一种减少柱状黄杆菌培养过程中成团培养基

技术领域

本发明涉及一种培养基，特别是涉及一种减少柱状黄杆菌培养过程中成团培养基。

背景技术

草鱼是我国淡水养殖的主要品种，占淡水养殖产量25％以上，2018年我国草鱼的养殖产量约534万吨，每年由病害造成损失近21亿元。柱状黄杆菌属革兰氏阴性菌，感染包括草鱼、清鱼、鲫鱼、鳜鱼、鮰鱼、鲈鱼等海淡水鱼类近20多科。由柱状黄干菌引起草鱼烂鳃病近些年全国范围内均有爆发，是草鱼养殖中最严重的“老三病”之一。随着国家对水产抗生素使用监管趋于严格，具有预防性、安全性特征的水产细菌疫苗近年愈发受到国家和科研单位重视。

草鱼柱状黄杆菌分离和流行病学调查作为其疫苗研发的关键因素之一，但柱状黄杆菌在生长过程中易成团，无法均匀分散在培养基中，在疫苗注射过程中易造成堵针。

发明内容

本发明提供了一种减少柱状黄杆菌培养过程中成团培养基，以降低柱状黄杆菌的成团，方便进行后续的使用。

本发明提供了一种减少柱状黄杆菌培养过程中成团培养基，包括下列成份：无机盐0.5-1g/L、蛋白胨4-5g/L、添加比例为1/1000-1/30000L/L的吐温、0.1-1％的血清，所述无机盐由乙酸钠、二水氯化钡、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、二水氯化钙、七水硫酸亚铁、碳酸氢钠中的一种或多种组成。

进一步地，所述无机盐包括：乙酸钠0.02g/L，二水氯化钡0.01g/L，磷酸氢二钾0.1g/L，磷酸二氢钾0.05g/L，七水硫酸镁0.6g/L，二水氯化钙0.0067g/L，七水硫酸亚铁0.002g/L，碳酸氢钠0.05g/L。

进一步地，所述减少柱状黄杆菌培养过程中成团培养基还包括除菌剂100-500μg/mL，所述除菌剂由多粘菌素、妥布霉素、达托霉素、万古霉素中的一种或多种组成。

更进一步地，所述除菌剂包括多粘菌素140-200U/mL、妥布霉素2-5μg/mL、达托霉素100-200μg/mL、万古霉素2-10μg/mL。

进一步地，所述减少柱状黄杆菌培养过程中成团培养基还包括酵母提取物0.4-0.5g/L。

进一步地，所述蛋白胨为胰蛋白胨。

本发明相对于现有技术，通过添加吐温，可有效降低柱状黄杆菌的成团情况，使柱状黄杆菌可均匀在培养基上成长，方便后续的使用。

附图说明

图1为本发明实施例1、对照例1及对照例2的平板菌落培育图；

图2为本发明实施例1、对照例1及对照例2的生长速率统计图。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。

实施例1

本发明实施例1的培养基组份包括乙酸钠0.02g/L，二水氯化钡0.01g/L，磷酸氢二钾0.1g/L，磷酸二氢钾0.05g/L，七水硫酸镁0.6g/L，二水氯化钙0.0067g/L，七水硫酸亚铁0.002g/L，碳酸氢钠0.05g/L，胰蛋白胨5g/L，添加比例为1/5000L/L的吐温，血清1％，。

实施例2

本发明实施例2的培养基组份包括乙酸钠0.02g/L，二水氯化钡0.01g/L，磷酸氢二钾0.1g/L，磷酸二氢钾0.05g/L，七水硫酸镁0.6g/L，二水氯化钙0.0067g/L，七水硫酸亚铁0.002g/L，碳酸氢钠0.05g/L，胰蛋白胨5g/L，添加比例为1/4000L/L的吐温，血清1％。

实施例3

本发明实施例3的培养基组份包括乙酸钠0.02g/L，二水氯化钡0.01g/L，磷酸氢二钾0.1g/L，磷酸二氢钾0.05g/L，七水硫酸镁0.6g/L，二水氯化钙0.0067g/L，七水硫酸亚铁0.002g/L，碳酸氢钠0.05g/L，胰蛋白胨5g/L，添加比例为1/3000L/L的吐温，血清1％。

实施例4

本发明实施例4的培养基组份包括乙酸钠0.02g/L，二水氯化钡0.01g/L，磷酸氢二钾0.1g/L，磷酸二氢钾0.05g/L，七水硫酸镁0.6g/L，二水氯化钙0.0067g/L，七水硫酸亚铁0.002g/L，碳酸氢钠0.05g/L，胰蛋白胨5g/L，添加比例为1/30000L/L的吐温，血清1％。

实施例5

本发明实施例5的培养基组份包括乙酸钠0.02g/L，二水氯化钡0.01g/L，磷酸氢二钾0.1g/L，磷酸二氢钾0.05g/L，七水硫酸镁0.6g/L，二水氯化钙0.0067g/L，七水硫酸亚铁0.002g/L，碳酸氢钠0.05g/L，胰蛋白胨5g/L，酵母提取物0.5g/L，血清0.6％，多粘菌素200U/mL，妥布霉素5μg/mL，达托霉素150μg/mL，万古霉素10μg/mL，添加比例为1/5000L/L的吐温。

对照例1

本发明对照例的培养基组份包括乙酸钠0.02g/L，二水氯化钡0.01g/L，磷酸氢二钾0.1g/L，磷酸二氢钾0.05g/L，七水硫酸镁0.6g/L，二水氯化钙0.0067g/L，七水硫酸亚铁0.002g/L，碳酸氢钠0.05g/L，胰蛋白胨5g/L。

对照例2

本发明对照例的培养基组份包括乙酸钠0.02g/L，二水氯化钡0.01g/L，磷酸氢二钾0.1g/L，磷酸二氢钾0.05g/L，七水硫酸镁0.6g/L，二水氯化钙0.0067g/L，七水硫酸亚铁0.002g/L，碳酸氢钠0.05g/L，胰蛋白胨5g/L，添加比例为1/40000L/L的吐温。

取实施例1及对照例1、对照例2的培养基在常规的培养条件下进行培育，并进行OD值计算及染色，如图1、图2所示，获得柱状黄杆菌的生长情况及成团情况。

本发明实施例通过采用0.02g/L乙酸钠、0.002g/L硫酸亚铁、0.6g/L硫酸镁，提高了柱状黄杆菌的生长率；如图1所示，本发明实施例1与对照例1、2相比，通过添加比例为1/5000L/L的吐温，有效降低了柱状黄杆菌成团情况，在作为疫苗使用时，无明显堵针情况发生。同时，本发明实施例1通过采用1％的血清及1/5000L/L的吐温，与对照例1、对照例2相比，可有效提高柱状黄杆菌的生长速度，如图2所示，在常规条件下培育10小时后，柱状黄杆菌的OD值可达0.600以上，而对照例1柱状黄杆菌的OD值在0.600以下，对照例2柱状黄杆菌的OD值更在0.400以下。此外，本发明实施例5不仅具有良好的分散效果，且通过采用多粘菌素、妥布霉素、达托霉素、万古霉素组合，可有效提高对杂菌的抑制。

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解，技术人员阅读本申请说明书后依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者等同替换，但这些修改或变更均未脱离本发明申请待批权利要求保护范围之内。