一种莓茶提取物的制备方法

技术领域

本发明涉及植物提取技术领域，尤其是涉及一种莓茶提取物的制备方法。

背景技术

莓茶，由原植物显齿蛇葡萄加工后代用茶，目前，莓茶生产上存在着原茶饮用不便、加工不便、产品附加值低的问题。以显齿蛇葡萄藤尖茎叶加工的干燥莓茶成品，藤茎纤细缠绕，体积蓬松硕大，包装运输成本高。原茶若直接饮用，泡茶时需手撕拉扯，既不卫生，又难把控茶汤比例，不易获得最佳口感效果。定量预包装小袋分装时，原茶破碎率高，粉末多，物料损耗高达20％以上；且加工技术含量低，产品单一，产业链短，制约了资源深度开发与产业延伸发展。

传统的莓茶中二氢杨梅素提取方法有“水提取法”、“醇提取法”。但是，“水提取法”提取效率低，且需偏高的能耗和较多(因重结晶过程所需)的时间成本，不利于工业化生产；醇提取法有机溶剂消耗量大，需要回收利用，提取物中存在有机溶剂残留，生产环节难以控制，且大多数的提取方法都无法精确的分离二氢杨梅素，提取的纯度较低，通常含有大量的多糖和多酚。

发明内容

本发明为了解决现有提取工艺中水提法提取效率低，且需偏高的能耗和较多的时间成本；醇提法有机溶剂消耗量大，且需要回收利用，大多数的提取方法都无法精确的分离二氢杨梅素，提供一种能耗低、时间短、过程清洁、工艺简单高效、易于工业化生产且可以精确的分离二氢杨梅素，提高二氢杨梅素的纯度的莓茶提取物的制备方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种莓茶提取物的制备方法，包括以下步骤：

S01、采摘新鲜的莓茶鲜叶，干燥处理，粉碎后置于反应容器中加入乙醇浸泡10-15min后，加入复合酶溶液，待酶解完成后超声波提取，得滤液，通过酶解与超声的协同提取，可有效提高提取效率以及总的提取率，提取条件温和，简单方便，减少了热能的消耗，通过复合酶可以同时破坏细胞之间的胞间层和细胞壁，进而破坏细胞内层，使二氢杨梅素易于萃取出来，同时提高提取率和纯度；

S02、将步骤S01中所得的滤液加入MOFs印迹材料，室温下置于水浴恒温振荡器振荡1h，离心以1000-3000rpm的搅拌速率搅拌5-15min，用0.45μm微孔滤膜过滤分离，得吸附了莓茶提取物的MOFs印迹材料；

S03、将步骤S02中所得的吸附了莓茶提取物的MOFs印迹材料加入甲醇和乙酸混合溶液，超声波辅助以3000rpm的速率离心10-15min，最后用0.45μm微孔滤膜过滤，得到含有莓茶提取物的滤液；

S04、将步骤S03中所得的滤液重复3-4次步骤S02和步骤S03，即得高纯度莓茶提取物。

优选的，所述步骤S02中的MOFs印迹材料的制备方法，包括以下步骤：

S11、将17mg的二氢杨梅素加入装有含有3mL的N,N-二甲基甲酰胺溶液的反应容器中溶解，加入10mg的甲醇和15mL的丙烯酰胺溶液预聚合2-5小时，得预聚合液体；

S12、在上述预聚合液体中加入4份的AIBME和11份的EDGMA，再加入13份的稀土-MOFs，超声脱气20-40min，充氮10-20min，在温度为60℃的条件下，恒温水浴反应24h，得半成品；

S13、将上述半成品用体积比为1:9的乙酸和甲醇混合溶液进行洗脱，接着用甲醇溶液清洗，所得的固体50-70℃真空干燥10-14h，即得，通过使用稀土-MOFs作为分子印迹材料，其管状通道丰富，分布均匀，体现出较好的吸附性能，且其中的管状通道有利于反应物的吸附和生成物的脱附。

优选的，所述步骤S12中的稀土-MOFs的制备方法，包括以下步骤：将氯化铈、亚氨基二乙酸和硝酸铝按5.2:1:1.3的比例加入去离子水中混合，待稳定后，于72℃下烘干，冷却备用，通过采用热熔法制备了铈铝MOFs材料，其吸附性能好，孔隙率高，活性中心位点多，因此吸附效率得到了显著的提高，同时也提高了有机-金属框架在水中的稳定性，增强了其化学稳定性和热稳定性，使用寿命得到了增长。

优选的，所述步骤S01中采摘的莓茶鲜叶为4-5月的嫩茎藤叶，粉碎的目数为60目。

优选的，所述步骤S01中为加入60-80％乙醇浸泡。

优选的，所述步骤S01加入复合酶溶液后于40-50℃下酶解40-50min，每20min搅拌一次。

优选的，所述步骤S01中酶解后于50-60℃使用超声波提取40-50min。

优选的，所述步骤S03中加入体积比为9:1的甲醇和乙酸。

优选的，所述步骤S01中的复合酶为果胶酶、纤维素酶和淀粉酶。

优选的，所述果胶酶、纤维素酶和淀粉酶的比例为2:3:1。

本发明相对于现有技术，有以下优点：

本申请提供的一种莓茶提取物的制备方法，通过酶法协同超声波对莓茶中的有效成分进行提取，提取条件温和，简单方便，减少了热能的消耗，提高了总黄酮的提取效率以及提取率，最后使用MOF印迹材料对二氢杨梅素进行定向选择，提高了对二氢杨梅素分离的专属选择性，提取效率高纯度高且性能稳定，并可多次重复利用。

具体实施方式

下面结合具体实施例1-3与对比例1-3说明本发明的具体技术方案：

(1)稀土-MOFs的制备

将氯化铈、亚氨基二乙酸和硝酸铝按5.2:1:1.3的比例加入去离子水中混合均匀，待溶液稳定后，放入干燥箱中于72℃下烘干，待完全干燥后，冷却备用。

(2)MOFs印迹材料的制备

将17mg的二氢杨梅素加入装有含有3mL的N,N-二甲基甲酰胺溶液的反应容器中溶解，加入10mg的甲醇和15mL的丙烯酰胺溶液预聚合2-5小时，得预聚合液体；向预聚合液体中加入4份的AIBME和11份的EDGMA，再加入13份的稀土-MOFs，超声脱气20-40min，充氮10-20min，在温度为60℃的条件下，恒温水浴反应24h，，用体积比为1:9的乙酸和甲醇混合溶液进行洗脱，接着用甲醇溶液清洗，所得的固体50-70℃真空干燥10-14h，即得。

实施例1：

S01、采摘4-5月份新鲜莓茶的嫩茎藤叶，进行干燥处理，处理至嫩茎藤叶含水量为6％时，粉碎后置于反应容器中加入60-80％乙醇浸泡10min后，加入比例为2:3:1的果胶酶、纤维素酶和淀粉酶的复合酶溶液，调节pH＝4，于40℃下酶解40min，每20min搅拌一次，待酶解完成后，于50℃使用超声波提取40min，得滤液；

S02、将步骤S01中所得的滤液按料液比5:12g/mL加入MOFs印迹材料，室温下置于水浴恒温振荡器振荡1h，离心以1000rpm的搅拌速率搅拌5min，用0.45μm微孔滤膜过滤分离，得吸附了莓茶提取物的MOFs印迹材料；

S03、将步骤S02中所得的吸附了莓茶提取物的MOFs印迹材料加入体积比为9:1甲醇和乙酸混合溶液，超声波辅助以3000rpm的速率离心10min，最后用0.45μm微孔滤膜过滤，得到含有莓茶提取物的滤液；

S04、将步骤S03中所得的滤液重复3次步骤S02和步骤S03，即得高纯度莓茶提取物。

实施例2：

S01、采摘4-5月份新鲜莓茶的嫩茎藤叶，进行干燥处理，处理至嫩茎藤叶含水量为6％时，粉碎后置于反应容器中加入70％乙醇浸泡13min后，加入比例为2:3:1的果胶酶、纤维素酶和淀粉酶的复合酶溶液，调节pH＝4，于45℃下酶解45min，每20min搅拌一次，待酶解完成后，于55℃使用超声波提取45min，得滤液；

S02、将步骤S01中所得的滤液按料液比5:12g/mL加入MOFs印迹材料，室温下置于水浴恒温振荡器振荡1h，离心以2000rpm的搅拌速率搅拌13min，用0.45μm微孔滤膜过滤分离，得吸附了莓茶提取物的MOFs印迹材料；

S03、将步骤S02中所得的吸附了莓茶提取物的MOFs印迹材料加入体积比为9:1甲醇和乙酸混合溶液，超声波辅助以3000rpm的速率离心13min，最后用0.45μm微孔滤膜过滤，得到含有莓茶提取物的滤液；

S04、将步骤S03中所得的滤液重复4次步骤S02和步骤S03，即得高纯度莓茶提取物。

实施例3：

S01、采摘4-5月份新鲜莓茶的嫩茎藤叶，进行干燥处理，处理至嫩茎藤叶含水量为6％时，粉碎后置于反应容器中加入60-80％乙醇浸泡15min后，调节pH＝4，加入比例为2:3:1的果胶酶、纤维素酶和淀粉酶的复合酶溶液，于50℃下酶解50min，每20min搅拌一次，待酶解完成后，于60℃使用超声波提取50min，得滤液；

S02、将步骤S01中所得的滤液按料液比5:12g/mL加入MOFs印迹材料，室温下置于水浴恒温振荡器振荡1h，离心以3000rpm的搅拌速率搅拌15min，用0.45μm微孔滤膜过滤分离，得吸附了莓茶提取物的MOFs印迹材料；

S03、将步骤S02中所得的吸附了莓茶提取物的MOFs印迹材料加入体积比为9:1甲醇和乙酸混合溶液，超声波辅助以3000rpm的速率离心15min，最后用0.45μm微孔滤膜过滤，得到含有莓茶提取物的滤液；

S04、将步骤S03中所得的滤液重复4次步骤S02和步骤S03，即得高纯度莓茶提取物。

对比例1：

采摘4月份新鲜莓茶的嫩茎藤叶，进行干燥处理，处理至嫩茎藤叶含水量为6％时，粉碎后置于反应容器中加入60-80％乙醇浸泡15min后，加入比例为2:3:1的果胶酶、纤维素酶和淀粉酶的复合酶溶液，调节pH＝4，于50℃下酶解50min，待酶解完成后，于60℃使用超声波提取50min，得莓茶提取物。

对比例2：

采摘4月份新鲜莓茶的嫩茎藤叶，进行干燥处理，处理至嫩茎藤叶含水量为6％时，加入60％的乙醇，先用超声波提取，提取温度为60℃，提取时间50min，后加入比例为2:3:1的果胶酶、纤维素酶和淀粉酶的复合酶溶液，调节pH＝4，于50℃下酶解50min，每20min搅拌一次，待酶解完成，过滤得莓茶提取物。

对比例3：

1)采摘4月份新鲜莓茶的嫩茎藤叶，进行干燥处理，处理至嫩茎藤叶含水量为6％时，加入60％的乙醇，于60℃使用超声波提取50min，过滤后得滤液；

2)将所得的滤液按料液比5:12g/mL加入MOFs印迹材料，室温下置于水浴恒温振荡器振荡1h，离心以3000rpm的搅拌速率搅拌15min，用0.45μm微孔滤膜过滤分离，得吸附了莓茶提取物的MOFs印迹材料；将吸附了莓茶提取物的MOFs印迹材料加入体积比为9:1甲醇和乙酸混合溶液，超声波辅助以3000rpm的速率离心15min，最后用0.45μm微孔滤膜过滤，得到含有莓茶提取物的滤液；

重复3次上述步骤2)，即得莓茶提取物。

对实施例1-3和对比例1-3中采用本申请提取方法制备所得的莓茶提取物进行检测，结果如下表1所示：

表1：实施例1-3与对比例1-3中总提取率与二氢杨梅素含量

由表1可以看出，本申请提供的一种莓茶提取物的制备方法，通过酶法协同超声波对莓茶中的有效成分进行提取，提取条件温和，简单方便，减少了热能的消耗，提高了总黄酮的提取效率以及提取率，最后使用MOF印迹材料对二氢杨梅素进行定向选择，提高了对二氢杨梅素分离的专属选择性，提取效率高纯度高且性能稳定，并可多次重复利用，对比例1中未经过MOFs印迹材料提取的总提取率以及其中所得的莓茶提取物中二氢杨梅素的含量较低，对比例2中先进行超声后酶解提取，其提取率较对比例1更低，对比例3中，未经过酶解提取的总提取率与所得的莓茶提取物中二氢杨梅素的含量均较低，因此，本申请提供的一种莓茶提取物的制备方法，通过酶法协同超声波对莓茶中的有效成分进行提取，提取条件温和，简单方便，减少了热能的消耗，提高了总黄酮的提取效率以及提取率，最后使用MOF印迹材料对二氢杨梅素进行定向选择，提高了对二氢杨梅素分离的专属选择性，提取效率高纯度高且性能稳定，并可多次重复利用。

以上所述仅为本申请的较佳实施例而已，并不用以限制本申请，凡在本申请的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。