一种中药组合物中辛弗林含量的检测方法和应用

技术领域

本发明涉及中药分析领域，具体涉及一种中药组合物中辛弗林含量的检测方法和应用。

背景技术

枳术宽中胶囊，为胶囊剂，内容物为淡灰褐色粉末；气微香，味微苦、咸，成分为白术(炒)、枳实、柴胡和山楂，具有健脾和胃，理气消痞的功效，用于胃痞(脾虚气滞)，症见呕吐、反胃、纳呆、返酸等，以及功能性消化不良见以上症状者。

辛弗林是枳实的主要成分，辛弗林含量检测是枳术宽中胶囊质量控制中的重要步骤。现有技术并没有针对包括白术、枳实、柴胡和山楂的中药组合物(如枳术宽中胶囊内容物)中辛弗林含量的检测方法。中国药典(2015年版)提供了枳实中辛弗林的含量测定方法，然而白术、枳实、柴胡和山楂组成的中药组合物成分复杂，各成分之间相互影响，将药典中的方法应用于上述中药组合物的辛弗林含量检测时，辛弗林与其他组分的分离效果较差，无法对辛弗林含量进行准确测定。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术没有针对包括白术、枳实、柴胡和山楂的中药组合物中辛弗林含量的检测方法，以及现有技术中的辛弗林含量检测方法不适用于该中药组合物的缺陷，从而提供一种中药组合物中辛弗林含量的检测方法和应用。

第一方面，本发明提供一种中药组合物中辛弗林含量的检测方法，所述中药组合物的原料包括：枳实、白术、柴胡和山楂，

所述检测方法包括：采用高效液相色谱法检测所述中药组合物中的辛弗林含量，色谱条件包括：

流动相：体积比30:70的乙腈和十二烷基硫酸钠溶液，其中，所述十二烷基硫酸钠溶液的溶剂为体积分数0.1％的磷酸溶液，十二烷基硫酸钠的质量分数为0.2％。

进一步地，色谱条件还包括：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；

洗脱方式：等度洗脱；

进一步地，色谱条件还包括：

进样量：10μL；流速：0.8-1mL/min；柱温：25-30℃；

检测仪器为紫外检测器；检测波长：225nm。

优选地，流速：1mL/min；柱温：30℃。

进一步地，所述检测方法包括：采用高效液相色谱法分别检测对照品溶液及供试品溶液中辛弗林的峰面积，根据外标法计算中药组合物中辛弗林的含量。

进一步地，所述供试品溶液的制备方法包括：

取待测中药组合物粉末，精密称定，加入甲醇进行提取，放冷，滤过，精密量取续滤液，蒸干，残渣加入磷酸溶液使溶解，定容，得到供试品溶液。

进一步地，在制备所述供试品溶液的步骤中，

以g/mL计，所述待测中药组合物粉末与甲醇的质量体积比为2:50；

所述提取为在室温下超声提取30min。

进一步地，在制备所述供试品溶液的步骤中，

精密量取续滤液25mL，蒸干，残渣加体积分数为0.75％的磷酸溶液使溶解，转移至25mL容量瓶中，加入体积分数为0.75％的磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得。

进一步地，所述对照品溶液的制备方法包括：

精密称定辛弗林对照品，加入使甲醇溶解并配制成所需浓度的对照品溶液。

第二方面，本发明提供所述的检测方法在含有所述中药组合物的药品的质量控制中的应用。

进一步地，所述药品为枳术宽中胶囊。

本发明技术方案，具有如下优点：

1.本发明首次提出了针对包括枳实、白术、柴胡和山楂的中药组合物中辛弗林的含量检测方法，采用本发明提供的高效液相色谱法能够实现辛弗林与中药组合物中其他成分的有效分离，该检测方法准确、稳定、重复性好，从而能够用于该中药组合物的辛弗林含量测定。

2.本发明提供的中药组合物中辛弗林含量的检测方法可以用于含有该中药组合物的药品的质量控制，如用于枳术宽中胶囊的质量控制，采用该方法能够对枳术宽中胶囊中是否含有枳实以及对原料药枳实的质量进行检测和控制，对枳术宽中胶囊的质量控制具有重要意义。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明专属性考察中供试品溶液的高效液相色谱图；

图2是本发明专属性考察中对照品溶液的高效液相色谱图；

图3是本发明专属性考察中空白试剂的高效液相色谱图；

图4是本发明专属性考察中阴性样品溶液的高效液相色谱图；

图5是本发明对照例中供试品溶液的高效液相色谱图。

具体实施方式

提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。

本发明实施例和实验例中涉及仪器仪表及容器具来源如表1所示，试剂、对照品和试验样品来源如表2所示。

表1 仪器仪表及容器具来源

表2 试剂、对照品和试验样品来源

实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用仪器仪表、容器具、试剂、对照品和试验样品均为可以通过市购获得的常规产品，包括但不限于本申请实施例和实验例中采用的仪器仪表、容器具、试剂、对照品和试验样品。

实施例1

一种枳术宽中胶囊中辛弗林含量的检测方法，采用高效液相色谱法进行检测，具体如下：

(1)色谱条件：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250mm×4.6mm，Waters)

流动相：体积比30:70的乙腈和十二烷基硫酸钠溶液，其中，十二烷基硫酸钠溶液的溶剂为体积分数0.1％的磷酸溶液，十二烷基硫酸钠在十二烷基硫酸钠溶液中的质量分数为0.2％；

洗脱方式：等度洗脱；

进样量：10.0μL；流速：1.00mL/min；柱温30℃；

检测仪器为紫外检测器；检测波长：225nm。

(2)对照品溶液的制备：

精密称定辛弗林对照品4.056mg，置100mL容量瓶中，加入甲醇使溶解并定容至刻度，得浓度为40.56μg/mL的对照品储备溶液，分别用甲醇稀释得到表3所示各浓度的对照品溶液：

表3 对照品溶液的制备

(3)供试品溶液的制备：

取枳术宽中胶囊内容物适量研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，在室温下超声处理30min，放冷，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25mL，蒸干，残渣加体积分数0.75％(1.5mL→200mL)的磷酸溶液使溶解，转移至25mL容量瓶中，加上述磷酸溶液稀释到刻度，摇匀，即得。

(4)测定法：

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10.0μL，注入高效液相色谱仪，测定辛弗林对应峰面积，根据外标法计算枳术宽中胶囊中辛弗林的含量。

实验例 中药组合物中辛弗林含量的检测方法的方法学考察

一、线性考察

1.考察方法

取实施例1中制备的6个浓度的对照品溶液(1#、2#、3#、4#、5#、6#)按照实施例1中的色谱条件分别进样，每个浓度进样2次，测得相应的峰面积，2次峰面积取平均值。以对照品浓度为横坐标、以相应浓度测得的峰面积平均值为纵坐标作图，并进行线性回归计算，考察结果如表4所示。

2.考察结果

表4 线性考察结果

由表4可见，在8.112-32.448μg/mL浓度范围内，辛弗林峰面积与对照品溶液浓度呈现良好线性关系，R

二、准确度考察

1.考察方法

加样回收供试品溶液的制备：

取枳术宽中胶囊内容物适量研细，分别取6份样品各约1g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，供试品中精密加入浓度为1.814mg/mL的对照品溶液(精密称取辛弗林对照品18.14mg，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得)各1mL，再将各样中精密加入甲醇49mL，分别在室温下超声处理30min，放冷，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25mL，蒸干，残渣加体积分数0.75％(1.5mL→200mL)的磷酸溶液使溶解，转移至25mL容量瓶中，加上述磷酸溶液稀释到刻度，摇匀，即得。

取参照实施例1中的方法制备的供试品溶液；取实施例1中制备的6#对照品溶液。

按照实施例1中的色谱条件分别进样，每个样品(加样回收供试品溶液、供试品溶液、对照品溶液)进样2次，测得相应的峰面积，2次峰面积取平均值，根据测得的峰面积计算加样供试品中辛弗林含量和供试品中辛弗林含量。并按照如下公式计算加样回收率：

准确度考察结果如表5所示。

2.考察结果

表5 准确度考察结果

由表5可见，加样回收率(99.8％)符合规定(95％～102％)，该方法准确度高。

三、专属性考察

1.考察方法

取参照实施例1中的方法制备的供试品溶液、实施例1中制备的6#对照品溶液、空白溶剂和阴性样品溶液，按照实施例1中的色谱条件分别进样，分别得到高效液相色谱图如图1-4所示。

其中，阴性样品溶液的制备方法：

取白术药粉(由于在提取过程中，各种中药组合物是先后加入同时进行提取、煎煮的，不能取到柴胡和山楂组合物)约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，在室温下超声处理30min，放冷，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25mL，蒸干，残渣加体积分数0.75％(1.5mL→200mL)的磷酸溶液使溶解，转移至25mL容量瓶中，加上述磷酸溶液稀释到刻度，摇匀，即得。

2.考察结果

如图1所示，供试品溶液的高效液相色谱图中，辛弗林色谱峰与其他成分色谱峰可实现基线分离，保留时间为24.638分钟；如图2所示，对照品溶液的高效液相色谱图中，辛弗林色谱峰的保留时间为24.516分钟；如图3所示，空白试剂未检测到辛弗林色谱峰及其他干扰峰；如图4所示，阴性样品溶液也未检测到辛弗林色谱峰及其他干扰峰。以上证明，阴性样品、空白试剂分别对辛弗林无干扰。

四、精密度考察

1.考察方法

按照实施例1中提供的制备方法制备6份供试品溶液(1#、2#、3#、4#、5#、6#)，按照实施例1中的色谱条件分别进样，每个样品进样2次，测得相应的峰面积，2次峰面积取平均值，计算其平均峰面积的相对标准偏差，根据峰面积平均值和实施例1中制备的6#对照品溶液的峰面积计算各供试品溶液中的辛弗林含量。精密度考察结果如表6所示。

2.考察结果

表6 精密度考察结果

如表6所示，6份供试品溶液的辛弗林峰面积的变异系数RSD＜2％，说明本方法精密度良好。

五、耐用性考察

1.考察方法

分别取实施例1制备的6#对照品溶液和按照实施例1制备的供试品溶液，按照实施例1中的色谱条件、柱温改变至25℃(其他条件不变)、流速变为0.8mL/min(其他条件不变)分别进样，每个样品进样2次，测得相应的峰面积，2次峰面积取平均值，计算辛弗林含量，以条件改变后测得的辛弗林含量和实施例1色谱条件下测得的辛弗林含量作比较，计算标准偏差Rd(％)。耐用性考察结果如表7所示。

2.考察结果

表7 耐用性考察结果

如表7所示，改变柱温和流速条件得到的检测结果标准偏差均＜10.0％，可以用于辛弗林含量检测。

对比例

参考《中国药典》2015版一部P247枳实质量标准，采用高效液相色谱法对本发明中的枳术宽中胶囊内容物进行检测，具体方法如下：

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为50：50的甲醇-磷酸二氢钾溶液为流动相；检测波长为225mn；流速1.0ml/min。其中，磷酸二氢钾溶液的制备过程为：取磷酸二氢钾0.6g、十二烷基磺酸钠1.0g、冰醋酸1ml，加水溶解并稀释至1000ml。

供试品溶液制备：取枳术宽中胶囊内容物约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1.5h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，通过聚酰胺柱(60～90目，2.5g，柱内径1.5cm，干法装柱)，用水25ml洗脱，收集洗脱液，转移至25ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

加样回收供试品溶液制备：取枳术宽中胶囊内容物适量研细，分别取6份样品各约1g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，供试品中精密加入浓度为1.907g/mL的对照品溶液各1mL，再将各样中精密加入甲醇49mL，分别在室温下超声处理30min，放冷，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25mL，蒸干，残渣加体积分数0.75％(1.5mL→200mL)的磷酸溶液使溶解，转移至25mL容量瓶中，加上述磷酸溶液稀释到刻度，摇匀，即得。

根据以上方法，取实施例1中制备的6#对照品溶液，本对照例制备的供试品溶液，以及本对照例制备的加样回收供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪中，测定结果如表8所示，供试品溶液的高效液相色谱图如图5所示。

表8

通过图5可以看出：主成分峰开始时，有明显的不规则波动，疑似杂峰未分离，出峰时间靠前，与溶剂峰相互参杂。且经过表8所示的加样回收检测结果可知，本发明的检测方法应用于枳术宽中胶囊中时，检测效果明显优于药典中记载的常规检测方法，效果显著。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。