一种基于Co3O4磁性纳米粒子信号放大探针的SPR免疫传感器

技术领域

本发明涉及免疫学检测分析技术领域，具体涉及用于检测蛋白分子的Co

背景技术

20世纪60年代Otto和 Kretschmann分别发明了用可见光激发表面等离子体的方法，1982年Nylander等首次将表面等离子体共振（Surfance plasmon resonance， SPR）技术用于免疫传感器领域，1983年Liedberg等成功地将SPR用于IgG蛋白与其抗原的反应测定。SPR可用于实时分析，简单快捷地监测DNA与蛋白质之间、蛋白质与蛋白质之间、药物与蛋白质之间、抗原与抗体之间、受体与配体之间等等生物分子之间的相互作用,在生物研究、医疗检测、食品检测及环境监测等领域具有广泛的应用。

SPR技术可与免疫传感器结合，实现不同类型的蛋白质的高灵敏度检测。三明治夹心法是SPR免疫传感器用于抗原物质测定时的重要方法，通过引入二级抗体，增加SPR传感表面的质量，改变传感表面的折射率，从而提高SPR传感器的性能，提高了灵敏度和特异性。

Co

发明内容

本发明的目的是提供通过改进Co

本发明的目的是这样实现的 ，一种基于Co

第1步，将Co

第2步，将SPA蛋白固定于表面等离子体共振免疫传感器SPR基底，再连接捕获抗体Ab

本发明的基于Co

进一步地，本发明的第一步中的Co

1.1首先将Co(NO

1.2 向[Co（NH

1.3向Co

进一步地，1.1步， Co(NO

进一步地，1.2步中，Co(NO

再进一步地，1.3步中，Co

本发明的第2步包括如下分步过程：

2.1将摩尔比为2：3：56的H

2.2 将步骤2.1吹干芯片装入表面等离子体共振仪的检测池中，向检测池中通入PBS缓冲液至平稳基线；

2.3 向检测池中通入金黄色葡萄球菌蛋白A（SPA）溶液温育至信号平稳，再通入PBS缓冲液冲洗至SPR信号稳定；

2.4向检测池中注入一级抗体（Ab

2.5 向检测池中SPR芯片表面注入牛血清白蛋白（BSA）溶液封闭温育至信号再次平稳，再通入PBS冲洗至SPR信号稳定；

2.6向检测池中SPR芯片表面注入抗原与一级抗体（Ab

2.7向检测池中通入Co

进一步地，2.3步中，SPA溶液的浓度为100 μg/mL，2.4步中，Ab

进一步地，2.5步中，BSA溶液的浓度为200 μg/mL。

进一步地，2.7步中，所述Co

再进一步地，2.2～2.7步中，向检测池中通入溶液的流速为5 μL/min；各步的温育时间为30～40 min。

附图说明

图1为本发明基于Co

图2为本发明制备Co

图4为本发明基于Co

为了更好的阐明本发明的技术过程和目的，下面结合附图及具体实施方式对本发明进行详细介绍。

具体实施方式

本实施例按如图1所示的流程具体制备一种基于Co

首先合成Co

将0.291g Co（NO

然后，制备基于Co

（1）取上述Co

（2）将体积比为1：1：5超纯水，H

（3）将处理好的芯片装入表面等离子体共振仪器检测池中，以5 μL/min的流速通入PBS缓冲液（0.01 mol/L）至检测池平稳基线；

（4）向检测池中以5 μL/min流速通入浓度为100 μg/mL金黄色葡萄球菌蛋白A（SPA）溶液直至信号平稳，再通入PBS（0.01 mol/L）冲洗至SPR信号稳定；

（5）向检测池中以5 μL/min流速通入浓度为100 μg/mL一级抗体（Ab

（6）向检测池中以5 μL/min流速通入浓度为200 μg/mL牛血清白蛋白（BSA）溶液封闭直至信号再次平稳，再通入PBS（0.01 mol/L）冲洗至SPR信号稳定；

（7）向检测池中以5 μL/min流速通入HIgG抗原溶液与一级抗体（Ab

（8）SPR信号稳定后通入步骤（1）中制得的Co

同时，对上述制备的Co

图3为本实施例的基于Co

如图4为上述传感器检测不同浓度的HIgG标准样品的SPR信号曲线。由图可以清晰看出SPR信号随HIgG浓度增大而增大。图4A为基于Co

实施例2

本实施例为考察基于Co

表1.HIgG实际样品的测定

从表1可以看出回收率范围为97.3%-105.4%，说明该SPR传感器在实际血清样本中可以准确检测HIgG。