一种抑制西藏高原拉萨裸裂尻鱼水霉菌的抑菌剂

技术领域

本发明属于水产领域，尤其是涉及一种抑制西藏高原拉萨裸裂尻鱼水霉菌的抑菌剂。

背景技术

裸裂尻鱼属(Schizopygopsis)，俗称土鱼，为无鳞鱼，是西藏高原重要的土著经济鱼类之一，属于冷水性鱼类，主要分布在雅鲁藏布江中上游干、支流及其附属水体，为我国特有种。西藏高原拉萨裸裂尻鱼养殖水温一般在20℃以内，水霉易在较低温度爆发。并且鱼类养殖过程中易爆发寄生虫，寄生虫滋生造成鱼体受损，导致水霉病爆发。

油橄榄叶是油橄榄的干燥叶，数量巨大，属于废弃物和副产物，过去研究表明叶中含有橄榄苦苷、黄酮和多酚等多种生物活性物质，其中羟基酪醇(Hydroxytyrosol，HT)可以通过橄榄苦苷经过转化得到，是油橄榄中的简单酚类化合物，具有抗菌消炎、扩张血管、防止动脉粥样硬化、抗癌、抗氧化和抑制血小板凝集等作用。

橄榄苦苷是一种无毒、易被人体吸收的苯酚类裂环环烯醚帖苷化合物，有清除超氧阴离子自由基、过氧化氢、NO·和过氧亚硝基阴离子的能力，还有抗癌、抗血栓、预防动脉硬化和神经保护等作用。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在克服现有技术中的缺陷，提出一种抑制西藏高原拉萨裸裂尻鱼水霉菌的抑菌剂。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种抑制西藏高原拉萨裸裂尻鱼水霉菌的抑菌剂，该抑菌剂包含质量百分比为1-10％的油橄榄提取物。

优选的，所述的抑菌剂包含质量百分比为3-8％的油橄榄提取物。

进一步，所述的油橄榄提取物为质量比为1：0.1-10的羟基酪醇与橄榄苦苷。

优选的，所述的油橄榄提取物为质量比为1：0.5-8的羟基酪醇与橄榄苦苷。

优选的，所述的油橄榄提取物为质量比为1：0.8-5的羟基酪醇与橄榄苦苷。

进一步，所述的羟基酪醇由包括如下步骤的方法制：将油橄榄叶干燥后粉碎成粉末，将粉末加入到0.1-0.2mol/L的盐酸溶液中，水浴加热2-5小时后，调节溶液pH值至中性，然后过滤即成。

进一步，所述的水浴加热的温度为40-60℃；所述的粉末与盐酸溶液的固液比为1:30-60。

进一步，所述的橄榄苦苷由包括如下步骤的方法制：将油橄榄叶干燥后粉碎成粉末，将粉末加入到10-20倍量的浓度为60-80％的乙醇中，在30-60℃下水浴加热提取1-3小时，提取完成后过滤即得。

所述的抑菌剂的应用，所述的抑菌剂在制备具有抑菌效果的饲料中的应用。

所述的抑菌剂的应用，所述的抑菌剂在制备治疗水霉病的药物中的应用。

相对于现有技术，本发明具有以下优势：

本发明所述的一种抑制西藏高原拉萨裸裂尻鱼水霉菌的抑菌剂采用油橄榄提取物中的羟基酪醇与橄榄苦苷进行结合，抑菌效果显著，尤其是对水霉菌具有优异的抑菌效果，可用于西藏高原拉萨裸裂尻鱼水霉病的治疗。

具体实施方式

除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下面结合实施例来详细说明本发明。

实施例1油橄榄提取物的制备

称量100g油橄榄叶干燥后粉碎成粉末，将粉末加入到4L浓度为0.12mol/L的盐酸溶液中，50℃水浴加热2小时后，调节溶液pH值至中性，然后过滤后得到羟基酪醇。

称量100g油橄榄叶干燥后粉碎成粉末，将粉末加入到20倍量的浓度为80％的乙醇中，在45℃下水浴加热提取2小时，提取完成后过滤即得橄榄苦苷。

称量10g羟基酪醇与10g橄榄苦苷混合均匀后得到油橄榄提取物A。

称量10g羟基酪醇与40g橄榄苦苷混合均匀后得到油橄榄提取物B。

称量0.5g羟基酪醇与10g橄榄苦苷混合均匀后得到油橄榄提取物C。

称量10g羟基酪醇与0.5g橄榄苦苷混合均匀后得到油橄榄提取物D。

称量10g羟基酪醇得到油橄榄提取物E。

称量10g橄榄苦苷得到油橄榄提取物F。

实施例2抑菌剂的制备

称量5g油橄榄提取物A与100g常规抑菌剂进行混合，得到抑菌剂A。

称量5g油橄榄提取物B与100g常规抑菌剂进行混合，得到抑菌剂B。

称量5g油橄榄提取物C与100g常规抑菌剂进行混合，得到抑菌剂C。

称量5g油橄榄提取物D与100g常规抑菌剂进行混合，得到抑菌剂D。

称量5g油橄榄提取物E与100g常规抑菌剂进行混合，得到抑菌剂E。

称量5g油橄榄提取物F与100g常规抑菌剂进行混合，得到抑菌剂F。

称量0.5g油橄榄提取物A与100g常规抑菌剂进行混合，得到抑菌剂G。

称量15g油橄榄提取物A与100g常规抑菌剂进行混合，得到抑菌剂H。

实施例3抑菌剂的抑菌效果

试验菌培养：将水霉菌菌株活化，接种于固体培养基上，在15℃培养24h后，挑取单个菌落，接种到营养肉汤培养基上震荡培养24h。采用平板计数法将菌液稀释到合适浓度，菌液浓度为1×101CFU/mL。

在不同的试管中加入抑菌剂A、抑菌剂B、抑菌剂C、抑菌剂D、抑菌剂E、抑菌剂F、抑菌剂G、抑菌剂H与常规抑菌剂，不加组合物作为空白对照，不加细菌作为阴性对照，每个重复3次。置15℃摇床中震荡(180r/min)培养24h，抑菌圈直径及抑菌等级如表1所示。结果判断标准按《中药药理学》介绍的标准：抑菌圈≥20mm，属于极敏；抑菌圈15-19mm属于高敏；抑菌圈10-14mm属于中敏；抑菌圈小于10mm，属于低敏；没有抑菌圈，属于不敏(无抑菌效果)。

表1抑菌圈直径及抑菌等级

上述表中，“+++”表示极敏，“++”表示高敏，“+”表示中敏或低敏，“－”表示不敏(无抑菌效果)。

由表1可以看出，抑菌剂A-抑菌剂H均对水霉菌起到了抑菌效果，其中抑菌剂A与抑菌剂B对水霉菌的抑菌等级为极敏，表明包含质量比为1：0.1-10的羟基酪醇与橄榄苦苷的油橄榄提取物且上述油橄榄提取物的抑菌剂对水霉菌有显著的抑菌效果，单独采用羟基酪醇或橄榄苦苷作为抑菌成分均与上述的抑菌效果有显著的差距。

实施例4抑菌剂对于西藏高原拉萨裸裂尻鱼水霉菌的影响

称量100g油橄榄叶干燥后粉碎成粉末，将粉末加入到4L浓度为0.12mol/L的盐酸溶液中，50℃水浴加热2小时后，调节溶液pH值至中性，然后过滤后得到羟基酪醇。

称量100g油橄榄叶干燥后粉碎成粉末，将粉末加入到20倍量的浓度为80％的乙醇中，在45℃下水浴加热提取2小时，提取完成后过滤即得橄榄苦苷。

称量10g羟基酪醇与10g橄榄苦苷混合均匀后得到油橄榄提取物A。

称量10g羟基酪醇与60g橄榄苦苷混合均匀后得到油橄榄提取物B。

称量10g羟基酪醇与2g橄榄苦苷混合均匀后得到油橄榄提取物C。

称量5g油橄榄提取物A与100g常规抑菌剂进行混合，得到抑菌剂A。

称量5g油橄榄提取物A与100g常规抑菌剂进行混合，得到抑菌剂B。

称量5g油橄榄提取物A与100g常规抑菌剂进行混合，得到抑菌剂C。

称量5g油橄榄提取物A与100g常规抑菌剂进行混合，得到抑菌剂D。

称量10g油橄榄提取物A与100g常规抑菌剂进行混合，得到抑菌剂E。

称量100g常规抑菌剂作为对照组。

2020年4-5月，从野外收购西藏土著鱼类7000余尾，挑选出用于繁殖的亲本后，剩余鱼用于做水霉抑菌效果试验；试验在宽2m×长10m×深0.5m水泥池中进行，实验前暂养7d，待鱼稳定后开始试验(暂养7d后因鱼运输及挑选造成机械损伤，95％以上鱼体表均有水霉)，选取其中600尾作为试验鱼，均分为6组，分别投加抑菌剂A、抑菌剂B、抑菌剂C、抑菌剂D、抑菌剂E与对照组，用药期间进排水关闭，用药后将药水排掉再注入新水。统计各实验组死亡率、水霉治愈率及用药7d后水霉复发率，结果见表2。

表2抑菌剂对于西藏高原拉萨裸裂尻鱼水霉菌的结果

由表2可知，抑菌剂A对于西藏高原拉萨裸裂尻鱼水霉菌具有突出的抑制效果，其死亡率、治愈率与复发率均显著，表明包含质量比为1：0.8-5的羟基酪醇与橄榄苦苷的油橄榄提取物且含有3-8％上述油橄榄提取物的抑菌剂对水霉菌有显著的抑菌效果。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。