氟环唑和多菌灵的超高效液相色谱串联质谱检测方法

技术领域

本发明涉及柑橘中的氟环唑和多菌灵的检测，尤其是指用超高效液相色谱串接质谱联用仪对柑橘中氟环唑和多菌灵进行检测的方法，该方法具有简便快捷、灵敏度高、重现性好等优点。

背景技术

氟环唑是巴斯夫公司研发的低毒、长效、内吸型三唑类杀菌剂，能被植物的茎、叶吸收，并向上、向外传导，可有效抑制病菌麦角甾醇的合成，阻碍病菌细胞壁的形成；可快速被靶标植株吸收并传导至相应的感病部位，使病害浸染立刻停止；可以防治多种作物真菌性病害，对一系列禾谷类作物病害如眼纹病、白粉病、立枯病等具有良好的预防和防治效果，广泛应用于香蕉、水稻、柑橘等作物上。

多菌灵属苯并咪唑类杀菌剂，高效低毒，具有治疗和保护作用，对子囊菌纲的某些病原菌和半知菌类中的大多数病原真菌有效，其作用机理是干扰病原菌有丝分裂中纺锤体的形成，影响细胞分裂，起到杀菌作用。对柑橘树炭疽病具有较好防效。

柑橘在生产、储藏和运输过程中容易发生炭疽病和酸腐病等病害，目前常用采摘前喷药和采摘后浸药两种方式，但是用药种类和方式没有统一的标准，氟环唑和多菌灵作为低毒高效的杀菌剂，可有效治疗柑橘的炭疽病等。目前关于柑橘中氟环唑和多菌灵的超高效液相色谱串联质谱检测方法未见相关报道。

发明内容

本发明的目的在于针对目前氟环唑和多菌灵在柑橘中广泛使用但分析方法缺失的现状，提供一种超高效液相色谱串联质谱法检测柑橘全果和果肉中氟环唑和多菌灵的方法，其具有灵敏度高、重现性好、有机溶剂用量少等特点，可满足氟环唑和多菌灵残留分析要求。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种检测柑橘全果和果肉中氟环唑和多菌灵残留量的超高效液相色谱串联质谱法，包括如下步骤：

(1)配制氟环唑和多菌灵的柑橘全果和果肉基质混合标准工作溶液：

称取10.00g经测定不含氟环唑和多菌灵的空白柑橘全果和果肉样品，加入40mL提取液(乙腈)，7g氯化钠，涡旋提取3min，4000rmp离心3min，取上清液；

取1.5mL上述上清液放入预先加有100mg PSA的离心管中，混匀，11000rmp离心3min，准确移取1mL上清液浓缩近干后，用乙腈：水(1:1V/V)定容至2mL，离过0.22μm滤膜，得到空白基质提取净化液；以空白基质提取净化液为溶剂配制氟环唑和多菌灵的柑橘全果和果肉基质标准工作溶液；

(2)用超高效液相色谱串联质谱法测定氟环唑和多菌灵的基质标准工作溶液中农药组分的提取离子峰面积，以浓度为横坐标，以提取离子峰面积为纵坐标绘制出氟环唑和多菌灵的标准工作曲线；

其中测定条件为：电离源模式：ESI；电离源极性：正；雾化气：氮气；鞘气压力：276kPa；离子传输管温度：350℃；喷针温度：320℃；离子喷雾电压：3500V；色谱柱HypersilGOLD C18(2.1mm×100mm 1.9μm)，柱温：35℃；流速：0.3mL/min；进样量：5μL；其他具体的质谱条件见表1。流动相B为甲醇溶液，流动相C为0.1％甲酸水溶液(v/v)，梯度洗脱条件见表2(表2中流动相B、C两种溶剂的比例均为体积比)。

表1氟环唑和多菌灵的质谱条件

表2梯度洗脱条件

(3)测定柑橘全果和果肉样品中氟环唑和多菌灵残留量，检测方法包括以下步骤：

对柑橘全果和果肉样品进行提取；称取柑橘全果和果肉样品10.00g，加入40mL提取液(乙腈)，混匀后，继续加入7g氯化钠，涡旋提取3min，4000rmp离心3min，取上清液；

对所述待净化的柑橘全果和果肉样品提取液进行净化；取1.5mL上述上清液放入预先加有100mg PSA的离心管中，混匀，11000rmp离心3min，准确移取1mL上清液浓缩近干后，用乙腈：水(1:1V/V)定容至2mL，过0.22μm滤膜后，得到用于测定氟环唑和多菌灵残留的柑橘全果和果肉样品提取净化液；

(4)用超高效液相色谱串联质谱法测定所述柑橘全果和果肉样品提取净化液中的氟环唑和多菌灵残留量，记录色谱峰面积，基质外标法定量，得到所述柑橘全果和果肉样品提取净化液中氟环唑和多菌灵的测定值；再将所述测定值带入到定量计算公式中，最终得到柑橘全果和果肉样品中待测氟环唑和多菌灵残留量；

定量计算公式：R＝(C×V1×V3)/m×V2，式中：R为样品中农药的残留量(mg/kg)；C为根据样品峰面积经标准曲线或单点定量计算得出样品进样浓度(mg/L)；m为称样量(g)；V1为提取液体积(mL)；V2为分取液体积(mL)；V3为定容体积(mL)；

其中所述柑橘全果和果肉样品提取净化液中的氟环唑和多菌灵的色谱条件与步骤(2)中的氟环唑和多菌灵的色谱条件相同。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)使用本发明的前处理方法操作步骤简便，定性定量能力较强，对目标农药的提取率高，提取溶剂用量少，添加回收率合格；

(2)使用本发明的超高效液相色谱串联质谱法可以同一测定条件下进行氟环唑和多菌灵两种化学农药的检测；

(3)本发明使用的超高效液相色谱串联质谱，方法的准确度和灵敏度高；样品检测时间短，检测效率高。

附图说明

图1为基质溶液中0.1mg/L氟环唑的色谱图。

图2为柑橘全果样品中氟环唑的色谱图。

图3为柑橘果肉样品中氟环唑的色谱图。

图4为基质溶液中0.1mg/L多菌灵的色谱图。

图5为柑橘全果样品中多菌灵的色谱图。

图6为柑橘果肉样品中多菌灵的色谱图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不能用来限制本发明的范围。

实施例中氟环唑(纯度98.5％)和多菌灵(纯度99.58％)均购自坛墨质检科技股份有限公司；N-丙基乙二胺(PSA)吸附剂购自上海安谱实验科技股份有限公司。

一种检测柑橘全果和果肉中氟环唑和多菌灵残留量的超高效液相色谱串联质谱法实施例：

采集柑橘全果和果肉样品，运用本发明的方法分析柑橘全果和果肉中氟环唑和多菌灵，包括以下步骤：

(1)配制氟环唑和多菌灵的柑橘全果和果肉基质混合标准工作溶液：

称取10.00g经测定不含氟环唑和多菌灵的空白柑橘全果和果肉样品，加入40mL提取液(乙腈)，混匀后，加入7g氯化钠，涡旋提取3min，4000rmp离心3min，取上清液；

取1.5mL上述上清液放入预先加有100mg PSA的离心管中，混匀，11000rmp离心3min，准确移取1mL上清液浓缩近干后，用乙腈：水(1:1V/V)定容至2mL，过0.22μm滤膜，得到柑橘全果和果肉的空白基质提取净化液。以空白基质提取净化液为溶剂配制氟环唑和多菌灵的柑橘全果和果肉基质标准工作溶液；

步骤(1)所述的柑橘全果和果肉基质标准工作溶液中，氟环唑和多菌灵的浓度范围均为0.5-1000μg/L；

(2)用超高效液相色谱串联质谱法测定氟环唑和多菌灵的基质标准工作溶液中农药组分的提取离子峰面积，以浓度为横坐标，以提取离子峰面积为纵坐标绘制出氟环唑和多菌灵的标准工作曲线；

其中测定条件为：电离源模式：ESI；电离源极性：正；雾化气：氮气；鞘气压力：276kPa；离子传输管温度：350℃；喷针温度：320℃；离子喷雾电压：3500V；色谱柱HypersilGOLD C18(2.1mm×100mm1.9μm)，柱温：35℃；流速：0.3mL/min；进样量：5μL；其他具体的质谱条件见表1。流动相B为甲醇溶液，流动相C为0.1％甲酸水溶液(v/v)，梯度洗脱条件见表2(表2中流动相B、C两种溶剂的比例均为体积比)。

氟环唑和多菌灵的柑橘全果和果肉基质标准溶液色谱质谱图如图1和图4所示。

(3)测定柑橘全果和果肉样品中氟环唑和多菌灵残留量，检测方法包括以下步骤：

对柑橘全果和果肉样品进行提取；称取柑橘全果和果肉样品10.00g，加入40mL提取液(乙腈)，混匀后，继续加入7g氯化钠，涡旋提取3min，4000rmp离心3min，取上清液；

对所述待净化的柑橘全果和果肉样品提取液进行净化；取1.5mL上述上清液放入预先加有100mg PSA的离心管中，混匀，11000rmp离心3min，准确移取1mL上清液浓缩近干后，用乙腈：水(1:1V/V)定容至2mL，过0.22μm滤膜后，得到用于测定氟环唑和多菌灵残留的柑橘全果和果肉样品提取净化液；

(4)用超高效液相色谱串联质谱法测定所述柑橘全果和果肉样品提取净化液中的氟环唑和多菌灵残留量，记录色谱峰面积，基质外标法定量，得到所述柑橘全果和果肉样品提取净化液中氟环唑和多菌灵的测定值；再将所述测定值带入到定量计算公式中，最终得到柑橘全果和果肉样品中待测氟环唑和多菌灵残留量；

定量计算公式：R＝(C×V1×V3)/m×V2，式中：R为样品中农药的残留量(mg/kg)；C为根据样品峰面积经标准曲线或单点定量计算得出样品进样浓度(mg/L)；m为称样量(g)；V1为提取液体积(mL)；V2为分取液体积(mL)；V3为定容体积(mL)；

其中所述柑橘全果和果肉样品提取净化液中的氟环唑和多菌灵的色谱条件与步骤(2)中的氟环唑和多菌灵的色谱条件相同。

柑橘全果和果肉样品中氟环唑的色谱质谱图如图2和图3所示；

柑橘全果和果肉样品中多菌灵的色谱质谱图如图5和图6所示。

(5)根据氟环唑和多菌灵的测定值，按照定量公式，求出柑橘全果和果肉样品中的氟环唑浓度为0.19mg/kg和0.019mg/kg，多菌灵浓度为0.022mg/kg和0.036mg/kg。

氟环唑和多菌灵的基质标准工作曲线以及定量范围，方法检测限(LOQ)见表3。

表3氟环唑和多菌灵的基质标准工作曲线等相关参数

以上实施方式仅用于说明本发明，而非对本发明的限制。尽管参照实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，对本发明的技术方案进行各种组合、修改或者等同替换，都不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。