一种生长抑素杂质的控制方法

技术领域

本发明涉及分析技术领域，具体地，本发明涉及一种生长抑素杂质的控制方法。

背景技术

目前，临床上使用的生长抑素制剂主要采用冷冻干燥法制备而来，采用的包装形式为中性硼硅玻璃瓶及丁基橡胶塞。

现有技术中中国药典(2020版)、BP、EP均收录了生长抑素有关物质检测方法。CN113702560B提供了一种化学合成生长抑素中产生副产物的检测方法，能准确检测出生长抑素中半胱氨酸消旋杂质、甘氨酸和丙氨酸的错接肽和缺失肽杂质的含量，但无法检测其它杂质的含量。

因此，分析检测生长抑素制剂杂质的方法仍有待研究。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。

发明人发现在生长抑素制剂保存的过程中，来源于丁基橡胶塞中的丙酮会逐渐挥发，与制剂中的生长抑素反应，生成一定量的新的化合物，即丙酮加合物。现有技术方案无法对生长抑素中的丙酮加合物进行检测。因此，本发明提供了一种检测手段，可以实现在出厂放行及上市后产品中丙酮加合物的检测及监控。同时也为药物的包装材料选择提供一定的指导意见。

为此，在本发明的一个方面，本发明提出了一种化合物，其为式(I)或式(II)所示的化合物或式(I)或式(II)所示化合物的立体异构体、药学上可接受的盐或它的前药，

需要说明得是，结构式(I)或式(II)中的“Cys-Cys”之间的化学键指的是两个不同位点Cys的巯基(-SH)被氧化形成的二硫键S-S，而其它每两个相邻氨基酸之间的化合键为酰胺键-CO-NH-。发明人发现在生长抑素制剂保存的过程中，来源于丁基橡胶塞中的丙酮会逐渐挥发，会与制剂中的生长抑素反应，生成一定量的丙酮加合物，经鉴定，该化合物为上述式(I)或式(II)所示化合物。发明人发现，上述化合物的产生会影响生长抑素制剂的质量和安全性，因此，在生长抑素制剂保存过程中，监测上述丙酮加合物的含量，对生长抑素制剂的质量控制和监测具有重要意义。

在本发明的另一个方面，本发明提出了一种检测前面所述的化合物的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括利用高效液相色谱对待测样品进行检测；以及基于检测结果，确定所述化合物的含量。由此，可以将生长抑素及其制剂中有关化合物在同一色谱条件下进行快速高效的分离，可有效控制生长抑素的质量。该检测方法灵敏度高、专属性强、精密度高、准确性强、操作方便，可有效控制产品的质量。

根据本发明的实施例，所述检测前面所述的化合物的方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述高效液相色谱的流动相A和B分别为磷酸钠盐的水溶液与乙腈的混合溶液，所述磷酸钠盐的水溶液为磷酸二氢钠、辛烷磺酸钠、高氯酸钠的混合溶液。

根据本发明的实施例，所述流动相A中，所述磷酸钠盐的水溶液与乙腈的体积比为70:30，在所述流动相B中，磷酸钠盐的水溶液与乙腈的体积比为50:50。选用此作为流动相，可以进一步提高分离效率。

根据本发明的实施例，所述磷酸钠盐的水溶液包括：5～15mM辛烷磺酸钠、30～100mM高氯酸钠和10～25mM磷酸二氢钠。由此，对待测样品中式(I)或式(II)所示化合物的检测准确度更高。

根据本发明的实施例，所述磷酸钠盐的水溶液的pH值为5.6～6.0，优选为5.8。由此，可以进一步改善主峰与杂质峰之间的分离度，降低主峰的拖尾因子，提高主峰的理论塔板数。

根据本发明的实施例，所述高效液相色谱的色谱柱的柱长为150mm，色谱柱的直径为4.6mm，色谱填料粒径为3μm。

根据本发明的实施例，所述色谱柱为Shimsen Ankylo C18。该色谱柱能够在保证良好分离效果的前提下，可提供适中的疏水作用力，分离效率更高。

根据本发明的实施例，所述高效液相色谱采用梯度洗脱。该方式能够提高分离能力，使得到的分离效果更佳，峰形更好。

根据本发明的实施例，所述梯度洗脱方式如下所述：

。

根据本发明的实施例，所述待测样品为生长抑素，所述生长抑素预先与丁基橡胶塞接触。

需要说明的是，所述“接触”可以为直接接触，即生长抑素预先与丁基橡胶塞直接接触，使生长抑素与丁基橡胶塞中的化学物质直接发生反应；也可以为间接接触，即丁基橡胶塞中的化学物质挥发与生长抑素接触发生反应。

根据本发明的实施例，所述待测样品预先溶于水中。

根据本发明的实施例，所述高效液相色谱进一步采用如下条件：进样量为30～50μL，优选为40μL。

根据本发明的实施例，检测波长为215～225nm，优选为220nm。由此，可以显著提高高效液相色谱的检测灵敏度。

根据本发明的实施例，所述流动相的流速为0.8～1.2mL/min，优选为1.0mL/min。由此，可以进一步提高分离度。

根据本发明的实施例，所述色谱柱的柱温为20～30℃，优选为25℃。由此，可以显著改善相邻色谱峰之间的分离度。

在本发明的又一个方面，本发明提出了一种分离前面所述的化合物的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括采用前面所述的方法对待测样品进行处理；在所述化合物对应峰出现时，收集流出液，以便获得所述化合物。采用此方法，能够将生长抑素制剂中的化合物较好的分离出来，确定该化合物的含量，从而判断生长抑素制剂的质量是否合格。

根据本发明的实施例，所述化合物对应峰的出峰时间为30～31min。

在本发明的又一个方面，本发明提出了前面所述的化合物在生长抑素制剂产品质控中的用途。通过监测所述化合物在生长抑素制剂产品中的含量能够有效控制生长抑素制剂产品的质量。

根据本发明的实施例，前面所述的化合物在生长抑素制剂产品中质量浓度不高于0.5％，是所述生长抑素制剂产品质量合格的指示。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1是根据本发明实施例的分离色谱图；

图2是根据本发明实施例的流出液的一级质谱图；

图3是根据本发明实施例的流出液的二级质谱图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1

发明人取了一定量的贮存于中性硼硅玻璃瓶及丁基橡胶塞的生长抑素制剂配制供试品，采用高效液相色谱分析，如图1所示，发现在30～31min左右会有区别于生长抑素(45～47min)特征峰的峰形出现。发明人收集30～31min的流出液，经一级质谱、二级质谱分析，数据如图2、图3所示，得出该化合物的结构如式(I)或式(II)所示。发明人分析，该结构的化合物可能是来源于丁基橡胶塞中挥发的丙酮与制剂中的生长抑素反应得到的。该化合物为生长抑素制剂保存过程产生的杂质，因此，监测上述丙酮加合物的含量，对生长抑素制剂的质量控制和监测具有重要意义。

其中，高效液相色谱分析条件如下所述：

色谱柱：Shimsen Ankylo C18，3μm 4.6*150mm；检测波长：220nm；柱温：25℃；进样体积：40μL。磷酸钠盐溶液(10mM辛烷磺酸钠、50mM高氯酸钠，溶于15mM磷酸二氢钠，用氢氧化钠溶液调节pH至5.8)，流动相A为磷酸钠盐溶液：乙腈＝70:30，流动相B为磷酸钠盐溶液：乙腈＝50:50，按表1进行梯度洗脱，其中，柱流速为1.0ml/min。

表1

实施例2

(1)取注射用生长抑素(3mg)，加50％丙酮溶液3ml溶解，调节pH至3.5。室温放置24小时。

(2)另取注射用生长抑素(3mg)，加水3ml溶解。

(3)将步骤(1)和(2)两支注射用生长抑素溶液按体积比1:1混合。按照实施例1的HPLC方法进行检测，丙酮加合物的保留时间为30.8min，生长抑素的保留时间为46.0min。

(4)另取注射用生长抑素，加水制成1mg/mL的溶液，采用实施例1中的HPLC检测方法，采用峰面积归一化法计算，丙酮加合物的含量为0.16％。

实施例3

(1)取注射用生长抑素(3mg)，加50％丙酮溶液3ml溶解，调节pH至3.5。室温放置24小时。

(2)另取注射用生长抑素(3mg)，加水3ml溶解。

(3)将步骤(1)和(2)两支注射用生长抑素溶液按体积比1:1混合。取混合后的溶液分装至玻璃瓶中，每瓶装入0.1ml，冷冻干燥后置于-20℃冷冻保存。临用前加水0.1ml溶解。按照实施例1的HPLC方法进行检测，丙酮加合物的保留时间为30.9min，生长抑素的保留时间为46.5min。

(4)另取30℃放置了6个月的注射用生长抑素，加水制成1mg/mL的溶液，采用实施例1的HPLC检测方法，采用峰面积归一化法计算，丙酮加合物的含量为0.56％。

实施例4

(1)取注射用生长抑素(3mg)，加50％丙酮溶液3ml溶解，调节pH至3.5。室温放置24小时。

(2)另取注射用生长抑素(3mg)，加水3ml溶解。

(3)将步骤(1)和(2)两支注射用生长抑素溶液按体积比1:1混合。按照实施例1的HPLC方法进行检测，丙酮加合物的保留时间为30.8min，生长抑素的保留时间为46.0min。

(4)取3mg规格的注射用生长抑素，分别在40℃分别放置1个月、2个月、3个月、6个月。分别加水制成1mg/mL的溶液，采用实施例1中的HPLC检测方法，采用峰面积归一化法计算，丙酮加合物的检测结果如表2所示，注射用生长抑素中的丙酮加合物含量随时间的增加而逐渐增多。

表2

实施例5

(1)取注射用生长抑素制剂，用水制成1mg/mL。并加入丙酮加合物杂质对照品5μg/mL、乙酰化杂质C对照品5μg/mL、乙酰化杂质D对照品5μg/mL、乙酰化杂质E对照品5μg/mL。按照表3中的色谱条件测试丙酮加合物杂质，并计算丙酮加合物杂质回收率，结果如表4所示。

回收率可接受标准为90％～110％

乙酰化杂质C：Ala

乙酰化杂质D：Lys

乙酰化杂质E：Lys

表3

检测结果如表4所示，当改变磷酸钠盐的pH值时(在条件A和条件B-1～B-4下)，发现磷酸钠盐pH过高(pH＝6.2)或过低(pH＝5.4)时，丙酮加合物杂质的测定结果会不准确并且回收率已不符合可接受的标准，而磷酸钠盐pH为5.8和6.0时，检测结果和回收率较好。当改变磷酸二氢钠浓度时(在条件C-1～C-4下)，发现当磷酸二氢钠浓度过高(35mM)或过低(5mM)时，丙酮加合物杂质的测定结果会不准确并且回收率已不符合可接受的标准，而在磷酸二氢钠浓度为10mM和25mM时，检测结果和回收率较好，因此选择浓度在10～25mM范围内的磷酸二氢钠浓度作为检测条件。当改变高氯酸钠浓度时(在条件D-1～D-4下)，发现高氯酸钠浓度过低(10mM)时，丙酮加合物杂质的测定结果会不准确并且回收率已不符合可接受的标准，而在高氯酸钠浓度在30～100mM范围内时，检测结果和回收率较好，因此选择此范围作为检测条件。当将辛烷磺酸钠换做庚烷磺酸钠时，发现丙酮加合物杂质的测定结果会不准确并且回收率已不符合可接受的标准，说明辛烷磺酸钠具有更好的检测丙酮加合物杂质的能力。

表4

对比实施例6

(1)取注射用生长抑素(3mg)，加50％丙酮溶液3ml溶解，调节pH至3.5。室温放置24小时。

(2)另取注射用生长抑素(3mg)，加水3ml溶解。

(3)将步骤(1)和(2)两支注射用生长抑素溶液按体积比1:1混合。按照现有技术CN113702560B提供的方法进行检测，丙酮加合物与生长抑素的保留时间重叠，未能检测丙酮加合物。

现有技术无法检测出丙酮加合物，而本发明提供的检测条件能够较好的检测出丙酮加合物的含量。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。