小檗碱在植物灰霉病防治中作为杀菌增效剂的应用

本申请是申请号为“201810960959.8”，发明名称为“小檗碱在植物灰霉病防治中作为杀菌增效剂的应用”的专利申请的分案申请

技术领域

本发明涉及植物疾病防治领域，具体涉及小檗碱在植物灰霉病防治中作为杀菌增效剂的应用。

背景技术

灰霉病是由半知菌亚门葡萄孢属灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)感染寄主植物引起的一种真菌病害，可为害番茄、黄瓜、葡萄、草莓等果蔬以及一些花卉作物，产量损失高达20％～50％，主要为害寄主茎、叶、花、果实，但主要危害青果。灰霉病自20世纪80年代开始在我国发生蔓延，接连造成非常巨大的经济损失。

实际生产中防治灰霉病的措施主要包括化学防治、生物防治、物理防治、培育抗病品种等。由于化学防治具有经济实惠，及时高效等特点。许多年以来，灰霉病的防治方法主要是化学药剂防治。但灰葡萄孢菌具有繁殖生长迅速和遗传变异量巨大的特点，导致其对许多大量施用的化学药剂产生非常严重的多重耐药性。这不但使药效降低，而且造成一定程度的环境污染和药物残留。新药开发周期长、难度大，费用巨大。现有杀菌剂的增效剂发现将为提升病原菌对药剂敏感性，解决农业生产中灰霉病抗性问题提供有效途径。

杀菌增效剂一般是指其本身无抑菌活性或较弱的杀菌活性，其通常为具有低表面张力、良好展着性、渗透性或乳化分散性的物质，如有机硅类表面活性剂、矿物油等，主要能增强药液在植物体表面的湿润、黏附及展着能力，显著提高农药的有效利用率，从而提高药剂对病害的防效。但是，这些物质对吸收进植物体内的药剂进一步传导入病原菌体内的促进作用有限，特别是对于因外排能力增强产生多药抗性的菌株。目前，关于田间多药抗性灰霉病菌有效的杀菌剂增效剂尚鲜有报道，这类物质的开发和应用将为有效控制田间抗药性灰葡萄孢菌群体的危害具有重要的意义。

发明内容

基于上述缺陷，本发明的第一目的，是提供小檗碱在植物灰霉病防治中作为杀菌增效剂的应用。

小檗碱对于多种不同作用机制的杀菌剂都具有显著的增效作用。小檗碱，分子式C

本发明将小檗碱与杀菌剂混合后，意外地发现，经混合后对抗药性灰霉病菌有很好的增效作用，抑制率大大提高，并降低了杀菌剂的使用剂量。

本发明一并提出如下改进：

所述杀菌增效剂中的杀菌剂为苯并咪唑类杀菌剂、新型烟酰胺类杀菌剂、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂、苯胺基嘧啶类杀菌剂、三唑类杀菌剂、酰亚胺类杀菌剂、吡咯类杀菌剂和取代苯胺类杀菌剂(其使用形式可包含以组合物的形式应用，先后分别应用等多种方式)；

优选地，所述苯并咪唑类杀菌剂为多菌灵；

或，所述新型烟酰胺类杀菌剂为啶酰菌胺；

或，所述甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂为嘧菌酯；

或，所述苯胺基嘧啶类杀菌剂为嘧霉胺；

或，所述三唑类杀菌剂为苯醚甲环唑；

或，所述酰亚胺类杀菌剂为异菌脲或腐霉利；

或，所述吡咯类杀菌剂为咯菌腈；

或，所述取代苯胺类杀菌剂为氟啶胺。

本发明所提出的应用方法中，所述的灰霉病的致病菌为对琥珀酸脱氢酶抑制剂、线粒体呼吸抑制剂、微管蛋白抑制剂、蛋氨酸生物合成抑制剂、麦角甾醇合成抑制剂、信号传导抑制剂和解偶联剂中的一种或多种产生抗性的菌株；

优选地，所述灰霉病的致病菌为多菌灵、啶酰菌胺、嘧菌酯、嘧霉胺、苯醚甲环唑、异菌脲、腐霉利、咯菌腈和氟啶胺中的一种或多种的抗性菌株；和/或，所述的灰霉病的致病菌为苯并咪唑类杀菌剂、新型烟酰胺类杀菌剂、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂、苯胺基嘧啶类杀菌剂、三唑类杀菌剂、酰亚胺类杀菌剂、吡咯类杀菌剂和取代苯胺类杀菌剂中的一种或多种的抗性菌株。

本发明所提供的应用，针对上述抗性菌株具有卓越的杀菌效。

本发明的第二个目的，是提供一种用于灰霉病防治的组合物，包括(由以下组分组成)小檗碱和杀菌剂；

优选地，所述杀菌剂为苯并咪唑类杀菌剂、新型烟酰胺类杀菌剂、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂、苯胺基嘧啶类杀菌剂、三唑类杀菌剂、酰亚胺类杀菌剂、吡咯类杀菌剂和取代苯胺类杀菌剂。本发明意外地发现，小檗碱能显著提升这些类杀菌剂的杀菌效果。

在所述组合物中，优选地，所述苯并咪唑类杀菌剂为多菌灵。

进一步地，所述小檗碱与苯并咪唑类杀菌剂的重量比为(0.5-50):1；更优选所述重量比为(10-15):1，在此范围内，小檗碱的增效效果可达10倍以上。

在所述组合物中，优选地，所述新型烟酰胺类杀菌剂为啶酰菌胺。

进一步地，所述小檗碱和所述新型烟酰胺类杀菌剂的重量比为(0.5-50):1；更优选所述重量比为(1.25-10):1，在此范围内，小檗碱的增效效果可达0.6～7.8倍。

在所述组合物中，优选地，所述甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂为嘧菌酯。

进一步地，所述小檗碱和所述甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的重量比为(1-50):1；更优选所述重量比为(10-20):1，在此范围内，小檗碱的增效效果可达3倍以上。

在所述组合物中，优选地，所述苯胺基嘧啶类杀菌剂为嘧霉。

进一步地，所述小檗碱与苯胺基嘧啶类杀菌剂的重量比为(1-50):1；更优选所述重量比为(5-20):1，在此范围内，小檗碱的增效效果可达4倍以上。

本发明所提供的增效剂可以和杀菌剂以组合产品的形式，加工成水分散粒剂、可湿性粉剂、悬浮剂、乳油、微乳剂、水乳剂、微囊剂、微囊悬浮剂。在此不做特殊限制。

本发明意外地发现了小檗碱对于苯并咪唑类杀菌剂、新型烟酰胺类杀菌剂、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂、苯胺基嘧啶类杀菌剂和三唑类杀菌剂具有增效作用，与杀菌剂混合使用能提高杀菌剂的毒力，恢复抗药性菌株对药剂的敏感性，可作为杀菌剂的增效剂使用，可用于植物田间灰霉病抗药性治理，特别是对于具备抗性的植物有更好的治理效果。

本发明的优点在于：

1.小檗碱对杀菌剂具有增效作用，与杀菌剂混合使用可以提高杀菌剂的毒力，提高抗药性菌株对杀菌剂的敏感性，提高杀菌剂对田间抗药性灰霉病的防治效果，并减少杀菌剂的用量，为现有杀菌剂新制剂的开发应用提供了新的方法。

2.小檗碱是天然植物的提取物，用于医药领域，对环境友好。本发明提供了该类药物的新用途，可在农业领域用于病害防治，并为灰霉病田间抗性治理提供了新的途径。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

以下各实施例中，所涉及“质量份”按照本领域理解，为重量单位，可为“g”、“kg”、“mg”、“μg”等。

以下各实施例、试验例中涉及试剂披露如下：

多菌灵(98％，四川国光农化股份有限公司)，啶酰菌胺(98％，江苏辉丰农化股份有限公司)、嘧菌酯(96.5％，江苏辉丰农化股份有限公司)、嘧霉胺(93％，利民化工股份有限公司)、小檗碱(97％，天津希恩思生化科技有限公司)。

菌株来源如下：

灰霉菌242(2016年4月采上海市银龙土场)，上述菌株经检验，为啶酰菌胺、嘧菌酯、多菌灵和嘧霉胺的抗性菌株。灰霉菌242可由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心受理保藏，具体保藏信息如下：分类命名为Botrytis cinerea，保藏编号为CGMCC3.18983。

以上灰霉菌为本实验室在田间采集获得的，田间存在的灰霉大部分存在不同抗药性，多药抗性灰霉菌为本领域技术人员易于从田间分离获得的一类抗药性菌株，本领域技术人员可采用常规方法获得对啶酰菌胺、嘧菌酯、多菌灵和嘧霉胺的抗性菌株。

实施例1

本实施例提供一种用于植物灰霉病防治的组合物，由质量份数10份小檗碱和1份多菌灵组成。

实施例2

本实施例提供一种用于植物灰霉病防治的组合物，由质量份数5份小檗碱和1份多菌灵组成。

实施例3

本实施例提供一种用于植物灰霉病防治的组合物，由质量份数2.5份小檗碱和1份多菌灵组成。

实施例4

本实施例提供一种用于植物灰霉病防治的组合物，由质量份数0.625份小檗碱和1份多菌灵组成。

应用例1

本应用例提供小檗碱在植物灰霉病防治的杀菌增效剂的应用，其中，所述杀菌增效剂与苯并咪唑类杀菌剂以组合物的形式应用于灰霉病害的防治。

试验对象：采用灰霉多抗菌株242，苯并咪唑类杀菌剂(多菌灵)单剂、实施例1-4所提供的组合物和小檗碱单剂。

试验方法：

1.带毒培养基制备：使用有机溶剂二甲基亚砜(DMSO)溶解，分别配制杀菌剂和增效剂母液。在PDA培养基(每升200g马铃薯，18g葡萄糖，15g琼脂)中添加杀菌剂和小檗碱(对照为DMSO)制成带毒培养基。

2.EC

抑制率按照如下公式计算：

按照上述方法进行抑制率测定，并计算各比例复配药液及单剂药液的EC

3.增效性测定：按上述方法分别测定多菌灵单剂、小檗碱单剂、多菌灵与小檗碱复配后对灰霉菌株242的EC

试验结果：多菌灵与小檗碱单剂和混剂对田间灰霉多药抗药性菌株242的毒力检测结果如表1所示。

据文献报道，当多菌灵对灰葡萄孢菌的EC

表1小檗碱对多菌灵抑制田间抗性灰霉病菌的增效作用

实施例5

本实施例提供一种用于植物灰霉病防治的组合物，由质量份数10份小檗碱和1份啶酰菌胺组成。

实施例6

本实施例提供一种用于植物灰霉病防治的组合物，由质量份数5份小檗碱和1份啶酰菌胺组成。

实施例7

本实施例提供一种用于植物灰霉病防治的组合物，由质量份数2.5份小檗碱和1份啶酰菌胺组成。

实施例8

本实施例提供一种用于植物灰霉病防治的组合物，由质量份数1.25份小檗碱和1份啶酰菌胺组成。

应用例2

本应用例提供小檗碱在植物灰霉病防治的杀菌增效剂的应用，其中，所述杀菌增效剂与新型烟酰胺类杀菌剂以组合物的形式应用于灰霉病害的防治。

试验对象：新型烟酰胺类杀菌剂(啶酰菌胺)单剂、实施例5-8所提供的组合物和小檗碱单剂。

试验方法：

1.EC

2.增效性测定：按照应用例1所记载的方法分别测定啶酰菌胺单剂、小檗碱单剂、啶酰菌胺与小檗碱复配后对灰霉菌株242的EC

试验结果：

啶酰菌胺与小檗碱单剂和混剂对田间灰霉多药抗药性菌株242的毒力检测结果如表2所示。

据文献报道，啶酰菌胺的MIC为10μg/mL，抗性测定试验中啶酰菌胺对灰霉灰霉多抗菌株242的EC

表2小檗碱对啶酰菌胺抑制田间抗性灰霉病菌的增效作用

实施例9

本实施例提供一种用于植物灰霉病防治的组合物，由质量份数20份小檗碱和1份嘧菌酯组成。

实施例10

本实施例提供一种用于植物灰霉病防治的组合物，由质量份数10份小檗碱和1份嘧菌酯组成。

实施例11

本实施例提供一种用于植物灰霉病防治的组合物，由质量份数5份小檗碱和1份嘧菌酯组成。

实施例12

本实施例提供一种用于植物灰霉病防治的组合物，由质量份数2.5份小檗碱和1份嘧菌酯组成。

实施例13

本实施例提供一种用于植物灰霉病防治的组合物，由质量份数1.25份小檗碱和1份嘧菌酯组成。

应用例3

本应用例提供小檗碱在植物灰霉病防治的杀菌增效剂的应用，其中，所述杀菌增效剂与甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂以组合物的形式应用于灰霉病害的防治。

试验对象：甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂(嘧菌酯)单剂、实施例9-13所提供的组合物和小檗碱单剂。

试验方法：

1.EC

2.增效性测定：按照应用例1所记载的方法分别测定嘧菌酯单剂、小檗碱单剂、嘧菌酯与小檗碱复配后对灰霉菌株242的EC

试验结果：

嘧菌酯与小檗碱单剂和混剂对田间灰霉多药抗药性菌株242的毒力检测结果如表3所示。

据文献报道，嘧菌酯的MIC为50μg/mL，抗性测定试验中嘧菌酯对灰霉多抗菌株242的EC

表3小檗碱对嘧菌酯抑制田间抗性灰霉病菌的增效作用

实施例14

本实施例提供一种用于植物灰霉病防治的组合物，由质量份数20份小檗碱和1份嘧霉胺组成。

实施例15

本实施例提供一种用于植物灰霉病防治的组合物，由质量份数10份小檗碱和1份嘧霉胺组成。

实施例16

本实施例提供一种用于植物灰霉病防治的组合物，由质量份数5份小檗碱和1份嘧霉胺组成。

应用例4

本应用例提供小檗碱在植物灰霉病防治的杀菌增效剂的应用，其中，所述杀菌增效剂与苯胺基嘧啶类杀菌剂以组合物的形式应用于灰霉病害的防治。

试验对象：苯胺基嘧啶类杀菌剂(嘧霉胺)单剂、实施例14-16所提供的组合物和小檗碱单剂。

试验方法：

1.1.带毒培养基制备：使用有机溶剂二甲基亚砜(DMSO)溶解，分别配制杀菌剂和增效剂母液。在GGA培养基(每升葡萄糖4g，明胶4g，琼脂12.5g，K

2.EC

3.增效性测定：按照应用例1所记载的方法分别测定嘧霉胺单剂、小檗碱单剂、嘧霉胺与小檗碱复配后对灰霉菌株242的EC

试验结果：

嘧霉胺与小檗碱单剂和混剂对田间灰霉多药抗药性菌株242的毒力检测结果如表4所示。

据文献报道，当嘧霉胺对灰葡萄孢菌的EC

表4小檗碱对嘧霉胺抑制田间抗性灰霉病菌的增效作用

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。