一种人血浆中尼洛替尼含量的检测方法

技术领域

本发明涉及人血浆中尼洛替尼含量检测技术领域，尤其涉及一种人血浆中尼洛替尼含量的检测方法。

背景技术

尼洛替尼(nilotinib，达希纳)是一种新型肿瘤靶向治疗药物，于2009年在中国上市。该药的活性成分是氨基嘧啶衍生物。尼洛替尼能够竞争性抑制Bcr-Abl融合激酶的ATP结合位点-3，特异性抑制Ber-Abl，主要用于Ph+CML慢性期及加速期患者的治疗。其临床应用广泛，也适用于伊马替尼不能耐受或耐药的患者4，在疗效和有效性方面均优于伊马替尼，而且不良反应更小。但由于该药上市时间短，临床基础研究资料相对较少。已有测定人血浆中尼洛替尼的分析方法。主要有紫外561和串联质谱。现有的分析处理方法繁琐，主要采用液液萃取”和固相SPE小柱来处理样品。步骤繁琐，不利于环保，血浆用量大，因此提出一种人血浆中尼洛替尼含量的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人血浆中尼洛替尼含量的检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种人血浆中尼洛替尼含量的检测方法，包括以下步骤：

S1，仪器与材料：仪器：Agilent液相色谱仪/质谱联用仪；试药：尼罗替尼对照品、维拉帕米、乙腈、甲酸、超纯水、血清；

S2，色谱条件：色谱柱：Agilent XDB C

S3，质谱条件：采用电喷雾电离源，雾化气(N

S4，对照品溶液：精密称取5.001mg尼洛替尼对照品粉末，置于5ml量瓶中，以乙腈溶解并定容至刻度摇匀，即得1000μg·ml

S5，内标溶液：精密称取4.54mg维拉帕米对照品粉末，置于2ml量瓶中以乙腈溶解，配制成2.27mg·ml

S6，单次口服灌胃尼洛替尼胶囊(用0.5％羧甲基纤维素钠将去壳后的胶囊粉末溶解制成浓度为4mg·ml混悬液)40mg·kg

优选的，所述S1血清处理精密吸取血清30μ，置于1.5m离心管中，加入内标工作液120μ，涡旋震荡1min,13500r·min离心15min，取上清液80μl，加等体积的水混匀后，放入自动进样瓶中,5μl进样分析。

优选的，所述S1Agilent液相色谱/质谱联用仪，包括G13lIA型四元输液泵，G1322A型脱气机，G1367B型自动进样器，G1316A型柱温箱；C6410B型三重串联四级杆质谱，配有电喷雾源和MassHunter工作站；Millipore Simplicity185型超纯水系统、Vortex Genie2型漩涡混悬器、BR4i高速冷冻离心机。

优选的，所述S1血清为人口服尼洛替尼胶囊后的血浆。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明中，通过本方法血清样品经蛋白质沉淀后，离心后上清与水等比例稀释后进样较单独离心后上清直接进样的色谱峰形好，上清直接进样后峰形不对称，同时本发发的内标维拉帕米响应好，而且能够与尼洛替尼在色谱柱上分离，避免由于化合物在色谱柱上共流出等带来的基质效应，操作步骤相对简捷，快速，血清用量少，且分析时间较短。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例,基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供一种技术方案：

一种人血浆中尼洛替尼含量的检测方法，包括以下步骤：

S1，仪器与材料：仪器：Agilent液相色谱仪/质谱联用仪；试药：尼罗替尼对照品、维拉帕米、乙腈、甲酸、超纯水、血清；

S2，色谱条件：色谱柱：Agilent XDB C

S3，质谱条件：采用电喷雾电离源，雾化气(N

S4，对照品溶液：精密称取5.001mg尼洛替尼对照品粉末，置于5ml量瓶中，以乙腈溶解并定容至刻度摇匀，即得1000μg·ml

S5，内标溶液：精密称取4.54mg维拉帕米对照品粉末，置于2ml量瓶中以乙腈溶解，配制成2.27mg·ml

S6，单次口服灌胃尼洛替尼胶囊(用0.5％羧甲基纤维素钠将去壳后的胶囊粉末溶解制成浓度为4mg·ml混悬液)40mg·kg

所述S1血清处理精密吸取血清30μ，置于1.5m离心管中，加入内标工作液120μ，涡旋震荡1min,13500r·min离心15min，取上清液80μl，加等体积的水混匀后，放入自动进样瓶中,5μl进样分析。

所述S1Agilent液相色谱/质谱联用仪，包括G13lIA型四元输液泵，G1322A型脱气机，G1367B型自动进样器，G1316A型柱温箱；C6410B型三重串联四级杆质谱，配有电喷雾源和MassHunter工作站；Millipore Simplicity185型超纯水系统、Vortex Genie2型漩涡混悬器、BR4i高速冷冻离心机。

通过本方法血清样品经蛋白质沉淀后，离心后上清与水等比例稀释后进样较单独离心后上清直接进样的色谱峰形好，上清直接进样后峰形不对称，同时本发发的内标维拉帕米响应好，而且能够与尼洛替尼在色谱柱上分离，避免由于化合物在色谱柱上共流出等带来的基质效应，操作步骤相对简捷，快速，血清用量少，且分析时间较短。

实施例：仪器与材料：仪器：Agilent液相色谱仪/质谱联用仪；试药：尼罗替尼对照品、维拉帕米、乙腈、甲酸、超纯水、血清；色谱条件：色谱柱：Agilent XDB C18柱(50mm×4.6mm，3.5μm)；Zorbax SB-C8保护柱(2.1mm×12.5mm)；流动相为甲醇(含0.1％甲酸)：水(含0.1％甲酸)＝50：50；等度洗脱，流速为0.35ml·min-1，分析时间4min，进样量为5μl；柱温为35℃；质谱条件：采用电喷雾电离源，雾化气(N2)压力为40psi，干燥气流速(N2)为8L·min-1，驻留时间为200ms，干燥气温度为350℃，正离子方式检测；毛细管电压3500V，扫描方式多为反应监测，尼洛替泥离子对为530.2>289.1，传输能量为150V，碰撞能量为40eV，维拉帕米离子对为455.3>165，传输能量为140V，碰撞能量为29eV；

对照品溶液：精密称取5.001mg尼洛替尼对照品粉末，置于5ml量瓶中，以乙腈溶解并定容至刻度摇匀，即得1000μg·ml-1的尼洛替尼标准贮备液,4℃保存备用，精密吸取尼洛替尼储备液适量，置于10ml量瓶，稀释成50μg·m-1的对照品溶液，然后用50％乙腈逐步稀释，混匀，配制尼洛替尼浓度分别为：50,100,250,500,1000,2500,5000,10000,20000mg·ml-1系列溶液；内标溶液：精密称取4.54mg维拉帕米对照品粉末，置于2ml量瓶中以乙腈溶解，配制成2.27mg·ml-1的内标储备液，取储备液1μl，置于100ml量瓶中，用乙腈定容至浓度为22.7ng·ml-1的内标工作液；血清处理精密吸取血清30μ，置于1.5m离心管中，加入内标工作液120μ，涡旋震荡1min,13500r·min离心15min，取上清液80μl，加等体积的水混匀后，放入自动进样瓶中,5μl进样分析；单次口服灌胃尼洛替尼胶囊(用0.5％羧甲基纤维素钠将去壳后的胶囊粉末溶解制成浓度为4mg·ml混悬液)40mg·kg-1，于给药前和给药后0.25,0.5,1,2,3,4,6,8，10,12,24h从眼眶静脉取血约0.3ml置于离心管中,8000g离心8min，取血清于-40℃放置，待测，计算尼洛替尼的血药浓度，经DAS软件，采用非房室模型，对参数进行计算，通过本方法血清样品经蛋白质沉淀后，离心后上清与水等比例稀释后进样较单独离心后上清直接进样的色谱峰形好，上清直接进样后峰形不对称，同时本发发的内标维拉帕米响应好，而且能够与尼洛替尼在色谱柱上分离，避免由于化合物在色谱柱上共流出等带来的基质效应，操作步骤相对简捷，快速，血清用量少，且分析时间较短。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。