祛痘中药组合物及应用与祛痘活性复合物的制备方法、祛痘护肤品

技术领域

本发明涉及中药组合物领域和护肤品领域，更具体地说，涉及一种祛痘中药组合物及应用与祛痘活性复合物的制备方法、祛痘护肤品。

背景技术

痤疮，俗称痘痘，是发生于毛囊皮脂腺的一种慢性炎症性疾病，发病率高，多发生于青春期和成年期，主要集中在面部、前胸和上背部，形成白头粉刺、黑头粉刺、炎性丘疹或脓疱，严重的会形成结节和囊肿，部分人群会遗有瘢痕。

痤疮的发病机制错综复杂，西医认为痤疮的发生与皮脂分泌异常、雄激素水平的升高、毛囊皮脂腺导管角化异常、细菌感染和炎症反应等诸多因素均密切相关。中医把病因病机主要归纳为风热外袭、胃肠湿热、毒热互结、血热偏盛、冲任失调、阴虚不足、阳郁寒凝、血瘀痰结这八个方面；其中，普遍认为肺热和胃肠湿热是影响青春痘的最主要的原因。国际上临床治疗痤疮一直以口服抗生素和激素类药物为主导，国内近年来抗痤疮药物用药习惯已经向非维A酸类产品转化，但这些产品存在副作用大、不能根治，痤疮容易复发的问题。

随着中医中药的蓬勃发展，人们对天然产品的青睐，中医中药用于痤疮的治疗日益得到重视和认可。中医对痤疮的治疗多运用清热解毒、健脾、理气、祛痰的中药进行治疗，取得了不错的效果，例如：中国专利CN 102228532B公开的“一种治疗痤疮的组合药物”，该药物按重量份数由以下组分组成：枇杷叶30-40份、苍术20-40份、黄芩30-40份、金银花30-40份、丹参30-40份。中国专利CN 113663036 B公开了“一种治疗面部痤疮的中药组合物”，该中药组合物根据痤疮在面部不同区域的分布，选择不同组合物的搭配形式，取得了相对好的效果，但口服中药不太方便，且显效慢，不易被大家接受；相反，祛痤疮化妆品得到了市场的青睐，但目前市场上具有明显祛痤疮效果的中药化妆品几乎为零。例如：中国专利CN106074944A公开了“一种中草药祛痘修复面膜”，所述的祛痘中药面膜是由以下重量份数计的原料药物制成：白花蛇舌草10-20份、黄连10-20份、紫草10-30份、大黄5-10份、丹参10-30份、大腹皮5-10份、荷叶10-20份、茯苓5-15份，白芷10-20份、蒲公英10-20份、连翘10-30份、赤芍5-10份、蜂蜜10-30份和防风5-10份。然而，该面膜存在有药无方，盲目堆药，杂乱无章的情况，且显效慢，连续使用9周后治愈率方可达到60.9％。因此，具有较好祛痤疮效果的中药化妆品具有广泛的市场需求。

发明内容

从中医学的角度来看，痤疮的形成病机离不开一个“郁”，即火热郁遏，痰湿郁阻，气血郁滞，終致皮肤局部气血不通，形成痤疮。本发明的目的在于针对该病因病机，研发一种对痤疮具有广谱治疗效果，即对多数证型都有较好的作用，尤其对偏热性病变效果更优的祛痘中药组合物。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种祛痘中药组合物，所述组合物按重量份数由以下组分组成：丹参2-6份，蒲公英2-5份，山楂1-5份，苍术1-4份，连翘1-6份，大黄1-4份，半夏1-5份，薄荷1-3份。

作为本发明的优选，所述组合物按重量份数由以下组分组成：丹参3份，蒲公英3份，山楂3份，苍术2份，连翘3份，大黄2份，半夏2份，薄荷1份。

本发明还提供上述祛痘中药组合物或优选祛痘中药组合物在制备祛痘护肤品中的应用。

本发明还提供一种祛痘活性复合物的制备方法，该方法利用上述祛痘中药组合物或优选祛痘中药组合物，通过粉碎，水煎煮提取，柱层析法进行分离和富集，获得祛痘活性复合物。

作为本发明的优选，所述祛痘活性复合物的制备方法包括以下步骤：

S1、按比例称取丹参、蒲公英、山楂、苍术、连翘、大黄、半夏、薄荷，混合粉碎，水煎煮提取2-3次，每次煎煮30-60min；过滤，合并煎液；

S2、所得煎液离心处理，将上清液旋转蒸发浓缩，得中药复方粗提物；

S3、将中药复方粗提物用大孔树脂柱色谱分离，用蒸馏水、10％、20％、40％、60％的乙醇作为洗脱剂进行洗脱，TLC检测各洗脱部位，合并提取液；并对各洗脱部位进行丹酚酸B的鉴定，保留含丹酚酸B部分，旋转蒸发仪浓缩到相对密度为0.2-0.3g/mL的浓缩液作为祛痘活性复合物。

作为本发明的优选，丹酚酸B采用薄层色谱鉴定，具体方法为：使用10×10cm硅胶GF254薄层板，将分离所得各洗脱部位与标准品丹酚酸B同时在硅胶GF254薄层板上点样，展开剂为乙酸乙酯：甲醇：甲酸＝4:1:0.1；置于紫外258nm下观察荧光，进行TLC分析，确定中药复方粗提物的丹酚酸B。

本发明还提供上述方法或优选方法制得的祛痘活性复合物在制备祛痘护肤品中的应用。

作为本发明的优选，所述祛痘护肤品包括面霜、乳液、精华液、洗面奶、面膜等。

本发明还提供一种祛痘护肤品，所述祛痘护肤品包括化妆品基质和采用上述方法或优选方法制得的祛痘活性复合物；其中，所述祛痘活性复合物添加量为化妆品基质的10-30％。

本发明还提供一种祛痘面霜的制备方法，该方法将采用上述方法或优选方法制得的祛痘活性复合物和面霜基质按一定比例混合搅拌，制得祛痘面霜；其中，所述祛痘活性复合物添加量为面霜基质的10-30％。

作为本发明的优选，所述祛痘面霜的制备方法包括以下步骤：

S1、取聚乙二醇400 20-40重量份、聚乙二醇4000 2-6重量份混合，50-70℃水浴加热融化，加甘油2-4重量份搅拌混合均匀，冷却到45-55℃；

S2、加祛痘活性复合物6-10重量份，搅拌，混合均匀，即得祛痘面霜。

本发明的优点和有益效果：

(1)本发明提供的中药组合物用药精简，配伍得当，经多年临床实践检验，具有祛痤疮效果，方中蒲公英、丹参清热解毒，凉血化瘀，两药合用使局部热毒清解，血液畅通，能有效改善局部红、肿、热、痛现象，共为君药。连翘能清热解毒，消肿散结；大黄凉血解毒，逐瘀通经，有抗感染作用；山楂属消食药，但有较好的行气散瘀作用，能抑菌、抗氧化、增强免疫力等药理作用，三药能协助君药增强清热解毒，散结化瘀效果，共为臣药。苍术燥湿健脾，半夏燥湿化痰，两药合用能祛湿化痰，改善局部油脂过剩状况，共为佐药。薄荷疏散风热，清利头目，疏肝行气，其性升散，有“郁而发之”之意，可引诸药作用于皮肤，且能疏肝解郁，可协助诸药解郁，为佐使药。全方寒凉并用，清化共施，针对其主要病机“郁”，既有清热祛湿，化痰消瘀之力，又有疏通气机之能，终致各种郁滞化解，痤疮消散。

(2)采用上述中药组合物制得的祛痘活性复合物中含有丹酚酸B和其它活性成分，其具有较强清除炎症因子的作用，所得复合物在细胞水平具有抑制IL-6和TNF-α炎症因子和促进抗炎细胞因子IL-10的作用，是呈现祛痘效果的作用机制之一。

(3)本发明提供的祛痘活性复合物的制备方法简单，所得复合物中含有丹酚酸B和其它活性成分，既能消炎抗菌，同时还具有清热祛湿，化痰消瘀之力和疏通气机之能；将其添加在面霜中，经痤疮患者试用表明，显效更快(1-2周)，祛痘效果更好，总有效率80％，治愈率达70％，对偏热性病变(热毒型痤疮、脾胃湿热型痤疮、肺热型痤疮)总有效率达100％，明显优于直接服用祛痘中药组合物。

(4)本发明通过控制祛痘活性复合物添加量能保证面霜质量，获得质量合格的祛痘面霜。

(5)本发明提供的祛痘面霜有祛痤疮、祛痘印、消炎、消肿的功效，起效快，效果明显，使用1-2周即可看出祛痘效果，无刺激，且制备方法简单，可直接将祛痘活性复合物添加在化妆品基质中。

附图说明

图1为丹酚酸B标准品溶液的标准曲线；

图2为随机抽取的第一位使用者使用实施例3祛痘面霜过程的对比图；

图3为随机抽取的第二位使用者使用实施例3祛痘面霜过程的对比图；

图4为随机抽取的第三位使用者使用实施例3祛痘面霜过程的对比图；

图5为自愿受试者使用对比例2祛痘面霜过程的对比图。

具体实施方式

本发明公开了一种祛痘中药组合物及应用与祛痘活性复合物的制备方法与应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进组分参数或工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明保护范围内。

以下结合附图和实施例对本申请作进一步详细说明。

本发明实施例中所涉及的主要试剂与仪器如下：

福林酚，飞净生物科技有限公司；D101大孔吸附树脂，东鸿化工有限公司；乙酸乙酯，无锡市展望化工试剂有限公司；甲醇，上海凌峰化学试剂有限公司；甲酸，上海凌峰化学试剂有限公司；无水乙醇，无锡市展望化工试剂有限公司；无水碳酸钠，国药集团化学试剂有限公司；薄层层析硅胶GF

小鼠单核巨噬细胞株(RAW264.7巨噬细胞株)购于上海生物科学研究所；DMEM高糖培养基(武汉博士德生物有限公司)；标准胎牛血清(武汉博士德生物有限公司)；脂多糖(Sigma，USA)；活性氧(ROS)试剂盒(武汉博士德生物有限公司)；IL-6PicoKine

实施例1

本实施例提供一种祛痘中药组合物，所述组合物按重量份数由以下组分组成：丹参3份，蒲公英3份，山楂3份，苍术2份，连翘3份，大黄2份，半夏2份，薄荷1份。

浙江农林大学鄢圣英主任医师具有多年的利用中药治疗痤疮的临床经验，鄢圣英老师对本发明公开的祛痘中药组合物进行了临床疗效追踪，经鄢老师多年临床实践表明，该中药组合物具有很好的治疗痤疮的效果，临床治疗过程和结果如下：

患者：面部痤疮患者305例；

疗效标准：根据皮损(粉刺、红斑、丘疹、脓疱、囊肿、结节)消退情况判定疗效。痊愈为皮损消退率≥90％；显效为皮损消退率60％～89％；好转为皮损消退率20％～59％；无效为皮损消退率＜20％。皮损消退率＝(治疗前后皮损数量差值/治疗前皮损总数量)×100％。总有效率＝(痊愈+显效)例数/总例数×100％。

用法用量：口服，将上述复方(59克)用水煎煮，煎煮液浓缩到60毫升服用，每日2次，每次30毫升；

治疗效果：总有效率为68％，痊愈为41％。

由于本实施例所述的祛痘中药组合物具有很好的治疗痤疮的效果，因此其可在制备祛痘护肤品中应用。

实施例2

本实施例提供一种祛痘活性复合物的制备方法，该方法按一定比例称取丹参(3g)、蒲公英(3g)、山楂(3g)、苍术(2g)、连翘(3g)、大黄(2g)、半夏(2g)、薄荷(1g)，混合粉碎，水煎煮提取2次，按比例第一次加水465毫升，煎煮30min；第二次加水233毫升，煎煮30min；过滤，合并煎液；将所得煎液以转速2000r/min，离心30min，将上清液旋转蒸发浓缩，得中药复方粗提物。

将中药复方粗提物用大孔树脂柱色谱分离，用蒸馏水、10％、20％、40％、60％的乙醇作为洗脱剂进行洗脱，TLC检测各洗脱部位，合并提取液，并对各洗脱部位进行丹酚酸B的鉴定和含量测定。

本实施例对酚类化合物(丹酚酸B)的鉴定和含量测定具体方式如下：

丹酚酸B的薄层色谱鉴定方法为：使用10×10cm硅胶GF

丹酚酸B的含量测定方法为：

①对照品溶液的制备：精密称取丹酚酸B对照品0.0016g于10ml容量瓶中，蒸馏水溶解并定容，得到浓度为0.16mg/ml的丹酚酸B标准品溶液，备用。

②样品溶液的制备：将柱色谱分离的所得含酚类成分(丹酚酸B)的溶液，置于旋转蒸发仪浓缩至25ml，备用。

③线性关系考察：分别精密移取丹酚酸B标准品溶液0、0.25、0.5、1.00、2.00ml于10ml容量瓶中，分别加入福林酚试剂2.5ml，摇匀，静置3min，加入3％Na

④样品的测定：精密量取0.1ml供试品溶液(样品溶液)，稀释150倍，量取1ml溶液于10ml容量瓶中，然后操作参考“③线性关系考察”，计算样品中总酚类化合物的含量，重复三次，取平均值。

实验结果见表1，吸光度的平均值为0.635，计算出祛痘活性复合物中丹酚酸B的含量为31.85％

表1祛痘活性复合物中总酚酸含量(以丹酚酸B计)

实施例3

本实施例提供一种祛痘面霜的制备方法，该方法为：取聚乙二醇400 30g、聚乙二醇40008g混合，60℃水浴加热融化，加甘油3g搅拌混合均匀，冷却到50℃加实施例2制备的祛痘活性复合物8g，搅拌，混合均匀，即得。

本实施例对祛痘面霜质量进行评价：

按照表2所示的评分标准，从面霜的外观形状、涂展性、稳定性(离心后性状、耐热耐寒程度)三方面对基质质量进行评分。总分为100分，若制得的祛痘面霜(祛痤疮面霜)评分达到70分以上，则认为制得的祛痘面霜质量较好。

①外观及形状：通过肉眼观察所制备祛痘面霜的色泽。

②涂展性：取适量祛痘面霜涂布于载玻片上，观察其涂展性。

③离心试验：取适量祛痘面霜以转速2500r/min，离心30min，观察油水分离情况。

④耐热耐寒实验：取适量祛痘面霜置于55℃干燥箱及-20℃冰箱中分别放置12h、24h，观察油水分离情况。

表2祛痘面霜质量评分标准

结果：采用实施例3的方法制得的祛痘面霜质量评分时，外观及形状20分，涂展性18分，离心后性状16分，耐热程度15分，耐寒程度15分，总分84分，超过70分以上，证明质量较好。

需要说明：制备祛痘面霜的方法并不局限于本实施例所提供的方法。在制备祛痘面霜时，还可直接将实施例2制得的祛痘活性复合物和面霜基质按一定比例混合搅拌，从而制得祛痘面霜；其中，所述祛痘活性复合物添加量为面霜基质的10-30％。

另外，参照本实施例制备祛痘面霜的方法还可制备其他祛痘护肤品，所述祛痘护肤品包括面霜、乳液、精华液、洗面奶、面膜等：制备时，可直接将祛痘护肤品的化妆品基质和实施例2制得的祛痘活性复合物混合；其中，所述祛痘活性复合物添加量为化妆品基质的10-30％。

本实施例中祛痘活性复合物添加量需要严格控制，经过试验证明，若祛痘活性复合物添加量少于上述范围，则无法达到祛痘的效果，若祛痘活性复合物添加量过多，则对祛痘面霜质量造成影响。

实施例4

实施例2制得的祛痘活性复合物抗炎作用研究：

实验细胞分组：共分为五组，空白对照组、LPS造模组、中药复方低、中、高剂量三组。空白对照组：给予正常培养液培养24h；LPS造模组：LPS(10μM)刺激24h；中药复合物(祛痘活性复合物)低、中、高组(终浓度10、20、40μM)与LPS共同培养24h。

取对数生长期的细胞，按每孔1×10

表3中药复合物对RAW264.7细胞分泌IL-6、IL-10和TNF-α的影响

注：与Control比，

由表3可以看出，中药复合物(祛痘活性复合物)给药组在细胞水平对IL-6和TNF-α炎症因子的表达呈现抑制作用,对抗炎因子IL-10表达为促进作用，且高剂量组和低剂量组跟对照组和模型组比较，差异均有显著性(P<0.05)。

实施例5

实施例3制得的祛痘面霜疗效刺激性和疗效评估

选择受试者20人，年龄在20-23岁之间、有不同程度痘痘的大学生，其中男生6人，女生14人；痤疮类型：肺热型痤疮4例，脾胃湿热型6例，热毒型5例，囊肿结节型痤疮5例；首次使用12h后观察有无红肿现象及有无痒痛感。使用为期两周，在使用期间，不得使用其他祛痘类的产品，但保持基本护肤，拍照记录每天痘痘的变化。

疗效标准：根据皮损(粉刺、红斑、丘疹、脓疱、囊肿、结节)消退情况判定疗效。痊愈为皮损消退率≥90％；显效为皮损消退率60％～89％；好转为皮损消退率20％～59％；无效为皮损消退率＜20％。皮损消退率＝(治疗前后皮损数量差值/治疗前皮损总数量)×100％。总有效率＝(痊愈+显效)例数/总例数×100％。

结果：实验筛选的20人均纳入评估，首次使用12h期间不清洗，各测试者均无不适感和红肿现象。20个受试者中，均有效果，好转率100％；且无过敏反应、红肿、痒等不适症状，其中16位受试者表示该面霜祛痘印效果明显，总有效率80％，痊愈率70％，痊愈+显效的16位证型包括肺热型痤疮4例，脾胃湿热型6例，热毒型5例，囊肿结节型痤疮1例。

本实施例随机抽取三位使用者使用过程的对比图，如图2至图4所示。由图2至图4可以看出，祛痘面霜有明显祛痤疮、祛痘印、消炎、消肿的功效。

本发明为了研究自拟方“丹蒲饮”的祛痘效果和配伍机制，对该方进行拆方研究。

对比例1

本对比例对君药(丹参+蒲公英)进行提取纯化制备祛痘活性复合物，提取制备方法和丹蒲饮(实施例2)的处理工艺一致；将二者的提取复合物分别用于制备祛痘面霜(制备工艺不变，中药提取复合物加样量不变，同实施例3)。通过自愿受试者试用证明，单独使用君药对痤疮效果不明显。

对比例2

本对比例对去除蒲公英的其他7味药(丹参+山楂+连翘+大黄+苍术+半夏+薄荷)进行提取纯化制备祛痘活性复合物，提取制备方法和丹蒲饮(实施例2)的处理工艺一致；之后将提取复合物分别用于制备祛痘面霜(制备工艺不变，中药提取复合物加样量不变，同实施例3)。通过自愿受试者试用证明，对比例2对痤疮有效果，可明显改善红肿，但祛痤疮、祛痘印效果不明显，见图5。

对比例3

本对比例对丹酚酸B对照进行研究，在面霜基质中添加丹酚酸B(百分含量为0.82％)，与丹蒲饮祛斑霜(实施例3的祛痘面霜)的丹酚酸B含量(0.83％)接近，面霜基质种类和含量不变，通过自愿受试者试用证明，在面霜基质中添加丹酚酸B有消炎消肿的功效，但祛痘效果与添加中药丹蒲饮复方相比差距较大，且不及单纯君药的试验效果，可以确定本发明祛痘面霜达到祛痘效果的活性成分不仅有丹酚酸B，其中还包括其它活性成分。

本发明在研究开发此祛痘中药组合物过程中对组方原料的选择以及配比关系做了大量实验，成功的发明了上述组方，该组方用药精简，配伍得当，针对痤疮主要病机“郁”，既有清热祛湿，化痰消瘀之力，又有疏通气机之能，终致各种郁滞化解，痤疮消散。

鉴于该祛痘中药组合物具有很好的治疗痤疮的效果，本发明还尝试利用煎煮法提取该组方中的祛痤疮功效成分，并通过柱层析法进行分离和富集，从而获得祛痘活性复合物，通过抗炎作用研究确定祛痘活性复合物具有明显抗炎作用，通过将其添加到化妆品中制备祛痘面霜，并通过祛痘面霜疗效刺激性和疗效评估可以确定，添加祛痘活性复合物的面霜具有明显的祛痤疮、祛痘印、消炎、消肿的功效，更适合治疗痤疮，其治疗效果优于直接服用实施例1的中药组合物；考虑是祛痘活性复合物中的酚酸等活性成分直接作用于皮肤后更容易被人体吸收，所以显效更快、效果更优。

另外，通过本发明提供的对比例可以看出，本发明的中药组合物中的中药饮片缺一不可，重量配比非常重要，每个组分多、少对整体治疗效果都会有一定的影响，且祛痘活性复合物的工艺流程对祛痘面霜的疗效和质量也有一定影响。