一种强力定眩片HPLC指纹图谱的建立方法

技术领域

本发明涉及一种中药的HPLC指纹图谱的建立方法，特别涉及一种强力定眩片HPLC指纹图谱的建立方法，本发明属于医药技术领域。

背景技术

强力定眩片是陕西汉王药业有限公司独家生产的药品(批准文号：国药准字Z61020139)，是由天麻、杜仲、杜仲叶、野菊花、川芎5味中药组成的复方制剂，其配伍精良，诸药合用共奏息风止痉、平肝潜阳、益气活血之效。主治高血压、高脂血证和眩晕等证。该药能解除血管痉挛，扩张血管，降低血黏稠度，提升患者脑组织中的去甲肾上腺素、多巴胺以及5-羟色胺水平，临床疗效显著。

中药材质量直接关系到中药复方制剂质量及其临床疗效，仅凭单一成分的定量测定来反映中药材、中药复方质量具有一定的片面性和局限性。多指标化学成分的含量测定虽然能全面、客观地评价复方制剂的质量，但对上市产品的制造企业的检测条件要求高、检测成本大、周期相对较长。指纹图谱具有信息唯一性、特征性、整体性、时效性、依从性和使用性强等特点。指纹图谱能够全面、准确地反映上市中成药遵循固化、法定、科学的制备工艺生产之稳定与重现特性，是中成药质量控制的有效手段，从而建立该方法为鉴别中成药的真伪，评价其质量的一致性及稳定性具有重要意义。

目前，国内外未有强力定眩片指纹图谱的研究报道。本发明建立了强力定眩片HPLC指纹图谱方法，旨在为评估强力定眩片法定生产工艺的重现性、稳定性和质量检控提供方法学保障。

发明内容

本发明的目的在于提供一种强力定眩片HPLC指纹图谱的建立方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明的一种强力定眩片HPLC指纹图谱的建立方法，其包括以下步骤：

(1)强力定眩片供试品溶液的制备

分别取十批次以上强力定眩片作为供试品，分别精密称取每个批次供试品不低于0.4g，置5mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理15-45min，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，过0.45μm微孔滤膜滤过，即得；

(2)HPLC检测

色谱柱：Lamdo Stamsil C

(3)HPLC指纹图谱的建立

采用步骤(2)相同的色谱条件分别测定十批次以上的供试品溶液，获得十批次以上的供试品溶液的HPLC色谱图，将十批次以上的色谱图数据以AIA格式导入“中药指纹图谱相似度系统(2004A版)”软件，经多点校正后进行全谱峰匹配，从而得到十批次以上拟合的强力定眩片HPLC指纹图谱。

其中，优选的，步骤(1)中超声处理的时间为15-30min，功率为250W，频率为40kHz。

其中，优选的，采用本发明所述的方法得到的强力定眩片HPLC指纹图谱，所述的强力定眩片HPLC指纹图谱中包括34个共有指纹峰。

相较于现有技术，本发明的有益效果是：

本发明建立了强力定眩片的HPLC指纹图谱，并且对该方法的精密度、重复性以及稳定性进行了考察，结果表明，该方法精密度、重复性以及稳定性均良好，共检出34个共有峰，10批强力定眩片的指纹图谱的相似度值在0.9以上，符合《中国药典》要求。本发明的技术为评估强力定眩片法定生产工艺的重现性、稳定性和质量检控提供了方法学保障。

附图说明

图1为10批强力定眩片的HPLC指纹图谱；

其中，R：特征图谱(10批拟合)；S1～S10：强力定眩片制剂生产批号；

图2为强力定眩片HPLC对照指纹图谱；

其中，1～34：特征指纹属于HPLC仪在“Lamdo Stamsil C

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明不限于以下实施例。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神及范围下可对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1强力定眩片HPLC指纹图谱的建立及方法学考察

1材料

1.1仪器LC-2010CHT高效液相色谱仪(日本岛津公司)，LCLabsolution色谱工作站(日本岛津公司)，BSA2202S型电子天平(德国sartorius公司)，移液枪(德国Eppendorf)，Milli-Q Integral 5超纯水一体化系统(密理博公司)；KQ-500E超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，250W，40kHz)。

1.2试剂与药物10批强力定眩片样品批号为DX078907(S1)、DX079907(S2)、DX080907(S3)、DX081907(S4)、DX082908(S5)、DX083908(S6)、DX084908(S7)、DX085908(S8)、DX086908(S9)、DX087908(S10)由陕西汉王药业股份有限公司提供。乙腈、甲醇均为色谱纯，美国Fisher公司；其余试剂均为分析纯；水为超纯水。

2.方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Lamdo Stamsil C

2.2参比物与供试品溶液的制备

2.2.1参比物溶液的制备精密称取没食子酸对照品适量，制成每1ml甲醇含30μg没食子酸对照品溶液。

2.2.2供试品溶液制备

精密称取供试品0.4g，置5mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理30min(功率：250W，频率：40KHz)，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，过0.45μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3指纹图谱方法学考察

2.3.1精密度试验取批号为DX082908的样品，按“2.2.2”项下方法制备供试液，按“2.1”项下色谱条件，连续进样6次，以2号峰(没食子酸)为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD。结果，相对保留时间的RSD＜1.0％，相对峰面积的RSD＜5.0％，表明仪器精密度良好，见表1～2。

表1精密度共有峰相对保留时间

表2精密度共有峰相对峰面积

2.3.2重复性试验取批号为DX082908的样品，按“2.2.1”项下方法平行制备6份供试液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，以2号峰(没食子酸)为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD。结果，各共有峰的相对保留时间的RSD＜2.0％，相对峰面积的RSD＜5.0％，表明方法重复性良好，见表3～4。

表3重复性共有峰相对保留时间

表4重复性共有峰相对峰面积

2.3.3稳定性试验取批号为DX082908的样品，按“2.2.1”项下方法制备供试液，按“2.1”项下色谱条件，分别在在第0、2、4，6、8、10、24、36h进样测定，以2号峰(没食子酸)为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD。结果，相对保留时间的RSD＜1.0％，相对峰面积的RSD＜5.0％，表明供试品溶液在36h内稳定性良好，见表5～6。

表5稳定性共有峰相对保留时间

表6稳定性相对峰面积

2.4指纹图谱的建立及相似度评价取10批强力定眩片样品，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液(S1～S10)，按“2.1”项下色谱条件分别测定10批强力定眩片供试品溶液，记录色谱图。将文件以AIA格式导入“中药指纹图谱相似度系统(2004A版)”软件，以S1样品色谱图为参照图谱，设定时间窗宽度为0.5，经多点校正后进行全谱峰匹配，得到10批样品指纹图谱及对照指纹图谱(R)，见图1、图2。结果显示，10批样品中有34个共有峰，其相似度均≥0.9，见表7，表明其质量相对稳定，共有成分基本一致。

表7 10批样品的相似度

表8 10批样品共有峰相对保留时间

表9 10批样品共有峰相对峰面积

3.讨论

3.1色谱条件的选择2015年版《中国药典》

3.2提取溶剂的选择试验考察了用水、60％甲醇溶液、70％甲醇溶液、80％甲醇溶液、90％甲醇溶液和甲醇(纯甲醇)提取的效果，发现甲醇的提取率较高，峰数目较多，分离度较好，故选择了甲醇提取，各色谱峰与其它杂质峰完全达到基线分离，故选用甲醇作为提取溶剂。

3.3样品处理比较试验比较了超声提取时间15、30、45min对提取率的影响，经比较发现：超声处理30min优于15和45min，故优选超声处理30min。本研究比较了加热回流和超声提取两种方法，考虑到成分含藁本内脂、天麻素等挥发性成分受热易分解，且有文献报道，天麻素受热60℃以上含量会下降，还会有新物质生成，故选择了超声提取法。

中药的成分复杂，质量控制难度较大。指纹图谱为中药提供了一个质量控制指标，因其具有特征性强、整体性和模糊性的特点，已被广泛应用于中药制剂的综合评价和综合控制。本发明所建方法高效、灵敏，较好地展现了本品，指纹图谱中34个共有峰面积精密度、重复性、稳定性的RSD均小于5％，相对保留时间的精密度、重复性、稳定性试验的RSD均小于2.0％。