甜菊醇糖苷组合物的制造方法

技术领域

本发明涉及一种甜菊醇糖苷组合物的制造方法及增加含甜菊醇糖苷的溶液中的甜菊醇糖苷浓度的方法。此外，本发明还涉及一种含有通过所述制造方法制造而得的甜菊醇糖苷组合物的饮食品。

背景技术

在菊科甜菊(Stevia rebaudiana)的叶中含有作为二萜的一种的被称作甜菊醇(Steviol)的次级代谢产物，甜菊醇糖苷由于呈现砂糖的约300倍的甜味而被作为低热量的甜味剂利用于食品产业。肥胖作为深刻的社会问题在国际上日益严峻，从增进健康及削减医疗费的观点出发低热量甜味剂的需求也日益增大。目前，人工合成的氨基酸衍生物阿斯巴甜(Aspartame)、乙酰磺胺酸钾(Acesulfame Potassium)被作为人工甜味剂利用，然而像甜菊醇糖苷这样天然存在的低热量甜味剂更为安全，从而期待其容易得到消费者理解(Public Acceptance)。

至今为止报告有含有甜菊醇糖苷的各种组合物。例如，专利文献1中记载有一种方法，其从以比一般的相对浓度(common relative concentration)更高的浓度含有瑞鲍迪苷M的甜菊(Stevia rebaudiana)植物的叶中，萃取来获得甜菊醇糖苷组合物。

专利文献

专利文献1：国际公开第2017/035527号小册子

发明内容

本发明提供一种甜菊醇糖苷组合物的新型制造方法及增加含甜菊醇糖苷的溶液中的甜菊醇糖苷浓度的方法。此外，本发明提供一种含有通过所述制造方法制造而得的甜菊醇糖苷组合物的饮食品。

本发明者等进行了深入研究，结果发现，在由甜菊植物的干燥叶制造甜菊醇糖苷的过程中，通过将pH调整至规定的范围，可增加含甜菊醇糖苷的溶液中的甜菊醇糖苷组合物的浓度，从而完成本发明。本发明如下述所示。

[1]

一种甜菊醇糖苷组合物的制造方法，其特征在于，

包含准备含有甜菊萃取物的含甜菊醇糖苷的溶液，

及向所述含甜菊醇糖苷的溶液中添加第1添加剂(并不进一步添加添加剂时，仅称作“添加剂”)来准备第1处理液(无第2处理液时，仅称作“处理液”)，

并以所述第1处理液达到pH10～13的方式添加所述第1添加剂。

[1A]

一种甜菊醇糖苷组合物的制造方法，其特征在于，

包含准备含有甜菊萃取物的含甜菊醇糖苷的溶液，

及向所述含甜菊醇糖苷的溶液中添加添加剂来准备处理液，

并以所述处理液达到pH10～13的方式添加所述添加剂。

[2]

根据[1]所述的制造方法，其特征在于，所述第1添加剂为碱剂。

[2A]

根据[1A]所述的制造方法，其特征在于，所述添加剂为碱剂。

[3]

根据[2]或[2A]所述的制造方法，其特征在于，所述碱剂含有选自碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、硅酸盐、碳酸盐及碳酸氢盐中的1种以上的化合物。

[4]

根据[1]～[3]中任一项所述的制造方法，其特征在于，所述甜菊醇糖苷组合物含有选自瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、甜菊苷、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、瑞鲍迪苷G、瑞鲍迪苷N、甜叶悬钩子苷及甜菊双糖苷中的1种以上的甜菊醇糖苷。

[5]

根据[1]～[4]中任一项所述的制造方法，其特征在于，准备所述第1处理液后，使所述第1处理液保持1分钟～3天。

[5A]

根据[1]～[4]中任一项所述的制造方法，其特征在于，准备所述处理液后，使所述处理液保持1分钟～3天。

[6]

根据[1]～[5]中任一项所述的制造方法，其特征在于，

进一步包含向所述第1处理液中添加第2添加剂准备第2处理液，

并以所述第2处理液达到pH2～10的方式添加所述第2添加剂。

[6A]

根据[1]～[5A]中任一项所述的制造方法，其特征在于，

进一步包含向所述处理液中添加第2添加剂准备第2处理液，

并以所述第2处理液达到pH2～10的方式添加所述第2添加剂。

[7]

根据[6]所述的制造方法，其特征在于，进一步向所述第1处理液及/或所述第2处理液中添加选自硫酸铝、多氯化铝、氯化铁(III)或其水合物、聚丙烯酰胺水解物、海藻酸、壳多糖及壳聚糖中的1种以上的化合物。

[7A]

根据[6A]所述的制造方法，其特征在于，进一步向所述处理液及/或所述第2处理液中添加选自硫酸铝、多氯化铝、氯化铁(III)或其水合物、聚丙烯酰胺水解物、海藻酸、壳多糖及壳聚糖中的1种以上的化合物。

[8]

一种增加含甜菊醇糖苷的溶液中的甜菊醇糖苷浓度的方法，其特征在于，

包含准备含有甜菊萃取物的含甜菊醇糖苷的溶液，

及向所述含甜菊醇糖苷的溶液中添加第1添加剂来准备第1处理液，

并以所述第1处理液达到pH10～13的方式添加所述第1添加剂。

[8A]

一种增加含甜菊醇糖苷的溶液中的甜菊醇糖苷浓度的方法，其特征在于，

包含准备含有甜菊萃取物的含甜菊醇糖苷的溶液，

及向所述含甜菊醇糖苷的溶液中添加添加剂来准备处理液，

并以所述处理液达到pH10～13的方式添加所述添加剂。

[9]

根据[8]或[8A]所述的方法，其特征在于，使选自瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷C、甜菊苷、瑞鲍迪苷F、瑞鲍迪苷G及甜叶悬钩子苷中的1种以上的甜菊醇糖苷的浓度增加。

[10]

一种甜菊醇糖苷组合物，其特征在于，通过[1]～[7A]中任一项所述的方法制造。

[11]

一种饮食品，其特征在于，含有[10]所述的甜菊醇糖苷组合物。

根据本发明，可提供一种甜菊醇糖苷组合物的新型制造方法。此外，根据本发明，可提供一种增加含甜菊醇糖苷的溶液中的甜菊醇糖苷组合物浓度的方法。

附图说明

图1为表示含有甜菊醇糖苷的溶液中的甜菊醇糖苷浓度变化的图。

图2为表示从碱性变为中性时的RebA的浓度变化的图。

图3为表示基于碱剂的种类的RebA的浓度变化的图。

具体实施方式

以下，对本发明进行详细的说明。以下的实施方式为用于说明本发明的例示，并非将本发明仅限定于该实施方式的意思。本发明，只要不脱离该主旨，可以用各种各样的方式实施。且，本说明书中引用的所有的文献及公开公报、专利公报以及其他专利文献，作为参考纳入本说明书中。

本说明书中，“瑞鲍迪苷”、“Reb”及“Reb.”表示相同的意思，皆表示“rebaudioside”。

1.甜菊醇糖苷组合物的制造方法

本发明的甜菊醇糖苷组合物的制造方法(以下，也称作“本发明的制造方法”)，包含准备含有甜菊萃取物的含甜菊醇糖苷的溶液(以下，也仅称作“含甜菊醇糖苷的溶液”)，及向所述含甜菊醇糖苷的溶液中添加第1添加剂来准备第1处理液，并以所述第1处理液达到pH10～13的方式添加所述第1添加剂。

此外，本发明的制造方法，包含准备含有甜菊萃取物的含甜菊醇糖苷的溶液，及向所述含甜菊醇糖苷的溶液中添加添加剂来准备处理液，并以所述处理液达到pH10～13的方式添加所述添加剂。

根据本发明的制造方法，通过使含甜菊醇糖苷的溶液的pH达到10～13的方式进行调整，可增加作为结果物而得的甜菊醇糖苷组合物中的特定的甜菊醇糖苷的浓度。

甜菊的叶，除甜菊醇糖苷以外还含有多种多样的成分，准备以甜菊萃取物为主要构成要素的甜菊醇糖苷组合物时，该甜菊醇糖苷组合物中所含的甜菊醇糖苷以外的成分，只要没有任意添加其他成分，则为实质上来自甜菊的成分。作为这样的甜菊醇糖苷以外的来自甜菊的成分，有水溶性成分和不溶性成分。作为水溶性成分，可列举水溶性食物纤维等多糖类、生物碱及类黄酮及类萜等二次代谢产物、甲醇、多酚、矿物质、维生素、氨基酸、有机酸、水溶性蛋白质以及各种其他糖苷。作为不溶性成分，可列举包含不溶性食物纤维等的不溶性多糖类、不溶性蛋白质及脂质。

虽不受理论约束，但一般认为根据本发明的一种方式的制造方法，与这些来自甜菊的某些的成分结合的甜菊醇糖苷，因pH的上升从该结合中解离，从而精制量增加，最终所得的甜菊醇糖苷组合物中的浓度增加。

本说明书中，所谓甜菊醇糖苷的浓度增加，是指与未将含甜菊醇糖苷的溶液调整至规定的pH而得的甜菊醇糖苷组合物中的甜菊醇糖苷的浓度相比，甜菊醇糖苷的浓度增加。即，该浓度的增加只要为相对的即可，并非需要甜菊醇糖苷的浓度达到某特定的数值以上。此外，甜菊醇糖苷的浓度的增加，可作为以上述比较对照为基准时的增加率(％)来表示。

甜菊醇糖苷的浓度可通过使用LC/MS或HPLC的方法进行测定。

通过本发明的制造方法而得的甜菊醇糖苷组合物，包含选自瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、甜菊苷、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、瑞鲍迪苷G、瑞鲍迪苷N、甜叶悬钩子苷及甜菊双糖苷中的1种以上的甜菊醇糖苷。

此外，通过本发明的制造方法而得的甜菊醇糖苷组合物，除上述列举的甜菊醇糖苷以外，例如也可进一步含有选自瑞鲍迪苷E、瑞鲍迪苷I、瑞鲍迪苷J、瑞鲍迪苷K、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷O、瑞鲍迪苷Q、瑞鲍迪苷R、杜克苷C、甜菊醇及甜菊单糖苷中的1种以上的甜菊醇糖苷。

通过本发明的制造方法而得的甜菊醇糖苷组合物，为在上述列举的甜菊醇糖苷中，选自瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷C、甜菊苷、瑞鲍迪苷F、瑞鲍迪苷G及甜叶悬钩子苷中的1种以上的浓度增加的物质。

在本发明的一种实施方式中，将第1处理液或处理液调整至规定的pH时的瑞鲍迪苷A的浓度的增加率也可为101～150％、101～140％、103～140％、105～140％、110～140％、115～140％、120～140％、121～140％、122～140％、123～140％、124～140％、125～140％、126～140％、127～140％、128～140％、129～140％或130～140％等。

在本发明的一种实施方式中，将第1处理液或处理液调整至规定的pH时的瑞鲍迪苷C的浓度的增加率也可为101～170％、101～165％、101～160％、105～160％、110～160％、115～160％、120～160％、125～160％、130～160％、131～160％、132～160％、133～160％、134～160％、135～160％、136～160％、137～160％、138～160％、139～160％或140～160％等。

在本发明的一种实施方式中，将第1处理液或处理液调整至规定的pH时的甜菊苷的浓度的增加率也可为101～200％、101～190％、101～185％、101～180％、110～180％、120～180％、125～180％、130～180％、135～180％、140～180％、145～180％、150～180％、151～180％、152～180％、153～180％、154～180％、155～180％、156～180％、157～180％、158～180％、159～180％或160％～180％等。

在本发明的一种实施方式中，将第1处理液或处理液调整至规定的pH时的瑞鲍迪苷F的浓度的增加率也可为101～150％、101～140％、103～140％、105～140％、110～140％、115～140％、120～140％、121～140％、122～140％、123～140％、124～140％、125～140％、126～140％、127～140％、128～140％、129～140％或130～140％等。

在本发明的一种实施方式中，将第1处理液或处理液调整至规定的pH时的瑞鲍迪苷G的浓度的增加率也可为101～350％、101～340％、101～330％、110～330％、120～330％、130～330％、140～330％、150～330％、160～330％、170～330％、180～330％、190～330％、200～330％、210～330％、220～330％、230～330％、240～330％或250～330％等。

在本发明的一种实施方式中，将第1处理液或处理液调整至规定的pH时的甜叶悬钩子苷的浓度的增加率也可为101～700％、101～690％、101～680％、101～670％、110～670％、120～670％、130～670％、140～670％、150～670％、160～670％、170～670％、180～670％、190～670％或200～670％等。

在本发明的一种实施方式中，上述各甜菊醇糖苷的浓度的增加率是指使用含有用作为原料的甜菊干燥叶(含水率：3～4重量％)的30倍量的离子交换水(60℃±5℃)对其萃取1次而得的甜菊萃取物的含甜菊醇糖苷的溶液时的增加率。

(A)准备含有甜菊萃取物的含甜菊醇糖苷的溶液

本发明的制造方法包括准备含有甜菊萃取物的含甜菊醇糖苷的溶液。作为获得甜菊萃取物的方法，例如可列举使用水性溶剂对甜菊植物的干燥叶进行萃取来获得萃取物(萃取液)。

在本说明书中，所谓甜菊植物的干燥叶是指通过使甜菊植物的新鲜叶干燥来降低含水量后的叶。甜菊植物的干燥叶的含水率优选为1～10重量％，更优选为2～8重量％，特别优选为3～4重量％。

从干燥叶中萃取甜菊醇糖苷，可使用水或醇，或者它们的混合溶液等溶剂来实施。作为优选的萃取溶剂，可列举离子交换水、纯水(例如，MilliQ水)及乙醇水溶液等。进行萃取时，可将干燥叶粉碎，也可不粉碎。进行粉碎时，可使用球磨机等来粉碎。或者，也可使用捏合萃取器(SKN-R100，三友机器株式会社制)等，来进行萃取处理。

萃取时通过对水性溶剂进行加热，可更有效地萃取甜菊醇糖苷。萃取时的温度，例如可为25～80℃、30～75℃、35～70℃、40～65℃、45～70℃，优选为45～70℃。另外，本说明书中，温度的下限值及上限值，例如也可为各温度的±1℃、±2℃、±3℃、±4℃、±5℃的温度。

萃取可不仅仅为1次，也可实施多次。通过实施多次萃取，可萃取更多叶中所含的甜菊醇糖苷。从效率的观点出发，萃取优选2次左右。

在本发明的一种实施方式中，含甜菊醇糖苷的溶液可为通过上述方法而得的甜菊萃取物自身。此外，含甜菊醇糖苷的溶液只要含有甜菊萃取物即可，也可进一步添加通过其他任意方法(例如，使用甜菊醇糖苷水解酶的方法等)生产的甜菊醇糖苷组合物。

此外，在本发明的一种实施方式中，所得的甜菊萃取物也可经固液分离处理。作为固液分离处理，只要固体和液体可充分分离即可，并无特别限定，例如可列举使用离心分离器或压滤器的处理，或使用过滤器或筛目的重力过滤。

固液分离处理也可使用多种方法，例如，也可在第1固液分离处理后实施第2固液分离处理。

(B)向含甜菊醇糖苷的溶液中添加第1添加剂或添加剂准备第1处理液或处理液

本发明的制造方法包含向根据上述(A)的方法准备的含甜菊醇糖苷的溶液中添加第1添加剂准备第1处理液。此外，本发明的制造方法，包含向根据上述(A)的方法准备的含甜菊醇糖苷的溶液中添加添加剂准备处理液。在本发明的一种实施方式中，第1添加剂或添加剂为碱剂。作为碱剂，例如可列举碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、硅酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐等。

作为碱金属氢氧化物，可列举氢氧化钠、氢氧化钾等。作为碱土金属氢氧化物，可列举氢氧化钙、氢氧化镁等。作为硅酸盐，可列举偏硅酸钠、原硅酸钠、偏硅酸钾、原硅酸钾等。作为碳酸盐，可列举碳酸钠、碳酸钾等。作为碳酸氢盐，可列举碳酸氢钠、碳酸氢钾等。其中，特别优选氢氧化钠、氢氧化钾及氢氧化钙。此外，这些碱剂可单独使用1种，也可组合使用2种以上。

在本发明的优选的实施方式中，第1添加剂或添加剂，以第1处理液或处理液达到pH10～13的方式添加至含甜菊醇糖苷的溶液中。即，第1添加剂或添加剂的添加量，只要第1处理液或处理液的pH达到上述范围即可并无特别限制，根据含甜菊醇糖苷的溶液的量，一边以第1处理液或处理液的pH达到10～13的方式进行适当调整一边添加即可。

此外，在本发明的一种实施方式中，第1处理液或处理液的pH也可为pH10～13、pH10～12.5、pH10.1～12.5、pH10.2～12.5、pH10.3～12.5、pH10.4～12.5、pH10.5～12.5、pH10.6～12.5、pH10.7～12.5、pH10.8～12.5、pH10.9～12.5、pH11～13、pH11～12.5、pH11.1～12.5、pH11.2～12.5、pH11.3～12.5、pH11.4～12.5、pH11.5～12.5、pH11.6～12.5、pH11.7～12.5、pH11.8～12.5、pH11.9～12.5、pH11～12.2、pH11.1～12.2、pH11.2～12.2、pH11.3～12.2、pH11.4～12.2、pH11.5～12.2、pH11.6～12.2、pH11.7～12.2、pH11.8～12.2或pH11.9～12.2等。

添加第1添加剂或添加剂时的含甜菊醇糖苷的溶液的温度也可为1～60℃、5～60℃、10～60℃、15～60℃、20～60℃、25～60℃、30～60℃、40～60℃、50～60℃、1～50℃、5～50℃、10～50℃、15～50℃、20～50℃、25～50℃、30～50℃、1～40℃、5～40℃、10～40℃、15～40℃、20～40℃、25～40℃、30～40℃、1～30℃、5～30℃、10～30℃、15～30℃或20～30℃等。

此外，在本发明的一种实施方式中，第1处理液或处理液也可在准备后述第2处理液之前保持规定的时间。本说明书中，所谓保持第1处理液或处理液，是指准备第1处理液或处理液后，在为了准备后述第2处理液而添加第2添加剂之间，维持规定的pH的值或范围。保持第1处理液或处理液时，可不实施任何的处理来保持，也可在实施一些处理的基础上保持。

作为保持第1处理液或处理液的时间，例如可列举1分钟～3天、1分钟～2天、1分钟～24小时、1分钟～12小时、1分钟～10小时、1分钟～8小时、1分钟～6小时、1分钟～4小时、1分钟～3小时、1分钟～2小时、2分钟～2小时、3分钟～2小时、4分钟～2小时、5分钟～2小时、10分钟～2小时、15分钟～2小时、20分钟～2小时、25分钟～2小时、30分钟～2小时、35分钟～2小时、40分钟～2小时、45分钟～2小时、50分钟～2小时、55分钟～2小时或1～2小时等。根据本发明的制造方法，通过向含甜菊醇糖苷的溶液中添加第1添加剂或添加剂调整至pH10～13的范围，甜菊醇糖苷组合物中的特定的甜菊醇糖苷的浓度增加。一度调整至pH10～13的范围的第1处理液或处理液，之后即使保持至添加第2添加剂为止，增加的甜菊醇糖苷的浓度也不会减少，保持稳定。

保持第1处理液或处理液时的温度，例如也可为室温(约25℃)。

(C)向第1处理液或处理液中添加第2添加剂准备第2处理液

本发明的制造方法进一步包含向第1处理液中添加第2添加剂准备第2处理液。此外，本发明的制造方法，还进一步包含向处理液中添加第2添加剂准备第2处理液。在本发明的一种实施方式中，第2添加剂为具有降低pH的作用的添加剂。这样的添加剂，只要具有降低pH的作用即可，可使用任意物质，例如可列举柠檬酸、乳酸、乙酸等有机类的pH调节剂、磷酸、盐酸、硫酸、二氧化碳等无机类的pH调节剂。此外，也可使用后述的硫酸铝、多氯化铝、氯化铁(III)或其水合物等化合物。这些第2添加剂，可单独使用1种，也可组合使用2种以上。

在本发明的优选的实施方式中，第2添加剂以第2处理液达到pH2～10的方式添加至第1处理液或处理液中。即，第2添加剂的添加量，只要第2处理液的pH达到上述范围即可，并无特别限制，可根据第1处理液或处理液的量，一边以第2处理液的pH达到2～10的方式适当调整一边添加即可。此外，使用硫酸铝、多氯化铝、氯化铁(III)或其水合物等化合物时，也考虑后述凝聚反应，调整添加量即可。

根据本发明的制造方法，通过向含甜菊醇糖苷的溶液中添加第1添加剂或添加剂调整至pH10～13的范围，甜菊醇糖苷组合物中的特定的甜菊醇糖苷的浓度增加。一度调整至pH10～13的范围的第1处理液或处理液，之后即使添加第2添加剂调整至pH2～10的范围，增加的甜菊醇糖苷的浓度也不会减少，保持稳定。

此外，在本发明的一种实施方式中，第2处理液也可为pH2～10、pH2.5～9.5、pH3～9、pH3.5～8.5、pH4～8、pH4.5～8或pH5～8等。

向第1处理液或处理液中添加第2添加剂时的温度，例如也可为室温(约25℃)。

在本发明的优选实施方式中，也可进一步向第1处理液或处理液及/或第2处理液中添加选自硫酸铝、多氯化铝、氯化铁(III)或其水合物、聚丙烯酰胺水解物、海藻酸、壳多糖及壳聚糖中的1种以上的化合物。这些化合物含有1种以上即可，也可组合含有2种以上。此外，这些化合物可在上述“B”工序时添加，也可如上所述在本工序“C”时添加，也可在上述“B”工序及本工序“C”中添加。

上述化合物的添加量，只要为在第1处理液或处理液及/或第2处理液中引起凝聚反应的量即可，并无特别限定，例如，相对于处理液中所含的可溶性固体成分，可以3.0～50重量％的量添加。例如，为氯化铁(III)六水合物时，可以相当于处理液中的固体成分的15～40重量％的量添加，可优选以18～38重量％，可更优选以20～35重量％的量添加。为0.5％(w/v)壳聚糖溶液时，可以相当于处理液中所含的可溶性固体成分的3.0～10重量％的量添加，可优选以4.0～8.0重量％，更优选以4.5～7.0重量％的量添加。

此外，实施凝聚处理时的pH，可根据上述化合物的种类，以凝聚最优化的方式进行适当选择。在本发明的一种实施方式中，凝聚处理时的第1处理液或处理液及/或第2处理液的pH也可为pH2～13、pH3～13、pH4～13、pH5～13或pH6～13等。

此外，实施凝聚处理时的温度，可以室温(约25℃)，不进行加热或冷却来实施。

在本发明的一种实施方式中，第1处理液或处理液及/或第2处理液中所含的凝聚物，也可在上述凝聚处理之后，后述的任意的树脂提纯处理之前去除。凝聚物的去除，可通过过滤等已知的方法来实施。

本发明的制造方法，根据期望，也可进一步对第2处理液实施以下(D)～(F)的处理。

(D)树脂提纯处理

在本发明的一种实施方式中，也可用疏水性多孔质树脂对经上述各处理而准备的第2处理液进行处理。甜菊醇糖苷为分子结构中具有亲水基和疏水基的两亲性，分子量为1,000左右。此外，已知在pH2.5～9.0下稳定，在酸性、碱性下也不会离子化。另一方面，经过凝聚处理的第1处理液或处理液中也含有大量甜菊醇糖苷以外的成分。虽然不受理论约束，但一般认为这些成分中存在如铁离子一般分子量与甜菊醇糖苷不同的成分，或氨基酸一般离子化的成分，这些成分可通过疏水性多孔质树脂的处理来去除。

具有疏水性的甜菊醇骨架的甜菊醇糖苷与合成树脂进行疏水键合而被捕捉。另一方面，亲水性高的杂质不与树脂键合而移动至透过组分从而被去除，因此认为向填充有上述树脂的管柱中投入经凝聚处理的处理液，然后通过用水进行清洗可提高甜菊醇糖苷的纯度。此外，通过低极性的溶剂而甜菊醇糖苷与合成树脂的官能团的键合离解，因此具有最终可以高收率回收甜菊醇糖苷的优点。

作为本发明的一种实施方式的制造方法中使用的疏水性多孔质树脂，只要是与水的亲和性低的多孔质树脂即可，并无特别限定，例如优选选自苯乙烯与二乙烯苯的共聚物、聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯腈、聚酰胺及聚碳酸酯中的1种以上的疏水性树脂的多孔质树脂。在本发明的优选的实施方式中，优选未对苯乙烯与二乙烯苯的共聚物进行离子交换基的导入处理(即，不具有离子交换基)。一般而言，制造离子交换树脂时，使苯乙烯与二乙烯苯共聚而形成立体的网状结构后，向树脂中导入离子交换基，但“未经离子交换基的导入处理”是指未经过这样的处理。

在本发明的一种实施方式中，疏水性多孔质树脂具有疏水性基，疏水性基包含选自芳基、烷基、烷基甲硅烷基、酯基及环氧基中的1种以上。在本发明的一种实施方式中，只要含有选自这些中的1种以上的疏水性基即可，也可进一步含有其他疏水性基。作为芳基，例如可列举苯基、苄基、甲苯基、二甲苯基等，作为烷基，可列举C1～20的烷基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、十八烷基等。

在本发明的优选的实施方式中，疏水性多孔质树脂的众数细孔半径为

另外，在用疏水性多孔质树脂进行处理前，也可使用阴离子交换树脂进一步对处理液进行处理。通过事先用阴离子交换树脂进行处理，可有效去除色素或儿茶素等与疏水性树脂键合的成分。作为这样的阴离子交换树脂，并无特别限定，例如，可列举碱性阴离子交换树脂，作为这样的碱性阴离子交换树脂，可使用导入1～2级氨基作为官能团的弱碱性阴离子交换树脂或具有季铵基(例如，三甲基铵基或二甲基乙醇铵基等)的强碱性阴离子交换树脂等。

(E)浓缩处理

经树脂提纯处理的溶液，也可进一步实施浓缩处理来去除水性溶剂。这样的处理并无特别限定，可列举通过加热使水性溶剂蒸发、通过减压干燥去除水性溶剂的方法等。

(F)任意的追加的工序

本发明的制造方法之后，可通过进一步加上晶析工序，来制造高纯度(纯度95％以上)的甜菊醇糖苷组合物。

2.增加含甜菊醇糖苷的溶液中的甜菊醇糖苷浓度的方法

本发明还涉及一种增加含甜菊醇糖苷的溶液中的甜菊醇糖苷浓度的方法(以下，也称作“本发明的方法”)。本发明的方法，包含准备含有甜菊萃取物的含甜菊醇糖苷的溶液，及向所述含甜菊醇糖苷的溶液中添加第1添加剂来准备第1处理液，并以所述第1处理液达到pH10～13的方式添加所述第1添加剂。

此外，本发明的方法，包含准备含有甜菊萃取物的含甜菊醇糖苷的溶液，及向所述含甜菊醇糖苷的溶液中添加添加剂来准备处理液，并以所述处理液达到pH10～13的方式添加所述添加剂。

此外，本发明的方法使选自瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷C、甜菊苷、瑞鲍迪苷F、瑞鲍迪苷G及甜叶悬钩子苷中的1种以上的甜菊醇糖苷的浓度增加。

另外，本发明的方法实质上具有与本发明的甜菊醇糖苷组合物的制造方法相同的构成。从而，上述“1.甜菊醇糖苷组合物的制造方法”的说明，对于本发明的方法也适用。

3.甜菊醇糖苷组合物

本发明还涉及一种通过本发明的制造方法制造的甜菊醇糖苷组合物(以下，也称“本发明的甜菊醇糖苷组合物”)。在本发明的一种实施方式中，甜菊醇糖苷组合物也可作为甜味剂组合物。

作为甜味剂组合物使用时，除本发明的甜菊醇糖苷组合物外，也可含有甜菊醇糖苷以外的甜味剂。作为这样的甜味剂，例如可列举果糖、砂糖、果葡糖浆(Glucose-fructosesyrup)、葡萄糖、麦芽糖、高果糖浆(High Fructose Syrup)、糖醇、低聚糖、蜂蜜、甘蔗榨汁液(黑糖蜜)、饴糖、罗汉果末、罗汉果萃取物、甘草末、甘草萃取物、翅果竹芋种子末、翅果竹芋种子萃取物等天然甜味剂，或乙酰磺胺酸钾、三氯蔗糖、纽甜、阿斯巴甜、糖精等人工甜味剂等。其中，从清爽度、饮用容易度、自然的味道、赋予适度的醇香味的观点出发，优选使用天然甜味剂，特别适合使用果糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、砂糖。这些甜味剂可仅使用一种，也可使用多种。

4.含有甜菊醇糖苷组合物的饮食品

本发明还涉及一种含有通过本发明的制造方法制造而得的甜菊醇糖苷组合物的饮食品(以下，也称作“本发明的饮食品”)。本发明的饮食品只要含有本发明的甜菊醇糖苷组合物即可，并无特别限定。此处，所谓饮食品，是指饮料及食品。在优选的实施方式中，饮食品为饮料。

本发明的饮食品中所含的本发明的甜菊醇糖苷的量，根据具体的饮食品而不同，为饮料的情况下，优选为约1质量ppm～800质量ppm，例如也可为20质量ppm～750质量ppm、20质量ppm～700质量ppm、20质量ppm～650质量ppm、20质量ppm～600质量ppm、20质量ppm～550质量ppm、25质量ppm～550质量ppm、30质量ppm～550质量ppm、35质量ppm～550质量ppm、40质量ppm～550质量ppm、45质量ppm～550质量ppm、50质量ppm～550质量ppm、55质量ppm～550质量ppm、20质量ppm～540质量ppm、25质量ppm～540质量ppm、30质量ppm～540质量ppm、35质量ppm～540质量ppm、40质量ppm～540质量ppm、45质量ppm～540质量ppm、50质量ppm～540质量ppm、55质量ppm～540质量ppm、20质量ppm～530质量ppm、25质量ppm～530质量ppm、30质量ppm～530质量ppm、35质量ppm～530质量ppm、40质量ppm～530质量ppm、45质量ppm～530质量ppm、50质量ppm～530质量ppm、55质量ppm～530质量ppm、20质量ppm～520质量ppm、25质量ppm～520质量ppm、30质量ppm～520质量ppm、35质量ppm～520质量ppm、40质量ppm～520质量ppm、45质量ppm～520质量ppm、50质量ppm～520质量ppm、55质量ppm～520质量ppm、20质量ppm～510质量ppm、25质量ppm～510质量ppm、30质量ppm～510质量ppm、35质量ppm～510质量ppm、40质量ppm～510质量ppm、45质量ppm～510质量ppm、50质量ppm～510质量ppm、55质量ppm～510质量ppm、20质量ppm～505质量ppm、25质量ppm～505质量ppm、30质量ppm～505质量ppm、35质量ppm～505质量ppm、40质量ppm～505质量ppm、45质量ppm～505质量ppm、50质量ppm～505质量ppm、55质量ppm～505质量ppm、20质量ppm～500质量ppm、25质量ppm～500质量ppm、30质量ppm～500质量ppm、35质量ppm～500质量ppm、40质量ppm～500质量ppm、45质量ppm～500质量ppm、50质量ppm～500质量ppm、55质量ppm～500质量ppm、20质量ppm～495质量ppm、25质量ppm～495质量ppm、30质量ppm～495质量ppm、35质量ppm～495质量ppm、40质量ppm～495质量ppm、45质量ppm～495质量ppm、50质量ppm～495质量ppm、55质量ppm～495质量ppm、20质量ppm～490质量ppm、25质量ppm～490质量ppm、30质量ppm～490质量ppm、35质量ppm～490质量ppm、40质量ppm～490质量ppm、45质量ppm～490质量ppm、50质量ppm～490质量ppm、55质量ppm～490质量ppm、100质量ppm～400质量ppm、150质量ppm～400质量ppm、200质量ppm～400质量ppm、250质量ppm～400质量ppm、300质量ppm～400质量ppm、100质量ppm～150质量ppm、100质量ppm～200质量ppm、100质量ppm～250质量ppm或100质量ppm～300质量ppm。通过使含量在该范围内，具有可赋予饮食品以适度的甜味的优点。本说明书中，所谓“ppm”只要无特别说明，是指“质量ppm”。

本发明的饮食品，也可含有甜菊醇糖苷以外的甜味剂。作为这样的甜味剂，例如可列举果糖、砂糖、果葡糖浆(Glucose-fructose syrup)、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、高果糖浆(High Fructose Syrup)、糖醇、低聚糖、蜂蜜、甘蔗榨汁液(黑糖蜜)、饴糖、罗汉果末、罗汉果萃取物、甘草末、甘草萃取物、翅果竹芋种子末、翅果竹芋种子萃取物等天然甜味剂，或乙酰磺胺酸钾、三氯蔗糖、纽甜、阿斯巴甜、糖精等人工甜味剂等。其中，从清爽度、饮用容易度、自然的味道、赋予适度的醇香味的观点出发，优选使用天然甜味剂，特别适合使用果糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、砂糖。这些甜味剂可仅使用一种，也可使用多种。

就甜菊醇糖苷以外的甜味剂的含量而言，为高甜度甜味剂(例如，罗汉果苷V、木糖醇及人工甜味剂)时，本发明的甜菊醇糖苷组合物与甜菊醇糖苷以外的甜味剂的组成比，以重量比计，可为1：99～99：1、5：99～95：5、10：90～90：10、15：85～85：15、20：80～80：20、25：75～75：25、30：70～70：30、35：65～65：35、40：60～60：40、45：65～65：45或50：50。含有本发明的甜菊醇糖苷组合物与低甜度甜味剂(例如，蔗糖或果葡糖浆等)时，本发明的甜菊醇糖苷组合物与低甜度甜味剂的组成比，以重量比计，可为1：1000～1：100、1：800～1：100、1：700～1：100、1：600～1：100、1：500～1：100、1：400～1：100、1：300～1：100或1：200～1：100。

本发明的食品并无特别限定，例如可列举点心、面包类、谷粉、面类、米饭类、农业或林业加工食品、畜牧业加工品、水产加工品、奶或乳制品、油脂或油脂加工品、调料或其他食品原材料等。

作为本发明的饮料，并无特别限定，例如可列举碳酸饮料、非碳酸饮料、酒精饮料、非酒精饮料、啤酒或无酒精啤酒等啤酒风味饮料、咖啡饮料、茶饮料、可可饮料、营养饮料、功能性饮料等。

本发明的饮料也可制备为经加热杀菌并装入容器中的状态的容器装饮料。作为容器，并无特别限定，例如可列举PET瓶、铝罐、钢罐、纸盒、冷杯、瓶等。实施加热杀菌时，其种类并无特别限定，例如，可使用UHT杀菌及杀菌釜杀菌等通常的方法来实施。加热杀菌工序的温度并无特别限定，例如为65～130℃，优选为85～120℃下，10～40分钟。其中，只要可获得与上述条件同等的杀菌效果，也可在适当的温度下进行数秒，例如5～30秒的杀菌。

本发明的饮食品的制造方法，只要可获得含有上述各成分的饮食品即可，并无特别限定。根据本发明的一种实施方式，可提供一种制造方法，其为本发明的饮食品的制造方法，其特征在于，包含获得本发明的甜菊醇糖苷组合物，并将所述甜菊醇糖苷组合物添加至饮食品或其原料中。获得本发明的甜菊醇糖苷组合物如上述“1.甜菊醇糖苷组合物的制造方法”中所记载。将本发明的甜菊醇糖苷组合物添加至饮食品或其原料中，可在饮食品的制造工序中的任意的工序中实施，例如，可在对饮食品的原料进行混合时，也可在最终调整饮食品的味质时实施。

实施例

以下，通过实施例来详细地说明本发明，但本发明的内容并不由此限定。

＜制造例＞

1.萃取及固液分离

将甜菊干燥叶(含水率：3～4重量％)的15倍量的离子交换水加热至60℃±5℃，并将甜菊干燥叶浸入该水中。然后，用捏合萃取器(SKN-R100，三友机器株式会社制)以8rpm的搅拌棒一边搅拌一边实施萃取60分钟。接着通过18筛目和140筛目的筛网进行过滤，使用冷水以热交换器进行冷却，以碟型离心分离机(9150rpm(11601G)，24L/min)对滤液进行固液分离获得一次萃取液。期间，再次在相同条件下对过滤后的叶进行萃取，固液分离，获得透明的二次萃取液，加入至一次萃取液中，由此获得含有甜菊醇糖苷组合物的溶液。

2.凝聚

将相当于含甜菊醇糖苷的溶液中的可溶性固体成分的16.16％的量的Ca(OH)

3.树脂提纯

作为树脂提纯，实施(i)使用阴离子交换树脂的提纯和(ii)使用疏水性多孔质树脂(未导入离子交换基的树脂)的提纯。

(i)使用阴离子交换树脂的提纯

向管柱中填充高多孔质的碱性阴离子交换树脂(三菱化学公司制)，并向该管柱中投入凝聚分离后的第2处理液实施提纯。将凝聚分离后的第2处理液投入管柱后，接着用管柱容积的2倍量的离子交换水压出，回收经提纯的含有甜菊醇糖苷组合物的溶液。通过该提纯，可去除处理液中的黑色杂质和着色成分。

(ii)使用疏水性多孔质树脂的提纯

向管柱中填充疏水性多孔质树脂(三菱化学公司制)，并向该管柱中投入(i)使用阴离子交换树脂的提纯后的样本实施提纯。作为疏水性多孔质树脂，使用为苯乙烯与二乙烯苯的共聚物，不具有离子交换基，众数细孔半径为

4.蒸发浓缩

使用离心式薄膜真空蒸发装置EVAPOR(大川原制作所制)，一边对溶液进行蒸发浓缩一边去除乙醇。蒸发浓缩处理后，水也会残留，甜菊醇糖苷组合物为液状。

＜实施例1＞

评价含有甜菊萃取物的含甜菊醇糖苷的溶液中的甜菊醇糖苷浓度的pH依赖性。

除了将离子交换水的量设为甜菊干燥叶(含水率：3～4重量％)的30倍量，将萃取次数设为1次以外，以与上述＜制造例＞的“1.萃取及固液分离”同样的方法，准备含甜菊醇糖苷的溶液。此时，测定含甜菊醇糖苷的溶液的pH，为5.7。然后，向该含甜菊醇糖苷的溶液中添加NaOH(Nacalai Tesque株式会社制，4mol/L氢氧化钠溶液)或柠檬酸(富士胶片和光纯药株式会社制，产品编号038-06925，纯度99.5％以上)，使pH由约3～约12为止阶段性地变化，测定各pH下的瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷M的浓度。

接着，向将pH调整至约12的含甜菊醇糖苷的溶液中添加柠檬酸，使pH降低至约7为止，再次测定瑞鲍迪苷A的浓度。

使pH阶段性地变化至约12为止时的上述3种的甜菊醇糖苷的浓度的推移示于图1，然后使pH降低至约7时的瑞鲍迪苷A的含量的变化示于图2。另外，各甜菊醇糖苷的浓度，以下述表1所示的测定条件，通过液相色谱质量分析(LC/MSMS)法求取。

[表1]

[表1]

如图1所示，以pH9附近为界限，瑞鲍迪苷A的浓度增加，然后pH为约12时，其浓度显著增加。另一方面，瑞鲍迪苷D及瑞鲍迪苷M，即使使pH变为碱性也未确认浓度的增减。

由该结果确认，含甜菊醇糖苷的溶液中的瑞鲍迪苷A的pH依赖性的浓度增加。

此外，如图2所示，使pH上升至约12为止后，通过柠檬酸使pH下降至约7为止时的含甜菊醇糖苷的溶液中的瑞鲍迪苷A浓度未确认大幅改变。由此结果确认，pH一度上升至约12后，即使再度使pH下降至中性区域，瑞鲍迪苷A也稳定地存在于含甜菊醇糖苷的溶液中。

<实施例2>

针对通过实施例1确认含甜菊醇糖苷的溶液中的浓度增加的瑞鲍迪苷A，评价其浓度增加是否因碱剂的种类而变化。

以与上述<实施例1>同样的方法，准备含甜菊醇糖苷的溶液。此时测定含甜菊醇糖苷的溶液的pH，为5.8。接着，准备变更碱剂的种类的以下4种样本，使pH变为碱性。pH调整后的各样本的pH示于表2。

·样本1：无碱剂(pH无变化)

·样本2：NaOH(Nacalai Tesque株式会社制，4mol/L氢氧化钠溶液)

·样本3：KOH(Nacalai Tesque株式会社制，1mol/L氢氧化钾溶液)

·样本4：碳酸氢钠(NaHCO

然后，关于pH调整后的各样本1～4，以与实施例1同样的方法，测定瑞鲍迪苷A的浓度。结果示于图3。

[表2]

[表2]

如图3所示，pH调整至约12的样本2(NaOH)及样本3(KOH)中，与并未将pH从5.8进行变更的样本1相比，瑞鲍迪苷A的浓度显著增加。由该结果确认，瑞鲍迪苷A的浓度增加不依赖碱剂的种类，而依赖pH。

＜实施例3＞

为了研究甜菊醇糖苷的工业性生产中的制造时的参数，对改变pH及保持时间时的甜菊醇糖苷的浓度变化进行评价。

以与上述＜实施例1＞同样的方法准备含甜菊醇糖苷的溶液。接着，使用NaOH将含甜菊醇糖苷的溶液的pH调整至9、10、11、11.8、12、12.2及12.5，保持该pH，以表3所示时间将调节至各pH的样本于室温(约25℃)下保持。然后，使用柠檬酸针对各样本将pH调整至约7，以与实施例1同样的方法测定甜菊醇糖苷的浓度。以将pH调整至各指定值那一刻(0分)的样本为基准，调整至各pH的样本中的甜菊醇糖苷浓度的增加率示于表4～9。另外，表4为瑞鲍迪苷A，表5为瑞鲍迪苷C，表6为甜菊苷，表7为瑞鲍迪苷F，表8为瑞鲍迪苷G，表9为甜叶悬钩子苷的浓度的增加率。

[表3]

[表3]

[表4]

[表4：RebA]

[表5]

[表5：RebC]

[表6]

[表6：甜菊苷]

[表7]

[表7：RebF]

[表8]

[表8：RebG]

[表9]

[表9：甜叶悬钩子苷]

如表4～9所示，确认任一种甜菊醇糖苷均不依赖pH及保持时间，浓度增加后的甜菊醇糖苷稳定地存在于溶液中。此外，上述甜菊醇糖苷，均在调整至pH10～13的样本中确认浓度的大幅增加。