一种阿莫西林原料药的杂质检测方法

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种纳米银杂化硅胶填料所得的液相色谱柱在分离阿莫西林原料药杂质中的应用。

背景技术

阿莫西林，是一种最为常用的半合成青霉素类广谱β-内酰胺类抗生素，为一种白色粉末，阿莫西林杀菌作用强，是目前应用较为广泛的广谱类青霉素之一。

阿莫西林原料药在制备的整个流程中，受工艺条件的限制会产生一定数量的杂质，现公开的杂质包括：杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I、杂质J、杂质K、杂质L、杂质M

基于纳米材料的特殊理化性质，纳米材料与硅胶杂化后形成的硅胶柱能够有效提高对部分复杂化合物的分离效果。中国专利CN107199025A公开了一种掺杂纳米金刚石的有机聚合物色谱填料的制备方法，有效改善了分离效果和峰形。

随着检测技术的发展以及提高药物质量的需求，在不能改善工艺条件的前提下，有必要相对完整的检测出因工艺缺陷所致的各类杂质，过去公知的杂质类型相对较少，所用检测方法具有局限性，有必要提供一种新的检测方法尽可能覆盖更多的杂质，同时要避免诸如分离度低、检测时间过长、专属性低和灵敏度差的问题。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种阿莫西林原料药的杂质检测方法，本方法提供的采用纳米银杂化硅胶填料所得的液相色谱柱可以有效检测阿莫西林杂质，同时结合本发明提供的色谱条件，所得方法专属性强、检测基线噪声稳定、分析时间较短，特别是能有效分离不同的杂质，适用于阿莫西林原料药的质量监测。

本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种阿莫西林原料药的杂质检测方法，包括以纳米银杂化硅胶为填料的液相色谱柱，然后运用高效液相色谱法对阿莫西林原料药中的杂质进行检测：

所述以纳米银杂化硅胶为填料的液相色谱柱的制备方法为：

S1：将纳米银溶胶与经酸化处理的硅胶基质混合，纳米银溶胶与经酸化处理的硅胶基质的体积比为1：4-5，加入过氧化苯甲酸叔丁酯，在75℃下搅拌6小时，静置过夜，抽滤烘干；

S2：将步骤S1所得的产物加入到含十八烷基硫醇的二甲苯溶液中，在反应釜中以80-95℃的条件下反应8-10小时，反应结束后，抽滤烘干，制得成品填料，该填料用于液相色谱柱。

进一步地，所述高效液相色谱法的流动相由流动相A和流动相B组成，其中，流动相A为四丁基碘化铵、冰醋酸和水制得的溶液，流动相B为甲醇与水的混合溶液，梯度洗脱中流动相A和流动相B的体积比为0-95:100-5。

进一步地，流动相A和流动相B混合后超声5-30min。

进一步地，所述高效液相色谱法的色谱条件还包括：检测波长216nm、柱温30℃、流速：0.8mL/min、进样体积：10μL。

进一步地，流动相A中四丁基碘化铵、冰醋酸和水制得的溶液的pH为7-8。

进一步地，所述高效液相色谱法进行梯度洗脱的顺序为：首先以流动相A和流动相B的质量比为95:5等度洗脱，直到阿莫西林峰洗脱完毕，此时开始计时，0-25min，按照流动相的组成渐变为0:100的条件洗脱；25-30min，流动相的组成渐变为95:5，30min后，保持流动相的组成为95:5进行洗脱。

本发明创造性地运用纳米银杂化硅胶填料显著提高了分离效果，按照不同体积比的流动相A四丁基碘化铵和冰醋酸溶液与流动相B为甲醇与水进行梯度洗脱，可以有效改善分离效果并显著提升检测速度。

综上所述，本发明包括以下有益技术效果：

1.本发明提供的一种阿莫西林原料药的杂质检测方法可以同时检测上述阿莫西林的13种杂质，检测范围广，避免了分次操作。

2.本发明方法专属性强、检测基线噪声稳定、分析时间较短，特别是能有效分离不同的杂质，适用于阿莫西林原料药的质量监测。

3.本发明提供的纳米银杂化硅胶填料适用广泛，在其他领域也具有可期望的应用前景。

3.本发明方法设备简单、操作方便、易于普遍推广。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步解释，但是应当注意的是，以下实施例仅用以解释本发明，而不能用来限制本发明，所有与本发明相同或相近的技术方案均在本发明的保护范围之内，且未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料为市售商品。

实施例1

一种阿莫西林原料药的杂质检测方法，包括以纳米银杂化硅胶为填料的液相色谱柱，然后采用高效液相色谱法对阿莫西林原料药中的杂质进行检测，具体包括以下步骤：

所述以纳米银杂化硅胶为填料的液相色谱柱的制备方法为：

S1：将纳米银溶胶与经酸化处理的硅胶基质混合，纳米银溶胶与经酸化处理的硅胶基质的体积比为1：4，加入过氧化苯甲酸叔丁酯，过氧化苯甲酸叔丁酯的量为纳米银溶胶与经酸化处理的硅胶基质混合后体积的5％，在75℃下搅拌6小时，静置过夜，抽滤烘干；

S2：将步骤S1所得的产物加入到含十八烷基硫醇的二甲苯溶液中，二甲苯溶液的量为步骤S1所得的产物质量的2倍，在反应釜中以80℃的条件下反应8小时，反应结束后，抽滤烘干，制得成品填料，该填料用于液相色谱柱。

本实施例的色谱条件是：检测波长216nm、柱温30℃、流速：0.8mL/min、进样体积：10μL、流动相由流动相A与流动相B构成，其中流动相A为四丁基碘化铵、冰醋酸和水制得的溶液，其pH为8；流动相B中甲醇与水的体积比为2:1，流动相A和流动相B混合后超声5min。

本实施例的洗脱方式是：首先以流动相A和流动相B的质量比为95:5等度洗脱，直到阿莫西林峰洗脱完毕，此时开始计时，0-25min，按照流动相的组成渐变为0:100的条件洗脱；25-30min，流动相的组成渐变为95:5，30min后，保持流动相的组成为95:5进行洗脱。

实施例2

一种阿莫西林原料药的杂质检测方法，包括以纳米银杂化硅胶为填料的液相色谱柱，然后采用高效液相色谱法对阿莫西林原料药中的杂质进行检测，具体包括以下步骤：

所述以纳米银杂化硅胶为填料的液相色谱柱的制备方法为：

S1：将纳米银溶胶与经酸化处理的硅胶基质混合，纳米银溶胶与经酸化处理的硅胶基质的体积比为1：5，加入过氧化苯甲酸叔丁酯，过氧化苯甲酸叔丁酯的量为纳米银溶胶与经酸化处理的硅胶基质混合后体积的5％，在75℃下搅拌6小时，静置过夜，抽滤烘干；

S2：将步骤S1所得的产物加入到含十八烷基硫醇的二甲苯溶液中，二甲苯溶液的量为步骤S1所得的产物质量的4倍，在反应釜中以90℃的条件下反应10小时，反应结束后，抽滤烘干，制得成品填料，该填料用于液相色谱柱。

本实施例的色谱条件是：检测波长216nm、柱温30℃、流速：0.8mL/min、进样体积：10μL、流动相由流动相A与流动相B构成，其中流动相A为四丁基碘化铵、冰醋酸和水制得的溶液，其pH为8；流动相B中甲醇与水的体积比为3:2，流动相A和流动相B混合后超声30min。

本实施例的洗脱方式是：首先以流动相A和流动相B的质量比为95:5等度洗脱，直到阿莫西林峰洗脱完毕，此时开始计时，0-25min，按照流动相的组成渐变为0:100的条件洗脱；25-30min，流动相的组成渐变为95:5，30min后，保持流动相的组成为95:5进行洗脱。

实施例3

一种阿莫西林原料药的杂质检测方法，包括以纳米银杂化硅胶为填料的液相色谱柱，然后采用高效液相色谱法对阿莫西林原料药中的杂质进行检测，具体包括以下步骤：

所述以纳米银杂化硅胶为填料的液相色谱柱的制备方法为：

S1：将纳米银溶胶与经酸化处理的硅胶基质混合，纳米银溶胶与经酸化处理的硅胶基质的体积比为1：5，加入过氧化苯甲酸叔丁酯，过氧化苯甲酸叔丁酯的量为纳米银溶胶与经酸化处理的硅胶基质混合后体积的5％，在75℃下搅拌6小时，静置过夜，抽滤烘干；

S2：将步骤S1所得的产物加入到含十八烷基硫醇的二甲苯溶液中，二甲苯溶液的量为步骤S1所得的产物质量的3倍，在反应釜中以95℃的条件下反应9小时，反应结束后，抽滤烘干，制得成品填料，该填料用于液相色谱柱。

本实施例的色谱条件是：检测波长216nm、柱温30℃、流速：0.8mL/min、进样体积：10μL、流动相由流动相A与流动相B构成，其中流动相A为四丁基碘化铵、冰醋酸和水制得的溶液，其pH为8；流动相B中甲醇与水的体积比为3:2，流动相A和流动相B混合后超声15min。

本实施例的洗脱方式是：首先以流动相A和流动相B的质量比为95:5等度洗脱，直到阿莫西林峰洗脱完毕，此时开始计时，0-25min，按照流动相的组成渐变为0:100的条件洗脱；25-30min，流动相的组成渐变为95:5，30min后，保持流动相的组成为95:5进行洗脱。

对比例1

一种阿莫西林原料药的杂质检测方法，通过采用高效液相色谱法对阿莫西林原料药中的杂质进行检测，具体包括以下步骤：

本实施例的色谱条件是：Wondasil C18色谱柱4.6mm*200mm*5u、检测波长216nm、柱温30℃、流速：0.8mL/min、进样体积：10μL、流动相由流动相A与流动相B构成，其中流动相A为四丁基碘化铵、冰醋酸和水制得的溶液，其pH为8；流动相B中甲醇与水的体积比为3:2，流动相A和流动相B混合后超声15min。

本实施例的洗脱方式是：首先以流动相A和流动相B的质量比为95:5等度洗脱，直到阿莫西林峰洗脱完毕，此时开始计时，0-25min，按照流动相的组成渐变为0:100的条件洗脱；25-30min，流动相的组成渐变为95:5，30min后，保持流动相的组成为95:5进行洗脱。

与实施例3不同的是，对比例1没有使用纳米银杂化硅胶填料所得的液相色谱柱。

对比例2

一种阿莫西林原料药的杂质检测方法，包括以纳米银杂化硅胶为填料的液相色谱柱，然后运用高效液相色谱法进行检测，具体包括以下步骤：

所述以纳米银杂化硅胶为填料的液相色谱柱的制备方法为：

S1：将纳米银溶胶与经酸化处理的硅胶基质混合，纳米银溶胶与经酸化处理的硅胶基质的体积比为1：5，加入过氧化苯甲酸叔丁酯，过氧化苯甲酸叔丁酯的量为纳米银溶胶与经酸化处理的硅胶基质混合后体积的5％，在75℃下搅拌6小时，静置过夜，抽滤烘干；

S2：将步骤S1所得的产物加入到含十八烷基硫醇的二甲苯溶液中，二甲苯溶液的量为步骤S1所得的产物质量的3倍，在反应釜中以95℃的条件下反应9小时，反应结束后，抽滤烘干，制得成品填料，该填料用于液相色谱柱。

本实施例的色谱条件是：检测波长216nm、柱温30℃、流速：0.8mL/min、进样体积：10μL、流动相由流动相A与流动相B构成，其中流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液；流动相B中甲醇与水的体积比为3:2，流动相A和流动相B混合后超声15min。

本实施例的洗脱方式是：首先以流动相A和流动相B的质量比为95:5等度洗脱，直到阿莫西林峰洗脱完毕，此时开始计时，0-25min，按照流动相的组成渐变为0:100的条件洗脱；25-30min，流动相的组成渐变为95:5，30min后，保持流动相的组成为95:5进行洗脱。

与实施例3不同的是，对比例2流动相A改为磷酸二氢钾溶液。

试验例1、杂质分离效果测试试验方法：在采用实施例1-3及对比例1-2的阿莫西林原料药的杂质检测方法下对可分离杂质数及实验重复性进行测试，试验结果如表1所示。

表1-杂质分离效果

由表1可以看出，采用本发明实施例1-3阿莫西林原料药的杂质检测方法可完全分离目前已公开的13种杂质，而按照对比例1或对比例2的方法不能一次检出所有杂质，由此可见，本发明色谱条件稳定，实验重复性好，RSD值小于2％，具有较高的柱效。