组合疗法
文献发布时间：2024-04-18 20:01:55
技术领域
本发明涉及新的组合，该组合包含治疗有效量的式(I)的多发性内分泌癌蛋白(menin)混合谱系白血病1(多发性内分泌癌蛋白-MLL)抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和治疗有效量的至少一种其他治疗剂，该治疗剂是低甲基化剂、胞苷脱氨酶抑制剂、DNA嵌入剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、激酶抑制剂、CD20抑制剂、IDH抑制剂、免疫调节剂或DHODH抑制剂；以及涉及使用此类组合治疗被诊断患有癌症的受试者的方法。
背景技术
癌症是全世界死亡的主要原因。在2020年由GLOBOCAN记录的一千万癌症死亡中，7.1％归因于造血功能障碍。因此，迫切需要用于造血功能障碍的新治疗形式，该造血功能障碍包括急性髓样白血病(AML)、骨髓增生异常综合征(MDS)和急性淋巴母细胞白血病(ALL)，如下文进一步详述。
AML是一种常见的血液恶性肿瘤，其发病率从年轻人的3:100,000上升到老年人的大于20:100,000。对于年龄<60岁的患者，总存活率(OS)为40％至50％，但对于年龄>60岁的患者仅为5％。大多数新诊断的AML患者年龄为60岁以上。在该患者群体中，由于年龄和共病导致的治疗相关死亡率增加，标准诱导化学疗法通常不是选择。不适合组合化学疗法的AML患者的护理标准是用低甲基化剂(阿扎胞苷或地西他滨)或低剂量阿糖胞苷治疗。具有FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)突变的复发性/难治性AML用FLT3激酶抑制剂(例如，吉瑞替尼(gilteritinib)、米哚妥林(midostaurin))治疗。尽管有这些前线治疗，中值OS也仅为约10个月。在所有类型的AML中，尽管有最初的治疗反应，但疾病复发仍是常见的，并且是死亡的最常见原因。标准化学疗法和同种异体干细胞移植(当使用时)通常不能根除所有肿瘤增殖细胞并选择化学疗法抗性白血病增殖亚克隆。对补救疗法难治的患者被姑息性治疗，因为目前的治疗选择非常有限。这些患者具有2个月的中值存活期。此外，具有新诊断的中度或更高风险MDS的患者和在标准护理后复发的那些具有不良预后和进展成AML的高风险。因此，迫切需要用于复发性/难治性(R/R)AML和MDS患者、基于年龄和共病不适合诱导化学疗法的新诊断的AML患者、以及新诊断的中/高/非常高风险MDS患者的新治疗形式。
ALL是通过受损的分化、增殖、以及淋巴祖细胞在骨髓和/或髓外位点的累积而传播的血液恶性肿瘤。ALL代表所有白血病病例的12％，并且是最常见的儿童急性白血病，全世界发病率预计为每100,000人中1人至4.75人。ALL代表成人白血病的约20％。尽管目前疗法的完全缓解(CR)率高(80％至90％)，但大多数患有ALL的成人患者复发。成人和老年患者的5年总存活率为大约30％至40％。因此，迫切需要用于治疗癌症，特别是复发性/难治性ALL的新治疗形式，更特别是在成人且尤其是老年患者中。
发明内容
本发明的实施方案涉及以下项的新组合：式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和至少一种其他治疗剂，该治疗剂是低甲基化剂、胞苷脱氨酶抑制剂、DNA嵌入剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、激酶抑制剂、CD20抑制剂、IDH抑制剂、免疫调节剂或DHODH抑制剂。
本发明的实施方案涉及此类组合用于治疗已被诊断患有造血功能障碍(包括但不限于血液癌症)的受试者的用途，该治疗使用本文所述的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂与至少一种其他治疗剂的组合。
本发明的实施方案涉及用于使用此类组合治疗已被诊断患有造血功能障碍的受试者的新方法。新方法的实施方案包括向受试者施用治疗有效量的如本文所述的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂；和治疗有效量的至少一种其他治疗剂；其中该多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
本发明的实施方案涉及用于使用此类组合治疗已被诊断患有造血功能障碍的受试者的新方法。新方法的实施方案包括向受试者施用治疗有效量的如本文所述的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂；和治疗有效量的至少一种其他治疗剂，该治疗剂是低甲基化剂、胞苷脱氨酶抑制剂、DNA嵌入剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、激酶抑制剂、CD20抑制剂、IDH抑制剂、免疫调节剂或DHODH抑制剂；其中该多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，本发明涉及用于治疗已被诊断患有造血功能障碍的受试者的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和治疗有效量的阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，本发明涉及用于治疗已被诊断患有造血功能障碍的受试者的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和治疗有效量的阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物；其中该阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物在施用多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂之前、同时或之后施用于受试者。
在实施方案中，式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是：
以及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
Het表示含有一个、两个或三个氮原子和任选的羰基部分的5元或6元单环芳族环；
其中所述5元或6元单环芳族环任选地被选自由C
R
R
Y
R
U表示N或CH；
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
X
R
R
R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
在特定的实施方案中，式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺苯磺酸盐(besylate salt/benzenesulfonate salt)：
及其溶剂化物。
技术人员将理解，“以及其溶剂化物”是指(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺的苯磺酸盐。
在特定的实施方案中，式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺苯磺酸盐或其水合物。
在特定的实施方案中，式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺双苯磺酸盐或其溶剂化物。
在特定的实施方案中，式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺双苯磺酸盐或其水合物。
特别地，本发明涉及(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺双苯磺酸盐0.5-2.0当量水合物。
特别地，本发明涉及(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺双苯磺酸盐2.0当量水合物。
在特定的实施方案中，式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺双苯磺酸盐水合物的晶型A。
在特定的实施方案中，式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺双苯磺酸盐0.5-2.0当量水合物的晶型A。
更特别地，本发明涉及(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺双苯磺酸盐2.0当量水合物的晶型A。
由以下具体实施方式和通过实施本发明，本发明的附加实施方案、特征和优点将显而易见。
附图说明
图1是化合物A4的X射线粉末衍射(XRPD)图：(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺双苯磺酸盐水合物的晶型A。
图2描绘了对照组和用包含不同量的化合物A3的方案治疗的治疗组的肿瘤体积作为时间函数的比较。
图3描绘了对照组和用包含不同量的化合物A3的方案治疗的治疗组的肿瘤存活百分比作为时间函数(例如，Kaplan-Meier存活曲线)的比较。
图4A描绘了在用媒介物、用阿扎胞苷或化合物A1的单一疗法、或用化合物A1和阿扎胞苷的双重组合治疗后携带已建立的OCI-AML3肿瘤的小鼠的作为时间函数的存活百分比的比较。
图4B描绘了在用媒介物、用阿扎胞苷或化合物A1的单一疗法、或用化合物A1和阿扎胞苷的双重组合治疗后携带已建立的MOLM-13肿瘤的小鼠的作为时间函数的存活百分比的比较。
图5描绘了在用媒介物、用吉瑞替尼或化合物A1的单一疗法、或用化合物A1和吉瑞替尼的双重组合治疗后携带已建立的MOLM-13肿瘤的小鼠的作为时间函数的存活百分比的比较。
图6A是maxR的等值线图，其示出了化合物A4与吉瑞替尼组合对MOLM-13细胞体外增殖的效应。
图6B是maxR的等值线图，其示出了化合物A4与吉瑞替尼组合对MV4-11细胞体外增殖的效应。
图7A是maxR的等值线图，其示出了化合物A4与米哚妥林组合对MOLM-13细胞体外增殖的效应。
图7B是maxR的等值线图，其示出了化合物A4与米哚妥林组合对MV4-11细胞体外增殖的效应。
图8A是maxR的等值线图，其示出了化合物A4与伊达比星组合对MOLM-13细胞体外增殖的效应。
图8B是maxR的等值线图，其示出了化合物A4与伊达比星组合对OCI-AML3细胞体外增殖的效应。
图9A是maxR的等值线图，其示出了化合物A4与地西他滨组合对MOLM-13细胞体外增殖的效应。
图9B是maxR的等值线图，其示出了化合物A4与地西他滨组合对OCI-AML3细胞体外增殖的效应。
图10A是maxR的等值线图，其示出了化合物A3与DHODH抑制剂化合物22组合对MOLM-13细胞体外增殖的效应。
图10B是maxR的等值线图，其示出了化合物A3与DHODH抑制剂化合物22组合对OCI-AML3细胞体外增殖的效应。
图11A描绘了在用媒介物、用多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂化合物A1或DHODH抑制剂化合物22的单一疗法、或用化合物A1和化合物22的双重组合治疗后携带已建立的MOLM-13肿瘤的小鼠的作为时间函数的存活百分比的比较。
图11B描绘了在用媒介物、用多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂化合物A1或DHODH抑制剂化合物22的单一疗法、或用化合物A1和化合物22的双重组合治疗后携带已建立的OCI-AML3肿瘤的小鼠的作为时间函数的存活百分比的比较。
具体实施方式
如本文所用，术语“卤基”或“卤素”表示氟、氯、溴和碘。
如本文所用，前缀“C
如本文用作基团或基团的一部分的术语“C
类似地，如本文用作基团或基团的一部分的术语“C
如本文用作基团或基团的一部分的术语“C
技术人员清楚的是，S(＝O)
技术人员清楚的是，CO或C(＝O)表示羰基部分。
本领域技术人员将清楚的是基团诸如-CRR-表示
这种基团的示例为-CR
本领域技术人员将清楚的是，基团诸如-NR-表示
“含有一个、两个或三个氮原子和任选的羰基部分的单环5元或6元芳族环”的非限制性示例包括但不限于吡唑基、咪唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基或1,2-二氢-2-氧代-4-吡啶基。
本领域技术人员将理解，含有一个、两个或三个氮原子和羰基部分的5元或6元单环芳族环包括但不限于
当任何变量在任何成分中出现一次以上时，每个定义是独立的。
当任何变量在任何式(例如，式(I))中出现一次以上时，每个定义是独立的。
通常，除非另外指明或从上下文中清楚地看出，每当术语“取代的”用于本发明中时，意指在使用“取代的”的表达中指出的原子或基团上的一个或多个氢，特别是1个至4个氢，更特别是1个至3个氢，优选地1个或2个氢，更优选地1个氢被来自所示基团的选择替代，前提条件是不超过正常化合价，并且该取代产生化学稳定的化合物，即足够稳固以经受住从反应混合物分离至有用纯度(在反应之后分离，例如通过硅胶色谱法纯化)的化合物。在特定的实施方案中，当取代基的数目未明确指定时，取代基的数目为1。
取代基和/或变量的组合只有在这样的组合产生化学稳定的化合物时才是允许的。“稳定的化合物”在本上下文中意指足够稳固以经受住从反应混合物分离至有用纯度(在反应之后分离，例如通过硅胶色谱法纯化)的化合物。
技术人员将理解，术语“任选地被取代的”意指在使用“任选地被取代的”的表达中所指示的原子或基团可以是或可以不是取代的(这分别意指取代的或未取代的)。
当在部分上存在两个或更多个取代基时，在可能的情况下并且除非另外指明或从上下文中清楚地看出，它们可替代相同原子上的氢，或者它们可替代该部分中不同原子上的氢原子。
在本发明的上下文中，如果没有另外指明，“饱和的”意指“完全饱和的”。
除非另外指明或从上下文中清楚地看出，芳族环基团可通过任何可用的环碳原子(C-连接的)或氮原子(N-连接的)连接到式(I)的分子的其余部分。
除非另外指明或从上下文中清楚地看出，根据实施方案，芳族环基团在可能的情况下可任选地在碳原子和/或氮原子上被取代。
如本文所用，术语“包含”涵盖术语“由……组成”和“基本上由……组成”。本文所述的使用术语“包含”的所有实施方案也适用于其中术语“包含”限于“由……组成”的本发明实施方案。同样地，本文所述的使用术语“包含”的所有实施方案也适用于其中术语“包含”限于“基本上由……组成”的本发明实施方案。
如本文所用，术语“受试者”是指动物，优选哺乳动物(例如，猫、狗、灵长类动物或人类)，更优选是或曾经是治疗、观察或实验对象的人类。
如本文所用的术语“治疗有效量”意指在组织系统、动物或人体中引起研究人员、兽医、医生或其他临床医师正在寻求的生物或药物反应(包括缓解或逆转所治疗的疾病或障碍的症状)的活性化合物或药剂的量。
术语“组合物”旨在涵盖包含指定量的指定成分的产品，以及通过组合指定量的指定成分而直接或间接得到的任何产品。
如本文所用，术语“治疗”(“treatment”和“treating”)旨在指其中可存在障碍进展的减慢、中断、阻止或停止、或者其一种或多种症状的改善的所有过程，但不一定是指所有症状的完全消除。
如本文所用，具有仅显示为实线的键而不显示为实心楔形或散列楔形键或者以其他方式指示为在一个或多个原子周围具有特定构型(例如，R、S)的任何化学式设想了每种可能的立体异构体，或者两种或更多种立体异构体的混合物。
在上文和下文中，术语“式(I)的化合物”意指包括其互变异构体和其立体异构形式。
在上文和下文中，术语“式(Z)的化合物”意在包括其互变异构体和其立体异构形式。
术语“立体异构体”、“立体异构形式”或“立体化学异构形式”在上文或下文中可互换使用。
本发明包括本发明化合物的所有立体异构体作为纯立体异构体或作为两种或更多种立体异构体的混合物。
对映体是互为不可重叠镜像的立体异构体。一对对映体的1:1混合物是外消旋体或外消旋混合物。
阻转异构体(或阻转异构体(atropoisomers))是具有特定空间构型的立体异构体，由于大的空间位阻，其产生围绕单键的受限旋转。式(I)的化合物的所有阻转异构形式旨在包括在本发明的范围内。
非对映体(或非对映异构体)是不为对映体的立体异构体，即它们不与镜像相关。如果化合物含有双键，则取代基可以是E或Z构型。
二价环状饱和或部分饱和基团上的取代基可具有顺式或反式构型；例如，如果化合物含有二取代的环烷基基团，则取代基可为顺式或反式构型。
因此，只要化学上可能，本发明包括对映体、阻转异构体、非对映体、外消旋体、E异构体、Z异构体、顺式异构体、反式异构体以及它们的混合物。
所有那些术语，即对映体、阻转异构体、非对映体、外消旋体、E异构体、Z异构体、顺式异构体、反式异构体以及它们的混合物的含义是技术人员已知的。
根据Cahn-Ingold-Prelog系统指定绝对构型。不对称原子处的构型由R或S指定。绝对构型未知的拆分的立体异构体可根据其旋转平面偏振光的方向由(+)或(-)指定。例如，绝对构型未知的拆分的对映体可根据其旋转平面偏振光的方向由(+)或(-)指定。
当鉴定特定的立体异构体时，这意指所述立体异构体基本上不含其他异构体，即与小于50％，优选地小于20％，更优选地小于10％，甚至更优选地小于5％，特别地小于2％并且最优选地小于1％的其他立体异构体相关。因此，当式(I)的化合物例如指定为(R)时，这意味着化合物基本上不含(S)异构体；当式(I)的化合物例如指定为E时，这意味着化合物基本上不含Z异构体；当式(I)的化合物例如指定为顺式时，这意味着化合物基本上不含反式异构体。
一些根据式(I)的化合物还可以其互变异构形式存在。虽然在上面式(I)中未明确指示，此类形式(只要它们可以存在)旨在被包括在本发明的范围内。由此可见，单一化合物可以立体异构体和互变异构体的形式存在。
药学上可接受的盐包括酸加成盐和碱加成盐。此类盐可通过常规方法形成，例如通过游离酸或游离碱形式与一个或多个当量的适当碱或酸，任选地在溶剂中或在盐不溶于其中的介质中反应，接着使用标准技术(例如，真空、通过冷冻干燥或通过过滤)去除所述溶剂或所述介质。盐还可通过使盐形式的本发明化合物的抗衡离子与另一种抗衡离子交换来制备，例如使用合适的离子交换树脂。
如上文或下文提及的药学上可接受的盐是指包含式(I)的化合物和其溶剂化物能够形成的治疗活性的非毒性酸和非毒性碱盐形式。
合适的酸包括例如无机酸，诸如氢卤酸(例如，盐酸或氢溴酸)、硫酸、硝酸、磷酸等酸；或有机酸，例如乙酸、丙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸(即乙二酸)、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环拉酸、水杨酸、对氨基水杨酸、扑酸等酸。相反地，所述盐形式可通过用适当的碱处理而转化成游离碱形式。
含有酸性质子的式(I)的化合物和其溶剂化物也可通过用适当的有机碱和无机碱处理而转化成其无毒的金属或胺盐形式。
适当的碱盐形式包括例如铵盐、碱金属和碱土金属盐(例如，锂、钠、钾、铯、镁、钙盐等)、与有机碱的盐，该有机碱例如伯、仲和叔脂族和芳族胺，诸如甲胺、乙胺、丙胺、异丙胺、四种丁胺异构体、二甲胺、二乙胺、二乙醇胺、二丙胺、二异丙胺、二正丁胺、吡咯烷、哌啶、吗啉、三甲胺、三乙胺、三丙胺、奎宁环、吡啶、喹啉和异喹啉；苄星、N-甲基-D-葡糖胺、海巴明盐以及与氨基酸(诸如例如精氨酸、赖氨酸等)的盐。相反，盐形式可通过用酸处理而转化成游离酸形式。
术语“前药”包括在口服或肠胃外施用(特别是口服施用)后在预定时间内(例如，在0.5小时与24小时之间的给药间隔内，或例如，在6小时与24小时之间的给药间隔内(即，每天一次至四次))以实验可检测的量在体内被代谢成(更具)活性形式的任何化合物。为了避免疑问，术语“肠胃外”施用包括除口服施用之外的所有施用形式，特别是静脉内(IV)、肌内(IM)和皮下(SC)注射。
前药可通过修饰化合物上存在的官能团来制备，使得当将此类前药施用于哺乳动物受试者时，修饰在体内被裂解。这些修饰通常通过合成具有前药取代基的母体化合物来实现。通常，前药包括这样的化合物，其中羟基、氨基、巯基、羧基或羰基与可在体内裂解以分别再生游离的羟基、氨基、巯基、羧基或羰基的任何基团键合。
前药的示例包括但不限于羟基官能团的酯和氨基甲酸酯、羧基官能团的酯基团、N-酰基衍生物和N-曼尼希碱。关于前药的一般信息可见于例如Bundegaard,H.“Design ofProdrugs”第l-92页,Elesevier,New York-Oxford(1985)。
术语溶剂化物包括式(I)的化合物能够形成的溶剂加成形式及其盐。此类溶剂加成形式的示例为例如水合物、醇化物等。
在下述方法中制备的本发明化合物可以对映体的混合物，特别是对映体的外消旋混合物的形式合成，所述混合物可按照本领域已知的拆分方法彼此分离。分离式(I)的化合物和其药学上可接受的盐和溶剂化物的对映体形式的方式涉及使用手性固定相的液相色谱法。所述纯立体化学异构体形式还可衍生自适当起始物质的对应纯立体化学异构体形式，前提条件是反应立体特异性地发生。优选地，如果需要特定的立体异构体，则所述化合物将通过立体特异性制备方法合成。这些方法将有利地采用光学纯的起始物质。
如本文所用，术语“光学纯”意指产物含有至少80重量％的一种对映体和20重量％或更少的另一种对映体。优选地，产物含有至少90重量％的一种对映体和10重量％或更少的另一种对映体。在最优选的实施方案中，术语“光学纯”意指组合物含有至少99重量％的一种对映体和1％或更少的另一种对映体。
本发明还涵盖同位素标记的化合物，其与本文所述的那些相同，但事实上一个或多个原子被原子质量或质量数不同于通常在自然界中发现的原子质量或质量数(或在自然界中发现的最丰富的原子质量或质量数)的原子替代。
在本发明的范围内设想如本文指定的任何特定原子或元素的所有同位素和同位素混合物，无论是天然存在还是合成产生，无论是天然丰度还是同位素富集形式。可掺入本发明化合物中的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，诸如
某些同位素标记的化合物(例如，用
含有本文所述的一种或多种化合物的固体口服剂型(诸如片剂或胶囊剂)可视情况一次以至少一种剂型施用。也可按持续释放制剂的方式施用化合物。
其中可施用本文所述化合物的附加口服剂型包括酏剂、溶液剂、糖浆和混悬剂；每种剂型任选地含有调味剂和着色剂。
另选地，本文所述的一种或多种化合物可通过吸入(气管内或鼻内)给予或以栓剂或阴道栓剂的形式施用，或者它们可以洗剂、溶液剂、霜剂、膏剂或扑粉剂的形式局部施用。例如，可将它们混入霜剂中，所述霜剂包含聚乙二醇或液态石蜡的水乳液、由其组成和/或基本上由其组成。它们也可以所述霜剂的介于约1重量％至约10重量％之间的浓度混入膏剂中，所述膏剂包含蜡或软石蜡基以及任何稳定剂和防腐剂(有可能需要)、由其组成和/或基本上由其组成。另选的施用方式包括通过使用皮肤贴剂或透皮贴剂来透皮施用。
用于本发明方法的药物组合物(以及单独的化合物)也可胃肠外注射，例如海绵体内(intracavernosally)、静脉内、肌内、皮下、真皮内或鞘内注射。在这种情况下，该组合物还将包括合适的载体、合适的赋形剂和合适的稀释剂中的至少一种。
对于非肠道施用，本发明的药物组合物最好以无菌水溶液形式使用，其可含有其他物质，例如足够的盐和单糖以制备与血液等渗的溶液。
对于颊面或舌下施用，本发明的药物组合物可以片剂或锭剂形式施用，所述片剂或锭剂可以常规方式配制。
进一步举例来说，含有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂作为活性成分的药物组合物可根据常规药物混配技术通过将这些化合物与药学上可接受的载体、药学上可接受的稀释剂和/或药学上可接受的赋形剂混合来制备。所述载体、赋形剂和稀释剂可采用各种各样的形式，这取决于所需施用途径(例如口服、非肠道施用等)。因此对于诸如混悬剂、糖浆、酏剂和溶液剂的液体口服制剂，合适的载体、赋形剂和稀释剂包括水、二元醇、油、醇类、调味剂、防腐剂、稳定剂、着色剂等；对于诸如散剂、胶囊剂和片剂的固体口服制剂，合适的载体、赋形剂和稀释剂包括淀粉、糖、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘结剂、崩解剂等。固体口服制剂也可任选地用诸如糖的物质包衣，或包肠溶衣，以便调节吸收和崩解的主要部位。对于非肠道施用，载体、赋形剂和稀释剂通常包括无菌水，并且可以添加其他成分以增加组合物的溶解度和可保存性。注射用混悬剂或溶液剂也可以利用含水载体与适当的添加剂(诸如增溶剂和防腐剂)一起制备。
根据特定的实施方案，在平均(70kg)人的每日约1次至约(4次)的方案中，使用治疗有效量的(I)的化合物或或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂的方法可包含约0.1mg至约3000mg或其中的任何特定量或范围，尤其是约1mg至约1000mg或其中的任何特定量或范围的剂量范围的活性成分；但是，对于本领域的技术人员显而易见的是式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂的治疗有效量将随着进行治疗的疾病、综合征、病症和障碍而变化。
本发明的一个实施方案涉及使用用于口服施用的药物组合物的方法，该药物组合物包含约1mg至约500mg的量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。有利地，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物可以单一日剂量施用，或者总日剂量可以每日两次、三次和(4x)的分开剂量施用。
待施用的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的最佳剂量可容易确定，并且将随所使用的具体化合物、施用模式、制剂强度以及造血功能障碍的进程而变化。此外，与待治疗的具体受试者相关的因素(包括受试者性别、年龄、体重、饮食和施用时间)将导致需要调整剂量以实现适当的治疗水平和所需的疗效。因此，上述剂量为一般情况的示例。当然，可能会存在其中较高或较低剂量范围是有益的个别情况，并且这类情况也在本发明的范围内。
每当将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的使用施用于有需要的受试者时，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物可以上述组合物和剂量方案中的任一者施用，或者借助于本领域已确立的那些组合物和剂量方案施用。
本发明的一个实施方案涉及使用用于静脉内或皮下施用的药物组合物的方法，该药物组合物包含约1mg至约500mg的量的治疗剂。有利地，治疗剂可以单一日剂量施用，或者总日剂量可以每天两次、三次和(4x)的分开剂量施用。
待施用的治疗剂的最佳剂量可容易确定，并且将随所使用的具体化合物、施用模式、制剂强度以及疾病、综合征、病症或障碍的进程而变化。此外，与待治疗的具体受试者相关的因素(包括受试者性别、年龄、体重、饮食和施用时间)将导致需要调整剂量以实现适当的治疗水平和所需的疗效。因此，上述剂量为一般情况的示例。当然，可能会存在其中较高或较低剂量范围是有益的个别情况，并且这类情况也在本发明的范围内。
每当将治疗剂的使用施用于有需要的受试者时，治疗剂可以上述组合物和剂量方案中的任一者施用，或者借助于本领域已确立的那些组合物和剂量方案施用。
如本文所用，术语“多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂”是指在科学领域中在多发性内分泌癌蛋白与混合谱系白血病1(MLL1)(也称为组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2A(KMT2A)蛋白之间的蛋白质-蛋白质相互作用的抑制剂(UniProt登录#Q03164)，其抑制或降低多发性内分泌癌蛋白-MLL 1活性。本文所述的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂公开于PCT/CN2020/137266(其在2021年6月24日作为WO 2021/121327公开)中，该专利全文以引用的方式并入本文并且其还公开了对应的合成方案和分析表征。
如本文所用，术语“治疗剂”是指治疗癌症的任何药剂。在本申请的上下文中，在一些实施方案中，治疗剂限于本文明确列出的治疗剂。
如本文所用，术语“低甲基化剂”是指抑制或减少DNA甲基化的药剂。
如本文所用，术语“胞苷脱氨酶抑制剂”是指抑制或降低胞苷脱氨酶活性的药剂。
如本文所用，术语“激酶抑制剂”是指抑制或降低至少一种激酶(例如，酪氨酸和/或丝氨酸激酶，诸如fms样受体酪氨酸激酶-3(FLT3)、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)、阿贝尔森(Abelson)酪氨酸激酶1(ABL)、极光(Aurora)丝氨酸/酪氨酸激酶)的活性的药剂。
如本文所用，术语“FLT-3抑制剂”是指基于其对fms样受体酪氨酸激酶3(FLT3)及其相关下游靶标的效力和特异性而分类为第一代和下一代抑制剂的酪氨酸激酶抑制剂(TKI)。
如本文所用，术语“CD20抑制剂”是指降低CD20活性的任何药剂。
如本文所用，术语“异柠檬酸脱氢酶(IDH)抑制剂”是指在三羧酸(TCA)循环中干扰异柠檬酸向α-酮戊二酸(α-KG)转化的任何药剂。
如本文所用，术语“免疫调节剂”是指刺激或抑制免疫系统(例如，经由细胞因子调节、T细胞的共刺激、共抑制分子的下调、增强自然杀伤细胞活性、调节性T细胞的抑制和修复T细胞上受干扰的突触形成)的任何药剂。在特定的实施方案中，免疫调节剂(诸如单克隆抗体、细胞因子和疫苗)影响免疫系统的特定部分。在其他实施方案中，免疫调节剂(诸如卡介苗(BCG)和左旋咪唑)以一般方式影响免疫系统。
如本文所用，术语“程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)抑制剂”是指抑制或降低PD-1活性的任何药剂。
如本文所用，术语“二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)抑制剂”是指抑制或降低二氢乳清酸脱氢酶活性的任何药剂。
除非另外指明，否则如本文所用，术语“影响”或“受影响的”(当涉及疾病、障碍或医学病症时，是受多发性内分泌癌蛋白-MLL活性的抑制或改变影响的)包括所述造血功能障碍的一种或多种症状或临床表现的频率和/或严重程度的降低；并且/或者包括预防所述造血功能障碍的发展或者所述造血功能障碍的一种或多种症状或临床表现的发展。
如本文所用，术语“造血功能障碍”是指与血液和血浆中细胞组分的产生相关的任何障碍，包括但不限于血液癌症。
根据一个实施方案，本发明提供了如本文所述的组合。
根据一个实施方案，本发明提供了用作药物的如本文所述的组合。
根据一个实施方案，本发明提供了用于制备药物的如本文所述的组合。
根据一个实施方案，本发明提供了用于制备用于治疗或预防本文提及的任何一种疾病状况的药物的如本文所述的组合。
根据一个实施方案，本发明提供了用于预防或治疗(特别是治疗)如本文所述的疾病的如本文所述的组合。
根据一个实施方案，本发明提供了用于预防或治疗(特别是治疗)癌症的如本文所述的组合。
根据一个实施方案，本发明提供了用于预防或治疗(特别是治疗)癌症(包括但不限于实体瘤、肉瘤和造血功能障碍)的如本文所述的组合。
根据一个实施方案，癌症选自但不限于乳腺癌、结肠直肠癌、胃癌、神经胶质瘤、头颈癌、肝细胞癌、肺癌、多发性骨髓瘤、成神经细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌和肉瘤。
根据一个实施方案，肉瘤选自但不限于软组织肉瘤、神经胶质瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、淋巴肉瘤和横纹肌肉瘤。
根据一个实施方案，本发明提供了用于预防或治疗(特别是治疗)造血功能障碍(包括但不限于血液癌症，包括但不限于淋巴瘤、骨髓瘤和白血病)的如本文所述的组合。
根据一个实施方案，本发明提供了用于预防或治疗(特别是治疗)造血功能障碍的如本文所述的组合。
根据一个实施方案，造血功能障碍选自但不限于淋巴瘤、骨髓瘤、脊髓发育不良和白血病。
根据一个实施方案，造血功能障碍是淋巴瘤，其选自霍奇金病淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。
根据一个实施方案，淋巴瘤是非霍奇金病，该非霍奇金病是伯基特氏淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、脾边缘带淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤或血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤(AILT)。
根据一个实施方案，造血功能障碍是骨髓瘤。根据一个实施方案，造血功能障碍是多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症或浆细胞瘤。
根据一个实施方案，造血功能障碍是脊髓发育不良，包括但不限于骨髓增生异常综合征(MDS)。
根据一个实施方案，造血功能障碍是白血病。
根据一个实施方案，造血功能障碍是白血病，其选自急性白血病和慢性白血病。根据一个实施方案，白血病是急性白血病。根据一个实施方案，白血病是慢性白血病。
根据一个实施方案，造血功能障碍是髓样白血病、髓性白血病、成淋巴细胞性白血病、淋巴细胞白血病。根据一个实施方案，造血功能障碍是白血病，其选自但不限于急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、小淋巴细胞白血病(SLL)、急性髓样白血病(AML)、慢性特发性骨髓纤维化(MF)、慢性髓性白血病(CML)、T细胞幼淋巴细胞白血病(T-PLL)、B细胞幼淋巴细胞白血病(B-PLL)、慢性嗜中性粒细胞白血病(CNL)、多毛细胞白血病(HCL)、T细胞大颗粒淋巴细胞白血病(T-LGL)和侵袭性NK细胞白血病。根据一个实施方案，AML是急性成巨核细胞白血病(AMKL)。
根据一个实施方案，白血病是MDS、CLL、SLL、ALL或AML。根据一个实施方案，白血病是CLL、SLL或AML。根据一个实施方案，白血病是CLL或SLL。在一些实施方案中，CLL或SLL是表达CD20的癌症。根据一个实施方案，白血病是ALL或AML。根据一个实施方案，白血病是ALL。根据一个实施方案，白血病是AML。根据一个实施方案，造血功能障碍是华氏巨球蛋白血症。
根据一个实施方案，造血功能障碍是MLL重排白血病、MLL部分串联重复(PTD)白血病、MLL扩增白血病、MLL阳性白血病或表现出升高的HOX/MEIS1基因表达标签的白血病。
根据一个实施方案，白血病是MLL重排白血病和/或核磷蛋白1(NPM1)突变白血病。
根据一个实施方案，造血功能障碍是MLL重排白血病。
根据一个实施方案，造血功能障碍是核磷蛋白1(NPM1)突变白血病(例如，NPM1c)。
根据一个实施方案，本发明提供了治疗造血功能障碍的方法，该造血功能障碍是骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性肿瘤(MPN)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓样白血病(AML)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)或慢性淋巴细胞白血病(CLL)，该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，并且至少一种其他治疗剂是低甲基化剂、胞苷脱氨酶抑制剂、DNA嵌入剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、激酶抑制剂、CD20抑制剂、IDH抑制剂、免疫调节剂或DHODH抑制剂。
根据一个实施方案，造血功能障碍是骨髓增生异常综合征(MDS)或骨髓增殖性肿瘤(MPN)。
根据一个实施方案，造血功能障碍是急性淋巴细胞白血病(ALL)。
根据一个实施方案，造血功能障碍是急性骨样白血病(AML)。
根据一个实施方案，造血功能障碍是小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)或慢性淋巴细胞白血病(CLL)。
根据一个实施方案，造血功能障碍是SLL或CLL，其中SLL或CLL是表达CD20的癌症。
根据一个实施方案，造血功能障碍是骨髓增生异常综合征(MDS)。
根据一个实施方案，造血功能障碍是骨髓增殖性肿瘤(MPN)。
根据一个实施方案，造血功能障碍是具有FLT3突变的NPM1突变白血病。
根据一个实施方案，造血功能障碍是FLT3依赖性白血病。
根据一个实施方案，造血功能障碍是MEF2G依赖性白血病。
根据一个实施方案，造血功能障碍具有一个或多个MLL1(KMT2A)重排或改变(例如，重复或扩增)和/或NPM1突变。
根据一个实施方案，造血功能障碍具有(i)一个或多个MLL1(KMT2A)重排或改变(例如，重复或扩增)和/或NPM1突变加上(ii)FLT3突变。
根据一个实施方案，造血功能障碍是MLL重排白血病。
根据一个实施方案，造血功能障碍是急性骨样白血病(AML)。
根据一个实施方案，造血功能障碍是小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)。
根据一个实施方案，造血功能障碍是慢性淋巴细胞白血病(CLL)。
根据一个实施方案，造血功能障碍是急性白血病、慢性白血病、髓样白血病、髓性白血病、成淋巴细胞性白血病、淋巴细胞白血病、急性髓性白血病(AML)、慢性髓性白血病(CML)、急性淋巴母细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、T细胞幼淋巴细胞白血病(T-PLL)、大颗粒淋巴细胞白血病、多毛细胞白血病(HCL)、MLL重排白血病、MLL-PTD白血病、MLL扩增白血病、MLL阳性白血病或表现出升高的HOX/MEIS1基因表达标签的白血病。
根据一个实施方案，造血功能障碍是AML，特别是核磷蛋白(NPM1)突变的AML(即，NPM1
根据一个实施方案，造血功能障碍是MLL重排白血病，特别是MLL重排的AML或ALL。
根据一个实施方案，造血功能障碍包括MLL基因改变，特别地造血功能障碍是具有MLL基因改变的AML或ALL。在某些实施方案中，MLL基因改变是重复。在某些实施方案中，MLL基因改变是扩增。
根据一个实施方案，造血功能障碍包括NPM1基因突变和/或MLL1(也称为KMT2A)基因突变。
根据一个实施方案，MLL1基因突变包括但不限于MLL1基因重排、重复或扩增。
根据一个实施方案，造血功能障碍是混合谱系白血病(MLL)、MLL相关白血病、MLL关联白血病、MLL阳性白血病、MLL诱导的白血病、与MLL相关的白血病、急性白血病、慢性白血病、骨髓增生异常综合征(MDS)或骨髓增殖性肿瘤(MPN)。
本文所述的用于治疗障碍的方法的所有实施方案也适用于在治疗所述障碍中使用。
本文所述的用于在治疗障碍中使用的所有实施方案也适用于治疗所述障碍的方法。
本文所述的用于治疗障碍的方法的所有实施方案也适用于在用于治疗所述障碍的方法中使用。
本文所述的用于在治疗障碍的方法中使用的所有实施方案也适用于治疗所述障碍的方法。
在一个实施方案中，本发明涉及一种新的组合，该组合包含治疗有效量的式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂、或其互变异构体或立体异构形式、或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和治疗有效量的至少一种其他治疗剂，所述治疗剂是低甲基化剂、胞苷脱氨酶抑制剂、DNA嵌入剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、激酶抑制剂、CD20抑制剂、IDH抑制剂、免疫调节剂或DHODH抑制剂。
根据一个实施方案，式(I)的化合物是具有以下结构的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂：
以及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
Het表示含有一个、两个或三个氮原子和任选的羰基部分的5元或6元单环芳族环；
其中所述5元或6元单环芳族环任选地被选自由C
R
R
Y
R
U表示N或CH；
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
X
R
R
R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
Het表示含有一个、两个或三个氮原子和任选的羰基部分的5元或6元单环芳族环；
其中所述5元或6元单环芳族环任选地被选自由C
R
R
Y
R
U表示N或CH；
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
X
R
R
R
其中R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
Het表示含有一个、两个或三个氮原子和任选的羰基部分的5元或6元单环芳族环；
其中所述5元或6元单环芳族环任选地被选自由C
R
R
Y
R
U表示N或CH；
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
X
R
R
R
R
选自由以下项组成的组：-OH、氰基、卤代基、-S(＝O)
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
Het表示含有一个、两个或三个氮原子和任选的羰基部分的5元或6元单环芳族环；
其中所述5元或6元单环芳族环任选地被选自由C
R
R
Y
R
U表示N或CH；
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
X
R
R
R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
Het表示含有两个氮原子的6元单环芳族环；其中所述6元单环芳族环被一个C
R
R
Y
R
U表示N或CH；
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
X
R
R
其中R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
Het表示含有两个氮原子的6元单环芳族环；其中所述6元单环芳族环被一个C
R
R
Y
R
U表示N或CH；
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
X
R
R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
R
R
Y
R
U表示N或CH；
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
X
R
R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
Het表示被一个C
R
R
Y
R
U表示N；
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
X
R
R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
Het表示被一个C
R
R
Y
R
U表示N；
n2为2；
n1、n3和n4为1；
X
R
R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
R
R
Y
R
U表示N；
n2为2；
n1、n3和n4为1；
X
R
R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
R
R
Y
R
U表示N；
n2为2；
n1、n3和n4为1；
X
R
R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
R
R
Y
R
U表示N；
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
X
R
R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
R
R
Y
R
U表示N；
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
X
R
R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
R
R
Y
R
U表示N；
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
X
R
R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
R
R
Y
R
U表示N；
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
X
R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
R
R
Y
R
U表示N；
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
X
R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
R
R
Y
R
U表示N；
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
X
R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
Het表示含有两个氮原子的6元单环芳族环；其中所述6元单环芳族环任选地被一个C
R
R
Y
R
U表示N；
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
X
R
R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
根据一个实施方案，式(I)的化合物如本文所定义，及其互变异构体和立体异构形式，其中
R
R
R
Y
R
U表示N；
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
X
R
R
R
R
以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的那些式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中n1为1，n2为2，n3为1并且n4为1。
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的那些式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中Y
在一个实施方案中，本发明涉及如任何其他实施方案中所提及的那些式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中Y
在一个实施方案中，本发明涉及如任何其他实施方案中所提及的那些式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中Y
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中Het表示
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的那些式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中Het表示含有一个或两个氮原子的单环5元或6元芳族环；
其中所述单环5元或6元芳族环被一个C
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的那些式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中Het表示含有一个或两个氮原子的单环5元或6元芳族环；其中所述单环5元或6元芳族环被一个C
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的那些式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中Het表示含有一个或两个氮原子的单环6元芳族环；其中所述单环6元芳族环被一个C
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的那些式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中Het表示含有一个或两个氮原子的单环6元芳族环；并且其中所述单环6元芳族环被一个C
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明涉及使用如在任何其他实施方案中所提及的式(I)化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组的方法，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如在任何其他实施方案中提及的式(I)化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何亚组，其中R
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或其任何子组，其中式(I)的化合物限于式(Ia)或式(Ib)的化合物：
/>
其中R
在一个实施方案中，在任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其任何子组限于式(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一个实施方案中，在任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其任何子组限于式(Ib)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一个实施方案中，本发明包括如任何其他实施方案中所提及的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或其任何子组，其中式(I)的化合物限于式(I-y)的化合物：
其中R
在式(I-y)中，n1为1，n2为2，n3为1，并且n4为1。
在特定的实施方案中，式(I)的化合物是化合物A：
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在特定的实施方案中，式(I)的化合物是化合物A1：
在特定的实施方案中，式(I)的化合物是化合物A2：
在特定的实施方案中，式(I)的化合物是化合物A3：
在特定的实施方案中，式(I)的化合物是化合物A4-a：
或其溶剂化物。
在特定的实施方案中，式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺苯磺酸盐或其水合物。
在特定的实施方案中，式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺双苯磺酸盐或其溶剂化物。
在特定的实施方案中，式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺双苯磺酸盐(化合物A4-b)或其水合物。
在特定的实施方案中，式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是化合物A4：(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺双苯磺酸盐水合物的晶型A。
在特定的实施方案中，式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺双苯磺酸盐0.5-2.0当量水合物的晶型A。
在一个实施方案中，本发明涉及如通用反应方案中所定义的式(I)的子组。
在一个实施方案中，式(I)的化合物选自由以下项组成的组：示例性化合物、其互变异构体和立体异构形式、及其游离碱、任何药学上可接受的盐和溶剂化物中的任一者。
在一些实施方案中，提供了药物组合物，该药物组合物包含药学上可接受的载体和作为活性成分的治疗有效量的如在任何其他实施方案中所描述的组合。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是低甲基化剂、胞苷脱氨酶抑制剂、DNA嵌入剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、激酶抑制剂、CD20抑制剂、IDH抑制剂、免疫调节剂或DHODH抑制剂。
根据实施方案，该多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
根据特定的实施方案，多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
根据特定的实施方案，多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是化合物A1。
根据特定的实施方案，多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是化合物A2。
根据特定的实施方案，多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是化合物A3。
根据特定的实施方案，多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是化合物A4-a或其溶剂化物。
根据特定的实施方案，多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是化合物A4-b或其水合物。
根据特定的实施方案，多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂是化合物A4。
在特定的实施方案中，多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂可具有改善的代谢稳定性特性。
在特定的实施方案中，多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂可具有延长的体内半衰期(T1/2)。
在特定的实施方案中，多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂可具有改善的口服生物利用度。
在特定的实施方案中，多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂可减少肿瘤生长，例如携带MLL(KMT2A)基因重排/改变和/或NPM1突变的肿瘤。
在特定的实施方案中，多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂可在延长的时间段期间在体内具有改善的PD特性，例如在至少16小时的时间段内靶基因表达诸如MEIS1的抑制和分化标记的上调。
在特定的实施方案中，多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂可具有改善的安全性特征(例如，降低的hERG抑制；改善的心血管安全性)。
在特定的实施方案中，多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂可适于Q.D.给药(每日一次)。
根据实施方案，至少一种其他治疗剂是低甲基化剂、胞苷脱氨酶抑制剂、DNA嵌入剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、激酶抑制剂、CD20抑制剂、IDH抑制剂、免疫调节剂或DHODH抑制剂。
根据实施方案，低甲基化剂包括但不限于阿扎胞苷、地西他滨或它们药学上可接受的盐或溶剂化物。
根据实施方案，胞苷脱氨酶抑制剂包括但不限于赛达瑞定(cedazuridine)或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
根据实施方案，DNA嵌入剂包括但不限于蒽环霉素(例如，柔红霉素、多柔比星、伊达比星)。
根据实施方案，DNA嵌入剂是柔红霉素。
根据实施方案，DNA嵌入剂是多柔比星。
根据实施方案，DNA嵌入剂是伊达比星。
根据实施方案，嘧啶类似物包括但不限于阿糖胞苷(ARA-C)。
根据实施方案，嘌呤类似物是氟达拉滨。
根据实施方案，激酶抑制剂是FLT-3抑制剂、BTK抑制剂、ABL抑制剂、极光抑制剂或它们两种或更多种激酶抑制剂的多激酶抑制剂。
根据实施方案，激酶抑制剂是FLT-3抑制剂、ABL抑制剂和极光抑制剂的多激酶抑制剂。根据实施方案，这种多激酶抑制剂包括但不限于KW-2449。
根据实施方案，激酶抑制剂是酪氨酸激酶抑制剂。
根据实施方案，酪氨酸激酶抑制剂是FLT-3抑制剂或BTK抑制剂。
根据实施方案，FLT3抑制剂包括但不限于索拉非尼、舒尼替尼、米哚妥林(PKC412)、来妥替尼(CEP-701)、坦度替尼(MLN518)、奎沙替尼(AC220)、吉瑞替尼(ASP2215)和KW-2449。
根据实施方案，FLT3抑制剂是吉瑞替尼(ASP2215)。
根据实施方案，FLT3抑制剂是米哚妥林(PKC412)。
根据实施方案，BTK抑制剂包括但不限于依鲁替尼。
根据实施方案，CD20抑制剂包括但不限于抗CD20抗体(例如，奥滨尤妥珠单抗(GA101))。
根据实施方案，IDH抑制剂包括但不限于艾伏尼布和伊那尼布(enasidenib)。
根据实施方案，异柠檬酸脱氢酶1抑制剂包括但不限于艾伏尼布。
根据实施方案，异柠檬酸脱氢酶2抑制剂包括但不限于伊那尼布。
根据实施方案，免疫调节剂包括但不限于PD-1抑制剂(例如，纳武单抗、阿特珠单抗和帕博利珠单抗)、沙利度胺、来那度胺、泊马度胺、卡介苗(BCG)和左旋咪唑。
根据实施方案，PD-1抑制剂包括但不限于纳武单抗、阿特珠单抗和帕博利珠单抗。
根据实施方案，DHODH抑制剂包括但不限于具有式(Z)结构的化合物：
其中
X为CH或N；
Y为CH或N；
R
R
R
R
R
R
·C
·
·
·
每个R
R
R
n为1或2；
或其药学上可接受的盐、同位素、N-氧化物、溶剂化物或立体异构体；
或选自以下项的化合物
或其药学上可接受的盐、N-氧化物、溶剂化物或立体异构体。
根据实施方案，DHODH抑制剂包括但不限于具有式(Z)结构的化合物：
其中
X为CH或N；
Y为CH或N；
R
R
R
R
R
R
·C
·
·
·
其中
每个R
R
R
n为1或2；
或其药学上可接受的盐、同位素、N-氧化物、溶剂化物或立体异构体。
在式(Z)的上下文中，以下定义适用：
术语“烯基”包括长度和可能的取代类似于上述烷基，但包含至少一个双键的不饱和脂族基团。例如，术语“烯基”包括直链烯基基团(例如乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基等)。术语烯基还包括烯基基团，该烯基基团包括置换烃主链的一个或多个碳的氧、氮、硫或磷原子。在某些实施方案中，直链或支链烯基基团在其主链中具有6个或更少的碳原子(例如，对于直链为C
术语“卤代烷基”是指链中具有1至6个碳原子的直链或支链烷基基团，其任选地用卤素取代氢。如本文所用，术语“C
术语“卤代烯基”包括长度与上述烷基相似并且可能取代的不饱和脂族基团，但其包含至少一个双键并且在链中具有1个至6个碳原子，任选地用卤素取代氢。
术语“芳基”是指每个环具有6个原子的单环芳族碳环(具有全部为碳的环原子的环结构)。(在芳基基团中的碳原子为sp2杂化的。)
术语“杂芳基”是指每个杂环具有3至9个环原子的单环或稠和二环的杂环(具有选自碳原子和至多四个杂原子的环原子的环结构，杂原子选自氮、氧和硫)。杂芳基基团的示例性示例包括以适当键合部分的形式出现的以下实体：
本领域技术人员将认识到，上文列出或举例说明的物质并非穷举性的，并且还可选择在这些限定术语范围内的其他物质。
术语“可变连接点”意指允许基团连接在结构中的多于一个另选位置处。连接总是代替环原子中的一个环原子上的氢原子。换句话讲，键合的所有排列由单个示意图表示，如以下例证所示。
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中X为CH。
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中X为N。
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中Y为CH。
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中Y为N。
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中
R
其中R
R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中
R
每个R
R
n为1或2。
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中
R
每个R
R
n为1或2。
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中
R
其中
每个R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中
R
每个R
R
n为1或2。
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中
R
R
R
R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中
R
R
R
R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其中R
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，该化合物选自由以下组成的组：
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-(3-氟苯基)-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-(3-氟苯基)-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-(3-氟苯基)-4-苯基异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-4-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2,6-二氯苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-4-(1-甲基环丙基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2,6-二氯苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟苯基)-4-环丙基-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-4-(丙-1-烯-2-基)-2-(2-(三氟甲基)苯基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-1-氧代-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-2(1H)-基)苯甲腈；
2-(2-氯苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-4-(丙-1-烯-2-基)-2-(邻甲苯基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-4-异丙基酞嗪-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-(3-氟苯基)-4-异丙基酞嗪-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-4-异丙基酞嗪-1(2H)-酮；
4-乙基-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-(3-氟苯基)酞嗪-1(2H)-酮；
4-乙基-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-(邻甲苯基)酞嗪-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(邻甲苯基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-4-甲基吡啶-3-基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-4-(1-甲基环丙基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-(3-氟苯基)-4-(2-羟基丙-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
4-(二甲氨基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-(邻甲苯基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-(丙-1-烯-2-基)酞嗪-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-甲氧基-4-(丙-1-烯-2-基)酞嗪-1(2H)-酮；
2-(5-氯-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
2-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-3-氟-8-(丙-1-烯-2-基)-6-(邻甲苯基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮；
2-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-3-氟-8-甲基-6-(邻甲苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮；
2-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-3-氟-8-异丙基-6-(邻甲苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮；
6-(2-氯-6-氟苯基)-2-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-3-氟-8-(丙-1-烯-2-基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮；
6-(2-氯-6-氟苯基)-2-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-3-氟-8-异丙基-1,6-萘啶-5(6H)-酮；
(S)-2-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-3-氟-6-(邻甲苯基)-8-(1,1,1-三氟丙-2-基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮；
(R)-2-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-3-氟-6-(邻甲苯基)-8-(1,1,1-三氟丙-2-基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(4-甲基噻唑-5-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-3-氟-8-异丙基-6-(邻甲苯基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(2-氟-5-甲苯基)-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(2-氟-5-甲苯基)-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-5-甲苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(2-氟-5-甲氧基苯基)-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-(丙-1-烯-2-基)-2-(邻甲苯基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-5-甲氧基苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
外消旋-4-(仲丁基)-2-(2-氯-6-氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟异喹啉-1(2H)-酮；
2-(3-氯-6-甲氧基吡啶-2-基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(2-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟-3-甲氧基苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(邻甲苯基)酞嗪-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基酞嗪-1(2H)-酮；
外消旋6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(邻甲苯基)-4-(1,1,1-三氟丙-2-基)酞嗪-1(2H)-酮；
(S*)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(邻甲苯基)-4-(1,1,1-三氟丙-2-基)酞嗪-1(2H)-酮；
(R*)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(邻甲苯基)-4-(1,1,1-三氟丙-2-基)酞嗪-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-(1-甲基环丙基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(2-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(5-氯-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(3-氯-2-甲氧基-5-甲基吡啶-4-基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
2-(3-氯-2-甲氧基-5-甲基吡啶-4-基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(2-氟-5-甲氧基苯基)-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(4-氟-2-甲苯基)-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-3-(2-羟基乙氧基)苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(2-氟苯基)-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(5-氟-2-甲苯基)-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2,5-二氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(2-氟-6-甲苯基)-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-3-甲氧基苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(2-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-4-基)-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2,5-二氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(2-氟-6-甲苯基)-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(3-氟-2-甲苯基)-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2,5-二甲苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(4-氟-2-甲苯基)-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(2-氟苯基)-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(2-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-4-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-甲基-4-(丙-1-烯-2-基)-2-(邻甲苯基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟-3-甲氧基苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(邻甲苯基)-4-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(5-氟-2-甲苯基)-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(2-甲氧基苯基)-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-5-甲基吡啶-3-基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-4-基)-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(3-氟-2-甲基苯基)-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2,5-二甲苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-(丙-1-烯-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
外消旋-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(邻甲苯基)-4-(1,1,1-三氟丙-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-(2-乙苯基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(2-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-4-基)-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-5-甲基吡啶-3-基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(2-(甲基-d
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(4-甲基嘧啶-5-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(2-甲氧基苯基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(3-氟-6-甲氧基吡啶-2-基)-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(3-甲基吡嗪-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-5-甲基吡啶-3-基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
2-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-3-氟-6-(2-氟-5-甲基苯基)-8-异丙基-1,6-萘啶-5(6H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟4-异丙基-2-(4-甲基哒嗪-3-基)异喹啉-1(2H)-酮；
(S)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(邻甲苯基)-4-(1,1,1-三氟丙-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
(R)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(邻甲苯基)-4-(1,1,1-三氟丙-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(2-(三氟甲基)苯基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(5-甲基嘧啶-4-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-(二氟甲基)苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
2-(3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
2-环己基-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
2-(3-氯-6-甲基吡啶-2-基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
2-环戊基-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
2-(3-氯-4-甲氧基吡啶-2-基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-((1R,2S)-2-甲基环己基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(2-甲氧基-5-甲基吡啶-4-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-((1S,2R)-2-甲基环己基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(环丙基甲基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(1-甲氧基丁-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(3-甲基吡啶-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
外消旋6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-((顺式)-3-甲氧基环戊基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-((1R*,2R*)-2-甲基环己基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-((1S*,2S*)-2-甲基环己基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(戊-3-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-((1R*,2R*)-2-甲基环戊基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-((1S*,2S*)-2-甲基环戊基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-((1R*,2S*)-2-甲基环戊基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-((1S*,2R*)-2-甲基环戊基)异喹啉-1(2H)-酮；
外消旋6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-((顺式)-3-甲氧基环己基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(二环[2.2.1]庚-1-基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(2-甲氧基-3-甲基吡啶-4-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-3-氟-8-异丙基-6-(2-甲氧基苯基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(3-甲基异噻唑-4-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(5-甲基异噻唑-4-基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-3-氟-8-异丙基-6-(2-(三氟甲基)苯基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮；
2-(3,6-二甲基吡啶-2-基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2,5-二甲基吡啶-4-基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(3-甲基吡啶-4-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(2-甲基吡啶-3-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(2-羟基-5-甲基吡啶-4-基)-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(2-(二氟甲基)苯基)-2-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-3-氟-8-异丙基-1,6-萘啶-5(6H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(2-羟基-3-甲基吡啶-4-基)-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；和
2-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-3-氟-8-异丙基-6-(o-D
或其药学上可接受的盐、同位素、N-氧化物、溶剂化物或立体异构体；
或选自以下项的化合物：
2-(2-氯-6-氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-(2-氟-4-硝基苯基)-4-碘异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟苯基)-7-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-6-氟-4-(丙-1-烯-2-基)酞嗪-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟苯基)-7-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-6-甲氧基-4-(丙-1-烯-2-基)酞嗪-1(2H)-酮；
或其药学上可接受的盐、N-氧化物、溶剂化物或立体异构体。
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，该化合物选自由以下组成的组：
2-(2-氯-6-氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(邻甲苯基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-4-甲基吡啶-3-基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-4-(1-甲基环丙基)异喹啉-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-(丙-1-烯-2-基)酞嗪-1(2H)-酮；
2-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-3-氟-8-异丙基-6-(邻甲苯基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(邻甲苯基)酞嗪-1(2H)-酮；
2-(2-氯-6-氟苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基酞嗪-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(2-(甲基-d3)苯基)异喹啉-1(2H)-酮；
(R)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-2-(邻甲苯基)-4-(1,1,1-三氟丙-2-基)异喹啉-1(2H)-酮；
6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(2-(三氟甲基)苯基)异喹啉-1(2H)-酮；和
2-(2-(二氟甲基)苯基)-6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基异喹啉-1(2H)-酮；
或其药学上可接受的盐、同位素、N-氧化物、溶剂化物或立体异构体。
在本发明的一个实施方案中，DHODH抑制剂是6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(邻甲苯基)异喹啉-1(2H)-酮或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、同位素变体或N-氧化物。
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其具有式(Za)：
其中
Y为CH或N；
R
R
R
R
C
其中
每个R
R
R
n为1或2；
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、同位素变体或N-氧化物。
在本发明的实施方案中，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物，其具有式(Zb)：
其中
Y为CH或N；
R
R
R
R
其中
R
R
R
n为1；
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、同位素变体或N-氧化物。
现在将参考用于下文它们的一般性制备和后面的实施例的示例性合成方案来描述可用于本发明的方法中的示例性式(Z)化合物。本领域技术人员将认识到，为获得本文的多种化合物，可适当地选择原料，使得在根据需要进行保护或不保护的情况下，在整个反应方案中将携带最终需要的取代基，以得到所期望的产物。另选地，可能需要或者希望采用合适的基团代替最终期望的取代基，该合适的基团可经历整个反应方案，并且在适当情况下用所期望的取代基代替。除非另外指明，否则变量均如上文针对式(Z)所定义。反应可在溶剂的熔点和回流温度之间进行，并且优选在介于0℃和溶剂的回流温度之间进行。可采用常规加热或微波加热来加热反应。反应还可在密闭压力容器中在高于溶剂的正常回流温度下进行。
在用于式(Z)的通用方案和实施例中使用的所有缩写如表1A中所定义。变量如范围中所定义或如通用方案中所具体定义。
表1A
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/>
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制备例
现在将参考示例性合成方案来描述可用于本发明的方法中的示例性式(Z)化合物，以用于下文的它们的一般性制备和后面的具体实施例。
方案1
根据方案1，分三步从2-(苄氧基)乙酸乙酯制备式(II)的1,2,4-三唑-5(4H)-酮化合物(其中PG为Bn)。在第一步中，通过使2-(苄氧基)乙酸乙酯与水合肼在合适的溶剂(诸如EtOH等)中；在70℃-85℃的温度范围下反应来制备2-(苄氧基)乙酰肼。酰肼与式R
式(II)的化合物(其中R
采用公认的方法(诸如T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“Protective Groups inOrganic Synthesis”，第3版，John Wiley&Sons出版社，1999年中所述的方法)分两步实现式(II)的化合物(其中PG为Bn)与式(II)的化合物(其中PG为TBDPS)的保护基团交换。在第一步中，在本领域技术人员已知的氢气分解条件下实现苄基的去保护，得到醇。例如，在以下条件下实现去保护：采用钯催化剂(诸如Pd/C等)；在H
方案2
根据方案2，将式(XIV)的化合物(其中R
方案3
根据方案3，式(V)的化合物(其中R
使式(VI)的化合物(其中PG为Bn并且R
随后采用公认的方法(诸如T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“Protective Groups inOrganic Synthesis”，第3版，John Wiley&Sons出版社，1999年中描述的那些)进行去保护，提供式(Z)的化合物(其中X和Y为CH)。例如，采用本领域技术人员已知的条件，优选在合适的溶剂(诸如THF等)中用TBAF，将式(VI)的化合物(其中R
Bn保护基团的去除在存在氢气的情况下，在存在催化剂诸如碳载钯(Pd/C)的情况下实现。保护基团Bn的去除还在约80℃的温度处采用TFA来实现。
将式(Z)的化合物(其中X为CH；Y为CH；R
方案4
根据方案4，式(VII)的化合物与α,β-不饱和醛诸如3-甲基-2-丁烯醛、3-甲基戊-2-烯醛等；采用TiCl
方案5
/>
根据方案5，可商购获得或可合成获得的式(X)化合物(其中HAL为F，R
方案6
根据方案6，将式(XII)的化合物(其中R
方案7
根据方案7，根据先前所描述的方法，式(XIV)的化合物(其中R
方案8
根据方案8，式(XVIIa)和(XVIIb)的化合物由5-溴异苯并呋喃-1,3-二酮分两步制备。使5-溴异苯并呋喃-1,3-二酮与可商购获得或可合成获得的适当取代的烷基格氏试剂(诸如i-PrMgCl、EtMgBr等)；在CdCl
使式(XVIII)的化合物(其中R
方案9
根据方案9，将式(X)的化合物(其中HAL为Br，R
式(VI)的化合物(其中Y为CH，并且R
方案10
根据方案10，将式R
式(XVIII)的化合物(其中R
式(XVIII)的化合物(其中R
方案11
根据方案11，使4,5-二氟邻苯二甲酸酐与式R
方案12
根据方案12，使式R
方案13
根据方案13，式(XVIII)的化合物的N-芳基化通过适当取代的可商购获得或可合成可获得的式(XXIII)的氟化合物的反应来实现，其中R
式(XXIV)的化合物的还原采用锌或铁和NH
用NaNO
方案14
根据方案14，使式(X)的化合物(其中HAL为F、R
式(XXX)的异香豆素化合物(其中R
将式(XXX)的化合物(其中Y为CH并且R
方案15
根据方案15，采用本领域技术人员已知的Wittig反应条件，将2-丁酮转化成3-甲基戊-2-烯酸乙酯。例如，在有或没有添加剂(诸如苯甲酸、LiCl和十二烷基硫酸钠(SDS)等)的情况下，在合适的溶剂(诸如甲苯)中，在室温至溶剂的回流温度范围内的温度处，使2-丁酮与三苯基磷内
方案16
根据方案16，将式(XXX)的化合物的异香豆素(其中Y为CH)与可商购获得或可合成获得的式R
方案17
式(XXX)的异香豆素化合物可以根据方案17制备。采用本领域技术人员已知的条件，诸如草酰氯或亚硫酰氯，在存在催化量的DMF的情况下，由式(X)的化合物(其中HAL为F，R
方案18
根据方案18，式(Xa)的化合物(其中HAL为Cl，R
方案19
根据方案19，使式R
方案20
根据方案20，使3-甲基丁醛与式(XXXIX)的化合物(其中Y为N并且R
方案21
根据方案21，使式(XXXIX)或式(XI)的化合物(其中R
式(XLV)的化合物分两步由式(XXXIX)的化合物制备。使式(XXXIX)的化合物(其中R
将可商购获得或可合成获得的肼R
方案22
根据方案22，使2-溴-4,5-二氟苯甲酸甲酯与适当保护的式(II)的三唑酮化合物在碱诸如K
方案23
根据方案23，使式(XXXIX)的化合物(其中R
方案24
根据方案24，通过以下方式将式(VI)的化合物(其中PG为Bn)脱保护：采用本领域技术人员已知的条件，优选在密封管中的纯TFA中，在约60℃至90℃的温度处；或者采用BCl
以类似的方式，对式(XVIII)的化合物(其中R
使式(Z)的化合物(其中R
式(Z)的化合物可使用本领域普通技术人员已知的方法转化成它们相应的盐。例如，将式(Z)的胺用三氟乙酸、HCl或柠檬酸在溶剂(诸如Et
如果根据本发明的化合物具有至少一个手性中心，则它们可以对映体形式相应地存在。如果化合物具有两个或更多个手性中心，则它们还可以非对映体形式存在。应当理解，所有的此类异构体及其混合物涵盖在本发明的范围内。
根据上述方案制备的化合物可以通过形式特异性合成或者通过拆分来作为单一形式，诸如单一对映体获得。作为另外一种选择，根据上述方案制备的化合物可作为各种形式的混合物，诸如外消旋混合物(1:1)或非外消旋混合物(非1:1)获得。在获得对映体的外消旋混合物和非外消旋混合物的情况中，可以使用本领域普通技术人员已知的常规分离方法诸如手性层析、重结晶、非对映体盐形成法、衍生成非对映体加合物、生物转化或酶促转化来分离单一对映体。在获得区域异构体混合物或非对映体混合物的情况下，如适用，可以使用常规方法诸如层析法或结晶来分离单一异构体。
提供如下具体实施例来进一步说明式(Z)的化合物和各种优选实施方案。
实施例
在获得下文实施例中所描述的式(Z)的化合物和相应的分析数据时，除非另外指明，否则遵循以下实验和分析方案。
除非另外指明，否则反应混合物均在室温(rt)和氮气氛围下进行磁力搅拌。在将溶液“干燥”的情况下，它们通常是经干燥剂(诸如Na
使用预充填管柱，在硅胶(SiO
制备性反相高效液相色谱法(RP HPLC)在以下设备中的任一个上进行：
方法A.Gilson GX-281半制备型HPLC，其具有Phenomenex Synergi C18(10μm，150×25mm)或Boston Green ODS C18(5μm，150×30mm)，流动相为5％-99％ ACN的水溶液(含0.225％ FA)，进行10分钟，然后在100％ ACN下保持2分钟，流速为25mL/min；或者
方法B.Gilson GX-281半制备型HPLC，其具有Phenomenex Synergi C18(10μm，150×25mm)或Boston Green ODS C18(5μm，150×30mm)，流动相为5％-99％ ACN的水溶液(0.1％ TFA)，进行10分钟，然后在100％ ACN下保持2分钟，流速为25mL/min；或者
方法C.Gilson GX-281半制备型HPLC，其具有Phenomenex Synergi C18(10μm，150×25mm)或Boston Green ODS C18(5μm，150×30mm)，流动相为5％-99％ ACN的水溶液(0.05％ HCl)，进行10分钟，然后在100％ ACN下保持2分钟，流速为25mL/min；或者
方法D.Gilson GX-281半制备型HPLC，其具有Phenomenex Gemini C18(10μm，150mm×25mm)、AD(10μm，250mm×30mm)或Waters XBridge C18柱(5μm，150mm×30mm)，流动相为0％-99％ ACN的水溶液(含0.05％氢氧化铵v/v)，进行10分钟，然后在100％ ACN下保持2分钟，流速为25mL/min；或者
方法E.Gilson GX-281半制备型HPLC，其具有Phenomenex Gemini C18(10μm，150×25mm)或Waters XBridge C18柱(5μm，150×30mm)，流动相为5％-99％ ACN的水溶液(10mM NH
在Thar 80Prep-SFC系统或Waters 80Q Prep-SFC系统(来自Waters)上进行制备型超临界流体高效液相色谱(SFC)。将ABPR设定为100巴，以将CO2保持在SF条件下，并且流速可根据化合物特性变化，流速的范围为50g/min至70g/min。柱温为环境温度。
除非另外指明，否则在SHIMADZU LCMS-2020MSD或1200G6110AMSD上使用正离子模式的电喷雾电离(ESI)获得质谱(MS)。计算的质量(calcd.)对应于精确质量。
在Bruker AVIII 400型光谱仪上获得核磁共振(NMR)谱。多重性的定义如下：s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，dd＝双重双重峰，ddd＝双重双重双重峰，td＝三重双重峰，dt＝双重三重峰，spt＝七重峰，quin＝五重峰，m＝多重峰，br＝宽峰。应当理解，对于包含可交换质子的化合物而言，所述质子在NMR光谱中可能可见或可能不可见，这取决于用于进行NMR光谱的溶剂的选择以及溶液中化合物的浓度。
使用ChemDraw Ultra 12.0，ChemDraw Ultra 14.0(CambridgeSoft Corp.，Cambridge，MA)或ACD/Name 10.01版(Advanced Chemistry)，生成化学名称。
命名为R*或S*的化合物是绝对构型未确定的对映体纯化合物。
中间体1：3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-1H-1,2,4-三唑-5(4H)-酮。
步骤A.2-(苄氧基)乙酰肼。
向2-(苄氧基)乙酸乙酯(55g，283.17mmol)的EtOH(500mL)溶液中添加NH
步骤B.3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-1H-1,2,4-三唑-5(4H)-酮
在0℃下，向2-(苄氧基)乙酰肼(52g，288mmol)的H
中间体2：5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-乙基-2,4-二氢-3H-1,2,
步骤A.4-乙基-5-(羟甲基)-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-酮。
向5-[(苄氧基)甲基]-4-甲基-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-酮(8g，34.3mmol，1.0当量)的甲醇(200mL)溶液中添加Pd/C(2g)。将所得混合物保持在氢气下并在室温下搅拌6小时。然后将所得混合物过滤并将滤液浓缩，得到白色固体状粗产物4-乙基-5-(羟甲基)-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-酮(4.3g，88％收率)。
步骤B：5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-乙基-2,4-二氢-3H-1,2,4-
向4-乙基-5-(羟甲基)-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-酮(3g，21mmol，1.0当量)在DCM(30mL)中的溶液中添加叔丁基氯二苯基硅烷(6.5mL，25mmol，1.2当量)和吡啶(1.86mL，23mmol，1.1当量)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水(100mL)淬灭。将所得混合物用DCM(3×100mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(SiO
中间体3：5-((苄氧基)甲基)-4-乙基-2-(7-氟-1-氧代-4-(丙-1-烯-2-基)-1H-异
步骤A.4,5-二氟-2-碘苯甲酸叔丁酯。
将4,5-二氟-2-碘苯甲酸(3g，11mmol)溶于THF(30mL)中，然后添加二碳酸二叔丁酯(4.6g，21mmol)，随后添加DMAP(645mg，5.3mmol)。将反应混合物在氮气下在50℃处搅拌过夜，然后冷却至室温。将溶剂在减压下蒸发。将残余物用EtOAc稀释，然后用盐水洗涤。将有机层分离，用Na
步骤B.4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-
将4,5-二氟-2-碘苯甲酸叔丁酯(3.2g，9.4mmol)、3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-1H-1,2,4-三唑-5(4H)-酮(中间体1，2.6g，11.2mmol)和Cs
步骤C.4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-
向4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-5-氟-2-碘苯甲酸叔丁酯(5g，9mmol)在DCM(50mL)中的溶液中缓慢添加TFA(10mL)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩。将所获得的残余物用石油醚在室温下研磨30分钟。将混合物过滤，并且将固体用石油醚冲洗。收集沉淀物并真空干燥，得到白色固体状标题化合物(4.1g，收率：91％)。ESI-MS：C
步骤D.5-((苄氧基)甲基)-4-乙基-2-(7-氟-1-氧代-4-(丙-1-烯-2-基)-1H-异苯
在氮气下，向乙酸3-甲基丁-1,2-二烯-1-基酯(中间体12，280mg，2.2mmol)、4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-5-氟-2-碘苯甲酸(1.1g，2.2mmol)和Cy
中间体4：5-((苄氧基)甲基)-4-乙基-2-(7-氟-4-异丙基-1-氧代-1H-异苯并吡
方法I：
步骤A.4,5-二氟-2-碘苯甲酸3-甲基丁-2-烯-1-基酯
向4,5-二氟-2-碘苯甲酸(1.4g，4.9mmol)和Cs
步骤B.4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-
向4,5-二氟-2-碘苯甲酸3-甲基丁-2-烯-1-基酯(1.6g，4.5mmol)、3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-1H-1,2,4-三唑-5(4H)-酮(中间体1，2.1g，9.1mmol)在无水DMF(25mL)中的混合物中添加Cs
步骤C.5-((苄氧基)甲基)-4-乙基-2-(7-氟-4-异丙基-1-氧代-1H-异苯并吡喃-
向4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-5-氟-2-碘苯甲酸3-甲基丁-2-烯-1-基酯(4g，6.86mmol，1当量)在甲苯(200mL)中的混合物中分别添加(tBu
方法II
在室温处，向5-((苄氧基)甲基)-4-乙基-2-(7-氟-1-氧代-4-(丙-1-烯-2-基)-1H-异苯并吡喃-6-基)-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-酮(中间体3，5.9g，13.5mmol)在THF(100mL)中的混合物中添加威尔金森催化剂[RhCl(PPh
中间体5：4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-
步骤A.4,5-二氟-2-碘苯甲酸叔丁酯。
将4,5-二氟-2-碘苯甲酸(3g，11mmol)溶于THF(30mL)中，然后添加二碳酸二叔丁酯(4.6g，21mmol)，随后添加DMAP(645mg，5.3mmol)。将反应混合物在氮气下在50℃处搅拌过夜，然后冷却至室温。将溶剂在减压下蒸发。将残余物用EtOAc稀释，然后用盐水洗涤。将有机层分离，用Na
步骤B.4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-
将4,5-二氟-2-碘苯甲酸叔丁酯(3.2g，9.4mmol)、3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-1H-1,2,4-三唑-5(4H)-酮(中间体1，2.6g，11.2mmol)和Cs
步骤C.4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-
向4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-5-氟-2-碘苯甲酸叔丁酯(5g，9mmol)在DCM(50mL)中的溶液中缓慢添加TFA(10mL)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩。将所获得的残余物用石油醚在室温下研磨30分钟。将混合物过滤，并且将固体用石油醚冲洗。收集沉淀物并真空干燥，得到白色固体状标题化合物(4.1g，收率：91％)。ESI-MS：C
步骤D.4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-
将4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-5-氟-2-碘苯甲酸(3.5g，7mmol)在SOCl
中间体6：2-氯-6-氟-N-(3-甲基戊-2-烯-1-基)苯胺
步骤A.3-甲基戊-2-烯酸乙酯
向2-丁酮(52g，717.6mmol)和(乙氧甲酰基亚甲基)三苯基膦(50g，143.5mmol)在甲苯(65mL)中的溶液中添加苯甲酸(3.5g，28.7mmol)。将反应混合物在回流下加热16小时。将混合物用石油醚稀释并通过短硅胶垫过滤。用己烷洗涤硅胶。将滤液在0℃-2℃处减压浓缩。将残余物通过二氧化硅柱色谱法(洗脱：0-10％ EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到无色液体状标题化合物(23.3g粗制物)。
步骤B.3-甲基戊-2-烯-1-醇
在-78℃处，在氮气下向DIBAL-H(118mL，118mmol)的甲苯溶液(1M)中滴加3-甲基戊-2-烯酸乙酯(20g粗制物)的甲苯溶液(40mL)。将反应混合物在-78℃处搅拌2小时。将混合物升温至室温并在0℃处缓慢倒入饱和酒石酸钾钠水溶液中。将混合物搅拌2小时并通过短
步骤C.3-甲基戊-2-烯醛
向3-甲基戊-2-烯-1-醇(2g，20.0mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加Dess-martin过碘烷(10g，24.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。将混合物通过短
步骤D.N-(2-氯-6-氟苯基)-3-甲基戊-2-烯-1-亚胺
在氮气下在0℃处，向2-氯-6-氟苯胺(1.2g，8.2mmol)和3-甲基戊-2-烯醛(0.97g，9.9mmol)在DCM(18mL)中的混合物中添加三乙胺(4.6mL，33mmol)，然后滴加TiCl
步骤E.2-氯-6-氟-N-(3-甲基戊-2-烯-1-基)苯胺
向N-(2-氯-6-氟苯基)-3-甲基戊-2-烯-1-亚胺(1.3g，5.76mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中添加NaBH
中间体7：5-氯-3-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-胺
步骤A.5-氯-3-甲基-4-硝基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑
在室温处，向3-甲基-4-硝基吡唑(2g，15.7mmol)在EtOAc(20mL)中的溶液中添加DHP(2g，23.6mmol)和TsOH.H
步骤B.5-氯-3-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-胺
向5-氯-3-甲基-4-硝基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑(100mg，0.4mmol)在MeOH/THF/H
中间体8：3-(2-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯苯胺。
步骤A.叔-丁基(2-(2-氯-3-硝基苯氧基)乙氧基)二苯基硅烷
在0℃处在氮气下，向2-氯-3-硝基苯酚(200mg，1.2mmol)、2-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)乙-1-醇(554mg，1.8mmol)和PPh
步骤B.3-(2-((叔-丁基二苯基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯苯胺。
向叔丁基(2-(2-氯-3-硝基苯氧基)乙氧基)二苯基硅烷(220mg，0.5mmol)、NH
中间体9：5-((苄氧基)甲基)-4-乙基-2-(7-甲基-1-氧代-4-(丙-1-烯-2-基)-1H-
步骤A.2-溴-4-氟-5-甲基苯甲酸叔丁酯
向2-溴-4-氟-5-甲基苯甲酸(1g，4.3mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加(Boc)
步骤B.4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-
将2-溴-4-氟-5-甲基苯甲酸叔丁酯(750mg，2.6mmol)、5-((苄氧基)甲基)-4-乙基-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-酮(800mg，3.4mmol)和Cs
步骤C.4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-
向4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-溴-5-甲基苯甲酸叔丁酯(500mg，0.90mmol)在DCM(5mL)中的混合物中添加TFA(1mL)。将混合物在室温下搅拌12小时。浓缩混合物。将残余物用DCM溶解，并缓慢添加石油醚。将混合物在室温下搅拌30分钟。过滤混合物，并用石油醚冲洗沉淀物。收集固体并真空干燥，得到白色固体状标题化合物(360mg，收率：86％)。ESI-MS：C
步骤D.5-((苄氧基)甲基)-4-乙基-2-(7-甲基-1-氧代-4-(丙-1-烯-2-基)-1H-异
在氮气下，向4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-溴-5-甲基苯甲酸(560mg，1.26mmol)、乙酸3-甲基丁-1,2-二烯-1-基酯(中间体12，1.58g，12.5mmol)、AcOK(369mg，3.76mmol)和TBAB(809mg，2.51mmol)在DMF(3.9mL)中的混合物中添加Pd(OAc)
中间体10：6-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-
步骤A.2,6-二氯-5-氟烟酰氯
在0℃处，向2,6-二氯-5-氟烟酸(20g，95mmol)在THF(200mL)中的溶液中滴加(COCl)
步骤B.2,6-二氯-5-氟烟酸异丙酯
在0℃处，向丙-2-醇(8.56g，142mmol，10.9mL)和吡啶(9.02g，114mmol)在THF(200mL)中的混合物中添加2,6-二氯-5-氟烟酰氯(21.7g，96.0mmol)在THF(50mL)中的溶液。将混合物于25℃搅拌1小时。将混合物倒入水(300mL)中。将水相用乙酸乙酯(300mL)萃取。将合并的有机相用无水Na
步骤C.6-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-
向2,6-二氯-5-氟烟酸异丙酯(4g，15.87mmol)的DMSO(40mL)混合物中添加3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-1H-1,2,4-三唑-5(4H)-酮(3.89g，16.66mmol)和K
中间体11：5-((苄氧基)甲基)-4-乙基-2-(7-氟-3-羟基-4-异丙基-1-氧代异苯并
步骤A.4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-
向装有2-溴-4,5-二氟苯甲酸甲酯(100.0g，398mmol)、5-((苄氧基)甲基)-4-乙基-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-酮(中间体1，113.5g，508mmol)和K
步骤B.5-((苄氧基)甲基)-4-乙基-2-(7-氟-3-羟基-4-异丙基-1-氧代异苯并吡
向4-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-溴-5-氟苯甲酸甲酯(30g，65.9mmol)、Xantphos(4.02g，6.6mmol)、[Pd(烯丙基)Cl]
中间体12：乙酸3-甲基丁-1,2-二烯-1-基酯
步骤A.乙酸2-甲基丁-3-yn-2-基酯
在0℃处，向Mg(ClO
步骤B.乙酸3-甲基丁-1,2-二烯-1-基酯
在氮气下，向乙酸2-甲基丁-3-yn-2-基酯(2.5g，20mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加AgBF
PCT/IB2020/053601(其在2020年10月22日作为WO 2020/212897公开)的实施例22
步骤A.6-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-
向5-((苄氧基)甲基)-4-乙基-2-(7-氟-3-羟基-4-异丙基-1-氧代异苯并吡喃-6-基)-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-酮(中间体11，56g，123mmol)在AcOH(160mL)中的混合物中添加邻甲苯胺(14.8g，138mmol)。将反应混合物在80℃处加热16小时。浓缩混合物，然后用NaHCO
步骤B.6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-
在氮气下，在-78℃处向6-(3-((苄氧基)甲基)-4-乙基-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(邻甲苯基)异喹啉-1(2H)-酮(26.5g，50.3mmol)在DCM(230mL)中的搅拌溶液中添加BCl
应注意，本文所述的式(Z)的化合物描述于PCT/IB2020/053601(其于2020年10月22日公开为WO 2020/212897，出于所有目的将其全文以引用方式并入本文)中。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是低甲基化剂、胞苷脱氨酶抑制剂、DNA嵌入剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、激酶抑制剂、CD20抑制剂、IDH抑制剂、免疫调节剂或DHODH抑制剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，其中至少一种其他治疗剂是低甲基化剂。
根据实施方案，低甲基化剂是阿扎胞苷、地西他滨或它们药学上可接受的盐或溶剂化物。
根据特定的实施方案，低甲基化剂是阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物以及阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物以及阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物以及阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是地西他滨或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是地西他滨或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是地西他滨或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是地西他滨或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是地西他滨或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是地西他滨或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是地西他滨或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是地西他滨或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是DNA嵌入剂。
根据实施方案，DNA嵌入剂是蒽环霉素。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是蒽环霉素。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是蒽环霉素。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是蒽环霉素。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是蒽环霉素。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是蒽环霉素。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是蒽环霉素。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是蒽环霉素。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是蒽环霉素。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，其中至少一种其他治疗剂是嘧啶类似物。
根据实施方案，该嘧啶类似物是阿糖胞苷。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿糖胞苷。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿糖胞苷。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿糖胞苷。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿糖胞苷。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿糖胞苷。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿糖胞苷。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿糖胞苷。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿糖胞苷。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，其中至少一种其他治疗剂是嘌呤类似物。
根据实施方案，嘌呤类似物是氟达拉滨。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是氟达拉滨。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是氟达拉滨。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是氟达拉滨。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是氟达拉滨。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是氟达拉滨。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是氟达拉滨。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是氟达拉滨。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是氟达拉滨。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，其中至少一种其他治疗剂是IDH抑制剂。
在一些实施方案中，IDH抑制剂是异柠檬酸脱氢酶-1抑制剂(例如，艾伏尼布)。
根据实施方案，该IDH抑制剂是艾伏尼布。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是艾伏尼布。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是艾伏尼布。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是艾伏尼布。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是艾伏尼布。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是艾伏尼布。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是艾伏尼布。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是艾伏尼布。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是艾伏尼布。
在一些实施方案中，IDH是异柠檬酸脱氢酶-2抑制剂(例如，伊那尼布)。
根据实施方案，IDH抑制剂是伊那尼布。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是伊那尼布。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是伊那尼布。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是伊那尼布。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是伊那尼布。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是伊那尼布。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是伊那尼布。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是伊那尼布。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是伊那尼布。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，其中至少一种其他治疗剂是免疫调节剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，其中至少一种其他治疗剂是作为PD-1抑制剂的免疫调节剂。
根据实施方案，免疫调节剂是纳武单抗、阿特珠单抗、帕博利珠单抗、沙利度胺、来那度胺、泊马度胺、卡介苗(BCG)或左旋咪唑。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是纳武单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是纳武单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是纳武单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是纳武单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是纳武单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是纳武单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是纳武单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是纳武单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿特珠单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿特珠单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿特珠单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿特珠单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿特珠单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿特珠单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿特珠单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是阿特珠单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是帕博利珠单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是帕博利珠单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是帕博利珠单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是帕博利珠单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是帕博利珠单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是帕博利珠单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是帕博利珠单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是帕博利珠单抗。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是沙利度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是沙利度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是沙利度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是沙利度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是沙利度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是沙利度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是沙利度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是沙利度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是来那度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是来那度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是来那度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是来那度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是来那度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是来那度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是来那度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是来那度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是泊马度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是泊马度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是泊马度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是泊马度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是泊马度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是泊马度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是泊马度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是泊马度胺。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是BCG。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是BCG。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是BCG。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是BCG。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是BCG。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是BCG。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是BCG。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是BCG。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是左旋咪唑。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是左旋咪唑。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是左旋咪唑。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是左旋咪唑。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是左旋咪唑。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是左旋咪唑。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是左旋咪唑。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是左旋咪唑。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，其中至少一种其他治疗剂是DHODH抑制剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，其中至少一种其他治疗剂是如本文所述的DHODH抑制剂化合物。
根据实施方案，DHODH抑制剂是式(Z)的化合物或其药学上可接受的盐、同位素、N-氧化物、溶剂化物或立体异构体。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是式(Z)的DHODH抑制剂或其药学上可接受的盐、同位素、N-氧化物、溶剂化物或立体异构体。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是式(Z)的DHODH抑制剂或其药学上可接受的盐、同位素、N-氧化物、溶剂化物或立体异构体。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是式(Z)的DHODH抑制剂或其药学上可接受的盐、同位素、N-氧化物、溶剂化物或立体异构体。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是式(Z)的DHODH抑制剂或其药学上可接受的盐、同位素、N-氧化物、溶剂化物或立体异构体。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是式(Z)的DHODH抑制剂或其药学上可接受的盐、同位素、N-氧化物、溶剂化物或立体异构体。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是式(Z)的DHODH抑制剂或其药学上可接受的盐、同位素、N-氧化物、溶剂化物或立体异构体。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是式(Z)的DHODH抑制剂或其药学上可接受的盐、同位素、N-氧化物、溶剂化物或立体异构体。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是式(Z)的DHODH抑制剂或其药学上可接受的盐、同位素、N-氧化物、溶剂化物或立体异构体。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是DHODH抑制剂，该DHODH抑制剂是化合物22或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、同位素变体或N-氧化物(例如，6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(邻甲苯基)异喹啉-1(2H)-酮)。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是DHODH抑制剂，该DHODH抑制剂是化合物22或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、同位素变体或N-氧化物(例如，6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(邻甲苯基)异喹啉-1(2H)-酮)。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是DHODH抑制剂，该DHODH抑制剂是化合物22或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、同位素变体或N-氧化物(例如，6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(邻甲苯基)异喹啉-1(2H)-酮)。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是DHODH抑制剂，该DHODH抑制剂是化合物22或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、同位素变体或N-氧化物(例如，6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(邻甲苯基)异喹啉-1(2H)-酮)。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是DHODH抑制剂，该DHODH抑制剂是化合物22或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、同位素变体或N-氧化物(例如，6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(邻甲苯基)异喹啉-1(2H)-酮)。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是DHODH抑制剂，该DHODH抑制剂是化合物22或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、同位素变体或N-氧化物(例如，6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(邻甲苯基)异喹啉-1(2H)-酮)。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是DHODH抑制剂，该DHODH抑制剂是化合物22或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、同位素变体或N-氧化物(例如，6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(邻甲苯基)异喹啉-1(2H)-酮)。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是DHODH抑制剂，该DHODH抑制剂是化合物22或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、同位素变体或N-氧化物(例如，6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(邻甲苯基)异喹啉-1(2H)-酮)。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，其中至少一种其他治疗剂是激酶抑制剂。
根据实施方案，该激酶抑制剂是丝氨酸和/或酪氨酸激酶抑制剂。
根据实施方案，该激酶抑制剂是FLT3和/或BTK的抑制剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，其中至少一种其他治疗剂是FLT3抑制剂。
根据实施方案，FLT3抑制剂是索拉非尼、舒尼替尼、米哚妥林(PKC412)、来妥替尼(CEP-701)、坦度替尼(MLN518)、奎沙替尼(AC220)、吉瑞替尼(ASP2215)或KW-2449。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是索拉非尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是索拉非尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是索拉非尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是索拉非尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是索拉非尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是索拉非尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是索拉非尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是索拉非尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是舒尼替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是舒尼替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是舒尼替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是舒尼替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是舒尼替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是舒尼替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是舒尼替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是舒尼替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是米哚妥林。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是米哚妥林。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是米哚妥林。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是米哚妥林。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是米哚妥林。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是米哚妥林。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是米哚妥林。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是米哚妥林。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是来妥替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是来妥替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是来妥替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是来妥替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是来妥替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是来妥替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是来妥替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是来妥替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是坦度替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是坦度替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是坦度替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是坦度替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是坦度替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是坦度替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是坦度替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是坦度替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是AC220。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是AC220。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是AC220。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是AC220。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是AC220。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是AC220。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是AC220。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是AC220。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是ASP2215。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是ASP2215。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是ASP2215。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是ASP2215。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是ASP2215。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是ASP2215。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是ASP2215。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是ASP2215。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是KW-2449。在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是KW-2449。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是KW-2449。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是KW-2449。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是KW-2449。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是KW-2449。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是KW-2449。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是KW-2449。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，其中至少一种其他治疗剂是BTK抑制剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是BTK抑制剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是BTK抑制剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是BTK抑制剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是BTK抑制剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是BTK抑制剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是BTK抑制剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是BTK抑制剂。
根据实施方案，该BTK抑制剂是依鲁替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是依鲁替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是依鲁替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是依鲁替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是依鲁替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是依鲁替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是依鲁替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是依鲁替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是依鲁替尼。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，其中至少一种其他治疗剂是CD20抑制剂。
根据实施方案，该CD20抑制剂是抗CD20抗体，特别是奥滨尤妥珠单抗(GA101)。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是CD20抑制剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是CD20抑制剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是CD20抑制剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是CD20抑制剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是CD20抑制剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是CD20抑制剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是CD20抑制剂。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是GA101。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是GA101。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A1和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是GA101。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A2和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是GA101。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A3和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是GA101。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-a或其溶剂化物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是GA101。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4-b或其水合物和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是GA101。
在一些实施方案中，提供了组合疗法，其包含化合物A4和至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是GA101。
上述实施方案的所有可能的组合被认为包含在本发明的范围内。
在一些实施方案中，提供了用于治疗已经被诊断患有造血功能障碍的受试者的方法。例如，本发明涉及新的方法，包括向受试者施用治疗有效量的如本文所述的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂；和治疗有效量的至少一种其他治疗剂。
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物口服施用于受试者。
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物以约1mg/kg至约50mg/kg的剂量施用于受试者。
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物以约2.5mg/kg至约25mg/kg的剂量施用于受试者。
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物以约7.5mg/kg至约12.5mg/kg的剂量施用于受试者。
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物以约8mg/kg至约10mg/kg的剂量施用于受试者。
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物以约0.1mg至约5mg的剂量施用于受试者。
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将至少一种其他治疗剂口服施用于受试者。
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将至少一种其他治疗剂以约1mg至约500mg的剂量口服施用于受试者。
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将至少一种其他治疗剂静脉内或皮下施用于受试者。
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将至少一种其他治疗剂以约10mg/m
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将至少一种其他治疗剂以约50mg/m
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将至少一种其他治疗剂以约60mg/m
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将至少一种其他治疗剂以约75mg/m
本发明的另一个实施方案涉及用于治疗已经被诊断患有癌症(例如，其中该癌症是造血功能障碍，诸如骨髓增生异常综合征(MDS)、急性髓样白血病(AML)、急性淋巴母细胞白血病(ALL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)或慢性淋巴细胞白血病(CLL))的受试者的方法，其中该方法包括向该受试者施用：
治疗有效量的式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂、或其互变异构体或立体异构形式、或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
治疗有效量的式(Z)的DHODH抑制剂或其药学上可接受的盐、同位素、N-氧化物、溶剂化物或立体异构体；
例如，其中该多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂和DHODH抑制剂根据其给药方案施用一段时间，例如(i)在一段时间内(例如，21天时间段、或28天时间段、或3个月时间段、或6个月时间段、或一年时间段等)的同一天同时或以任一顺序依次施用，和/或(ii)在一段时间内的不同天施用。
本发明的另一个实施方案涉及用于治疗已经被诊断患有癌症(例如，其中该癌症是造血功能障碍，诸如骨髓增生异常综合征(MDS)、急性髓样白血病(AML)、急性淋巴母细胞白血病(ALL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)或慢性淋巴细胞白血病(CLL))的受试者的方法，其中该方法包括向该受试者施用：
治疗有效量的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂，其为化合物A或其药学上可接受的盐或溶剂化物(例如，化合物A1、或化合物A2、或化合物A3、或化合物A4-a或其溶剂化物、或化合物A4-b或其水合物、或化合物A4)；和
治疗有效量的DHODH抑制剂，其为化合物22或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、同位素变体或N-氧化物(例如，6-(4-乙基-3-(羟甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基)-7-氟-4-异丙基-2-(邻甲苯基)异喹啉-1(2H)-酮)；
例如，其中该多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂和DHODH抑制剂根据其给药方案施用一段时间，例如(i)在一段时间内(例如，21天时间段、或28天时间段、或3个月时间段、或6个月时间段、或一年时间段等)的同一天同时或以任一顺序依次施用，和/或(ii)在一段时间内的不同天施用。
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物每日施用于受试者。
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物每日施用于受试者，持续至少7天。
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将至少一种其他治疗剂每日施用于受试者。
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将至少一种其他治疗剂每日施用于受试者，持续至少7天。
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将至少一种其他治疗剂每日施用于受试者。
本发明的另一个实施方案涉及如本文所述的方法，其中将至少一种其他治疗剂每日施用于受试者，持续至少21天。
待施用的本文所述的治疗性化合物中的任一种的最佳剂量可容易确定，并且将随所使用的具体化合物、施用模式、制剂强度以及疾病、综合征、病症或障碍的进程而变化。此外，与待治疗的具体受试者相关的因素(包括受试者性别、年龄、体重、饮食和施用时间)将导致需要调整剂量以实现适当的治疗水平和所需的疗效。
因此，上述剂量为一般情况的示例。当然，可能会存在其中较高或较低剂量范围是有益的个别情况，并且这类情况也在本发明的范围内。
每当将本文所述的治疗性化合物的使用施用于有需要的受试者时，本文所述的治疗性化合物可以上述组合物和剂量方案中的任一者施用，或者借助于本领域已确立的那些组合物和剂量方案施用。
本文所述的治疗性化合物可同时或依次施用于受试者。当依次施用时，可首先施用式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂。当同时施用时，该组合可以在相同或不同的药物组合物中施用。例如，可在施用至少一种其他治疗剂之前、同时或之后施用式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂。同样地，可在施用另一种治疗剂之前、同时或之后施用至少一种其他治疗剂。辅助疗法(即其中一种或两种药剂用作主要治疗并且另一种药剂用于辅助该主要治疗)也是本发明的实施方案。
本发明的一个实施方案涉及与治疗有效量的至少一种其他治疗剂组合使用的治疗有效量的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂，其包括如在任何实施方案中所提及的式(I)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中至少一种其他治疗剂是低甲基化剂、胞苷脱氨酶抑制剂、DNA嵌入剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、激酶抑制剂、CD20抑制剂、异柠檬酸脱氢酶抑制剂、免疫调节剂或二氢乳清酸脱氢酶抑制剂。在某些实施方案中，上述治疗有效量以分开的剂型施用，用于在治疗已经被诊断患有造血功能障碍的受试者中使用。
本发明的一个实施方案涉及药物产品，其包括如在任何实施方案中所提及的式(I)的多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，以及至少一种其他治疗剂，该至少一种其他治疗剂是低甲基化剂、胞苷脱氨酶抑制剂、DNA嵌入剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、激酶抑制剂、CD20抑制剂、异柠檬酸脱氢酶抑制剂、免疫调节剂或二氢乳清酸脱氢酶抑制剂，作为组合制剂用于同时、单独或依次用于治疗已被诊断患有造血功能障碍的受试者。
提供以下实施例以说明本公开中描述的一些概念。虽然实施例被认为是提供实施方案，但其不应被认为限制本文所述的更一般的实施方案。
实施例
通用合成方案
阿扎胞苷
阿扎胞苷是可商购获得的。
式I的化合物
在该部分中，如在所有其他部分中，除非上下文另外指示，否则对式(I)的提及还包括如本文所定义的所有其他子组和其示例。
式(I)的化合物的一些典型实施例的一般性制备描述于下文和具体实施例中，并且通常由可商购获得或通过有机化学领域技术人员常用的标准合成方法制备的起始材料制备。下面的方案仅意在代表本发明的示例，而绝无意于限制本发明。
另选地，式(I)的化合物还可通过如下文通用方案中所述的类似反应方案与本领域技术人员常用的标准合成方法结合来制备。
技术人员将认识到，在方案中描述的反应中，尽管这并不总是明确示出的，但可能需要保护最终产物中期望的反应性官能团(例如羟基、氨基或羧基基团)，以避免它们不期望地参与反应。通常，可根据标准实践使用常规保护基团(PG)。可使用本领域已知的方法在方便的后续阶段去除保护基团。
技术人员将认识到，在方案中所描述的反应中，在惰性气氛下，例如在N
对于技术人员显而易见的是，可能需要在反应后处理之前冷却反应混合物(是指分离和纯化化学反应的产物所需的一系列操作，例如淬灭、柱色谱法、萃取)。
技术人员将认识到，在搅拌下加热反应混合物可增强反应结果。在一些反应中，可使用微波加热代替常规加热来缩短总反应时间。
技术人员将认识到，下文方案中所示的化学反应的另一顺序也可产生所需的式(I)的化合物。
技术人员将认识到，下文方案中所示的中间体和最终化合物可根据本领域技术人员熟知的方法进一步官能化。本文所述的中间体和化合物可以游离形式或作为其盐或溶剂化物分离。本文所述的中间体和化合物可以互变异构体和立体异构形式的混合物的形式合成，所述互变异构体和立体异构形式可按照本领域已知的拆分方法彼此分离。
在式(I)的通用方案中使用的所有缩写如下表1B中的部分实施例中所定义。变量如范围中所定义或如通用方案中所具体定义。
部分A)方案1a、1b、1c、2a、2b和3
在方案1a、1b和1c中，应用以下反应条件：
步骤1：在合适的温度(例如-70℃)下，在合适的碱(例如TMEDA)和合适的有机金属试剂(例如异丙基溴化镁)的存在下，在合适的溶剂(例如THF)中；
步骤2：在合适的温度(例如0℃至室温)下，在合适的氧化试剂(例如DMP)的存在下，在合适的溶剂(例如DCM)中；
步骤3：在合适的温度(例如-20℃至室温)下，在合适的有机金属试剂(例如异丙基溴化镁)的存在下，在合适的溶剂(例如THF)中；
步骤4：在合适的温度(例如80℃)下，在合适的碱(例如NaOH)的存在下，在合适的溶剂(例如THF和H
步骤5：在合适的温度(例如室温)下，在合适的酰胺缩合试剂(例如EDCI和HOBt)的存在下，在合适的碱(例如NMM)的存在下，在合适的溶剂(例如DCM)中；
步骤6：在合适的温度(例如-70℃)下，在合适的有机金属试剂(例如异丙基锂)的存在下，在合适的溶剂(例如THF)中；
步骤7：在合适的温度(例如90℃)下，在合适的有机金属催化剂(例如Pd(dppf)Cl
步骤8：在合适的温度(例如0℃至室温)下，在合适的路易斯酸(例如BBr
步骤9：在合适的温度(例如-78℃至40℃，特别是0℃至室温)下，在合适的碱(例如TEA、DBU或K
/>
在方案2a和2b中，应用以下反应条件：
步骤9：参见方案1中的步骤9；
步骤10：在合适的温度(例如室温)下，在合适的催化剂(例如Pd/C)的存在下，在合适的还原试剂(例如H
步骤11：对于N脱保护，在合适的温度(例如室温)下，在合适的酸(例如TFA)的存在下，在合适的溶剂(例如DCM)中；对于O脱保护，在合适的温度(例如室温)下，在合适的酸(例如4-甲基苯磺酸)的存在下，在合适的溶剂(例如MeOH)中；
步骤12：在合适的温度(例如80℃)下，任选地在合适的路易斯酸(例如ZnCl
步骤13：在合适的温度(例如室温)下，在合适的有机金属催化剂(例如Ag(Phen)
步骤14：在合适的温度(例如室温)下，在合适的氯化试剂(例如草酰氯)的存在下，在DMF的存在下，在合适的溶剂(例如DCM)中；
方案3
在方案3中，应用以下反应条件：
步骤11-12：参见方案2中的步骤11-12；
步骤15：在合适的温度(例如80℃)下，在合适的碱(例如Cs
步骤16：在合适的温度(例如40℃)下，在合适的碱(例如氨)的存在下，在合适的溶剂(例如1,4-二氧杂环己烷)中。
部分B)方案4、5、6、7、8、9、10、11和12
在方案4中，应用以下反应条件：
步骤1：在合适的温度(例如90℃)下，在合适的有机金属催化剂(例如Pd(dppf)Cl
步骤2：在合适的温度(例如室温)下，在合适的酰胺缩合试剂(例如HATU)的存在下，在合适的碱(例如DIEA)的存在下，在合适的溶剂(例如DCM)中；
步骤3：在合适的温度(例如-78℃至室温)下，在合适的路易斯酸(例如BBr
步骤4：在合适的温度(例如-78℃至40℃，特别是0℃至室温)下，在合适的碱(例如TEA、DBU或K
步骤5：在合适的温度(例如室温)下，在合适的碱(例如LiOH×H
步骤6：在合适的温度(例如室温)下，在合适的有机金属催化剂(例如Ag(Phen)
步骤7：在合适的温度(例如室温)下，在合适的溴化试剂(诸如1,3-二溴-1,3,5-三嗪烷-2,4,6-三酮)的存在下，在2,2,2-三氟乙-1-醇作为溶剂的存在下。
在方案5中，应用以下反应条件：
步骤8：在合适的温度(例如-78℃至40℃，特别是0℃至室温)下，在合适的碱(例如TEA、DBU或K
步骤9：在合适的温度(例如-78℃至40℃，特别是0℃至室温)下，在合适的碱(例如TEA、DBU或K
步骤10：在合适的温度(例如室温)下，在合适的有机金属催化剂(例如Pd/C)和合适的碱(例如TEA)的存在下，在合适的溶剂(例如MeOH)中，在H
步骤11：当PG为Boc时，在合适的温度(例如室温)下，在合适的酸(例如TFA)的存在下，在合适的溶剂(例如DCM)中。
方案6
在方案6中，应用以下反应条件：
步骤12：还原胺化条件，在合适的温度(例如室温至80℃)下，在存在或不存在合适的路易斯酸(例如ZnCl
步骤13：在合适的温度(例如0℃)下，在合适的亲电子试剂(例如MsCl)的存在下，在合适的碱(例如TEA)的存在下，在合适的溶剂(例如DCM)中；
步骤14：在合适的温度(例如0℃至室温)下，在合适的氧化剂(例如DMP)的存在下，在合适的溶剂(例如DCM)中；
步骤15：在合适的温度(例如50℃)下，在合适的酸(例如HCl)的存在下，在合适的溶剂(例如ACN)中；
步骤16：在合适的温度(例如室温)下，在存在或不存在合适的碱(例如TEA)的情况下，在合适的溶剂(例如THF)中；
方案7
在方案7中，应用以下反应条件：
步骤11：当PG为Boc时，在合适的温度(例如室温)下，在合适的酸(例如TFA)的存在下，在合适的溶剂(例如DCM)中；
步骤12：还原胺化条件，在合适的温度(例如室温至80℃)下，在存在或不存在合适的路易斯酸(例如ZnCl
步骤17：在合适的温度(例如室温至80℃)下，在合适的碱(例如DIEA或Cs
步骤18：在合适的温度(例如40℃)下，在合适的碱(例如氨)的存在下，在合适的溶剂(诸如1,4-二氧杂环己烷)中。
方案8
在方案8中，应用以下反应条件：
步骤9：在合适的温度(例如-78℃至40℃，特别是0℃至室温)下，在合适的碱(例如TEA、DBU或K
步骤10：在合适的温度(例如室温)下，在合适的有机金属催化剂(例如Pd/C)的存在下，任选地在合适的碱(例如TEA)的存在下，在合适的溶剂(例如MeOH)中，在H
步骤19：在合适的温度(例如室温)下，在合适的氯化试剂(例如草酰氯)的存在下，在DMF的存在下，在合适的溶剂(例如DCM)中；
步骤20：在合适的温度(例如90℃)下，在合适的亲核胺的存在下，在合适的溶剂(例如EtOH)中；
步骤21：在合适的温度(例如室温)下，在合适的酸(例如HCl的二氧杂环己烷溶液)的存在下，在合适的溶剂(例如MeOH)中；
步骤22：在合适的温度(例如110℃)下，在合适的硼试剂(例如三甲基环三硼氧烷)的存在下，在合适的有机金属催化剂(例如四(三苯基膦)钯(0))的存在下，在合适的碱(例如K
方案9
在方案9中，应用以下反应条件：
步骤23：在合适的温度(例如-78℃至-25℃)下，在合适的碱(例如DIEA)的存在下，在合适的溶剂(例如THF)中；
步骤24：在合适的温度(例如在-65℃至-55℃之间)下，在合适的还原剂(例如DIBAL-H)的存在下，在合适的溶剂(例如甲苯)中，优选地在合适的流动化学系统中进行；
步骤25：首先在合适的温度(例如-10℃至10℃)下，在合适的碱(例如DMAP)的存在下，在合适的缩合剂(例如DCC)的存在下，在合适的溶剂(例如DCM)中；然后在合适的温度(例如-10℃至0℃)下，在合适的酸(例如AcOH)的存在下，在合适的还原剂(例如NaBH
步骤26：在合适的溶剂(例如甲苯)中并且加热至回流；
步骤27：在合适的温度(例如-5℃至5℃)下，在合适的还原剂(例如LiBH
步骤28：在合适的温度(例如15℃至25℃)下，在合适的还原剂(例如NaBH(OAc)
步骤29：在合适的温度(例如15℃至25℃)下，在合适的酸(例如HCl)的存在下，在合适的溶剂(例如IPA)中；
步骤30：在合适的温度(例如5℃至30℃)下，在合适的碱(例如TEA)的存在下，在合适的还原剂(例如NaBH(OAc)
步骤31：在合适的温度(例如50℃至55℃)下，在合适的碱(例如K
步骤32：当PG为Bn时，在合适的温度(例如-5℃至45℃)下，在合适的压力范围(例如0.27MPa至0.40MPa)内的氢气气氛下，在合适的催化剂(例如碳载氢氧化钯)的存在下，在合适的酸(例如MSA)的存在下，在合适的溶剂(诸如EtOH)中；
步骤33：在合适的温度(例如-50℃至-40℃)下，在合适的碱(例如TEA)的存在下，在合适的溶剂(诸如2-甲基四氢呋喃)中；
步骤34：在合适的温度(例如20℃至30℃)下，在合适的碱(例如TMG)的存在下，在合适的溶剂(诸如2-甲基四氢呋喃)中；
步骤35：在合适的温度(例如20℃至30℃)下，在合适的压力范围(例如0.20Mpa至0.30Mpa)内的氢气气氛下，在合适的催化剂(例如碳载钯)的存在下，在合适的溶剂(诸如MeOH)中；
另选地，在合适的温度(诸如室温)下，在合适的催化剂(例如1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物)、合适的还原剂(诸如硼氢化钠)、合适的碱(例如N,N,N',N'-四甲基乙二胺)的存在下，在合适的溶剂(例如四氢呋喃)中。
方案10
通常，可根据以下反应方案10制备式(I)的化合物，其中Y
方案10
在方案10中，应用以下反应条件：
步骤36：在60℃至100℃范围内的合适温度处，在合适的催化剂诸如乙酸钯(Pd(OAc)
技术人员将认识到，从化合物(Ia)开始，可进行如方案5中的步骤10和方案8中的步骤20、21和22中所报道的类似化学。
方案11
通常，可根据以下反应方案11制备式(I)的化合物，其中Y
在方案11中，应用以下反应条件：
步骤37：在80℃至200℃范围内的合适温度处，在合适的催化剂诸如乙酸钯(Pd(OAc)
技术人员将认识到，从化合物(Ib)开始，可进行如方案5中的步骤10和方案8中的步骤20、21和22中所报道的类似化学。
在方案12中，应用以下反应条件：
步骤38：在合适的温度(例如室温至80℃)下，在合适的碱(例如DIEA、Cs
另选地，在合适的温度(例如室温至100℃处，在合适的催化剂(例如Pd
技术人员将认识到，从中间体Z开始，可进行如在Y
应当理解，在存在合适的官能团的情况下，各种式的化合物或在其制备中使用的任何中间体可通过采用缩合、取代、氧化、还原或裂解反应的一种或多种标准合成方法进一步衍生化。特定的取代方法包括常规的烷基化、芳基化、杂芳基化、酰化、磺酰化、卤化、硝化、甲酰化和偶联程序。
式(I)的化合物可以对映体的外消旋混合物的形式合成，所述混合物可按照本领域已知的拆分方法彼此分离。含有碱性氮原子的式(I)的外消旋化合物可通过与合适的手性酸反应转化成对应的非对映体盐形式。随后例如通过选择性或分级结晶分离所述非对映体盐形式，并且通过碱从其中释放对映体。分离式(I)的化合物的对映体形式的替代方式涉及使用手性固定相的液相色谱法。所述纯立体化学异构体形式还可衍生自适当起始物质的对应纯立体化学异构体形式，前提条件是反应立体特异性地发生。
在式(I)的化合物的制备中，可能需要保护中间体的末端官能团(例如，伯胺或仲胺)。对这种保护的需要将根据末端官能团的性质和制备方法的条件而变化。合适的氨基保护基团(NH-Pg)包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧基羰基(Boc)、苄氧羰基(CBz)和9-芴基-亚甲氧羰基(Fmoc)。本领域技术人员容易地确定对这种保护的需要。对于保护基团和其用途的一般描述，参见T.W.Greene and P.G.M.Wuts,Protective Groups in OrganicSynthesis,第4版,Wiley,Hoboken,New Jersey,2007。
在以下实施例中说明用于制备式(I)的化合物的几种方法。除非另有说明，否则所有起始材料均可购自商业供应商并且无需进一步纯化即可使用，或另选地可由技术人员通过使用熟知的方法来合成。
表1B-缩写
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如本领域技术人员所理解的，使用所示方案合成的化合物可作为溶剂化物(例如，水合物)存在并且/或者含有残余溶剂或少量杂质。作为盐形式分离的化合物或中间体可以是整数化学计量的(integer stoichiometric)，即单盐或二盐，或者是中间体化学计量的(intermediate stoichiometry)。当以下实验部分中的中间体或化合物表示为“HCl盐”而没有表示HCl的当量数时，这意味着没有确定HCl的当量数。相同的原理也将适用于在实验部分中提及的所有其他盐形式，例如“草酸盐”、“甲酸盐”或
技术人员将认识到，即使在以下实验方案中未明确提及的情况下，通常在柱色谱法纯化之后，收集所需的级分并且蒸发溶剂。
在未指示立体化学的情况下，这意味着其是立体异构体的混合物，除非另外指明或从上下文中是清楚的。
除非另外指明，否则当用‘RS’表示立构中心时，这意味着在指定的中心获得外消旋混合物。
实施例1-(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨
中间体1-(5-甲基-4-氧代己基)氨基甲酸叔丁酯的制备
向冷却至-70℃的2-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(5.0g，27mmol)和TMEDA(5.0mL，33mmol)在THF(60mL)中的溶液中缓慢添加异丙基溴化镁溶液(19mL，55mmol，2.9M在2-甲基四氢呋喃中)，将所得混合物缓慢升温至室温并搅拌12小时。将混合物倒入饱和NH
中间体13-6-(3,6-二氯-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸叔
向在0℃冷却的3,5,6-三氯-1,2,4-三嗪(10.0g，54.2mmol)和TEA(15.2mL，109mmol)在DCM(100mL)中的溶液中添加2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸叔丁酯(9.21g，43.4mmol)，将混合物升温至室温并搅拌1小时。将混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na
中间体27-N-乙基-5-氟-N
向在0℃处冷却的5-氟-2-甲氧基苯甲酸(8.00g，47.0mmol)和N-乙基丙-2-胺(8.19g，94.0mmol)在无水DCM(150mL)中的混合物中缓慢地分批添加HATU(21.5g，56.5mmol)和DIEA(9.10g，70.4mmol)。将所得混合物缓慢升温至室温并搅拌8小时。将有机层用水(20mL×3)洗涤并经无水Na
中间体28-N-乙基-5-氟-2-羟基-N-异丙基苯甲酰胺的制备
向在-78℃处冷却的N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-甲氧基苯甲酰胺(中间体27)(12.0g，50.1mmol)在无水DCM(100mL)中的溶液中缓慢添加BBr
中间体28的替代制备
将5-氟-2-羟基-苯甲酸(14.0kg，89.68mol，1.0当量)在THF(168L，12体积)中的混合物调节至15℃-25℃，并且在1小时的时间段内添加1,1-羰基二咪唑(17.45kg，107.62mol，1.2当量)。添加后，将混合物在15℃-25℃处搅拌18小时。此后，在15℃-25℃处在2小时的时间段内将N-乙基丙-2-胺(14.85kg，170.39mol，1.9当量)添加到混合物中。将所得的混合物在15℃-25℃处进一步陈化18小时至24小时之间。将pH用10％ H
中间体14-6-(3-氯-6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三
/>
将6-(3,6-二氯-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸叔丁酯(中间体13)(12.0g，33.3mmol)、N-乙基-5-氟-2-羟基-N-异丙基苯甲酰胺(中间体28)(7.5g，33.3mmol)和DBU(6.1g，40.1mmol)在THF(120mL)中的混合物在25℃处搅拌8小时。将混合物用水(30mL)稀释并用DCM(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na
中间体2-6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟-苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-
中间体2的合成方法A
在N
中间体2的合成方法
向6-(3-氯-6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸叔丁酯(中间体14)(22.0g，40.1mmol)、TEA(15mL)在MeOH(100mL)中的溶液中添加Pd/C(湿的，5.0g，10％)。将所得混合物在H
中间体3-2-((5-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-N-乙
向6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸叔丁酯(中间体2)(300mg，0.583mmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加TFA(0.5mL，6.4mmol)，将所得混合物在室温下搅拌3小时。然后将10％ NaOH(5mL)溶液缓慢添加到混合物中以调节pH值至约12，将所得混合物用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层经无水Na
化合物61-(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-
将2-((5-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-N-乙基-5-氟-N-异丙基苯甲酰胺(中间体3)(1.0g，2.4mmol)、(5-甲基-4-氧代己基)氨基甲酸叔丁酯(中间体1)(830mg，3.62mmol)和ZnCl
化合物62和63-(R)-(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,
(4-6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基氨基甲酸叔丁酯(化合物61)(200mg，0.319mmol)通过SFC在DAICEL CHIRALPAK IG(柱：250×30mm10um；等度洗脱：EtOH(含有0.1％的25％氨):超临界CO
化合物64-(R)-2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-
向(R)-(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸叔丁酯(化合物62)(550mg，0.876mmol)在DCM(4mL)中的溶液中缓慢添加TFA(4mL)，并将所得混合物在25℃处搅拌1小时。将反应混合物减压浓缩得到残余物。将残余物在DCM(40mL)中稀释，并将pH值通过NaOH(2M，16mL)水溶液调节至约12。将水层用DCM(10mL×2)萃取。将合并的有机层经无水Na
化合物11-(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-
将(R)-2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-N-乙基-5-氟-N-异丙基苯甲酰胺(化合物64)(120mg，粗制物)、1-溴-2-甲氧基乙烷(32mg，0.23mmol)、Cs
LC-MS(ESI)(方法1):R
化合物A-(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨
将(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(化合物11)(40.0mg，0.068mmol)、甲醛(55.4mg，0.683mol，37％的水溶液)和AcOH(8.2mg，0.137mmol)在无水MeOH(2mL)中的混合物在45℃处搅拌1小时。然后，向混合物中添加NaBH
实施例2-(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨
中间体7-4-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)丁酸的制备
向4-(甲基氨基)丁酸盐酸盐(3.0g，19.5mmol)和TEA(7.78mL，58.6mmol)在MeOH(30mL)中的溶液中滴加Boc
中间体8-(4-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备
向4-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)丁酸(中间体7)(1.80g，粗制物)在CHCl
中间体9-甲基(5-甲基-4-氧代己基)氨基甲酸叔丁酯的制备
向在N
化合物60-(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-
向2-((5-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-N-乙基-5-氟-N-异丙基苯甲酰胺(中间体3)(600mg，1.45mmol)和甲基(5-甲基-4-氧代己基)氨基甲酸叔丁酯(中间体9)(330mg，1.37mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中添加ZnCl
化合物67-
向(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物60)(1g，1.56mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加4M HCl的二氧杂环己烷溶液(5mL，20mmol)，将所得混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物真空浓缩，以提供标题化合物(960mg，粗制物，HCl盐)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步骤。
化合物A-(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨
向N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(甲基氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺盐酸盐(化合物67)(480mg，粗制物)、K
首先将N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(化合物68)(960mg，由通过方法B获得的几个批次合并)通过SFC使用DAICEL CHIRALPAK IG(柱：250×30mm 10um；流动相：A：超临界CO
1
LCMS(ESI)(方法2)：R
SFC(方法11):R
实施例3-(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨
中间体227-(R)-(1-(2,2-二甲基-4,6-二氧代-1,3-二氧杂环己烷-5-基)-3-甲基
将在-10℃至0℃处预冷的Boc-L-缬氨酸(44.9kg)、2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-4,6-二酮(32.9kg)和DMAP(35.5kg)的DCM(607kg)溶液在3小时内添加到DCC(55.5kg)的DCM(613kg)溶液中，并在-10℃至0℃处陈化16小时。添加10％柠檬酸水溶液(449kg)，同时保持温度低于10℃。所得浆液在0℃至10℃处陈化2小时，然后过滤。将滤饼用DCM(91kg)洗涤。分离滤液，并且用10％柠檬酸水溶液(两次，450kg)和10％ NaCl水溶液(449kg)洗涤有机层。向有机相(1200kg)中添加乙酸(75.0kg)，同时保持温度在-10℃至0℃之间。在5小时内分批添加硼氢化钠(18.0kg)，同时保持温度在-10℃至0℃的范围内，然后将所得混合物在-10℃至0℃处再陈化16小时。将混合物升温至15℃至25℃，并陈化2小时。然后将混合物用14％ NaCl水溶液(450kg)洗涤，接着用14％ NaCl水溶液(432kg)进行第二次洗涤，最后用水洗涤(444kg)。将有机相减压浓缩至2-4个体积。向残余物中添加异丙醇(143kg)并减压浓缩至4-5个体积。在冷却至-10℃至0℃并老化8小时之后，过滤所得浆液，用IPA(38kg)洗涤并干燥，以提供白色固体状标题中间体(46.7kg，69％收率)。
中间体228-(R)-2-异丙基-5-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
将(R)-(1-(2,2-二甲基-4,6-二氧代-1,3-二氧杂环己烷-5-基)-3-甲基丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体227)(46.7kg)的甲苯(333kg)溶液加热至回流并陈化4小时。将混合物冷却至环境温度，过滤并用甲苯(20kg)洗涤。将合并的滤液减压浓缩至干，提供油状所需化合物(31.05kg，96％收率)，其无需进一步纯化即可直接使用。
中间体229-(5R)-2-羟基-5-异丙基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
将(R)-2-异丙基-5-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(中间体228)(30.9kg)的2-MeTHF(26.7kg)溶液冷却至-5℃至5℃。在3小时内添加LiBH
中间体230-(R)-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)氨基甲酸叔
在15℃至25℃处，用2-甲氧基-N-甲基乙-1-胺(12.3kg，138.0mol)处理(5R)-2-羟基-5-异丙基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(中间体229)(28.55kg)的DCM(344kg)溶液，并将所得混合物陈化1小时。在5小时内分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(40.12kg)，同时保持温度在15℃至25℃之间，并将所得混合物陈化48小时。通过在2小时内添加8％ NaOH水溶液(184kg)猝灭反应混合物，同时保持温度在15℃至25℃之间，并将混合物再陈化2小时。分离水层，并用水(169kg)洗涤有机层。然后将有机层减压浓缩至干，以提供油状标题中间体(33.26kg，88％收率)，其无需进一步纯化即可直接使用。
中间体231-(R)-N
在3小时内，在环境温度处，向在异丙醇(84.80kg)中的4摩尔HCl溶液中添加(R)-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体230)(32.38kg)在异丙醇(25.6kg)中的溶液，并且将混合物在环境温度处再陈化19小时。然后在1小时内添加甲基叔丁基醚(95.25kg)并将混合物陈化2.5小时。将所得浆液过滤并用MTBE(53kg)洗涤。将滤饼干燥，提供白色固体状标题化合物(23.92kg，81％收率)。
中间体232-1-苄基-3-(氯甲基)吡咯烷-3-甲酸乙酯的制备
向冷却至-35℃至-25℃的DIPEA(952g，1.1当量)在THF(6L)中的溶液中添加正BuLi(2.33kg，2.5M在己烷中，1.0当量)，同时保持温度低于-25℃。将所得混合物在-35℃至-25℃处再陈化30分钟，然后冷却至-78℃至-60℃之间的温度。在-78℃至-60℃处添加1-苄基吡咯烷-3-甲酸乙酯(2kg，1.0当量)在THF(2L)中的溶液并且再搅拌30分钟。然后在-78℃至-60℃处填装氯碘甲烷(1.81kg，1.2当量)。将反应混合物在-60℃至-40℃处陈化2小时。在0℃至10℃之间的温度处将该反应混合物添加到柠檬酸水溶液(660g在6L H
中间体233-1-苄基-3-(氯甲基)吡咯烷-3-甲醛的制备
在流动化学系统中进行的反应：将1-苄基-3-(氯甲基)吡咯烷-3-甲酸乙酯(中间体232)(4.4kg)在甲苯(26L)中的溶液以26.7mL/min泵送并冷却至-60℃。冷却后，然后将其与DIBAL-H(28.1mol)在-60℃处的甲苯(28L)中的冷却溶液混合，泵送速率为32.1mL/min。使混合物通过在-60℃处的全氟烷氧基(PFA)盘管反应器(总流速为58.8mL/min，停留时间为5秒)。将所得混合物与以15.2mL/min的速率泵送的冷却的MeOH(-60℃)混合。将该混合溶液在-60℃处泵送到另一个PFA盘管反应器中(总流速为74mL/min，停留时间为5秒)。将所得混合物收集到含有20重量％的罗谢耳盐(Rochelle’s salt)(20V)水溶液的接受器中。分离各层并将有机相用水(2×44L)洗涤两次。将有机相与以类似方式制备的另一个3.0kg批次合并，并减压浓缩以提供20.8kg所需化合物的甲苯溶液(通过HPLC测定为25.5重量％，得到85％的测定收率)，其无需进一步纯化即可直接使用。
1
中间体234-(R)-4-(6-苄基-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-N-(2-甲氧基乙基)-N,
在20℃至30℃处，向用甲苯(30L)和(R)-N
将所得混合物升温至50℃至55℃并陈化3小时。然后将反应混合物冷却至环境温度并与另外两个批次(2.4kg+3.0kg)合并。将合并的料流用甲基叔丁基醚洗涤三次(3×40L)。向所得水层中添加另外的甲基叔丁基醚(83L)，并将水相使用8重量％NaOH水溶液碱化至pH 9-10，同时将温度保持在15℃至35℃之间。分离水层并将有机层用水(3×30L)洗涤三次。然后将有机层减压浓缩至大约3个体积，然后用甲醇冲洗三次(3×30L)并浓缩至干，以提供浅黄色油状的所需中间体(12.4kg，90％分离收率)，其无需进一步纯化即可直接使用。
中间体234a(中间体234的柠檬酸盐)的制备
将EtOH(80ml)和中间体234(20g)添加到圆底烧瓶中。接着，在室温下将0.5M柠檬酸的EtOH溶液(100ml；1当量)添加到圆底烧瓶的混合物中。随后，将混合物蒸发至干(Rotavap，40℃)。向残余物中添加乙腈(200ml)，并将混合物蒸发至干(Rotavap，40℃)。向残余物中添加乙腈(100ml)，并在室温下在磁加热板上搅拌过夜。最后，过滤出中间体234a，并在室温下干燥。
中间体234的柠檬酸盐的结晶形式(中间体234b)的制备
在室温下将中间体234a(3.72g)添加到乙腈(20ml)中并搅拌混合物。将混合物加热至60℃，直到反应混合物变得均匀(约10分钟)。接着，将混合物以0.5℃/min的速率冷却至50℃。接着，添加晶种(19mg中间体234a；0.5w/w％)，并在3小时30分钟期间将混合物在搅拌的同时陈化。接着，以2,3的指数将混合物经8小时非线性冷却至20℃。将所得混合物搅拌过夜，并过滤出产物并干燥(在通风橱中在室温下过夜)。在分离后，获得中间体234b(2.75g；收率73.9％)，作为中间体234的柠檬酸盐的结晶形式。所获得的中间体/柠檬酸的比率为3/2(NMR)。
根据下面的公式进行上文所提及的非线性冷却：
在限定的冷却持续时间期间每30秒开始一次新的线性斜坡。根据以下公式计算斜坡：
T
T
T
t
持续时间：限定的冷却持续时间
n：指数
1
中间体224-(R)-N-(2-甲氧基乙基)-N,5-二甲基-4-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-
向冷却至-5℃至5℃的在EtOH(1.47kg)中的碳载氢氧化钯(1.2kg)中添加甲磺酸(MSA)(11kg)、(R)-4-(6-苄基-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基-N-(2-甲氧基乙基)-N,5-二甲基己-1-胺(中间体234)(10kg)和EtOH(250L)。将混合物升温至35℃-45℃，并在氢气气氛(0.27MPa至0.40MPa)下搅拌16小时-20小时。将混合物经硅藻土(20kg)过滤，并用EtOH(24L)洗涤垫。将滤液减压(<40℃)浓缩至2-3个体积，然后用2-MeTHF(73kg和47kg)冲洗两次，得到2-3个体积的溶液。用2-MeTHF(65kg)稀释之后，添加10％硫酸钠水溶液(30kg)并将混合物冷却到0℃至10℃，随后添加16％NaOH水溶液(50kg)将pH调节至13-14。将温度调节至15℃至25℃并搅拌30分钟至60分钟。分离水层并用2-MeTHF(47kg×2)萃取两次。将合并的有机层减压浓缩(<40℃)至3-4个体积，并添加2-MeTHF(950g)。在减压浓缩(<40℃)至3-4个体积之后，将所得溶液用2-MeTHF(30kg)稀释，通过4A分子筛(25kg)干燥，并用2-MeTHF(30kg)洗涤。浓缩最终溶液，以提供油状的所需化合物(6.7kg)，测定纯度为90.1％，校正收率为79％。
中间体225-(R)-4-(6-(3,6-二氯-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-
向(R)-N-(2-甲氧基乙基)-N,5-二甲基-4-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)己-1-胺(中间体224)(100g)中添加2-MeTHF(430g)和TEA(68g)，并将混合物冷却至-50℃至-40℃。添加在2-MeTHF(172g)中的3,5,6-三氯-1,2,4-三嗪(62g)并将混合物搅拌1小时至3小时。将所得混合物升温至-20℃至-10℃并添加7％ NaHCO
化合物393-(R)-2-((3-氯-5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-
化合物393的合成方法A
将N-乙基-5-氟-2-羟基-N-异丙基苯甲酰胺(中间体28)(1.10g，4.88mmol)、(R)-4-(6-(3,6-二氯-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-N-(2-甲氧基乙基)-N,5-二甲基己-1-胺(中间体225)(1.70g，3.82mmol)和DBU(750mg，4.93mmol)在无水THF(15mL)中的混合物在40℃处搅拌8小时。在冷却至室温之后，将混合物减压浓缩，将所得残余物用DCM(60mL)稀释并用H
化合物393的合成方法A
在20℃至30℃处，向(R)-4-(6-(3,6-二氯-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-N-(2-甲氧基乙基)-N,5-二甲基己-1-胺(中间体225)的2-MeTHF溶液(676g在2-MeTHF中的14.8重量％溶液，校正的100g中间体225)和N-乙基-5-氟-2-羟基-N-异丙基苯甲酰胺(中间体28)(50.6g)的2-MeTHF(40g)溶液中添加四甲基胍(31g)，并将混合物搅拌40小时至48小时。添加7％ NaHCO
化合物A-(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨
将(R-2-((3-氯-5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-N-乙基-5-氟-N-异丙基苯甲酰胺(化合物393)(163.93g在MeOH中的60.1重量％溶液，校正的100g化合物393)、碳载钯(10g)和MeOH(316g)的甲醇溶液在20℃至30℃处在氢气气氛(0.20Mpa至0.30Mpa)下搅拌18小时。将混合物经硅藻土(75g)过滤，并将滤饼用MeOH(158g)洗涤。将滤液减压浓缩(
实施例4-(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨
向(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(化合物A)(270mg，0.450mmol)在20mL ACN(20mL)中的溶液中添加草酸(81.0mg，0.900mmol)。添加后，将反应混合物在室温下搅拌1小时。然后将反应混合物浓缩，将残余物再溶解于ACN和去离子水中，并冻干以提供白色固体状的标题化合物(350mg)。
1
1
LCMS(ESI)(方法2)：R
实施例5
在20℃至25℃处，向化合物A在IPAc(360g)中的溶液(207.90g在IPAc中的48重量％溶液，100g活性化合物A)中添加EtOH(63g)。然后在约15分钟内用在EtOH(49.5g)中的浓HCl(32.9g)处理该溶液。用结晶化合物A1晶种(2g，2％晶种载量)接种混合物，然后陈化18小时。在20℃至25℃之间的温度处在4小时内缓慢添加IPAc(870g)，并将浆液再搅拌18小时。在冷却至约5℃之后，过滤产物，用IPAc(522g)洗涤，并在20℃-30℃处真空干燥，以提供白色固体状的弱结晶化合物A1(91.0％收率，115.4g)。(注：在反应中使用的少量晶种材料通过类似的反应方案以小规模获得。)
重结晶：将弱结晶化合物A1(100g)、EtOH(166g)、纯净水(21.5g)和IPAc(178g)的溶液在20℃至30℃处搅拌0.5小时-2小时以得到澄清溶液。在1小时-2小时内滴加额外的IPAc(522g)，然后用结晶化合物A1晶种(2g，2％晶种载量)接种混合物。然后将混合物陈化18小时-20小时，在20℃至30℃之间的温度处在12小时内缓慢添加IPAc(348g)，并将浆液再搅拌55小时-60小时。过滤产物，用IPAc(158g)洗涤并在20℃-30℃处真空干燥，以提供白色固体状化合物A1(85％收率，85.0g，净值)。
1
LCMS(方法7):R
实施例6-(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨
/>
将43.06g苯磺酸(相对于游离碱化合物A的2当量)添加到840ml丙酮/水95/5v/v混合物中并溶解。添加192.8g化合物A的IPAc溶液(含有80g API)。将该物质溶解，得到澄清溶液。再添加80ml IPAc，并将温度调节至25℃。添加2％晶种，并将混合物在25℃处搅拌1小时。然后在8小时的时间段内添加28.8V(2312ml)的IPAc。此后，将悬浮液在25℃处搅拌18小时。将悬浮液过滤并用320ml丙酮/水/IPAc 23.75/1.75/75v/v/v的混合物洗涤。获得122.91g晶型A双苯磺酸盐水合物(未确定当量水)。
本领域技术人员将理解，在上述反应中使用的少量初始晶种材料可以经由类似的反应方案在不添加晶种的情况下以小规模获得并且等待自发成核。还在盐筛选实验期间获得苯磺酸盐的初始晶种。在这些实验中，将100mg游离碱称量到2mL小瓶中，然后添加200μL乙酸乙酯或丙酮以溶解游离碱。将1当量反离子(苯磺酸)添加到样品中，并将样品在25℃处搅拌3天。将所获得的悬浮液离心并产生初始晶种。
将适当量的(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺双苯磺酸盐水合物的晶型A溶解在氘代DMSO中并记录1D
使用装备有Bruker 5mm PA BBO 600S3 BB-H-D-05Z-GRD高分辨率探针并运行TOPSPIN 4.0软件的Bruker AVANCE NEO-600MHz NMR光谱仪在300K下对氘化DMSO中的样品收集1维质子实验。
1
实施例7-(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨
将异丙醇/水95/5的混合物(24ml)填装到烧瓶中并加热至40℃。添加苯磺酸(4.31g；98％)。随后，添加19.3g的化合物A在IPAc中的溶液(含有8g化合物A)。添加另外16ml的IPAc。添加2％晶种，并将混合物在40℃处搅拌1小时。然后在8小时的时间段内滴加IPAc(115.2ml)。接着，将混合物冷却至0℃持续15小时。过滤悬浮液，并将湿滤饼用(IPA/H
晶型A
(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲
在PANalytical Empyrean衍射仪上进行X射线粉末衍射(XRPD)分析。该仪器装备有Cu-KαX射线管，其使用分别用于入射光束和衍射光束的iCore和dCore调谐光学器件。使用反向装载技术将化合物装载到16mm样品架的空腔中。
使用以下方法在XRPD上运行样品：
管：Cu：K-Alpha
发生器：电压：45kV；电流：40mA
几何：Bragg-Brentano
扫描模式：连续扫描
扫描范围：3度至35度
步长：0.0131度
计数时间：30s
旋转器旋转时间：1秒
入射光束路径(iCore)
程序发散狭缝：自动
照射长度：10mm
索拉狭缝：0.03rad
掩模1：14mm
掩模2：6mm
宽度：7.7mm
衍射光束路径(dCore)
防散射狭缝：自动
照射长度：10mm
索拉狭缝：0.04rad
检测器：PIXcel3D-Medipix3 1x1
本领域技术人员将认识到,衍射图和峰位置通常基本上独立于所使用的衍射仪以及是否使用特定的校准方法。通常，峰位置可相差约±0.2°2θ或更小。每个特定衍射峰的强度(和相对强度)也可作为各种因素的函数而变化，包括但不限于粒度、取向、样品纯度等。
X射线粉末衍射图包含位于5.4、7.2、11.1、11.9和21.7°2θ±0.2°2θ处的峰。X射线粉末衍射图还可包含选自以下的至少一个峰：13.7、14.5、14.7、15.0、16.5、17.8、19.0、19.4、20.1°2θ±0.2°2θ。
晶型A的特征还可在于X射线粉末衍射图具有选自表2所鉴定的那些峰的四个、五个、六个、七个、八个、九个或更多个峰。
晶型A的特征还可在于X-射线粉末衍射图包含表2所指示的那些峰，其中所述峰的相对强度大于约2％，优选地大于约5％，更优选地大于约10％，更优选地大于约15％。然而，技术人员将认识到，峰的相对强度可以在不同样品之间和在相同样品上的不同测量值之间变化。
晶型A的特征还可在于X射线粉末衍射图基本上如图1所描绘。
表2提供了(R)-N-乙基-5-氟-N-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺双苯磺酸盐水合物BSA盐的XPRD的峰列表和相对强度(图1)。
表2
本文所述的化合物A4公开于PCT/CN2021/100466(2021年6月17日提交)中，出于所有目的将该专利全文以引用的方式并入本文。
分析方法
上述化合物或下表中的分析信息是通过使用下文所述的分析方法产生的。
NMR方法
使用Bruker Avance III 400光谱仪在环境温度(298.6K)下进行一些NMR实验，该光谱仪使用内部氘锁并且装备有具有z梯度的BBO 400MHz S1 5mm探头并且对于质子在400MHz下和对于碳在100MHz下操作。化学位移(δ)以百万分率(ppm)报告。J值以Hz表示。
使用Varian 400-MR光谱仪在环境温度(298.6K)下进行一些NMR实验，该光谱仪使用内部氘锁并且装备有具有z梯度的Varian 400 4NUC PFG探头并且对于质子在400MHz下和对于碳在100MHz下操作。化学位移(δ)以百万分率(ppm)报告。J值以Hz表示。
使用Varian 400-VNMRS光谱仪在环境温度(298.6K)下进行一些NMR实验，该光谱仪使用内部氘锁并且装备有具有z梯度的Varian 400ASW PFG探头并且对于质子在400MHz下和对于碳在100MHz下操作。化学位移(δ)以百万分率(ppm)报告。J值以Hz表示。
使用Bruker AVANCE III HD 300光谱仪在环境温度(298.6K)下进行一些NMR实验，该光谱仪使用内部氘锁并且装备有具有z梯度的PA BBO 300S1 BBF-H-D-05Z 5mm探头并且对于质子在300MHz下和对于碳在75MHz下操作。化学位移(d)以百万分率(ppm)报告。J值以Hz表示。
LCMS(液相色谱/质谱)
一般程序
高效液相色谱(HPLC)测量使用LC泵、二极管阵列(DAD)或UV检测器和如相应方法中所规定的柱来进行。HPLC细节提供于下表3中。如果需要，包括另外的检测器(参见下面表3和表4)。
将来自柱的流送入配置有大气压离子源的质谱仪(MS)。设置调整参数(例如，扫描范围、驻留时间……)以便获得允许识别化合物的标称单同位素分子量(MW)的离子在技术人员的知识范围内。用适当的软件进行数据采集。
通过实验保留时间(R
在下文中，“SQD”是指单四极检测器，“室温”是指室温，“BEH”是指桥接乙基硅氧烷/二氧化硅混合物，“HSS”是指高强度二氧化硅，“DAD”是指二极管阵列检测器。
表3-LCMS方法代码
流速以mL/分钟表示；柱温(T)以℃计；运行时间以分钟计
分析SFC
SFC方法的一般程序
SFC测量使用分析超临界流体色谱(SFC)系统进行，该系统由用于递送二氧化碳(CO
表4-分析型SFC细节
流速以mL/分钟表示；柱温(T)以℃计；运行时间以分钟计，背压(BPR)以巴或磅力/平方英寸(psi)计。“ACN”意指乙腈；“MeOH”意指甲醇；“EtOH”意指乙醇；“DEA”意指二乙胺。上面表4中使用的所有其他缩写如前面所定义。
药理学部分
1)多发性内分泌癌蛋白/MLL均相时间分辨荧光(HTRF)测定
向未经处理的白色384孔微量滴定板中添加40nL 200X测试化合物的DMSO溶液和4μL在测定缓冲液(40mM Tris·HCl，pH 7.5、50mM NaCl、1mM DTT(二硫苏糖醇)和0.05％Pluronic F-127)中的2X铽螯合物标记的多发性内分泌癌蛋白(关于制备，参见下文)。将测试化合物和铽螯合物标记的多发性内分泌癌蛋白在环境温度处温育30分钟之后，添加4μL在测定缓冲液中的2X FITC-MBM1肽(FITC-β-丙氨酸-SARWRFPARPGT-NH
通过首先根据等式1计算在每个化合物浓度下的抑制％来确定化合物效力：
抑制％＝((HC-LC)-(HTRF
其中LC和HC是在存在或不存在饱和浓度的与FITC-MBM1竞争结合多发性内分泌癌蛋白的化合物的情况下测定的HTRF值，并且HTRF
抑制％＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((logIC
多发性内分泌癌蛋白的铽穴状化合物标记的制备：如下用铽穴状化合物标记多发性内分泌癌蛋白(氨基酸1-610-6xhis标签，在20mM Hepes(2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙烷磺酸)、80mM NaCl、5mM DTT(二硫苏糖醇)(pH 7.5)中的2.3mg/mL)。将200μg的多发性内分泌癌蛋白缓冲液交换到1x Hepes缓冲液中。将6.67μM多发性内分泌癌蛋白与8倍摩尔过量的NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)-铽穴状化合物一起在室温下孵育40分钟。通过用洗脱缓冲液(0.1M Hepes(pH 7)+0.1％ BSA(牛血清白蛋白))在NAP5柱上进行反应，将一半标记的蛋白质从游离标记中纯化出来。另一半用0.1M磷酸盐缓冲盐水(PBS)(pH7)洗脱。每份收集400μl洗脱液，等分并冷冻在-80℃。铽标记的多发性内分泌癌蛋白的最终浓度分别为在Hepes缓冲液中115μg/mL和在PBS缓冲液中85μg/mL。
多发性内分泌癌蛋白的蛋白质序列(SEQ ID NO:1)：MGLKAAQKTLFPLRSIDDVVRLFAAELGREEPDLVLLSLVLGFVEHFLAVNRVIPTNVPELTFQPSPAPDPPGGLTYFPVADLSIIAALYARFTAQIRGAVDLSLYPREGGVSSRELVKKVSDVIWNSLSRSYFKDRAHIQSLFSFITGTKLDSSGVAFAVVGACQALGLRDVHLALSEDHAWVVFGPNGEQTAEVTWHGKGNEDRRGQTVNAGVAERSWLYLKGSYMRCDRKMEVAFMVCAINPSIDLHTDSLELLQLQQKLLWLLYDLGHLERYPMALGNLADLEELEPTPGRPDPLTLYHKGIASAKTYYRDEHIYPYMYLAGYHCRNRNVREALQAWADTATVIQDYNYCREDEEIYKEFFEVANDVIPNLLKEAASLLEAGEERPGEQSQGTQSQGSALQDPECFAHLLRFYDGICKWEEGSPTPVLHVGWATFLVQSLGRFEGQVRQKVRIVSREAEAAEAEEPWGEEAREGRRRGPRRESKPEEPPPPKKPALDKGLGTGQGAVSGPPRKPPGTVAGTARGPEGGSTAQVPAPAASPPPEGPVLTFQSEKMKGMKELLVATKINSSAIKLQLTAQSQVQMKKQKVSTPSDYTLSFLKRQRKGLHHHHHH
2a)增殖测定
在人白血病细胞系中评估多发性内分泌癌蛋白/MLL蛋白/蛋白质相互作用抑制剂测试化合物的抗增殖效果。细胞系MOLM-14具有MLL易位并分别表达MLL融合蛋白MLL-AF9以及来自第二等位基因的野生型蛋白质。还测试了携带NPM1c基因突变的OCI-AML3细胞。MLL重排的细胞系(例如，MOLM-14)和NPM1c突变的细胞系展现出干细胞样升高的HOXA/MEIS1基因表达标签。将KO-52用作含有两个MLL(KMT2A)野生型等位基因的对照细胞系，以便排除显示一般细胞毒性效果的化合物。
将MOLM-14细胞在补充有10％热灭活的胎牛血清(HyClone)、2mM L-谷氨酰胺(Sigma Aldrich)和50μg/ml庆大霉素(Gibco)的RPMI-1640(Sigma Aldrich)中培养。将KO-52和OCI-AML3细胞系在补充有20％热灭活的胎牛血清(HyClone)、2mM L-谷氨酰胺(SigmaAldrich)和50μg/ml庆大霉素(Gibco)的α-MEM(Sigma Aldrich)中增殖。在培养期间将细胞保持在30万-250万个细胞/ml，并且传代数不超过20。
为了评估抗增殖效果，将200个MOLM-14细胞、200个OCI-AML3细胞或300个KO-52细胞接种在96孔圆底超低附着板(Costar，目录号7007)中的200μl培养基/孔中。在整个实验中，基于生长曲线选择细胞接种数量以确保线性生长。添加不同浓度的测试化合物，并且将DMSO含量归一化至0.3％。将细胞在37℃和5％ CO
为了确定测试化合物随时间推移的效果，计算每个孔中的融合作为球状体尺寸的量度。最高剂量的参考化合物的融合用作LC(低对照)的基线，并且经DMSO处理的细胞的融合用作0％细胞毒性(高对照，HC)。
将绝对IC
LC＝低对照：用例如1μM的细胞毒素剂星形孢菌素处理的细胞，或例如用高浓度的另选参考化合物处理的细胞；
HC＝高对照：平均融合(％)(经DMSO处理的细胞)；
效果％＝100-(100*(样品-LC)/(HC-LC))；和
GraphPad Prism(第7.00版)用于计算IC
2b)MEIS1 mRNA表达测定
通过Quantigene Singleplex测定(Thermo Fisher Scientific)检查化合物处理后的MEIS1 mRNA表达。该技术允许使用与感兴趣的确定靶序列杂交的探针直接定量mRNA靶标，并且使用多模式(Multimode)平板读数器Envision(PerkinElmer)检测信号。将MOLM-14细胞系用于该实验。在递增浓度的化合物的存在下，将细胞以3,750个细胞/孔接种在96孔板中。在与化合物一起温育48小时之后，将细胞在裂解缓冲液中裂解并在55℃处温育45分钟。将细胞裂解物与作为归一化对照的人MEIS1特异性捕获探针或人RPL28(核糖体蛋白L28)特异性探针以及阻断探针混合。然后将细胞裂解物转移到定制测定杂交板(ThermoFisher Scientific)中，并在55℃处温育18小时至22小时。随后，洗涤平板以去除未结合的物质，随后依次添加预扩增物、扩增物和标记探针。用多模式平板读数器Envision测量信号(＝基因计数)。使用合适的软件通过剂量反应模型计算IC
结果汇总于下表5中。
表5-生物学数据-HTRF、增殖和MEIS1 mRNA表达测定
3)小鼠PK(体内T
在单次静脉内(IV，以2.5ml/kg施用0.5mg/kg或1.0mg/kg)或口服(PO，以10ml溶液/kg施用5mg/kg)给药在20％(重量:体积)HP-β-CD溶液中或在无热原水中配制的测试制品后在禁食雄性CD-1小鼠(6-8周龄)中评估体内药代动力学(PK)。
使用EDTA作为抗凝剂，通过连续毛细管微量取样(大约0.03mL)在期望的时间点从背侧跖骨静脉收集血浆和/或全血样品。使用合格的LC-MS/MS方法分析化合物在血浆和血液样品中的浓度。使用WinNonlin(PhoenixTM，6.1版)或类似软件进行主要药代动力学参数的计算机模拟分析。
4)在人/小鼠肝微粒体中的代谢稳定性
实验程序
本研究的目的是测量测试化合物在人和小鼠肝微粒体中的体外代谢稳定性并提供关于代谢更新的定量信息(即，测试化合物的表观固有清除率的确定)。
以在DMSO中10mM的储备浓度制备测试品。为了确定代谢更新，通过将2μL用于测试化合物或阳性对照化合物的10mM DMSO储备溶液添加到198μL乙腈(100μM最终浓度)中来制备最终工作溶液。
如下进行温育：首先，将肝微粒体在冰上解冻，并且制备在pH 7.4的100mM PBS(磷酸盐缓冲盐水)中的含有肝微粒体的主溶液。接着，将肝微粒体溶液添加到温育板中，并添加10mM NADPH(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐)(MW：833.4g/mol；Roche DiagnosticsGmbH，德国。溶解于磷酸盐缓冲液(100mmol/L，pH 7.4))中。将混合物混合10秒，并在37℃下在温育板中预热10分钟。通过将5μL用于测试化合物或阳性对照化合物的100μM工作溶液添加到温育板中(最终测试品浓度＝1μM)来起始代谢反应。反应最终混合物在pH 7.4的100mMPBS中应含有1mM NADPH、0.5mg/mL微粒体蛋白和1μM测试化合物或阳性对照化合物。在温育混合物中有机溶剂的百分比为1％，其中DMSO≤0.02％。
通过在选定的时间点将50μL温育混合物转移到含有200μL冷甲醇的猝灭板中来猝灭反应。在所有时间点取样之后，将猝灭板以4000rpm离心40分钟以沉淀蛋白质。将总共90μL的上清液转移到分析板中，并将超纯H
数据分析
所有计算均使用Microsoft Excel进行。通过母药剩余百分比的自然对数相对于温育时间曲线的线性回归确定斜率值k。结果汇总于下表6中。
从斜率值确定体外半衰期(体外t
体外t
使用以下等式将体外t
表6-小鼠PK和代谢稳定性
“NA”意指未分析
5)在MOLM-14或OCI-AML3细胞的皮下(sc或SC)异种移植物中的药效学(PD)活性方
测试剂和对照
将化合物A3配制在20％羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)中并制备成对于20g动物每剂量达到0.2mL(10mL/kg)的总体积。每天通过个体体重调整剂量。对于每项研究，每周一次制备化合物A3的工作储备液，并储存在室温下。每日口服(PO)施用化合物A3。
测定
在MOLM-14细胞或OCI-AML3细胞的皮下(SC)异种移植物中评价化合物的体内药效学(PD)活性。将具有MOLM-14或OCI-AML3肿瘤的裸NMRI小鼠(Crl:NMRI-Foxn1nu/-)用3个日剂量的媒介物或化合物进行治疗。在第2天给药后23小时、最后一次给药后0.5小时和最后一次给药后16小时收集血浆样品，并在最后一次给药后16小时收集肿瘤样品。为了检查化合物对多种多发性内分泌癌蛋白-KMT2A靶基因(例如，MEIS1、MEF2C、FLT3)表达的影响，使用QuantiGene Plex技术(Thermo Fisher Scientific)。将冷冻的肿瘤匀浆化并转移到在裂解缓冲液中的单个裂解基质管中，并在55℃处温育30分钟。将细胞裂解物与靶标特异性捕获探针、Luminex珠和封闭探针混合，转移到定制测定杂交板(Thermo FisherScientific)中并在54℃处温育18小时至22小时。随后，将板转移到磁性分离板上并洗涤以从珠上去除未结合的材料，随后进行预扩增物、扩增物和标记探针的顺序杂交以及后续的链霉亲和素-藻红蛋白结合。用Luminex FlexMap三维仪器测量来自珠的信号。对于所有非管家基因反应，对背景和相对表达进行校正的计数相等。对于每个样品，每个测试基因信号(减去背景)除以归一化基因信号(RPL19、RPL28、ATP6V1A：减去背景)。通过将经处理的样品的归一化值除以经DMSO处理的样品的归一化值来计算倍数变化。结果汇总于下面表7和表8中。
表7-所选基因从MOLM-14 SC模型的表达水平(相对于媒介物的％)(平均值和标准
表8-所选基因从OCI-AML3 SC模型的表达水平(相对于媒介物的％)(平均值和标
表7a和表8a显示了基于用新鲜肿瘤样品在优化条件下的重复实验的中值。
表7a-所选基因从MOLM-14 SC模型的表达水平(相对于媒介物的％)(中值和标准
表8a-所选基因从OCI-AML3 SC模型的表达水平(相对于媒介物的％)(中值和标准
6)在MOLM-14皮下模型中的功效研究
测试剂和对照
将化合物A3配制在20％羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)中并制备成对于20g动物每剂量达到0.2mL(10mL/kg)的总体积。每天通过个体体重调整剂量。对于每项研究，每周一次制备化合物A3的工作储备液，并储存在25℃处。
动物
当雌性NMRI裸小鼠(MOLM-14 SC)为大约6周至8周龄并且重量大约25g时使用它们。在实验使用之前，所有动物可从任何与运输相关的胁迫中适应并恢复最少7天。随意提供高压灭菌的水和经照射的食物，并且将动物保持在12小时光照和黑暗循环中。使用前对笼子、寝具和水瓶进行高压消毒，并且每周更换一次。进一步的细节在下表9中提供。
表9-组织培养和细胞注射试剂
肿瘤模型和细胞培养方法
将人AML MOLM-14细胞在37℃、5％ CO
使用1cc注射器和27号针头，每只小鼠在右胁腹接受在50％ Matrigel中的5×10
研究设计
每日口服(PO)施用化合物A3。
第0天是肿瘤细胞植入和研究开始的日子。
在肿瘤植入后第16天将携带SC MOLM-14肿瘤的小鼠随机化，并根据肿瘤体积将其分配到治疗组中(平均约130mm
动物监测
在整个研究中，将每只动物的SC肿瘤体积每周测量2次至3次或更多次。
计算
使用下式计算肿瘤体积：
肿瘤体积(mm
ΔTGI％被定义为治疗组和对照组的平均肿瘤负荷之间的差异，计算为ΔTGI％＝([(TV
治疗组和对照组的平均肿瘤体积计算如下：
TGI％＝((TV
肿瘤消退(TR)％(其经定量以反映与独立于对照组的基线相比肿瘤体积的治疗相关减小)计算如下：TR％＝(1-平均值(TV
数据分析
使用Prism软件(GraphPad第7或8版)对肿瘤体积作图。当每个组中剩余2/3或更多小鼠时，在研究的最后一天，与HPβCD媒介物治疗的对照相比，对于化合物A3治疗组评价大多数研究的统计显著性。当p≤0.05时，组之间的差异被认为是显著的。
使用R软件3.4.2版中的线性混合效应(LME)分析(使用Janssen's内部开发的Shiny应用4.0版)计算动物肿瘤体积的统计显著性，其中治疗和时间作为固定效应，并且动物作为随机效应。如果各条纵向反应轨线不是线性的，则进行对数变换。
来源于该模型的信息用于与对照组或在所有治疗组之间进行成对治疗比较。结果示于图2中。
7)使用Ca
方案
在96孔板中测试化合物。
在Cor.4U
另选地，主要在
阳性和阴性对照
媒介物对照：二甲亚砜(DMSO)。化合物在DMSO中的溶液或其溶剂(最终浓度为0.1％ DMSO；n＝8)。
测试制品和对照的制备
将测试化合物以1000倍预期浓度溶解于DMSO中。制备化合物“母板”，其含有1000倍最终浓度的测试化合物和阳性对照和阴性对照。在实验日，将这些储备溶液用补充有10mM HEPES(Gibco)的Tyrode(Sigma)稀释至2倍预期浓度(在圆底化合物板中)。测试溶液和媒介物对照中的最终DMSO浓度为0.1％。
细胞
从CDI(Ncardia，德国)获得hSC-CM(
称为
实验开始之前
在实验开始前至少一小时，用含有钙染料的台氏液(Tyrode solution)(参见下文)替换正常细胞培养基。
将Cal 520染料(AAT Bioquest)溶解在11ml补充有10mM HEPES的台氏液中并且在添加到细胞中之前加热至37℃。
将35μl细胞培养基从每个孔中取出，并用35μl预热的Cal 520染料溶液替换，并且将细胞板在37℃/5％ CO
实验
使用Cal520
荧光信号(Ca
将细胞板装载到FDSS/μCell中用于测试运行：测量Ca
T＝0：对照期(-5分钟至-1分钟)+化合物添加，随后3分钟。
T＝30：在添加化合物之后29分钟至34分钟测量
在化合物添加步骤期间，将100μl相应双浓缩测试溶液同时移液至每个孔中。
使用合适的软件(例如Notocord-Hem，4.3版)离线分析数据。
测量Ca
-搏动速率(BR)
-Ca
-CTD
在实验期期间还注意到各种“心律失常样”活性的存在。这些包括：
·“早期后除极”(EAD样)事件(被定义为“在瞬变初始峰值后的瞬变波形的额外小峰”)，
·“室性心动过速样”(VT样)事件(被定义为非常快的搏动速率)或
·“心室纤颤样”(VF样)事件(被定义为“具有不规则和不可测量的瞬时电位的小振幅快速率Ca
·细胞的“搏动停止”(没有观察到Ca
如果化合物诱导的钙瞬时信号变化不能被软件分析，则这些信号被鉴定为BQL(低于质量分析水平)。
数据分析
从FDSS-μCell测量的数据被复制用于离线分析，并且被分析并上载到SPEC-II(我们的操作管理系统)中用于进一步分析。收集施用化合物之前和之后的变量值并将其转移到Excel工作簿中。
所有值(实际单位和从基线值的变化百分比)表示为中值(最小值和最大值)。使用Wilcoxon-Mann-Whitney检验将在化合物组中观察到的相对于对应基线值(以实际单位计)的变化与溶剂对照组中的那些进行比较。进行具有邦费罗尼校正(Bonferronicorrection)的双尾检验用于多重性调整。由于与溶剂组相比各存在10个处理组，因此认为0.05/10(0.005)的α水平反映了与溶剂组的统计学显著差异。使用合适的软件(例如R软件3.5.2版)进行所有统计分析。
平板中hiPSC-CM的质量控制：
如果平板不满足以下标准，则将其淘汰：
-稳定的规则搏动
-振幅>500相对单位
-搏动速率介于每分钟25次与80次搏动之间
-介于300ms与800ms之间的CTD
在本研究中，平板中的hiPSC-CM满足上述标准。
这些参数与心律失常或搏动停止的发生率相结合用于使用加权评分方法计算潜在危险水平(基于Kopljar等人,Stem Cell Reports 2018.11,1365-1377)。通过基于CTD
没有危险：在媒介物效应水平内或小的非相关变化。
低危险：相关效应，但潜在地具有低的心脏无力(cardiac liabilities)风险。
高危险：相对高的心脏无力风险。
非常高危险：由于心律失常样事件(EAD)引起的非常高风险。
“危险评分”结果提供了对游离药物当量(因为没有血浆蛋白添加到孔中)下的潜在急性心脏药物诱导的效应的鉴定。危险鉴定的评估使用称为CTCM_Scoring_version 1的“评分参考书”进行(Kopljar等人,Stem Cell Reports 2018.11:1365-1377)，并且根据表10的以下颜色方案指示水平。
表10-危险鉴定图例的颜色方案
根据在HiPSc-CM中测量的Ca
结果
使用
阳性和阴性对照：在该测定中，阳性和阴性对照均具有预期的药理学作用。结果汇总于下面表11和表12中。
表11-化合物A3的危险评分
表12-化合物A1和11的危险评分
对于化合物A1：在小鼠异种移植模型中使用30mg/kg的有效剂量，CTCM人浓度与游离C
边缘CTCM人10μM与游离Cmax>16(小鼠，人)
边缘CTCM人30μM与游离Cmax>45(小鼠，人)。
8)在hERG转染的细胞系中对膜钾电流I
方案1
缩写
CHO 中国仓鼠卵巢细胞系
DMSO二甲亚砜
hERG人ether-à-go-go相关基因
I
方法
使用稳定表达hERG钾通道的CHO细胞进行实验。细胞在37℃和5％CO
溶液：电解液含有(以mM计)145NaCl、4KCl、10葡萄糖、10HEPES((4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)、2CaCl
以电压钳模式进行膜片钳实验，并利用QPatch系统(Sophion)用自动化膜片钳测定记录全细胞电流。通过使用QPatch测定软件将电流信号放大并数字化、储存并分析。
保持电位为-80mV。hERG电流(K
浓度/反应关系通过对单个数据点的非线性最小二乘拟合来计算。通过拟合例程计算半数最大抑制浓度(IC50)。
方案2
细胞
在hERG转染的HEK293细胞上测试化合物、媒介物对照和阳性对照。使用稳定转染hERG的人胚肾细胞系(HEK293)(Zhou Z等人Biophysical Journal 1998.74,230-241；McDonald T.V.等人,Nature 1997.388,289-292)(威斯康星大学(University ofWisconsin)，美国麦迪逊(Madison,USA))。使用T175烧瓶，将细胞培养在MEM(最低必需培养基，Gibco)中，该MEM补充有(将所示的量添加到500ml MEM中)：5ml L-谷氨酰胺-青霉素-链霉素(Sigma)、50ml胎牛血清(Bio-Whittaker)、5ml非必需氨基酸100x(Gibco)、5ml丙酮酸钠100mM(Gibco)和4ml遗传霉素50mg/ml(Gibco)。将细胞在37℃下在5％ CO
细胞收获用于测定
使用accumax
将烧瓶用含有2mM EDTA(乙二胺四乙酸)(Sigma)的约5ml-10ml磷酸盐缓冲盐水(PBS)(Gibco
化合物
使用该化合物的10mM溶液，并铺板在384孔板中。使用自动化液体处理(BiomekFXP；最终DMSO浓度：0.03％至0.3％)用记录溶液稀释储备溶液的等分试样。使用范围为1μM至30μM的筛选浓度标准范围。
在每次运行中包括阳性对照(E-4031)以评价测定的灵敏度。表13汇总了实验中所使用的外部和细胞内溶液。在表13中，细胞内和外部缓冲溶液的组成以[mM]显示，并且“NMDG”意指N-甲基-D-葡糖胺。
表13-外部和细胞内溶液
研究设计
在转染细胞上的全细胞膜片钳技术允许研究离子通道而没有来自其他离子通道的干扰或具有有限的来自其他离子通道的干扰。用自动化平面膜片钳系统SyncroPatch384PE研究化合物对hERG电流的影响(Obergrussberger等人,Journal of LaboratoryAutomation 2016.21(6),779-793)。以膜片钳技术的全细胞模式记录所有细胞。将该模块掺入液体处理移液机器人系统Biomek FXP中，以施用细胞和化合物、媒介物对照和阳性对照。
将不同浓度的化合物以两个累积增加的化合物浓度施用(分别为1μM和10μM、以及3μM和30μM)。hERG电流被确定为在-30mV下的最大尾电流，并且报告在添加化合物或媒介物和阳性对照后的抑制百分比。
在使用芯片填充溶液将细胞捕获到记录芯片的单个孔上之后，用密封增强剂溶液(增加的[Ca
在实现全细胞模式之后，给予测试脉冲约10分钟以定量对照条件中的hERG电流。在该对照期期间，将媒介物对照溶液(含有0.03％ DMSO的记录溶液)三次添加到单个孔中。在继续脉冲方案的同时，添加累积增加浓度的媒介物对照、化合物或阳性对照。在药物施用5分钟之后测量媒介物、化合物和阳性对照的效应。每个细胞测试两个浓度的化合物。
内部和记录溶液的使用将导致约10mV液界电位，并且命令电压阶跃将考虑这一点。
电生理测量：通过自动化膜片钳系统用膜片钳技术在不同的膜电位下测量细胞的膜电流。保持电位为-70mV。hERG电流(K
数据分析
漏泄校正的hERG电流(K
在SyncroPatch 384PE PatchControl384软件中设定QC参数，以便如果值落在该范围之外，则自动从分析中排除孔。QC标准取决于记录板(芯片)的类型。通常，使用4xChip(中等大小的孔)从hERG转染的HEK293细胞记录。在首次添加化合物之前设定QC标准4-6；在每次化合物添加结束时还设定QC标准4和5。
QC标准和可接受范围
1.板检查：-500pA-500pA
2.接触密封电阻：-100kOhm-10MOhm
3.接合电位偏移：0-100mV
4.Rseal≥100MOhm
5.Rseries：介于1MOhm-25MOhm之间
6.在添加化合物之前hERG尾电流≥0.2nA
每种化合物在同一平板上在至少5个孔中复制。将每个浓度至少2-3次重复的抑制百分比报告为中值。方案1和方案2的结果分别汇总在下面表14和表15中。
表14-来自方案1的hERG
表15-来自方案2的hERG
9)在播散性OCI-AML3模型中的功效研究
测试剂和对照
将化合物A3配制在20％羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)中并制备成对于20g动物每剂量达到0.2mL(10mL/kg)的总体积。每天通过个体体重调整剂量。对于每项研究，每周一次制备化合物A3的工作储备液，并储存在25℃处。
动物
当雌性SCID米色小鼠(CB17.Cg-PrkdcscidLystbg-J/Crl/-)为大约6周至8周龄并且重量大约25g时使用它们。在实验使用之前，所有动物可从任何与运输相关的胁迫中适应并恢复最少7天。随意提供高压灭菌的水和经照射的食物，并且将动物保持在12小时光照和黑暗循环中。使用前对笼子、寝具和水瓶进行高压消毒，并且每周更换一次。组织培养和细胞注射试剂汇总在下表16中。
表16-组织培养和细胞注射试剂
肿瘤模型和细胞培养方法
将人AML细胞系OCI-AML3在37℃、5％ CO
对于播散性OCI-AML3模型，每只小鼠使用26号针通过静脉内注射接受5×10
研究设计
每天口服(PO)施用化合物A3。
第0天是肿瘤细胞植入和研究开始的日子。
在功效研究中，在肿瘤细胞植入后3天将携带IV OCI-AML3异种移植肿瘤的小鼠随机分配到治疗组。在同一天开始用媒介物或化合物A3(以30mg/kg、50mg/kg和100mg/kg)进行治疗，每天给药持续28天。
动物监测
每天监测动物的与化合物毒性或肿瘤负荷相关的临床症状(即，后肢麻痹、嗜睡等)。
计算
对于存活评估，结果以存活百分比对肿瘤植入后的天数作图。将阴性临床体征和/或≥20％体重减轻用作死亡的替代终点。利用Kaplan-Meier存活分析来确定中值存活期。将增加寿命(ILS)百分比计算为：((治疗组的中值存活日-对照组的中值存活日)/对照组的中值存活日)×100。由于不良临床征象(诸如溃疡性肿瘤、体重减轻等)或与治疗无关的死亡而未能达到替代终点的动物被审查用于存活评估。根据NCI标准的定义，ILS≥25％被认为具有生物学意义。(Johnson JI等人Br J Cancer.2001.84(10),1424-1431)。
数据分析
存活和体重数据利用Prism(第7版)以图形的方式表示。如上文所述评价体重的统计显著性。在R软件3.4.2版中使用对数秩(Mantel-Cox)检验，对比较治疗性治疗组与适当媒介物治疗的对照的Kaplan-Meier存活曲线评价统计学显著性。当p值≤0.05时，组之间的差异被认为是显著的。
存活
Kaplan-Meier存活曲线示于图3中。对携带已建立的OCI-AML3肿瘤的小鼠每天口服给药在20％ HP-β-CD制剂中的30mg/kg、50mg/kg、100mg/kg的化合物A3，共持续28天(n＝9-10只/组)。对于经化合物A3治疗的组，在以下日子达到中值存活天数：对于30mg/kg在第75.5天、对于50mg/kg在第58.5天以及对于100mg/kg在第75天，这与经媒介物治疗的对照组的38.5天中值存活期形成对比。与对照小鼠相比，化合物A3治疗导致携带OCI-AML3肿瘤的小鼠的寿命在统计学上显著增加了96.1％、51.9％和94.8％(在30mg/kg、50mg/kg和100mg/kg剂量水平下)(p≤0.001)。根据≥25％ ILS的NCI标准阈值，这是生物学上显著的ILS(Johnson JI等人Br J Cancer.2001.84(10),1424-1431)。
10)多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂与阿扎胞苷的组合在NSG小鼠的OCI-AML3
上文所述的播散性OCI-AML3模型还用于检查多发性内分泌癌蛋白-MLL-抑制剂(如上文所述配制的)与阿扎胞苷(在10％二甲亚砜[DMSO]中配制的)的组合的功效，具有以下差异：(i)代替雌性SCID米色，使用NSG(非肥胖型糖尿病[NOD]scidγ或NOD.Cg-Prkdc
表17-对小鼠中的OCI-AML3肿瘤的治疗
Kaplan-Meier存活曲线示于图4A中。治疗携带已建立的OCI-AML3肿瘤的小鼠4周对寿命的影响汇总在表18中。
表18-在小鼠中治疗OCI-AML3肿瘤后对寿命的影响
与媒介物对照和
如表18中所反映的，与媒介物对照治疗小鼠或单独用阿扎胞苷治疗小鼠相比，用化合物A1与阿扎胞苷的组合治疗小鼠导致携带OCI-AML3肿瘤的小鼠的寿命(ILS)在统计学上显著增加。与单独的化合物A1相比，化合物A1与阿扎胞苷的组合没有统计学差异，因此没有拮抗作用。
11)多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂与阿扎胞苷的组合在NSG小鼠的MOLM-13
使用MOLM-13细胞代替OCI-AML3细胞，采用与本文所述的散播性OCI-AML3模型类似的用于检查多发性内分泌癌蛋白-MLL-抑制剂与阿扎胞苷的组合的功效的方法。
肿瘤模型和细胞培养方法
在37℃、5％ CO2下在指定的完全培养基(RPMI，洛斯维-帕克纪念研究所(RoswellPark Memorial Institute)[RPMI]1640+10％ HI FBS+2mM L-谷氨酰胺+50μg/ml庆大霉素)中培养人AML细胞系MOLM-13。在对数生长的同时收获细胞并将该细胞再悬浮于冷的(4℃)无血清RPMI 1640培养基中。每只小鼠接受1×10
在该功效研究中使用化合物对各组的治疗汇总于表19中。
表19-对小鼠中的MOLM-13肿瘤的治疗
Kaplan-Meier存活曲线示于图4B中。治疗携带已建立的MOLM-13肿瘤的小鼠4周对寿命的影响汇总在表20中。
表20
与媒介物对照和
如表20中所反映的，与单独用阿扎胞苷或化合物A1治疗的小鼠相比，用化合物A1与阿扎胞苷的组合治疗小鼠导致携带MOLM-13肿瘤的小鼠的寿命(ILS)在统计学上显著增加。
12)多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂与吉瑞替尼的组合在NSG小鼠的MOLM-13
使用MOLM-13细胞代替OCI-AML3细胞，采用与本文所述的散播性OCI-AML3模型类似的用于检查多发性内分泌癌蛋白-MLL-抑制剂与吉瑞替尼的组合的功效的方法。
肿瘤模型和细胞培养方法
在37℃、5％ CO2下在指定的完全培养基(RPMI，洛斯维-帕克纪念研究所(RoswellPark Memorial Institute)[RPMI]1640+10％ HI FBS+2mM L-谷氨酰胺+50μg/ml庆大霉素)中培养人AML细胞系MOLM-13。在对数生长的同时收获细胞并将该细胞再悬浮于冷的(4℃)无血清RPMI 1640培养基中。每只小鼠接受1×10
在该功效研究中使用化合物对各组的治疗汇总于表21中。
表21-对小鼠中的MOLM-13肿瘤的治疗
Kaplan-Meier存活曲线示于图5中。治疗携带已建立的MOLM-13肿瘤的小鼠4周对寿命的影响汇总在表22中。
表22-在小鼠中治疗MOLM-13肿瘤后对寿命的影响
与媒介物对照和
如表22中所反映的，与单独用吉瑞替尼或化合物A1治疗的小鼠相比，用化合物A1与吉瑞替尼的组合治疗小鼠导致携带MOLM-13肿瘤的小鼠的寿命(ILS)在统计学上显著增加。
13)体外增殖-多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂与FLT3抑制剂(吉瑞替尼或米哚妥
细胞系
AML细胞系MOLM-13、OCI-AML3和MV4-11购自DSMZ。将MOLM-13在补充有10％胎牛血清(FBS)和1％青霉素/链霉素的RPMI培养基中生长。将MV4-11细胞在补充有10％ FBS和1％青霉素/链霉素的IMDM培养基中生长。将OCI-AML3细胞在80％-90％α-MEM(含有核糖和脱氧核糖核苷)+10％-20％ FBS中培养。将所有细胞系在37℃、5％ CO2气氛中培养。
Cell Titer Glo测定
将AML细胞系(5×10
协同作用计算
用最高单一药剂(HSA)无效模型实施的基于R的Biochemically IntuitiveGeneralized Loewe(BIGL)模型。具体而言，应用BIGL方法来计算药物-药物相互作用(Vander Borght,K.,Tourny,A.,Bagdziunas,R.等人BIGL:Biochemically IntuitiveGeneralized Loewe null model for prediction of the expected combined effectcompatible with partial agonism and antagonism.Sci Rep 7,17935(2017)；Thas,O.,Tourny,A.,Verbist,B.,Hawinkel,S.,Nazarov,M.,Mutambanengwe,K.和Bijnens,L.Statistical detection of synergy:New methods and a comparativestudy.Pharmaceutical Statistics(2021))。
使用Cell Titer-Glo测定基于细胞代谢活性来计算使用HSA作为平均模型的细胞系数据的BIGL分析的协同矩阵结果。指示了Bootstrap置信区间。示出了效应大小及其置信区间。值得注意的是，每个数据点基于p值和相应maxR统计的符号，其中点的大小反映与分级标度对应的协同作用或拮抗作用的程度。如果在区间中包括0，则没有显著平均效应。
结果
(A)多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂与FLT3抑制剂(吉瑞替尼或米哚妥林)的组合
使用6天CellTiter-Glo测定格式，在MOLM-13(KMT2A重排)和MV4-11(FLT3-ITD)AML细胞系中评价吉瑞替尼或米哚妥林与化合物A4的成对矩阵组合。值得注意的是，化合物A4与吉瑞替尼或米哚妥林的组合在这些细胞系中的任一种中都没有拮抗性细胞毒性(针对吉瑞替尼如在图6A和图6B中所反映的以及下文表23A和表23B中所详述的；以及针对米哚妥林如在图7A和图7B中所反映的以及下文表24A和表24B中所详述的)。
发现低剂量的更具选择性的FLT3抑制剂吉瑞替尼(即，5nM或0.5nM)与化合物A4的组合在MOLM-13和MV4-11细胞系中分别具有协同作用，如与加性反应所预期的相比细胞增殖的更大降低所表明(参见图6A和图6B以及表23A和表23B)。
表23A-化合物A4与吉瑞替尼的组合对MOLM-13细胞增殖的效应
注意，不存在任何星号指示加合效应，拮抗作用由“*”指示，并且协同作用由“**”指示。拮抗效应和协同效应源自基于maxR测试的显著调用以及与之相关的数字，它们分别被解释为拮抗作用或协同作用。
表23B-化合物A4与吉瑞替尼的组合对MV4-11细胞增殖的效应
注意，不存在任何星号指示加合效应，拮抗作用由“*”指示，并且协同作用由“**”指示。拮抗效应和协同效应源自基于maxR测试的显著调用以及与之相关的数字，它们分别被解释为拮抗作用或协同作用。
表24A-化合物A4与米哚妥林的组合对MOLM-13细胞增殖的效应
注意，不存在任何星号指示加合效应，拮抗作用由“*”指示，并且协同作用由“**”指示。拮抗效应和协同效应源自基于maxR测试的显著调用以及与之相关的数字，它们分别被解释为拮抗作用或协同作用。
表24B-化合物A4与米哚妥林的组合对MV4-11细胞增殖的效应
注意，不存在任何星号指示加合效应，拮抗作用由“*”指示，并且协同作用由“**”指示。拮抗效应和协同效应源自基于maxR测试的显著调用以及与之相关的数字，它们分别被解释为拮抗作用或协同作用。
(B)多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂与伊达比星的组合
使用6天Cell Titer-Glo测定格式，在MOLM-13(KMT2A-AF9；FLT3-ITD)和OCI-AML3(NPM1c AML)细胞中评价伊达比星和化合物A4的成对矩阵组合。值得注意的是，伊达比星和化合物A4的组合在MOLM-13(KMT2A-AF9；FLT3-ITD)细胞中没有拮抗性细胞毒性，如在等值线图中所反映的(图8A)和在下文表25A中所详述的。
表25A-化合物A4与伊达比星的组合对MOLM-13细胞增殖的效应
注意，不存在任何星号指示加合效应，拮抗作用由“*”指示，并且协同作用由“**”指示。拮抗效应和协同效应源自基于maxR测试的显著调用以及与之相关的数字，它们分别被解释为拮抗作用或协同作用。
同样地，伊达比星和化合物A4的组合在OCI-AML3(NPM1c AML)细胞中没有拮抗性细胞毒性，如在等值线图中所反映的(图8B)和在下文表25B中所详述的。
表25B-化合物A4与伊达比星的组合对OCI-AML3细胞增殖的效应
注意，不存在任何星号指示加合效应，拮抗作用由“*”指示，并且协同作用由“**”指示。拮抗效应和协同效应源自基于maxR测试的显著调用以及与之相关的数字，它们分别被解释为拮抗作用或协同作用。
(C)多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂与地西他滨的组合
使用6天CellTiter-Glo测定格式，在MOLM-13(KMT2A-AF9；FLT3-ITD)和OCI-AML3(NPM1c AML)细胞中评价地西他滨和化合物A4的成对矩阵组合。值得注意的是，发现地西他滨和化合物A4的组合在MOLM-13(KMT2A-AF9；FLT3-ITD)细胞中具有协同细胞毒性，如在等值线图中所反映的(图9A)和在下文表26A中所详述的。
表26A-化合物A4与地西他滨的组合对MOLM-13细胞增殖的效应
注意，不存在任何星号指示加合效应，拮抗作用由“*”指示，并且协同作用由“**”指示。拮抗效应和协同效应源自基于maxR测试的显著调用以及与之相关的数字，它们分别被解释为拮抗作用或协同作用。
在低剂量的地西他滨(15nM)下观察到在OCI-AML3(NPM1cAML)细胞中的拮抗效应，如在等值线图中所反映的(图9B)和在下文表26B中所详述的。
表26B-化合物A4与地西他滨的组合对OCI-AML3细胞增殖的效应
注意，不存在任何星号指示加合效应，拮抗作用由“*”指示，并且协同作用由“**”指示。拮抗效应和协同效应源自基于maxR测试的显著调用以及与之相关的数字，它们分别被解释为拮抗作用或协同作用。
14)体外增殖-多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂与DHODH抑制剂(化合物22)的组合
化合物A3与DHODH抑制剂(化合物22)的组合的效果在增殖测定中使用MOLM-13(KMT2A-r)和OCI-AML3(NPM1c)细胞系来确定。将MOLM-13细胞以2000个细胞/孔接种并且将OCI-AML3细胞以1000个细胞/孔接种在96孔板中，并暴露于在表27A和表27B中详述的规定浓度的组合的指定药物。具体地，将化合物A3的浓度范围(在MOLM-13中以1μM的初始浓度或在OCI-AML3中以15μM的初始浓度开始的6点、4倍系列稀释)与化合物22的浓度范围组合(在MOLM13中以75nM的初始浓度或在OCI-AML3中以250nM的初始浓度开始的7点、3倍系列稀释)。将MOLM-13和OCI-AML3细胞在37℃、5％ CO
通过使用Incucyte ZOOM活细胞成像系统(Essen BioScience)的4x物镜的非侵入性活细胞成像并在第8天获取图像来实时监测球状体样生长。使用作为Incucyte ZOOM软件“IncuCyte ZOOM 2016B”(Essen BioScience)的一部分的综合分析工具来确定作为球状体尺寸的量度的融合百分比。将DMSO含量归一化至0.3％，并将来自DMSO孔的融合百分比用作基线反应。
在第8天评价潜在的组合效果，并使用以最高单一药剂(HSA)无效模型(Van derBorght 2017)实施的基于R的Biochemically Intuitive Generalized Loewe(BIGL)模型分析协同作用。汇集并分析来自MOLM-13的2个独立实验或来自OCI-AML3细胞的3个独立实验的数据。
结果
与MOLM-13细胞系中的化合物A3或化合物22单一疗法相比，化合物A3与化合物22的双重组合导致显著增加的细胞增殖抑制(参见图10A)。在MOLM-13细胞中的一系列浓度中观察到强的协同效应，如在等值线图中所反映的(图10A)和在下表27A中所详述的，其中效应大小表示为在组合治疗的观察结果与预期结果之间的差异，括号中显示了95％置信区间。
在OCI-AML3细胞中，化合物A3和化合物22单一疗法介导有效的生长抑制。对于化合物A3和化合物22的双重组合疗法，没有观察到协同或拮抗效应，如在等值线图中所反映的(图10B)和在下文表27B中所详述的。
表27A-化合物A3与DHODH抑制剂(化合物22)的组合对MOLM-13细胞增殖的效应
注意，不存在任何星号指示加合效应，拮抗作用由“*”指示，并且协同作用由“**”指示。拮抗效应和协同效应源自基于maxR测试的显著调用以及与之相关的数字，它们分别被解释为拮抗作用或协同作用。
表27B-化合物A3与DHODH抑制剂(化合物22)的组合对OCI-AML3细胞增殖的效应
注意，不存在任何星号指示加合效应，拮抗作用由“*”指示，并且协同作用由“**”指示。拮抗效应和协同效应源自基于maxR测试的显著调用以及与之相关的数字，它们分别被解释为拮抗作用或协同作用。
15)多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂与DHODH抑制剂的组合在人急性髓样白血病
15A)多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂与DHODH抑制剂的组合在NSG小鼠的MOLM-13
研究设计
将多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂化合物A1口服施用(PO)并在20％β-羟丙基-环糊精(HP-β-CD)中配制。将DHODH抑制剂化合物22口服施用(PO)并在0.5％甲基纤维素中配制。
第0天是肿瘤细胞植入和研究开始的日子。
在MOLM-13功效研究中，在肿瘤细胞植入后5天将携带IV MOLM-13异种移植肿瘤的小鼠随机分配到治疗组。
在第5天开始用媒介物、化合物A1(10mg/kg或30mg/kg)、化合物22(0.063mg/kg或0.125mg/kg)或组合化合物22(0.063mg/kg或0.125mg/kg)+化合物A1(10mg/kg，PM)进行治疗，每日给药，持续28天。在组合队列中，小鼠在AM中用化合物22给药，间隔8小时给予化合物A1。在该功效研究中使用化合物对各组的治疗汇总于表28中。
表28-对小鼠中的MOLM-13肿瘤的治疗
表29-在小鼠中治疗MOLM-13肿瘤后对中值存活期和寿命的影响
与媒介物对照和
在图11A中示出了Kaplan Meier存活曲线，并且表29给出了中值存活期和％ILS。就％ILS而言，与用媒介物治疗的小鼠相比，用DHODH抑制剂化合物22与化合物A1的组合治疗小鼠导致携带MOLM-13肿瘤的小鼠的寿命在统计学上显著增加。当0.063mg/kg化合物22与30mg/kg化合物A1组合时，或当0.125mg/kg化合物22与10mg/kg或30mg/kg化合物A1组合时，观察到显著的寿命延长，其大于加和并与作为单一疗法的化合物22或化合物A1相比具有统计学显著性。
15B)多发性内分泌癌蛋白-MLL抑制剂与DHODH抑制剂的组合在NSG小鼠的OCI-
在OCI-AML3功效研究中，在肿瘤细胞植入后5天将携带IV OCI-AML3异种移植肿瘤的小鼠随机分配到治疗组。在第5天开始用媒介物(如上文针对MOLM-13所述)、化合物A1(30mg/kg或100mg/kg)、化合物22(0.125mg/kg或0.25mg/kg)或组合化合物22(0.125mg/kg或0.25mg/kg)+化合物A1(30mg/kg或100mg/kg，PM)进行治疗，每日给药，持续28天。在组合队列中，小鼠在AM中用化合物22给药，间隔8小时给予化合物A1。与MOLM-13散播性研究相比，使用更高剂量的化合物A1或化合物22，因为肿瘤对单一疗法治疗的敏感性不同。在该功效研究中使用化合物对各组的治疗汇总于表30中。
表30-对小鼠中的OCI-AML3肿瘤的治疗
表31-在小鼠中治疗OCI-AML3肿瘤后对中值存活期和寿命的影响
与媒介物对照和
在图11B中示出了Kaplan Meier存活曲线，并且表31给出了中值存活期和％ILS。对于用化合物22+化合物A1的任何组合治疗的小鼠，用比媒介物治疗的天数或与单一疗法中的每种化合物相比更多的天数达到中位存活期，如在表31中所反映。就％ILS而言，与用媒介物或作为单一疗法的化合物22或化合物A1治疗的小鼠相比，用DHODH抑制剂化合物22与化合物A1的组合治疗小鼠导致携带OCI-AML3肿瘤的小鼠的寿命在统计学上显著增加。
<110> 杨森制药有限公司（Janssen Pharmaceutica NV）
强生(中国)投资有限公司（Johnson & Johnson (China) Investment Ltd.）
<120> 组合疗法
<130> P2022TC2022
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<210> 1
<211> 616
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Met Gly Leu Lys Ala Ala Gln Lys Thr Leu Phe Pro Leu Arg Ser Ile
1 5 1015
Asp Asp Val Val Arg Leu Phe Ala Ala Glu Leu Gly Arg Glu Glu Pro
202530
Asp Leu Val Leu Leu Ser Leu Val Leu Gly Phe Val Glu His Phe Leu
354045
Ala Val Asn Arg Val Ile Pro Thr Asn Val Pro Glu Leu Thr Phe Gln
505560
Pro Ser Pro Ala Pro Asp Pro Pro Gly Gly Leu Thr Tyr Phe Pro Val
65707580
Ala Asp Leu Ser Ile Ile Ala Ala Leu Tyr Ala Arg Phe Thr Ala Gln
859095
Ile Arg Gly Ala Val Asp Leu Ser Leu Tyr Pro Arg Glu Gly Gly Val
100 105 110
Ser Ser Arg Glu Leu Val Lys Lys Val Ser Asp Val Ile Trp Asn Ser
115 120 125
Leu Ser Arg Ser Tyr Phe Lys Asp Arg Ala His Ile Gln Ser Leu Phe
130 135 140
Ser Phe Ile Thr Gly Thr Lys Leu Asp Ser Ser Gly Val Ala Phe Ala
145 150 155 160
Val Val Gly Ala Cys Gln Ala Leu Gly Leu Arg Asp Val His Leu Ala
165 170 175
Leu Ser Glu Asp His Ala Trp Val Val Phe Gly Pro Asn Gly Glu Gln
180 185 190
Thr Ala Glu Val Thr Trp His Gly Lys Gly Asn Glu Asp Arg Arg Gly
195 200 205
Gln Thr Val Asn Ala Gly Val Ala Glu Arg Ser Trp Leu Tyr Leu Lys
210 215 220
Gly Ser Tyr Met Arg Cys Asp Arg Lys Met Glu Val Ala Phe Met Val
225 230 235 240
Cys Ala Ile Asn Pro Ser Ile Asp Leu His Thr Asp Ser Leu Glu Leu
245 250 255
Leu Gln Leu Gln Gln Lys Leu Leu Trp Leu Leu Tyr Asp Leu Gly His
260 265 270
Leu Glu Arg Tyr Pro Met Ala Leu Gly Asn Leu Ala Asp Leu Glu Glu
275 280 285
Leu Glu Pro Thr Pro Gly Arg Pro Asp Pro Leu Thr Leu Tyr His Lys
290 295 300
Gly Ile Ala Ser Ala Lys Thr Tyr Tyr Arg Asp Glu His Ile Tyr Pro
305 310 315 320
Tyr Met Tyr Leu Ala Gly Tyr His Cys Arg Asn Arg Asn Val Arg Glu
325 330 335
Ala Leu Gln Ala Trp Ala Asp Thr Ala Thr Val Ile Gln Asp Tyr Asn
340 345 350
Tyr Cys Arg Glu Asp Glu Glu Ile Tyr Lys Glu Phe Phe Glu Val Ala
355 360 365
Asn Asp Val Ile Pro Asn Leu Leu Lys Glu Ala Ala Ser Leu Leu Glu
370 375 380
Ala Gly Glu Glu Arg Pro Gly Glu Gln Ser Gln Gly Thr Gln Ser Gln
385 390 395 400
Gly Ser Ala Leu Gln Asp Pro Glu Cys Phe Ala His Leu Leu Arg Phe
405 410 415
Tyr Asp Gly Ile Cys Lys Trp Glu Glu Gly Ser Pro Thr Pro Val Leu
420 425 430
His Val Gly Trp Ala Thr Phe Leu Val Gln Ser Leu Gly Arg Phe Glu
435 440 445
Gly Gln Val Arg Gln Lys Val Arg Ile Val Ser Arg Glu Ala Glu Ala
450 455 460
Ala Glu Ala Glu Glu Pro Trp Gly Glu Glu Ala Arg Glu Gly Arg Arg
465 470 475 480
Arg Gly Pro Arg Arg Glu Ser Lys Pro Glu Glu Pro Pro Pro Pro Lys
485 490 495
Lys Pro Ala Leu Asp Lys Gly Leu Gly Thr Gly Gln Gly Ala Val Ser
500 505 510
Gly Pro Pro Arg Lys Pro Pro Gly Thr Val Ala Gly Thr Ala Arg Gly
515 520 525
Pro Glu Gly Gly Ser Thr Ala Gln Val Pro Ala Pro Ala Ala Ser Pro
530 535 540
Pro Pro Glu Gly Pro Val Leu Thr Phe Gln Ser Glu Lys Met Lys Gly
545 550 555 560
Met Lys Glu Leu Leu Val Ala Thr Lys Ile Asn Ser Ser Ala Ile Lys
565 570 575
Leu Gln Leu Thr Ala Gln Ser Gln Val Gln Met Lys Lys Gln Lys Val
580 585 590
Ser Thr Pro Ser Asp Tyr Thr Leu Ser Phe Leu Lys Arg Gln Arg Lys
595 600 605
Gly Leu His His His His His His
610 615