一种小分子含硫杂环化合物

技术领域

本发明涉及小分子化合物领域，具体地，涉及一种小分子含硫杂环化合物及其用于治疗青光眼的应用。

背景技术

Rho-相关的卷曲螺旋型蛋白激酶(ROCK)，属于丝氨酸-苏氨酸激酶的AGC(PKA/PKG/PKC)家族。已经描述了ROCK的两种人同种型，ROCK-I(也被称作p160ROCK或ROKβ)和ROCK-II(ROKα)是大约160kDa蛋白，其含有一个N-端Ser/Thr激酶结构域，继之以一个卷曲螺旋结构、一个普列克底物蛋白同源性结构域和在C-端处的一个富含半胱氨酸的区域(Multifunctional kinases in cell behaviour.Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2003(4):446-456)。

Rho属于小分子单聚体GTPase超家族，是Ras超家族的哺乳动物基因同系物，通过其下游最主要的效应分子Rho激酶(Rho-associated coiled-coil containing proteinkinase，ROCK)，来调节细胞肌动蛋白骨架的重组，从而广泛参与细胞有丝分裂、细胞骨架调整、平滑肌细胞收缩、神经再生、肿瘤细胞浸润、细胞凋亡的调节等一系列生物学过程。Rho/ROCK激活后可以作用于多种底物，从而产生生物学过程。最主要的两种底物是肌球蛋白轻链(MLC)和肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)，MLC的磷酸化水平是决定平滑肌收缩程度的一个重要因素。肌球蛋白轻链激酶(MLCK)磷酸化MLC的Ser-19位点，导致平滑肌收缩；MLCP的抑制可以使MLC的磷酸化和平滑肌的收缩进一步增强。ROCK被激活以后，本身可以将MLC磷酸化而发生肌丝收缩作用；同时也能将MLCP磷酸化，使MLCP失活，导致细胞胞浆内MLC磷酸化程度增高，间接促进肌丝收缩。

在动物模型中Rho激酶活性的抑制展现出治疗人类疾病的多种益处，包括心血管疾病如肺动脉高压、高血压、动脉粥样硬化、心脏肥大、高眼压、脑缺血、脑血管痉挛等，和中枢神经系统病症如神经元变性等，以及肿瘤。研究表明ROCK表达和活性在自发性高血压大鼠中有所升高，说明其与这些动物高血压的发生具有关联(Involvement of Rho-kinasein hypertensive vascular disease:a novel therapeutic target inhypertension.FASEB J.,2001,15(6):1062-4)。ROCK抑制剂Y-27632可使三种大鼠高血压模型(自发性高血压、肾性高血压、醋酸脱氧皮质酮盐型高血压)中的血压显著降低，而对对照大鼠的血压作用较小(Calcium sensitization of smooth muscle mediated by aRho-associated protein kinase in hypertension[J].Nature,1997,389(6654):990-4)。也有研究表明ROCK抑制剂对肺动脉高压具有较好的作用(Acute vasodilator effectsof a Rho-kinase inhibitor,fasudil in patients with severe pulmonaryhypertension.Heart,2005:91(3):391-2)。

ROCK活性是白血球-血小板-内皮相互作用、白血球外渗和水肿中的重要信号传递机制。内皮细胞中Rho激酶的过度活化会造成有利于炎症细胞募集的细胞-细胞连接部的破坏所引起的泄漏。总之，这些证据指出了ROCK在与急性和慢性炎症有关的病理学状况以及自身免疫疾病中的作用(Isoform-specific targeting of ROCK proteins in immunecells.Small GTPases.2016；7(3):173-177)。ROCK抑制在类风湿性关节炎和狼疮的实验模型中的有益效果的得到动物实验的验证(Rho kinase inhibitors and theirapplication to inflammatory disorders.Curr.Top.Med.Chem.2009(9)：704-723；Antinociceptive effects of AS1892802,a novel rho kinase inhibitor,in ratmodels of inflammatory and noninflammatory arthritis.J.Pharmacol.Exp.Ther.2010,334：955-963；Administration of fasudil,a ROCK inhibitor,attenuates diseasein lupus-prone NZB/W F1 female mice.Lupus.2012；21(6):656-61)。法舒地尔对T-细胞迁移的抑制作用可能扩大它作为多发性硬化的新疗法的临床应用(Therapeuticpotential of experimental autoimmune encephalomyelitis by Fasudil,a Rhokinase inhibitor.J Neurosci Res.2010；88(8):1664-72)。累积的证据也证实，ROCK在调节炎性肠病(IBD)的发病机制的3个疾病因素中起关键作用：肠屏障的破坏，肠内容物向粘膜免疫细胞的暴露，和异常的免疫应答(Role of Rho kinase signal pathway ininflammatory bowel disease.Int J ClinExp Med.2015；8(3):3089-3097)。

目前已上市的ROCK抑制剂药物有Asahi Kasei公司的Eril(适用于脑血管痉挛的治疗)；Kowa公司的Glanatec(适用于高眼压症和青光眼的治疗，仅在日本获批),美国Aerie公司的青光眼新药Rhopressa(netarsudil)2017年在美国获批用于治疗罹患开角型青光眼或高眼压的患者，降低他们的眼内压。Rhopressa是一款全新的每日一次滴眼液。

因此，进行开发作用于ROCK的靶向小分子药物研究，得到活性更好、选择性更高、更低毒性和副作用、更经济的ROCK抑制剂，具有十分重要的社会和经济意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型的对ROCK激酶有高活性的抑制剂及其制备方法和用途。

本发明提供了一种含硫的杂环化合物，其特征在于：为由如下结构式所示的化合物或其立体异构体，几何异构体，互变异构体，消旋体，氘代同位素衍生物，水合物，溶剂化物，代谢产物以及药学上可接受的盐或前药；

其中，环A为芳基或杂芳基；

B为并环杂芳基，含一个N原子和一个流原子；

R

R

R

或者，R

R

其优选结构可以为：

上述R

其中，R

在本发明中取代的烷基指烷基碳链上的氢原子中的一个或一个以上为其他基团所取代，此处所指的其他基团可以为羟基、环烷基(以类似于

在本发明中取代或未取代的杂烷基指：指在上述取代或未取代的烷基的基础上，其碳链上的一个或多个碳原子为氧、硫、氮所替代。

在本发明中取代的环烷基指环基环上的一个或多个氢原子为其他基团所取代，此处所指的其他基团可以为烷基、取代的烷基(同上)、卤素(F，Cl，Br，I)、羧基、氰基(-CN)、磺酰基(-SO

在本发明中取代或未取代的杂环烷基指：指在上述取代或未取代的环烷基的基础上，其环上的一个或多个碳原子为氧、硫、氮所替代。

在本发明中取代的烷氧基指烷氧基(

上述一种含硫的杂环化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物，用于制备ROCK抑制剂类药物，用于制备治疗心血管疾病、高眼压症、肺动脉高压、青光眼药物。

具体方法为：以上述化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

此外，本发明还提供了上述含硫杂环衍生物的制备方法，其特征在于，具体反应方程式如下：

其中，Re选自烷基，Prot是胺基保护基团。

上述反应的具体过程可以为：如式IV-1和IV-2显示的化合物可以从直接购得，或通过已知的常见合成方法获得。式IV-1与式IV-2可以在碱性(如K

Prot是胺基保护基团。

上述反应的具体过程可以为：式Interm B所显示的化合物可以通过已知的方法合成得到(如US2007/112019，Journal of Medicinal Chemistry,2003,vol.46,p.3354–3370，US2002/86891等所披露发方法)。式Interm B所显示的化合物在碱性(如三乙胺，吡啶)条件下和三氟甲磺酸酐反应得到式V-1所显示的化合物。V-1所显示的化合物用钯催化的胺化反应得到式V-2所显示的化合物。水解V-2则得到式V-3所显示的化合物。式V-3和式Interm A显示的化合物反应得到式V-4所显示的化合物。脱保护得到式IIIb1所显示对化合物，式IIIb1进行单或双烷基化形成式IIIb2所显示的化合物。

具体实施方式

在下述实施例中进一步详细公开了一些实施方案，这些实施例并不意图以任何方式限制所述权利要求的范围。

实施例1

3-氨基-2-(4-(羟甲基)苯基)-N-(1H-吲唑-6-基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

步骤A：2-(4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)乙酸甲酯(化合物1.1)

将2-(4-(羟甲基)苯基)乙酸甲酯(5.0g,27.8mmol)和咪唑(2.8g,41.7mmol)溶于50mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入叔丁基二甲基氯硅烷(5.0g,33.4mmol)，在室温下反应过夜。TLC监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物1.1(8.1g，产率：98％)。

步骤B：2-(4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸甲酯(化合物1.2)

将化合物1.1(3.0g,10.2mmol)溶于10mL无水四氢呋喃中,氮气置换，干冰丙酮降温至-78℃，缓慢滴加六甲基二硅基胺基锂(1.0M，12.2mL,12.2mmol),滴加完成后体系于-78℃搅拌1小时，将N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(2.9g,12.2mmol)溶于10mL四氢呋喃中，慢慢滴加到体系中，控制滴加温度低于-70℃，滴加结束后反应保持在-78℃下搅拌3小时，TLC监测反应完全。加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物1.2(3.6g,产率：78％)。

步骤C：2-((2-(4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)-2-羧乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物1.3)

将化合物1.2(3.6g,8.0mmol)溶于100mL四氢呋喃和30mL水中,在0℃下加入氢氧化锂一水合物(1.0g,24.0mmol)，于0℃下搅拌3小时，LCMS监测反应完全。减压蒸出有机溶剂，用1M的盐酸水溶液调pH至3-4，然后用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得粗产物1.3(3.4g，产率：93％)。LCMS ESI(+)m/z：458.2(M+1).

步骤D：2-(4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸(化合物1.4)

将化合物1.3(3.4g,7.4mmol)，1-羟基苯并三唑(0.9g,7.4mmol)和三乙胺(2.2g,22.2mmol)溶于10mL二氯甲烷中,氮气保护，降温至0℃，然后向反应液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(1.4g,7.4mmol)，搅拌一段时间，反应液变澄清，缓慢升温至室温，反应过夜。TLC监测反应完全。加水稀释反应液，用二氯甲烷(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物1.4(1.5g,产率：46％)。

步骤E：2-(4-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(1H-吲唑-6-基)丙酰胺(化合物1.5)

将化合物1.4(100mg,0.23mmol)溶于2mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(61mg,0.32mmol),4-二甲氨基吡啶(39mg,0.32mmol)和6-氨基吲唑(36mg,0.27mmol)，在室温下反应2小时。TLC监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物1.5(50mg，产率：39％)。

步骤F：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(羟基甲基)苯基)-N-(1H-吲唑-6-基)丙酰胺(化合物1.6)

将化合物1.5(50mg,0.09mmol)溶于5mL四氢呋喃中，然后加入5mL盐酸水溶液(1.0M)，在室温下反应30分钟。LCMS监测反应完全。反应完后加入饱和碳酸氢钠溶液中和，然后用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和的食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得到粗产物1.6(15mg，产率：33％)。LCMS ESI(+)m/z:441.1(M+1).

步骤G：3-氨基-2-(4-(羟甲基)苯基)-N-(1H-吲唑-6-基)丙酰胺(化合物1)

将化合物1.6(15mg,0.03mmol)溶于2mL甲胺乙醇溶液中，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于2mL的甲醇中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例1(9.2mg，产率：77％)。LCMS ESI(+)m/z:311.1(M+1).

实施例2

3-氨基-N-(苯并[d]异噻唑-6-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

步骤A：6-甲氧基苯并[d]异噻唑(化合物2.1)

将2-氟-4-甲氧基苯甲醛(20.0g,130.0mmol)溶于50mL 2-甲氧基乙醇中，然后加入硫(4.1g,130.0mmol)和50mL氨水，在160℃下反应2小时。LCMS监测反应完全。加入水稀释反应液，用二氯甲烷(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物16.1(12.7g，产率：59％)。LCMS ESI(+)m/z:166.0(M+1).

步骤B：苯并[d]异噻唑-6-醇(化合物2.2)

将化合物2.1(12.7g,77.0mmol)溶于100mL二氯甲烷中，然后在0℃下慢慢滴加三溴化硼(14.5mL,154.0mmol)，在室温下反应5小时。TLC监测反应完全。反应完全后将反应液慢慢倒入冰水中，用二氯甲烷(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得到粗产物2.2(11.5g，产率：98％)。

步骤C：苯并[d]异噻唑-6-基三氟甲磺酸盐(化合物2.3)

将化合物2.2(11.5g,76.0mmol)溶于二氯甲烷中，在-78℃下滴加二异丙基乙胺(48mL,129.0mmol)和三氟甲磺酸酐(20mL,114.0mmol),使反应在-78℃下反应1小时。LCMS监测反应完全。加入饱和氯化铵淬灭反应，用二氯甲烷(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物2.3(8.1g，产率：38％)。LCMS ESI(+)m/z:284.0(M+1).

步骤D：N-(二苯基亚甲基)苯并[d]异噻唑-6-胺(化合物2.4)

将化合物2.3(8.1g,28.6mmol),磷酸钾(9.1g,42.9mmol)，二苯甲酮亚胺(6.4g,35.8mmol)和2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(2.7g,5.7mmol)溶于乙二醇二甲醚中，在氮气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(2.6g,2.8mmol)。在90℃和氮气保护下反应过夜。LCMS监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物2.4(8.4g，产率：93％)。LCMS ESI(+)m/z:315.1(M+1).

步骤E：苯并[d]异噻唑-6-胺(化合物2.5)

将化合物2.4(8.4g,26.7mmol)溶于50mL四氢呋喃中，在室温下加入50mL盐酸水溶液(2.0M)。在室温下反应过夜。LCMS监测反应完全。反应完后用乙酸乙酯萃取除去杂质，水相用饱和碳酸氢钠中和，用乙酸乙酯(50mLX3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，得到粗产物2.5(1.5g，产率：37％)。LCMS ESI(+)m/z:151.0(M+1).

步骤F：N-(苯并[d]异噻唑-6-基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物2.6)

将3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酸(62mg,0.20mmol)溶于5mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后依次加入2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(114mg,0.30mmol)和N，N-二异丙基乙胺(52mg,0.40mmol)，在室温下搅拌5分钟，再加入化合物18.5(36mg,0.24mmol)，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(10mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物2.6(82mg，产率：93％)。LCMS ESI(+)m/z:442.1(M+1)。

步骤G：3-氨基-N-(苯并[d]异噻唑-6-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物2)

将化合物2.6(82mg,0.18mmol)溶于5mL甲胺乙醇溶液中，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于2mL的甲醇中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例2(1.3mg，产率：2％)。LCMS ESI(+)m/z:312.1(M+1).

实施例3

3-氨基-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

将5-溴噻吩-2-甲醛(1.0g,5.2mmol)和氨基乙醛二甲基缩醛(546mg,5.2mmol)溶于10mL甲苯中，加热回流3小时，并用分水器除去反应生成的水，TLC监测反应完全，将反应液减压浓缩得到粗产物3.1(1.4g，产率：100％)。

步骤B：((5-溴噻吩-2-基)(二甲氧基磷酰基)甲基)(2,2-二甲氧基乙基)氨基甲酸乙酯(化合物3.2)

将化合物3.1(1.4g,5.2mmol)溶于10mL四氢呋喃中，在冰盐浴下滴加氯甲酸甲酯(561mg,5.2mmol)，搅拌5分钟后去掉冰盐浴，在室温下加入亚磷酸三甲酯(645mg,5.2mmol)，在室温下反应过夜。TLC监测反应完全，减压浓缩得到粗产物3.2(2.4g，产率：100％)。

步骤C：2-溴噻吩并[2,3-c]吡啶(化合物17.3)

将化合物3.2(2.4g，5.2mmol)溶于10mL二氯甲烷中，在冰浴下慢慢滴加四氯化钛(3.5mL，31.2mmol)，在40℃下反应24小时。LCMS监测反应完全，反应完后将反应液慢慢倒入20mL冰水和10mL氨水混合物中，用硅藻土过滤除去反应生成的二氧化钛，并用二氯甲烷洗涤滤饼，滤液用二氯甲烷(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物3.3(583mg，产率：52％)。LCMS ESI(+)m/z:213.9(M+1，215.9(M+1)).

步骤D：N-(二苯基亚甲基)噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(化合物3.4)

将化合物3.3(583mg，2.7mmol)，二苯甲酮亚胺(579mg，3.2mmol),1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(336mg，20mol％)和叔丁醇钾(365mg，3.8mmol)溶于10mL甲苯中，在氮气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(247mg,10mol％)。在80℃和氮气保护下反应过夜。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩柱层析纯化得产物3.4(471mg，产率：54％)。LCMS ESI(+)m/z:315.1(M+1).

步骤E：噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(化合物3.5)

将化合物3.4(471mg,1.5mmol)溶于5mL四氢呋喃中，在室温下加入5mL盐酸水溶液(2M)。在室温下反应过夜。LCMS监测反应完全。反应完后用乙酸乙酯萃取除去杂质，水相用饱和碳酸氢钠中和，再用乙酸乙酯萃取，合并有机层，用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，得到粗产物3.5(153mg，产率：68％)。LCMS ESI(+)m/z:151.0(M+1).

步骤F：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物3.6)

将3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酸(100mg,0.30mmol)溶于5mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后依次加入2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(171mg,0.45mmol)和N，N-二异丙基乙胺(77mg,0.60mmol)，在室温下搅拌5分钟，再加入化合物3.5(54mg,0.36mmol)，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(10mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物3.6(92mg，产率：70％)。LCMS ESI(+)m/z:442.1(M+1).

步骤G：3-氨基-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物3)

将化合物3.6(92mg,0.21mmol)溶于5mL甲胺乙醇溶液中，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于2mL的甲醇中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例3(38mg，产率：45％)。LCMS ESI(+)m/z:312.1(M+1).

实施例4

3-氨基-N-(异喹啉-6-基)-2-(4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

步骤A：1-(2-(苄氧基)-2-氧代乙基)-4-甲基吡啶-1-鎓(化合物4.1)

将称量好的4-甲基吡啶(4g，42.95mmol)溶于120mL乙腈中，加入2-溴乙酸苄基酯(10.8g，47.25mmol)，反应液在85度和氮气保护下搅拌24小时。将反应液减压浓缩得到化合物4.1(10.4g，粗品，棕色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：242.1(M).

步骤B：2-(4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酸苄酯(化合物4.2)

将化合物4.1(10.4g，42.92mmol)溶于100mL乙醇中，然后在0度分批加入硼氢化钠(1.62g，42.92mmol)，反应液在室温搅拌3小时。向反应液中加入饱和氯化铵溶液40mL，然后用乙酸乙酯(100mL)萃取3次，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤3次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化后得到化合物4.2(5g，收率：48％，黄色油状物)。LCMSESI(+)m/z：246.1(M+1).

步骤C：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酸苄酯(化合物4.3)

将化合物4.2(3g，12.23mmol)溶于50mL无水四氢呋喃中，冷却至-78度，在氮气保护下，慢慢滴入双三甲基硅基胺基锂(13.4mL，1M)，在-78度搅拌0.5小时，然后向反应液中滴加N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(3.23g，13.45mmol)的四氢呋喃溶液30mL，在-78度搅拌2.5小时。用氯化铵饱和溶液(30mL)对反应进行淬灭，用乙酸乙酯(100mL)萃取2次，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化后得到化合物4.3(700mg，收率：14％，黄色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：405.2(M+1).

步骤D：2-((2-羧基-2-(4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物4.4)

将化合物4.3(580mg，1.43mmol)溶解在15mL甲醇，15mL四氢呋喃和15mL水中，加入一水合氢氧化锂(240mg,5.72mmol)，反应液在50度搅拌2小时。向反应液中加入1M盐酸溶液至pH为3，然后将反应液减压浓缩得到产物4.4(500mg,粗品，黄色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：333.1(M+1).

步骤E：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酸(化合物4.5)

将化合物4.4(500mg，1.50mmol)溶解在30mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(570mg，3.0mmol)，1-羟基苯并三唑(405mg，3.0mmol)和三乙胺(608mg，6.0mmol)。反应液在室温搅拌2小时。将反应液用4M盐酸/甲醇溶液调节pH至4，减压浓缩，剩余物用柱层析和反向制备纯化得到产物4.5(130mg，产率：28％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：315.1(M+1).

步骤F：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(异喹啉-6-基)-2-((4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲基)丙酰胺(化合物4.6)

将化合物4.5(120mg，0.38mmol)溶解在20mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(148mg，1.14mmol)，6-氨基异喹啉(66mg，0.45mmol)和50％1-丙基磷酸酐/N,N-二甲基甲酰胺(488mg，0.76mmol)。反应液在室温搅拌2小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物4.6(50mg，产率：29％，黄色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：455.2(M+1).

步骤G：3-氨基-N-(异喹啉-6-基)-2-((4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲基)丙酰胺(化合物4)

将化合物4.6(50mg,0.11mmol)溶解在4mL甲胺/乙醇中，反应液在45度搅拌1小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到实施例4(30mg，产率：83％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：325.2(M+1).

实施例5

3-氨基-N-(异喹啉-6-基)-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

步骤A：2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)乙酸甲酯(化合物5.1)

将称量好的化合物4-甲基吡啶-2(1H)-酮(600mg，5.5mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，然后将溴乙酸甲酯(925mg，6.05mmol)，溴化锂(957mg，11mmol)和碳酸铯(2.15g，6.6mmol)加入到反应瓶中，反应液在75度下搅拌3小时。通过LCMS和TLC(PE:EA＝5:1)来确认反应完全。水被加入到反应液中，然后用乙酸乙酯(80mL)萃取，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到化合物5.1(230mg，收率：23.1％,淡黄色油状物)。LCMS ESI(+)m/z:182.1(M+1).

步骤B：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酸甲酯(化合物5.2)

在零下78摄氏度下，将化合物5.1(230mg，1.27mmol)溶于无水四氢呋喃(15mL)中，然后慢慢滴入双三甲基硅基胺基锂(1.53mL，1.53mmol)到反应液里，在此温度下搅拌0.5小时，紧接着将称量好的N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(335.3mg，1.397mmol)溶解于无水四氢呋喃(5mL)后慢慢滴加到反应瓶中，之后在此温度下搅拌1小时和冰浴下搅拌1小时。通过TLC(PE:EA＝1:1)和LCMS确认反应完全。用氯化铵饱和溶液对反应进行淬灭，乙酸乙酯(60mL)萃取，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物5.2(130mg，收率：30.1％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z:341.1(M+1).

步骤C：2-((2-羧基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物5.3)

将化合物5.2(130mg，0.382mmol)溶于甲醇(5mL)中，然后将一水合氢氧化锂(40mg，0.955mmol)溶于水(1mL)里滴入到反应液中，在常温搅拌3小时。通过TLC和LCMS确认反应完全。反应液真空浓缩，残渣溶于水中后用1M的稀盐酸将其酸性调到pH＝2-3，之后乙酸乙酯(50mL)萃取，分液合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干化后得到化合物5.3(100mg，收率：76％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z:345.1(M+1).

步骤D：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酸(化合物5.4)

将化合物5.3(100mg，0.29mmol)溶解在30mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(105mg，0.55mmol)，1-羟基苯并三唑(75mg，0.55mmol)和三乙胺(84mg，0.83mmol)。反应液在室温搅拌2小时,然后在45度搅拌2小时。将反应液用4M盐酸/甲醇溶液调节pH至4，减压浓缩，剩余物用柱层析和反向制备纯化得到产物5.4(50mg，产率：52％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：327.1(M+1).

步骤E：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(异喹啉-6-基)-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酰胺(化合物5.5)

将化合物5.4(50mg，0.15mmol)溶解在6mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(200mg，1.5mmol)，6-氨基异喹啉(33mg，0.22mmol)和50％1-丙基磷酸酐/N,N-二甲基甲酰胺(580mg，0.9mmol)。反应液在60度搅拌1小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物5.5(25mg，产率：36％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：453.2(M+1).

步骤F：3-氨基-N-(异喹啉-6-基)-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酰胺(化合物5)

将化合物5.5(25mg,0.06mmol)溶解在10mL甲胺/乙醇中，反应液在45度搅拌1小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到实施例20(11mg，产率：62％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：323.1(M+1).

实施例6

3-(1-氨基环丙基)-N-(异喹啉-6-基)-2-苯基丙酰胺

具体反应方程式如下所示

步骤A：2-(4-氯苯基)-3-氰基丙酸甲酯(化合物6.1)

将对氯苯乙酸甲酯(3g，16.2mmol)溶解在30mL四氢呋喃溶液中，氮气保护下降温至零下78℃。，滴加LiHMDS(29.2ml，29.2mmol)，搅拌1小时，溴乙腈(1.7ml，24.32mmol)溶解在10mL四氢呋喃溶液中，滴加到反应液中，在搅拌2小时。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用50mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析纯化得到产物6.1(3.15g，产率：87％)。LCMS ESI(+)m/z：224.0(M+1).

步骤B：6-(4-氯苯基)-4-氮杂螺[2.4]庚烷-5-酮(化合物6.2)

将化合物6.1(3.15g，14.06mmol)溶解在30mL四氢呋喃溶液中，加入钛酸四异丙酯(5ml，16.88mmol)，滴加乙基溴化镁(14ml，28.12mmol)，室温下搅拌2小时。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用50mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析纯化得到产物6.2(1.6g，产率：51％)。LCMS ESI(+)m/z：222.1(M+1).

步骤C：6-(4-氯苯基)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚烷-4-羧酸叔丁酯(化合物6.3)

将化合物6.2(1.6g，7.2mmol)溶解在20mL四氢呋喃溶液中，氮气保护下，在零下78℃下滴加LiHMDS(8.6ml，8.6mmol)，搅拌30分钟，二碳酸二叔丁酯(1.86ml，7.9mmol)溶解在5mL四氢呋喃溶液中，滴加到反应液中，在搅拌2小时。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用50mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥。旋干，柱层析纯化得到产物6.3(1.15g，产率：50％)。LCMS ESI(+)m/z：322.1(M+1)

步骤D：3-(1-((叔丁氧基羰基)氨基)环丙基)-2-(4-氯苯基)丙酸(化合物6.4)

采用实施例5中步骤C，合成得到化合物6.4。LCMS ESI(+)m/z：340.1(M+1).

步骤E：(1-(2-(4-氯苯基)-3-(异喹啉-6-基氨基)-3-氧代丙基)环丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6.5)

采用实施例5中步骤E，合成得到化合物6.5。LCMS ESI(+)m/z：466.2(M+1).

步骤F：叔丁基(1-(3-(异喹啉-6-基氨基)-3-氧代-2-苯基丙基)环丙基)氨基甲酸酯(化合物6.6)

将化合物6.5(140mg，0.3mmol)溶解在5mL甲醇溶液中，加入钯碳(20mg)、三乙胺(0.5ml)，氢气氛围下搅拌3小时。硅藻土过滤反应液，旋干，柱层析纯化得到产物6.6(100mg，产率：77％)。LCMS ESI(+)m/z：432.2(M+1).

步骤G：3-(1-氨基环丙基)-N-(异喹啉-6-基)-2-苯基丙酰胺(化合物6)

将化合物6.6(100mg，0.23mmol)溶解在5mL二氯甲烷溶液中，加入三氟乙酸(1mL)，室温下搅拌1小时。旋干，反向制备纯化得到实施例6(60mg，产率：99％)。LCMS ESI(+)m/z：332.2(M+1).

实施例7

3-氨基-N-(4-氯噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

步骤A：4-氯噻吩并[2,3-C]吡啶-2-羧酸甲酯(化合物7.1)

将3,5-二氯异烟醛(2g，11.36mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(25mL)中，然后将碳酸铯(3.89g，11.93mmol)和巯基乙酸甲酯(1.81g，17.04mmol)加入到反应液中，之后常温搅拌3小时。通过TLC和LCMS来确认反应完全。将水加入到反应液中后有黄色固体析出，过滤，滤饼用水洗涤两遍，将滤饼中水分旋干后得到淡黄色固体7.1(2.2g，收率：85％)。LCMS ESI(+)m/z:228.0/230.0(M+1).

步骤B：(4-氯噻吩并[2,3-C]吡啶-2-羧酸(化合物7.2)

将化合物7.1(2.2g，9.69mmol)溶于四氢呋喃(10mL)和甲醇(10mL)中，然后将一水合氢氧化锂(1.02g，24.23mmol)溶解于水(2ml)里滴加到反应混合物中，常温搅拌3小时。通过TLC和LCMS确认反应完全。将反应液用真空泵浓缩后加入水，然后用2mol/L的稀盐酸调节水相pH＝3-4，有固体析出，过滤，收集固体旋干后得到灰白色固体7.2(1.89g，收率：92％)。LCMS ESI(+)m/z:214.0/216.0(M+1).

步骤C：4-氯噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(化合物7.3)

在冰浴下，将化合物37.2(150mg，0.7mmol)溶于干燥的甲苯(5mL)中，冰浴下，加入三乙胺(176mg，1.75mmol)和叠氮磷酸二苯酯(250mg，0.91mmol)，继续保持0摄氏度搅拌0.5小时，然后在惰性气体氛围下85摄氏度搅拌2小时，紧接着水(25mg，1.4mmol)被加入到反应瓶中，85摄氏度搅拌过夜。通过LCMS确认反应完全。水被加入到反应液中，用乙酸乙酯(15mL)萃取后合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干后得到粗品化合物7.3(70mg，收率：54％)。LCMS ESI(+)m/z:185.0/187.1(M+1).

步骤D：N-(4-氯噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物7.4)

将化合物7.3(31mg，0.16mmol)和3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酸(40mg，0.129mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(33mg，0.25mmol)含量50％丙基磷酸酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液(123mg，0.19mmol)到反应液中，该反应常温搅拌2小时。通过LCMS确认反应完全。水被加入到反应液中，用乙酸乙酯(12mL)萃取后合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，经柱层析纯化得到淡黄色油状产品7.4(15mg，收率：24％)。LCMS ESI(+)m/z:476.1/478.1(M+1).

步骤E：3-氨基-N-(4-氯噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物7)

将化合物7.4(15mg，0.032mmol)溶于乙醇(4mL)中，然后加入水合肼(16mg，0.32mmol)到反应液中，反应在惰性气体氛围下60摄氏度搅拌2小时。通过LCMS确认反应完全。反应液直接用真空泵浓缩旋干，残渣溶于甲醇(1.5mL)，反向制备纯化后得到白色固体实施例7(10mg，收率：69％，纯度：98％)。LCMS ESI(+)m/z:346.1/348.1(M+1).

实施例8

(S)-3-氨基-2-(4-(羟基甲基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示

步骤A：2-(4-(溴甲基)苯基)乙酸(化合物8.1)

将4-甲基苯乙酸(100g，670mmol)溶于乙腈(1L)中，将N-溴代丁二酰亚胺(125.2g，703.5mmol)和偶氮二异丁腈(2.2g，13.4mmol)溶于反应液中，在氮气的保护下80℃反应3小时，反应完毕后，将反应液降至室温，有大量固体析出，过滤，滤饼依次用石油醚/乙酸乙酯(1:1)(200mL)，饱和亚硫酸氢钠(200mL)，水(200mL)，石油醚(200mL)洗涤，50℃烘干得到化合物8.1(82g，收率：54％,白色固体)。LCMS ESI(+)m/z:229.0/231.0(M+1).

步骤B：2-(4-(羟甲基)苯基)乙酸(化合物8.2)

将化合物41.1(82g，358.1mmol)加入水(300mL)中，加热100℃反应2小时，反应变澄清，然后冷却至室温，冰浴继续降温至0℃，析出白色固体，过滤，滤饼用水洗涤2次，50℃烘干得到化合物8.2(40g，收率：67％，白色固体)直接用于下一步反应。

步骤C：2-(4-(羟甲基)苯基)乙酸甲酯(化合物8.3)

将化合物8.2(40g，241.0mmol)溶于甲醇(400mL)中，加入硫酸(2.4g，24.1mmol)，冰浴反应2小时，反应完全后加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)，水层以乙酸乙酯(200mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到化合物8.3(41g，收率：95％，淡黄色油状物)。LCMS ESI(+)m/z:181.1(M+1).

步骤D：2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)乙酸甲酯(化合物8.4)

将化合物8.3(41g，226.5mmol)以及咪唑(23.1g，339.8mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(400mL)中，冰浴将至0℃，分批加入三异丙基氯硅烷(48.1g，249.2mmol)，自然升温至室温搅拌过夜，反应完全后加水(500mL)，水层以乙酸乙酯(200mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到化合物8.4(72g，收率：94％，无色油状物)，直接用于下一步反应。

步骤E：2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)乙酸(化合物8.5)

将化合物8.4(72g，214.0mmol)溶于四氢呋喃(500mL)中，加入氢氧化锂(10.8g，256.8mmol)，室温搅拌过夜，反应完全后加入1M的盐酸溶液(300mL)，水层以乙酸乙酯(200mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、旋干，得到化合物8.5(67g，收率：97％，无色油状物)直接用于下一步反应。

步骤F：(R)-4-苄基-3-(2-(4-(((三异丙基硅基)氧基)甲基)苯基)乙酰基)恶唑烷-2-酮(化合物8.6)

将化合物8.5(67g，207.8mmol)以及无水N,N-二甲基甲酰胺(0.76g，10.4mmol)溶于无水二氯甲烷中，在冰浴条件下缓慢滴加草酰氯(31.7g，249.4mmol)，保持冰浴制备得到酰氯，同时在另外一个三口瓶中将(R)-4-苄基-噁唑烷酮(25.7g，145.2mmol)加入无水四氢呋喃(300mL)中，氮气置换，用干冰丙酮降温至-78℃，缓慢滴加正丁基锂(2.5M，64mL)并保持温度在-78℃，滴加完毕后继续在-78℃小搅拌2小时，然后通过恒压滴液漏斗慢慢滴加之前制备的酰氯的无水四氢呋喃溶液，保持滴加温度在-78℃，滴加完成后继续保持-78℃反应2小时，然后自然升温至室温，反应完全后用饱和氯化铵水溶液(400mL)萃灭反应，水层以乙酸乙酯(300mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和碳酸氢钠水溶液(300mL)，饱和食盐水(300mL)依次洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，经柱层析纯化，得化合物8.6(44g，收率：44％，无色油状物)。

步骤G:2-((S)-3-((R)-4-苄基-2-氧代恶唑烷-3-基)-3-氧代-2-(4-(((三异丙基硅基)氧基)甲基)苯基)丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物8.7)

将化合物8.6(44g，91.3mmol)溶于无水四氢呋喃(500mL)中，氮气置换，干冰丙酮降温至-78℃，缓慢滴加LiHMDS(1M，109mL)，滴加完毕后继续在-78℃下搅拌1小时，将N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(26.3g，109.6mmol)溶于无水四氢呋喃(200mL)中，通过恒压滴液漏斗慢慢滴加上述体系中，控制滴加温度低于-70℃，滴加结束后反应保持在-78℃下搅拌3小时，自然升温至室温搅拌过夜，反应完全后用饱和氯化铵水溶液(400mL)萃灭反应，水层以乙酸乙酯(300mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(300mL)依次洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到黄色固体，采用乙酸乙酯/石油醚体系对其重结晶，析出固体，过滤，滤饼用石油醚(100mL)洗涤，旋干，得到化合物8.7(32g，收率：55％，白色固体)。

步骤H：(S)-2-((2-羧基-2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物8.8)

将化合物8.7(32g，49.9mmol)溶于四氢呋喃(300mL)中，加水(100mL)，冰浴冷却反应体系至0℃，然后加入氢氧化锂(6.3g，149.7mmol)，于0℃搅拌1小时，反应完全后用2M盐酸溶液调节反应液pH值至2-3，水层以乙酸乙酯(200mL X 4)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(300mL)依次洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到化合物8.8(20g，收率：80％，淡黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z:500.2(M+1).

步骤I：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)丙酸(化合物8.9)

将化合物8.8(20g，40mmol)，1-羟基苯并三唑(5.9g，44mmol)和三乙胺(12.1g，120mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺中，冰浴冷却反应体系至0℃，然后向反应液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(8.4g，44mmol)。搅拌一段时间，反应液变澄清，缓慢升至室温过夜，反应完全后反应液减压至干，加入饱和氯化铵水溶液(200mL)，水层以乙酸乙酯(200mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和碳酸氢钠水溶液(300mL)，饱和食盐水(300mL)依次洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到化合物8.9(17g，收率：88％，黄色固体)

步骤J：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基基)苯基)丙酰胺(化合物8.10)

将(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)丙酸(65mg，0.123mmol)溶解在5mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(25ul，0.16mmol)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N”，N'-四甲基脲六氟磷酸盐(77mg，0.20mmol)，室温下搅拌10分钟，加入噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(20mg，0.135mmol)，搅拌2小时。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用30mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析纯化得到产物8.10(48mg，产率：58％)。LCMS ESI(+)m/z：614.2(M+1).

步骤K：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(羟甲基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物8.11)

将化合物8.10(48mg，0.078mmol)溶解在5mL四氢呋喃溶液中，加入1mL盐酸(2M)，室温下搅拌0.5小时。直接旋干溶剂得到产物8.11(30mg，产率：100％)。LCMS ESI(+)m/z：458.1(M+1).

步骤L：(S)-3-氨基-2-(4-(羟基甲基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物8)

将化合物8.11(30mg，0.066mmol)溶解在5mL甲氨乙醇溶液中，在60℃下搅拌3小时，旋干溶剂，反向制备纯化得到实施例8(18mg，产率：84％)。LCMS ESI(+)m/z：328.1(M+1).

实施例9

(S)-3-氨基-N-(苯并[d]异噻唑-6-基)-2-(4-(羟基甲基)苯基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示

步骤A：用苯并[d]异噻唑-6-胺代替实施例8步骤A中的噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺，合成得到化合物9.1。LCMS ESI(+)m/z：614.2(M+1).

步骤B：采用实施例8中步骤B，合成得到化合物9.2。LCMS ESI(+)m/z：458.1(M+1).

步骤C：采用实施例8中步骤C，合成得到实施例9。LCMS ESI(+)m/z：328.1(M+1).

实施例10

3-氨基-2-(4-羟基苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

步骤A：2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)乙酸(化合物10.1)

将对羟基苯乙酸(5.0g，32.86mmol)溶解在400mL四氢呋喃中，在0度，加入咪唑(11g,164.3mmol)和叔丁基二甲基氯硅烷(13.8g,92.00mmol)，反应液在室温下搅拌2小时。向反应液中加入130mL饱和碳酸钠溶液，室温继续搅拌1小时。向反应液中加入2M盐酸溶液至pH为4，用乙酸乙酯(500mL)萃取2次，合并有机相，食盐水(200mL)洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物10.1(5.78g,产率：66％，无色油状物)。

步骤B：2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)乙酸苄酯(化合物10.2)

将化合物10.1(5.78g，21.70mmol)溶解在100mL N,N-二甲基甲酰胺中，将溶液冷却至0度，加入碳酸钾(3.6g，26.04mmol)和苄溴(4.45g，26.04mmol)，反应液在室温搅拌2小时。向反应液加入水80mL，用乙酸乙酯(100mL)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗4次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物10.2(3.66g，产率：47％，无色油状物)。

步骤C：2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸苄酯(化合物10.3)

将化合物10.2(3.66g，10.27mmol)溶解在30mL无水四氢呋喃溶液中，将反应液冷却至-78度，在氮气保护下，滴加1M的六甲基二硅基胺基锂(12.3mL，12.3mmol),反应液在-78度和氮气保护下搅拌1小时。然后滴加2-(溴甲基)异吲哚-1,3-二酮(2.96g，12.3mmol)的四氢呋喃溶液25mL，反应液在-78度搅拌3小时。向反应液中加入30mL水，用乙酸乙酯(60mL)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物10.3(3.9g，产率：74％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：516.2(M+1).

步骤D：2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸(化合物10.4)

将化合物10.3(3.9g，7.56mmol)溶解在30mL四氢呋喃和60mL甲醇中，加入钯碳(600mg，10％)，反应液在室温和氢气保护下搅拌3小时。将反应液用硅藻土过滤，滤液减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物10.4(2.9g，产率：90％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：426.2(M+1).

步骤E：2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物10.5)

将化合物10.4(600mg，1.41mmol)溶解在20mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(276mg，2.11mmol)，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N”，N'-四甲基脲六氟磷酸盐(648mg，1.69mmol)，和噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(233mg，1.55mmol)。反应液在25度和氮气保护下搅拌2小时。向反应中加水(40mL)，然后用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得到产物10.5(780mg，产率：99％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：558.2(M+1).

步骤F：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-羟基苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物10.6)

将化合物10.5(780mg，1.40mmol)溶解在50mL四氢呋喃中，加入2M盐酸水溶液15mL，反应液在50度搅拌3小时。将反应液用饱和碳酸氢钠溶液调节pH为7，用乙酸乙酯(100mL)萃取3次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物10.6(350mg，产率：56％，白色固体)。LCMSESI(+)m/z：444.1(M+1).

步骤G：3-氨基-2-(4-羟基苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物10)

将化合物10.6(15mg，0.03mmol)溶解在7mL甲胺/乙醇中，反应液在50度搅拌1小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到实施例10(8mg，产率：80％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：314.1(M+1).

实施例11

3-氨基-N-(4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

步骤A：3,5-二氟吡啶-4-甲醛(化合物11.1)

将3,5-二氟吡啶(1g，58.5mmol)溶解于无水四氢呋喃(15mL)后冷却至零下78摄氏度，在氮气的保护下将二异丙基氨基锂(10mL，10.4mmol)慢慢滴加到反应瓶内，在此温度下继续搅拌0.5小时，将甲酸乙酯(1.61g，21.73mmol)溶于无水四氢呋喃(5mL)后慢慢滴加到反应瓶中，之后在冰浴下搅拌2小时。通过LCMS和TLC确认反应完全。水被加入到反应液中，用乙酸乙酯(20mL)萃取后合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到黄色固体产品11.1(280mg，收率：23％)。LCMS ESI(+)m/z:176.0(M+33).

步骤B：4-氟噻吩并[2,3-C]吡啶-2-羧酸甲酯(化合物11.2)

将化合物11.1(280mg，1.96mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，然后在冰浴下将碳酸铯(703mg，2.15mmol)和巯基乙酸甲酯(166mg，1.568mmol)加入到反应液中，之后常温搅拌3小时。通过TLC和LCMS来确认反应完全。水被加入到反应液中，用乙酸乙酯(15mL)萃取后合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到白色固体11.2(170mg，收率：41％)。LCMS ESI(+)m/z:212.0(M+1).

步骤C：(4-氟噻吩并[2,3-C]吡啶-2-羧酸(化合物11.3)

将化合物11.2(170mg，0.81mmol)溶于四氢呋喃(6mL)和甲醇(1mL)中，然后将一水合氢氧化锂(85mg，2.02mmol)溶解于水(2ml)里滴加到反应混合物中，40摄氏度搅拌0.5小时。通过TLC和LCMS确认反应完全。将反应液用真空泵浓缩后加入水，然后用2mol/L的稀盐酸调节水相pH＝3-4，有固体析出，过滤，收集固体旋干后得到灰白色固体11.3(130mg，收率：82％)。LCMS ESI(+)m/z:198.0(M+1).

步骤D：4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(化合物11.4)

在冰浴下，将化合物11.3(150mg，0.7mmol)溶于干燥的甲苯(8mL)中，冰浴下，加入三乙胺(166mg，1.65mmol)和叠氮磷酸二苯酯(236mg，0.86mmol)，继续保持0摄氏度搅拌0.5小时，然后在惰性气体氛围下85摄氏度搅拌2小时，紧接着水(35mg，1.98mmol)被加入到反应瓶中，85摄氏度搅拌过夜。通过LCMS确认反应完全。水被加入到反应液中，用乙酸乙酯(15mL)萃取后合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干后得到粗品化合物11.4(100mg，收率：90％)。LCMSESI(+)m/z:169.0(M+1).

步骤E：N-(4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物11.5)

将化合物11.4(26mg，0.155mmol)和3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酸(40mg，0.129mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，然后加入三乙胺(26mg，0.258mmol)和含量50％丙基磷酸酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液(123mg，0.1935mmol)到反应液中，该反应常温搅拌3小时。通过LCMS确认反应完全。水被加入到反应液中，用乙酸乙酯(12mL)萃取后合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱纯化得到淡黄色油状产品11.5(20mg，收率：34％)。LCMS ESI(+)m/z:460.1(M+1).

步骤F：3-氨基-N-(4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物11)

将化合物11.5(20mg，0.043mmol)溶于乙醇(5mL)中，然后加入水合肼(22mg，0.434mmol)到反应液中，反应在惰性气体氛围下60摄氏度搅拌2小时。通过LCMS确认反应完全。反应液直接用真空泵浓缩旋干，残渣溶于甲醇(1.5mL)，反向制备纯化后得到白色固体实施例11(3mg(三氟乙酸盐)，收率：21％，纯度：96％)。LCMS ESI(+)m/z:330.1(M+1).

实施例12

3-氨基-2-(4-(2-羟基乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

步骤A：2-(4-乙烯基苯基)乙酸甲酯(化合物12.1)

将2-(4-溴苯基)乙酸甲酯(11.0g,48.0mmol)，三氟(乙烯基)硼酸钾(7.7g,57.6mmol)和碳酸铯(31.3g,96.0mmol)溶于200mL四氢呋喃和20mL水中，然后加入二(三苯基膦)二氯化钯(674mg,0.96mmol)，在85℃和氮气保护下反应过夜。LCMS监测反应完全。过滤、滤液用乙酸乙酯(50mLX3)萃取三次，合并有机相，用饱和的食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物12.1(7.0g，产率：83％)。LCMS ESI(+)m/z:177.1(M+1).

步骤B：2-(4-(2-羟乙基)苯基)乙酸甲酯(化合物12.2)

将化合物12.1(3.5g,19.9mmol)溶于20mL四氢呋喃中，在冰浴下滴加硼烷(10.0M,4mL,40.0mmol)，在0℃下反应1小时，再在室温下反应1小时。然后在冰浴下滴加60mL氢氧化钠水溶液(1M)，再滴加5mL双氧水(30％)，在冰浴下反应30分钟，再在室温下反应30分钟。TLC监测到原料反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物12.2(1.5g,产率：39％)。

步骤C：2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙酸甲酯(化合物12.3)

将化合物12.2(1.5g,7.7mmol)溶于10mL二氯甲烷中,然后加入2,6-二甲基吡啶(1.4mL,11.6mmol)和三异丙基硅基三氟甲磺酸酯(2.5mL,9.2mmol)在室温下反应过夜。TLC监测到原料反应完全。加入水淬灭反应，用二氯甲烷(20mLX3)萃取三次，合并有机相，用饱和的食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物12.3(2.1g,产率：78％)。

步骤D：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)丙酸甲酯(化合物12.4)

将化合物12.3(2.1g,6.0mmol)溶于20mL无水四氢呋喃中,氮气置换，干冰丙酮降温至-78℃，缓慢滴加六甲基二硅基胺基锂(1.0M，7.2mL，7.2mmol),滴加完成后体系于-78℃搅拌1小时，将N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(1.7g,7.2mmol)溶于10mL四氢呋喃中，慢慢滴加到体系中，控制滴加温度低于-70℃，滴加结束后反应保持在-78℃下搅拌3小时，TLC监测到原料反应完全。加入饱和的氯化铵溶液(10mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤、旋干，柱层析纯化得产物12.4(1.0g,产率：33％)。

步骤E：2-((2-羧基-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物12.5)

将化合物12.4(1.0g,2.0mmol)溶于10mL四氢呋喃和3mL水中,在0摄氏度下加入氢氧化锂一水合物(252mg,6.0mmol)，于0℃下搅拌3小时，LCMS监测反应完全。减压蒸出有机溶剂，用1M的盐酸水溶液调pH至3-4，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得产物12.5(960mg，产率：95％)。LCMSESI(+)m/z：514.2(M+1).

步骤F：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)丙酸(化合物12.6)

将化合物12.5(960mg,1.9mmol)，1-羟基苯并三唑(257mg,1.9mmol)和三乙胺(0.8mL,5.7mmol)溶于10mL二氯甲烷中,氮气保护，降温至0℃，然后向反应液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(365mg,1.9mmol)，搅拌一段时间，反应液变澄清，缓慢升温至室温，反应过夜。LCMS监测反应完全。加水稀释反应液，用二氯甲烷萃取(20mLX3)，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物12.6(510mg,产率：54％)。LCMS ESI(+)m/z：496.2(M+1).

步骤G：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(2-((三异丙基硅基)氧基)乙基)苯基)丙酰胺(化合物12.7)

将化合物12.6(70mg,0.14mmol)溶于5mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后依次加入2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(80mg,0.21mmol)和N，N-二异丙基乙胺(36mg,0.28mmol)，在室温下搅拌5分钟，再加入化合物19.5(25mg,0.17mmol)，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(10mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物12.7(62mg，产率：71％)。LCMS ESI(+)m/z:628.3(M+1).

步骤H：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(2-羟基乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物12.8)

将化合物12.7(62mg,0.10mmol)溶于5mL四氢呋喃中，然后加入5mL盐酸水溶液(1M)中，40℃下反应2小时。LCMS监测反应完全。反应完后加入饱和碳酸氢钠溶液中和，然后用乙酸乙酯(10mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得到粗产物12.8(47mg，产率：100％)。LCMS ESI(+)m/z:472.1(M+1).

步骤I：3-氨基-2-(4-(2-羟基乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物12)

将化合物12.8(47mg,0.10mmol)溶于5mL甲胺乙醇溶液中，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于2mL的甲醇中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例12(19mg，产率：44％)。LCMS ESI(+)m/z:342.1(M+1).

实施例13

3-氨基-2-(4-(3-羟基丙氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

步骤A：(2-(4-羟基苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物13.1)

将3-氨基-2-(4-羟基苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(850mg，2.71mmol)溶解在40mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入三乙胺(550mg,5.42mmol)和BOC酸酐(770mg,3.52mmol)，反应液在室温下搅拌20小时。将反应液减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物13.1(1.1g,产率：98％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：414.1(M+1).

步骤B：(2-(4-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙氧基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物13.2)

将化合物13.1(50mg，0.12mmol)溶解在10mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入碳酸钾(34mg，0.24mmol)和(3-溴丙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(46mg，0.18mmol)，反应液在100度和氮气保护下搅拌10小时。向反应液加入水30mL，用乙酸乙酯(40mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗3次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物13.2(10mg，产率：14％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：586.2(M+1).

步骤C：3-氨基-2-(4-(3-羟基丙氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物13)

将化合物13.2(10mg，0.02mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入三氟乙酸1mL，反应液在室温搅拌1小时，将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到实施例13(5.8mg，产率：91％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：372.1(M+1).

实施例14

3-氨基-2-(4-(2,3-二羟基丙氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

步骤A：(2-(4-(2,3-二羟基丙氧基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物14.1)

将(2-(4-羟基苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.48mmol)溶解在18mL乙醇中，加入三乙胺(244mg,2.42mmol)和缩水甘油(180mg,2.42mmol)，反应液在80度和氮气保护下搅拌60小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物14.1(5mg,产率：2％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：488.2(M+1).

步骤B：3-氨基-2-(4-(2,3-二羟基丙氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物14)

将化合物14.1(5mg，0.01mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入三氟乙酸1mL，反应液在室温搅拌1小时，将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到实施例49(0.8mg，产率：20％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：388.1(M+1).

实施例15

3-氨基-2-(4-((1,3-二羟基丙-2-基)氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

步骤A：2-(4-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯氧基)丙二酸二甲酯(化合物15.1)

将(2-(4-羟基苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.24mmol)溶解在8mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入2-溴丙二酸二甲酯(76mg,0.36mmol)和碳酸钾(67mg,0.48mmol)，反应液在50度搅拌3.5小时。向反应液中加入水25mL，用乙酸乙酯(40mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物15.1(35mg,产率：27％，黄色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：544.2(M+1).

步骤B：(2-(4-((1,3-二羟基丙烷-2-基)氧基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物15.2)

将化合物15.1(35mg，0.06mmol)溶解在8mL四氢呋喃中，反应液冷却至0度，加入硼氢化钠(15mg，0.36mol)，反应液在0度搅拌20分钟，滴加甲醇4mL，反应液在室温搅拌2小时。向反应液加入硼氢化锂(28mg，1.29mmol)，反应液在50度搅拌4小时。向反应液加入1M盐酸溶液至pH为7，将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物15.2(10mg，产率：32％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：488.2(M+1).

步骤C：3-氨基-2-(4-((1,3-二羟基丙-2-基)氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物15)

将化合物15.2(10mg，0.02mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入三氟乙酸1mL，反应液在室温搅拌1小时，将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物15(3.6mg，产率：45％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：388.1(M+1).

实施例16

3-氨基-N-(5-氯苯并[d]异噻唑-6-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

步骤A：5-氯-2-氟-4-甲氧基苯甲醛(化合物16.1)

将2-氟-4-甲氧基苯甲醛(6g，38.96mmol)溶于冰醋酸(13mL)中，在冰浴下将氯化砜(10.52g，77.92mmol)慢慢加入到反应液中，然后反应常温搅拌过夜。通过LCMS确认反应完全。反应液被加入到冰水中，有固体析出后过滤，固体用乙酸乙酯溶解，然后有机相依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩旋干，粗品固体用石油醚打浆，过滤后得到白的固体产物16.1(4g，收率：55％)。LCMS ESI(+)m/z:189.0/191.0(M+1)。

步骤B：5-氯-6-甲氧基苯并[d]异噻唑(化合物16.2)

将化合物16.1(3.8g，20.2mmol)溶于乙二醇甲醚(20mL)中，然后将硫粉(646.4mg，20.2mmol)和氨水(20mL)加入到反应液里，在封管里140摄氏度搅拌2小时。通过TLC和LCMS确认反应完全(反应有部分掉氯的分子)。反应液被加入到冰水中，用乙酸乙酯(20mL)萃取，然后合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，柱层析纯化得到淡黄色固体产物16.2(1.88g，收率：47％)。LCMS ESI(+)m/z:200.0/202.0(M+1)。

步骤C：5-氯苯并[d]异噻唑-6-醇(化合物16.3)

将化合物51.2(1.88g，9.5mmol)和吡啶盐酸盐(10g)加到反应瓶中，170摄氏度搅拌8小时。通过TLC(PE：EA＝10：1)和LCMS确认反应完全。水被加入到反应瓶中，有固体析出，过滤旋干后得到淡粉色固体16.3(1.57g，收率：90％)。LCMS ESI(+)m/z:186.0/188.0(M+1).

步骤D：5-氯苯并[d]异噻唑-6-基三氟甲磺酸盐(化合物16.4)

将称量好的化合物16.3(1.57g，8.48mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，在零下78摄氏度条件下，加入N,N-二异丙基乙胺(3.28g，25.46mmol)和三氟甲磺酸酐(3.59g，12.73mmol)，继续保持此温度搅拌1小时。通过TLC(PE：EA＝10：1)和LCMS确认反应完全。用二氯甲烷稀释反应液，然后依次用1mol/L的稀盐酸、饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，柱层析纯化后得到淡黄色固体16.4(1.37g，收率：51％)。LCMS ESI(+)m/z:318.1/320.1(M+1).

步骤E：5-氯-N-(二苯基亚甲基)苯并[d]异噻唑-6-胺(化合物16.5)

将化合物16.4(640mg，2.02mmol)溶于1,4-二氧六环(12mL)中，然后加入二苯甲酮亚胺(402mg，2.22mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(185mg，0.20mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(233mg，0.404mmol)和碳酸铯(1.32g，4.04mmol)到反应液中，该反应在惰性气体氛围下90摄氏度搅拌过夜。通过LCMS确认反应完全。水被加入到反应液中，用乙酸乙酯(15mL)萃取后合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到黄色固体产物16.5(660mg，收率：94％)。LCMS ESI(+)m/z:349.1/351.1(M+1).

步骤F：5-氯苯并[d]异噻唑-6-胺(化合物16.6)

将化合物16.5(660mg，0.043mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，然后加入3mol/L的稀盐酸(10mL)到反应液中，反应在室温搅拌2小时。通过TLC(PE：EA＝8：1)和LCMS确认反应完全。水被加入到反应液中，用乙酸乙酯(15mL)萃取后合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干后得到粗品，然后用石油醚打浆10分钟后过滤，得到黄色固体产物16.6(295mg，收率：85％，纯度：95％)。LCMS ESI(+)m/z:185.0/187.0(M+1).

步骤G：N-(5-氯苯并[d]异噻唑-6-基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物16.7)

将3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酸(20mg，0.064mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，在冰浴下，加入N,N-二甲基甲酰胺(1滴)和草酰氯(16mg，0.13mmol)到反应液中，反应在室温搅拌2小时。通过TLC确认反应完全。直接将反应液真空旋干，用无水吡啶(4mL)转移到反应瓶中，紧接着加入化合物51.6(13mg，0.071mmol)，在氮气氛围下80摄氏度搅拌8小时。同样直接将反应液真空旋干，残渣用乙酸乙酯(20mL)溶解，有机相依次用1mol/L的稀盐酸和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到产物16.7(20mg，收率：65％，纯度：95％)。LCMS ESI(+)m/z:476.1/478.1(M+1).

步骤H：3-氨基-N-(5-氯苯并[d]异噻唑-6-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物16)

将化合物16.7(20mg，0.042mmol)溶于乙醇(6mL)中，然后加入水合肼(21mg，0.42mmol)到反应液中，反应在惰性气体氛围下60摄氏度搅拌2小时。通过LCMS确认反应完全。反应液直接用真空泵浓缩旋干，残渣溶于甲醇(1.5mL)，反向制备纯化后得到白色固体实施例16(6mg，收率：31％，纯度：96％)。LCMS ESI(+)m/z:346.1/348.1(M+1).

实施例17

3-氨基-2-(4-(1,2-二羟基乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

步骤A：2-(4-(环氧乙烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(化合物17.1)

将称量好的2-(4-乙烯基苯基)乙酸甲酯(2.2g，12.48mmol)溶于80mL二氯甲烷中，在冰浴下分批加入间氯过氧苯甲酸(7.6g，37.44mmol),反应液在0度搅拌1小时，然后在室温搅拌16小时。向反应液中加入饱和亚硫酸钠溶液300mL，搅拌1小时，用二氯甲烷(300mL)萃取2次，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到化合物17.1(1.84g，产率：77％，无色油状物)。

步骤B：2-(4-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)苯基)乙酸甲酯(化合物17.2)

将化合物17.1(1.84g，9.57mmol)溶于30mL丙酮中，然后加入Amberlyst 15(2.5g，12.44mmol)，反应液在室温搅拌20小时。将反应液过滤，向滤液中加入饱和碳酸氢钠溶液150mL，然后用乙酸乙酯(300mL)萃取2次，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤1次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物17.2(1.5g，收率：63％，无色油状物)。

步骤C：2-(4-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸甲酯(化合物17.3)

在零下78摄氏度下，将化合物17.2(1.5g，5.99mmol)溶于无水四氢呋喃(20mL)中，然后慢慢滴入双三甲基硅基胺基锂(7.2mL，7.19mmol)到反应液里，在-78度和氮气保护下搅拌0.5小时，紧接着将称量好的N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(1.73g，7.19mmol)溶解于无水四氢呋喃(10mL)后慢慢滴加到反应瓶中，之后继续在此温度下搅拌1.5小时。用20mL氯化铵饱和溶液对反应进行淬灭，用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物17.3(2g，收率：82％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：410.1(M+1).

步骤D：2-((2-羧基-2-(4-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物17.4)

将化合物17.3(2g，4.88mmol)溶解在35mL四氢呋喃和30mL水中，加入一水合氢氧化锂(615mg,14.64mmol)，反应液在室温搅拌2小时。向反应液中加入饱和柠檬酸溶液至pH为6，用乙酸乙酯(40mL)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗2次，无水硫酸钠干燥,过滤，减压浓缩得到产物17.4(1.1g,产率：55％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：414.1(M+1).

步骤E：2-(4-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸(化合物17.5)

将化合物17.4(1.1g，2.66mmol)溶解在30mL的N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(760mg，3.99mmol)，1-羟基苯并三唑(540mg，3.99mmol)和二异丙基乙胺(688mg，5.32mmol)。反应液在室温搅拌12小时。将反应液减压浓缩，向剩余物加入水20mL，用饱和柠檬酸溶液至pH为6，用乙酸乙酯(40mL)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物17.5(760mg，产率：72％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：396.1(M+1).

步骤F：2-(4-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物17.6)

将化合物17.5(260mg，0.66mmol)溶解在12mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(127mg，0.99mmol)，6-氨基异喹啉(104mg，0.69mmol)和2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N”，N'-四甲基脲六氟磷酸盐(300mg，0.79mmol)。反应液在室温搅拌1.5小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物17.6(260mg，产率：75％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：528.1(M+1).

步骤G：2-(4-(1,2-二羟乙基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物52.7)

将化合物17.6(260mg,0.49mmol)溶解在30mL甲醇和30mL乙腈中，加入3.3mL 1.5M的盐酸水溶液，反应液在30度搅拌2小时，将反应液减压浓缩，得到产物17.7(240mg，产率：100％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：488.1(M+1).

步骤H：3-氨基-2-(4-(1,2-二羟基乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物17)

将化合物17.7(25mg，0.05mmol)溶解在5mL甲胺/乙醇中，反应液在50度搅拌1小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到实施例17(11mg，产率：61％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：358.1(M+1).

实施例18

3-氨基-2-(4-(2-羟基乙氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

将(2-(4-羟基苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.24mmol)溶解在8mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(115mg,0.48mmol)和碳酸钾(100mg,0.72mmol)，反应液在100度搅拌12小时。向反应液中加入40mL水，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物18.1(21mg,产率：15％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：572.2(M+1).

步骤B：3-氨基-2-(4-(2-羟基乙氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物18)

将化合物18.1(21mg，0.04mmol)溶解在4mL二氯甲烷中，加入三氟乙酸2mL，反应液在50度和氮气保护下搅拌2小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到实施例18(3mg，产率：23％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：358.1(M+1).

实施例19

3-氨基-2-(4-(3-羟基丙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

将2-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(1.5g,3.5mmol)溶于10mL甲胺乙醇溶液中，在50℃反应1.5小时。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、柱层析纯化得产物19.1(1.0g，产率：66％)。LCMS ESI(+)m/z:428.2(M+1)。

步骤B：(2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物19.2)

将化合物19.1(1.0g,2.3mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.7mL,3.5mmol)溶于5mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入二碳酸二叔丁酯(0.8mL,3.5mmol)，在室温下反应1小时，LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、柱层析纯化得产物19.2(1.2g，产率：100％)。LCMS ESI(+)m/z:528.2(M+1).

步骤C：(2-(4-羟基苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物19.3)

将化合物19.2(1.2g,2.3mmol)溶于10mL甲醇中，然后加入碳酸钾(476mg,3.5mmol)，在50℃反应2小时，LCMS监测反应完全。反应完后将反应液浓缩，柱层析纯化得产物19.3(940mg，产率：63％)。LCMS ESI(+)m/z:414.1(M+1).

步骤D：4-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯基三氟甲磺酸酯(化合物19.4)

将化合物19.3(940mg,1.5mmol)和吡啶(474mg,6.0mmol)溶于5mL二氯甲烷中，在0℃下滴加三氟甲磺酸酐(846mg,3.0mmol)，然后在室温下反应30分钟，LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用二氯甲烷(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、柱层析纯化得产物19.4(220mg，产率：27％)。LCMS ESI(+)m/z:546.1(M+1).

步骤E：(2-(4-烯丙基苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物19.5)

将化合物19.4(100mg,0.18mmol)，2-烯丙基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(37mg,0.22mmol)和碳酸铯(117mg,0.36mmol)溶于9mL四氢呋喃和1mL水中，然后加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(6mg,5mol％)，氮气置换，在85℃下反应过夜，LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用乙酸乙酯(10mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、柱层析纯化得产物19.5(78mg，产率：99％)。LCMS ESI(+)m/z:438.2(M+1).

步骤F：(2-(4-(3-羟丙基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物19.6)

将化合物19.5(78mg,0.17mmol)溶于2mL四氢呋喃中，在冰浴下滴加硼烷(10.0M,0.02mL,0.34mmol)，在0℃下反应1小时，再在室温下反应1小时。然后在冰浴下滴加5mL氢氧化钠水溶液(1M)，再滴加1mL双氧水(30％)，在冰浴下反应30分钟，再在室温下反应30分钟。LCMS监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(10mLX3)，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物19.6(20mg,产率：26％)。LCMS ESI(+)m/z:456.2(M+1).

步骤G：3-氨基-2-(4-(3-羟基丙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物19)

将化合物19.6(12mg,0.03mmol)溶于2mL二氯甲烷中，然后加入2mL盐酸/1,4-二氧六环溶液，在室温下反应1小时。LCMS监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于2mL的甲醇中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例19(2mg，产率：15％)。LCMS ESI(+)m/z:356.1(M+1).

实施例20

3-氨基-2-(4-(4-羟丁基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

将2-(4-溴苯基)乙酸甲酯(4.3g,18.7mmol)，3-丁炔-1-醇(2.6g,37.4mmol)溶于100mL三乙胺中，然后加入四(三苯基膦)钯(864mg,4mol％)和碘化亚铜(426mg,12mol％)，氮气置换，在100℃下反应2小时。LCMS监测反应完全。过滤，滤液减压浓缩，旋干，柱层析纯化得产物20.1(2.8g，产率：68％)。LCMS ESI(+)m/z:219.1(M+1).

步骤B：2-(4-(4-羟基丁基)苯基)乙酸甲酯(化合物20.2)

将化合物20.1(2.8g,12.8mmol)溶于20mL甲醇中，然后加入钯/碳(280mg,10％)，氢气置换三次，在40℃下反应过夜。LCMS监测反应完全。过滤，滤液减压浓缩，旋干，柱层析纯化得产物20.2(2.0g，产率：70％)。LCMS ESI(+)m/z:223.1(M+1).

步骤C：2-(4-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)丁基)苯基)乙酸甲酯(化合物20.3)

将化合物20.2(2.0g,9.0mmol)溶于10mL二氯甲烷中,然后加入2,6-二甲基吡啶(1.6mL,13.5mmol)和三异丙基硅基三氟甲磺酸酯(3.0mL,10.8mmol)在室温下反应过夜。TLC监测到原料反应完全。加入水淬灭反应，用二氯甲烷(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mLX3)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物20.3(3.4g,产率：100％)。

步骤D：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)丁基)苯基)丙酸甲酯(化合物20.4)

将化合物20.3(3.4g,9.0mmol)溶于20mL无水四氢呋喃中,氮气置换，干冰丙酮降温至-78℃，缓慢滴加六甲基二硅基胺基锂(1.0M，10.8mL，10.8mmol),滴加完成后体系于-78℃搅拌1小时，将N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(2.6g,10.8mmol)溶于10mL四氢呋喃中，慢慢滴加到体系中，控制滴加温度低于-70℃，滴加结束后反应保持在-78℃下搅拌3小时，LCMS监测到原料反应完全。加入饱和的氯化铵溶液(10mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(50mLX3)萃取，饱和食盐水(100mL)洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤、旋干，柱层析纯化得产物20.4(2.9g,产率：60％)。LCMS ESI(+)m/z：538.3(M+1).

步骤E：2-((2-羧基-2-(4-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)丁基)苯基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物20.5)

将化合物20.4(2.9g,5.4mmol)溶于10mL四氢呋喃和3mL水中,在0℃下加入氢氧化锂一水合物(680mg,16.2mmol)，于0℃下搅拌3小时，LCMS监测反应完全。减压蒸出有机溶剂，用1M的盐酸水溶液调pH至3-4，用乙酸乙酯萃取(50mLX3)，合并有机相，用饱和食盐水(100mLX3)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得产物20.5(2.8g，产率：94％)。LCMSESI(+)m/z：542.3(M+1).

步骤F：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)丁基)苯基)丙酸(化合物20.6)

将化合物20.5(2.8g,5.1mmol)，1-羟基苯并三唑(688mg,5.1mmol)和三乙胺(2.1mL,15.3mmol)溶于10mL二氯甲烷中,氮气保护，降温至0℃，然后向反应液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(979mg,5.1mmol)，搅拌一段时间，反应液变澄清，缓慢升温至室温，反应过夜。LCMS监测反应完全。加水稀释反应液，用二氯甲烷(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物20.6(2.3g,产率：86％)。LCMS ESI(+)m/z：524.3(M+1).

步骤G：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(4-((三异丙基硅基)氧基)丁基)苯基)丙酰胺(化合物20.7)

将化合物20.6(300mg,0.57mmol)溶于5mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后依次加入2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(327mg,0.86mmol)和N，N-二异丙基乙胺(147mg,1.1mmol)，在室温下搅拌5分钟，再加入化合物17.5(102mg,0.68mmol)，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物20.7(373mg，产率：100％)。LCMS ESI(+)m/z:656.3(M+1).

步骤H：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(4-羟丁基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物20.8)

将化合物20.7(373mg,0.69mmol)溶于2mL四氢呋喃中，然后加入6mL盐酸水溶液(1.0M)中，40℃下反应过夜。LCMS监测反应完全。反应完后加入饱和碳酸氢钠溶液中和，然后用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得到粗产物20.8(270mg，产率：95％)。LCMS ESI(+)m/z:500.2(M+1).

步骤I：3-氨基-2-(4-(4-羟丁基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物20)

将化合物20.8(30mg,0.06mmol)溶于5mL甲胺乙醇溶液中，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于2mL的甲醇中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例20(18mg，产率：67％)。LCMS ESI(+)m/z:370.2(M+1).

实施例21

(S)-3-氨基-2-(4-(2-羟基乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

步骤A：2-(4-乙烯基苯基)乙酸甲酯(化合物21.1)

将2-(4-溴苯基)乙酸甲酯(10g，43.65mmol)溶于200mL四氢呋喃和20mL水中，加入乙烯基三氟硼酸钾(7g，52.39mmol)，碳酸铯(28.6g，87.31mmol)和双(三苯基膦)氯化钯(600mg，0.87mmol),反应液在78度和氮气保护下搅拌16小时。将反应液冷却至室温，向反应液中加入水100mL，用乙酸乙酯(400mL)萃取2次，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到化合物21.1(5.6g，产率：73％，无色油状物)。

步骤B：2-(4-(2-羟乙基)苯基)乙酸(化合物21.2)

将化合物21.1(5.6g，31.78mmol)溶于50mL四氢呋喃中，冷却至0度，滴加10M的硼烷二甲硫醚溶液6.4mL。反应液在0度和氮气保护下搅拌1小时，然后在20度搅拌1小时。将反应液冷却至0度，滴加1M的氢氧化钠溶液和30％的双氧水56mL。反应液在0度搅拌0.5小时，然后在20度搅拌1小时。向反应液中加入饱和亚硫酸钠溶液400mL，然后用1M的盐酸溶液调节pH为2，用乙酸乙酯(500mL)萃取5次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物21.2(3.85g，收率：67％，白色固体)。

步骤C：2-(4-(2-羟乙基)苯基)乙酸甲酯(化合物21.3)

将化合物21.2(3.85g，21.37mmol)溶于45mL二氯甲烷和10mL甲醇中，冷却至0度，滴加2M的三甲基硅基重氮甲烷11.2mL，反应液在室温搅拌0.5小时。将反应液减压浓缩，柱层析纯化后得到化合物21.3(2.4g，收率：58％，无色油状物)。

步骤D：2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙酸甲酯(化合物21.4)

将化合物21.3(2.4g，12.36mmol)溶于40mL二氯甲烷中，冷却至0度，加入2,6-二甲基吡啶(1.99g，18.54mmol)和三异丙基硅基三氟甲磺酸酯(4.56g，14.83mmol)，反应液在室温搅拌16小时。向反应液中加入水50mL，用二氯甲烷(80mL)萃取2次，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤1次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物21.4(3.7g，收率：85％，无色油状物)。

步骤E：2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙酸(化合物21.5)

将化合物21.4(3.7g，10.55mmol)溶解在15mL水，15mL甲醇和40mL四氢呋喃中，加入一水合氢氧化锂(1.33g,31.65mmol)，反应液在室温搅拌2小时。向反应液中加入1M的盐酸溶液至pH为3，用乙酸乙酯(100mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗2次，无水硫酸钠干燥,过滤，减压浓缩得到产物21.5(3.43g,产率：97％，黄色固体)。

步骤F：2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙酰氯(化合物21.6)

将化合物21.5(3.43g，10.19mmol)溶解在40mL二氯甲烷中，将反应液冷却至0度，在氮气保护下滴加草酰氯(1.55g，12.23mmol),反应液在室温搅拌12小时。将反应液减压浓缩得到产物21.6(3.62g，产率：100％，黄色油状物)。

步骤G：(R)-4-苄基-3-(2-(4-(2-((三异丙基硅基)氧基)乙基)苯基)乙酰基)恶唑烷-2-酮(化合物21.7)

将(R)-4-苄基恶唑烷-2-酮(1.72g，9.69mmol)溶解在30mL四氢呋喃中，将反应液冷却至-78度，在氮气保护下，滴加2.5M的正丁基锂(4.28mL，10.71mmol)，反应液在-78度搅拌1小时。然后向反应液中滴加化合物21.6(3.62g，10.20mmol)的四氢呋喃溶液15mL。反应液在-78度搅拌2.5小时。向反应液中加入氯化铵溶液30mL，用乙酸乙酯(150mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物21.7(3.15g，产率：62％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：496.3(M+1).

步骤H：2-((R)-3-((R)-4-苄基-2-氧代恶唑烷-3-基)-3-氧代-2-(4-(2-((三异丙基硅基)氧基)乙基)苯基)丙基)异吲哚-1,3-二酮(化合物21.8)

在零下78摄氏度下，将化合物21.7(3.15g，6.35mmol)溶于30mL无水四氢呋喃中，然后慢慢滴入双三甲基硅基胺基锂(7.63mL，7.63mmol)到反应液里，在此温度下搅拌1小时，紧接着将称量好的N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(1.83g，7.63mmol)溶解于无水四氢呋喃(20mL)后慢慢滴加到反应瓶中，之后在此温度下搅拌2小时。用氯化铵饱和溶液对反应进行淬灭，乙酸乙酯(200mL)萃取2次，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物21.8(2g，收率：48％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z:655.3(M+1).

步骤I：(R)-2-((2-羧基-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物21.9)

将化合物21.8(2g，3.05mmol)溶于25mL甲醇和25mL四氢呋喃中，然后将一水合氢氧化锂(385mg，9.16mmol)溶于水(20mL)里滴入到反应液中，在室温搅拌3小时。向反应液中加入水60mL，水相用乙酸乙酯(40mL)洗2次，然后用1M的盐酸溶液调节pH为4，用乙酸乙酯(100mL)萃取2次，分液合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干后得到化合物21.9(980mg，收率：62％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z:514.2(M+1).

步骤J：(R)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)丙酸(化合物21.10)

将化合物21.9(980mg，1.91mmol)溶解在30mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(548mg，2.86mmol)，1-羟基苯并三唑(387mg，2.86mmol)和三乙胺(577mg，5.72mmol)，反应液在室温搅拌12小时。将反应液用1M盐酸溶液调节pH至4，用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗3次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物21.10(840mg，产率：89％，黄色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：496.2(M+1).

步骤K：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基))乙基)苯基)丙酰胺(化合物21.11)

将化合物21.10(840mg，1.69mmol)溶解在30mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(438mg，3.39mmol)，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N”，N'-四甲基脲六氟磷酸盐(967mg，2.54mmol)和噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(305mg，2.03mmol)。反应液在室温搅拌2小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物21.11(580mg，产率：55％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：628.3(M+1).

步骤L：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(2-羟乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物21.12)

将化合物21.11(580mg，0.92mmol)溶解在50mL四氢呋喃中，加入1.5M的盐酸水溶液20mL，反应液在40度搅拌2小时。将反应液冷却至室温，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8，用乙酸乙酯(100mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗3次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物21.12(350mg，产率：80％，黄色固体)。LCMSESI(+)m/z：472.1(M+1).

步骤M：(S)-3-氨基-2-(4-(2-羟基乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物21)

将化合物21.12(100mg，0.21mmol)溶解在33％的甲胺/乙醇溶液6mL中，反应液在50度搅拌1小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物实施例21(50mg，产率：69％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：342.1(M+1).

实施例22

(S)-3-氨基-N-(4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(羟甲基)苯基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

步骤A：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(((三异丙基甲硅烷基))氧基)甲基)苯基)丙酰胺(化合物22.1)

将(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)丙酸(400mg，0.832mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，然后加入50％1-丙基磷酸酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液(793mg，1.24mmol)、N,N-二异丙基乙胺(214mg，1.66mmol)和4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(154mg，0.92mmol)，将反应常温搅拌2小时。通过TLC(DCM:MeOH＝10:1)和LCMS确认反应完全。水被加入到反应瓶中，然后用乙酸乙酯(12mL)萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，柱层析纯化后得到白色固体22.1(300mg，收率：57％)。LCMS ESI(+)m/z:632.2(M+1).

步骤B：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(羟甲基)苯基)丙酰胺(化合物22.2)

将化合物22.1(300mg，0.475mmol)溶于四氢呋喃(12mL)和甲醇(2mL)中，然后将1.5mol/L的稀盐酸(5mL)加入反应瓶中，将反应置于55摄氏度的油浴中搅拌4小时。通过LCMS确认反应完全。饱和的碳酸氢钠溶液被加入到反应瓶中，然后用乙酸乙酯(12mL)萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩后得到灰白色固体22.2(185mg，收率：82％)。LCMS ESI(+)m/z:476.1(M+1).

步骤C：(S)-3-氨基-N-(4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(羟甲基)苯基)丙酰胺(化合物22)

将化合物22.2(125mg，0.263mmol)溶于33％甲胺的乙醇溶液(6mL)中，，反应在惰性气体氛围下50摄氏度搅拌1.5小时。通过LCMS确认反应完全。反应液直接用真空泵浓缩旋干，残渣溶于甲醇(1.5mL)，反向制备纯化后得到白色固体实施例22(61mg，收率：50％，纯度：98％)。LCMS ESI(+)m/z:346.1(M+1).

实施例23

(S)-3-氨基-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

将对甲基苯乙酸(5.0g，33.29mmol)溶解在100mL二氯甲烷中，将反应液冷却至0度，在氮气保护下滴加草酰氯(5.07g，39.95mmol),反应液在室温搅拌12小时。将反应液减压浓缩得到产物23.1(5.61g，产率：100％，黄色油状物)。

步骤B：(R)-4-苄基-3-(2-(对甲苯基)乙酰基)恶唑烷丁-2-酮(化合物23.2)

将(R)-4-苄基恶唑烷-2-酮(5.6g，31.61mmol)溶解在60mL四氢呋喃中，将反应液冷却至-78度，在氮气保护下，滴加2.5M的正丁基锂(13.97mL，34.93mmol)，反应液在-78度搅拌1小时。然后向反应液中滴加化合物1.1(5.61g，33.27mmol)的四氢呋喃溶液30mL。反应液在-78度搅拌2.5小时，然后逐渐升高至室温，搅拌12小时。向反应液中加入氯化铵溶液50mL，用乙酸乙酯(300mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物23.2(5.7g，产率：55％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：310.1(M+1).

步骤C：2-((R)-3-((R)-4-苄基-2-氧代恶唑烷丁-3-基)-3-氧代-2-(对甲苯基)丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物23.3)

在零下78摄氏度下，将化合物23.2(5.7g，18.43mmol)溶于70mL无水四氢呋喃中，然后慢慢滴入双三甲基硅基胺基锂(22.1mL，22.1mmol)到反应液里，在此温度下搅拌1小时，紧接着将称量好的N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(5.31g，22.1mmol)溶解于无水四氢呋喃(35mL)后慢慢滴加到反应瓶中，之后在此温度下搅拌3小时。用氯化铵饱和溶液对反应进行淬灭，乙酸乙酯(200mL)萃取2次，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物23.3(7.8g，收率：90％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z:469.2(M+1).

步骤D：(R)-2-((2-羧基-2-(对甲苯基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物23.4)

将化合物23.3(7.8g，16.65mmol)溶于25mL甲醇和100mL四氢呋喃中，然后将一水合氢氧化锂(2.1g，49.95mmol)溶于水(40mL)里滴入到反应液中，在室温搅拌2小时。向反应液中加入水120mL，水相用乙酸乙酯(40mL)洗3次，然后用1M的盐酸溶液调节pH为3，用乙酸乙酯(100mL)萃取2次，分液合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干后得到化合物23.4(4.6g，收率：84％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z:328.1(M+1).

步骤E：(R)-3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)-2-(对甲苯基)丙酸(化合物23.5)

将化合物23.4(4.6g，14.05mmol)溶解在80mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(4.0g，21.07mmol)，1-羟基苯并三唑(2.84g，21.07mmol)和三乙胺(5.26g，42.15mmol)，反应液在室温搅拌12小时。将反应液用1M盐酸溶液调节pH至3，用乙酸乙酯(100mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗3次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物23.5(2.8g，产率：64％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：310.1(M+1).

步骤F：(S)-3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物23.6)

将化合物23.5(600mg，1.94mmol)溶解在30mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(664mg，5.82mmol)，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N”，N'-四甲基脲六氟磷酸盐(1.1g，2.91mmol)和噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(361mg，1.94mmol)。反应液在室温搅拌16小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物23.6(500mg，产率：58％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：442.1(M+1).

步骤G：(S)-3-氨基-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物23)

将化合物23.6(500mg，1.13mmol)溶解在30mL乙醇和5mL N,N-二甲基甲酰胺中中，加入水合肼(567mg，11.30mmol)，反应液在50度搅拌4小时。将反应液冷却至室温，有固体析出，过滤，将滤液减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到粗产物360mg，取100mg样品用反向制备纯化得到产物实施例23(53mg，产率：53％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：312.1(M+1).

实施例24

(S)-3-(二甲基氨基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺

具体反应方程式如下所示：

步骤A：(S)-3-(二甲基氨基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物24)

将(S)-3-氨基-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(260mg，0.83mmol)溶解在30mL甲醇中，加入37％-40％甲醛水溶液(339mg，4.17mmol),氰基硼氢化钠(157mg，2.50mmol)和醋酸(150mg，2.50mmol)，反应液在室温和氮气保护下搅拌2小时。向反应液中加入碳酸氢钠水溶液(20mL)，用乙酸乙酯(70mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物实施例24(130mg，产率：46％，淡黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：340.1(M+1).

实施例25

4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸甲酯

具体反应方程式如下所示：

步骤A：2-(4-溴苯基)-3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)丙酸甲酯(化合物25.1)

在零下78摄氏度下，将对溴苯乙酸甲酯(2.0g，8.73mmol)溶于40mL无水四氢呋喃中，然后慢慢滴入双三甲基硅基胺基锂(1.75g，10.48mmol)到反应液里，在此温度下搅拌1小时，紧接着将称量好的N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(2.52g，10.48mmol)溶解于无水四氢呋喃(20mL)后慢慢滴加到反应瓶中，之后在此温度下搅拌2小时。用氯化铵饱和溶液对反应进行淬灭，乙酸乙酯(100mL)萃取2次，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物25.1(2.64g，收率：78％)。LCMS ESI(+)m/z:388.0,390.0(M+1).

步骤B：2-((2-(4-溴苯基)-2-羧乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物25.2)

将化合物25.1(2.6g，6.7mmol)溶于25mL甲醇和25mL四氢呋喃中，然后将一水合氢氧化锂(482mg，20.1mmol)溶于水(10mL)里滴入到反应液中，在室温搅拌3小时。向反应液中加入水50mL，用1M的盐酸溶液调节pH为3，用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，分液合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干后得到化合物25.2(2.63g，收率：100％)。LCMS ESI(+)m/z:392.0,394.0(M+1).

步骤C：2-(4-溴苯基)-3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)丙酸(化合物25.3)

将化合物25.2(2.63g，6.89mmol)溶解在50mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(1.98g，10.33mmol)，1-羟基苯并三唑(1.4g，10.33mmol)和三乙胺(2.09g，20.67mmol)，反应液在室温搅拌12小时。将反应液用1M盐酸溶液调节pH至3，用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗3次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物25.3(1.6g，产率：62％)。LCMSESI(+)m/z：274.0,276.0(M+1).

步骤D：2-(4-溴苯基)-3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物25.4)

将化合物25.3(1.0g，2.67mmol)溶解在20mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(690mg，8.02mmol)，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N”，N'-四甲基脲六氟磷酸盐(1.53g，4.01mmol)和噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(440mg，2.94mmol)。反应液在室温搅拌2小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物25.4(560mg，产率：41％)。LCMS ESI(+)m/z：506.0,508.0(M+1).

步骤E：3-氨基-2-(4-溴苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物25.5)

将化合物25.4(560mg，1.10mmol)溶解在30mL乙醇中，加入水合肼(551mg，11.00mmol)，反应液在50度搅拌4小时。将反应液冷却至室温，有固体析出，过滤，将滤液减压浓缩得到产物25.5(415mg，产率：100％)。LCMS ESI(+)m/z：376.0,378.0(M+1).

步骤F：(2-(4-溴苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物25.6)

将化合物25.5(415mg，1.10mmol)溶解在15mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入三乙胺(333mg，3.30mmol)，BOC酸酐(480mg，2.20mmol)，反应液在室温搅拌3小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗3次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物25.6(525mg，产率：100％)。LCMS ESI(+)m/z：476.0,478.0(M+1).

步骤G：4-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸甲酯(化合物25.7)

将化合物25.6(100mg，0.21mmol)溶解在2mL N,N-二甲基甲酰胺,2mL三乙胺和6mL甲醇中，加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(44mg，0.06mmol)，反应液在80度和一氧化碳氛围中搅拌12小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物25.7(37mg，产率：39％)。LCMS ESI(+)m/z：456.2(M+1).

步骤H：4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸甲酯(化合物25)

将化合物25.7(37mg，0.08mmol)溶解在5mL甲醇中，加入4M的盐酸/甲醇溶液2mL，反应液在室温搅拌4小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物实施例25(20mg，产率：69％)。LCMS ESI(+)m/z：356.1(M+1).

实施例26

4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸

具体反应方程式如下所示：

步骤A：4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸(化合物26)

将4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸甲酯(15mg，0.04mmol)溶解在5mL四氢呋喃中，加入一水合氢氧化锂(5.3mg，0.12mmol)的水溶液2mL,反应液在室温搅拌2小时。向反应液中加入2M的盐酸溶液至pH为5，将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物实施例26(7mg，产率：50％)。LCMS ESI(+)m/z：342.1(M+1).

实施例27

(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸苄酯

具体反应方程式如下所示：

步骤A：(S)-4-(3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸苄酯(化合物27.1)

将(S)-3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)-2-(4-(羟甲基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(80mg,0.175mmol)溶于2mL的吡啶中，在冰水浴下加入苯甲酰氯(80uL,0.694mmol)，然后升至室温并搅拌2.5小时。LCMS监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物27.1(90mg，产率：92％)。

步骤B：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸苄酯(化合物27)

将化合物27.1(90mg,0.16mmol)溶于5mL的四氢呋喃中，然后加入水合肼(77uL,1.6mmol),在55℃下反应3小时。TLC及LCMS监测反应完全。反应完后加水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，得到的残留物溶于5mL的甲醇和水溶液中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例27(36mg，产率：52％，纯度：97％)。LCMS ESI(+)m/z:432.2(M+1).

实施例28

(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)2,4-二甲基苯甲酸酯

步骤A：(S)-4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2,4-苯甲酸二甲酯(化合物28.1)

将(S)-(2-(4-(羟甲基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(100mg,0.234mmol)和2,4-二甲基苯甲酸(38mg,0.257mmol)溶于3mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(67mg,0.351mmol)和4-二甲氨基吡啶(28mg,0.234mmol)，在室温下反应过夜。TLC监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物28.1(91mg，产率：69％)。

步骤B：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)2,4-二甲基苯甲酸酯(化合物28)

将化合物28.1(89mg,0.16mmol)溶于5mL的甲醇中，加入3mL盐酸甲醇溶液(4M)，先在室温下搅拌1小时，然后将体系升温至50℃反应2小时，TLC监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于5mL的甲醇和水溶液中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例28(50mg，产率：68％，纯度：98％)。LCMS ESI(+)m/z:460.2(M+1).

实施例29

(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)3,5-二甲基苯甲酸酯

具体反应方程式如下所示：

步骤A：(S)-4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基3,5-苯甲酸二甲酯(化合物29.1)

将(S)-(2-(4-(羟甲基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(100mg,0.234mmol)和3,5-二甲基苯甲酸(38mg,0.257mmol)溶于3mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(67mg,0.351mmol)和4-二甲氨基吡啶(28mg,0.234mmol)，在室温下反应过夜。TLC监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物29.1(96mg，产率：73％)。

步骤B：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)3,5-二甲基苯甲酸酯(化合物29)

将化合物29.1(96mg,0.17mmol)溶于5mL的甲醇中，加入2mL盐酸甲醇溶液(4M)，先在室温下搅拌1小时，然后将体系升温至50℃反应2小时，TLC监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于5mL的甲醇和水溶液中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例29(46mg，产率：60％，纯度：98％)。LCMS ESI(+)m/z:460.2(M+1).

实施例30：ROCK2激酶抑制剂活性测试

<一>实验过程。

1)按照实验需求准备4X ROCK2反应溶液，4X ATP反应溶液，4X底物溶液，4X化合物溶液。

2)向384多孔板中依次加入2.5μL，4X激酶溶液，和2.5μL，已经稀释好的不同浓度梯度的4X测试化合物溶液，每个浓度设置2个复孔，同时设置酶溶液空白对照组和阴性对照组(DMSO组)，1000转，离心1分钟，混匀酶和化合物，向384多孔板中加入2.5μL，4X底物溶液，1000转离心1分钟，向384多孔板中加入2.5μL，4XATP溶液，1000转离心1分钟起始酶反应，室温孵育1.5小时。

ROCK2反应的各组分终浓度分别为：ROCK2：1nM，底物：500nM，ATP：6uM，测试化合物终浓度范围为：100nM-5pM

3)按照实验需求配制4X Streptavidin-XL-665检测溶液。

4)酶反应结束后，向384多孔板每孔中加入5ul，4X Streptavidin-XL-665检测溶液，1000转，离心1分钟，向384多孔板每孔中加入5μL，4X STK Antibody-cryptate检测抗体溶液，1000转，离心1分钟，室温条件下孵育1小时。

5)抗体孵育结束后，在Envision读板仪上用HTRF程序测定各孔的信号值。

<二>数据分析

1)以酶溶液空白对照组为100％抑制率和阴性对照组(DMSO组)为0％抑制率，计算检测化合物各个浓度对应的百分比抑制率。

2)在GraphPad Prism软件中对检测化合物的浓度对数值和相对应的百分比抑制率进行非线性回归分析，得到检测化合物的半数抑制浓度(IC50)。

用此方法检测得到化合物ROCK2激酶抑制剂活性(IC

实施例31：细胞活性测试

<一>实验过程

1)消化处于对数生长期的A7R5细胞，每孔2E5个细胞接种在6孔板中，5％CO2，37℃培养过夜，24小时后将细胞培养基替换为含有0.05％FBS的饥饿培养基，饥饿细胞20小时。

2)去除饥饿培养基，用配制好的化合物浓度梯度处理细胞60分钟，设置VIP-5021(10uM)为阳性对照，DMSO组为阴性对照。

3)化合物处理结束后，吸走化合物溶液，PBS清洗2次，每孔加入100ul细胞裂解液，用细胞刮板轻轻刮下细胞，并将细胞转移至离心管中，冰上裂解60分钟。

4裂解结束后，4℃，14000rpm离心15分钟，收集裂解液上清，采用BCA方法进行蛋白定量，调整蛋白浓度，按照比例加入上样缓冲液，100℃，处理10分钟，使蛋白变性。

5)组装好电泳设备，每个样品上样20ug总蛋白，固定电压125V，电泳90分钟，电泳结束后，组装转膜系统，固定电流300mA，转膜120分钟，转膜结束后，取出PVDF膜，PBS清洗2次，加入封闭液，室温封闭60分钟，去除封闭液，加入含有一抗(Phospho-Myosin LightChain2(Ser19))溶液(抗体稀释倍数1：1000)，选定GAPDH作为内参，4℃，孵育过夜。

6)PBST清洗3次，加入含有对应种属的HRP-抗体(二抗稀释倍数1：2000)，室温孵育60分钟，PBST清洗3次，准备HRP化学发光底物，按照0.1毫升每平方厘米滴加在PVDF膜上，作用30秒，使用凝胶成像仪(ChemiDoc XRS+(BIO-RAD))采集化学发光信号。

7)使用image J软件对各个条带进行定量分析，以GAPDH表达量为内参，校正各个样品中Phospho-Myosin Light Chain2(Ser19)的磷酸化蛋白水平。

<二>数据分析

1)以最高浓度化合物样品的MLC2(Ser19)蛋白磷酸化水平为100％抑制率，以阴性对照组(DMSO组)的MLC2(Ser19)蛋白磷酸化水平为0％抑制率，计算检测化合物各个浓度对应的百分比抑制率

2)在GraphPad Prism软件中对检测化合物的浓度对数值和相对应的百分比抑制率进行非线性回归分析，得到检测化合物的细胞水平的半数抑制浓度(IC50)。

用此方法检测得到化合物细胞活性(IC