3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯的注射制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于生物医药以及药物制剂领域，具体涉及3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯的注射制剂及其制备方法。

背景技术

注射剂是指药物制成的供注入体内的无菌溶液(包括乳浊液和混悬液)以及供临用前配成溶液或混悬液的无菌粉末或浓溶液。自1985年首个长效注射微球Lupron问世后，注射剂产品不断推陈出新，出现纳米粒、脂质体等新型注射剂。目前已上市的注射剂产品种类繁多，注射纳米粒有紫杉醇Abraxane等；注射脂质体有多柔比星Myocet、阿糖胞苷Depocyt等；注射微球有奥曲肽Sandostatin Lar、曲普瑞林Trelstar等；注射混悬剂有阿立哌唑AbilifyMaintena、亮丙瑞林Eligard等。注射剂作为一种特殊的药物剂型，具有作用迅速、不受消化系统影响、无首过效应等优点，不仅作用于全身，还可局部定位，特别适用于不宜口服的药物和不能口服的病人。脂质体注射剂、混悬液注射剂、微球注射剂、纳米粒注射剂以及包合物注射剂等新剂型的开发应用，还可以实现药物的缓控释，减少注射次数，提高疗效，降低不良反应。

3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯可以做成注射制剂，但目前尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种全新的具有药理活性的3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯注射用药物制剂及其制备方法。

所述药理活性物质3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯可以被制成注射制剂，所述注射制剂包括但不仅限于蛋白纳米粒、环糊精包含物、脂质体、微球、储库型控释注射剂或无针注射释药系统。

进一步地，所述注射制剂的粒径在5-5000nm。

3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯的注射制剂的制备方法，所述蛋白纳米粒的制备步骤包括：a、用水溶液或盐溶液溶解蛋白，溶液中可加入增溶剂；b、加热使蛋白变性，随后加入3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯的乙醇或甲醇有机溶液，在蛋白复性、再折叠或自组装过程中，将3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯包入其中，形成蛋白纳米粒。

进一步地，所述蛋白为白蛋白、血红蛋白、转铁蛋白、胰岛素、血管内皮抑素、肌红蛋白、溶菌酶、免疫球蛋白、纤维连接蛋白、纤层蛋白、胶原蛋白或人造多肽与蛋白中的一种或多种；所述增溶剂为聚山梨酯类；所述步骤b制得的蛋白纳米粒再经过透析除去多余的小分子化合物及增溶剂，浓缩提高蛋白纳米粒浓度，冷冻干燥形成固体制剂；所述蛋白与3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯的质量比为(1～50):(1～40)。

3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯的注射制剂的制备方法，所述环糊精包含物的制备步骤包括：a、用水溶液或盐溶液溶解环糊精；b、加热以及搅拌条件下，随后缓慢加入3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯的乙醇或甲醇有机溶液，超声处理，使3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯包入环糊精中，形成环糊精包含物。

进一步地，所述环糊精包括但不限于α-环糊精、β环糊精、甲基-β-环糊精、γ-环糊精、羟丙基-β-环糊精或环糊精与其他基团的交联产物中的一种或多种；所述环糊精与3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯的质量比为(400～800):(10～55)。

进一步地，所述脂质体的制备步骤包括：a、磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000以及3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯溶于氯仿或氯仿与甲醇的混合物；b、30℃下旋转蒸发，随后加入水溶液或盐溶液溶解，超声处理后得脂质体。

进一步地，所述磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000以及3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯的质量比为：(5～20)：(1.5～6)：(1～3):(1～4)。

本发明获得的有益效果为：本发明提供了3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯的抗肿瘤注射制剂的制备方法。将3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯做成抗肿瘤注射制剂，可以提高3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯的水溶性浓度，增强其对肿瘤的靶向性和杀伤作用。

附图说明

图1为本发明中3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯白蛋白纳米粒、环糊精包含物以及脂质体的粒径图；

图2为本发明中白蛋白纳米粒、环糊精包含物以及脂质体对3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯的包封率；

图3为本发明中不同批次3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯白蛋白纳米粒的包封率；

图4为本发明中3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯白蛋白纳米粒的稳定性。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。

3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯的注射制剂，所述3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯可以被制成粒径在5-5000nm的注射制剂，所述注射制剂包括但不仅限于蛋白纳米粒、环糊精包含物、脂质体、微球、胶束、储库型控释注射剂或无针注射释药系统。

3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯的蛋白纳米粒的制备步骤包括：a、用水溶液或盐溶液溶解蛋白，溶液中可加入增溶剂；b、加热使蛋白变性，随后加入3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯的乙醇或甲醇有机溶液，在蛋白复性、再折叠或自组装过程中，将3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯包入其中，形成蛋白纳米粒，制得的蛋白纳米粒再经过透析除去多余的小分子化合物及增溶剂，浓缩提高蛋白纳米粒浓度，冷冻干燥形成固体制剂。

蛋白为白蛋白、血红蛋白、转铁蛋白、胰岛素、血管内皮抑素、肌红蛋白、溶菌酶、免疫球蛋白、纤维连接蛋白、纤层蛋白、胶原蛋白或人造多肽与蛋白中的一种或多种；所述增溶剂为聚山梨酯类。

3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯的环糊精包含物的制备步骤包括：a、用水溶液或盐溶液溶解环糊精；b、加热以及搅拌条件下，随后缓慢加入3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯的乙醇或甲醇有机溶液，超声处理，使3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯包入环糊精中，形成环糊精包含物。所述环糊精包括但不限于α-环糊精、β环糊精、甲基-β-环糊精、γ-环糊精、羟丙基-β-环糊精或环糊精与其他基团的交联产物中的一种或多种。

3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯脂质体的制备步骤包括：a、磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000以及3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯溶于氯仿或氯仿与甲醇的混合物；b、30℃下旋转蒸发，随后加入水溶液或盐溶液溶解，超声处理后得脂质体。

具体实施例：

实施例1. 3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯白蛋白纳米粒的制备

2.5mg白蛋白溶于1000μL的含0.5％吐温80的水溶液中，65℃搅拌的条件下，加入25mM的3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯溶液100μL。过夜透析，得到的白蛋白纳米粒悬液透明，粒径分布为60-120nm。

实施例2. 3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯白蛋白纳米粒的DLS表征

对按照本发明制备的3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯白蛋白纳米粒进行动态光散射(DLS)分析，所用仪器为Nanobrook 90Plus Zata纳米粒分析仪，所得纳米粒平均粒径为87.24nm(图1)。

实施例3. 3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯白蛋白纳米粒的包封率检测

100μL 3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯白蛋白纳米粒加入到900μL纯乙腈中破乳，0.22μM微孔滤膜过滤后用非极性固定相C18色谱柱测定包封率，流动相为纯乙腈：0.05％磷酸水溶液(85：15)，检测波长为210nm。HPLC分析表明本实验的3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯包封率为90.81％(图2)。

实施例4. 3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯甲基β环糊精包含物的制备

655mg甲基β环糊精溶于10mL水中，白蛋白溶于1000μL的含0.5％吐温80的水溶液中，65℃搅拌条件下，缓慢加入25mM的3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯乙醇溶液100μL。继续搅拌2小时，3000rpm离心10min，去除沉淀，即得包含物。

实施例5. 3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯环糊精包含物的DLS表征

对按照本发明制备的3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯环糊精包含物进行动态光散射(DLS)分析，所用仪器为Nanobrook 90Plus Zata纳米粒分析仪，所得纳米粒平均粒径为87.94nm(图1)。

实施例6. 3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯环糊精包含物的包封率检测

100μL 3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯白蛋白纳米粒加入到900μL纯乙腈中破乳，0.22μM微孔滤膜过滤后用非极性固定相C18色谱柱测定包封率，流动相为纯乙腈：0.05％磷酸水溶液(85：15)，检测波长为210nm。HPLC分析表明本实验的3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯包封率为0.11％(图2)。

实施例7. 3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯脂质体的制备

将10mg DSPC、3.6mg胆固醇、1.2mg DSPE-PEG2000溶于4ml三氯甲烷中，2mg 3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯溶于1ml甲醇中。两者混合后，30℃旋转蒸干，随后加入10ml蒸馏水溶解。超声后即得脂质体。

实施例8. 3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯脂质体的DLS表征

对按照本发明制备的3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯脂质体进行动态光散射(DLS)分析，所用仪器为Nanobrook 90Plus Zata纳米粒分析仪，所得纳米粒平均粒径为235.31nm(图1)。

实施例9. 3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯脂质体的包封率检测

100μL 3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯脂质体加入到900μL纯乙腈中破乳，0.22μM微孔滤膜过滤后用非极性固定相C18色谱柱测定包封率，流动相为纯乙腈：0.05％磷酸水溶液(85：15)，检测波长为210nm。HPLC分析表明本实验的3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯包封率为8.08％(图2)。

实施例10. 3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯白蛋白纳米粒制备方法稳定性考察

按照本发明制备方法分批制备白蛋白纳米粒，并对制得的白蛋白纳米粒进行粒径和包封率表征，不同批次制备的白蛋白纳米粒包封率稳定在80％左右(图3)。

实施例11. 3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯白蛋白纳米粒的制剂稳定性考察

对按照本发明制备的白蛋白纳米粒进行稳定性考察，得到的3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯白蛋白纳米粒分别用水，生理盐水，小牛血清和DMEM高糖培养基稀释，3-硼酸苯基-1-胺基甲酸胆固醇酯浓度为1mg/ml。在37℃放置24小时后，纳米粒的平均粒径没有变化，且没有沉淀产生(图4)。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。