一种基于生物素-亲和素系统双检测线免疫层析试纸条半定量检测黄曲霉毒素B1的制备

技术领域

本发明涉及一种基于生物素-亲和素系统双检测线免疫层析试纸条半定量检测黄曲霉毒素B1的的制备方法。

背景技术

黄曲霉毒素是真菌毒素的一种，是目前已知的最强的三大化学致癌物之一，目前，黄曲霉毒素的检测方法主要有理化检测法和快检免疫检测法，理化检测主要有 HPLC、HPLC-MS、TLC等，检测灵敏度高，比较普及且成熟，检测成本高; 快检免疫检测法主要有ELISA法、胶体金免疫层析法和量子点荧光免疫层析法等，操作简便，省时省力，成本较低，结果直观且适用于现场筛查。免疫层析法是近年来用于快速检验及诊断的新技术，快检主要优势在于其技术简单，操作简便，用时较少，省时省力，节省检测成本，相对HPLC 法等方法来说，仪器设备要求较少，价格低廉，检测结果直观，可用于现场检测。

发明内容

发明本发明涉及一种基于生物素-亲和素系统双检测线免疫层析试纸条半定量检测黄曲霉毒素B1的制备方法。

一种基于生物素-亲和素系统双检测线免疫层析试纸条半定量检测黄曲霉毒素B1的的制备方法，其步骤如下：

所述的的亲和素化柱状纳米金材料的制备：先将 0.3-0.4 g 0.2 mol/L 的季铵盐类化合物与0.001 mol/L 5.00 mL的氯金酸水溶液室温下充分混合，加入0.01 mol/L0.90 mL的碱性溶液，反应5 min，生成种子，然后将0.3 g 0.2 mol/L氯化季铵盐加入0.04mol/L 0.10 m的盐溶液与0.001 mol/L 1-10 mL的氯金酸混合液，再加入浓度为 0.0788mol/L 0.10 mL的抗坏血酸水溶液，然后将得到的0.01-0.05 ml的种子液加入该溶液反应1-5 min，室温下恒温静置24 h后以14000 r/min 的转速离心，然后将6 ml亲和素(1-5×10

所述的生物素化抗AFB

所述的基于生物素-亲和素系统金标探针的制备：利用生物素和亲和素之间高特异性亲和力以及多级放大效应，可提高免疫结合和示踪分析的灵敏度。生物素与亲和素之间的结合力可达1015mol L

所述的免疫层析试纸条的制备：通过将亲和素与柱状纳米金共价结合作为标记探针，采用共价偶联的方式连接生物素与抗黄曲霉毒B1单克隆抗体结合的聚合物形成偶联物然后喷到玻璃纤维素膜上，将抗原1与抗原2和羊抗鼠 IgG 分别包被硝酸纤维素膜的T线（有两条T线——T1和T2）和C线上。

所述的季铵盐类化合物是四丁基溴化铵、十六烷基三甲基溴化铵、氯化十二烷基二甲基苄基铵、溴化双十八烷基二甲基铵、十八烷基二甲基羟乙基铵硝酸盐的一种或多种。

所述的碱性溶液是氢氧化钠溶液、氢氧化钙溶液、氢化锂铝溶液、硼氢化钠溶液的一种或几种；所述的盐溶液是氯化钠溶液、硝酸钙溶液、硝酸银溶液、硝酸钠溶液的一种或几种。

所述的缓冲液1、2是醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液中的一种或多种。

本发明涉及的生物素-亲和素系统双检测线免疫层析试纸条半定量检测黄曲霉毒素B1具有简便，快速，灵敏度高的特点，克服了目前检测方法存在的操作繁琐，检测时间长的缺点，有广泛的应用前景。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行描述：

实施例1

具体步骤如下：

（1）亲和素化柱状纳米金材料的制备：先将 0.3 g 0.2 mol/L 的四丁基溴化铵与0.001 mol/L 5.00 mL的氯金酸水溶液室温下充分混合，加入0.01 mol/L 0.90 mL的氢氧化钠溶液，反应5 min，生成种子，然后将0.3 g 0.2 mol/L四丁基溴化铵加入0.04 mol/L0.10 m的氯化钠溶液与0.001 mol/L3 mL的氯金酸混合液，再加入浓度为 0.0788 mol/L0.10 mL的抗坏血酸水溶液，然后将得到的0.01 ml的种子液加入该溶液反应3 min，室温下恒温静置24 h后以14000 r/min 的转速离心，然后将6 ml亲和素(2×10

（2）生物素化抗AFB

（3）基于生物素-亲和素系统金标探针的制备：利用生物素和亲和素之间高特异性亲和力以及多级放大效应，可提高免疫结合和示踪分析的灵敏度。生物素与亲和素之间的结合力可达1015mol L

（4）免疫层析试纸条的制备：通过将亲和素与柱状纳米金共价结合作为标记探针，采用共价偶联的方式连接生物素与抗黄曲霉毒B1单克隆抗体结合的聚合物形成偶联物然后喷到玻璃纤维素膜上，将抗原1与抗原2和羊抗鼠 IgG 分别包被硝酸纤维素膜的T线（有两条T线——T1和T2）和C线上。

实施例2

具体步骤如下：

（1）亲和素化柱状纳米金材料的制备：先将 0.4 g 0.2 mol/L 的十六烷基三甲基溴化铵与0.001 mol/L 5.00 mL的氯金酸水溶液室温下充分混合，加入0.01 mol/L 0.90mL的氢化锂铝溶液，反应5 min，生成种子，然后将0.3 g 0.2 mol/L氯化季铵盐加入0.04mol/L 0.10 mL的盐溶液与0.001 mol/L 7 mL的氯金酸混合液，再加入浓度为 0.0788mol/L 0.10 mL的抗坏血酸水溶液，然后将得到的0.03 ml的种子液加入该溶液反应5 min，室温下恒温静置24 h后以14000 r/min 的转速离心，然后将6 ml亲和素(5×10

（2）生物素化抗AFB

（3）基于生物素-亲和素系统金标探针的制备：利用生物素和亲和素之间高特异性亲和力以及多级放大效应，可提高免疫结合和示踪分析的灵敏度。生物素与亲和素之间的结合力可达1015mol L

（4）免疫层析试纸条的制备：通过将亲和素与柱状纳米金共价结合作为标记探针，采用共价偶联的方式连接生物素与抗黄曲霉毒B1单克隆抗体结合的聚合物形成偶联物然后喷到玻璃纤维素膜上，将抗原1与抗原2和羊抗鼠 IgG 分别包被硝酸纤维素膜的T线（有两条T线——T1和T2）和C线上。

以上实施例只是为了说明本发明，而不是对本发明的限制。在上述说明的基础上，可以对本发明作许多改进和改变。在所附权利要求书的范围内，本发明可以有不同于上述的其它实现方式，选用其它试剂材料、调整分散时间等方法均在本发明专利要求范围之内。