一种天南星特征肽段及其检测方法和应用

技术领域

本发明属于中药材检测技术领域，具体涉及一种天南星特征肽段及其检测方法和应用。

背景技术

天南星是天南星科天南星属植物，一般在秋季采用其根茎部分，除去须根后，经过清洗、晒干等处理后入药。天南星具有清热解毒、消肿止痛的功效，特别是在风湿性关节炎治疗方面疗效显著，所以临床应用非常广泛。但是因为天南星产量较低，而同类药材较多，如虎掌南星、半夏、水半夏，上述中药同天南星药材具有部分相似药理作用，导致临床混用严重。

虽然天南星鉴别方法较多，如通过观察外观性状，显微法观察成束的草酸钙针晶或淀粉粒脐点形状，薄层色谱法比对所含氨基酸，HPLC法针对所含黄酮类成分或生物碱类成分，IR法针对分子官能团等，但上述方法专属性较差，很难与同科不同属的同类药材区分开来。部分文献也有PCR法报道，但PCR法循环过程复杂，对环境和样品要求很高，该法用于中药材检验容易出现假阳性或假阴性现象。而且天南星药材中缺乏专属性的小分子成分，2020年版《中国药典》中采用芹菜素作为对照来计算所含总黄酮类成分含量，标准中也没有专属性成分的含量测定，鉴别中同样也没有采用特殊的质量标记物，故现行版的《中国药典》收载的天南星质量标准仍然没有专属性的检测方法。

综上，目前天南星的鉴别方法存在很多局限性，无法与同科不同属的同类药材进行有效区分。

发明内容

针对现有技术中鉴别天南星无法与同科不同属的同类药材进行有效区分的问题，本发明提供了一种天南星特征肽段及其检测方法和应用，天南星特征肽专属性强，检测方法操作简单，灵敏度高，能准确判断是否为天南星，为保证天南星及其炮制品的质量提供科学方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种天南星特征肽段，所述的天南星特征肽段的氨基酸序列为GELVINN(+0.98)GEGSLVFR；N (+0.98)表示天冬酰胺发生脱酰胺修饰，分子量增加0.98。

一种检测上述天南星特征肽段的方法，采用液相色谱-高分辨质谱联用仪对待检测样品溶液进行鉴定，获得待检测样品的一级质谱和二级质谱，以天南星特征肽段为对照，判断待检测样品中是否含有天南星成分。

进一步地，采用电喷雾正离子模式监测，选择以高分辨质谱

进一步地，所述的待检测样品溶液的制备方法为：向待检测样品加入NH

进一步地，所述的待检测样品溶液的制备方法为：向15mg待检测样品中加入1ml0.5%NH

进一步地，液相色谱条件为：ACQUITY UPLC

高分辨质谱条件为：Fusion-Orbitrap高分辨质谱仪，电喷雾离子源，以正离子模式进行采集，喷雾电压为2.1 kV，离子传输毛细管温度为275℃，S-Lens传输效率设置为60%；一级质谱采用Orbitrap作为质量分析器，采集范围为350～1550Th；二级质谱采用离子阱作为质量分析器，Rapid Scan模式进行扫描，HCD碎裂模式，碎裂能量NCE设置为35%；选择

进一步地，所述梯度洗脱的条件为：0～5 min，2%～7％B；5～46min，7%～22％B；46～56min，22%～33％B；56～63min，33%～90％B；63～70min，90％B。

本发明中，所述的天南星特征肽段或所述的检测天南星特征肽段的方法在天南星药材质量控制中的应用。

本发明对收集的20批半夏，10批虎掌南星，5批天南星和5批水半夏进行了验证，该特征肽段的一级质谱在5批天南星样品中全部检出，二级质谱的主要碎片离子均检出，且在规定范围内；其他样品半夏、虎掌南星和水半夏均未检出该特征肽段的一级质谱。

本发明取得的有益效果为：

本发明提供的天南星特征肽段具有很高的专属性及信号响应，能够与其同科具有部分相似药理作用的半夏、虎掌南星、水半夏区分开来，可用于天南星药材的定性检测；

本发明提供的天南星特征肽段的检测方法操作简单，判断准确，能准确识别天南星特征肽段, 有利于天南星的质量控制，对保证含有天南星药品的质量具有重要的意义。

附图说明

图1为天南星正离子流图；

图2为天南星中天南星特征肽段的一级质谱图（

图3为天南星中天南星特征肽段的实测二级质谱图；

图4为天南星特征肽段预测的二级质谱图；

图5为半夏正离子流图；

图6为半夏中天南星特征肽段的一级质谱图（

图7为虎掌南星正离子流图；

图8为虎掌南星中天南星特征肽段的一级质谱图（

图9为水半夏正离子流图；

图10为水半夏中天南星特征肽段的一级质谱图（

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

实施例1

天南星特征肽段，其氨基酸序列SEQ ID NO.1为：GELVINN(+0.98)GEGSLVFR；其中，N(+0.98)中，N为天冬酰胺，N (+0.98)表示天冬酰胺发生脱酰胺修饰，分子量增加0.98。

所述的天南星特征肽段的结构式为：

。

实施例2

（1）向15mg天南星样品粉末中加入1ml 0.5%NH

（2）将步骤(1)中的天南星样品溶液注入液相色谱-高分辨质谱联用仪，获得天南星样品的一级质谱和二级质谱，以天南星特征肽段为对照进行判断；

所述的液相色谱-高分辨质谱联用仪中的液相色谱条件为：ACQUITY UPLC

高分辨质谱条件为：Fusion-Orbitrap高分辨质谱仪，电喷雾离子源，以正离子模式进行采集，喷雾电压为2.1 kV，离子传输毛细管温度为275℃，S-Lens传输效率设置为60%；一级质谱采用Orbitrap作为质量分析器，采集范围为350～1550Th；二级质谱采用离子阱作为质量分析器，Rapid Scan模式进行扫描，HCD碎裂模式，碎裂能量NCE设置为35%；选择

实施例2中天南星正离子流图如图1所示，天南星中天南星特征肽段的一级质谱图（

实施例3

实施例3中的待检测样品为半夏，其余检测方法和条件与实施例2相同，半夏正离子流图如图5所示，半夏中天南星特征肽段的一级质谱图（

实施例4

实施例4中的待检测样品为虎掌南星，其余检测方法和条件与实施例2相同，虎掌南星正离子流图如图7所示，虎掌南星中天南星特征肽段的一级质谱图（

实施例5

实施例5中的待检测样品为水半夏，其余检测方法和条件与实施例2相同，水半夏正离子流图如图9所示，水半夏中天南星特征肽段的一级质谱图（

本发明对收集的20批半夏，10批虎掌南星，5批天南星和5批水半夏进行了验证，该特征肽段的一级质谱在5批天南星样品中全部检出，二级质谱的主要碎片离子均检出，且在规定范围内；其他样品半夏、虎掌南星和水半夏均未检出该特征肽段的一级色谱峰。因此，本发明中的天南星特征肽段或检测天南星特征肽段的方法可应用于天南星药材的质量控制，对天南星药材进行定性检测，检测方法简单，对保证含有天南星药品的质量具有重要的意义。