新型主动脉瘤标志物

技术领域

本发明涉及一种辅助主动脉瘤诊断的临床检查剂的技术领域。详细地，涉及主动脉瘤的生物标志物、使用生物标志物的主动脉瘤的检测剂、主动脉瘤检测试剂盒和主动脉瘤的检测方法。

背景技术

主动脉瘤是主动脉壁的一部分周围性或局部性(直径)扩大或突出的状态，根据瘤的发生部位，在胸部主动脉称为胸主动脉瘤、胸部与腹部相连续的称为胸腹主动脉瘤、在腹部称为腹主动脉瘤(非专利文献1)。主动脉瘤发病高峰年龄是70～80岁，随着人口老龄化在近年来一直在增加，但只有检查，主动脉瘤才会被发现，且基本无症状地进展，一旦破裂则会导致生命危险的严重情况。但是，采用适当的治疗能够避免破裂，因此早期检测主动脉瘤非常重要。

胸主动脉瘤基本是在体检等进行胸部X光检查时偶然被发现的，腹主动脉瘤多是在叩击以触诊腹部来诊断胃溃疡或胆石症等胃肠道疾病时被发现，或者在胃肠道和肾脏、前列腺等腹部回声(超音波)的检查中或在胸腹部的MRI检查中偶然被发现。

另一方面，作为主动脉瘤的标志物，已知有D二聚体、CRP、WBC、血浆同型半胱氨酸等(非专利文献2和3)。但是，就灵敏度、特异性和疾病特异性方面而言，它们均不足够。因此，期望开发出一种能够以高灵敏度检测主动脉瘤的生物标志物。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：循環器病の診断と治療に関するガイドライン(2010年度合同研究班報告)大動脈瘤·大動脈解離診療ガイドライン，2011年改訂版(心血管疾病的诊断与治疗指南(2010年度联合研究组报告)主动脉瘤/主动脉夹层诊疗指南，2011年修订版)

非专利文献2：Balmforth Damian,et al.,General Thoracic andCardiovascular Surgery,2017Oct 28.Doi:10.1007/s11748-017-0855-0

非专利文献3：Wanhainen Anders,et al.,Arteriosclerosis，Thrombosis，andVascular Biology,36(2),236-44,2016

发明内容

发明所要解决的问题

本发明是鉴于上述情况而做出的，其目的在于提供一种能够以高灵敏度检测主动脉瘤的新型生物标志物。

解决问题的技术方案

本发明人为了提供灵敏度和特异性优异的主动脉瘤标志物而进行了深入研究，使用胸主动脉瘤组织进行了蛋白质组分析。根据通过比较健康者主动脉组织与胸主动脉瘤患者组织的蛋白质组数据而获得的疾病组织中显著波动的因素，在血液中发现了能够以高灵敏度、特异性地检测主动脉瘤的新型标志物，从而完成了本发明。

即，本发明包括以下内容的构成：

(1)一种主动脉瘤的检测方法，该方法包括：在从受试者获得的试样中，测定以下1)和/或2)的步骤：

1)NPC2即尼曼-匹克病C2型蛋白；

2)IGFBP7即胰岛素样生长因子结合蛋白-7蛋白。

(2)根据(1)所述的方法，其中，还包括：测定3)TSP1即凝血酶敏感蛋白-1蛋白和/或4)PROF1即前纤维蛋白-1蛋白的步骤。

(3)根据(1)所述的方法，其中，所述受试者是需要预防或治疗主动脉瘤的动物，所述方法以所述NPC2蛋白和/或IGFBP7蛋白作为指标，来评价或判定主动脉瘤的预防药或治疗药的效果。

(4)根据(2)所述的方法，其中，所述受试者是需要预防或治疗主动脉瘤的动物，所述方法以所述NPC2蛋白和/或IGFBP7蛋白和所述TSP1蛋白和/或PROF1蛋白作为指标，来评价或判定主动脉瘤的预防药或治疗药的效果。

(5)一种用于检测或筛查将来有主动脉瘤发病风险的受试者的方法，该方法包括：在从受试者获得的试样中，测定以下1)和/或2)的步骤：

1)NPC2即尼曼-匹克病C2型蛋白；

2)IGFBP7即胰岛素样生长因子结合蛋白-7蛋白。

(6)根据(5)所述的方法，其中，还包括测定3)TSP1即凝血酶敏感蛋白-1蛋白和/或4)PROF1即前纤维蛋白-1蛋白的步骤。

(7)根据(1)～(6)中任一项所述的方法，其中，所述主动脉瘤是胸主动脉瘤、胸腹主动脉瘤和/或腹主动脉瘤。

(8)根据(1)～(7)中任一项所述的方法，其中，试样选自血清、血浆和血液。

(9)根据(1)～(8)中任一项所述的方法，其中，所述受试者是人。

(10)根据(1)～(9)中任一项所述的方法，其中，测定方法是免疫测定法或质谱法。

(11)一种主动脉瘤的检测标志物，其包括以下的1)和/或2)：

1)NPC2蛋白、

2)IGFBP7蛋白。

(12)根据(11)所述的检测标志物，其还包括3)TSP1蛋白和/或4)PROF1蛋白。

(13)根据(11)或(12)所述的检测标志物，其中，所述主动脉瘤是胸主动脉瘤、胸腹主动脉瘤和/或腹主动脉瘤。

(14)一种主动脉瘤的检测剂，其包含用于测定(11)～(13)中任一项所述的检测标志物的抗体或适体。

(15)根据(14)所述的检测剂，其中，所述抗体是单克隆抗体和/或多克隆抗体。

(16)一种主动脉瘤的检测试剂盒，其包括(14)或(15)所述的检测剂。

(17)根据(11)～(16)中任一项所述的检测标志物、检测剂或检测试剂盒，其中，用于主动脉瘤检测的试样选自血清、血浆和血液。

(18)根据(11)～(13)中任一项所述的检测标志物用于筛选主动脉瘤的预防药或治疗药的用途。

(19)根据(11)～(13)中任一项所述的检测标志物用于体外检测或筛查将来有主动脉瘤发病风险的受试者的用途。

本说明书包含作为本申请优先权基础的国际申请号PCT/JP2018/013571所公开的内容。

发明效果

通过将本发明发现的NPC2或IGFBP7用作主动脉瘤的标志物，能够以高灵敏度且特异性地检测主动脉瘤的发病。而且，通过组合使用NPC2和IGFBP7，能够更准确地以高灵敏度检测主动脉瘤。此外，通过组合TSP1和/或PROF1与NPC2和/或IGFBP7，能够以高精度、高灵敏度检测主动脉瘤。

另外，本发明的主动脉瘤的检测剂和检测试剂盒可用于辅助早期诊断所有的胸主动脉瘤、胸腹主动脉瘤、腹主动脉瘤的发病，通过这些疾病的早期检测可以有助于避免疾病的恶化。而且，认为也可以用于开发和评价主动脉瘤的预防药和治疗药，并且还可以用于预防和治疗主动脉瘤。

附图说明

图1是表示实施例1的胸主动脉瘤患者血清样本中NPC2和IGFBP7的测定(ELISA法)结果图。

图2是表示实施例1的胸主动脉瘤诊断中的NPC2、IGFBP7及其组合的ROC(ReceiverOperating Characteristic，受试者工作特征曲线)曲线图。

图3是表示实施例2的胸主动脉瘤患者血浆样本中TSP1的测定(ELISA法)结果图。

图4是表示实施例2的胸主动脉瘤诊断中的TSP1、TSP1与NPC2的组合、TSP1与IGFBP7的组合，以及TSP1与NPC2与IGFBP7的组合的ROC曲线图。

图5是表示实施例3的胸主动脉瘤患者血清样本中PROF1的测定(ELISA法)结果图。

图6是表示实施例3的胸主动脉瘤诊断中的PROF1、PROF1与NPC2的组合、PROF1与IGFBP7的组合，以及PROF1与NPC2与IGFBP7的组合的ROC曲线图。

图7是表示实施例4的腹主动脉瘤患者血清样本中NPC2和IGFBP7的测定(ELISA法)结果图。

图8是表示实施例4的腹主动脉瘤诊断中的NPC2、IGFBP7及其组合的ROC曲线图。

图9是表示实施例5的腹主动脉瘤患者血浆样本中TSP1的测定(ELISA法)结果图。

图10是表示实施例5的腹主动脉瘤诊断中的TSP1、TSP1与NPC2的组合、TSP1与IGFBP7的组合，以及TSP1与NPC2与IGFBP7的组合的ROC曲线图。

图11是表示实施例6的腹主动脉瘤患者血清样本中PROF1的测定(ELISA法)结果图。

图12是表示实施例6的腹主动脉瘤诊断中的PROF1、PROF1与NPC2的组合、PROF1与IGFBP7的组合，以及PROF1与NPC2与IGFBP7的组合的ROC曲线图。

图13是表示比较例1的胸主动脉瘤患者血清样本中CRP的测定(胶乳凝集法)结果和ROC曲线图。

图14是表示比较例2的腹主动脉瘤患者血清样本中CRP的测定(胶乳凝集法)结果和ROC曲线图。

图15是表示实施例7的其他疾病的患者(大肠癌、胃癌、非小细胞肺癌、肝细胞癌)和胸主动脉瘤患者血清样本中IGFBP7的测定(ELISA法)结果图。

图16是表示实施例8的其他疾病的患者(大肠癌、胃癌、非小细胞肺癌、肝细胞癌)和腹主动脉瘤患者血清样本中IGFBP7的测定(ELISA法)结果图。

具体实施方式

为了鉴定主动脉瘤标志物，本发明人等使用从健康者主动脉组织14例、胸主动脉瘤患者组织29例采集的主动脉中膜平滑肌层组织，如下进行蛋白质组分析。

·组织破碎和胰蛋白酶消化

采集后，冷冻组织用微珠破碎机进行破碎，添加Lys-C(Lysyl Endopeptidase，赖氨酰内肽酶)、胰蛋白酶(Trypsin)，在37℃温育过夜进行消化。将得到的消化肽用C18(十八烷基甲硅烷基)柱进行脱盐，并用作分析样品。

·分析

分析样品在用Nano LC(日立Nano Frontier，日立高新技术公司)分离后，通过连接的TripleTOF 5600(SCIEX公司)进行MS/MS分析。利用Mascot database search(Matrixscience公司)从测定数据中鉴定蛋白，使用集成LC-MS数据而使用的比较定量蛋白质组分析软件2DICAL(2Dimensional Image Converted Analysis of Liquid chromatographymass spectrometry，三井信息株式会社)进行定量，探求在正常主动脉群与胸主动脉瘤组间存在差异的蛋白。其结果鉴定出NPC2、IGFBP7、TSP1和PROF1是相对于正常主动脉群在胸主动脉瘤群中显示显著性增加的蛋白，从而完成了本发明。

如上所述，已确认与健康者的主动脉中膜组织相比，NPC2、IGFBP7、TSP1和PROF1在胸主动脉瘤患者来源的主动脉中膜组织中均表达显著增强。通过分别单独将NPC2、IGFBP7用作标志物，可以检测主动脉瘤，如后面的实施例中所述的，通过组合NPC2和IGFBP7以用作标志物，发挥更优异的检测效果。此外，通过组合TSP1和/或PROF1，可以进一步提高检测效果。如后面的实施例中所述的，在作为胸主动脉瘤的标志物的评价中，单独NPC2、IGFBP7的AUC值均大于0.9，是非常有用的标志物，但NPC2与IGFBP7的组合、NPC2与TSP1的组合、NPC2与PROF1的组合、IGFBP7与PROF1的组合，NPC2、IGFBP7和TSP1的组合，以及NPC2、IGFBP7和PROF1的组合显示出更高的AUC值，作为胸主动脉瘤的标志物更有用。予以说明，基于实施例1～3的数据绘制ROC曲线而求得的NPC2、TSP1和PROF1的组合的AUC值为0.953，NPC2、IGFBP7、TSP1和PROF1的组合的AUC值为0.948(这些标志物组合的ROC曲线未予图示)。这些组合作为胸主动脉瘤的标志物均非常有用。

另外，在作为腹主动脉瘤的标志物的评价中，NPC2的AUC值为0.827，是有用的标志物，但NPC2与TSP1的组合，以及NPC2与PROF1的组合显示出更高AUC值，是有用的标志物。而且，IGFBP7单独、NPC2与IGFBP7的组合、IGFBP7与TSP1的组合、IGFBP7与PROF1的组合，NPC2、IGFBP7和TSP1的组合，以及NPC2、IGFBP7和PROF1的组合的AUC值大于0.9，作为腹主动脉瘤的标志物非常有用。予以说明，基于实施例4～6的数据绘制ROC曲线而求得的TSP1与PROF1的组合的AUC值为0.837，NPC2、TSP1和PROF1的组合的AUC值为0.886(这些标志物组合的ROC曲线未予图示)。这些组合作为腹主动脉瘤的标志物均有用。而且，基于实施例4～6的数据绘制ROC曲线而求得的IGFBP7、TSP1和PROF1的组合的AUC值为0.952，NPC2、IGFBP7、TSP1和PROF1的组合的AUC值为0.952(这些标志物组合的ROC曲线未予图示)。这些组合作为腹主动脉瘤的标志物均非常有用。

如上说明的，本发明的特征在于将NPC2和/或IGFBP7作为主动脉瘤的检测标志物。

本发明中，“标志物”或“生物标志物”是指用作从受试者获得的试样的测定用靶标的分子。

本发明的主动脉瘤的检测标志物包含NPC2和/或IGFBP7。人NPC2(即，Niemann-Pick disease type C2 protein，尼曼-匹克病C2型蛋白)是UniProt登录号P61916所表示的分泌性蛋白(http://www.uniprot.org/uniprot/P61916)。人NPC2的氨基酸序列如SEQID NO:1所示。SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中，第1位～第19位的氨基酸序列是信号肽，第20位～第151位的氨基酸序列是成熟型蛋白。NPC2在人中是有132个氨基酸组成的糖蛋白，在附睾中含量很高，但也存在于许多其他组织中。NPC2具有胆固醇结合能力，被认为与NPC1一起参与胆固醇从脂质体排出。NPC2功能缺陷会导致尼曼病C型，其表现为胆固醇在脂质体中异常沉积(Marie T.Vanier,Gilles Millat.Structure and function of theNPC2 protein.Biochimica et Biophysica Acta 2004；1685:14-21)。

本发明中，NPC2蛋白中包括由与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中的第20位～第151位的氨基酸序列具有70％以上、75％以上、80％以上、85％以上、90％以上、更优选为95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上、最优选为100％的序列同一性的氨基酸序列组成，且具有胆固醇结合活性和/或胆固醇从脂质体排出的活性的蛋白或者功能缺陷突变体等不具有该活性的蛋白，还包括这样蛋白的多聚体(二聚体及以上)。

另一方面，人IGFBP7(即，Insulin-like growth factor-binding protein 7，胰岛素样生长因子结合蛋白-7)是UniProt登录号Q16270所表示的分泌性蛋白(http://www.uniprot.org/uniprot/Q16270)。人IGFBP7的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。SEQ IDNO:2所示的氨基酸序列中，第1位～第26位的氨基酸序列是信号肽，第27位～第282位的氨基酸序列是成熟型蛋白。IGFBP7在心脏、脑、胎盘、肺、肝脏、骨骼肌、肾脏、胰腺、脾脏、胸腺、前列腺、睾丸、卵巢、小肠、结肠等很多组织表达。已知不同于其他IGFBP蛋白与胰岛素样生长因子(IGF)的结合性较弱，IGFBP7与胰岛素结合性强。据报告IGFBP7与细胞增殖控制、凋亡、细胞老化和血管新生相关(Shuzhen Zhu,Fangying Xu,Jing Zhang,Wenjing Ruan,Maode Lai.Insulin-like growth factor binding protein-related protein 1andcancer.Clinica Chimica Acta 2014；431:23-32)。

本发明中，IGFBP7蛋白中包括由与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列中的第27位～第282位的氨基酸序列具有70％以上、75％以上、80％以上、85％以上、90％以上、更优选为95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上、最优选为100％的序列同一性的氨基酸序列组成，且具有胰岛素结合活性或不具有该活性的蛋白，还包括这样蛋白的多聚体(二聚体及以上)。

本发明中，作为与NPC2和/或IGFBP7组合的标志物可以包括TSP1。人TSP1(即，Thrombospondin 1，凝血酶敏感蛋白-1)是UniProt登录号P07996所表示的分泌性蛋白(http://www.uniprot.org/uniprot/P07996)。人TSP1的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列中，第1位～第18位的氨基酸序列是信号肽，第19位～第1170位的氨基酸序列是成熟型蛋白。TSP1是形成450kDa的同型三聚体的糖蛋白，在血小板、血管平滑肌细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞等表达。已知TSP1与维持血管结构和稳态有关，此外据报告与很多受体和蛋白酶、生长因子等结合(Smriti Murali Krishna,JonathanGolledge.The role of thrombospondin-1 in cardiovascular health andpathology.International Journal of Cardiology 2013；168:692-706)。

本发明中，TSP1蛋白包括由与SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列中的第19位～第1170位的氨基酸序列具有70％以上、75％以上、80％以上、85％以上、90％以上、更优选为95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上、最优选为100％的序列同一性的氨基酸序列组成的蛋白，还包括这样蛋白的多聚体(二聚体及以上)。

本发明中，作为与NPC2和/或IGFBP7组合的标志物可以包括PROF1。人PROF1(即，Profilin 1，前纤维蛋白-1)是UniProt登录号P07737所表示的蛋白(https://www.uniprot.org/uniprot/P07737)。人PROF1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。PROF1广泛表达，是由高度保守的140个氨基酸残基构成的15kDa肌动蛋白结合蛋白之一，具有浓度依赖性地催化肌动蛋白聚合的功能(Duah Alkam,Ezra Z.Feldman,Awantika Singh,andMahmoud Kiaei.Profilin1 Biology and its Mutation,Actin(g)in Disease.Cell MolLife Sci.2017；74(6):967-981)。

本发明中，PROF1蛋白中包括由与SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列中的第1位～第140位的氨基酸序列具有70％以上、75％以上、80％以上、85％以上、90％以上、更优选为95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上、最优选为100％的序列同一性的氨基酸序列组成，且具有肌动蛋白结合活性的蛋白，还包括这样蛋白的多聚体(二聚体及以上)。

予以说明，也可以将本发明的标志物与C反应蛋白(CRP)、D二聚体、白细胞计数(WBC)、血浆同型半胱氨酸、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)等已知的主动脉瘤标志物组合使用。

可以由本发明标志物检测的主动脉瘤的发病部位没有特别限定。在主动脉根部、升主动脉、主动脉弓部、降主动脉中任一处发病的胸主动脉瘤、胸腹主动脉瘤、腹主动脉瘤均可以检测。

本发明中，检测主动脉瘤的方法包括测定NPC2蛋白和/或IGFBP7蛋白的步骤。在测定试样中的NPC2蛋白和/或IGFBP7蛋白时，可以测定作为糖蛋白的NPC2和/或IGFBP7，此外，还可以通过预处理除去糖链、磷酸等翻译后的修饰，然后测定NPC2和/或IGFBP7的氨基酸序列部分。

另外，本发明中，检测主动脉瘤的方法除了测定NPC2蛋白和/或IGFBP7蛋白的步骤之外，还可以包括测定TSP1和/或PROF1的步骤。在测定试样中的TSP1蛋白和/或PROF1蛋白时，可以测定作为糖蛋白的TSP1和/或PROF1，此外，还可以通过预处理除去糖链、磷酸等翻译后的修饰，然后测定TSP1和/或PROF1的氨基酸序列部分。

检测主动脉瘤的方法可以通过在从受试者获得的试样中测定本发明的标志物来检测该受试者的主动脉瘤。因此，可以将检测主动脉瘤的方法称为主动脉瘤的诊断、检查、评价或判定方法，或者用于检测主动脉瘤的体外数据采集方法等。

作为能够成为检测主动脉瘤方法的受试对象的动物，例如可举出：人、猴、牛、猪、马、狗、猫、绵羊、山羊、兔、仓鼠、豚鼠、小鼠、大鼠等哺乳类，优选为人。

另外，作为在检测主动脉瘤的方法中使用的试样，例如可举出：血清、血浆、血液等。

本发明中，例如在从怀疑是主动脉瘤的患者采集的试样中，可以通过在体外测定NPC2蛋白水平和/或IGFBP7蛋白水平来判断主动脉瘤的发病可能性。将患者样本中的NPC2蛋白水平和/或IGFBP7蛋白水平与健康者的水平相比较，当患者样本中的NPC2蛋白水平和/或IGFBP7蛋白水平高于健康者的水平时，判断为在主动脉某一部位将来有主动脉瘤发病的可能性或目前主动脉瘤正在发展中的可能性很高。

本发明中，除了NPC2蛋白水平和/或IGFBP7蛋白水平的测定之外，还可以通过测定TSP1蛋白水平和/或PROF1蛋白水平来判断主动脉瘤的发病可能性。除了患者样本中的NPC2蛋白水平和/或IGFBP7蛋白水平，还将TSP1蛋白水平和/或PROF1蛋白水平与健康者的水平相比较，当患者样本中的NPC2蛋白水平和/或IGFBP7蛋白水平高于健康者的水平，而且患者样本中的TSP1蛋白水平和/或PROF1蛋白水平低于健康者的水平时，判断为在主动脉某一部位将来有主动脉瘤发病的可能性或目前主动脉瘤正在发展中的可能性很高。

具体地，根据检测主动脉瘤的方法，本发明还包括通过在从受试者获得的试样中测定本发明的标志物来检测或筛查将来有主动脉瘤发病风险的受试者的方法。

另外，作为用于判断主动脉瘤发病可能性或目前主动脉瘤正在发展中的可能性很高的各标志物的临界值，没有限定，可举例有如下。下述的临界值是根据由实施例所示的数据绘制的ROC曲线，计算对于各临界值的确诊率，将显示最高确诊率的作为临界值而计算的。

(1)胸主动脉瘤：血清中临界值：

(i)NPC2的临界值：4.2ng/mL(灵敏度96.6％、特异性88.6％、确诊率91.8％)；

(ii)IGFBP7的临界值(胸主动脉瘤时，得到3个为最高确诊率(84.9％)的临界值)：

临界值1：175.4ng/mL(灵敏度75.9％、特异性90.9％、确诊率84.9％)；

临界值2：173.5ng/mL(灵敏度79.3％、特异性88.6％、确诊率84.9％)；

临界值3：193.9-209.2ng/mL(灵敏度62.1％、特异性100％、确诊率84.9％)；

(iii)PROF1的临界值：2.1ng/mL(灵敏度58.6％、特异性88.6％、确诊率76.7％)。

(2)胸主动脉瘤：血浆中的临界值：

TSP1的临界值：874.0ng/mL(灵敏度62.1％、特异性37.9％、确诊率78.1％)。

(3)腹主动脉瘤：血清中临界值：

(i)NPC2的临界值：3.9ng/mL(灵敏度80.4％、特异性86.4％、确诊率83.2％)；

(ii)IGFBP7的临界值(腹主动脉瘤时，得到2个为最高确诊率(84.2％)的临界值)：

临界值1：175.4ng/mL(灵敏度78.4％、特异性90.9％、确诊率84.2％)；

临界值2：173.5ng/mL(灵敏度80.4％、特异性88.6％、确诊率84.2％)；

(iii)PROF1的临界值(腹主动脉瘤测定病例数为41例，与其他标志物的腹主动脉瘤测定病例数不同，此外得到2个为最高确诊率(64.2％)的临界值)：

临界值1：2.9ng/mL(灵敏度75.6％、特异性68.2％、确诊率64.2％)；

临界值2：3.1ng/mL(灵敏度82.9％、特异性61.4％、确诊率64.2％)。

(4)腹主动脉瘤：血浆中的临界值：

TSP1的临界值：1128.0ng/mL(灵敏度74.5％、特异性75.0％、确诊率74.7％)。

基于这些临界值，当患者样本中的NPC2蛋白水平和/或IGFBP7蛋白水平高于临界值，或者进一步患者样本中的TSP1蛋白水平和/或PROF1蛋白水平低于临界值时，判断为胸主动脉瘤或腹主动脉瘤发病可能性或目前胸主动脉瘤或腹主动脉瘤正在发展中的可能性很高。

本发明的标志物还可以用于筛选主动脉瘤的预防药或治疗药、用于评价和判定主动脉瘤的预防药或治疗药的效果。例如，在进行评价和判定主动脉瘤的预防药或治疗药的效果时，可以按照以下方法进行：在向需要预防或治疗主动脉瘤的受试对象动物给予主动脉瘤的预防药或治疗药之前与之后，从受试对象动物采集试样，或者在给予该预防药或治疗药之后，按时间顺序在两个以上的时间点从受试对象动物采集试样，研究试样中的NPC2蛋白水平和/或IGFBP7蛋白水平随时间的变化。通过给予主动脉瘤的预防药或治疗药，在主动脉瘤病变的形成、进展受到抑制时，从受试对象动物采集的试样中的NPC2蛋白水平和/或IGFBP7蛋白水平随时间的增加显示有被抑制或稳定的趋势。另一方面，通过给予主动脉瘤的预防药或治疗药，在主动脉瘤病变得到改善时，从受试对象动物采集的试样中的NPC2蛋白水平和/或IGFBP7蛋白水平显示有随时间减少的趋势。

本发明中，在向受试对象动物给予主动脉瘤的预防药或治疗药之前与之后，从受试对象动物采集试样，或者在给予该预防药或治疗药之后，按时间顺序在两个以上的时间点从受试对象动物采集试样，除了研究试样中的NPC2蛋白水平和/或IGFBP7蛋白水平随时间变化之外，还研究TSP1蛋白水平和/或PROF1蛋白水平随时间变化，由此可以评价或判定主动脉瘤的预防药或治疗药的效果。通过给予主动脉瘤的预防药或治疗药，在主动脉瘤病变的形成、进展受到抑制时，从受试对象动物采集的试样中的NPC2蛋白水平和/或IGFBP7蛋白水平随时间的增加显示有被抑制或稳定的趋势，TSP1蛋白水平和/或PROF1蛋白水平随时间减少显示有被抑制或稳定的趋势。另一方面，通过给予主动脉瘤的预防药或治疗药，在主动脉瘤病变得到改善时，从受试对象动物采集的试样中的NPC2蛋白水平和/或IGFBP7蛋白水平显示有随时间减少的趋势，TSP1蛋白水平和/或PROF1蛋白水平显示有随时间增加的趋势。

作为测定本发明标志物蛋白的方法，例如只要是特异性地测定NPC2蛋白、IGFBP7蛋白、TSP1蛋白、PROF1蛋白的方法，则可以使用免疫测定法、质谱法等已知的任何方法。作为在测定本发明标志物蛋白时所使用的检测剂，可以使用抗体和适体等。

作为免疫测定法，没有特别限定，可以举出各种的酶免疫测定法、放射免疫测定法(RIA)、酶结合免疫测定法(ELISA)、双单克隆抗体夹心免疫测定、单克隆多克隆抗体夹心免疫测定、免疫染色法、免疫荧光法、蛋白质印迹法、生物素-亲和素法、免疫沉淀法、胶体金凝集法、免疫色谱法、胶乳凝集法(LA)、免疫比浊法(TIA)等。

作为在免疫测定法中使用的检测剂，可以使用已经销售的抗NPC2抗体、抗IGFBP7抗体、抗TSP1抗体、抗PROF1抗体，也可以基于公知的NPC2的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)、IGFBP7的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)、TSP1的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)、PROF1的氨基酸序列(SEQ ID NO:4)通过常规方法制备抗体。可以是特异性地识别NPC2、IGFBP7、TSP1、PROF1各自的氨基酸序列结构的抗体，也可以是特异性地识别包括各自糖链和二硫键、磷酸化等翻译后修饰的整个结构的抗体。

只要是可以检测NPC2蛋白、IGFBP7蛋白、TSP1蛋白、PROF1蛋白的抗体，则所来源的动物物种和克隆没有特别限定。可以举出来源于兔、山羊、小鼠、大鼠、豚鼠、马、绵羊、骆驼、鸡等的抗体，单克隆抗体和多克隆抗体均可以。此外，可以使用适于特异性结合于NPC2蛋白、IGFBP7蛋白、TSP1蛋白、PROF1蛋白的所有亚类的抗体。当然也可以使用重组抗体、Fab、Fab'或F(ab')2片段这样的片段。

作为本发明的主动脉瘤的检测剂，还可以使用与PC2蛋白、IGFBP7蛋白、TSP1蛋白、PROF1蛋白具有结合性的适体。在适体的制造时，通过已知的方法从公知的NPC2的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)和IGFBP7的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)、TSP1蛋白(SEQ ID NO:3)、PROF1蛋白(SEQ ID NO:4)对可结合的DNA或者RNA或它们的诱导体即核酸适体和由氨基酸构成的肽适体进行合成并使用即可。在测定时，可以通过发光法和荧光法、表面等离子体共振法检测适体的结合。

作为质谱法，没有特别限定，可以利用将使用电喷雾电离法(ESI)、基质辅助激光解吸电离法(MALDI)、表面增强激光解吸电离法(SELDI)等的离子源与飞行时间型分析仪(TOF)、离子阱型分析仪(IT)、傅立叶变换型分析仪(FT)等进行组合的质谱仪。可以使用将质谱仪与高速液相色谱(HPLC)或毛细管电泳(CE)等分离装置连接而成的LC-MS和CE-MS等。此外，作为质谱数据的获得方法，可举出：数据非依赖性分析(DIA)、数据依赖性分析(DDA)、多反应监测方法(MRM)等。质谱中还包括对试样进行iTRAQ试剂(SCIEX公司)等的稳定同位素标记的情况。

在进行本发明的主动脉瘤检测时所需要的各种试剂类，可以预先包装在试剂盒中。例如，作为试剂盒提供如下：(i)作为捕获抗体对本发明的标志物蛋白有特异性的单克隆抗体或多克隆抗体；(ii)作为检测抗体对本发明的标志物蛋白有特异性的酶标记单克隆抗体或多克隆抗体；(iii)底物溶液等必要的试剂。

实施例

下面，通过实施例更详细地说明本发明，本发明的技术范围不限于以下实施例。

〔实施例1〕

由胸主动脉瘤患者血清样本测定NPC2、IGFBP7(ELISA法)

对于NPC2、IGFBP7的血清浓度，进行了ELISA测定。NPC2、IGFBP7分别使用NPC2ELISA试剂盒(Aviva Systems Biology公司)、用于胰岛素样生长因子结合蛋白-7的ELISA试剂盒(Cloud-Clone公司)进行测定。按照试剂盒附带的操作方案进行测定。

详细地，在抗NPC2抗体或抗IGFBP7抗体的固相板中，添加稀释的血清样本并温育。然后，除去样本液，在NPC2测定时，添加生物素标记的抗NPC2抗体，在IGFBP7测定时，添加检测试剂A液，并进行温育。在温育后进行洗涤操作，在NPC2测定时，添加HRP(Horseradishperoxidase，辣根过氧化物酶)标记的亲和素，在IGFBP7测定时，添加检测试剂B液，并进行温育。接着，进行洗涤操作，添加TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)溶液进行显色反应，然后添加终止液，使用酶标仪(SpectraMax M2e，Molecular Devices公司)在主波长450nm、副波长540nm下进行测定。对该数据从由同时测定的各标准液的测定数据绘制的校准曲线计算浓度，并测定NPC2、IGFBP7浓度。统计处理使用StatFlex ver6.0(Artec公司)，显著性差异检验使用曼-惠特尼U检验(Mann-Whitney U test)。

·结果1

NPC2和IGFBP7的结果如图1所示。

根据图1所示的结果，NPC2在健康者(44例)和胸主动脉瘤患者(29例)中分别为2.941±2.001ng/mL、9.021±4.313ng/mL，在胸主动脉瘤患者中，血清NPC2值显著性升高。因此，表明NPC2作为胸主动脉瘤标志物是有用的标志物。

另一方面，IGFBP7在健康者(44例)和胸主动脉瘤患者(29例)中分别为139.216±28.481ng/mL、243.941±89.474ng/mL，在胸主动脉瘤患者中，血清IGFBP7值显著性升高。因此，也表明IGFBP7作为胸主动脉瘤标志物是有用的标志物。

·结果2(通过ROC曲线对NPC2、IGFBP7作为胸主动脉瘤标志物的评价)

胸主动脉瘤诊断中的NPC2、IGFBP7的ROC(Receiver Operating Characteristic，受试者工作特征曲线)曲线如图2所示。ROC曲线通过统计分析软件StatFlex ver6.0(Artec公司)绘制。由ROC曲线求得的AUC(Area Under the Curve，曲线下面积)对于NPC2为0.947，对于IGFBP7为0.930。而且，NPC2与IGFBP7组合时的AUC为0.966。因此，表明NPC2、IGFBP7作为胸主动脉瘤标志物均是有用的标志物，它们的组合进一步增强了有用性。

〔实施例2〕

从胸主动脉瘤患者血浆样本中测定TSP1(ELISA法)和通过ROC曲线对作为胸主动脉瘤标志物的评价(NPC2、IGFBP7与TSP1的组合)

对于TSP1的血浆浓度，进行了ELISA测定。TSP1使用人凝血酶敏感蛋白-1Quantikine ELISA试剂盒(R&D Systems公司)进行了测定。按照试剂盒附带的操作方案进行测定。

详细地，在抗TSP1抗体的固相板中，添加稀释的血浆样本并温育。然后，除去样本液，添加过氧化物酶结合的抗TSP1抗体并温育。在温育后进行洗涤操作，进行显色反应，然后添加终止液，使用酶标仪(SpectraMax M2e，Molecular Devices公司)在主波长450nm、副波长540nm下进行测定。对该数据从由同时测定的各标准液的测定数据绘制的校准曲线计算浓度，并测定TSP1浓度。统计处理使用StatFlex ver6.0(Artec公司)，显著性差异检验使用曼-惠特尼U检验。

·结果1

TSP1的结果如图3所示。

根据图3所示的结果，TSP1在健康者(44例)和胸主动脉瘤患者(29例)中分别为1666.55±968.196ng/mL、950.152±611.083ng/mL，在胸主动脉瘤患者中，血浆TSP1值显著性下降。因此，表明TSP1作为胸主动脉瘤标志物是有用的标志物。

·结果2(通过ROC曲线对TSP1作为胸主动脉瘤标志物的评价)

胸主动脉瘤诊断中的TSP1的ROC(受试者工作特征曲线)曲线如图4所示。ROC曲线通过统计分析软件StatFlex ver6.0(Artec公司)绘制。由ROC曲线求得的AUC(曲线下面积)为0.760。而且，对于按照实施例1所述的方法测定的NPC2与IGFBP7的组合，在由ROC曲线求出AUC时，TSP1和NPC2组合时的AUC为0.960，TSP1和IGFBP7组合时的AUC为0.927，TSP1、NPC2和IGFBP7组合时的AUC为0.972。因此，表明TSP1作为胸主动脉瘤标志物是有用的标志物，与NPC2和/或IGFBP7的组合进一步增强了有用性。

〔实施例3〕

从胸主动脉瘤患者血清样本中测定PROF1(ELISA法)和通过ROC曲线对作为胸主动脉瘤标志物的评价(NPC2、IGFBP7与PROF1的组合)

对于PROF1的血清浓度，进行了ELISA测定。PROF1使用人前纤维蛋白-1ELISA试剂盒(CUSABIO technology公司)进行了测定。按照试剂盒附带的操作方案进行测定。

详细地，在抗PROF1抗体的固相板中，添加稀释的血清样本并温育。然后，除去样本液，添加生物素标记的抗PROF1抗体并温育。在温育后进行洗涤操作，添加HRP(辣根过氧化物酶)标记的亲和素并温育。接着，进行洗涤操作，添加TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)溶液进行显色反应，然后添加终止液，使用酶标仪(SpectraMax M2e，Molecular Devices公司)在主波长450nm、副波长540nm下进行测定。对该数据从由同时测定的各标准液的测定数据绘制的校准曲线计算浓度，并测定PROF1浓度。统计处理使用StatFlex ver6.0(Artec公司)，显著性差异检验使用曼-惠特尼U检验。

·结果1

PROF1的结果如图5所示。

根据图5所示的结果，PROF1在健康者(44例)和胸主动脉瘤患者(29例)中分别为3.588±1.508ng/mL、2.456±1.943ng/mL，在胸主动脉瘤患者中，血清PROF1值显著性下降。因此，表明PROF1作为胸主动脉瘤标志物是有用的标志物。

·结果2(通过ROC曲线对PROF1作为胸主动脉瘤标志物的评价)

胸主动脉瘤诊断中的PROF1的ROC(受试者工作特征曲线)曲线如图6所示。ROC曲线通过统计分析软件StatFlex ver6.0(Artec公司)绘制。由ROC曲线求得的AUC(曲线下面积)为0.765。而且，对于按照实施例1所述的方法测定的NPC2与IGFBP7的组合，在由ROC曲线求出AUC时，PROF1和NPC2组合时的AUC为0.958，PROF1和IGFBP7组合时的AUC为0.937，PROF1、NPC2和IGFBP7组合时的AUC为0.972。因此，表明PROF1作为胸主动脉瘤标志物是有用的标志物，与NPC2和/或IGFBP7的组合进一步增强了有用性。

〔实施例4〕

由腹主动脉瘤患者血清样本测定NPC2、IGFBP7(ELISA法)

对于NPC2、IGFBP7的血清浓度，进行了ELISA测定。NPC2、IGFBP7分别使用NPC2ELISA试剂盒(Aviva Systems Biology公司)、用于胰岛素样生长因子结合蛋白-7的ELISA试剂盒(Cloud-Clone公司)进行了测定。按照试剂盒附带的操作方案进行测定。

详细地，在抗NPC2抗体或抗IGFBP7抗体的固相板中，添加稀释的血清样本并温育。然后，除去样本液，在NPC2测定时，添加生物素标记的抗NPC2抗体，在IGFBP7测定时，添加检测试剂A液，并进行温育。在温育后进行洗涤操作，在NPC2测定时，添加HRP(辣根过氧化物酶)标记的亲和素，在IGFBP7测定时，添加检测试剂B液，并进行温育。接着，进行洗涤操作，添加TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)溶液进行显色反应，然后添加终止液，使用酶标仪(SpectraMax M2e，Molecular Devices公司)在主波长450nm、副波长540nm下进行测定。对该数据从由同时测定的各标准液的测定数据绘制的校准曲线计算浓度，并测定NPC2、IGFBP7浓度。统计处理使用StatFlex ver6.0(Artec公司)，显著性差异检验使用曼-惠特尼U检验。

·结果1

NPC2和IGFBP7的结果如图7所示。

根据图7所示的结果，NPC2在健康者(44例)和腹主动脉瘤患者(51例)中分别为2.941±2.001ng/mL、8.125±7.088ng/mL，在腹主动脉瘤患者中，血清NPC2值显著性升高。因此，表明NPC2作为腹主动脉瘤标志物也是有用的标志物。

另一方面，IGFBP7在健康者(44例)和腹主动脉瘤患者(51例)中分别为139.216±28.481ng/mL、236.588±82.702ng/mL，在腹主动脉瘤患者中，血清IGFBP7值显著性升高。因此，对于IGFBP7，表明作为腹主动脉瘤标志物也是有用的标志物。

·结果2(通过ROC曲线对NPC2、IGFBP7作为腹主动脉瘤标志物的评价)

腹主动脉瘤诊断中的NPC2、IGFBP7的ROC曲线如图8所示。ROC曲线通过统计分析软件StatFlex ver6.0(Artec公司)绘制。由ROC曲线求得的AUC(曲线下面积)对于NPC2为0.827，对于IGFBP7为0.901。而且，NPC2与IGFBP7组合时的AUC为0.910。因此，表明NPC2、IGFBP7作为腹主动脉瘤标志物均是有用的标志物，它们的组合进一步增强了有用性。

〔实施例5〕

从腹主动脉瘤患者血浆样本中测定TSP1(ELISA法)和通过ROC曲线对作为腹主动脉瘤标志物的评价(NPC2、IGFBP7与TSP1的组合)

对于TSP1的血浆浓度，进行了ELISA测定。TSP1使用人凝血酶敏感蛋白-1Quantikine ELISA试剂盒(R&D Systems公司)进行了测定。按照试剂盒附带的操作方案进行测定。

详细地，在抗TSP1抗体的固相板中，添加稀释的血浆样本并温育。然后，除去样本液，添加过氧化物酶结合的抗TSP1抗体并温育。在温育后进行洗涤操作，进行显色反应，然后添加终止液，使用酶标仪(SpectraMax M2e，Molecular Devices公司)在主波长450nm、副波长540nm下进行测定。对该数据从由同时测定的各标准液的测定数据绘制的校准曲线计算浓度，并测定TSP1浓度。统计处理使用StatFlex ver6.0(Artec公司)，显著性差异检验使用曼-惠特尼U检验。

·结果1

TSP1的结果如图9所示。

根据图9所示的结果，TSP1在健康者(44例)和腹主动脉瘤患者(51例)中分别为1666.55±968.196ng/mL、1086.48±1041.75ng/mL，在腹主动脉瘤患者中，血浆TSP1值显著性下降。因此，表明TSP1作为腹主动脉瘤标志物是有用的标志物。

·结果2(通过ROC曲线对TSP1作为腹主动脉瘤标志物的评价)

腹主动脉瘤诊断中的TSP1的ROC(受试者工作特征曲线)曲线如图10所示。ROC曲线通过统计分析软件StatFlex ver6.0(Artec公司)绘制。由ROC曲线求得的AUC(曲线下面积)为0.742。而且，对于按照实施例4所述的方法测定的NPC2与IGFBP7的组合，在由ROC曲线求出AUC时，TSP1和NPC2组合时的AUC为0.831，TSP1和IGFBP7组合时的AUC为0.909，TSP1、NPC2和IGFBP7组合时的AUC为0.915。因此，表明TSP1作为腹主动脉瘤标志物是有用的标志物，与NPC2和/或IGFBP7的组合进一步增强了有用性。

〔实施例6〕

从腹主动脉瘤患者血清样本中测定PROF1(ELISA法)和通过ROC曲线对作为腹主动脉瘤标志物的评价(NPC2、IGFBP7与PROF1的组合)

对于PROF1的血清浓度，进行了ELISA测定。PROF1使用人前纤维蛋白-1ELISA试剂盒(CUSABIO technology公司)进行了测定。按照试剂盒附带的操作方案进行测定。

详细地，在抗PROF1抗体的固相板中，添加稀释的血清样本并温育。然后，除去样本液，添加生物素标记的抗PROF1抗体并温育。在温育后进行洗涤操作，添加HRP(辣根过氧化物酶)标记的亲和素并温育。接着，进行洗涤操作，添加TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)溶液进行显色反应，然后添加终止液，使用酶标仪(SpectraMax M2e，Molecular Devices公司)在主波长450nm、副波长540nm下进行测定。对该数据从由同时测定的各标准液的测定数据绘制的校准曲线计算浓度，并测定PROF1浓度。统计处理使用StatFlex ver6.0(Artec公司)，显著性差异检验使用曼-惠特尼U检验。

·结果1

PROF1的结果如图11所示。

根据图11所示的结果，PROF1在健康者(44例)和腹主动脉瘤患者(41例)中分别为3.588±1.508ng/mL、2.193±0.910ng/mL，在腹主动脉瘤患者中，血清PROF1值显著性下降。因此，表明PROF1作为腹主动脉瘤标志物是有用的标志物。

·结果2(通过ROC曲线对PROF1作为腹主动脉瘤标志物的评价)

腹主动脉瘤诊断中的PROF1的ROC(受试者工作特征曲线)曲线如图12所示。ROC曲线通过统计分析软件StatFlex ver6.0(Artec公司)绘制。由ROC曲线求得的AUC(曲线下面积)为0.796。而且，对于按照实施例4所述的方法测定的NPC2与IGFBP7的组合，在由ROC曲线求出AUC时，PROF1和NPC2组合时的AUC为0.871，PROF1和IGFBP7组合时的AUC为0.953，PROF1、NPC2和IGFBP7组合时的AUC为0.953。因此，表明PROF1作为腹主动脉瘤标志物是有用的标志物，与NPC2和/或IGFBP7的组合进一步增强了有用性。

〔比较例1〕

与常规标志物(CRP)的比较1

测定实施例1中使用的血清样本的CRP值。测定试剂使用C反应蛋白试剂盒CRP-latex X2“生研(Seiken)”NX(Denka Seiken株式会社)，测定装置使用LABOSPECT 008日立自动分析仪和7180型日立自动分析仪(日立高新技术公司)。ROC曲线通过统计分析软件StatFlex ver6.0(Artec公司)绘制。

结果如图13所示。

由ROC曲线求得的AUC(曲线下面积)为0.805。因此，显示出实施例1所示的NPC2(AUC＝0.947)、IGFBP7(AUC＝0.930)这两者作为胸主动脉瘤标志物是比CRP更有用的标志物。

〔比较例2〕

与常规标志物(CRP)的比较2

测定实施例4中使用的血清样本的CRP值。测定试剂使用C反应蛋白试剂盒CRP-latex X2“生研(Seiken)”NX(Denka Seiken株式会社)，测定装置使用LABOSPECT 008日立自动分析仪和7180型日立自动分析仪(日立高新技术公司)。ROC曲线通过统计分析软件StatFlex ver6.0(Artec公司)绘制。

结果如图14所示。

由ROC曲线求得的AUC(曲线下面积)为0.898。因此，NPC2与IGFBP7的组合(实施例4：AUC＝0.910)、IGFBP7与TSP1的组合(实施例5：AUC＝0.909)、NPC2、IGFBP7和TSP1的组合(实施例5：AUC＝0.915)、IGFBP7与PROF1的组合(实施例6：AUC＝0.953)、NPC2、IGFBP7和PROF1的组合(实施例6：AUC＝0.953)均显示出作为腹主动脉瘤标志物是比CRP更有用的标志物。

〔实施例7〕

与其他疾病的比较1(利用ELISA法测定血清样本的IGFBP7)

对于其他疾病的患者(大肠癌5例、胃癌5例、非小细胞肺癌5例、肝细胞癌4例)和胸主动脉瘤患者29例中的IGFBP7的血清浓度，进行了ELISA测定。IGFBP7的血清浓度根据实施例1所述的方法进行测定。用于比较其他疾病患者组与胸主动脉瘤患者组的统计处理使用StatFlex ver6.0(Artec公司)，显著性差异检验使用曼-惠特尼U检验。

·结果

结果如图15所示。

根据图15所示的结果，IGFBP7在其他疾病患者(合计19例)和胸主动脉瘤患者(29例)中分别为180.632±97.397ng/mL、243.881±96.857ng/mL，在胸主动脉瘤患者中，血清IGFBP7值显著性升高。因此，显示出IGFBP7可能是胸主动脉瘤的诊断标志物，其能够与心血管系统以外的其他疾病区分开。

〔实施例8〕

与其他疾病的比较2(利用ELISA法测定血清样本的IGFBP7)

对于其他疾病的患者(大肠癌5例、胃癌5例、非小细胞肺癌5例、肝细胞癌4例)和腹主动脉瘤患者51例中的IGFBP7的血清浓度，进行了ELISA测定。IGFBP7的血清浓度根据实施例1所述的方法进行测定。用于比较其他疾病患者组与腹主动脉瘤患者组的统计处理使用StatFlex ver6.0(Artec公司)，显著性差异检验使用曼-惠特尼U检验。

·结果

结果如图16所示。

根据图16所示的结果，IGFBP7在其他疾病患者(合计19例)和腹主动脉瘤患者(51例)中分别为180.632±97.397ng/mL、236.588±82.702ng/mL，在腹主动脉瘤患者中，血清IGFBP7值显著性升高。因此，显示出IGFBP7可能是腹主动脉瘤的诊断标志物，其能够与心血管系统以外的其他疾病区分。

工业上的可利用性

通过使用本发明的主动脉瘤的新型标志物即NPC2和/或IGFBP7，能够以高灵敏度且特异性地检测主动脉瘤的发病。因此，本发明的主动脉瘤的检测剂和检测试剂盒可用于筛选主动脉瘤和辅助早期诊断、开发和评价预防药和治疗药等，此外，本发明可用利用在制造该检测剂和检测试剂盒的工业中。

本说明书中所引用的所有出版物、专利和专利申请均通过引用全文并入本说明书中。

序列表

<110> 荣研化学株式会社

国立研究开发法人国立循环器病研究中心

<120> 新型主动脉瘤标志物

<130> PH-7839-PCT

<150> PCT/JP2018/013571

<151> 2018-03-30

<160> 4

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 151

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 1

Met Arg Phe Leu Ala Ala Thr Phe Leu Leu Leu Ala Leu Ser Thr Ala

1 5 10 15

Ala Gln Ala Glu Pro Val Gln Phe Lys Asp Cys Gly Ser Val Asp Gly

20 25 30

Val Ile Lys Glu Val Asn Val Ser Pro Cys Pro Thr Gln Pro Cys Gln

35 40 45

Leu Ser Lys Gly Gln Ser Tyr Ser Val Asn Val Thr Phe Thr Ser Asn

50 55 60

Ile Gln Ser Lys Ser Ser Lys Ala Val Val His Gly Ile Leu Met Gly

65 70 75 80

Val Pro Val Pro Phe Pro Ile Pro Glu Pro Asp Gly Cys Lys Ser Gly

85 90 95

Ile Asn Cys Pro Ile Gln Lys Asp Lys Thr Tyr Ser Tyr Leu Asn Lys

100 105 110

Leu Pro Val Lys Ser Glu Tyr Pro Ser Ile Lys Leu Val Val Glu Trp

115 120 125

Gln Leu Gln Asp Asp Lys Asn Gln Ser Leu Phe Cys Trp Glu Ile Pro

130 135 140

Val Gln Ile Val Ser His Leu

145 150

<210> 2

<211> 282

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 2

Met Glu Arg Pro Ser Leu Arg Ala Leu Leu Leu Gly Ala Ala Gly Leu

1 5 10 15

Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Ser Ser Ser Ser Ser Ser Asp Thr Cys

20 25 30

Gly Pro Cys Glu Pro Ala Ser Cys Pro Pro Leu Pro Pro Leu Gly Cys

35 40 45

Leu Leu Gly Glu Thr Arg Asp Ala Cys Gly Cys Cys Pro Met Cys Ala

50 55 60

Arg Gly Glu Gly Glu Pro Cys Gly Gly Gly Gly Ala Gly Arg Gly Tyr

65 70 75 80

Cys Ala Pro Gly Met Glu Cys Val Lys Ser Arg Lys Arg Arg Lys Gly

85 90 95

Lys Ala Gly Ala Ala Ala Gly Gly Pro Gly Val Ser Gly Val Cys Val

100 105 110

Cys Lys Ser Arg Tyr Pro Val Cys Gly Ser Asp Gly Thr Thr Tyr Pro

115 120 125

Ser Gly Cys Gln Leu Arg Ala Ala Ser Gln Arg Ala Glu Ser Arg Gly

130 135 140

Glu Lys Ala Ile Thr Gln Val Ser Lys Gly Thr Cys Glu Gln Gly Pro

145 150 155 160

Ser Ile Val Thr Pro Pro Lys Asp Ile Trp Asn Val Thr Gly Ala Gln

165 170 175

Val Tyr Leu Ser Cys Glu Val Ile Gly Ile Pro Thr Pro Val Leu Ile

180 185 190

Trp Asn Lys Val Lys Arg Gly His Tyr Gly Val Gln Arg Thr Glu Leu

195 200 205

Leu Pro Gly Asp Arg Asp Asn Leu Ala Ile Gln Thr Arg Gly Gly Pro

210 215 220

Glu Lys His Glu Val Thr Gly Trp Val Leu Val Ser Pro Leu Ser Lys

225 230 235 240

Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Glu Cys His Ala Ser Asn Ser Gln Gly Gln

245 250 255

Ala Ser Ala Ser Ala Lys Ile Thr Val Val Asp Ala Leu His Glu Ile

260 265 270

Pro Val Lys Lys Gly Glu Gly Ala Glu Leu

275 280

<210> 3

<211> 1170

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 3

Met Gly Leu Ala Trp Gly Leu Gly Val Leu Phe Leu Met His Val Cys

1 5 10 15

Gly Thr Asn Arg Ile Pro Glu Ser Gly Gly Asp Asn Ser Val Phe Asp

20 25 30

Ile Phe Glu Leu Thr Gly Ala Ala Arg Lys Gly Ser Gly Arg Arg Leu

35 40 45

Val Lys Gly Pro Asp Pro Ser Ser Pro Ala Phe Arg Ile Glu Asp Ala

50 55 60

Asn Leu Ile Pro Pro Val Pro Asp Asp Lys Phe Gln Asp Leu Val Asp

65 70 75 80

Ala Val Arg Ala Glu Lys Gly Phe Leu Leu Leu Ala Ser Leu Arg Gln

85 90 95

Met Lys Lys Thr Arg Gly Thr Leu Leu Ala Leu Glu Arg Lys Asp His

100 105 110

Ser Gly Gln Val Phe Ser Val Val Ser Asn Gly Lys Ala Gly Thr Leu

115 120 125

Asp Leu Ser Leu Thr Val Gln Gly Lys Gln His Val Val Ser Val Glu

130 135 140

Glu Ala Leu Leu Ala Thr Gly Gln Trp Lys Ser Ile Thr Leu Phe Val

145 150 155 160

Gln Glu Asp Arg Ala Gln Leu Tyr Ile Asp Cys Glu Lys Met Glu Asn

165 170 175

Ala Glu Leu Asp Val Pro Ile Gln Ser Val Phe Thr Arg Asp Leu Ala

180 185 190

Ser Ile Ala Arg Leu Arg Ile Ala Lys Gly Gly Val Asn Asp Asn Phe

195 200 205

Gln Gly Val Leu Gln Asn Val Arg Phe Val Phe Gly Thr Thr Pro Glu

210 215 220

Asp Ile Leu Arg Asn Lys Gly Cys Ser Ser Ser Thr Ser Val Leu Leu

225 230 235 240

Thr Leu Asp Asn Asn Val Val Asn Gly Ser Ser Pro Ala Ile Arg Thr

245 250 255

Asn Tyr Ile Gly His Lys Thr Lys Asp Leu Gln Ala Ile Cys Gly Ile

260 265 270

Ser Cys Asp Glu Leu Ser Ser Met Val Leu Glu Leu Arg Gly Leu Arg

275 280 285

Thr Ile Val Thr Thr Leu Gln Asp Ser Ile Arg Lys Val Thr Glu Glu

290 295 300

Asn Lys Glu Leu Ala Asn Glu Leu Arg Arg Pro Pro Leu Cys Tyr His

305 310 315 320

Asn Gly Val Gln Tyr Arg Asn Asn Glu Glu Trp Thr Val Asp Ser Cys

325 330 335

Thr Glu Cys His Cys Gln Asn Ser Val Thr Ile Cys Lys Lys Val Ser

340 345 350

Cys Pro Ile Met Pro Cys Ser Asn Ala Thr Val Pro Asp Gly Glu Cys

355 360 365

Cys Pro Arg Cys Trp Pro Ser Asp Ser Ala Asp Asp Gly Trp Ser Pro

370 375 380

Trp Ser Glu Trp Thr Ser Cys Ser Thr Ser Cys Gly Asn Gly Ile Gln

385 390 395 400

Gln Arg Gly Arg Ser Cys Asp Ser Leu Asn Asn Arg Cys Glu Gly Ser

405 410 415

Ser Val Gln Thr Arg Thr Cys His Ile Gln Glu Cys Asp Lys Arg Phe

420 425 430

Lys Gln Asp Gly Gly Trp Ser His Trp Ser Pro Trp Ser Ser Cys Ser

435 440 445

Val Thr Cys Gly Asp Gly Val Ile Thr Arg Ile Arg Leu Cys Asn Ser

450 455 460

Pro Ser Pro Gln Met Asn Gly Lys Pro Cys Glu Gly Glu Ala Arg Glu

465 470 475 480

Thr Lys Ala Cys Lys Lys Asp Ala Cys Pro Ile Asn Gly Gly Trp Gly

485 490 495

Pro Trp Ser Pro Trp Asp Ile Cys Ser Val Thr Cys Gly Gly Gly Val

500 505 510

Gln Lys Arg Ser Arg Leu Cys Asn Asn Pro Thr Pro Gln Phe Gly Gly

515 520 525

Lys Asp Cys Val Gly Asp Val Thr Glu Asn Gln Ile Cys Asn Lys Gln

530 535 540

Asp Cys Pro Ile Asp Gly Cys Leu Ser Asn Pro Cys Phe Ala Gly Val

545 550 555 560

Lys Cys Thr Ser Tyr Pro Asp Gly Ser Trp Lys Cys Gly Ala Cys Pro

565 570 575

Pro Gly Tyr Ser Gly Asn Gly Ile Gln Cys Thr Asp Val Asp Glu Cys

580 585 590

Lys Glu Val Pro Asp Ala Cys Phe Asn His Asn Gly Glu His Arg Cys

595 600 605

Glu Asn Thr Asp Pro Gly Tyr Asn Cys Leu Pro Cys Pro Pro Arg Phe

610 615 620

Thr Gly Ser Gln Pro Phe Gly Gln Gly Val Glu His Ala Thr Ala Asn

625 630 635 640

Lys Gln Val Cys Lys Pro Arg Asn Pro Cys Thr Asp Gly Thr His Asp

645 650 655

Cys Asn Lys Asn Ala Lys Cys Asn Tyr Leu Gly His Tyr Ser Asp Pro

660 665 670

Met Tyr Arg Cys Glu Cys Lys Pro Gly Tyr Ala Gly Asn Gly Ile Ile

675 680 685

Cys Gly Glu Asp Thr Asp Leu Asp Gly Trp Pro Asn Glu Asn Leu Val

690 695 700

Cys Val Ala Asn Ala Thr Tyr His Cys Lys Lys Asp Asn Cys Pro Asn

705 710 715 720

Leu Pro Asn Ser Gly Gln Glu Asp Tyr Asp Lys Asp Gly Ile Gly Asp

725 730 735

Ala Cys Asp Asp Asp Asp Asp Asn Asp Lys Ile Pro Asp Asp Arg Asp

740 745 750

Asn Cys Pro Phe His Tyr Asn Pro Ala Gln Tyr Asp Tyr Asp Arg Asp

755 760 765

Asp Val Gly Asp Arg Cys Asp Asn Cys Pro Tyr Asn His Asn Pro Asp

770 775 780

Gln Ala Asp Thr Asp Asn Asn Gly Glu Gly Asp Ala Cys Ala Ala Asp

785 790 795 800

Ile Asp Gly Asp Gly Ile Leu Asn Glu Arg Asp Asn Cys Gln Tyr Val

805 810 815

Tyr Asn Val Asp Gln Arg Asp Thr Asp Met Asp Gly Val Gly Asp Gln

820 825 830

Cys Asp Asn Cys Pro Leu Glu His Asn Pro Asp Gln Leu Asp Ser Asp

835 840 845

Ser Asp Arg Ile Gly Asp Thr Cys Asp Asn Asn Gln Asp Ile Asp Glu

850 855 860

Asp Gly His Gln Asn Asn Leu Asp Asn Cys Pro Tyr Val Pro Asn Ala

865 870 875 880

Asn Gln Ala Asp His Asp Lys Asp Gly Lys Gly Asp Ala Cys Asp His

885 890 895

Asp Asp Asp Asn Asp Gly Ile Pro Asp Asp Lys Asp Asn Cys Arg Leu

900 905 910

Val Pro Asn Pro Asp Gln Lys Asp Ser Asp Gly Asp Gly Arg Gly Asp

915 920 925

Ala Cys Lys Asp Asp Phe Asp His Asp Ser Val Pro Asp Ile Asp Asp

930 935 940

Ile Cys Pro Glu Asn Val Asp Ile Ser Glu Thr Asp Phe Arg Arg Phe

945 950 955 960

Gln Met Ile Pro Leu Asp Pro Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Pro Asn

965 970 975

Trp Val Val Arg His Gln Gly Lys Glu Leu Val Gln Thr Val Asn Cys

980 985 990

Asp Pro Gly Leu Ala Val Gly Tyr Asp Glu Phe Asn Ala Val Asp Phe

995 1000 1005

Ser Gly Thr Phe Phe Ile Asn Thr Glu Arg Asp Asp Asp Tyr Ala

1010 1015 1020

Gly Phe Val Phe Gly Tyr Gln Ser Ser Ser Arg Phe Tyr Val Val

1025 1030 1035

Met Trp Lys Gln Val Thr Gln Ser Tyr Trp Asp Thr Asn Pro Thr

1040 1045 1050

Arg Ala Gln Gly Tyr Ser Gly Leu Ser Val Lys Val Val Asn Ser

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1070 1075 1080

Gly Asn Thr Pro Gly Gln Val Arg Thr Leu Trp His Asp Pro Arg

1085 1090 1095

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1100 1105 1110

His Arg Pro Lys Thr Gly Phe Ile Arg Val Val Met Tyr Glu Gly

1115 1120 1125

Lys Lys Ile Met Ala Asp Ser Gly Pro Ile Tyr Asp Lys Thr Tyr

1130 1135 1140

Ala Gly Gly Arg Leu Gly Leu Phe Val Phe Ser Gln Glu Met Val

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Phe Phe Ser Asp Leu Lys Tyr Glu Cys Arg Asp Pro

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<210> 4

<211> 140

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 4

Met Ala Gly Trp Asn Ala Tyr Ile Asp Asn Leu Met Ala Asp Gly Thr

1 5 10 15

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20 25 30

Ala Ala Val Pro Gly Lys Thr Phe Val Asn Ile Thr Pro Ala Glu Val

35 40 45

Gly Val Leu Val Gly Lys Asp Arg Ser Ser Phe Tyr Val Asn Gly Leu

50 55 60

Thr Leu Gly Gly Gln Lys Cys Ser Val Ile Arg Asp Ser Leu Leu Gln

65 70 75 80

Asp Gly Glu Phe Ser Met Asp Leu Arg Thr Lys Ser Thr Gly Gly Ala

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Pro Thr Phe Asn Val Thr Val Thr Lys Thr Asp Lys Thr Leu Val Leu

100 105 110

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130 135 140