

将各组的LC3-II蛋白质量(发光强度)示于图11。另外，对于各组，将从Baf处置时的蛋白质量扣除了Baf非处置时的蛋白质量的差量(Δ)示于图12。

LC3-II蛋白质是自噬的标记物，在自噬被诱导时增加。增加了的LC3-II的一部分在自噬的过程中被分解。Baf抑制该分解。因此，能够基于Baf处置时的LC3-II量相对于Baf非处置时的LC3-II量的增加比例来评价自噬亢进状态。如图12所示，试验化合物中，确认了LC3-II因Baf处置而大幅增加，其程度能够与饥饿(starvation)匹敌，具有自噬诱导效果。

尽管在因肾缺血再灌注损伤、单侧尿路结扎(尿路堵塞)等引起的急性肾损伤中自噬也是保护性的，但仍观察到或报道了自噬流发生停滞。于是，确认了试验化合物在本申请试验例中具有自噬亢进作用。由此，试验化合物能够期待对于急性肾损伤的有效性。