一种泡壳背网蝽的室内扩繁方法

技术领域

本发明属于昆虫饲养技术领域，具体涉及一种泡壳背网蝽的室内扩繁方法。

背景技术

泡壳背网蝽(Cochlochila bullita

在危害肾茶时，泡壳背网蝽将卵产在肾茶植株上，进而以若虫、成虫对其进行危害，成虫个体较小，约3mm，在肾茶上聚集取食，并在叶子表面留下排泄物，导致被害叶片枯萎、脱落，严重时甚至整株枯死。在西双版纳州，该虫可全年发生危害，一般危害率为30％-60％，严重时可高达80％以上，是肾茶的主要害虫之一，对肾茶及肾茶相关产业，造成了较大的经济损失。肾茶广泛分布在我国云南、海南、广东、福建及台湾，可用于治疗肾结石、尿路感染和糖尿病等，是云南西双版纳州农户种植广泛的傣药之一。可见，泡壳背网蝽的防控至关重要。

目前，国内仅有少数关于泡壳背网蝽形态特征的介绍，尚未有关于该虫饲养技术方面的研究。而如何建立室内稳定的实验种群，获得大量一致的标准化稳定虫源，能为系统开展该虫的生物学、生态学、毒理学以及综合防控技术研究奠定基础。可见，缺乏泡壳背网蝽室内繁育的关键技术成为了研究其基础生物学、生态学以及毒理学等理论研究的技术瓶颈。因此，建立一套规范化、标准化的泡壳背网蝽室内扩繁技术，从而持续为该虫的相关研究提供稳定一致的可靠虫源，为该虫的基础生物学及综合防控提供技术支撑，是当前亟需解决的技术问题。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的是提供一种泡壳背网蝽的室内扩繁方法，该方法简单，成本低，泡壳背网蝽的存活率为85％以上，且经低温保存后网蝽卵的孵化率为75％以上，成虫收集率在60％以上。

为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案来实现的：

本发明提供一种泡壳背网蝽的室内扩繁方法，所述方法包括以下步骤：

S1、以肾茶叶片作为产卵基质，将肾茶叶片的叶柄插入装满中药液的管中，并封紧管口同时将叶柄固定，然后将管置于底部有抗菌保湿基质的养虫盒中，接着引入交配过的泡壳背网蝽成虫进行产卵培养，所述中药液由傣百解和绞股蓝制备得到，所述抗菌保湿基质包括琼脂、中药液和水；

S2、每天收集携带泡壳背网蝽卵的产卵基质，并补充与收集数量相同的新鲜产卵基质；

S3、将携带泡壳背网蝽卵的产卵基质置于底部有抗菌保湿基质的养虫盒的新养虫盒中进行孵化和若虫培养，待到有成虫出现时收集成虫。

本发明的泡壳背网蝽室内扩繁方法，整个扩繁过程包括卵的收集、卵的孵化、若虫饲养和成虫饲养等。本发明使用了抗菌保湿基质，显著延迟了叶片的保鲜时间，简化了频繁更换叶片饲料的繁琐步骤；本发明在养虫盒中添加了由绞股蓝和傣百解制备得到的中药液，有效降低了叶片的真菌感染率；本发明的养虫盒中使用了抗菌保湿基质，可延长叶片的保鲜时间至10天左右，同时降低了低龄幼虫的感染率，有效提高孵化率及各虫态成活率。

优选地，步骤S1至S3中，产卵、孵化和若虫培养的温度为25～30℃，湿度为70％±5％，光周期为12L:12D。本发明筛选出了25-30℃的最适饲养温度，湿度为70％±5％，光周期为12L:12D，提高各虫态的存活率达85％以上；明显提高效率，有助于泡壳背网蝽的规模化饲养扩繁。

优选地，所述中药液的制备方法为：将绞股蓝和傣百解混合，加水浸泡后，先以武火煎煮，再以文火煎煮，得到的煎煮液经过滤后即得中药液。

进一步地，所述绞股蓝和傣百解的质量比为(1～5):(1～5)。具体地，所述绞股蓝和傣百解的质量比为1:1。

进一步地，武火煎煮20-30min，再以文火煎煮10-20min。具体地，武火煎煮25min，再以文火煎煮15min。

优选地，按重量百分率计，所述抗菌保湿基质包括1％琼脂、1％中药液和98％水。

优选地，在养殖盒内制备抗菌保湿基质的方法为：先将水煮沸，然后加入琼脂，待琼脂充分融化后加入中药液，再将得到的混合液加入到养虫盒内使其平铺于养虫盒底部，经冷却并凝固后制得。

优选地，步骤S1中，交配过的泡壳背网蝽成虫的雌雄数量比为2:1。

优选地，步骤S1中，管中的中药液为用水稀释至重量百分比为5％的中药液。

优选地，步骤S2中收集得到的泡壳背网蝽卵可在17～20℃下低温保存10～14d后再用于后续的孵化和若虫培养。利用本发明所述方法进行泡壳背网蝽的室内扩繁时，得到的泡壳背网蝽的卵可以在17-20℃的较低温度环境中保存10-14d，且还能保证卵的孵化率达75％以上，成虫收集率60％以上。

优选地，所述养虫盒的盒盖中央设置有长方形口，所述长方形口上粘有纱网。

在本发明的一个具体实施方式中，所述养虫盒的长宽高为9.5cm×7.0cm×5.0cm，盒盖中央设置有长为5cm、宽为2cm的长方形口，并在长方形口上粘上200目的纱网。

在本发明的一个具体实施方式中，收集成虫的方法为：利用镊子夹取产卵基质，并用毛笔挑出产卵基质上的泡壳背网蝽成虫。

在本发明的一个具体实施方式中，使泡壳背网蝽成虫交配的方法为：使用小毛笔往塑料指形管(长10.0cm，直径1.3cm)中挑入不超过20头泡壳背网蝽成虫，设置成虫的雌雄数量比为2:1，放置不大于3h，使成虫完成交配。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明公开了一种肾茶新害虫泡壳背网蝽的室内扩繁方法，经卵的收集、卵的孵化和若虫饲养、成虫饲养等步骤后完成泡壳背网蝽的室内扩繁。本发明将饲养泡壳背网蝽的寄主植物与泡壳背网蝽的产卵载体均设置为肾茶叶片，精简了饲养步骤，有助于泡壳背网蝽标准化饲养扩繁。本发明添加由傣百解和绞股蓝制成的中药液，可降低真菌感染率30％左右；抗菌保湿基质和对肾茶叶片进行消毒保湿处理，可以将叶片保鲜时间由1天延长至10天左右；新羽化的成虫先交配再放入产卵装置中，可以将单个叶片上的后代卵的孵化率显著提高；在20℃下低温保存14d，该网蝽卵的孵化率为75％以上，成虫收集率在60％以上。本发明方法简单实用，省时省工，提高了泡壳背网蝽的存活率，减少了更换食料的频率，并降低真菌感染，避免了实验室种群的衰退，可短时间内获得大量虫龄一致的网蝽，可为实验室提供稳定虫源，为泡壳背网蝽的生物学、生态学和毒理学等理论研究奠定基础。

附图说明

图1为傣药肾茶植株；

图2为由傣百解和绞股蓝熬制而成的中药液；

图3为底部制备有抗菌保湿基质的塑料盒；

图4为插在装满5％中药液的塑料离心管中的肾茶叶片；

图5为泡壳背网蝽卵的显微图片；

图6为产在肾茶叶片上的泡壳背网蝽卵；

图7为转移到新添加的肾茶叶片上的泡壳背网蝽；

图8为1龄泡壳背网蝽若虫；

图9为2龄泡壳背网蝽若虫；

图10为3龄泡壳背网蝽若虫；

图11为4龄泡壳背网蝽若虫；

图12为5龄泡壳背网蝽若虫；

图13为孵化盒中饲养的泡壳背网蝽(其成虫正在肾茶叶片上活动)；

图14为25℃饲养条件下泡壳背网蝽各虫态的存活率。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为可通过常规的商业途径购买得到。

实施例1一种泡壳背网蝽的室内扩繁方法

本实施例使用到的离心管、塑料盒以及镊子等相关工具在清洗干净后，使用75％酒精进行消毒处理，晾干后再使用。

1、肾茶的获取

寄主植物傣药肾茶[Clerodendranthus spicatus(Thunb.)C.Y.Wu]叶片采自云南省景洪市中国医学科学院药用植物研究所云南分所肾茶种植基地。肾茶整个生长期有专人进行正常栽培管理，不施用任何农药，基地的肾茶植物(如图1所示)可为试验提供寄主植物保障。

2、中药液的配置

以配置140mL中药液为例：分别称取10g傣药绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)和10g傣百解(Marsdenia tenacissima)药材置于锅中，再加入1000mL水，浸泡30min后进行加热熬煮。先以武火煎煮25min，再以文火煎煮15min，得到煎煮液，最后使用纱布进行过滤，去除药渣，即获得中药液140mL，待冷却后冰箱保存备用(如图2所示)；

后续使用的5％中药液的配置方法为：按中药液：蒸馏水的重量百分比为5:95的标准往上述中药液中加入蒸馏水，即得到5％的中药液。

3、抗菌保湿基质的配制及养殖盒的制备

分别称取琼脂1.0g、中药液1.0g和水98mL，先将水煮沸，然后加入琼脂，待充分融化后加入中药液，然后趁热加入到塑料盒内，以平铺塑料盒底部1.0cm厚为准，待凝固并冷却后制作成抗菌保湿基质(如图3所示)。

下面所述的产卵装置、孵化盒、成虫饲养装置均为底部制备有抗菌保湿基质的塑料盒。

4、卵的收集

(1)产卵基质的准备：产卵基质为肾茶种植基地的新鲜、无病虫害的肾茶叶片。将20片肾茶叶片放置在3L清水中进行清洗，然后在自来水下冲洗20s，之后再使用装有75％酒精的喷壶给叶片正反面均匀喷雾进行消毒，最后将消毒好的叶片逐个平铺在滤纸上，并使用吸水纸巾擦干叶片上的水滴备用。使用时，将肾茶叶片的叶柄插入装满5％中药液的2mL塑料离心管中，叶柄由脱脂棉固定，并通过脱脂棉封紧离心管的管口(如图4所示)。

(2)设置产卵装置(如图3所示)：产卵装置为一长方体的塑料盒，长宽高为9.5cm×7.0cm×5.0cm，顶部盒盖中央设置长为5cm、宽为2cm的长方形口，并粘上200目的纱网；并在每个产卵装置内放置插在装满5％中药液的塑料离心管中的肾茶叶片。

(3)设置产卵：从肾茶种植园采集泡壳背网蝽成虫，使用小毛笔往塑料指形管(长10.0cm，直径1.3cm)中挑入不超过20头该虫成虫，设置成虫的雌雄数量比为2:1，放置3h使成虫完成交配。然后再使用小毛笔往每个产卵装置内挑入不超过20头经交配的泡壳背网蝽成虫，设置成虫的雌雄数量比为2:1，盖上塑料盒盖子进行饲养，饲养的温度为25-30℃，湿度为70％±5％，光周期为12L:12D。

(4)卵的收集(网蝽卵如图5和6所示)：每天收集已携带泡壳背网蝽卵的肾茶叶片，收集方式为添加新的产卵基质，泡壳背网蝽成虫会主动转移到新基质上(如图7所示)，极个别未转移的，则可进一步使用毛笔挑到新产卵基质上，最后再取出旧的肾茶叶片。收集完之后补充同样数量的新鲜肾茶叶片。

5、卵的孵化及若虫饲养

设置网蝽孵化盒，孵化盒和产卵装置均为一样的塑料盒。卵基本在产下后12d内孵化，每个孵化盒放置1片携带泡壳背网蝽卵的肾茶叶片，该叶片的叶柄插入装满5％中药液的2mL塑料离心管中，叶柄由脱脂棉固定，并通过脱脂棉封紧离心管的管口，然后将离心管倒放于底部含有抗菌保湿基质的塑料盒内，塑料盒的长宽高为9.5cm×7.0cm×5.0cm，盒盖中央设置长为5cm、宽为2cm的长方形口，并粘上200目的纱网，并盖好盖。第5d开始，每隔5d添加1片肾茶叶片，该叶片的叶柄同样插入装满5％中药液的2mL塑料离心管中，叶柄由脱脂棉固定；进行若虫饲养(1至5龄若虫分别如图8-12所示)。饲养的温度为25-30℃，湿度为70％±5％，光周期为12L:12D。

6、成虫收集

每日观察孵化盒中网蝽成虫的羽化情况，发现成虫则利用镊子夹取产卵基质，并用毛笔挑出产卵基质上的泡壳背网蝽成虫(如图13所示)。放置在成虫饲养装置内(同孵化盒)，成虫数量控制在20头以内(雄虫不低于7头)，然后将成虫饲养盒中的网蝽成虫按照规定数量转移至新设的产卵装置中，可继续进行产卵环节饲养。

7、卵的低温保存

将部分泡壳背网蝽的卵进行低温保存，以合理调控该网蝽室内种群数量，并在大量实验需求的时候进行繁殖，能够提供虫龄一致且稳定的大量虫源供试验所需。取1片携带网蝽卵的肾茶叶片，将该叶片的叶柄插入装满5％中药液的2mL塑料离心管中，叶柄由脱脂棉固定，并通过脱脂棉封紧离心管的管口，然后放入塑料盒(长×宽×高为30×20×10cm)内，每盒放10-15个，接着将塑料盒置于人工气候箱进行低温保存。泡壳背网蝽卵的低温保存条件和保存期限分别为17-20℃与10-14d，能保证卵的孵化率达75％以上，成虫收集率60％以上。

同时，在实施例1的实施过程中，还进行了添加中药液对肾茶叶片保鲜时间的影响(10次重复)、抗菌保湿基质对泡壳背网蝽真菌病害感染率的影响、温度对泡壳背网蝽发育历期的影响(20次重复)、低温保存对该网蝽发育历期的影响(20次重复)、泡壳背网蝽存活率观察(20次重复)、泡壳背网蝽交配情况对孵化率的影响(6次重复)、温度对泡壳背网蝽成虫寿命及繁殖力的影响(20次重复)等试验，结果如表1～5和图14所示。

由表1可见，添加中药液处理组可以明显延长肾茶叶片的保鲜时间，为10d；由表2可见，添加抗菌保湿基质处理组可以有效降低泡壳背网蝽真菌病害的感染率，可降低30.2％。

表3-4的研究结果表明，泡壳背网蝽在15℃下卵不能孵化，可见，泡壳背网蝽在15℃下不能完成一个世代历期，而20℃-35℃下均可以正常发育，均可完成世代历期；由图14可见，25℃下饲养的泡壳背网蝽，卵及各龄若虫存活率均大于86％，其中卵的存活率最低，为86％；由表5可见，25℃饲养条件下该网蝽只有在完成交配的情况下，后代卵才会孵化，卵平均孵化率为81.6％。未交配情况下，雌虫可以产卵，但卵不孵化。因此，应当在雌雄成虫提前完成交配后再进行饲养；由表6可见，该网蝽在20℃-35℃下，其单雌产卵量大于36粒；随着温度升高，其产卵量有所增加。但成虫寿命随着温度的升高而明显缩短，35℃时最短，为15d。

综合表3-6以及图14研究结果可见，由于35℃下该网蝽成虫寿命较短，20℃下产卵量低。因此，综合考虑发育历期、成虫寿命、产卵量、存活率、孵化率等主要生物学指标，优选在25℃-30℃下进行饲养，可以提高繁殖效率。

此外，由表7可见，在17-20℃下低温保存10-14d，卵孵化率可达75％以上，成虫收集率可达60％。

表1添加中药液对肾茶叶片保鲜时间的影响

表2抗菌保湿基质对泡壳背网蝽真菌病害感染率的影响

表3温度对泡壳背网蝽发育历期的影响(天/d)

表4低温保存对泡壳背网蝽发育历期的影响(天/d)

表5泡壳背网蝽交配情况对孵化率的影响

表6温度对泡壳背网蝽成虫寿命及繁殖力的影响

表7不同温度保存条件下泡壳背网蝽卵的孵化率及成虫收集率

以上对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。