一种疏风止痛胶囊中川芎的质量控制方法

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种疏风止痛胶囊中川芎的质量控制方法。

背景技术

疏风止痛胶囊是在《辨证录》“救破汤”的基础上，结合临床经验拟定而成的方剂，川芎为其中的君药组分。

川芎(Ligusticum chuanxiong hort)，栽培植物，主产于四川(灌县)，在云南、贵州、广西等地，生长于温和的气候环境。川芎是一种中药植物，常用于活血行气，祛风止痛，川芎辛温香燥，走而不守，既能行散，上行可达巅顶；又入血分，下行可达血海。活血祛瘀作用广泛，适宜瘀血阻滞各种病症；可治头风头痛、风湿痹痛等症。昔人谓川芎为血中之气药，殆言其寓辛散、解郁、通达、止痛等功能。

疏风止痛胶囊为硬胶囊，其内容物为棕色至棕褐色粉末。但目前对于该疏风止痛胶囊缺乏全面规范的方法学研究资料，并未有对川芎制定有规范的质量标准。

故而，亟需一种疏风止痛胶囊中川芎的质量控制方法。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种疏风止痛胶囊中川芎的质量控制方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

提供一种疏风止痛胶囊中川芎的质量控制方法，步骤包括：

S1、取样品研细后，加入第一溶剂，进行超声处理，放冷、滤过、蒸干滤液，于残渣中加入第一溶剂溶解，即得第一供试品溶液；依照薄层色谱法鉴别：所述第一供试品溶液的薄层色谱中，在与第一对照品溶液的薄层色谱以及第二对照品溶液的薄层色谱相应的位置上，是否显有相同颜色的斑点；

S2、将样品混匀研细后，精密称定，并精密加入第二溶剂，称定重量，进行加热回流，放冷，再次称定重量，并用第二溶剂补足所减失的重量，摇匀、静置，取上清液并滤过，取续滤液，即得第二供试品溶液；依照高效液相色谱法测定：以阿魏酸计，每0.29g样品中川芎的含量是否少于0.30mg。

优选地，所述第一溶剂为乙醇；所述第二溶剂为甲醇。

优选地，所述薄层色谱法包括：吸取所述第一供试品溶液、所述第一对照品溶液以及所述第二对照品溶液，分别点于同一薄层板上，展开、取出、晾干，并置于紫外光灯下检视。

优选地，所述第一对照品溶液由每1mL所述第一溶剂中加入1mg阿魏酸对照品制得；所述第二对照品溶液由每1mL所述第一溶剂中加入1mg藁本内酯对照品制得。

优选地，所述薄层色谱法的条件包括：点样量为2μL；所述薄层板为硅胶GF

优选地，所述展开剂中，甲苯与甲醇与冰醋酸间的体积比为30:3:1。

优选地，所述高效液相色谱法包括：精密吸取所述第二供试品溶液以及第三对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪。

优选地，所述第三对照品溶液由每1mL所述第二溶剂中加入50μg精密称定的阿魏酸对照品制得。

优选地，所述高效液相色谱法的条件包括：进样量为10μL；填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为甲醇-0.1％冰醋酸溶液；检测波长为321nm；理论板数按阿魏酸峰计算不低于6000。

优选地，所述流动相中，甲醇与0.1％冰醋酸溶液间的体积比为24:76。

本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：

本发明的质量控制方法对疏风止痛胶囊中川芎建立了相应的方法进行定性以及定量检测，具有较好的线性关系、平行性、重复性、准确度、稳定性、中间精密度、专属性以及耐用性，从而制订了疏风止痛胶囊中川芎的质量标准规范。

附图说明

图1为鉴别川芎时的薄层色谱图(室温、中湿)；

其中，Lane 1为藁本内酯对照品溶液；Lane 2为阿魏酸对照品溶液；Lane 3为空白样品(缺川芎)的供试品溶液；Lane 4为第一供试品溶液(批号为S141201)；Lane 5为第一供试品溶液(批号为S141202)；Lane 6为第一供试品溶液(批号为S141203)；

图2为疏风止痛胶囊中川芎含量测定时的液相色谱图；

其中，图A为第一供试品溶液的液相色谱图；图B为阿魏酸对照品溶液的液相色谱图；图C为空白样品(缺川芎)溶液的液相色谱图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，但不作为本发明的限定。

本实施例提供一种疏风止痛胶囊中川芎的质量控制方法，步骤包括：

S1、取2g样品研细后，加入10mL乙醇，进行超声处理30min，放冷、滤过、蒸干滤液，于残渣中加入1mL乙醇溶解，即得第一供试品溶液；取阿魏酸对照品，加入乙醇制得浓度为1mg/mL的第一对照品溶液；取藁本内酯对照品，加入乙醇制得浓度为1mg/mL的第二对照品溶液；依照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取所述第一供试品溶液、所述第一对照品溶液以及所述第二对照品溶液各2μL，分别点于同一硅胶GF

S2、将样品混匀研细后，精密称定2.0g，并精密加入70％甲醇50mL，称定重量，进行加热回流30min，放冷，再次称定重量，并用70％甲醇补足所减失的重量，摇匀、静置，取上清液并滤过，取续滤液，即得第二供试品溶液；精密称定阿魏酸对照品，加入甲醇制得浓度为50μg/mL的第三对照品溶液；依照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)试验，精密吸取所述第二供试品溶液以及第三对照品溶液各10μL，分别注入高效液相色谱仪(填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为甲醇-0.1％冰醋酸溶液(24:76)；检测波长为321nm；理论板数按阿魏酸峰计算不低于6000)，测定：以阿魏酸(C

(1)提取方法的考察

方法①：取4g样品研细后，加入20mL乙醚，进行加热回流60min，滤过、挥干滤液，于残渣中加入1mL乙酸乙酯溶解，即得第一供试品溶液；

方法②：取2g样品研细后，加入10mL乙醇，进行超声处理30min，放冷、滤过、蒸干滤液，于残渣中加入1mL乙醇溶解，即得第一供试品溶液；

上述两种方法均同时制备随行空白样品(缺川芎)的供试品溶液；结果两种提取方法所得到的空白样品(缺川芎)的供试品溶液的薄层色谱在与川芎对照药材溶液的薄层色谱相应的位置上均有干扰；但方法②较方法①分离度更好，且在所述阿魏酸对照品溶液的薄层色谱以及所述藁本内酯对照品溶液的薄层色谱相应的位置上，空白样品(缺川芎)的供试品溶液的薄层色谱并无干扰。

因此，选择提取方法②，并选择阿魏酸对照品以及藁本内酯对照品作为对照进行后续研究。

(2)点样量的考察

经考察，当第一对照品溶液以及第二对照品溶液的浓度均为1mg/mL，且第一供试品溶液、第一对照品溶液以及第二对照品溶液的点样量均为2μL时，薄层色谱上斑点的大小适中。

(3)展开剂的考察

考察正己烷-乙酸乙酯(9:1)、环己烷-乙酸乙酯(9:1)、环己烷-乙酸乙酯(3:1)、正己烷-乙酸乙酯-甲酸(3:1:0.05)、正己烷-乙酸乙酯-甲酸(7:1:0.05)、环己烷-乙酸乙酯(2:1)、环己烷-乙酸乙酯(1:1)、甲苯-乙酸乙酯(8:2)、正己烷-乙酸乙酯(17:3)、石油醚(60℃～90℃)-乙酸乙酯(17:3)、甲苯-甲醇-冰醋酸(30:3:1)等十余种展开剂，结果当采用甲苯-甲醇-冰醋酸(30:3:1)为展开剂、硅胶GF

(4)专属性的考察

空白样品(缺川芎)的供试品溶液同法制备后，空白样品(缺川芎)的供试品溶液的薄层色谱在与阿魏酸对照品溶液的薄层色谱以及藁本内酯对照品溶液的薄层色谱相应的位置上，不显相同颜色的斑点，对鉴别川芎无干扰，专属性较好(见图1)。

(5)耐用性的考察

采用本发明的鉴别方法，考察了薄层板不同的来源(进口和国产预制硅胶GF

(1)色谱柱的考察

考察不同厂家、不同品牌、不同长度的3种色谱柱，包括：①Agilent ZORBAXEclipe XDB-C18(安捷伦公司，5μm，4.6×150mm)、②Agilent ZORBAX EXTEND-C18(安捷伦公司，5μm，4.6×250mm)、③Dikma Kromasil 100A C18(迪马公司，5μm，4.6×150mm)。结果表明，不同规格色谱柱对本发明中阿魏酸的响应和分离均较好，方法耐用性较好。

(2)流动相的考察

考察甲醇-0.1％冰醋酸(30:70)作为流动相，发现阿魏酸分离较差；

考察甲醇-0.1％冰醋酸(24:76)作为流动相，发现供试品色谱中，阿魏酸与相邻色谱峰的分离较好。

因此，最终选择采用甲醇-0.1％冰醋酸(24:76)为流动相。

(3)线性关系的考察

分别精密吸取浓度为0.05014mg/mL的阿魏酸对照品溶液1μL、2μL、5μL、10μL和浓度为0.5014mg/mL的阿魏酸对照品溶液2μL、5μL、10μL、20μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并计算得回归方程。浓度和进样量之间的关系见表1。

表1浓度和进样量之间的关系(n＝8)

线性方程为：Y＝5263.40704X+34.39259，回归系数为：r＝1.0000。以上测定结果表明，阿魏酸进样量在0.05014μg～10.028μg范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系。

(4)对照品溶液平行性试验

精密量取浓度为0.05014mg/mL的阿魏酸对照品溶液10μL，分别进样分析6次，记录峰面积，结果见表2。

表2对照品溶液平行性试验结果(n＝6)

由上表可知，连续分析6次所得阿魏酸峰面积的RSD较小，对照品溶液的平行性良好。

(5)回流时间的考察

考察了回流时间15分钟、30分钟、45分钟、60分钟，结果分别为1.15mg/g、1.47mg/g、1.49mg/g、1.52mg/g。回流时间为30分钟时，提取效果已较完全，因此选择30分钟回流时间。

(6)重复性考察

取样品粉末2g，一式6份，按照上述供试品溶液制备方法处理，结果见表3。

表3重现性试验(n＝6)

由上表可知，6份样品重复性测定结果的相对标准偏差较小，方法重复性较好。

(7)准确度考察

取样品粉末1g，一式9份，精密称定，精密加入浓度为0.5014mg/mL的对照品溶液2.5mL、3.0mL，3.5mL(各3份)，分别作为低浓度、中浓度和高浓度加样，按照上述供试品溶液制备方法处理，计算加样回收率，结果见表4。

表4准确度试验(n＝9)

由上述结果可知，拟订方法准确性较好。

(8)供试品溶液的稳定性考察

取重复性考察项下供试品溶液，分别于0小时、1小时、2小时、4小时、6小时、9小时、12小时、15小时、18小时、21小时、24小时、27小时、30小时进样分析，记录峰面积，结果见表5。

表5供试品溶液的稳定性结果

上述试验结果表明，供试品溶液在30小时内基本稳定。

(9)中间精密度考察

为考察随机变动因素对精密度的影响，按照拟订的方法，由不同的分析人员在不同的日期、不同仪器设备对3批样品进行了含量测定，结果见表6。

表6中间精密度测定结果(单位：mg/粒)

上述结果表明，由不同的分析人员在不同日期、不同仪器和不同色谱柱的测定结果基本一致，方法的中间精密度良好。

(10)专属性考察

取空白样品(缺川芎)，按照拟订的方法进行测定，结果空白样品溶液在阿魏酸色谱峰处无干扰，专属性较好(见图2)。

综上所述，本发明的质量控制方法对疏风止痛胶囊中川芎建立了相应的方法进行定性以及定量检测，具有较好的线性关系、平行性、重复性、准确度、稳定性、中间精密度、专属性以及耐用性，从而制订了疏风止痛胶囊中川芎的质量标准规范。

以上所述仅为本发明较佳的实施例，并非因此限制本发明的实施方式及保护范围，对于本领域技术人员而言，应当能够意识到凡运用本发明说明书及图示内容所作出的等同替换和显而易见的变化所得到的方案，均应当包含在本发明的保护范围内。