眼部症状改善剂和眼部症状的改善方法

技术领域

本发明涉及眼部症状改善剂和眼部症状的改善方法。

背景技术

随着个人电脑、智能手机等的普及，抱怨眼疲劳(也称为眼睛疲劳、眼疲劳)和视力模糊、或与之相伴的全身疲劳(视疲劳)的人增加，越来越担心近视或散光等眼科疾病的增加。另外，随着老龄化的推进，年龄增加所引起的老花眼(也称为老花)也正在成为社会问题。因此，维持视功能并对眼部症状(眼科疾病；包括眼睛或由眼睛引起的所有毛病)进行预防、治疗、暂时矫正、改善等的需求增加。

已知将培养间充质干细胞而得到的培养上清液成分应用于眼部症状(例如参照专利文献1～3)。

专利文献1中记载了用于治疗过敏性鼻炎和花粉症中的至少一种的药物组合物，其包含通过培养永生化的永生化干细胞而得到的、含有来自永生化干细胞的分泌成分的永生化干细胞培养上清液或其分泌成分，其中永生化干细胞是牙髓干细胞或骨髓干细胞的任一种。在专利文献1的实施例中记载了：使用永生化牙髓干细胞培养上清液，将培养上清液以滴鼻剂的形式对人给药，从而改善了花粉症的眼部症状。

专利文献2中记载了白内障的抑制剂或治疗剂，其包含培养间充质干细胞而得到的培养上清液成分。在专利文献2的实施例中记载了：使用骨髓间充质干细胞作为间充质干细胞，将培养上清液成分以滴眼剂的形式对大鼠给药，改善了白内障。

专利文献3中记载了晶状体组织的硬化防止剂或治疗剂，其中包含培养间充质干细胞而得到的培养上清液成分。在专利文献3的实施例中记载了：使用骨髓间充质干细胞作为间充质干细胞，将培养上清液成分以滴眼剂的形式对大鼠给药，改善了晶状体组织的压缩回复性。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2016-210730号公报；

专利文献2：日本特开2019-156804号公报；

专利文献3：日本特开2019-156742号公报。

发明内容

发明所要解决的课题

本发明所要解决的课题在于：提供与近视、散光、老花眼、眼疲劳或视力模糊有关的新的眼部症状改善剂。

用于解决课题的手段

为了解决上述课题进行了深入研究，结果本发明人发现了：牙髓来源的干细胞的培养上清液可改善与近视、散光或老花眼有关的眼部症状(特别是视力、散光度数)，也可改善眼疲劳或视力模糊。

需要说明的是，在使用牙髓来源的干细胞的永生化细胞的专利文献1中，对近视、散光、老花眼、眼疲劳或视力模糊的改善未做研究。

在专利文献2和3中，对牙髓来源的干细胞的培养上清液未做研究。需要说明的是，在专利文献3中，虽然有关于老花眼的记载，但只研究了改善大鼠的晶状体组织的压缩回复性，没有研究实际上能将老花眼的人患者的视力改善到何种程度。

具体而言，本发明和本发明的优选构成如下。

[1]眼部症状改善剂，其是包含牙髓来源的干细胞的培养上清液或牙髓来源的干细胞的永生化干细胞的培养上清液的组合物，其用途是改善近视、散光、老花眼、眼疲劳或视力模糊的症状。

[2]根据权利要求1所述的眼部症状改善剂，其仅由牙髓来源的干细胞的培养上清液或永生化干细胞的培养上清液构成。

[3]根据[1]或[2]所述的眼部症状改善剂，其用途是改善近视，改善裸眼视力和矫正视力中的至少一种。

[4]根据[1]或[2]所述的眼部症状改善剂，其用途是改善老花眼，改善焦距33cm的视力和焦距50cm的视力中的至少一种。

[5]根据[1]～[4]中任一项所述的眼部症状改善剂，其用途是将眼部症状改善剂对出现近视、散光、老花眼、眼疲劳或视力模糊的对象进行滴眼给药。

[6]根据[5]所述的眼部症状改善剂，其对象是人。

[7]根据[5]或[6]所述的眼部症状改善剂，其中，对象是未出现白内障或青光眼的对象。

[8]根据[5]～[7]中任一项所述的眼部症状改善剂，其用途是在治疗有效期每天向对象给予1次以上的眼部症状改善剂。

[9]根据[1]～[8]中任一项所述的眼部症状改善剂，该眼部症状改善剂的用途是矫正眼部症状，

其用途是在对出现近视、散光、老花眼、眼疲劳或视力模糊的对象给予眼部症状改善剂的给药期暂时矫正对象的眼部症状。

[10]根据[9]所述的眼部症状改善剂，其用途是在给药期和从给药结束起3个月内暂时矫正对象的眼部症状

[11]眼部症状的改善方法，其包括对出现近视、散光、老花眼、眼疲劳或视力模糊的对象给予有效量的[1]～[10]中任一项所述的眼部症状改善剂。

[12]根据[11]所述的眼部症状的改善方法，其中，对象是人以外的动物。

[13]根据[11]或[12]所述的眼部症状的改善方法，该眼部症状的改善方法是眼部症状的矫正方法，

在向对象给予眼部症状改善剂的给药期暂时矫正对象的眼部症状。

[14]根据[11]～[13]中任一项所述的眼部症状的改善方法，其中，从给药期经过规定时间段后，重复设定向对象再次给予眼部症状改善剂的第2次以后的给药期。

发明效果

根据本发明，可提供与近视、散光、老花眼、眼疲劳或视力模糊有关的新的眼部症状改善剂。

附图说明

[图1]图1是显示开始给予样品后的时间与给予了实施例1或比较例1的样品的患者的左右眼的裸眼视力的平均值(以给药前的视力为100％进行计算)的关系的图。

[图2]图2是显示开始给予样品后的时间与给予了实施例1或比较例1的样品的患者的左右眼的矫正视力的平均值(以给药前的视力为100％进行计算)的关系的图。

[图3]图3是显示开始给予样品后的时间与给予了实施例1的样品的患者的左眼或右眼的散光度数的关系的图。

[图4]图4是显示开始给予样品后的时间与给予了实施例1的样品的其他患者的左眼或右眼的散光度数的关系的图。

[图5]图5是显示开始给予样品后的时间与给予了实施例1的样品的其他患者的左眼或右眼的散光度数的关系的图。

[图6]图6是显示开始给予样品后的时间与给予了实施例1或比较例1的样品的患者在焦距33cm和50cm处左右眼的裸眼视力的平均值(以给药前的视力为100％进行计算)的关系的图。

具体实施方式

以下，对本发明进行详细说明。以下记载的构成要件的说明有时是基于代表性的实施方式或具体例子提出的，但本发明并不限定于这样的实施方式。需要说明的是，本说明书中用“～”表示的数值范围是指包括“～”前后记载的数值作为下限值和上限值的范围。

[眼部症状改善剂]

本发明的眼部症状改善剂是包含牙髓来源的干细胞或其永生化干细胞的培养上清液的组合物，其用途是改善近视、散光、老花眼、眼疲劳或视力模糊的症状。

根据该构成，可提供与近视、散光、老花眼、眼疲劳或视力模糊有关的新的眼部症状改善剂。

以下，对本发明的眼部症状改善剂的优选方案进行说明。

＜眼部症状的改善＞

在本发明中，可改善眼疲劳或视力模糊，或者可改善与近视、散光或老花眼有关的眼部症状。这些之中，优选可改善近视、散光或老花眼，更优选可改善近视或老花眼。

本发明中的“改善”的范围不仅包括根治疾病的治疗，还包括即使没有根治但也使疾病暂时得到治疗或恢复、使疾病停止发展、或者与未进行治疗的情况相比使其延缓。因此，本发明中的“眼部症状的改善”不仅包括视力的恢复，还包括视力的暂时矫正、或由于眼疲劳或视力模糊而暂时恶化的视力或视野或焦点调节功能的恢复，还包括散光度数的恢复或暂时性恢复。例如，“眼部症状的改善”还包括：在本发明的眼部症状改善剂的给药期或从给药结束到某种程度的时间段为止，眼部症状(特别是视力或散光度数)暂时恢复，之后眼部症状再次回到原始状态的情况。

以下，分别对近视、散光、老花眼、眼疲劳或视力模糊的改善进行说明。

(近视的改善)

近视是指无法对焦于远焦点。

具体而言，近视是指由调节眼睛的焦点的能力减弱引起的，导致看远处时的远视视力困难的状况。眼睛的晶状体是使光折射的组织，在看远处时，晶状体周围的肌肉拉伸晶状体而使其厚度减少，反之，在想要看近处的物体时，周围的肌肉松弛，利用晶状体的弹性使厚度恢复原状，从而聚焦。

在近视的情况下，由于在视网膜的前面聚焦，所以成为无法看清的状态。近视大致分为以下两种：因角膜或晶状体的屈光率太强而发生的屈光性近视；以及因眼球的前后方向的长度即眼轴长度过长而发生的轴性近视。

屈光性近视是指不能很好地调节起到镜片作用的晶状体的厚度，在视网膜的前面对焦的状态，是由于眼睛的疲劳(视疲劳)、调节痉挛、调节紧张等，睫状体暂时麻痹，晶状体的运动恶化而引起的症状(以下，也称为“调节功能障碍”)。以往，该调节功能障碍也被称为假性近视、屈光性近视、调节紧张性近视，这些是基于一过性的调节痉挛或调节紧张的功能障碍，通过使眼睛休息或用滴眼液消除睫状体的痉挛而使晶状体的紧张状态松弛等来改善。

另一方面，轴性近视是指，由于眼轴长度较长，所以即使将晶状体调节得足够薄，也会在视网膜的前面对焦(聚焦)的状态，认为其是不可逆的，无法恢复到原来的状态。轴性近视通过抑制眼轴长度的伸长或缩短眼轴长度等来改善。

由于这些原因，特别是远处的焦点调节变得困难，导致近视。

“远视”视力被认为是在距眼睛1米以上的焦点处的视力。需要说明的是，优异的裸眼的远视视力也称为正常视力。

关于近视的发生或进展的机制尚未充分查明，即使利用眼镜或隐形眼镜进行矫正，也不存在根本的治疗方法。而且，即使利用眼镜或隐形眼镜进行矫正，有时近视也在进展。因此，优选不仅改善裸眼视力，还可改善在利用眼镜或隐形眼镜进行矫正的状态下的矫正视力。

在本发明的眼部症状改善剂为改善近视的用途的情况下，优选改善裸眼视力和矫正视力中的至少一种，更优选改善裸眼视力和矫正视力两者。

以对象的给药前的视力为100％，裸眼视力优选改善10％以上，更优选改善20％以上，特别优选改善30％以上。

以对象的给药前的视力为100％，矫正视力优选改善20％以上，更优选改善50％以上，特别优选改善100％以上。

(散光的改善)

散光是指眼睛无法对焦于点物体以在视网膜上形成对焦的图像。

散光是视觉缺陷或屈光缺陷，由于眼睛无法对焦于点物体以在视网膜上形成对焦的图像，所以该人的视觉模糊。认为散光的原因在于角膜的异常弯曲，即角膜的不均匀弯曲或非球面性(角膜曲率不是在所有方向上都相等)。完美的角膜是球面，而散光的人的角膜不是球面。换言之，角膜在一个方向上比在另一个方向上更弯曲、或者倾斜度更陡，从而图像不是集中于一点而是扩展。

通常在可矫正的散光(正交的对称的规则散光的状态)中，由于角膜变形为椭圆球状(大致橄榄球状)，因此只要仅在其曲率小的方向上通过镜片施加屈光矫正度数即圆柱度数，即可矫正视力。

然而，在角膜具有无规则性变形的角膜不规则散光或存在部分突出的圆锥角膜的情况下，镜片无法满足其不规则性，存在无法利用眼镜进行矫正或矫正视力的情况。需要说明的是，圆锥角膜是角膜因不明原因而突出的疾病。

在本发明的眼部症状改善剂为改善散光的用途的情况下，优选改善散光度数(astigmatism grade或astigmatic grade)，更优选改善裸眼视力的散光度数。散光度数优选改善1以上，更优选改善2以上，特别优选改善3以上。

(老花眼的改善)

老花眼是指无法对焦于近焦点。

具体而言，老花眼是指因调节眼睛的焦点的能力下降引起的，导致在看近处的物品时近视视力困难的状况。眼睛的晶状体是使光折射的组织，在看远处时，晶状体周围的肌肉拉伸晶状体而使其厚度减少，反之，想看近处的物体时，周围的肌肉松弛，利用晶状体的弹性使厚度恢复原状，从而聚焦。然而，在年龄增加的同时晶状体硬化而失去弹性、或者焦点从远处物体向近处物体转移所需的晶状体的前侧表面大幅弯曲，导致特别是近处的焦点调节变得困难而产生老花眼。

老花眼是年龄增加的正常和不可避免的影响，通常在40岁以后表现出最初的征兆。

特别是，往往将具有优异的裸眼下的远视视力的个人的最短焦距长的状态称为老花眼。

近视视力是指距离眼睛小于1米的焦点处的视力。需要说明的是，物体的对焦的最短焦距作为“近点”而已知。

在本发明的眼部症状改善剂为改善老花眼的用途的情况下，优选改善焦距33cm的视力和焦距50cm的视力中的至少一者，更优选改善焦距33cm的视力和焦距50cm的视力两者。

关于老花眼的对象的焦距33cm的裸眼视力，以对象的给药前的视力为100％，优选改善10％以上，更优选改善20％以上，特别优选改善30％以上。

关于老花眼的对象的焦距50cm的裸眼视力，以对象的给药前的视力为100％，优选改善10％以上，更优选改善50％以上，特别优选改善100％以上。

(眼疲劳的改善)

眼疲劳有以阅读、注视作业、观察作业等过度用眼或精神紧张为原因的眼疲劳，以及以随着个人电脑的普及而急剧增加的VDT(视觉显示终端：Visual Display Terminal)作业为原因的眼疲劳等。

作为眼疲劳的症状，例如往往还并发眼睛深处的疼痛、肩膀僵硬、头重等症状。而且，在眼疲劳很严重时，有时伴有恶心、干呕。这些症状是以睫状肌因长时间的注视作业等而陷入过度的紧张状态、眼睛的调节功能下降为主要原因引起的。

眼疲劳可以以在VDT作业1小时后测定的HFC-1值和VAS值为指标来测定，但没有限定。HFC-1值是表示对于随时间记录眼睛的屈光值时产生的调节微动，注视一定距离时的高频成分的出现频率的值。高频成分表示晶状体的振动、即睫状肌的震动，高频成分的出现频率越上升，则在睫状肌中产生越强的应力，HFC-1值越高，睫状肌就越紧张、眼睛呈疲劳状态。VAS值是在画有10cm的线的自觉症状调查表上，将感觉不到眼睛疲劳的情况设为0mm，将强烈感觉到眼睛疲劳的情况设为100mm，检查受试者感觉到的症状的程度的部位，作为自觉症状的严重程度而测定其长度(mm)，将其作为眼疲劳评分而算出的值。即，VAS值越高，眼疲劳的自觉症状评分就越高。

(视力模糊的改善)

视力模糊是指眼睛的焦点功能下降而使视野看起来模糊、或者在看近处后看远处时等对焦费时的症状。视力模糊可由过度用眼、白内障或结膜炎等炎症、随着年龄增加而发生的老花眼等原因引起。

＜眼部症状改善剂的作用机制＞

根据本发明的眼部症状改善剂，可改善由晶状体的变性引起的视功能下降(眼睛的老化、眼睛的焦点调节功能的下降等)，即近视和老花眼。因此，作为本发明的眼部症状改善剂的作用机制之一，认为可改善或暂时矫正晶状体的变性。另外，通过改善焦点调节功能，认为眼球的轴的运动变好，可改善视力模糊。

根据本发明的眼部症状改善剂，可改善由睫状体的痉挛或紧张、晶状体的紧张或运动引起的视功能下降，即屈光性近视。因此，作为本发明的眼部症状改善剂的作用机制之一，还考虑可改善眼疲劳(眼睛的疲劳)、由视疲劳、调节痉挛、调节紧张等引起的睫状体的痉挛或紧张等，可改善晶状体的紧张或运动，从而眼球的轴的运动变得良好，可改善屈光性近视。即，认为可改善屈光性近视会使眼睛不易疲劳，即还可改善眼疲劳。

另外，作为本发明的眼部症状改善剂的作用机制之一，还考虑可抑制眼轴长度的伸长、可抑制轴性近视的进展。

这里，仅改善老花眼的一部分缩瞳剂诱发睫状肌收缩的增加，诱发残留的预备性远近调节，在还保持远近调节功能的个人中牺牲远视视力以改善近视视力，仅改善老花眼。相对于此，本发明的眼部症状改善剂在可改善近视和老花眼两者而不牺牲远视视力方面优选。而且，在本发明的眼部症状改善剂可改善近视和老花眼两者的情况下，根据上述的各种作用机制，认为眼球的轴的运动变得良好，还可进一步改善眼疲劳和视力模糊。

另外，根据本发明的眼部症状改善剂，可改善散光。因此，作为本发明的眼部症状改善剂的作用机制之一，认为通过改善角膜的规则变形、无规则性的变形、部分突出以接近于球形的角膜，可改善或暂时矫正规则散光、角膜不规则散光、圆锥角膜等。

＜眼部症状改善剂的成分＞

本发明的眼部症状改善剂是包含牙髓来源的干细胞或其永生化干细胞的培养上清液的组合物。本发明的眼部症状改善剂的有效成分是牙髓来源的干细胞的培养上清液。牙髓来源的干细胞的永生化干细胞的培养上清液具有与牙髓来源的干细胞的培养上清液同样的有效成分。以下，有时对牙髓来源的干细胞的培养上清液的优选方案进行说明，但牙髓来源的干细胞的永生化干细胞的培养上清液的优选方案也相同。

本发明的眼部症状改善剂优选仅由牙髓来源的干细胞或永生化干细胞的培养上清液构成。

(牙髓来源的干细胞的培养上清液)

牙髓来源的干细胞的培养上清液优选实质上不含血清。例如，牙髓来源的干细胞的培养上清液优选血清含量为1质量％以下，更优选为0.1质量％以下，特别优选为0.01质量％以下。

-牙髓来源的干细胞-

牙髓来源的干细胞可来源于人，也可来源于人以外的动物。作为人以外的动物，可列举：与后述的给予本发明的眼部症状改善剂的对象的动物(生物种类)同样的动物，优选哺乳动物。

对用于培养上清液的牙髓来源的干细胞没有特别限定。可使用脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from exfoliated deciduous teeth)、或通过其他方法获取的乳牙牙髓干细胞、或恒牙牙髓干细胞(dental pulp stemcells；DPSC)。

牙髓来源的成体干细胞可产生血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、转化生长因子-β(TGF-β)-1和-3、TGF-α、KGF、HBEGF、SPARC、其他的生长因子、趋化因子等各种细胞因子。另外，还可产生外泌体等其他多种生理活性物质。

在本发明中，用于牙髓来源的干细胞的培养上清液的牙髓来源的干细胞特别优选为来源于含有大量蛋白的牙髓的干细胞，优选使用乳牙牙髓干细胞。即，在本发明中，优选使用乳牙牙髓干细胞的培养上清液。

用于本发明的牙髓来源的干细胞只要可实现目标处置即可，可以是天然的干细胞，也可以是基因修饰后的干细胞。

特别是，在本发明中可使用牙髓来源的干细胞的永生化干细胞。通过使用实质上可无限增殖的永生化干细胞，可使干细胞的培养上清液中所含的生物因子的量和组成长期稳定。对牙髓来源的干细胞的永生化干细胞没有特别限定。永生化干细胞优选为未癌化的永生化干细胞。牙髓来源的干细胞的永生化干细胞可通过向牙髓来源的干细胞中单独或组合添加以下的小分子化合物(抑制剂)进行培养来调制。

对TGFβ受体抑制剂没有特别限定，只要是具有抑制转化生长因子(TGF)β受体功能的作用的物质即可，例如可列举：2-(5-苯并[1,3]二氧杂环戊烯-4-基-2-叔丁基-1H-咪唑-4-基)-6-甲基吡啶、3-(6-甲基吡啶-2-基)-4-(4-喹啉基)-1-苯硫基氨基甲酰基-1H-吡唑(A-83-01)、2-[(5-氯-2-氟苯基)蝶啶-4-基]吡啶-4-基胺(SD-208)、3-[(吡啶-2-基)-4-(4-醌基)]-1H-吡唑、2-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(以上，Merck公司)、SB431542(Sigma-Aldrich公司)等。可优选列举A-83-01。

对ROCK抑制剂没有特别限定，只要是具有抑制Rho激酶(Rho-associated kinase)功能的作用的物质即可。作为ROCK抑制剂，例如可列举：GSK269962A(Axonmedchem公司)、盐酸法舒地尔(Tocris Bioscience公司)、Y-27632、H-1152(以上，富士胶片和光纯药株式会社)等。可优选列举Y-27632。

对GSK3抑制剂没有特别限定，只要是抑制GSK-3(糖原合酶激酶3：糖原合成酶3)的物质即可，可列举：A 1070722、BIO、BIO-acetoxime(以上，TOCRIS公司)等。

对MEK抑制剂没有特别限定，只要是具有抑制MEK(MAP激酶-ERK激酶)功能的作用的物质即可，例如可列举：AZD6244、CI-1040(PD184352)、PD0325901、RDEA119(BAY86-9766)、SL327、U0126-EtOH(以上，Selleck公司)、PD98059、U0124、U0125(以上，Cosmo Bio株式会社)等。

在将本发明的眼部症状改善剂用于再生医疗的情况下，从再生医疗等安全性确保法的要求出发，牙髓来源的干细胞或其永生化干细胞的培养上清液是不含除牙髓来源的干细胞以外的其他成体干细胞的方案。本发明的眼部症状改善剂可含有除牙髓来源的干细胞以外的间充质干细胞或其他成体干细胞，但优选不含这些。

作为除间充质干细胞以外的其他成体干细胞的例子，包括真皮系统、消化系统、骨髓系统、神经系统等来源的干细胞，但并不限于这些。作为真皮系统的成体干细胞的例子，包括上皮干细胞、毛囊干细胞等。作为消化系统的成体干细胞的例子，包括胰腺(全部的)干细胞、肝干细胞等。作为(间充质干细胞以外的)骨髓系统的成体干细胞的例子，包括造血干细胞等。作为神经系统的成体干细胞的例子，包括神经干细胞、视网膜干细胞等。

本发明的眼部症状改善剂可含有成体干细胞以外的干细胞，但优选不含。作为成体干细胞以外的干细胞，包括胚胎干细胞(ES细胞)、诱导多能性干细胞(iPS细胞)、胚胎癌细胞(EC细胞)。

-牙髓来源的干细胞的培养上清液的调制方法-

对牙髓来源的干细胞或其永生化干细胞的培养上清液的调制方法没有特别限定，可采用以往的方法。

牙髓来源的干细胞的培养上清液是培养牙髓来源的干细胞而得到的培养液。例如，通过在培养牙髓来源的干细胞之后分离去除细胞成分，可得到可用于本发明的培养上清液。可使用适当施行了各种处理(例如，离心处理、浓缩、溶剂置换、透析、冷冻、干燥、冷冻干燥、稀释、脱盐、保存等)的培养上清液。

用于获得牙髓来源的干细胞的培养上清液的牙髓来源的干细胞可通过常规方法选择，可根据细胞的大小或形态、或以粘附性细胞的形式选择。可从由脱落的乳牙或恒牙采集的牙髓细胞中作为粘附性细胞或其传代细胞来选择。在牙髓来源的干细胞的培养上清液中，可使用培养所选择的干细胞而得到的培养上清液。

需要说明的是，“牙髓来源的干细胞的培养上清液”优选为不含培养牙髓来源的干细胞等而得到的细胞本身的培养液。本发明中使用的牙髓来源的干细胞的培养上清液在其一个方案中优选作为整体不含细胞(不论细胞的种类如何)。根据该特征，该方案的组合物与牙髓来源的干细胞本身的区别自不必说，与含有牙髓来源的干细胞的各种组合物也明确地区别开来。该方案的典型例子是不含牙髓来源的干细胞、而仅由牙髓来源的干细胞的培养上清液构成的组合物。

本发明中使用的牙髓来源的干细胞的培养上清液可包含乳牙牙髓来源的干细胞和成人牙髓来源的干细胞这两者的培养上清液。本发明中使用的牙髓来源的干细胞的培养上清液优选包含乳牙牙髓来源的干细胞的培养上清液作为有效成分，更优选包含50质量％以上，优选包含90质量％以上。本发明中使用的牙髓来源的干细胞的培养上清液更特别优选为仅由乳牙牙髓来源的干细胞的培养上清液构成的组合物。

用于得到培养上清液的牙髓来源的干细胞的培养液可使用基础培养基、或在基础培养基中添加了血清等的培养液等。需要说明的是，作为基础培养基，除Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)以外，还可使用Iscove改良Dulbecco培养基(IMDM)(GIBCO公司等)、HamF-12培养基(HamF12)(SIGMA公司、GIBCO公司等)、RPMI1640培养基等。另外，作为可添加在培养基中的成分的例子，可列举：血清(胎牛血清、人血清、羊血清等)、血清替代品(Knockout serumreplacement(KSR：敲除血清替代品)等)、牛血清白蛋白(BSA)、抗生素、各种维生素、各种矿物质。

然而，为了调制不含血清的“牙髓来源的干细胞的培养上清液”，关于贯穿整个过程或最后或从最后起若干次的传代培养，可使用无血清培养基。例如，通过用不含血清的培养基(无血清培养基)培养牙髓来源的干细胞，可调制不含血清的牙髓来源的干细胞的培养上清液。通过进行一次或多次的传代培养，最后或从最后起若干次用无血清培养基进行传代培养，也可得到不含血清的牙髓来源的干细胞的培养上清液。另一方面，通过利用透析或基于柱的溶剂置换等从回收的培养上清液中去除血清，也可获得不含血清的牙髓来源的干细胞的培养上清液。

在用于获得培养上清液的牙髓来源的干细胞的培养中，可直接应用通常采用的条件。关于牙髓来源的干细胞的培养上清液的调制方法，优选根据干细胞的种类适当调整干细胞的分离和选择步骤。本领域技术人员可根据牙髓来源的干细胞的种类适当进行牙髓来源的干细胞的分离和选择。在培养牙髓来源的干细胞的情况下，优选使用培养箱在例如温度37℃、5％ CO

＜其他成分＞

本发明的眼部症状改善剂除了包含牙髓来源的干细胞的培养上清液，还可根据给药对象动物的种类或目的，在不损及本发明效果的范围内含有其他成分。作为其他成分，可列举：营养成分、抗生素、细胞因子、保护剂、载体、赋形剂、崩解剂、缓冲剂、pH调节剂、乳化剂、助悬剂、镇痛剂、稳定剂、保存剂、防腐剂等。另外，作为其他成分，可列举：滴眼药中通常含有的成分。

作为营养成分，例如可列举：脂肪酸等、维生素等。

作为抗生素，例如可列举：青霉素、链霉素、庆大霉素等。

作为载体，可列举：作为药学上可接受的载体而已知的材料。

本发明的眼部症状改善剂可以是牙髓来源的干细胞的培养上清液本身，也可以是进一步含有药学上可接受的载体或赋形剂等的药物组合物。药物组合物的目的在于促进对给药对象给予牙髓来源的干细胞的培养上清液。

药学上可接受的载体优选为不会在给药对象中引起显著的刺激性、不会抑制所给予的化合物的生物学活性和特性的载体(包括稀释剂)。载体的例子为：丙二醇；(生理)盐水；乳液；缓冲液；培养基，例如DMEM或RPMI等；含有去除自由基的成分的低温保存培养基。

本发明的眼部症状改善剂可包含以往已知的眼部症状改善剂的有效成分。本领域技术人员可根据用途或给药对象等进行适当变更。

另一方面，本发明的眼部症状改善剂优选不含规定的物质。

例如，本发明的眼部症状改善剂优选不含牙髓来源的干细胞。牙髓来源的干细胞的培养上清液优选为从回收的培养液中去除了牙髓来源的干细胞后的培养上清液。牙髓来源的干细胞的培养上清液中还包含：从牙髓来源的干细胞的培养上清液中进一步去除了残留培养基成分(培养前的培养液成分中的残留于培养后的培养液中的成分)、培养液的水分等无助于眼部症状改善的成分的至少一部分后的培养上清液。

另外，本发明的眼部症状改善剂可包含MCP-1或其他细胞因子。作为其他细胞因子，可列举：日本特开2018-023343号公报的[0014]～[0020]中记载的细胞因子等。

另外，本发明的眼部症状改善剂可包含Siglec-9或其他唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素。

需要说明的是，本发明的眼部症状改善剂优选实质上不含血清(胎牛血清、人血清、羊血清等)。另外，本发明的眼部症状改善剂优选实质上不含敲除血清替代品(KSR)等现有的血清替代品。

本发明的眼部症状改善剂优选上述其他成分的含量(固体成分量)均为1质量％以下，更优选为0.1质量％以下，特别优选为0.01质量％以下。

＜眼部症状改善剂的制造方法＞

对本发明的眼部症状改善剂的制造方法没有特别限定。

可按照上述方法调制牙髓来源的干细胞的培养上清液，以调制眼部症状改善剂。

对本发明的眼部症状改善剂的最终形态没有特别限定。例如，本发明的眼部症状改善剂可列举：将牙髓来源的干细胞的培养上清液填充至容器而成的形态；将牙髓来源的干细胞的培养上清液冷冻和/或干燥成固体后，制成制剂或填充至容器而成的形态等。作为容器，例如可列举：适合冷冻保存的管、离心管、袋、滴眼容器等。冷冻温度例如可设为-20℃～-196℃。

＜用途＞

本发明的眼部症状改善剂优选为在治疗有效期对出现近视、散光或老花眼的对象进行给药的用途。本发明的眼部症状改善剂更优选为在治疗有效期每天对出现近视、散光或老花眼的对象给药1次以上的用途。

另外，本发明的眼部症状改善剂优选为眼部症状矫正用途。更优选为在对出现近视、散光或老花眼的对象给予眼部症状改善剂的给药期暂时矫正对象的眼部症状的用途。

本发明的眼部症状改善剂特别优选为在给药期和给药结束后2个月内暂时矫正对象的眼部症状的用途，更特别优选为在给药期和给药结束后3个月内暂时矫正对象的眼部症状的用途。

本发明的眼部症状改善剂包含牙髓来源的干细胞的培养上清液，故也用于修复医疗用途。特别是牙髓来源的干细胞的培养上清液优选用于修复医疗用途。这里，已知在以干细胞移植为前提的再生医疗中，干细胞并不是再生的主角，而是干细胞产生的液体成分与自身的干细胞一起修复脏器。以往的干细胞移植所伴随的癌化、标准化、给药方法、保存性、培养方法等难题得到解决，通过牙髓来源的干细胞的培养上清液可进行修复医疗。与干细胞移植相比，在使用牙髓来源的干细胞的培养上清液的修复中没有移植细胞，所以不易发生肿瘤化等，可谓是更安全。另外，牙髓来源的干细胞的培养上清液具有可使用固定标准化的品质的培养上清液的优点。可大量生产或选择有效的给药方法，因此可低成本地用于广泛的疾病。所给予的牙髓来源的干细胞的培养上清液在体内循环，若发现受损组织，则通过归巢效应激活干细胞本身进行修复再生。进一步刺激脑垂体，使激素平衡健全化，新陈代谢周期如原来一样代谢亢进。

[眼部症状的改善方法]

本发明的眼部症状的改善方法包括：对出现近视、散光或老花眼的对象给予有效量的本发明的眼部症状改善剂。

＜给药方法＞

对出现近视、散光或老花眼的对象给予本发明的眼部症状改善剂的步骤没有特别限定。

给药方法可列举：对眼睛进行滴眼或使用软膏、向口腔、鼻腔或呼吸道喷雾或吸入、点滴、局部给药、滴鼻药等，优选侵袭少。本发明中，优选对出现近视、散光或老花眼的对象进行滴眼给药。

对给药次数和给药间隔没有特别限定。给药次数可设为每周1次以上，优选为5次以上，更优选为6次以上，特别优选为7次以上。给药间隔优选为1小时～1周，更优选为半天～1周，特别优选为1天(每天1次)或更高的频率。然而，可根据给药对象的生物种类或给药对象的症状适当调整。

本发明的眼部症状改善剂优选为在治疗有效期每天对出现近视、散光或老花眼的对象进行1次以上的给药的用途。在给药对象为人的情况下，优选每周的给药次数多，优选在治疗有效期每周给药5次以上，优选每天给药。

在使用一般浓度的牙髓来源的干细胞的培养上清液的情况下，对人的给药量优选为每只眼睛为0.01～5ml，更优选为0.02～1ml，更特别优选为0.03～0.07ml(约1滴)。可根据给药对象的症状适当调整。

＜给药期＞

本发明的眼部症状的改善方法优选为眼部症状(优选视力或散光度数，更优选视力)的矫正方法。本发明中，优选在向对象给予眼部症状改善剂的给药期暂时矫正对象的眼部症状(优选视力或散光度数，更优选视力)。

本发明的眼部症状改善剂优选治疗有效期为从开始给药起1个月以上，优选为2个月以上，特别优选为3个月以上。在治疗有效期的期间，优选近视、散光或老花眼的改善程度缓慢提高。在近视、散光或老花眼的改善程度不再进一步提高后(治疗有效期后)，可直接设定继续给予本发明的眼部症状改善剂的给药期，可一时中断给药。在治疗有效期后，通过直接设定给药期，可长期维持眼部症状的改善程度高的状态。

在给药期结束后，即一时中断给药后，可根据对象的需求向对象再次给予眼部症状改善剂。

从中断给药期后到开始向对象再次给予眼部症状改善剂的第2次以后的给药期为止的中断期可根据对象的体质、眼部症状的改善程度、需求适当设定。对中断期没有特别限定。通过在治疗有效期之后设定中断期，在中断期眼部症状的改善程度从高的状态慢慢变成低的状态，眼部症状(特别是视力或散光度数)的改善程度依情况会回到零。

这里，将从给药期结束到眼部症状的改善程度回到零的时间段作为矫正有效期。矫正有效期根据对象的症状、体质、眼部症状的改善程度而不同。例如，老花眼对象的矫正有效期比近视对象长。

中断期优选为眼睛症状的改善程度回到零之前。即，优选在矫正有效期的期间结束中断期。

本发明的眼部症状的改善方法优选从给药期经过规定的中断期后重复设定向对象再次给予眼部症状改善剂的第2次以后的给药期。更优选给药期后矫正有效期的期间重复设定向对象再次给予眼部症状改善剂的第2次以后的给药期。

＜给药对象＞

对待给予本发明的眼部症状改善剂的对象动物(生物种类)没有特别限定。待给予本发明的眼部症状改善剂的对象动物优选为哺乳动物、鸟类(鸡、鹌鹑、鸭等)、鱼类(鲑鱼、鳟鱼、金枪鱼、鲣鱼等)。作为哺乳动物，可以是人，也可以是非人哺乳动物。作为非人哺乳动物，更优选为牛、猪、马、山羊、绵羊、猴、狗、猫、小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠。

本发明的眼部症状改善剂优选给药对象为人。

另一方面，本发明的眼部症状的改善方法中，给药对象可以是人或人以外的动物的任一种，给药对象优选为人以外的动物。

本发明的眼部症状改善剂或眼部症状的改善方法可以是对出现了除近视、散光和老花眼以外的其他眼病的对象给药，也可以是对未患其他眼病的对象给药。在本发明的一个优选方案中，优选给药对象是未患白内障或青光眼的对象。

本发明的眼部症状改善剂可与以往已知的眼部症状改善剂并用。

实施例

以下，列举实施例和比较例，以进一步具体地说明本发明的特征。以下的实施例中所示的材料、用量、比例、处理内容、处理顺序等只要不脱离本发明的宗旨即可，可适当变更。因此，本发明的范围不应由以下给出的具体例限定性地解释。

[实施例1、比较例1]

＜牙髓来源的干细胞的培养上清液的调制＞

调制了DMEM培养液。

使用DMEM培养基代替DMEM/HamF12混合培养基，此外，依据日本专利第6296622号的实施例6中记载的方法，在DMEM培养液中接种人乳牙牙髓来源的干细胞，培养牙髓来源的干细胞，分离收集培养上清液。

以所调制的牙髓来源的干细胞的培养上清液作为实施例1的眼部症状改善剂样品。

另外，以DMEM培养液作为比较例1的样品，并用作对照。

＜近视的改善的评价(1)＞

在未患白内障和青光眼的26名成人近视患者中，，18名滴加实施例1的眼部症状改善剂样品，8名滴加比较例1的样品，每天早晨向两眼各滴加1滴(约0.05ml)。治疗期设为给药开始起3个月。

在给药前、给药开始起2周后(2W)、1个月后(1M)、2个月后(2M)、3个月后(3M)、3个月的给药结束起又1个月后(给药后1M)、给药结束起又3个月后(给药后3M)，测定各患者的左右眼的视力(eyesight)。

对于给予实施例1的眼部症状改善剂样品的18名患者，以给药前的视力(preeyesight)为100％，计算左右眼的裸眼视力的平均值。同样地，对于给予比较例1的样品的8名患者，以给药前的视力为100％，计算左右眼的裸眼视力的平均值。所得结果见图1。

由图1可知：在给予实施例1的眼部症状改善剂样品的情况下，与给予作为DMEM培养液的比较例1的样品的情况相比，裸眼视力显著改善。另外，还可知：作为在对近视的对象给药的给药期和从给药结束起3个月后暂时矫正对象的眼部症状(特别是视力)的用途特别有用。进一步可知：在对近视的对象给药的情况下，与给药结束起又1个月后(给药后1M)或给药结束起又3个月后(给药后3M)相比，给药期(给药期即将结束前)眼部症状的改善程度提高。

＜近视的改善的评价(2)＞

在测定了裸眼视力的26名患者中，对于用眼镜矫正的10名也同时期测定了矫正视力(corrected eyesight)。具体而言，测定了给予实施例1中调制的眼部症状改善剂样品的患者中的8名的矫正视力和给予比较例1中调制的样品的患者中的2名的矫正视力。

对于给予了实施例1的眼部症状改善剂样品的8名患者，以给药前的视力为100％，计算左右眼的基于眼镜的矫正视力的平均值。同样地，对于给予了比较例1的样品的2名患者，以给药前的视力为100％，计算左右眼的基于眼镜的矫正视力的平均值。所得结果见图2。

由图2可知：与给予作为DMEM培养液的比较例1的样品的情况相比，在给予实施例1的眼部症状改善剂样品的情况下矫正视力显著改善。另外，由图2还可知：作为在对近视的对象给药的给药期和从给药结束起3个月后暂时矫正对象的眼部症状(特别是视力)的用途特别有用。进一步可知：在对近视的对象给药的情况下，与给药结束起又1个月后(给药后1M)或给药结束起又3个月后(给药后3M)相比，给药期(给药期即将结束前)眼部症状的改善程度提高。

由以上可知：本发明的眼部症状改善剂可改善近视，可改善裸眼视力和矫正视力两者。

[实施例2]

＜散光的改善的评价＞

在测定了裸眼视力的26名患者中，对于3名散光患者，在同时期还测定了散光度数(astigmatism grade或astigmatic grade)。具体而言，在给予了实施例1中调制的眼部症状改善剂样品的患者中，以裸眼测定了3名的散光度数。关于各患者的右眼和左眼，各自得到的结果见图3～5。

由图3～5可知：在给予实施例1的眼部症状改善剂样品的情况下，散光有所改善。另外，由图3～5可知：作为在对散光的对象给药的给药期和从给药结束起2个月后暂时矫正对象的眼部症状(特别是散光度数)的用途特别有用。进一步可知：在对散光的对象给药的情况下，在给药期(给药期即将结束前)和从给药结束起又1个月后(给药后1M)或从给药结束起又2个月后(给药后2M)，散光的改善程度相同。

[实施例3]

＜老花眼的改善的评价＞

在测定了裸眼视力的26名患者中，对于14名40岁以上的老花眼患者，在同时期还进行了老花眼的评价。具体而言，在给予了实施例1中调制的眼部症状改善剂样品的患者中，以裸眼测定14名的焦距为33cm和50cm的视力。以给药前的视力(pre eyesight)为100％，计算左右眼的裸眼视力的平均值。所得结果见图6。

由图6可知：在给予实施例1的眼部症状改善剂样品的情况下，老花眼显著改善。即，本发明的眼部症状改善剂可改善老花眼，可改善焦距33cm的视力和焦距50cm的视力两者。另外，由图6还可知：作为在对老花眼的对象给药的给药期和从给药结束起3个月后暂时矫正对象的眼部症状(特别是视力)的用途特别有用。进一步可知：在对散光的对象给药的情况下，与给药结束起又1个月后(给药后1M)或给药结束起又3个月后(给药后3M)相比，给药期(给药期即将结束前)眼部症状的改善程度提高。

另一方面，可知：与图1和图2所示的暂时矫正近视对象的视力的情况下的结果相比，在图6所示的暂时矫正老花眼对象的视力的情况下，在给药结束后1个月后(给药后1M)或给药结束后3个月后(给药后3M)，视力的改善程度的消退缓慢。即，可知：与对近视的对象给药相比，对老花眼的对象给药可长期保持眼部症状改善剂的效果(视力的暂时矫正)。因此，可知：本发明的眼部症状改善剂特别是在暂时矫正老花眼对象的视力的情况下，作为在对老花眼对象给药的给药期和给药结束后3个月后暂时矫正对象的眼部症状(特别是视力)的用途非常有用。

如图1、图2和图6所示，本发明的眼部症状改善剂可改善近视和老花眼两者，因此考虑其作用机制，认为可改善睫状体的痉挛或紧张、晶状体的紧张或运动、晶状体的变形或眼睛的焦点调节功能，从而眼球的轴的运动变得良好。可改善睫状体的痉挛或紧张、晶状体的紧张或运动、晶状体的变性或眼睛的焦点调节功能，从而眼球的轴的运动变得良好，认为这可进一步改善眼疲劳或视力模糊。

除了使用脂肪来源的干细胞以外，与本申请说明书的实施例1(牙髓来源的干细胞的培养上清液的调制)同样地操作，调制了脂肪来源的干细胞的培养上清液。

(1)近视的改善的评价

对于3名未患白内障和青光眼的成人近视患者(25岁的患者A、30岁的患者B、50岁的患者C)，分别对右眼滴加实施例1的眼部症状改善剂样品(牙髓来源的干细胞的培养上清液)，对左眼滴加比较例A的样品(脂肪来源的干细胞的培养上清液)，每天早晨1次，滴加1滴(约0.05ml)。治疗期为给药开始起3个月。

在给药前(pre)、给药开始起1个月后(1M)、2个月后(2M)、3个月后(3M)测定3名患者的左右眼的裸眼的视力(eyesight)。

另外，对于佩戴隐形眼镜的25岁的患者A和30岁的患者B，也同样测定了左右眼的矫正视力。

以各患者的给药前的视力(pre eyesight)为100％，分别计算右眼和左眼的裸眼视力或矫正视力。所得结果见下表。

[表1]

[表2]

[表3]

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[表4]

[表5]

由以上的表可知：与给予脂肪来源的干细胞的培养上清液即比较例1的样品的情况相比，在给予实施例1的眼部症状改善剂样品(牙髓来源的干细胞的培养上清液)的情况下，近视显著改善。

(2)老花眼的改善的评价

在3名患者中，对于还出现了老花眼的30岁的患者B和50岁的患者C也同样测定了左右眼的焦距33cm的视力(30岁的患者B的裸眼视力、50岁的患者C的矫正视力)。以各患者的给药前的视力(pre eyesight)为100％，分别计算右眼和左眼的裸眼视力或矫正视力。所得结果见下表。

[表6]

[表7]

由以上的表可知：与给予脂肪来源的干细胞的培养上清液即比较例1的样品的情况相比，在给予实施例1的眼部症状改善剂样品(牙髓来源的干细胞的培养上清液)的情况下，老花眼显著改善。