针对过继性T细胞疗法中的突变MYD88L265P蛋白表位的特异性T细胞受体

技术领域

本发明涉及免疫疗法技术领域，尤其涉及过继性T细胞疗法或T细胞受体(TCR)基因疗法。本发明提供了一种可编码TCR构建体的至少一个TCRα或β链构建体的核酸，所述TCR构建体能够在对所述肽/HLA复合物具有高亲和力的HLA-B*07:02的存在下特异性结合SEQID NO:2的MYD88 L265P肽。本发明还提供了上述核酸对应的蛋白质和宿主细胞，优选CD8+T细胞，以及所述核酸、蛋白质或宿主细胞的医学用途，特别是在诊断、预防和/或治疗携带MYD88 L265P突变的癌症中的用途。所述携带MYD88 L265P突变的癌症例如选自弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(例如活化B细胞型DLBCL(ABC-DLBCL)或原发性CNS DLBCL、皮肤DLBCL、腿型DLBCL或睾丸DLBCL)的非霍奇金B细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)(例如，瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM))和IgM单克隆丙种球蛋白病(IgM MGUS)。

背景技术

B细胞源性肿瘤仍然是西方世界的主要死亡原因之一。预计德国每年约有1500～2000例高等级B细胞淋巴瘤新发病例。其中高达40％的患者在初始标准治疗后会复发，或者根本没有反应，这表明当前迫切需要替代治疗方案。淋巴瘤的发病率随着年龄的增长而急剧增加，对于许多年龄在75岁或以上的患者而言，预后的效果更差。

尽管化疗在毒性和耐药性发展方面存在局限性，但其仍是大多数癌症类型的主要治疗选择。多种化疗方案联合靶向CD20 B细胞抗原的单克隆抗体利妥昔单抗被广泛用作弥漫性大B细胞淋巴瘤的一线治疗方法，治愈率约为60％。即使采用干细胞挽救的高剂量化疗，在一线治疗后也只能挽救不到三分之一的复发/难治性疾病患者。原发性CNS淋巴瘤预后更差：似乎只有高剂量化疗才有疗效，但由于年龄限制和合并症的原因，仅在少数患者中是可行的，因为其在大于70岁的患者中发生频率较高。

嵌合抗原受体(CAR)是能够识别与TCR结构域结合的细胞表面抗原的抗体的抗原结合结构域的嵌合体。经基因工程改造以表达CAR的T细胞因此靶向表达CAR结合的抗原的细胞，而不考虑任何HLA限制。

靶向CD19的CART细胞已被成功的证明可应用于约50％的难治性和复发性DLBCL患者的治疗中，也证明了过继性T细胞疗法的效力。近年来，采用嵌合抗原受体基因转移对抗B细胞抗原CD19的过继性T细胞疗法(ATT)的临床研究取得了显著成功，被称为“突破性癌症疗法”。大多数研究人员正在这一相同的策略上开发研究，主要是通过靶向B细胞谱系抗原，如CD19、CD20和CD22。然而，通过调节靶抗原的表面表达而发生肿瘤逃逸是该策略的一个主要限制，导致至少50％接受治疗的患者复发，并且其费用高昂。此外，基于CAR的过继性T细胞疗法只能靶向细胞表面蛋白，而不能靶向细胞内蛋白。尽管比化疗更具特异性，但基于CAR的ATT并非真正的具有肿瘤特异性，因为在B细胞定向CAR-ATT后，包括恶性和正常B淋巴细胞在内的整个B细胞区室均被清除，这经常导致严重B细胞耗竭从而可能需要长期的免疫球蛋白替代。

TCR是免疫球蛋白超家族的异质二聚体细胞表面蛋白，与参与介导信号转导的CD3复合物的不变蛋白相关。TCR以αβ和γδ的形式存在，这两种形式在结构上相似，但具有非常不同的结构位置和可能的功能。天然异质二聚体αβTCR的α链和β链为跨膜蛋白，每个链均包含两个胞外结构域，即膜近端恒定结构域和膜远端可变结构域。每个恒定区和可变区都包含链内二硫键。可变区含有高度多态性的环，类似于抗体的互补决定区(CDRs)。

每个TCR链的可变区包括可变段和连接段，在β链的情况下还包括多样性段。每个可变区由嵌入框架序列的三个CDRs(互补决定区)组成，其中一个是名为CDR3的高变区。多种类型的α链可变区(Vα)和多种类型的β链可变区(Vβ)，通过它们的框架、CDR1和CDR2序列以及部分定义的CDR3序列来区分。特定的TRAV或TRBV编号由IMGT命名法赋予Vα或Vβs。T细胞受体对识别的表位的特异性主要由CDR3区决定(Danska等,1990.J.Exp.Med.172:27-33；Garcia等,2005.Cell 122(3):333-336)。

采用过继性TCR基因疗法可使患者自身的T细胞具备所需的特异性，并在短时间内产生足够数量的T细胞，从而避免其衰竭。TCR可转导至所有T细胞或T细胞亚群，如CD8、中枢记忆T细胞或具有干细胞特征的T细胞，这可确保更好的持久性和转移时的功能。可以将TCR工程改造的T细胞输注到癌症患者中，所述癌症患者具有例如通过化疗或放疗导致的淋巴细胞减少，诱导稳态扩增，从而大大增强移植的具有高治愈率的T细胞的植入和长期持久性。

与基于CAR的策略相反，基于TCR的过继T细胞疗法依赖于传统的在MHC分子背景下存在的抗原的加工表位的TCR识别，而非像CARs那样依赖于抗体识别。其优点是表面表达对于TCR识别不是必需的，因此，在CARs结合时调节表面抗原表达不会造成限制。此外，癌症突变主要发生在调节细胞增殖、存活的胞质内蛋白或对药物和其他调节信号具有敏感性的胞质内蛋白中，而不是发生在表面分子中：T细胞受体可以靶向独立于细胞定位的任何蛋白，从而大大拓宽了可靶向抗原的范围，所述可靶向抗原包括谱系特异性表面抗原(如CARs)和真正的肿瘤特异性细胞内抗原。

理想情况下，由肿瘤发展过程中获得的体细胞突变衍生得到的癌症特异性突变抗原，即所谓的“新抗原”，是免疫系统识别的最佳可能靶点，因为它们被癌细胞严格表达，这意味着更高的特异性和更低的脱靶毒性。如果潜在的突变导致高亲和力的MHC分子上产生了异常肽，那么携带致癌驱动突变的癌症对于TCR基因疗法仍然是非常有吸引力的(Blankenstein等人,2015.Curr Opin Immunol.33:112-119).

MYD88是一种细胞内衔接蛋白。将MYD88中265位亮氨酸变为脯氨酸(L265P)的错义突变是最常见的驱动突变之一，可在约五分之一比例的所有淋巴恶性肿瘤中发现，在侵袭性和治疗耐药性病例中更为常见。所述突变在B细胞淋巴瘤中以高频率发生，例如在弥漫性大B细胞淋巴瘤中，例如活化B细胞型DLBCL(ABC-DLBCL)或原发性CNS DLBCL、皮肤DLBCL、腿型DLBCL或睾丸DLBCL；淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)，例如IgM单克隆丙种球蛋白病和约90％的瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM)患者(Yu等,2018.Cancer Res.78(10):2457-62；Knittel等,2016.Blood 127(22):2732-2741；Rovira等,2016.Clin Cancer Res1-10；Lee等,2017.Scientific Reports 7:1785)。

已经建议将包含MYD88 L265P突变的肽用于癌症的免疫治疗(专利DE102015106731A1,Nelde等,2017.Oncoimmunology 6(3):e1219825)。基于电子预测，Nelde等人(2017年)针对多种HLAI类限制，确定了含有HLA配体的潜在MYD88 L265P。一组HLA-IMYD88L265P衍生配体显示可引发针对HLA-B*07和HLA-B*15的特异性细胞毒性T细胞应答，Nelde等人研究讨论了所述肽是否可以天然存在。

尼尔森等人(2017.Oncommunology 6(7):e1321184)通过检测供体T细胞上所有可能的8-、9-、10-和11-mer突变肽的文库，评估了来自健康供体的T细胞对常见驱动突变的识别，如MYD88 L265P突变。他们在一名供体中发现了针对由HLA-B*07:02表示的MYD88 L265P的肽RPIPIKYKA(SEQ ID NO:1，粗体P表示L265P突变)的CD8+T细胞，并发现了所述肽也可在人B细胞中加工的证据。其他肽，特别是较长的肽RPIPIKYKAM(SEQ ID NO:2)，也可被用该肽脉冲的靶细胞上的供体T细胞识别，但对所述肽有反应的大多数T细胞系未能识别用MYD88L265P转染的B细胞。作者因此得出结论，75％的候选肽未能被自然加工，这将使得识别该肽的TCR不适用于T细胞疗法。关于可加工的与SEQ ID NO:1的肽反应的剩余T细胞系，Nielsen等人讨论了TCR基因疗法的选择，但他们认为，基于表达HLA-B*07的患者数量少，TCR工程的实用性是有限的。T细胞未被克隆，也未提供TCR序列。因此，作者建议转向一个可选的靶抗原的扩展列表，这些抗原经常携带淋巴瘤中的推定驱动突变。此外，作者还教导了通过接种将肽用于治疗目的。

发明内容

有鉴于此，发明人解决了提供有利的TCR构建体的问题，所述TCR构建体能够特异性靶向包含由于B细胞淋巴瘤的驱动基因突变引起的氨基酸取代的肽，所述B细胞淋巴瘤可以被天然加工并存在于HLA上，其中，优选的，所述TCR构建体具备允许所述TCR构建体用于治疗用途的高亲和力。这个问题通过权利要求的主题来解决。

发明人提供了识别MYD88 L265P中所述抗原的表位的TCR构建体，即在HLA-B*07:02的存在下结合SEQ ID NO:2的MYD88 L265P肽的TCR构建体，所述TCR具有惊人的高亲和力。与尼尔森等人的教导相反，他们还发现可以对MYD88 L265P进行天然加工以产生存在于HLA-B*07:02的存在下的SEQ ID NO:2的肽，并且靶向所述肽的T细胞因此可以有利地用于表达MYD88 L265P的肿瘤的治疗。

本发明提供了一种核酸，其中所述核酸编码在HLA-B*07:02的存在下能够特异性结合SEQ ID NO:2的MYD88 L265P肽的TCR构建体的至少一个TCRα链或β链构建体，

a)其中所述TCRα链构建体包含SEQ ID NO:13的CDR3序列，和/或其中所述TCRβ链构建体包含SEQ ID NO:16的CDR3序列；或者

b)其中所述TCRα链构建体包含SEQ ID NO:23的CDR3序列，

和/或其中所述TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:24具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:25具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:26的CDR3序列；或者

c)其中所述TCRα链构建体包含SEQ ID NO:33的CDR3序列，

和/或其中所述TCRβ链构建体包含SEQ ID NO:36的CDR3序列；或者

d)其中所述TCRα链构建体包含SEQ ID NO:43的CDR3序列，

和/或其中所述TCRβ链构建体包含SEQ ID NO:46的CDR3序列，或者

e)其中所述TCRα链构建体包含SEQ ID NO:93的CDR3序列，

和/或其中所述TCRβ链构建体包含SEQ ID NO:96的CDR3序列，或者

f)其中所述TCRα链构建体包含SEQ ID NO:103的CDR3序列，

和/或其中所述TCRβ链构建体包含SEQ ID NO:106的CDR3序列；或者

g)其中所述TCRα链构建体包含SEQ ID NO:113的CDR3序列，

和/或其中所述TCRβ链构建体包含SEQ ID NO:116的CDR3序列；或者

h)其中所述TCRα链构建体包含SEQ ID NO:123的CDR3序列，

和/或其中所述TCRβ链构建体包含SEQ ID NO:126的CDR3序列；或者

i)其中所述TCRα链构建体包含SEQ ID NO:133的CDR3序列，

和/或其中所述TCRβ链构建体包含SEQ ID NO:136的CDR3序列。

由于亲和力和特异性可以通过下文描述的本领域已知的方法进一步优化，本发明还提供了一种核酸，其在HLA-B*07:02的存在下能够特异性结合SEQ ID NO:2的MYD88L265P肽的TCR构建体的至少一个TCRα链或β链构建体，

a)其中所述TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:13具有至少90％序列同一性的CDR3序列，和/或其中所述TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:16具有至少90％序列同一性的CDR3序列；或者

b)其中所述TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:23具有至少90％序列同一性的CDR3序列，和/或其中所述TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:24具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:25具有至少90％序列同一性的CDR2序列和与SEQ ID NO:26具有至少90％序列同一性的CDR3序列；或者

c)其中所述TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:33具有至少90％序列同一性的CDR3序列，和/或其中所述TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:36具有至少90％序列同一性的CDR3序列；或者

d)其中所述TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:43具有至少90％序列同一性的CDR3序列，和/或其中所述TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:46具有至少90％序列同一性的CDR3序列，或者

e)其中所述TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:93具有至少90％序列同一性的CDR3序列，和/或其中所述TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:96具有至少90％序列同一性的CDR3序列，或者

f)其中所述TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:103具有至少90％序列同一性的CDR3序列，和/或其中所述TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:106具有至少90％序列同一性的CDR3序列；或者

g)其中所述TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:113具有至少90％序列同一性的CDR3序列，和/或其中所述TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:116具有至少90％序列同一性的CDR3序列；或者

h)其中所述TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:123具有至少90％序列同一性的CDR3序列，和/或其中所述TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:126具有至少90％序列同一性的CDR3序列；或者

i)其中所述TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:133具有至少90％序列同一性的CDR3序列，和/或其中所述TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:136具有至少90％序列同一性的CDR3序列。

优选的TCR构建体的上述e)中的TCRα和/或链构建体可以是包含TCR2304可变区的部分。

优选的TCR构建体的上述a)中的TCRα和/或链构建体可以是包含TCR2207可变区的部分。

优选的TCR构建体的上述b)中的TCRα和/或链构建体可能是包含TCR2205可变区的部分。需要注意的是在上述b)中的TCRα和/或链构建体的存在下所述TCR2205的β链的CDR3序列，即SEQ ID NO:26，已经在先出版在名为“Tissue distribution ad clonaldiversity of the T and B-cell repertoire in type 1diabetes in thesupplementary data,Seay等人,2016,JCI Insight.1(20):e88242”的文章上。基因的剩余部分尤其在CDR1和CDR2上不同，变体基因亚型和相应的α链序列有所不同。

优选的TCR构建体的上述c)中的TCRα和/或链构建体可以是包含TCR1610可变区的部分。

优选的TCR构建体的上述d)中的TCRα和/或链构建体可以是包含TCR1605可变区的部分。

优选的TCR构建体的上述f)中的TCRα和/或链构建体可以是包含TCR2705可变区的部分。

优选的TCR构建体的上述g)中的TCRα和/或链构建体可以是包含TCR2709可变区的部分。

优选的TCR构建体的上述h)中的TCRα和/或链构建体可以是包含TCR2716可变区的部分。

优选的TCR构建体的上述i)中的TCRα和/或链构建体可以是包含TCR2719可变区的部分。

在HLA-B*07:02的存在下，本发明的所有TCR构建体都能够特异性结合SEQ ID NO:2的MYD88 L265P肽。发明人可以证明，组织相容性抗原HLA-B7:02可以有效地呈现该突变以进行T细胞受体识别，并且它是相对常见的MHC单倍型，在德国人中的出现的频率为15-25％，在北美高加索人中约为30％。

本发明的TCR构建体之一，其中所述TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:13具有至少90％序列同一性的CDR3序列，并且其中所述TCRβ链构建体，例如TCR2207，包含与SEQ IDNO:16具有至少90％序列同一性的CDR3序列，其还能够特异性识别9-mer、11-mer和12-merMYD88 L265P肽，特别是SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的肽。

所述TCR构建体可以特异性识别SEQ ID NO:2的肽，特别的，它们不识别SEQ IDNO:3的相应MYD88野生型肽。优选的，它们也对非MYD88 L265P自身肽，特别是待接受TCR治疗患者的HLA上出现的自身肽没有显著的交叉反应性。

本文使用的术语“能够特异性结合”或“识别”或“特异于”给定抗原，是指TCR构建体可以特异性结合和免疫识别所述表位和HLA，更优选具有高亲和力。例如，在HLA*B07:02的存在下，如果表达TCR的T细胞在与用低浓度的各自肽(例如，约10

在本发明的背景下，“约”应理解为是指规定值+/-10％，优选+/-5％。

亲和力(或亲合力，因为典型的TCR具有两个结合位点)可以通过本领域技术人员熟知的方法进行分析，例如，通过BiaCore，通过用MHC-肽多聚体染色和分析FACS上的平均荧光强度(MFI)，或优选通过IFNγ响应的非线性曲线分析，其中亲和力与K

在一个实施方式中，在本发明的核酸中，编码的TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:91具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:92具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:93的CDR3序列，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:94具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:95具有至少90％序列同一性的CDR2序列以及SEQ IDNO:96的CDR3序列。

优选的，在本发明的所述核酸中，TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:97具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:98具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区。所述核酸可包含分别编码所述可变区的SEQ ID NO:99和SEQ ID NO:100，其代表针对在人细胞中为了表达而密码子优化的核酸。

在一个实施方式中，在本发明的核酸中，TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:11具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:12具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:13的CDR3序列，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:14具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:15具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:16的CDR3序列。

优选的，在本发明的所述核酸中，TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:17具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:18具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区。所述核酸可包含分别编码所述可变区的SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20，其代表密码子优化的核酸。

在一个实施方式中，在本发明的核酸中，TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:21具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:22具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:23的CDR3序列，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:24具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:25具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:26的CDR3序列。

优选的，在本发明的所述核酸中，TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:27具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:28具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区。所述核酸可包含分别编码所述可变区的SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30，其代表密码子优化的核酸。

在一个实施方式中，在本发明的核酸中，TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:31具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:32具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:33的CDR3序列，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:34具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:35具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:36的CDR3序列。

优选的，在本发明的所述核酸中，TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:37具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:38具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区。所述核酸可包含分别编码所述可变区的SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40，其代表密码子优化的核酸。

在一个实施方式中，在本发明的核酸中，TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:41具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:42具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:43的CDR3序列，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:44具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:45具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:46的CDR3序列。

优选的，在本发明的所述核酸中，TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:47具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:48具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区。所述核酸可包含分别编码所述可变区的SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50，其代表密码子优化的核酸。

在一个实施方式中，在本发明的核酸中，编码的TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:101具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:102具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:103的CDR3序列，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:104具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:105具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:106的CDR3序列。

优选的，在本发明的所述核酸中，TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:107具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:108具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区。所述核酸可包含分别编码所述可变区的SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:110，其代表针对在人细胞中表达而密码子优化的核酸。

在一个实施方式中，在本发明的核酸中，编码的TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:111具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:112具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:113的CDR3序列，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:114具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:115具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:116的CDR3序列。

优选的，在本发明的所述核酸中，TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:117具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:118具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区。所述核酸可包含分别编码所述可变区的SEQ ID NO:119和120，其代表针对在人细胞中表达而密码子优化的核酸。

在一个实施方式中，在本发明的核酸中，编码的TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:121具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:122具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:123的CDR3序列，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:124具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:125具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:126的CDR3序列。

优选的，在本发明的所述核酸中，TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:127具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:128具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区。所述核酸可包含分别编码所述可变区的SEQ ID NO:129和SEQ ID NO:130，其代表针对在人细胞中表达而密码子优化的核酸。

在一个实施方式中，在本发明的核酸中，编码的TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:131具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:132具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:133的CDR3序列，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:134具有至少90％序列同一性的CDR1序列、与SEQ ID NO:135具有至少90％序列同一性的CDR2序列和SEQ ID NO:136的CDR3序列。

优选的，在本发明的所述核酸中，TCRα链构建体包含与SEQ ID NO:137具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区，和/或TCRβ链构建体包含与SEQ ID NO:138具有至少90％、优选至少95％或100％序列同一性的可变区。所述核酸可包含分别编码所述可变区的SEQ ID NO:139和SEQ ID NO:140，其代表针对在人细胞中表达而密码子优化的核酸。

TCRα链和/或β链构建体可具有图2所示的TCR 2304、TCR2207、TCR2205、TCR1610或TCR1605，或TCR2705、TCR2709、TCR2716或TCR2719的特征。在一个实施方式中，本发明的TCR构建体不包含含有TRBV28的β链。

优选的，本发明的核酸编码TCRα链构建体和TCRβ链构建体。在本发明的背景下，“一个”应理解为表示“一个或多个”，除非另有明确说明。因此，例如，由于本发明的TCR构建体同时含有α链和β链构建体，因此它可以由一个或两个核酸编码。α链和β链构建体一起能够在HLA-B*07:02的存在下与MYD88 L265P肽特异性结合。作为中间产物，所述α链和β链构建体或编码它们的核酸本身也是本发明的主题。

优选的，在本发明的所有TCR和/或β链构建体中，与本文定义的CDR区域的序列同一性是100％。

然而，基于本发明提供的定义的CDR3和可变区序列，可以进行TCR序列的亲和成熟(Chervin等人,2008.J Immunol Methods.339(2):175–84)；Robbins等人,2008.JImmunol.180:6116–31)。导致CDR3序列中氨基酸交换的非同义核苷酸的取代，可能导致TCR对靶抗原的亲和力增强。此外，可变TRA和TRB区域其他部分的TCR序列变化可能会改变TCR对肽-MHC复合物的亲和力。这可能会增加TCR对肽-MHC的总体亲和力，但存在非特异性识别和交叉反应性增加的风险(Linette等人,2013.Blood 122(6):863–72)。优选的，不同于所提供的特异性序列的TCR对所提供的靶抗原保留排他特异性，即，它们不交叉反应，最重要的是，它们对人自身肽不具有交叉反应性。TCR的潜在交叉反应性可以针对带有正确MHC等位基因的细胞上载的已知自身肽进行测试(Morgan等人,2013,J.Immunother.36,133-151).因此，优选的，表达本发明的TCR构建体的过继转移T细胞对健康组织没有负面影响。

本发明的TCRα链和/或β链构建体可包含与其天然配对物对应的所有特征或结构域，但这不是必需的。优选的，TCRα链和/或β链构建体包含至少一个可变区或一个可变区和一个恒定区，所述可变和/或恒定区与人可变或恒定TCR区具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性。对于过继性TCR疗法，优选的是TCR构建体包含全长TCRα链和β链，该链包含可变区、恒定区和跨膜区。优选的，TCR构建体基本上或专门来源于人，以使免疫原性最小化。人TCR和β恒定区是例如显示在SEQ ID NO:7(α)和SEQ ID NO:10(β、TCRBC2，或者也可以使用TCRRBC1)。然而，为了防止与内源性TCR链配对，本发明的构建体优选含有一个或多个，例如，1-5、1-10或1-20个与人序列相比的氨基酸交换、插入或缺失，例如，提供额外的半胱氨酸以能够形成另外的二硫键(Sommermeyer等，2010,J.Immunol.184,6223-31).这种TCR的恒定区可以通过用鼠序列替换人恒定区序列的几个氨基酸(通常为9)而被最小程度地“鼠化”(例如，SEQ ID NO:6(α)和SEQ ID NO:9(β))。TCRα链和β链构建体的恒定区也可以是鼠恒定区(SEQ ID NO:5(α)和SEQ ID NO:8(β、TCRBC2，或者也可以使用TCRRBC1))。α链和β链恒定区都是相同类型的，例如，两者都可以被最小程度地鼠化。

所述构建体也可以是嵌合抗原受体或其一部分，其中，例如，人TCR可变区可以与不同的免疫球蛋白恒定区连接，例如，IgG恒定结构域，或能够特异性结合抗原(如CD3 T细胞抗原)的抗体结构域。

本发明所述的构建体包括单链构建体(scTCR)和异质二聚体TCR构建体。scTCR可以包含第一TCR链构建体的可变区(例如，α链)和整个(全长)第二TCR链(例如，β链)，反之亦然。此外，scTCR可以任选的包含一个或多个将两种或多种多肽连接在一起的接头。所述接头可以是例如将如本文所述的两条单链连接在一起的肽。本发明还提供了与细胞因子融合的本发明的这种scTCR，例如，一种人细胞因子，如IL-2、IL-7或IL-15。

本发明的TCR构建体还可以以多聚体复合物的形式提供，其包含至少两个scTCR分子，其中所述scTCR分子各自与至少一个生物素部分融合，并且其中所述scTCR通过生物素-链霉菌(streptamer)相互作用相互连接以形成所述多聚体复合物。本发明还提供了更高级的多聚体复合物，其包含两个以上(例如四个)的scTCR。

本发明的TCR构建体可以被修饰以包含可检测的标记，例如放射性同位素、荧光团(例如，异硫氰酸荧光素(FITC)、藻红蛋白(PE))、酶(例如，碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶)和颗粒(例如，金颗粒或磁性颗粒)。

本发明的核酸，特别是如果所述核酸编码TCR构建体的至少一个TCRα链和TCRβ链构建体，可以是例如，允许所编码的蛋白质在宿主细胞中表达的载体，例如，人T细胞，例如病毒载体、转座子或适用于基于CRISPR/CAS的重组的载体((Legut等人,2018.Blood131:311-322；Eyquem等人,2017.Nature 543:113-117；Roth等人,2018.Nature 559:405-409)。在一个实施方式中，载体允许将所述核酸整合到宿主基因组中。

优选的，本发明的TCRα链构建体和/或TCRβ链构建体或TCR构建体是载体。合适的载体包括设计用于繁殖和扩增或用于表达或两者兼有的载体，如质粒和病毒。所述载体可以是适于表达的表达载体，所述表达载体是选自人T细胞或人T细胞前体的宿主细胞，优选人T细胞例如CD8+T细胞，CD8+中枢记忆T细胞，CD8+效应记忆T细胞，CD8+干细胞样T细胞。所述载体可以是病毒载体，例如，逆转录病毒，特别是γ-逆转录病毒或慢病毒载体。合适的表达载体的实例包括逆转录病毒载体MP71。重组表达载体包含调控序列，例如转录和翻译起始和终止密码子、调控非翻译区、核糖体间进入位点，所述调控序列对宿主细胞(例如细菌、真菌、植物或动物细胞，例如，如上定义的人CD8+T细胞)的类型具有特异性，其中载体将被导入该宿主细胞中，并且本发明核酸的表达将在该细胞中进行。此外，本发明的载体可以包括一个或多个标记基因，其允许选择转化或转染的宿主。重组表达载体可包含天然或优选的异源启动子，所述异源启动子可操作地连接到编码本发明所述构建体的核苷酸序列，或连接到与编码本发明构建体的核苷酸序列互补或杂交的核苷酸序列。启动子的选择包括，例如，强启动子、弱启动子、诱导型启动子、组织特异性启动子和发育特异性启动子。启动子可以是非病毒启动子或病毒启动子。优选的，它是异源启动子，即，一种在人T细胞中不与TCR天然连接的启动子，如长末端重复启动子，其适用于在人T细胞中表达。本发明的重组表达载体可被设计用于瞬时表达、稳定表达或两者兼有。此外，重组表达载体可被制备用于组成型表达或诱导型表达。

本发明还提供了一种蛋白质，即，α或β链构建体，或优选包含α链和β链构建体的TCR受体构建体，其能够将HLA-*B07:02与SEQ ID NO:2的表位特异性结合。所述蛋白质优选被本发明的核酸编码。优选的，所述蛋白质被宿主细胞表达为跨膜蛋白。

本发明还提供了包含本发明的核酸或蛋白的宿主细胞。宿主细胞可以是真核细胞，植物、动物、真菌或藻类，或者可以是原核细胞，细菌或原生动物。宿主细胞可以是培养的细胞或原代细胞，即，直接从生物体(例如，人类)分离得到的。宿主细胞可以是贴壁细胞或悬浮细胞，即，悬浮生长的细胞。为了产生重组TCR、多肽或蛋白质，宿主细胞优选为哺乳动物细胞。最优选的，宿主细胞是人细胞。虽然宿主细胞可以是任何细胞类型，可以来源于任何类型的组织，并且可以是任何发育阶段，但是宿主细胞优选是外周血白细胞(PBL)或外周血单核细胞(PBMC)。更优选的，宿主细胞是T细胞或T细胞前体，特别是人T细胞。T细胞可以是任何T细胞，如培养的T细胞，例如，原代T细胞，或来自培养的T细胞系的T细胞，或获得自哺乳动物的T细胞，优选的，它是来自人类患者，特别是来自待治疗的人类患者的T细胞或T细胞前体。自体或异体来源的T细胞可从多种来源获得，如血液、骨髓、淋巴结、胸腺或其他组织或液体。T细胞也可以富集或纯化。优选的，所述T细胞是人T细胞。更优选的，所述T细胞是从人分离的T细胞，例如人类病人。T细胞可以是任何类型的T细胞，但优选为CD8+细胞。它可以是任何发育阶段，包括但不限于肿瘤浸润细胞(TILs)、效应细胞、中枢效应细胞、记忆T细胞、幼稚T细胞等，优选中枢记忆T细胞。

本发明的宿主细胞优选包含本发明的核酸和/或本发明的蛋白质，其中所述宿主细胞优选是CD8+T细胞，任选的，人CD8+T细胞。

本发明还提供了一种药物组合物，其包含

a)本发明的核酸，其中所述核酸编码在HLA-B*07:02的存在下能够特异性结合SEQID NO:2的MYD88 L265P肽的TCR构建体；或者

b)本发明的蛋白质，其中所述蛋白质包含在HLA-B*07:02的存在下能够特异性结合SEQ ID NO:2的MYD88 L265P肽的TCR构建体；或者

c)本发明的宿主细胞，其中所述宿主细胞可以表达在HLA-B*07:02存在下能够特异性结合SEQ ID NO:2的MYD88 L265P肽的TCR构建体。

优选的，所述药物组合物包含本文所定义的人CD8+宿主细胞。所述宿主细胞可以包括，例如，编码TCR构建体的载体，所述TCR构建体包含在HLA-B*07:02存在下能够特异性识别SEQ ID NO:2的肽的TCRα链构建体和TCRβ链构建体。优选的，所述载体是用于在一个核酸上表达α链和β链构建体的表达载体，例如，被p2A元素隔开。本文定义的TCR链的可变区，例如，TCR2304、TCR2207、TCR2205、TCR1610或TCR1605，优选TCR2304，与恒定区连接，优选与最小鼠化的恒定区连接。

可选的，也可对患者施用本发明的核酸，特别是表达载体，用于T细胞的体内转导。

所述药物组合物也可以是包含其他治疗剂的试剂盒的一部分，例如，抗体如利妥昔单抗、免疫毒素(如奥英妥珠单抗)、或CAR，其可靶向B细胞谱系抗原(如CD19、CD20、CD22或CD79)的CAR，优选能够靶向CD19的CAR、小分子如激酶抑制剂或化疗剂，包括联合化疗和甚至高剂量化疗。所述药物组合物可以与任何上述其他治疗剂联合使用，在所述药物组合物之前、伴随或之后施用。本发明的药物组合物还可以与能够诱导靶肿瘤细胞中的IFNγ表达以增强ID NO:2的肽的加工的试剂组合在一种组合物或试剂盒中。

本发明的药物组合物或本发明的试剂盒可用于疾病的诊断、预防和/或治疗，特别是在怀疑包含表达具有L265P突变的MYD88蛋白的细胞的患者中。所述疾病优选为肿瘤疾病，例如一种良性或恶性肿瘤疾病。在一个优选的实施方式中，所述肿瘤细胞已经被证实可以表达MYD88 L265P和/或HLA-B*07:02，特别是两者同时表达。

优选的，所述患者患有选自下述的非霍奇金B细胞淋巴瘤：

-弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)，优选活化B细胞型DLBCL(ABC-DLBCL)或原发性CNS DLBCL、皮肤DLBCL、腿型DLBCL或睾丸DLBCL；

-淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)，优选瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM)；和

-IgM单克隆丙种球蛋白病(IgM MGUS)。

优选的，所述疾病得到治疗。患病风险的降低也被认为是疾病的预防，其中，优选的，受治疗的受试者的风险在比较人群中降低至正常水平以下，优选的，所述风险降低至少10％、至少25％、至少50％或至少75％或100％。

本发明还提供了一种治疗患有上述疾病，特别是肿瘤或肿瘤疾病的受试者的方法，包括施用本发明的核酸、蛋白或宿主细胞。优选的，所述受试者是需要这种治疗的受试者，即，病人。优选实施方式中的受试者是患有肿瘤或肿瘤疾病的哺乳动物受试者，优选人患者。活性药物以有效的剂量进行给药。

本发明的一个优选药物用途涉及免疫治疗，优选过继性T细胞疗法。本发明的产品和方法特别适用于过继性T细胞疗法。本发明化合物的给药可以包括例如，向所述患者输注本发明的T细胞。优选的，所述T细胞是患者的自体T细胞，其已经被遗传修饰以表达本发明的TCR，例如，其被本发明的核酸进行体外转导。

本发明的治疗可以是对患者的一线治疗。优选的，它是对患者的二线治疗，如果患者已经复发或用一种或多种替代药物(例如，小分子抑制剂、化疗、抗体或基于CAR的治疗，例如针对B细胞谱系抗原如CD19)的疗法很难治愈。

本发明的蛋白TCR构建体还可以用于，例如，诊断目的，以查明受试者是否表达MYD88 L265P，特别是根据SEQ ID NO:2的表位是否由HLA*B07:02表示。为此，这样的构建体优选被标记以促进检测。优选的，对发现在HLA*B07:02上存在所述表位的患者采用本发明的过继性T细胞疗法，或可选地，采用本发明的TCR基因疗法进行治疗。

本发明还提供了一种测试人类受试者的方法，例如一种表达MYD88 L265P的B细胞淋巴瘤患者，所述方法包括接触来自于包含肿瘤细胞的受试者的样品，所述肿瘤细胞例如源自受试者的血液、具有(优选进行标记)本发明的TCR构建体，或具有本发明表达构建体的宿主细胞。所述方法可以进一步包括检测所述标记，通过FACS或显微镜方法，或检测所述T细胞的活化，其可以是基于FACS的。检测所述T细胞的活化可以包括检测T细胞活化标记如CD137(和任选的，本发明的TCR构建体的表达)，通过FACS，检测细胞因子的表达，例如，通过ELISA、ELISPOT或基于PCR的方法。

所述方法还可以包括将MYD88 L265P的表达或缺乏表达告知受试者，并且任选的，如果患者表达MYD88 L265P，则用本发明的药物组合物治疗患者受试者。

当然，也可以通过其他方式确定MYD88 L265P的存在与否，例如，通过测序、基于PCR的方法或基于抗体的方法。

本发明还涉及制备本发明的宿主细胞的方法，包括将编码本发明的TCR构建体的表达载体导入合适的宿主细胞，所述宿主细胞优选从患者分离的人CD8+T细胞。然后可以将所述宿主细胞重新引入患者体内。

本发明将通过下面的实施例结合参考附图和序列进行进一步说明，然而，本发明不限于此。出于本发明的目的，本文引用的所有参考文献都通过引用的方式整体结合于此。

附图说明

图1:突变特异性T细胞的产生

A.产生突变特异性T细胞的方法学示意图。B.单次再刺激后克隆-10(TCR1610)的代表性链霉菌(streptamer)染色。C.在链霉菌(streptamer)阳性细胞的FACS分离之前，通过与载有肽的自体PBMCs共培养过夜，检测了大量T细胞克隆对突变肽的选择性反应性。用IFNγELISA法测定反应。

图2:突变特异性T细胞受体(TCRs)的鉴定

TCR基因盒的代表性构建体。

图3:TCR亲和力分析

A./C.当与用HLA*B07:02转导并载有不同浓度的突变肽(SEQ ID NO:2)的K562细胞共培养时，来自健康供体的TCR转导的CD8+T细胞的IFNγ响应的非线性曲线分析。对突变肽应答的可检测浓度可低至10

图4:TCR工程化T细胞的突变特异性激活

A.经TCR2207转导的T细胞在有或无HLA-B7表达的情况下针对K562细胞的突变特异性激活，也可经病毒转导以表达全长野生型或突变体(L265P)MYD88，共培养16小时后通过流式细胞术分析显示。B./C.TCR转导T细胞的比较突变特异性激活分析。ELISA法测得的IFNγ应答具有突变特异性和HLA-B7限制性应答。该表位可由人细胞加工和呈现。

图5:TCR工程化T细胞的突变特异性细胞毒性

A.与表达本发明TCR的T细胞共培养16小时的HLA-B7阳性靶细胞的存活率通过流式细胞术进行分析(显示:3种最高亲和力TCR)。将细胞门控为GFP阳性，作为野生型或突变MYD88表达的报告基因，并通过激活的Caspase-3(a-Caspase-3)的细胞内染色与可固定的死细胞染色相结合来分析生存能力。左下象限提供了存活细胞的数量。B./C.不同TCR转导的T细胞的比较细胞毒性分析的靶细胞的存活率。表达突变和HLA*B07:02的靶细胞被TCR转导的T细胞特异性杀死。细胞毒性强度与TCR亲和力密切相关。

图6:针对淋巴瘤细胞系的TCR工程化T细胞的突变特异性激活

A.在与OCI-Ly3(ABC样DLBCL，纯合子MYD88-L265P)和HBL-1(ABC样DLBCL，杂合子MYD88-L265P)淋巴瘤细胞系共培养16小时后，用2种最高亲和力TCR中的一种转导的T细胞的流式细胞仪活化分析。由于两种细胞系的HLA-B7均为阴性，因此对它们进行病毒转导以表达该抗原(显示为:“细胞系_B7”)。用HLA-B7转导的OCI-Ly3细胞被TCR工程化T细胞高度识别。针对杂合突变HBL-1细胞观察到了较弱的应答，当在共培养之前用50ng/ml人IFNγ对靶细胞预处理过夜时，这种应答稍微得到改善，已知这改善了肽的蛋白酶体加工和MHC呈递。B.TCR2304转导的T细胞的突变特异性和HLA-B7限制性激活。

图7:对淋巴瘤细胞系的突变特异性细胞毒性

A.与TCR2304转导的T细胞共培养16小时后，对OCI-Ly3淋巴瘤细胞进行流式细胞术生存力分析(如图5所示)。B.TCR2304转导的T细胞的突变特异性杀伤力。C.与HLA-B7阳性OCI-Ly3细胞共培养72小时后，TCR2304转导T细胞的抗原诱导增殖。在共培养前用CSFE标记T细胞以追踪增殖情况。

图8:通过丙氨酸扫描的TCRs的肽-MHC结合行为的表征

A.通过用丙氨酸逐一交换突变表位(SEQ ID NO:2)中的每个氨基酸进行丙氨酸扫描，以研究单个氨基酸对肽-MHC-TCR关系的影响。将所有肽分别加载到表达HLA-B7的K562细胞上，并与TCR转导的T细胞共培养16小时，以通过ELISA法测定IFNγ的生产。B.超过50％影响IFNγ反应的氨基酸位置被认为对于肽-MHC-TCR关系是重要的，并且使用在线工具Expitope将该结合基序用于靶外交叉反应性预测(Jaravine等，2017)。通过该分析对TCR2304具有预测的HLA-B7结合的肽(SEQ ID NO:141-152)再次装载在表达HLA-B7的K562细胞上，并与来自3个不同供体的TCR转导的T细胞共培养16小时。未观察到针对这些肽的交叉反应。

图9:

A.经过与SU-DHL-6(GBC样DLBCL，野生型MYD88)OCI-Ly3(ABC样DLBCL，纯合子MYD88-L265P)和TMD8(ABC样DLBCL，杂合子MYD88 L265P)淋巴瘤细胞系共培养16小时后，通过IFNγELISA法对TCR2304转导的T细胞进行活化分析。由于所有细胞系对HLA-B7均为阴性，因此对它们可以进行病毒转导以表达该抗原(显示为:“细胞系_B7”)。用HLA-B7转导的OCI-Ly3和TMD8细胞被TCR工程化T细胞高度识别。B.与经TCR2304转导的T细胞共培养16小时后，对淋巴瘤细胞进行流式细胞术生存力分析(如图5所示)，结果显示出突变特异性杀伤力。

实施例

实施例1:突变特异性T细胞的产生

PBMCs是从HLA-B7阳性的健康供血者血液中分离出来的。通过塑料粘附分离单核细胞以产生树突细胞(DC)，随后用含有800IU/ml GM-CSF和10ng/ml IL-4的1％人血清的RPMI中培养3天，随后在加入10ng/ml LPS和50ng/ml干扰素γ(IFNγ)的情况下培养未成熟树突细胞(imDC)过夜以使其成熟。然后成熟树突细胞(mDC)加载上突变肽(RPIPIKYKAM，SEQID NO:2)，并用于引发自体CD8阳性幼稚T细胞(48孔培养板中5×10

产生突变特异性T细胞的方法学示意图如图1A所示。图1B示出了单次再刺激后，克隆-10(TCR1610)的代表性链霉菌(streptamer)染色情况。

在链霉菌(streptamer)阳性或肽反应性细胞的FACS分离之前，通过与负载肽的自体PBMCs共培养过夜，检测出了大量T细胞克隆对突变肽的选择性反应性。用IFNγELISA法测定应答(图1C)。

实施例2:突变特异性T细胞受体(TCR)的鉴定

在用IFNγELISA进行最终检测后，通过FACS从每个反应性T细胞克隆中分别分离出活的CD8和链霉菌(streptamer)阳性细胞。进行总RNA分离。TCRα和β基因通过5'-RACEPCR扩增并克隆。对来自于每个TCR链的多个细菌克隆进行测序，以分析T细胞克隆性。表1示出了MyD88-L265P突变特异性TCR的CDR3、其序列号和基因亚型，表2示出了CDR1和CDR2的氨基酸序列列表。

表1

表2

将鉴定出的可变结构域与鼠恒定结构域的序列相结合，用于TCR的实验表征，并通过密码子优化进行合成，以在人细胞中表达。由p2A信号分离的编码TRBV结合鼠TRBC和TRAV结合TRAC的TCR基因试剂盒按照Obenaus等人(2015)和Sommermeyer等人(2010)所详细描述的方法进行构建(参见图2)。

实施例3:TCR亲和力分析

来自于HLA-B7阳性健康供体的外周CD8+T细胞被成功转导以表达突变特异性TCR，无分裂(fratricide)迹象，并与经HLA*B07:02转导并负载不同浓度突变肽的K562细胞共培养。用ELISA法测定IFNγ反应。图3A/C示出了TCR工程化T细胞对突变肽滴定的IFNγ响应的非线性曲线分析。对突变肽应答的可检测浓度低至10

表3:在HLA-B*07:02的情况下，TCR对SEQ ID NO:2的亲和力(显示为K

TCR2304和TCR2207对突变肽的亲和力最高，对SEQ ID NO:2的K

实施例4:TCR工程化T细胞的突变特异性激活

对含有或不含HLA-B7的K562细胞进行病毒转导，以表达全长野生型或突变体(L265P)MYD88，所述突变体通过p2A偶联至表达标记GFP并用作评估TCR工程T细胞细胞毒性反应性的人工靶细胞。当共培养16小时时，6个TCR实现了表达突变MyD88的靶细胞的识别，而无需事先加载肽，这表明该表位可被人细胞成功加工和呈递。

图4A通过流式细胞术分析染色活化标记CD137，示出了用TCR之一的TCR2207转导的T细胞的突变特异性活化。图4B/C示出了通过ELISA法测量用不同TCR转导的T细胞的比较的突变特异性IFNγ应答，示出了突变特异性和HLA-B7限制性应答。

实施例5:TCR转导的T细胞的突变特异性细胞毒性

在有或无HLA-B7的相同启动子控制下，将经TCR转导的T细胞与表达全长野生型或用p2A连接至GFP(作为表达标记)的突变型MYD88的K562细胞共培养16小时。表达突变和HLA*B07:02的靶细胞被TCR转导的T细胞特异性杀死。图5A显示与表达3种最高亲和力TCR之一的T细胞共培养16小时的HLA-B7阳性靶细胞的存活率，其通过流式细胞术进行分析。将细胞门控为GFP阳性，作为野生型或突变MYD88表达的报告基因，并通过激活的Caspase-3(a-Caspase-3)的细胞内染色与可固定的死细胞染色相结合来分析生存能力。图5B/C显示用不同TCR转导的T细胞的比较细胞毒性分析的靶细胞的生存能力。

实施例6:针对淋巴瘤细胞系的TCR工程化T细胞的突变特异性激活

为了研究TCR工程化T细胞在更类自然的表达水平中抗突变的功能潜力，在与OCI-Ly3(ABC样DLBCL，纯合MYD88-L265P)或HBL-1(ABC样DLBCL，杂合MYD88-L265P)淋巴瘤细胞系共培养16小时后，通过流式细胞术分析了用2种最高亲和力TCR之一转导的T细胞的活化情况。由于两种细胞系对HLA-B7均为阴性，因此对它们进行病毒转导以表达该抗原(显示为:“细胞系_B7”)。用HLA-B7转导的OCI-Ly3细胞被TCR工程化T细胞高度识别。针对杂合突变HBL-1细胞观察到较弱的应答，当在共培养之前用50ng/ml人IFNγ对靶细胞预处理过夜时，这种应答略微改善。已知IFNγ可改善肽的蛋白酶体加工和某些情况下的MHC呈递。

图6A示出了针对OCI-Ly3和HBL-1细胞的T细胞应答的流式细胞术分析。图6B示出了用TCR2304转导的T细胞对OCI-Ly3细胞的突变特异性和HLA-B7限制性激活。

实施例7:针对淋巴瘤细胞系的突变特异性细胞毒性

用TCR2304转导的T细胞用CSFE标记，并与含或不含HLA-B7的OCI-Ly3细胞共培养。靶淋巴瘤细胞的存活能力按照前面实施例5中所述进行分析。

图7A示出了与经TCR2304转导的T细胞共培养16小时后，有或无HLA-B7表达的OCI-Ly3细胞的存活率。图7B显示TCR2304转导的T细胞对突变特异性淋巴瘤细胞的杀伤作用。图7C示出了与HLA-B7阳性OCI-Ly3细胞共培养72小时后，TCR2304转导的T细胞的抗原诱导增殖，因为CSFE荧光强度降低表明细胞分裂仅发生在TCR转导细胞中。

实施例8:通过丙氨酸扫描的TCRs的肽-MHC结合行为表征

通过用丙氨酸逐一交换突变表位(SEQ ID NO:2)中的每个氨基酸进行丙氨酸扫描，以研究单个氨基酸对肽-MHC-TCR关系的影响。将所有肽分别加载到表达HLA-B7的K562细胞上，并与TCR转导的T细胞共培养16小时。不同数量和组的氨基酸被观察到并被认为对于不同TCR(结合基序)的识别是必不可少的。然而，反映突变体MyD88上氨基酸取代L265P的2位脯氨酸对所有TCR来说是绝对必需的，证明了TCR对突变的特异性(图8A)。作为安全筛选的一部分，使用在线工具Expitope(Jaravine等人,2017)单独分析了与其他人类蛋白质的结合序列相似性可能引起的交叉反应的可能性。对于TCR2304，该分析显示人蛋白质组中有12种肽具有结合基序相似性(最多5个错配位置)和对HLA-B7的不同亲和力预测(SEQ IDNO:141-152)。再次将所有这些肽加载到表达HLA-B7的K562细胞上，用于与来自3个不同供体的经TCR转导的T细胞共培养。未观察到针对任何肽的TCR识别(图8B)。

示例9:

为了更好地了解TCR识别和针对天然携带MYD88 L265P突变的细胞的T细胞功能，将3个不同健康供体的TCR2304转导T细胞与DLBCL细胞系共培养16小时；SU-DHL-6(野生型MYD88)、OCI-Ly3(纯合子MYD88 L265P)或TMD8(杂合子MYD88 L265P)，有或没有HLA-B7表达。

图9A示出了HLA-B7表达的OCI-Ly3和TMD8细胞系的突变特异性识别。具有HLA-B7的SU-DHL-6对照细胞系仅在共培养前加载突变肽时被识别。

图9B示出了TCR转导的T细胞对OCI-Ly3和TMD8细胞系的有效突变特异性和HLA限制性杀伤力。

SEQUENCE LISTING

<110> 柏林夏瑞蒂医科大学

<120> 针对过继性T细胞疗法中的突变MYD88L265P蛋白表位的特异性T细胞受体

<130> 11731 P 6821 EP

<150> EP19152801.7

<151> 2019-01-21

<160> 152

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 9

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> MYD88 L265P 9mer

<400> 1

Arg Pro Ile Pro Ile Lys Tyr Lys Ala

1 5

<210> 2

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> MYD88 L265P 10mer

<400> 2

Arg Pro Ile Pro Ile Lys Tyr Lys Ala Met

1 5 10

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> wt MYD88 10mer

<400> 3

Arg Leu Ile Pro Ile Lys Tyr Lys Ala Met

1 5 10

<210> 4

<400> 4

000

<210> 5

<211> 136

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 鼠恒定区TCR alpha链

<400> 5

Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp Pro Arg Ser

1 5 10 15

Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Ile Asn

20 25 30

Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp Lys Thr Val

35 40 45

Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala Ile Ala Trp

50 55 60

Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys Glu Thr Asn

65 70 75 80

Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala Thr Leu Thr Glu

85 90 95

Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Ser Val

100 105 110

Met Gly Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu

115 120 125

Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser

130 135

<210> 6

<211> 140

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 小鼠最小恒定区-TCR alpha链

<400> 6

Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser

1 5 10 15

Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn

20 25 30

Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr Val

35 40 45

Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp

50 55 60

Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile

65 70 75 80

Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Val

85 90 95

Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln

100 105 110

Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly

115 120 125

Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser

130 135 140

<210> 7

<211> 140

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人类恒定区- TCR alpha链

<400> 7

Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser

1 5 10 15

Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn

20 25 30

Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr Val

35 40 45

Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp

50 55 60

Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile

65 70 75 80

Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp Val

85 90 95

Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln

100 105 110

Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly

115 120 125

Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser

130 135 140

<210> 8

<211> 173

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 鼠恒定区-TCR beta链mTCRBC2

<400> 8

Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu Phe Glu Pro

1 5 10 15

Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu

20 25 30

Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn

35 40 45

Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Ala Tyr Lys

50 55 60

Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala

65 70 75 80

Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe

85 90 95

His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser Pro Lys Pro

100 105 110

Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly

115 120 125

Ile Thr Ser Ala Ser Tyr His Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu

130 135 140

Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser

145 150 155 160

Gly Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Lys Lys Asn Ser

165 170

<210> 9

<211> 179

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 小鼠最小恒定区-TCR beta链

<400> 9

Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Lys Val Ala Val Phe Glu Pro

1 5 10 15

Ser Lys Ala Glu Ile Ala His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu

20 25 30

Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn

35 40 45

Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys

50 55 60

Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu

65 70 75 80

Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys

85 90 95

Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg

115 120 125

Ala Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr His Gln Gly Val Leu Ser

130 135 140

Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala

145 150 155 160

Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp

165 170 175

Ser Arg Gly

<210> 10

<211> 179

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人类恒定区-TCR beta链TCRBC2

<400> 10

Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Lys Val Ala Val Phe Glu Pro

1 5 10 15

Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu

20 25 30

Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn

35 40 45

Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys

50 55 60

Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu

65 70 75 80

Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys

85 90 95

Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg

115 120 125

Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser

130 135 140

Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala

145 150 155 160

Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp

165 170 175

Ser Arg Gly

<210> 11

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 alpha链TCR2207

<400> 11

Thr Ser Gly Phe Asn Gly

1 5

<210> 12

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 alpha链TCR2207

<400> 12

Asn Val Leu Asp Gly Leu

1 5

<210> 13

<211> 12

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 alpha链TCR2207

<400> 13

Cys Ala Val Asp Val Gly Tyr Ser Thr Leu Thr Phe

1 5 10

<210> 14

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 beta链TCR2207

<400> 14

Asp Phe Gln Ala Thr Thr

1 5

<210> 15

<211> 7

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 beta链TCR2207

<400> 15

Ser Asn Glu Gly Ser Lys Ala

1 5

<210> 16

<211> 16

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 beta链TCR2207

<400> 16

Cys Ser Ala Arg Asp Arg Ser Gly Thr Leu Gly Gly Glu Leu Phe Phe

1 5 10 15

<210> 17

<211> 127

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2207的 alpha链可变区

<400> 17

Met Trp Gly Val Phe Leu Leu Tyr Val Ser Met Lys Met Gly Gly Thr

1 5 10 15

Thr Gly Gln Asn Ile Asp Gln Pro Thr Glu Met Thr Ala Thr Glu Gly

20 25 30

Ala Ile Val Gln Ile Asn Cys Thr Tyr Gln Thr Ser Gly Phe Asn Gly

35 40 45

Leu Phe Trp Tyr Gln Gln His Ala Gly Glu Ala Pro Thr Phe Leu Ser

50 55 60

Tyr Asn Val Leu Asp Gly Leu Glu Glu Lys Gly Arg Phe Ser Ser Phe

65 70 75 80

Leu Ser Arg Ser Lys Gly Tyr Ser Tyr Leu Leu Leu Lys Glu Leu Gln

85 90 95

Met Lys Asp Ser Ala Ser Tyr Leu Cys Ala Val Asp Val Gly Tyr Ser

100 105 110

Thr Leu Thr Phe Gly Lys Gly Thr Met Leu Leu Val Ser Pro Asp

115 120 125

<210> 18

<211> 132

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2207的 beta链可变区

<400> 18

Met Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Pro Gly Ser Gly Leu Gly Ala

1 5 10 15

Val Val Ser Gln His Pro Ser Trp Val Ile Cys Lys Ser Gly Thr Ser

20 25 30

Val Lys Ile Glu Cys Arg Ser Leu Asp Phe Gln Ala Thr Thr Met Phe

35 40 45

Trp Tyr Arg Gln Phe Pro Lys Gln Ser Leu Met Leu Met Ala Thr Ser

50 55 60

Asn Glu Gly Ser Lys Ala Thr Tyr Glu Gln Gly Val Glu Lys Asp Lys

65 70 75 80

Phe Leu Ile Asn His Ala Ser Leu Thr Leu Ser Thr Leu Thr Val Thr

85 90 95

Ser Ala His Pro Glu Asp Ser Ser Phe Tyr Ile Cys Ser Ala Arg Asp

100 105 110

Arg Ser Gly Thr Leu Gly Gly Glu Leu Phe Phe Gly Glu Gly Ser Arg

115 120 125

Leu Thr Val Leu

130

<210> 19

<211> 381

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2207的 alpha链可变区-密码子优化的

<400> 19

atgtggggcg tgttcctgct gtacgtgtcc atgaagatgg gcggcaccac cggccagaac 60

atcgatcagc ctacagagat gaccgccacc gagggcgcca tcgtgcagat caattgcacc 120

taccagacca gcggcttcaa cgggctgttt tggtatcagc agcacgccgg cgaggcccct 180

acattcctga gctacaatgt gctggacggc ctcgaggaaa agggcagatt ctccagcttc 240

ctgagcagaa gcaagggcta ctcctacctg ctgctgaaag aactgcagat gaaggacagc 300

gcctcttacc tgtgcgccgt ggatgtgggc tacagcacac tgacatttgg caagggcacc 360

atgctgctcg tgtccccaga c 381

<210> 20

<211> 396

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2207的 beta链可变区-密码子优化的

<400> 20

atgttgttgt tgctgttgct cctcggacct ggctctggac tgggagctgt ggtttctcag 60

cacccctctt gggtcatctg caagagcggc accagcgtga agatcgagtg cagaagcctg 120

gacttccagg ccaccacaat gttctggtac agacagttcc ccaagcagag cctgatgctg 180

atggccacct ctaacgaggg cagcaaggcc acatatgagc agggcgtcga gaaggacaag 240

ttcctgatca accacgccag cctgacactg agcaccctga cagtgacaag cgcccatcct 300

gaggacagca gcttctacat ctgcagcgcc agagacagaa gcggcacact tggcggcgag 360

ctgttttttg gcgagggctc tagactgacc gtgctg 396

<210> 21

<211> 7

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 alpha链TCR2205

<400> 21

Asn Ile Ala Thr Asn Asp Tyr

1 5

<210> 22

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 alpha链TCR2205

<400> 22

Gly Tyr Lys Thr Lys

1 5

<210> 23

<211> 14

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 alpha链TCR2205

<400> 23

Cys Leu Val Gly Arg Asp Gly Gly Ser Tyr Ile Pro Thr Phe

1 5 10

<210> 24

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 beta链TCR2205

<400> 24

Ser Gly Asp Leu Ser

1 5

<210> 25

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 beta链TCR2205

<400> 25

Tyr Tyr Asn Gly Glu Glu

1 5

<210> 26

<211> 14

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 beta链TCR2205

<400> 26

Cys Ala Ser Ser Ala Gly Gln Gly Ala Tyr Glu Gln Tyr Phe

1 5 10

<210> 27

<211> 129

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2205的 alpha链可变区

<400> 27

Met Arg Gln Val Ala Arg Val Ile Val Phe Leu Thr Leu Ser Thr Leu

1 5 10 15

Ser Leu Ala Lys Thr Thr Gln Pro Ile Ser Met Asp Ser Tyr Glu Gly

20 25 30

Gln Glu Val Asn Ile Thr Cys Ser His Asn Asn Ile Ala Thr Asn Asp

35 40 45

Tyr Ile Thr Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Ser Gln Gly Pro Arg Phe Ile

50 55 60

Ile Gln Gly Tyr Lys Thr Lys Val Thr Asn Glu Val Ala Ser Leu Phe

65 70 75 80

Ile Pro Ala Asp Arg Lys Ser Ser Thr Leu Ser Leu Pro Arg Val Ser

85 90 95

Leu Ser Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Val Gly Arg Asp Gly Gly

100 105 110

Ser Tyr Ile Pro Thr Phe Gly Arg Gly Thr Ser Leu Ile Val His Pro

115 120 125

Tyr

<210> 28

<211> 132

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2205的 beta链可变区

<400> 28

Met Gly Phe Arg Leu Leu Cys Cys Val Ala Phe Cys Leu Leu Gly Ala

1 5 10 15

Gly Pro Val Asp Ser Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys His Leu Ile Thr

20 25 30

Ala Thr Gly Gln Arg Val Thr Leu Arg Cys Ser Pro Arg Ser Gly Asp

35 40 45

Leu Ser Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Ser Leu Asp Gln Gly Leu Gln Phe

50 55 60

Leu Ile His Tyr Tyr Asn Gly Glu Glu Arg Ala Lys Gly Asn Ile Leu

65 70 75 80

Glu Arg Phe Ser Ala Gln Gln Phe Pro Asp Leu His Ser Glu Leu Asn

85 90 95

Leu Ser Ser Leu Glu Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser

100 105 110

Ser Ala Gly Gln Gly Ala Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg

115 120 125

Leu Thr Val Thr

130

<210> 29

<211> 387

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2205的 alpha链可变区-密码子优化的

<400> 29

atgagacagg tggccagagt gatcgtgttc ctgacactga gcaccctgag cctggccaag 60

accacacagc ccatcagcat ggacagctac gagggccaag aagtgaacat cacctgtagc 120

cacaacaata tcgccaccaa cgactacatc acgtggtatc aacagttccc cagtcaaggc 180

cctcggttca tcatccaagg ctacaagacc aaagtgacca acgaggtggc ctctctgttc 240

atccccgccg acagaaagag cagcaccctg tctctgccta gagtgtccct gagcgatacc 300

gccgtgtact actgtctcgt gggcagagat ggcggcagct acatccctac atttggcaga 360

ggcacaagcc tgatcgtgca cccctac 387

<210> 30

<211> 396

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2205的 beta链可变区-密码子优化的

<400> 30

atgggtttta gactgctgtg ctgcgtggcc ttctgtctgc ttggagctgg ccctgtggat 60

agcggcgtta cccagacacc taagcacctg atcacagcca caggccagcg cgtgaccctg 120

agatgttctc ctagaagcgg cgacctgagc gtgtactggt atcagcagtc tctggaccag 180

ggcctgcagt tcctgatcca ctactacaac ggcgaggaaa gagccaaggg caacatcctg 240

gaacggttca gcgcccagca gttcccagat ctgcacagcg agctgaacct gagcagcctg 300

gaactgggag atagcgccct gtacttctgt gcctcttctg ctggacaggg cgcctacgag 360

cagtattttg gccctggcac cagactgacc gtgacc 396

<210> 31

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 alpha链TCR1610

<400> 31

Asp Ser Ala Ile Tyr Asn

1 5

<210> 32

<211> 7

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 alpha链TCR1610

<400> 32

Ile Gln Ser Ser Gln Arg Glu

1 5

<210> 33

<211> 13

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 alpha链TCR1610

<400> 33

Cys Ala Pro Leu Gly Gly Gly Tyr Asn Lys Leu Ile Phe

1 5 10

<210> 34

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 beta链TCR1610

<400> 34

Met Asn His Asn Tyr

1 5

<210> 35

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 beta链TCR1610

<400> 35

Ser Val Gly Ala Gly Ile

1 5

<210> 36

<211> 14

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 beta链TCR1610

<400> 36

Cys Ala Ser Arg Leu Pro Thr Thr Asp Glu Lys Leu Phe Phe

1 5 10

<210> 37

<211> 131

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR1610的 alpha链可变区

<400> 37

Met Glu Thr Leu Leu Gly Leu Leu Ile Leu Trp Leu Gln Leu Gln Trp

1 5 10 15

Val Ser Ser Lys Gln Glu Val Thr Gln Ile Pro Ala Ala Leu Ser Val

20 25 30

Pro Glu Gly Glu Asn Leu Val Leu Asn Cys Ser Phe Thr Asp Ser Ala

35 40 45

Ile Tyr Asn Leu Gln Trp Phe Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly Leu Thr

50 55 60

Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Ser Gln Arg Glu Gln Thr Ser Gly Arg

65 70 75 80

Leu Asn Ala Ser Leu Asp Lys Ser Ser Gly Arg Ser Thr Leu Tyr Ile

85 90 95

Ala Ala Ser Gln Pro Gly Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Pro Leu

100 105 110

Gly Gly Gly Tyr Asn Lys Leu Ile Phe Gly Ala Gly Thr Arg Leu Ala

115 120 125

Val His Pro

130

<210> 38

<211> 132

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR1610的 beta链可变区

<400> 38

Met Ser Ile Ser Leu Leu Cys Cys Ala Ala Phe Pro Leu Leu Trp Ala

1 5 10 15

Gly Pro Val Asn Ala Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys Phe Arg Ile Leu

20 25 30

Lys Ile Gly Gln Ser Met Thr Leu Gln Cys Ala Gln Asp Met Asn His

35 40 45

Asn Tyr Met Tyr Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Met Gly Leu Lys Leu

50 55 60

Ile Tyr Tyr Ser Val Gly Ala Gly Ile Thr Asp Lys Gly Glu Val Pro

65 70 75 80

Asn Gly Tyr Asn Val Ser Arg Ser Thr Thr Glu Asp Phe Pro Leu Arg

85 90 95

Leu Glu Leu Ala Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Tyr Phe Cys Ala Ser

100 105 110

Arg Leu Pro Thr Thr Asp Glu Lys Leu Phe Phe Gly Ser Gly Thr Gln

115 120 125

Leu Ser Val Leu

130

<210> 39

<211> 393

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR1610的 alpha链可变区-密码子优化的

<400> 39

atggaaacac tgctgggcct gctgatcctg tggctgcaac tgcaatgggt gtcctccaag 60

caagaagtga ctcagatccc tgccgctctg tccgtgcctg aaggcgaaaa cctggtcctg 120

aactgcagct tcaccgacag cgccatctac aacctgcagt ggttcaggca ggatccaggc 180

aagggactga cctctctgct gctgattcag agcagccaga gagagcagac ctccggcaga 240

ctgaatgcca gcctggataa gagcagcggc cggtctacac tgtatatcgc cgcttctcag 300

ccaggcgata gcgccacata tctgtgtgct cctctcggcg gaggctacaa caagctgatt 360

ttcggcgctg gcaccagact ggccgtgcat cct 393

<210> 40

<211> 396

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR1610的 beta链可变区-密码子优化的

<400> 40

atgtctatta gcctgctgtg ctgtgccgcc tttcctctgc tttgggccgg acctgttaat 60

gccggcgtga cccagacacc taagttccgg atcctgaaga tcggccagag catgaccctg 120

cagtgcgccc aggacatgaa ccacaactac atgtactggt acagacagga ccccggcatg 180

ggcctgaagc tgatctacta ttctgtcgga gccggcatca ccgacaaggg cgaagtgcct 240

aatggctaca acgtgtccag aagcaccacc gaggacttcc ctctgcgact ggaactggct 300

gccccatctc agaccagcgt gtacttctgt gccagcagac tgcccaccac cgacgagaag 360

ctgttttttg gcagcggcac ccagctgagc gtgctg 396

<210> 41

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 alpha链TCR1605

<400> 41

Asn Ser Ala Ser Asp Tyr

1 5

<210> 42

<211> 7

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 alpha链TCR1605

<400> 42

Ile Arg Ser Asn Met Asp Lys

1 5

<210> 43

<211> 13

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 alpha链TCR1605

<400> 43

Cys Ala Glu Gly Thr Gly Ser Ala Arg Gln Leu Thr Phe

1 5 10

<210> 44

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 beta链TCR1605

<400> 44

Met Asp His Glu Asn

1 5

<210> 45

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 beta链TCR1605

<400> 45

Ser Tyr Asp Val Lys Met

1 5

<210> 46

<211> 20

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 beta链TCR1605

<400> 46

Cys Ala Ser Gly Pro Phe Arg Asp Ser Val Leu Thr Leu Val Ala Asn

1 5 10 15

Val Leu Thr Phe

20

<210> 47

<211> 132

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR1605的 alpha链可变区

<400> 47

Met Ala Gly Ile Arg Ala Leu Phe Met Tyr Leu Trp Leu Gln Leu Asp

1 5 10 15

Trp Val Ser Arg Gly Glu Ser Val Gly Leu His Leu Pro Thr Leu Ser

20 25 30

Val Gln Glu Gly Asp Asn Ser Ile Ile Asn Cys Ala Tyr Ser Asn Ser

35 40 45

Ala Ser Asp Tyr Phe Ile Trp Tyr Lys Gln Glu Ser Gly Lys Gly Pro

50 55 60

Gln Phe Ile Ile Asp Ile Arg Ser Asn Met Asp Lys Arg Gln Gly Gln

65 70 75 80

Arg Val Thr Val Leu Leu Asn Lys Thr Val Lys His Leu Ser Leu Gln

85 90 95

Ile Ala Ala Thr Gln Pro Gly Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Glu

100 105 110

Gly Thr Gly Ser Ala Arg Gln Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Gln Leu

115 120 125

Thr Val Leu Pro

130

<210> 48

<211> 138

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR1605的 beta链可变区

<400> 48

Met Gly Ile Arg Leu Leu Cys Arg Val Ala Phe Cys Phe Leu Ala Val

1 5 10 15

Gly Leu Val Asp Val Lys Val Thr Gln Ser Ser Arg Tyr Leu Val Lys

20 25 30

Arg Thr Gly Glu Lys Val Phe Leu Glu Cys Val Gln Asp Met Asp His

35 40 45

Glu Asn Met Phe Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Leu Gly Leu Arg Leu

50 55 60

Ile Tyr Phe Ser Tyr Asp Val Lys Met Lys Glu Lys Gly Asp Ile Pro

65 70 75 80

Glu Gly Tyr Ser Val Ser Arg Glu Lys Lys Glu Arg Phe Ser Leu Ile

85 90 95

Leu Glu Ser Ala Ser Thr Asn Gln Thr Ser Met Tyr Leu Cys Ala Ser

100 105 110

Gly Pro Phe Arg Asp Ser Val Leu Thr Leu Val Ala Asn Val Leu Thr

115 120 125

Phe Gly Ala Gly Ser Arg Leu Thr Val Leu

130 135

<210> 49

<211> 396

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR1605的 alpha链可变区-密码子优化的

<400> 49

atggccggaa tcagagccct gttcatgtat ctgtggctgc agctggactg ggtgtccagg 60

ggagaatctg tcggactgca tctgcccaca ctgagcgtgc aagagggcga caacagcatc 120

atcaactgcg cctacagcaa cagcgcctcc gactacttca tctggtacaa gcaagagagc 180

ggcaagggcc ctcagttcat catcgacatc cggtccaaca tggacaagcg gcaaggccag 240

agagtgaccg tcctgctgaa caagaccgtg aagcacctga gcctgcagat cgccgctaca 300

cagcctggcg atagcgccgt gtacttttgt gctgaaggca ccggaagcgc cagacagctg 360

acatttggca gcggaaccca gctcacagtg ctgccc 396

<210> 50

<211> 414

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR1605的 beta链可变区-密码子优化的

<400> 50

atgggaatta gactgctgtg cagagtggcc ttctgcttcc tggctgttgg cctggtggac 60

gtgaaagtga cccagagcag cagatacctg gtcaagagaa ccggcgagaa ggtgttcctg 120

gaatgcgtgc aggacatgga ccacgagaat atgttctggt acagacagga ccccggcctg 180

ggcctgagac tgatctactt cagctacgac gtgaagatga aggaaaaggg cgacatcccc 240

gagggctaca gcgtgtccag agagaagaaa gagcggttca gcctgatcct ggaaagcgcc 300

agcaccaacc agaccagcat gtacctgtgt gccagcggac ccttcagaga cagcgtgctg 360

acactggtgg ccaacgtgct gacttttggc gccggaagca gactgaccgt gctg 414

<210> 51

<211> 7

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 alpha链TCR2202

<400> 51

Asn Ile Ala Thr Asn Asp Tyr

1 5

<210> 52

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 alpha链TCR2202

<400> 52

Gly Tyr Glu Thr Lys

1 5

<210> 53

<211> 13

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 alpha链TCR2202

<400> 53

Cys Leu Ser Leu Ser Asp Ser Asn Tyr Gln Leu Ile Trp

1 5 10

<210> 54

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 beta链TCR2202

<400> 54

Ser Gly Asp Leu Ser

1 5

<210> 55

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 beta链TCR2202

<400> 55

Tyr Tyr Asn Gly Glu Glu

1 5

<210> 56

<211> 14

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 beta链TCR 2202

<400> 56

Cys Ala Ser Ser Val Gly Gln Gly Ser Tyr Glu Gln Tyr Phe

1 5 10

<210> 57

<211> 128

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2202的 alpha链可变区

<400> 57

Met Arg Gln Val Ala Arg Val Ile Val Phe Leu Thr Leu Ser Thr Leu

1 5 10 15

Ser Leu Ala Lys Thr Thr Gln Pro Ile Ser Met Asp Ser Tyr Glu Gly

20 25 30

Gln Glu Val Asn Ile Thr Cys Ser His Asn Asn Ile Ala Thr Asn Asp

35 40 45

Tyr Ile Thr Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Ser Gln Gly Pro Arg Phe Ile

50 55 60

Ile Gln Gly Tyr Lys Thr Lys Val Thr Asn Glu Val Ala Ser Leu Phe

65 70 75 80

Ile Pro Ala Asp Arg Lys Ser Ser Thr Leu Ser Leu Pro Arg Val Ser

85 90 95

Leu Ser Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Ser Leu Ser Asp Ser Asn

100 105 110

Tyr Gln Leu Ile Trp Gly Ala Gly Thr Lys Leu Ile Ile Lys Pro Asp

115 120 125

<210> 58

<211> 132

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2202的 beta链可变区

<400> 58

Met Gly Phe Arg Leu Leu Cys Cys Val Ala Phe Cys Leu Leu Gly Ala

1 5 10 15

Gly Pro Val Asp Ser Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys His Leu Ile Thr

20 25 30

Ala Thr Gly Gln Arg Val Thr Leu Arg Cys Ser Pro Arg Ser Gly Asp

35 40 45

Leu Ser Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Ser Leu Asp Gln Gly Leu Gln Phe

50 55 60

Leu Ile Gln Tyr Tyr Asn Gly Glu Glu Arg Ala Lys Gly Asn Ile Leu

65 70 75 80

Glu Arg Phe Ser Ala Gln Gln Phe Pro Asp Leu His Ser Glu Leu Asn

85 90 95

Leu Ser Ser Leu Glu Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser

100 105 110

Ser Val Gly Gln Gly Ser Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg

115 120 125

Leu Thr Val Thr

130

<210> 59

<211> 384

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2202的 alpha链可变区-密码子优化的

<400> 59

atgagacagg tggccagagt gatcgtgttc ctgacactga gcaccctgag cctggccaag 60

accacacagc ccatcagcat ggactcctac gagggccaag aagtgaacat cacctgtagc 120

cacaacaata tcgccaccaa cgactacatc acgtggtatc aacagttccc cagtcaaggc 180

cctcggttca tcatccaagg ctacaagacc aaagtgacca acgaggtggc ctctctgttc 240

atccccgccg atagaaagag cagcaccctg tctctgccca gagtgtccct gagcgatacc 300

gccgtgtact actgtctgag cctgtccgac tccaactacc agctgatttg gggagccggc 360

accaagctga tcatcaagcc cgac 384

<210> 60

<211> 396

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2202的 beta链可变区-密码子优化的

<400> 60

Ala Thr Gly Gly Gly Thr Thr Thr Thr Ala Gly Ala Cys Thr Gly Cys

1 5 10 15

Thr Gly Thr Gly Cys Thr Gly Cys Gly Thr Gly Gly Cys Cys Thr Thr

20 25 30

Cys Thr Gly Thr Cys Thr Gly Cys Thr Thr Gly Gly Ala Gly Cys Thr

35 40 45

Gly Gly Cys Cys Cys Thr Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ala Gly Cys Gly

50 55 60

Gly Cys Gly Thr Thr Ala Cys Cys Cys Ala Gly Ala Cys Ala Cys Cys

65 70 75 80

Thr Ala Ala Gly Cys Ala Cys Cys Thr Gly Ala Thr Cys Ala Cys Ala

85 90 95

Gly Cys Cys Ala Cys Ala Gly Gly Cys Cys Ala Gly Cys Gly Cys Gly

100 105 110

Thr Gly Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Ala Thr Gly Thr Thr Cys

115 120 125

Thr Cys Cys Thr Ala Gly Ala Ala Gly Cys Gly Gly Cys Gly Ala Cys

130 135 140

Cys Thr Gly Ala Gly Cys Gly Thr Gly Thr Ala Cys Thr Gly Gly Thr

145 150 155 160

Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Thr Cys Thr Cys Thr Gly Gly Ala

165 170 175

Cys Cys Ala Gly Gly Gly Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Thr Thr Cys

180 185 190

Cys Thr Gly Ala Thr Cys Cys Ala Gly Thr Ala Cys Thr Ala Cys Ala

195 200 205

Ala Cys Gly Gly Cys Gly Ala Gly Gly Ala Ala Ala Gly Ala Gly Cys

210 215 220

Cys Ala Ala Gly Gly Gly Cys Ala Ala Cys Ala Thr Cys Cys Thr Gly

225 230 235 240

Gly Ala Ala Cys Gly Gly Thr Thr Cys Ala Gly Cys Gly Cys Cys Cys

245 250 255

Ala Gly Cys Ala Gly Thr Thr Cys Cys Cys Ala Gly Ala Thr Cys Thr

260 265 270

Gly Cys Ala Cys Ala Gly Cys Gly Ala Gly Cys Thr Gly Ala Ala Cys

275 280 285

Cys Thr Gly Ala Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Ala Ala Cys

290 295 300

Thr Gly Gly Gly Ala Gly Ala Thr Ala Gly Cys Gly Cys Cys Cys Thr

305 310 315 320

Gly Thr Ala Cys Thr Thr Cys Thr Gly Thr Gly Cys Cys Thr Cys Thr

325 330 335

Thr Cys Thr Gly Thr Cys Gly Gly Cys Cys Ala Gly Gly Gly Cys Ala

340 345 350

Gly Cys Thr Ala Cys Gly Ala Gly Cys Ala Gly Thr Ala Thr Thr Thr

355 360 365

Thr Gly Gly Cys Cys Cys Thr Gly Gly Cys Ala Cys Cys Ala Gly Ala

370 375 380

Cys Thr Gly Ala Cys Cys Gly Thr Gly Ala Cys Cys

385 390 395

<210> 61

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 alpha链TCR2219

<400> 61

Lys Ala Leu Tyr Ser

1 5

<210> 62

<211> 7

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 alpha链TCR2219

<400> 62

Leu Leu Lys Gly Gly Glu Gln

1 5

<210> 63

<211> 15

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 alpha链TCR2219

<400> 63

Cys Gly Thr Ala His Leu Arg Ala Gly Ser Tyr Gln Leu Thr Phe

1 5 10 15

<210> 64

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 beta链TCR2219

<400> 64

Met Asn His Glu Tyr

1 5

<210> 65

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 beta链TCR2219

<400> 65

Ser Met Asn Val Glu Val

1 5

<210> 66

<211> 16

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 beta链TCR2219

<400> 66

Cys Ala Ser Ser Ser Ser Ser Gly Gly Ala Phe Asn Glu Gln Phe Phe

1 5 10 15

<210> 67

<211> 134

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2219的 alpha链可变区

<400> 67

Met Glu Thr Leu Leu Lys Val Leu Ser Gly Thr Leu Leu Trp Gln Leu

1 5 10 15

Thr Trp Val Arg Ser Gln Gln Pro Val Gln Ser Pro Gln Ala Val Ile

20 25 30

Leu Arg Glu Gly Glu Asp Ala Val Ile Asn Cys Ser Ser Ser Lys Ala

35 40 45

Leu Tyr Ser Val His Trp Tyr Arg Gln Lys His Gly Glu Ala Pro Val

50 55 60

Phe Leu Met Ile Leu Leu Lys Gly Gly Glu Gln Met Arg His Glu Lys

65 70 75 80

Ile Phe Ala Ser Phe Asn Glu Lys Lys Gln Gln Ser Ser Leu Tyr Leu

85 90 95

Thr Ala Ser Gln Leu Ser Tyr Ser Gly Thr Tyr Phe Cys Gly Thr Ala

100 105 110

His Leu Arg Ala Gly Ser Tyr Gln Leu Thr Phe Gly Lys Gly Thr Lys

115 120 125

Leu Ser Val Ile Pro Asn

130

<210> 68

<211> 134

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2219的 beta链可变区

<400> 68

Met Gly Pro Gln Leu Leu Gly Tyr Val Val Leu Cys Leu Leu Gly Ala

1 5 10 15

Gly Pro Leu Glu Ala Gln Val Thr Gln Asn Pro Arg Tyr Leu Ile Thr

20 25 30

Val Thr Gly Lys Lys Leu Thr Val Thr Cys Ser Gln Asn Met Asn His

35 40 45

Glu Tyr Met Ser Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Leu Gly Leu Arg Gln

50 55 60

Ile Tyr Tyr Ser Met Asn Val Glu Val Thr Asp Lys Gly Asp Val Pro

65 70 75 80

Glu Gly Tyr Lys Val Ser Arg Lys Glu Lys Arg Asn Phe Pro Leu Ile

85 90 95

Leu Glu Ser Pro Ser Pro Asn Gln Thr Ser Leu Tyr Phe Cys Ala Ser

100 105 110

Ser Ser Ser Ser Gly Gly Ala Phe Asn Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly

115 120 125

Thr Arg Leu Thr Val Leu

130

<210> 69

<211> 402

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2219的 alpha链可变区-密码子优化的

<400> 69

atggaaaccc tgctgaaggt gctgagcggc acactgctgt ggcagctgac atgggtccga 60

tctcagcagc ctgtgcagtc tcctcaggct gtgatcctga gagaaggcga ggacgccgtg 120

atcaactgca gcagctctaa ggccctgtac agcgtgcact ggtacaggca gaaacacggc 180

gaggcccctg tgttcctgat gattctgctg aaaggcggcg agcagatgcg gcacgagaag 240

atctttgcca gcttcaatga gaagaagcag cagagcagtc tgtacctgac cgccagccag 300

ctgagctaca gcggcacata cttttgcggc acagcccacc tgagagccgg cagctatcag 360

ctgacctttg gcaagggcac aaagctgagc gtgatcccca ac 402

<210> 70

<211> 402

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2219的 beta链可变区 -密码子优化的

<400> 70

atgggacctc aactgctggg atatgtggtg ctgtgtctgc tcggagccgg acctctggaa 60

gctcaagtga cacagaaccc cagatacctg atcaccgtga ccggcaagaa actgaccgtg 120

acctgcagcc agaacatgaa ccacgagtac atgagctggt acagacagga ccctggcctg 180

ggcctgagac agatctacta cagcatgaac gtggaagtga ccgacaaggg cgacgtgccc 240

gagggctaca aggtgtccag aaaagagaag cggaacttcc cactgatcct ggaaagccca 300

tctcctaacc agaccagcct gtacttctgc gccagcagca gttctagcgg cggagccttc 360

aacgagcagt tctttggccc tggcaccagg ctgaccgtgc tg 402

<210> 71

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 alpha链TCR 1336

<400> 71

Asp Ser Ala Ser Asn Tyr

1 5

<210> 72

<211> 7

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 alpha链TCR 1336

<400> 72

Ile Arg Ser Asn Val Gly Glu

1 5

<210> 73

<211> 13

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 alpha链TCR 1336

<400> 73

Cys Ala Ala Ser Gly Arg Tyr Asp Tyr Lys Leu Ser Phe

1 5 10

<210> 74

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 beta链TCR 1336

<400> 74

Leu Asn His Asn Val

1 5

<210> 75

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 beta链TCR 1336

<400> 75

Tyr Tyr Asp Lys Asp Phe

1 5

<210> 76

<211> 17

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 beta链TCR 1336

<400> 76

Cys Ala Thr Ala Ser Asp Leu Gln Gly Asp Arg Ser Thr Glu Ala Phe

1 5 10 15

Phe

<210> 77

<211> 131

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR1336的 alpha链可变区

<400> 77

Met Thr Ser Ile Arg Ala Val Phe Ile Phe Leu Trp Leu Gln Leu Asp

1 5 10 15

Leu Val Asn Gly Glu Asn Val Glu Gln His Pro Ser Thr Leu Ser Val

20 25 30

Gln Glu Gly Asp Ser Ala Val Ile Lys Cys Thr Tyr Ser Asp Ser Ala

35 40 45

Ser Asn Tyr Phe Pro Trp Tyr Lys Gln Glu Leu Gly Lys Arg Pro Gln

50 55 60

Leu Ile Ile Asp Ile Arg Ser Asn Val Gly Glu Lys Lys Asp Gln Arg

65 70 75 80

Ile Ala Val Thr Leu Asn Lys Thr Ala Lys His Phe Ser Leu His Ile

85 90 95

Thr Glu Thr Gln Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ala Ser

100 105 110

Gly Arg Tyr Asp Tyr Lys Leu Ser Phe Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr

115 120 125

Val Arg Ala

130

<210> 78

<211> 135

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR1336的 beta链可变区

<400> 78

Met Gly Pro Gly Leu Leu His Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Thr

1 5 10 15

Gly His Gly Asp Ala Met Val Ile Gln Asn Pro Arg Tyr Gln Val Thr

20 25 30

Gln Phe Gly Lys Pro Val Thr Leu Ser Cys Ser Gln Thr Leu Asn His

35 40 45

Asn Val Met Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Ser Gln Ala Pro Lys Leu

50 55 60

Leu Phe His Tyr Tyr Asp Lys Asp Phe Asn Asn Glu Ala Asp Thr Pro

65 70 75 80

Asp Asn Phe Gln Ser Arg Arg Pro Asn Thr Ser Phe Cys Phe Leu Asp

85 90 95

Ile Arg Ser Pro Gly Leu Gly Asp Ala Ala Met Tyr Leu Cys Ala Thr

100 105 110

Ala Ser Asp Leu Gln Gly Asp Arg Ser Thr Glu Ala Phe Phe Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Arg Leu Thr Val Val

130 135

<210> 79

<211> 393

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR1336的 alpha链可变区-密码子优化的

<400> 79

atgaccagca tccgggccgt gttcatcttc ctgtggctgc agctggacct cgtgaacggc 60

gagaatgttg agcagcaccc cagcacactg agcgtgcaag agggcgattc tgccgtgatc 120

aagtgcacct acagcgacag cgcctccaac tacttcccct ggtacaagca agagctggga 180

aaaagacccc agctgatcat cgacatccgg tccaacgtgg gcgagaagaa ggaccagaga 240

atcgccgtga ctctgaacaa gaccgccaag cacttctccc tgcacatcac cgagacacag 300

cctgaggata gcgccgtgta cttttgtgcc gccagcggca gatacgacta caagctgtct 360

tttggcgccg gaaccaccgt gacagtgcgg gcc 393

<210> 80

<211> 405

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR1336的 beta链可变区-密码子优化的

<400> 80

atgggacctg gattgcttca ttggatggcc ctgtgtctgc tcggcacagg acatggcgac 60

gctatggtca ttcagaaccc cagataccaa gtgacccagt tcggcaagcc cgtgacactg 120

agctgtagcc agacactgaa ccacaacgtg atgtactggt atcagcagaa gtcctctcag 180

gcccctaagc tgctgttcca ctactacgac aaggacttca acaacgaggc cgacacaccc 240

gacaacttcc agagcagaag gcccaatacc agcttctgct tcctggacat cagaagccct 300

ggcctgggag atgccgccat gtatctgtgt gccacagcca gcgatctgca gggcgataga 360

agcaccgagg ccttttttgg ccaaggcacc agactgaccg tggtg 405

<210> 81

<211> 7

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 alpha链TCR2211

<400> 81

Thr Ile Ser Gly Asn Glu Tyr

1 5

<210> 82

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 alpha链TCR2211

<400> 82

Gly Leu Lys Asn Asn

1 5

<210> 83

<211> 15

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 alpha链TCR2211

<400> 83

Cys Ile Val Arg Val Met Lys Thr Ser Tyr Asp Lys Val Ile Phe

1 5 10 15

<210> 84

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 beta链TCR2211

<400> 84

Trp Asn His Asn Asn

1 5

<210> 85

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 beta链TCR2211

<400> 85

Ser Tyr Gly Val His Asp

1 5

<210> 86

<211> 18

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 beta链TCR2211

<400> 86

Cys Ala Ser Ser Glu Pro Arg Thr Ser Gly Ile Ser Tyr Asn Glu Gln

1 5 10 15

Phe Phe

<210> 87

<211> 130

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2211的 alpha链可变区

<400> 87

Met Arg Leu Val Ala Arg Val Thr Val Phe Leu Thr Phe Gly Thr Ile

1 5 10 15

Ile Asp Ala Lys Thr Thr Gln Pro Pro Ser Met Asp Cys Ala Glu Gly

20 25 30

Arg Ala Ala Asn Leu Pro Cys Asn His Ser Thr Ile Ser Gly Asn Glu

35 40 45

Tyr Val Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile His Ser Gln Gly Pro Gln Tyr Ile

50 55 60

Ile His Gly Leu Lys Asn Asn Glu Thr Asn Glu Met Ala Ser Leu Ile

65 70 75 80

Ile Thr Glu Asp Arg Lys Ser Ser Thr Leu Ile Leu Pro His Ala Thr

85 90 95

Leu Arg Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ile Val Arg Val Met Lys Thr

100 105 110

Ser Tyr Asp Lys Val Ile Phe Gly Pro Gly Thr Ser Leu Ser Val Ile

115 120 125

Pro Asn

130

<210> 88

<211> 136

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2211的 beta链可变区

<400> 88

Met Gly Thr Arg Leu Phe Phe Tyr Val Ala Leu Cys Leu Leu Trp Ala

1 5 10 15

Gly His Arg Asp Ala Glu Ile Thr Gln Ser Pro Arg His Lys Ile Thr

20 25 30

Glu Thr Gly Arg Gln Val Thr Leu Ala Cys His Gln Thr Trp Asn His

35 40 45

Asn Asn Met Phe Trp Tyr Arg Gln Asp Leu Gly His Gly Leu Arg Leu

50 55 60

Ile His Tyr Ser Tyr Gly Val His Asp Thr Asn Lys Gly Glu Val Ser

65 70 75 80

Asp Gly Tyr Ser Val Ser Arg Ser Asn Thr Glu Asp Leu Pro Leu Thr

85 90 95

Leu Glu Ser Ala Ala Ser Ser Gln Thr Ser Val Tyr Phe Cys Ala Ser

100 105 110

Ser Glu Pro Arg Thr Ser Gly Ile Ser Tyr Asn Glu Gln Phe Phe Gly

115 120 125

Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu

130 135

<210> 89

<211> 390

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2211的 alpha链可变区-密码子优化的

<400> 89

atgagactgg tggccagagt gacagtgttc ctgaccttcg gcaccatcat cgacgccaag 60

acaacccagc ctcctagcat ggattgtgcc gagggcagag ctgccaacct gccttgtaat 120

cacagcacca tcagcggcaa cgagtacgtg tactggtaca ggcagatcca ctctcagggc 180

cctcagtaca tcatccacgg actgaagaac aacgagacaa acgagatggc cagcctgatc 240

atcaccgagg atagaaagag cagcaccctg atcctgcctc acgccacact gagagatacc 300

gccgtgtact actgcatcgt gcgcgtgatg aagaccagct acgacaaagt gatctttggc 360

cccggaacca gcctgagcgt gatccccaat 390

<210> 90

<211> 408

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2211的 beta链可变区 -密码子优化的

<400> 90

atgggaacca gactgttttt ttacgtggcc ctgtgcctgc tgtgggccgg acatagagat 60

gccgagatca cacagagccc cagacacaag atcaccgaga caggcagaca agtgaccctg 120

gcctgtcacc agacctggaa ccacaacaac atgttctggt acagacagga cctcggccac 180

ggcctgagac tgatccacta ctcttacggc gtgcacgaca ccaacaaggg cgaagtgtct 240

gacggctaca gcgtgtccag aagcaacacc gaggacctgc ctctgacact ggaatctgcc 300

gccagctctc agaccagcgt gtacttttgt gccagcagcg agcctagaac cagcggcatc 360

agctacaacg agcagttctt cggccctggc accagactga ccgtgctg 408

<210> 91

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 alpha链TCR2304

<400> 91

Thr Ser Gly Phe Asn Gly

1 5

<210> 92

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 alpha链TCR2304

<400> 92

Asn Val Leu Asp Gly Leu

1 5

<210> 93

<211> 13

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 alpha链TCR2304

<400> 93

Cys Ala Val Arg Ala Ser Gly Thr Tyr Lys Tyr Ile Phe

1 5 10

<210> 94

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 beta链TCR2304

<400> 94

Ser Gly His Asn Ser

1 5

<210> 95

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 beta链TCR2304

<400> 95

Phe Asn Asn Asn Val Pro

1 5

<210> 96

<211> 11

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 beta链TCR2304

<400> 96

Cys Ala Ser Gln Asp Ser Tyr Glu Gln Tyr Phe

1 5 10

<210> 97

<211> 128

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2304的 alpha链可变区

<400> 97

Met Trp Gly Val Phe Leu Leu Tyr Val Ser Met Lys Met Gly Gly Thr

1 5 10 15

Thr Gly Gln Asn Ile Asp Gln Pro Thr Glu Met Thr Ala Thr Glu Gly

20 25 30

Ala Ile Val Gln Ile Asn Cys Thr Tyr Gln Thr Ser Gly Phe Asn Gly

35 40 45

Leu Phe Trp Tyr Gln Gln His Ala Gly Glu Ala Pro Thr Phe Leu Ser

50 55 60

Tyr Asn Val Leu Asp Gly Leu Glu Glu Lys Gly Arg Phe Ser Ser Phe

65 70 75 80

Leu Ser Arg Ser Lys Gly Tyr Ser Tyr Leu Leu Leu Lys Glu Leu Gln

85 90 95

Met Lys Asp Ser Ala Ser Tyr Leu Cys Ala Val Arg Ala Ser Gly Thr

100 105 110

Tyr Lys Tyr Ile Phe Gly Thr Gly Thr Arg Leu Lys Val Leu Ala Asn

115 120 125

<210> 98

<211> 130

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2304的 beta链可变区

<400> 98

Met Asp Ser Trp Thr Phe Cys Cys Val Ser Leu Cys Ile Leu Val Ala

1 5 10 15

Lys His Thr Asp Ala Gly Val Ile Gln Ser Pro Arg His Glu Val Thr

20 25 30

Glu Met Gly Gln Glu Val Thr Leu Arg Cys Lys Pro Ile Ser Gly His

35 40 45

Asn Ser Leu Phe Trp Tyr Arg Gln Thr Met Met Arg Gly Leu Glu Leu

50 55 60

Leu Ile Tyr Phe Asn Asn Asn Val Pro Ile Asp Asp Ser Gly Met Pro

65 70 75 80

Glu Asp Arg Phe Ser Ala Lys Met Pro Asn Ala Ser Phe Ser Thr Leu

85 90 95

Lys Ile Gln Pro Ser Glu Pro Arg Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala

100 105 110

Ser Gln Asp Ser Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr

115 120 125

Val Thr

130

<210> 99

<211> 384

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2304的 alpha链可变区-密码子优化的

<400> 99

atgtggggcg tgttcctgct gtacgtgtcc atgaagatgg gcggcaccac cggccagaac 60

atcgatcagc ctacagagat gaccgccacc gagggcgcca tcgtgcagat caattgcacc 120

taccagacca gcggcttcaa cgggctgttt tggtatcagc agcacgccgg cgaggcccct 180

acattcctga gctacaatgt gctggacggc ctggaagaaa agggcagatt cagcagcttc 240

ctgagcagaa gcaagggcta ctcctacctg ctgctgaaag aactgcagat gaaggacagc 300

gcctcttacc tgtgtgccgt tagagccagc ggcacctaca agtacatctt cggcaccggc 360

accaggctga aggtgctggc caat 384

<210> 100

<211> 390

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2304的 beta链可变区-密码子优化的

<400> 100

atggatagct ggaccttttg ttgcgtgtcc ctgtgcatcc tggtggccaa gcacacagat 60

gccggcgtga tccagtctcc tagacacgaa gtgaccgaga tgggccaaga agtgaccctg 120

cgctgcaagc ctatcagcgg ccacaatagc ctgttctggt acagacagac catgatgaga 180

ggcctggaac tgctgatcta cttcaacaac aacgtgccca tcgacgacag cggcatgccc 240

gaggatagat tcagcgccaa gatgcccaac gccagcttca gcaccctgaa gatccagcct 300

agcgagccca gagatagcgc cgtgtacttt tgcgccagcc aggacagcta cgagcagtac 360

tttggccctg gcaccagact gaccgtgacc 390

<210> 101

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 alpha链TCR2705

<400> 101

Asn Ser Ala Phe Gln Tyr

1 5

<210> 102

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 alpha链TCR2705

<400> 102

Thr Tyr Ser Ser Gly Asn

1 5

<210> 103

<211> 13

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 alpha链TCR2705

<400> 103

Cys Ala Met Ser Gly Thr Gly Gly Phe Lys Thr Ile Phe

1 5 10

<210> 104

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 beta链TCR2705

<400> 104

Leu Gly His Asn Ala

1 5

<210> 105

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 beta链TCR2705

<400> 105

Tyr Ser Leu Glu Glu Arg

1 5

<210> 106

<211> 15

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 beta链TCR2705

<400> 106

Cys Ala Ser Ser Gln Asp Arg Pro Asn Tyr Tyr Gly Tyr Thr Phe

1 5 10 15

<210> 107

<211> 134

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2705的 alpha链可变区

<400> 107

Met Met Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu

1 5 10 15

Ser Trp Val Trp Ser Gln Gln Lys Glu Val Glu Gln Asp Pro Gly Pro

20 25 30

Leu Ser Val Pro Glu Gly Ala Ile Val Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser

35 40 45

Asn Ser Ala Phe Gln Tyr Phe Met Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Arg Lys

50 55 60

Gly Pro Glu Leu Leu Met Tyr Thr Tyr Ser Ser Gly Asn Lys Glu Asp

65 70 75 80

Gly Arg Phe Thr Ala Gln Val Asp Lys Ser Ser Lys Tyr Ile Ser Leu

85 90 95

Phe Ile Arg Asp Ser Gln Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala

100 105 110

Met Ser Gly Thr Gly Gly Phe Lys Thr Ile Phe Gly Ala Gly Thr Arg

115 120 125

Leu Phe Val Lys Ala Asn

130

<210> 108

<211> 136

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2705的 beta链可变区

<400> 108

Met Gly Cys Arg Leu Leu Cys Cys Ala Val Leu Cys Leu Leu Gly Ala

1 5 10 15

Gly Glu Leu Val Pro Met Glu Thr Gly Val Thr Gln Thr Pro Arg His

20 25 30

Leu Val Met Gly Met Thr Asn Lys Lys Ser Leu Lys Cys Glu Gln His

35 40 45

Leu Gly His Asn Ala Met Tyr Trp Tyr Lys Gln Ser Ala Lys Lys Pro

50 55 60

Leu Glu Leu Met Phe Val Tyr Ser Leu Glu Glu Arg Val Glu Asn Asn

65 70 75 80

Ser Val Pro Ser Arg Phe Ser Pro Glu Cys Pro Asn Ser Ser His Leu

85 90 95

Phe Leu His Leu His Thr Leu Gln Pro Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Leu

100 105 110

Cys Ala Ser Ser Gln Asp Arg Pro Asn Tyr Tyr Gly Tyr Thr Phe Gly

115 120 125

Ser Gly Thr Arg Leu Thr Val Val

130 135

<210> 109

<211> 402

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2705的 alpha链可变区-密码子优化的

<400> 109

atgatgaagt ccctgagagt gctgctggtc atcctgtggc tgcagctgtc ttgggtctgg 60

tcccagcaga aagaagtgga acaggaccct ggacctctga gcgttccaga aggcgccatc 120

gtcagcctga attgcaccta cagcaacagc gccttccagt acttcatgtg gtacagacag 180

tactcccgga agggccccga gctgctgatg tacacataca gcagcggcaa caaagaggac 240

ggccggttta cagcccaggt ggacaagagc agcaagtaca tctccctgtt catccgggac 300

agccagccta gcgatagcgc cacatacctg tgcgccatgt ctggcacagg cggcttcaag 360

accatcttcg gagccggcac acggctgttc gtgaaggcca ac 402

<210> 110

<211> 408

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2705的 beta链可变区-密码子优化的

<400> 110

atgggatgta gactgctgtg ttgtgccgtg ctgtgtctgc ttggagctgg cgaactggtg 60

cctatggaaa ccggcgtgac ccagacacct agacacctgg tcatgggcat gacaaacaag 120

aaaagcctga agtgcgagca gcacctgggc cacaatgcca tgtactggta caagcagagc 180

gccaagaaac ccctggaact gatgttcgtg tacagcctgg aagagagggt cgagaacaac 240

agcgtgccca gcagattcag ccctgagtgc cctaatagca gccacctgtt tctgcatctg 300

cacaccctgc agcctgagga ctctgccctg tatctgtgtg ccagcagcca ggacagaccc 360

aactactacg gctacacctt tggcagcggc accagactga ccgtggtg 408

<210> 111

<211> 7

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 alpha链TCR2709

<400> 111

Thr Ile Ser Gly Thr Asp Tyr

1 5

<210> 112

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 alpha链TCR2709

<400> 112

Gly Leu Thr Ser Asn

1 5

<210> 113

<211> 16

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 alpha链TCR2709

<400> 113

Cys Ile Leu Arg Asp Arg Tyr Gly Gly Ser Gln Gly Asn Leu Ile Phe

1 5 10 15

<210> 114

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 beta链TCR2709

<400> 114

Met Asn His Glu Tyr

1 5

<210> 115

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 beta链TCR2709

<400> 115

Ser Val Gly Glu Gly Thr

1 5

<210> 116

<211> 18

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 beta链TCR2709

<400> 116

Cys Ala Ser Ser Tyr Trp Pro Thr Thr Gly Glu Ser Thr Asp Thr Gln

1 5 10 15

Tyr Phe

<210> 117

<211> 131

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2709的 alpha链可变区

<400> 117

Met Lys Leu Val Thr Ser Ile Thr Val Leu Leu Ser Leu Gly Ile Met

1 5 10 15

Gly Asp Ala Lys Thr Thr Gln Pro Asn Ser Met Glu Ser Asn Glu Glu

20 25 30

Glu Pro Val His Leu Pro Cys Asn His Ser Thr Ile Ser Gly Thr Asp

35 40 45

Tyr Ile His Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Ser Gln Gly Pro Glu Tyr Val

50 55 60

Ile His Gly Leu Thr Ser Asn Val Asn Asn Arg Met Ala Ser Leu Ala

65 70 75 80

Ile Ala Glu Asp Arg Lys Ser Ser Thr Leu Ile Leu His Arg Ala Thr

85 90 95

Leu Arg Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys Ile Leu Arg Asp Arg Tyr Gly

100 105 110

Gly Ser Gln Gly Asn Leu Ile Phe Gly Lys Gly Thr Lys Leu Ser Val

115 120 125

Lys Pro Asn

130

<210> 118

<211> 136

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2709的 beta链可变区

<400> 118

Met Ser Leu Gly Leu Leu Cys Cys Gly Ala Phe Ser Leu Leu Trp Ala

1 5 10 15

Gly Pro Val Asn Ala Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys Phe Arg Val Leu

20 25 30

Lys Thr Gly Gln Ser Met Thr Leu Leu Cys Ala Gln Asp Met Asn His

35 40 45

Glu Tyr Met Tyr Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Met Gly Leu Arg Leu

50 55 60

Ile His Tyr Ser Val Gly Glu Gly Thr Thr Ala Lys Gly Glu Val Pro

65 70 75 80

Asp Gly Tyr Asn Val Ser Arg Leu Lys Lys Gln Asn Phe Leu Leu Gly

85 90 95

Leu Glu Ser Ala Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Tyr Phe Cys Ala Ser

100 105 110

Ser Tyr Trp Pro Thr Thr Gly Glu Ser Thr Asp Thr Gln Tyr Phe Gly

115 120 125

Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu

130 135

<210> 119

<211> 393

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2709的 alpha链可变区-密码子优化的

<400> 119

atgaagctgg tcaccagcat cacagtgctg ctgagcctgg gaattatggg cgacgccaag 60

accacacagc ccaacagcat ggaaagcaac gaagaggaac ccgtgcatct gccctgcaac 120

cacagcacaa tcagcggcac cgactacatc cactggtata gacagctgcc ctctcagggc 180

cccgagtatg tgattcacgg actgaccagc aacgtgaaca accggatggc ctctctggcc 240

attgccgagg acagaaagag cagcaccctg atcctgcaca gagccacact gagagatgcc 300

gccgtgtact actgcatcct gcgggataga tacggcggca gccagggcaa tctgatcttt 360

ggcaagggca ccaagctgag cgtgaagccc aac 393

<210> 120

<211> 408

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2709的 beta链可变区-密码子优化的

<400> 120

atgtctcttg gattgctttg ctgcggcgcc ttcagcctgc tttgggctgg acctgttaat 60

gccggcgtga cccagacacc taagttccgg gtgctgaaaa ccggccagag catgacactg 120

ctgtgcgccc aggacatgaa ccacgagtac atgtattggt acagacagga ccccggcatg 180

ggcctgagac tgatccacta ttctgtcggc gagggcacca cagccaaagg cgaagttcct 240

gacggctaca acgtgtcccg gctgaagaag cagaacttcc tgctgggcct cgagtctgcc 300

gctccatctc agaccagcgt gtacttctgt gccagcagct actggcctac caccggcgag 360

tctaccgaca cacagtattt cggccctggc accagactga ccgtgctg 408

<210> 121

<211> 7

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 alpha链TCR2716

<400> 121

Thr Ser Glu Asn Asn Tyr Tyr

1 5

<210> 122

<211> 8

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 alpha链TCR2716

<400> 122

Gln Glu Ala Tyr Lys Gln Gln Asn

1 5

<210> 123

<211> 17

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 alpha链TCR2716

<400> 123

Cys Ala Phe Met Lys Pro Tyr Ser Gly Gly Gly Ala Asp Gly Leu Thr

1 5 10 15

Phe

<210> 124

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 beta链TCR2716

<400> 124

Pro Arg His Asp Thr

1 5

<210> 125

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 beta链TCR2716

<400> 125

Phe Tyr Glu Lys Met Gln

1 5

<210> 126

<211> 16

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 beta链TCR2716

<400> 126

Cys Ala Ser Ser Leu Ala Gly Thr Thr Val Tyr Asn Glu Gln Phe Phe

1 5 10 15

<210> 127

<211> 139

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2716的 alpha链可变区

<400> 127

Met Thr Arg Val Ser Leu Leu Trp Ala Val Val Val Ser Thr Cys Leu

1 5 10 15

Glu Ser Gly Met Ala Gln Thr Val Thr Gln Ser Gln Pro Glu Met Ser

20 25 30

Val Gln Glu Ala Glu Thr Val Thr Leu Ser Cys Thr Tyr Asp Thr Ser

35 40 45

Glu Asn Asn Tyr Tyr Leu Phe Trp Tyr Lys Gln Pro Pro Ser Arg Gln

50 55 60

Met Ile Leu Val Ile Arg Gln Glu Ala Tyr Lys Gln Gln Asn Ala Thr

65 70 75 80

Glu Asn Arg Phe Ser Val Asn Phe Gln Lys Ala Ala Lys Ser Phe Ser

85 90 95

Leu Lys Ile Ser Asp Ser Gln Leu Gly Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys

100 105 110

Ala Phe Met Lys Pro Tyr Ser Gly Gly Gly Ala Asp Gly Leu Thr Phe

115 120 125

Gly Lys Gly Thr His Leu Ile Ile Gln Pro Tyr

130 135

<210> 128

<211> 144

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2716的 beta链可变区

<400> 128

Met Leu Ser Pro Asp Leu Pro Asp Ser Ala Trp Asn Thr Arg Leu Leu

1 5 10 15

Cys His Val Met Leu Cys Leu Leu Gly Ala Val Ser Val Ala Ala Gly

20 25 30

Val Ile Gln Ser Pro Arg His Leu Ile Lys Glu Lys Arg Glu Thr Ala

35 40 45

Thr Leu Lys Cys Tyr Pro Ile Pro Arg His Asp Thr Val Tyr Trp Tyr

50 55 60

Gln Gln Gly Pro Gly Gln Asp Pro Gln Phe Leu Ile Ser Phe Tyr Glu

65 70 75 80

Lys Met Gln Ser Asp Lys Gly Ser Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala Gln

85 90 95

Gln Phe Ser Asp Tyr His Ser Glu Leu Asn Met Ser Ser Leu Glu Leu

100 105 110

Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser Ser Leu Ala Gly Thr Thr

115 120 125

Val Tyr Asn Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu

130 135 140

<210> 129

<211> 417

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2716的 alpha链可变区-密码子优化的

<400> 129

atgaccagag tgtctctgct gtgggccgtc gtggtgtcca catgtctgga atctggcatg 60

gcccagacag tgacccagag ccagcctgag atgtctgtgc aagaggccga gactgtgacc 120

ctgtcctgca cctacgatac cagcgagaac aactactacc tgttctggta caagcagcct 180

cctagccggc agatgatcct ggtcatcaga caagaggcct ataagcagca gaacgccacc 240

gagaacagat tcagcgtgaa cttccagaag gccgccaaga gcttcagcct gaagatcagc 300

gatagccagc tgggagacac cgccatgtat ttctgcgcct ttatgaagcc ctacagcggc 360

ggaggtgccg atggcctgac atttggaaag ggcacccacc tgattatcca gccgtac 417

<210> 130

<211> 432

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2716的 beta链可变区-密码子优化的

<400> 130

atgctttctc cagatctgcc tgacagcgcc tggaacacca gactgctgtg tcacgtgatg 60

ctgtgtctgc tgggagccgt gtctgttgcc gctggcgtta tccagtctcc tcggcacctg 120

atcaaagaga agagagagac agccacactg aagtgctacc ccattccacg gcacgacacc 180

gtgtactggt atcagcaagg cccaggccag gatcctcagt tcctgatcag cttctacgag 240

aagatgcaga gcgacaaggg cagcatcccc gacagatttt ctgcccagca gttcagcgac 300

taccacagcg agctgaacat gagcagcctg gaactgggcg atagcgccct gtacttttgt 360

gcctcttctc tggccggcac cacagtgtac aacgagcagt ttttcggccc tggcaccagg 420

ctgaccgtgc tg 432

<210> 131

<211> 7

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 alpha链TCR2719

<400> 131

Asn Ile Ala Thr Asn Asp Tyr

1 5

<210> 132

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 alpha链TCR2719

<400> 132

Gly Tyr Lys Thr Lys

1 5

<210> 133

<211> 13

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 alpha链TCR2719

<400> 133

Cys Leu Val Gly Ala Asp Ser Asn Tyr Gln Leu Ile Trp

1 5 10

<210> 134

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR1 beta链TCR2719

<400> 134

Ser Gly Asp Leu Ser

1 5

<210> 135

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR2 beta链TCR2719

<400> 135

Tyr Tyr Asn Gly Glu Glu

1 5

<210> 136

<211> 14

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CDR3 beta链TCR2719

<400> 136

Cys Ala Ser Ser Pro Gly Gly Gly Ala Tyr Glu Gln Tyr Phe

1 5 10

<210> 137

<211> 128

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2719的 alpha链可变区

<400> 137

Met Arg Gln Val Ala Arg Val Ile Val Phe Leu Thr Leu Ser Thr Leu

1 5 10 15

Ser Leu Ala Lys Thr Thr Gln Pro Ile Ser Met Asp Ser Tyr Glu Gly

20 25 30

Gln Glu Val Asn Ile Thr Cys Ser His Asn Asn Ile Ala Thr Asn Asp

35 40 45

Tyr Ile Thr Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Ser Gln Gly Pro Arg Phe Ile

50 55 60

Ile Gln Gly Tyr Lys Thr Lys Val Thr Asn Glu Val Ala Ser Leu Phe

65 70 75 80

Ile Pro Ala Asp Arg Lys Ser Ser Thr Leu Ser Leu Pro Arg Val Ser

85 90 95

Leu Ser Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Val Gly Ala Asp Ser Asn

100 105 110

Tyr Gln Leu Ile Trp Gly Ala Gly Thr Lys Leu Ile Ile Lys Pro Asp

115 120 125

<210> 138

<211> 132

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TCR2719的 beta链可变区

<400> 138

Met Gly Phe Arg Leu Leu Cys Cys Val Ala Phe Cys Leu Leu Gly Ala

1 5 10 15

Gly Pro Val Asp Ser Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys His Leu Ile Thr

20 25 30

Ala Thr Gly Gln Arg Val Thr Leu Arg Cys Ser Pro Arg Ser Gly Asp

35 40 45

Leu Ser Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Ser Leu Asp Gln Gly Leu Gln Phe

50 55 60

Leu Ile Gln Tyr Tyr Asn Gly Glu Glu Arg Ala Lys Gly Asn Ile Leu

65 70 75 80

Glu Arg Phe Ser Ala Gln Gln Phe Pro Asp Leu His Ser Glu Leu Asn

85 90 95

Leu Ser Ser Leu Glu Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser

100 105 110

Ser Pro Gly Gly Gly Ala Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg

115 120 125

Leu Thr Val Thr

130

<210> 139

<211> 384

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2719的 alpha链可变区-密码子优化的

<400> 139

atgagacagg tggccagagt gatcgtgttc ctgacactga gcaccctgag cctggccaag 60

accacacagc ccatcagcat ggacagctac gagggccaag aagtgaacat cacctgtagc 120

cacaacaata tcgccaccaa cgactacatc acgtggtatc aacagttccc cagtcaaggc 180

cctcggttca tcatccaagg ctacaagacc aaagtgacca acgaggtggc ctctctgttc 240

atccccgccg acagaaagag cagcaccctg tctctgccta gagtgtccct gagcgatacc 300

gccgtgtact actgtctcgt gggcgccgac tctaactacc agctgatttg gggagccggc 360

accaagctga tcatcaagcc cgac 384

<210> 140

<211> 396

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TCR2719的 beta链可变区-密码子优化的

<400> 140

atgggtttta gactgctgtg ctgcgtggcc ttctgtctgc ttggagctgg ccctgtggat 60

agcggcgtta cccagacacc taagcacctg atcacagcca caggccagcg cgtgaccctg 120

agatgttctc ctagaagcgg cgacctgagc gtgtactggt atcagcagtc tctggaccag 180

ggcctgcagt tcctgatcca gtactacaac ggcgaggaaa gagccaaggg caacatcctg 240

gaacggttca gcgcccagca gttcccagat ctgcacagcg agctgaacct gagcagcctg 300

gaactgggag atagcgccct gtacttctgc gccagttctc ctggtggcgg agcctacgag 360

cagtattttg gccctggcac cagactgacc gtgacc 396

<210> 141

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CMKLR1的表位

<400> 141

Leu Pro Ile His Ile Thr Tyr Ala Ala Met

1 5 10

<210> 142

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> SLCO2B1的表位

<400> 142

Arg Pro Arg Met Ile Gly Tyr Gly Ala Ile

1 5 10

<210> 143

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> RP11-1220K2.2的表位

<400> 143

Arg Pro Ala Met Ile Pro Tyr Trp Ala Leu

1 5 10

<210> 144

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> CHRNB1的表位

<400> 144

Val Pro Ile Ile Ile Lys Tyr Leu Met Phe

1 5 10

<210> 145

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> PTPRG的表位

<400> 145

Arg Pro Val Pro Ile Ser Tyr His Gln Leu

1 5 10

<210> 146

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> PGBD1的表位

<400> 146

Lys Pro Ile Arg Ile Gly Tyr Lys Ile Trp

1 5 10

<210> 147

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> EHBP1的表位

<400> 147

Arg Pro Asp Leu Ile Asp Tyr Lys Ser Leu

1 5 10

<210> 148

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> GPR1的表位

<400> 148

Leu Pro Leu Tyr Ile Ser Tyr Val Ala Met

1 5 10

<210> 149

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> GPR183的表位

<400> 149

Leu Pro Thr Arg Ile Ala Tyr Tyr Ala Met

1 5 10

<210> 150

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> TMEM230的表位

<400> 150

Thr Pro Pro Lys Ile Pro Tyr Lys Ala Ile

1 5 10

<210> 151

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> EFEMP1的表位

<400> 151

Leu Pro Gln Ser Ile Val Tyr Lys Tyr Met

1 5 10

<210> 152

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> ADAMTSL2的表位

<400> 152

Arg Pro Gln Pro Ile Tyr Tyr Gly Phe Ser

1 5 10