基于特异性遗传位点鉴定龙胜凤鸡的方法

技术领域

本发明涉及家禽遗传资源、生物技术领域，具体涉及一种基于特异性遗传位点鉴定龙胜凤鸡的方法。

背景技术

龙胜凤鸡，也称“瑶山鸡”，是瑶族群众长期选育的地方家禽品种。该鸡中心产区为广西龙胜各族自治县，因其凤头、羽色绚丽多彩而得名，喻有凤凰之意。2009年，龙胜凤鸡被列为国家级畜禽遗传资源，2011年农业部批准对“龙胜凤鸡”实施农产品地理标志登记保护。龙胜凤鸡属于肉蛋兼用型地方鸡种，主要用来生产草蛋鸡、优质鸡。近年来，在各界努力下，龙胜凤鸡已小有名气。在推广龙胜凤鸡的过程中，时常出现以杂交或外貌近似品种冒充龙胜凤鸡的现象。

黄英飞等人利用微卫星标记和线粒体mtDNA D-loop区分析龙胜凤鸡遗传多样性，结果表明:18对微卫星检测中,龙胜凤鸡的多态信息含量PIC平均为0.5869，4个中度多态位点，14个高度多态位点；线粒体mtDNA D-loop区中，共发现9种单倍型，21个变异位点，变异方式主要是转换，未发现缺失；核苷酸多样度为(0.01129±0.00349)，单倍型多态度为(0.5150±0.1110)；在NJ系统发生树上，分为3大类群，则具有3个血统来源，结果显示龙胜凤鸡具有比较丰富的遗传多样性和较低的变异程度，说明采用家系保种法对龙胜凤鸡进行保种，方法有效可行(黄英飞,莫国东,吴强,等.利用微卫星标记和线粒体mtDNA D-loop区分析龙胜凤鸡遗传多样性[J].畜牧兽医科学(电子版),2019(18).)。

而目前，有关龙胜凤鸡品种鉴定的有效方法依然是空白。

发明内容

本发明主要目的是提供一种基于特异性遗传位点鉴定龙胜凤鸡的方法，本发明对筛选得到的龙胜凤鸡特异性遗传位点设计引物，利用龙胜凤鸡及其它多个鸡种在内的样本进行实际鉴定，筛选得到了对龙胜凤鸡鉴定率在85％及以上的特异性位点，因此，基于本发明筛选得到的特异性位点或其组合对龙胜凤鸡品种进行鉴定，准确率更高，所得鉴定结果更为可靠。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供一种基于特异性遗传位点鉴定龙胜凤鸡的方法，采用以下任意一个或几个特异性遗传位点进行鉴定：

LF_tag1位于鸡1号染色体177196566处，FLT1基因第6内含子，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag2位于鸡1号染色体6414462处，CELF2基因第2内含子，龙胜凤鸡基因型为CC；

LF_tag3位于鸡1号染色体25093360处，MET基因第8内含子，龙胜凤鸡基因型为GG；

LF_tag4位于鸡2号染色体99984714处，基因TMEM200C第2内含子，龙胜凤鸡基因型为CC；

LF_tag5位于鸡3号染色体53147306处，NMBR基因第1内含子，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag6位于鸡3号染色体44099105.处，基因PDE10A与QKI之间，龙胜凤鸡基因型为AAG//AAG，突变基因型为缺失AAG；

LF_tag7位于鸡3号染色体32599434处，CRIM1基因与SULT6B1之间，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag8位于鸡5号染色体55636675处，SLC35F4基因第1内含子，龙胜凤鸡基因型为缺失基因型--(参考基因型为GG)；

LF_tag9位于鸡9号染色体5222347处，FARP2基因‘第13内含子，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag10位于鸡10染色体11467052处，PDE8A基因5’UTR区，龙胜凤鸡基因型为GG；

LF_tag11位于鸡15染色体12745870处，RBM19基因第8内含子，龙胜凤鸡基因型为GG；

LF_tag12位于鸡28染色体3854254处，UPF1基因第16内含子，龙胜凤鸡基因型为CC。

进一步地，采用以下特异性位点进行鉴定：

LF_tag6位于鸡3号染色体44099105.处，基因PDE10A与QKI之间，龙胜凤鸡基因型为AAG//AAG，突变基因型为缺失AAG；

LF_tag8位于鸡5号染色体55636675处，SLC35F4基因第1内含子，龙胜凤鸡基因型为缺失基因型--(参考基因型为GG)。

进一步地，采用以下特异性位点进行鉴定：

LF_tag1位于鸡1号染色体177196566处，FLT1基因第6内含子，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag2位于鸡1号染色体6414462处，CELF2基因第2内含子，龙胜凤鸡基因型为CC；

LF_tag3位于鸡1号染色体25093360处，MET基因第8内含子，龙胜凤鸡基因型为GG；

LF_tag4位于鸡2号染色体99984714处，基因TMEM200C第2内含子，龙胜凤鸡基因型为CC；

LF_tag5位于鸡3号染色体53147306处，NMBR基因第1内含子，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag7位于鸡3号染色体32599434处，CRIM1基因与SULT6B1之间，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag9位于鸡9号染色体5222347处，FARP2基因‘第13内含子，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag10位于鸡10染色体11467052处，PDE8A基因5’UTR区，龙胜凤鸡基因型为GG；

LF_tag11位于鸡15染色体12745870处，RBM19基因第8内含子，龙胜凤鸡基因型为GG；

LF_tag12位于鸡28染色体3854254处，UPF1基因第16内含子，龙胜凤鸡基因型为CC。

进一步地，采用以下特异性位点进行鉴定：

LF_tag2位于鸡1号染色体6414462处，CELF2基因第2内含子，龙胜凤鸡基因型为CC；

LF_tag8位于鸡5号染色体55636675处，SLC35F4基因第1内含子，龙胜凤鸡基因型为缺失基因型--(参考基因型为GG)；

LF_tag1位于鸡1号染色体177196566处，FLT1基因第6内含子，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag4位于鸡2号染色体99984714处，基因TMEM200C第2内含子，龙胜凤鸡基因型为CC；

LF_tag5位于鸡3号染色体53147306处，NMBR基因第1内含子，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag7位于鸡3号染色体32599434处，CRIM1基因与SULT6B1之间，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag12位于鸡28染色体3854254处，UPF1基因第16内含子，龙胜凤鸡基因型为CC。

进一步地，鉴定所述特异性遗传位点所用引物分别为：

用于检测所述标记LF_tag1的引物为LF_P1f和LF_P1r：

LF_P1f：TACAGAATAACTGCCAGGAG；

LF_P1r：GGAGAAGTGACAGAGAAGAT；

用于检测所述标记LF_tag2的引物为LF_P2f和LF_P2r：

LF_P2f：TGTTGTGCCTGTGTCATT；

LF_P2r：CATCTCTGGTGTGCTTCA；

用于检测所述标记LF_tag3的引物为LF_P3f和LF_P3r：

LF_P3f：AATGCTTGGTTGCCTATTG；

LF_P3r：ATCTGGAGGAACATTGCTAA；

用于检测所述标记LF_tag4的引物为LF_P4f和LF_P4r：

LF_P4f：CTACCTACCAGCCACCAT；

LF_P4r：TCTTGTTCGTCCTTCATCTT；

用于检测所述标记LF_tag5的引物为LF_P5f和LF_P5r：

LF_P5f：CCTGGCAGTGTTCAAGAG；

LF_P5r：GCAAGCACAGAGTCCTAC；

用于检测所述标记LF_tag6的引物为LF_P6f和LF_P6r：

LF_P6f：AAGTCACATCCTCAGCATT；

LF_P6r：TTCTGTTCCTCTTCTTCCAA；

用于检测所述标记LF_tag7的引物为LF_P7f和LF_P7r：

LF_P7f：GACATGAGGTTCAAGTCTTATC；

LF_P7r：TTATTGTTCAGGTGGTGGTT；

用于检测所述标记LF_tag8的引物为LF_P8f和LF_P8r：

LF_P8f：TGATGAATAGAGTCCTGAAGC；

LF_P8r：ACCAGCATACAGAGCACTA；

用于检测所述标记LF_tag9的引物为LF_P9f和LF_P9r：

LF_P9f：CGTCTCTTAACTTGGTCATAC；

LF_P9r：GCTCACAATACAGGTCTATTAC；

用于检测所述标记LF_tag10的引物为LF_P10f和LF_P10r:

LF_P10f：ACTGATGTTATCGTGTGGAA；

LF_P10r：CCTAAGGCTCTGATTCGTTA；

用于检测所述标记LF_tag11的引物为LF_P11f和LF_P11r：

LF_P11f：ATGGTGGTGATTATGTTGGA；

LF_P11r：CATCTGCTTCTAGGCTATGA；

用于检测所述标记LF_tag12的引物为LF_P12f和LF_P12r：

LF_P12f：CATTCACTGCTATCACCTCT；

LF_P12r：CTTCTAACACTCTGCTCCTT。

本发明提供一种引物组合，其包括以下一对或几对引物：

用于检测所述标记LF_tag1的引物为LF_P1f和LF_P1r：

LF_P1f：TACAGAATAACTGCCAGGAG；

LF_P1r：GGAGAAGTGACAGAGAAGAT；

用于检测所述标记LF_tag2的引物为LF_P2f和LF_P2r：

LF_P2f：TGTTGTGCCTGTGTCATT；

LF_P2r：CATCTCTGGTGTGCTTCA；

用于检测所述标记LF_tag3的引物为LF_P3f和LF_P3r：

LF_P3f：AATGCTTGGTTGCCTATTG；

LF_P3r：ATCTGGAGGAACATTGCTAA；

用于检测所述标记LF_tag4的引物为LF_P4f和LF_P4r：

LF_P4f：CTACCTACCAGCCACCAT；

LF_P4r：TCTTGTTCGTCCTTCATCTT；

用于检测所述标记LF_tag5的引物为LF_P5f和LF_P5r：

LF_P5f：CCTGGCAGTGTTCAAGAG；

LF_P5r：GCAAGCACAGAGTCCTAC；

用于检测所述标记LF_tag6的引物为LF_P6f和LF_P6r：

LF_P6f：AAGTCACATCCTCAGCATT；

LF_P6r：TTCTGTTCCTCTTCTTCCAA；

用于检测所述标记LF_tag7的引物为LF_P7f和LF_P7r：

LF_P7f：GACATGAGGTTCAAGTCTTATC；

LF_P7r：TTATTGTTCAGGTGGTGGTT；

用于检测所述标记LF_tag8的引物为LF_P8f和LF_P8r：

LF_P8f：TGATGAATAGAGTCCTGAAGC；

LF_P8r：ACCAGCATACAGAGCACTA；

用于检测所述标记LF_tag9的引物为LF_P9f和LF_P9r：

LF_P9f：CGTCTCTTAACTTGGTCATAC；

LF_P9r：GCTCACAATACAGGTCTATTAC；

用于检测所述标记LF_tag10的引物为LF_P10f和LF_P10r:

LF_P10f：ACTGATGTTATCGTGTGGAA；

LF_P10r：CCTAAGGCTCTGATTCGTTA；

用于检测所述标记LF_tag11的引物为LF_P11f和LF_P11r：

LF_P11f：ATGGTGGTGATTATGTTGGA；

LF_P11r：CATCTGCTTCTAGGCTATGA；

用于检测所述标记LF_tag12的引物为LF_P12f和LF_P12r：

LF_P12f：CATTCACTGCTATCACCTCT；

LF_P12r：CTTCTAACACTCTGCTCCTT。

本发明还提供以上所述引物组合在鉴定龙胜凤鸡中的应用。

本发明还提供一种包括以上所述引物组合的试剂盒。

本发明还提供以上所述试剂盒在鉴定龙胜凤鸡中的应用。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明提供了一组特异性强、对龙胜凤鸡鉴定率高的特异性遗传位点，所述位点包括十个SNPs位点和两个INDELs位点。其中，两个INDELs位点LF_tag6、LF_tag8对龙胜凤鸡的鉴定率分别为95％、100％。

此外，本发明根据各遗传特异性位点设计的引物，用于对待测鸡相应位点的扩增、鉴定，特异性强，准确率高，为龙胜凤鸡品种的有效鉴定提供坚实基础。

附图说明

构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。

图1为基于贝叶斯法构建的地方鸡种系统进化树。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。

为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。

实施例1

(一)简化基因组测序筛选龙胜凤鸡品种特异性遗传标记：

供试样本:包括龙胜凤鸡(20只)、济宁百日鸡(20只)、琅琊鸡(20只)、寿光鸡(20只)、汶上芦花鸡(20只)、太湖鸡(20只)、鹿苑鸡(20只)、狼山鸡(20只)、溧阳鸡(20只)、徐海鸡(20只)、如皋黄鸡(20只)、闽清毛脚鸡(20只)、淮北麻鸡(20只)，每个品种公母各半。翅静脉采血0.5-1.0ml，置入抗凝管，-70℃保存。

采用常规血液DNA提取试剂盒抽取基因组DNA。以限制性内切酶对基因组DNA进行酶切，然后加上测序接头，构建小片段文库，进行GBS简化基因组测序。

为了检查酶切的效率，便于后续序列分析，进行了染色体电子酶切评估。为了保证数据质量，对原始序列进行更严格的过滤：去除含有接头序列的读长；去除未知碱基比例大于10％的读长；去除低质量读长(Q值低于10的碱基占比高于50％以上)。龙胜凤鸡1个体因质控不合格，将其从测序数据中剔除。

以最小等位基因频率-连锁不平衡方法分析259个地方鸡简化基因组序列，筛选得到15个龙胜凤鸡品种特异性SNPs/INDELs标记。15个SNPs/INDELs位点的物理位置是基于鸡全基因组参考序列比对确定的，所述鸡全基因组标准序列的版本号为(Gallus gallusGRCg6)。龙胜凤鸡品种特异性SNPs/INDELs标记具体如下:

LF_tag1位于鸡1号染色体177196566处，FLT1基因第6内含子，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag2位于鸡1号染色体6414462处，CELF2基因第2内含子，龙胜凤鸡基因型为CC；

LF_tag3位于鸡1号染色体25093360处，MET基因第8内含子，龙胜凤鸡基因型为GG；

LF_tag4位于鸡2号染色体99984714处，基因TMEM200C第2内含子，龙胜凤鸡基因型为CC；

LF_tag5位于鸡3号染色体53147306处，NMBR基因第1内含子，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag6位于鸡3号染色体44099105.处，基因PDE10A与QKI之间，龙胜凤鸡基因型为AAG//AAG，突变基因型为缺失AAG；

LF_tag7位于鸡3号染色体32599434处，CRIM1基因与SULT6B1之间，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag8位于鸡5号染色体55636675处，SLC35F4基因第1内含子，龙胜凤鸡基因型为缺失基因型--(参考基因型为GG)；

LF_tag9位于鸡9号染色体5222347处，FARP2基因‘第13内含子，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag10位于鸡10染色体11467052处，PDE8A基因5’UTR区，龙胜凤鸡基因型为GG；

LF_tag11位于鸡15染色体12745870处，RBM19基因第8内含子，龙胜凤鸡基因型为GG；

LF_tag12位于鸡28染色体3854254处，UPF1基因第16内含子，龙胜凤鸡基因型为CC；

Tag18_1位于鸡18号染色体3243101处，基因TBCD第7内含子，龙胜凤鸡基因型为TT；

Tag6_2位于鸡6号染色体8871256处，基因RTKN2第15内含子，龙胜凤鸡基因型为CC；

Tag15_1位于鸡15号染色体6864614处，基因CORO1C第8内含子，龙胜凤鸡基因型为AA。

其中LF_tag6、LF_tag8为特异性INDEL位点，其余均为特异性SNP位点。

针对以上所述特异性位点，设计以下引物：

用于检测所述标记LF_tag1的引物为LF_P1f和LF_P1r所示两条单链DNA；

用于检测所述标记LF_tag2的引物为LF_P2f和LF_P2r所示两条单链DNA；

用于检测所述标记LF_tag3的引物为LF_P3f和LF_P3r所示两条单链DNA；

用于检测所述标记LF_tag4的引物为LF_P4f和LF_P4r所示两条单链DNA；

用于检测所述标记LF_tag5的引物为LF_P5f和LF_P5r所示两条单链DNA；

用于检测所述标记LF_tag6的引物为LF_P6f和LF_P6r所示两条单链DNA；

用于检测所述标记LF_tag7的引物为LF_P7f和LF_P7r所示两条单链DNA；

用于检测所述标记LF_tag8的引物为LF_P8f和LF_P8r所示两条单链DNA；

用于检测所述标记LF_tag9的引物为LF_P9f和LF_P9r所示两条单链DNA；

用于检测所述标记LF_tag10的引物为LF_P10f和LF_P10r所示两条单链DNA；

用于检测所述标记LF_tag11的引物为LF_P11f和LF_P11r所示两条单链DNA；

用于检测所述标记LF_tag12的引物为LF_P12f和LF_P12r所示两条单链DNA；

用于检测所述标记Tag18_1的引物为Tag_P18_1f和Tag_P18_1r所示两条单链DNA；

用于检测所述标记Tag6_2的引物为Tag_P6_2f和Tag_P6_2r所示两条单链DNA；

用于检测所述标记Tag15_1的引物为Tag_P15_1f和Tag_P15_1r。

以上所述引物序列、扩增片段长度以及退火温度，如下表1所示。

表1.检测龙胜凤鸡品种特异性标记所用扩增引物

(二)对以上筛选得到的特异性遗传位点进行验证

应用上述15个特异性位点及相应引物对20份龙胜凤鸡血样和360份非龙胜凤鸡血样进行鉴定。具体操作步骤如下：

以CTAB法提取380份血液样品基因组DNA，经紫外分光光度计检测、琼脂糖电泳检测合格后进行PCR扩增。

PCR扩增过程：

1)反应体系:10μl体系包括鉴定材料DNA模板50ng，正、反向引物各lOng,5μL 2×

power Taq MasterMix，剩余体积用超纯水补足；

2)反应程序:首先94℃变性30s,51.0-56.1℃退火30s,72℃延伸30s，共5个循环；接着94℃变性30s,51.5-55.2℃退火30s,72摄氏度延伸30s，共30个循环；72℃延伸5min,4℃保存。

扩增产物送至测序公司进行DNA序列多态性检测。对于INDELs标记，也可选择毛细管电泳检测片段扩增长度，作为基因分型依据。各特异性标记位点对龙胜凤鸡的鉴定率如下表2所示。

表2.龙胜凤鸡品种特异性标记鉴定率

由上述表2可知，LF_tag1-12所述位点对龙胜凤鸡鉴定率均在85％及以上，其中特异性INDELs位点LF_tag8的鉴定率可达100％，而特异性位点Tag18_1、Tag6_2、Tag15_1对龙胜凤鸡的鉴定率均在80％以下。因此筛选LF_tag1-12位点的一个或多个的组合用于龙胜凤鸡的鉴定。

实施例2

基于特异性遗传位点鉴定龙胜凤鸡的方法：采用以下特异性位点进行鉴定：

LF_tag6位于鸡3号染色体44099105.处，基因PDE10A与QKI之间，龙胜凤鸡基因型为AAG//AAG，突变基因型为缺失AAG；

LF_tag8位于鸡5号染色体55636675处，SLC35F4基因第1内含子，龙胜凤鸡基因型为缺失基因型--(参考基因型为GG)。

实施例3

基于特异性遗传位点鉴定龙胜凤鸡的方法：采用以下特异性位点进行鉴定：

LF_tag1位于鸡1号染色体177196566处，FLT1基因第6内含子，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag2位于鸡1号染色体6414462处，CELF2基因第2内含子，龙胜凤鸡基因型为CC；

LF_tag3位于鸡1号染色体25093360处，MET基因第8内含子，龙胜凤鸡基因型为GG；

LF_tag4位于鸡2号染色体99984714处，基因TMEM200C第2内含子，龙胜凤鸡基因型为CC；

LF_tag5位于鸡3号染色体53147306处，NMBR基因第1内含子，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag7位于鸡3号染色体32599434处，CRIM1基因与SULT6B1之间，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag9位于鸡9号染色体5222347处，FARP2基因‘第13内含子，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag10位于鸡10染色体11467052处，PDE8A基因5’UTR区，龙胜凤鸡基因型为GG；

LF_tag11位于鸡15染色体12745870处，RBM19基因第8内含子，龙胜凤鸡基因型为GG；

LF_tag12位于鸡28染色体3854254处，UPF1基因第16内含子，龙胜凤鸡基因型为CC。

实施例4

基于特异性遗传位点鉴定龙胜凤鸡的方法：采用以下特异性位点进行鉴定：

LF_tag2位于鸡1号染色体6414462处，CELF2基因第2内含子，龙胜凤鸡基因型为CC；

LF_tag8位于鸡5号染色体55636675处，SLC35F4基因第1内含子，龙胜凤鸡基因型为缺失基因型--(参考基因型为GG)；

LF_tag1位于鸡1号染色体177196566处，FLT1基因第6内含子，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag4位于鸡2号染色体99984714处，基因TMEM200C第2内含子，龙胜凤鸡基因型为CC；

LF_tag5位于鸡3号染色体53147306处，NMBR基因第1内含子，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag7位于鸡3号染色体32599434处，CRIM1基因与SULT6B1之间，龙胜凤鸡基因型为AA；

LF_tag12位于鸡28染色体3854254处，UPF1基因第16内含子，龙胜凤鸡基因型为CC。

实施例5

一种引物组合，包括以下引物对：LF_P1f和LF_P1r，LF_P2f和LF_P2r，LF_P4f和LF_P4r，LF_P5f和LF_P5r，LF_P7f和LF_P7r，LF_P8f和LF_P8r，LF_P12f和LF_P12r。

所述引物组合可用于对龙胜凤鸡品种的鉴定，也可用于制备试剂盒。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 江苏省家禽科学研究所 四川璟燚生物科技有限公司

<120> 基于特异性遗传位点鉴定龙胜凤鸡的方法

<130>

<160> 30

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

tacagaataa ctgccaggag 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

ggagaagtga cagagaagat 20

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

tgttgtgcct gtgtcatt 18

<210> 4

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

catctctggt gtgcttca 18

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

aatgcttggt tgcctattg 19

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<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

atctggagga acattgctaa 20

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<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

ctacctacca gccaccat 18

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<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

tcttgttcgt ccttcatctt 20

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<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

cctggcagtg ttcaagag 18

<210> 10

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

gcaagcacag agtcctac 18

<210> 11

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

aagtcacatc ctcagcatt 19

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

ttctgttcct cttcttccaa 20

<210> 13

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

gacatgaggt tcaagtctta tc 22

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 14

ttattgttca ggtggtggtt 20

<210> 15

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

tgatgaatag agtcctgaag c 21

<210> 16

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

accagcatac agagcacta 19

<210> 17

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

cgtctcttaa cttggtcata c 21

<210> 18

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

gctcacaata caggtctatt ac 22

<210> 19

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

actgatgtta tcgtgtggaa 20

<210> 20

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 20

cctaaggctc tgattcgtta 20

<210> 21

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 21

atggtggtga ttatgttgga 20

<210> 22

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 22

catctgcttc taggctatga 20

<210> 23

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 23

cattcactgc tatcacctct 20

<210> 24

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 24

cttctaacac tctgctcctt 20

<210> 25

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 25

tatgctgatg ctgctgag 18

<210> 26

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 26

cagatgtgcc aagatgct 18

<210> 27

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 27

agtaggtagg tgaagtaagg a 21

<210> 28

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 28

ggacagatag caggacaag 19

<210> 29

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 29

ggcaagacag gtgagatg 18

<210> 30

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 30

ccatagaagg cgatgaagaa 20