一种女性私护复合益生菌粉、制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及保健养生技术领域，具体来说，涉及一种女性私护复合益生菌粉、制备方法及其应用。

背景技术

在解剖学上，女性的直肠、阴道、及膀胱三者相邻，因此有研究指出肠道中的微生物可经由细菌黏附而进入泌尿生殖道。此过程被认为是一种自然现象，其为阴道及尿道外部提供维持健康所需的微生物菌群。在正常情况下，阴道主要寄宿有多种乳酸杆菌，例如卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)、詹氏乳杆菌(Lactobacillus jenesenii)，其群体会排除病原体寄宿阴道、产生乳酸与维持阴道pH值为3.8至4.5以抑制病原体繁殖、以及产生抗菌物质与过氧化氢以杀死其他微生物。

当阴道及尿道外部因为各种原因，例如雌激素缺乏、抗生素治疗、在性交期间使用杀精子剂等，而丧失正常微生物菌群，泌尿生殖系统感染率就会上升。此外，由于女性较男性的尿道短且尿道与肛门及阴道口距离较近，相比男性有更高机率因为病菌由阴道口或肛门侵入尿道而罹患泌尿系统感染。常见的泌尿生殖道感染包括细菌性阴道感染、真菌性阴道感染、及泌尿道感染。细菌性阴道感染的主要病原体是厌氧革兰氏阴性杆菌，如阴道加德纳菌(Ga rd nerella vag ina lis)；真菌性阴道感染主要起因于白色念珠菌(Ca ndidaalbicans)；泌尿道感染的病原体通常是泌尿道致病型大肠杆菌(Escherichia coli)。该些感染虽可以藉由抗生素治疗，但是长时间使用可导致宿主对抗生素产生耐药性，从而导致治疗效果不好、复发率高等问题。

CN112007067A公开了一种私密保护益生菌组合物，包括鼠李糖乳杆菌、副干酪乳杆菌和蔓越莓粉。该发明可以有效降低阴道内pH值，增加阴道内乳酸菌含量，能在阴道内安全持久定植，并能抑制多种致病菌的活性，可作为改善多种泌尿生殖系统疾病，包括细菌性阴道炎(BV)、酵母菌性阴道炎(YV)和尿路感染(UTI)，降低感染和复发风险。

CN110214945A公开了改善女性泌尿生殖系统健康的益生菌组合物，按重量份数计，包括：蔓越莓10-40份、玫瑰茄10-35份、乳杆菌冻干粉1-10份、胶原蛋白肽20-60份，以及维生素C 0.01-0.2份；其中，蔓越莓、玫瑰茄均为干燥品。该发明通过上述各原料的互相作用，有效改善女性泌尿生殖系统的健康，尤其防止细菌性阴道炎的复发以及尿路感染的复发，同时还具有一定的美容护肤功能。

目前，针对女性私护的保健食品的研究相对较少，研发一款女性私护复合益生菌粉具有重要的意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有的保健食品中女性私护保健产品不足，提供一种女性私护复合益生菌粉。

本发明要解决的另一个技术问题是：提供所述女性私护复合益生菌粉的制备方法。

本发明要解决的另一个技术问题是：提供所述女性私护复合益生菌粉在制备女性私护保健食品中的应用。

本发明要解决的另一个技术问题是：提供一种包含所述女性私护复合益生菌粉的女性私护保健食品。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供了一种女性私护复合益生菌粉，利用卷曲乳杆菌LC-G22、婴儿双歧杆菌B1-G201和格氏乳杆菌LG-G12三种菌复配混合发酵制备而成。

该女性私护复合益生菌粉，可以调节内分泌，修复阴道黏膜损伤，重建阴道微环境，同时，可以杀灭病原菌，对阴道炎和尿路感染具有很好的治疗效果。

本发明还提供了上述女性私护复合益生菌粉的制备方法，包括以下步骤：

(1)种子液1的制备：将卷曲乳杆菌LC-G22接种于种子培养基中进行扩大培养，得到种子液1；

(2)种子液2的制备：将婴儿双歧杆菌B1-G201接种于种子培养基中进行扩大培养，得到种子液2；

(3)种子液3的制备：将格氏乳杆菌LG-G12接种于种子培养基中进行扩大培养，得到种子液3；

(4)混合发酵：先将种子液3接种于发酵培养基中，再接种种子液1和种子液2，经过发酵培养得到发酵液；

(5)将发酵液冷冻干燥，得到所述复合益生菌粉。

优选地，步骤(1)中所述扩大培养的温度为36-38℃，时间为10-13h；所述接种的接种量以卷曲乳杆菌LC-G22菌粉计为0.03-0.05g/L。

优选地，步骤(2)中所述扩大培养的温度为35-38℃，时间为12-15h；所述接种的接种量以婴儿双歧杆菌B1-G201菌粉计为0.1-0.3g/L。

优选地，步骤(3)中所述扩大培养的温度为36-38℃，时间为10-13h；所述接种的接种量以格氏乳杆菌LG-G12菌粉计为0.03-0.05g/L。

优选地，步骤(4)中所述发酵培养基，含葡萄糖20-25g/L、牛肉膏3.5-4.2g/L、大豆蛋白胨15-20g/L、磷酸二氢钾2-8g/L、硫酸镁1-5g/L和硫酸亚铁0.3-0.8g/L。

优选地，步骤(4)中所述发酵培养的温度为36-37℃，时间为30-35h。

优选地，步骤(4)中所述发酵培养基中接种的种子液1、种子液2和种子液3的体积比为1:5-10:3-8，所述接种的总接种量为3-5％。

进一步优选地，当发酵液的pH为5.5-6.0时，接种种子液1和种子液2。

进一步优选地，在接种种子液1和种子液2以后的30-40min后，在氮气环境下向发酵培养基中流加半胱氨酸盐酸盐和柠檬酸钠。

更进一步优选地，控制半胱氨酸盐酸盐在发酵培养基中的浓度为0.3-0.5g/L，控制柠檬酸钠在发酵培养基中的浓度为2-5g/L。

本发明还提供了上述女性私护复合益生菌粉在制备保健食品中的应用。

本发明还提供了一种女性私护保健食品，包括上述女私护复合益生菌粉。

优选地，所述女性私护保健食品，还可以包括益生元、植物提取物或其他食品上可接受的辅料。

说明：1、接种量是指移入种子液的体积和接种后培养液体积的比例；2、总接种量是指移入三种种子液的体积之和与接种后培养液体积的比例。

本发明中所述种子培养基为常规的MRS基础液体培养基，具体的，所述种子培养基，包含酵母粉5.0g/L、牛肉膏10.0g/L、蛋白胨10.0g/L、葡萄糖20.0g/L、无水乙酸钠2.0g/L、柠檬酸氢二胺2.0g/L、磷酸氢二钾2.6g/L、一水合硫酸锰0.25g/L、七水合硫酸镁0.5g/L、吐温-80 1mL/L，pH 6.4-6.6。

本发明的有益效果为：

(1)本发明的女性私护复合益生菌粉，通过精选卷曲乳杆菌LC-G22、婴儿双歧杆菌B1-G201和格氏乳杆菌LG-G12三种菌复配混合发酵制备而成，可以杀灭病原菌，调节内分泌，修复阴道黏膜损伤，重建阴道微环境。同时，经实验测试意外发现，相比常规的卷曲乳杆菌LC-G22、婴儿双歧杆菌B1-G201和格氏乳杆菌LG-G12三种菌复配得到的复合益生菌粉，本发明通过混合发酵制备的女性私护复合益生菌粉对阴道炎和尿路感染具有更好的治疗效果。

(2)本发明的制备方法通过对混合发酵工艺的改进，如接种量、接种时间以及在发酵过程中流加半胱氨酸盐酸盐和柠檬酸钠，可以促进菌种活性，提高发酵液中活菌含量，得到的女性私护益生菌冻干粉的得率更高，降低了生产成本。

具体实施方式

以下实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。对所公开的实施例的下述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例中，而是可以应用于符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的更宽的范围。虽然在本发明的实施或测试中可以使用与本发明中所述相似或等价的任何方法和材料，本文在此处列举优选的方法和材料。

除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。

如无特殊说明，本发明所采用的原料均为普通市售产品。

实施例1一种女性私护复合益生菌粉的发酵方法

(1)将卷曲乳杆菌LC-G22接种于种子培养基中进行扩大培养，得到种子液1；其中种子培养基为MRS基础液体培养基，扩大培养的温度为36℃，时间为10h；所述接种的接种量以卷曲乳杆菌LC-G22菌粉计为0.05g/L。

(2)将婴儿双歧杆菌B1-G201接种于种子培养基中进行扩大培养，得到种子液2；其中，扩大培养的温度为38℃，时间为12h；所述接种的接种量以婴儿双歧杆菌B1-G201菌粉计为0.1g/L。

(3)将格氏乳杆菌LG-G12接种于种子培养基中进行扩大培养，得到种子液3；其中，扩大培养的温度为36℃，时间13h；所述接种的接种量以格氏乳杆菌LG-G12菌粉计为0.05g/L。

(4)先将种子液3接种于发酵培养基中，再接种种子液1和2，经过发酵培养得到发酵液；

其中，发酵培养基，含葡萄糖20g/L、牛肉膏3.5g/L、大豆蛋白胨15g/L、磷酸二氢钾2g/L、硫酸镁1g/L和硫酸亚铁0.3g/L，发酵培养的温度为36℃，时间为35h；

所述接种的总接种量为3％，种子液1、种子液2和种子液3的体积比为1:5:3；

当发酵培养基的pH为5.5-6.0时，接种种子液1和种子液2，在接种种子液1和种子液2以后的30min后，在氮气环境下向发酵培养基中流加半胱氨酸盐酸盐(控制其在发酵培养基中的浓度为0.3g/L)和柠檬酸钠(控制其在发酵液培养基中的浓度为2g/L)。

经检测，发酵液中活菌含量为6.8×10

实施例2一种女性私护复合益生菌粉的发酵方法

(1)将卷曲乳杆菌LC-G22接种于种子培养基中进行扩大培养，得到种子液1；其中种子培养基为MRS基础液体培养基，扩大培养的温度为38℃，时间为13h；所述接种的接种量以卷曲乳杆菌LC-G22菌粉计为0.03g/L。

(2)将婴儿双歧杆菌B1-G201接种于种子培养基中进行扩大培养，得到种子液2；其中，扩大培养的温度为35℃，时间为15h；所述接种的接种量以婴儿双歧杆菌B1-G201菌粉计为0.3g/L。

(3)将格氏乳杆菌LG-G12接种于种子培养基中进行扩大培养，得到种子液3；其中，扩大培养的温度为38℃，时间为10h；所述接种的接种量以格氏乳杆菌LG-G12菌粉计为0.03g/L。

(4)先将种子液3接种于发酵培养基中，再接种种子液1和2，经过发酵培养得到发酵液；

其中，发酵培养基，含葡萄糖25g/L、牛肉膏4.2g/L、大豆蛋白胨20g/L、磷酸二氢钾8g/L、硫酸镁5g/L和硫酸亚铁0.8g/L，发酵培养的温度为37℃，时间为30h；

所述接种的总接种量为5％，种子液1、种子液2和种子液3的体积比为1:10:3；

当发酵培养基的pH为5.5-6.0时，接种种子液1和种子液2，在接种种子液1和种子液2以后的40min后，在氮气环境下向发酵培养基中流加半胱氨酸盐酸盐(控制其在发酵培养基中的浓度为0.5g/L)和柠檬酸钠(控制其在发酵培养基中的浓度为2g/L)。

经检测，发酵液中活菌含量为7.0×10

实施例3一种女性私护复合益生菌粉的发酵方法

(1)将卷曲乳杆菌LC-G22接种于种子培养基中进行扩大培养，得到种子液1；其中种子培养基为MRS基础液体培养基，扩大培养的温度为37℃，时间为11h；所述接种的接种量以卷曲乳杆菌LC-G22菌粉计为0.04g/L。

(2)将婴儿双歧杆菌B1-G201接种于种子培养基中进行扩大培养，得到种子液2；其中，扩大培养的温度为37℃，时间为13h；所述接种的接种量以婴儿双歧杆菌B1-G201菌粉计为0.2g/L。

(3)将格氏乳杆菌LG-G12接种于种子培养基中进行扩大培养，得到种子液3；其中，扩大培养的温度为37℃，时间为12h；所述接种的接种量以格氏乳杆菌LG-G12菌粉计为0.04g/L。

(4)先将种子液3接种于发酵培养基中，再接种种子液1和2，经过发酵培养得到发酵液；

其中，发酵培养基，含葡萄糖22g/L、牛肉膏4.0g/L、大豆蛋白胨17g/L、磷酸二氢钾6g/L、硫酸镁2g/L和硫酸亚铁0.5g/L，发酵培养的温度为37℃，时间为32h；

所述接种的总接种量为4％，种子液1、种子液2和种子液3的体积比为1:7:5；

当发酵培养基的pH为5.5-6.0时，接种种子液1和种子液2，在接种种子液1和种子液2以后的35min后，在氮气环境下向发酵培养基中流加半胱氨酸盐酸盐(控制其在发酵培养基中的浓度为0.4g/L)和柠檬酸钠(控制其在发酵培养基中的浓度为4g/L)。

经检测，发酵液中活菌含量为9.7×10

实施例4

本实施例与实施例3的区别仅在于：

所述接种的总接种量为4％，种子液1、种子液2和种子液3的体积比为1:6:6；

当发酵培养基的pH为5.5-6.0时，接种种子液1和种子液2，在接种种子液1和种子液2以后的38min后，在氮气环境下向发酵培养基中流加半胱氨酸盐酸盐(控制其在发酵培养基中的浓度为0.5g/L)和柠檬酸钠(控制其在发酵培养基中的浓度为3g/L)。

经检测，发酵液中活菌含量为7.5×10

对比例1

本对比例与实施例3的区别在于：

所述接种的总接种量为5％，种子液1、种子液2和种子液3的体积比为3:1:4；

当发酵培养基的pH为5.5-6.0时，接种种子液1和种子液2，在接种种子液1和种子液2以后的50min后，在氮气环境下向发酵培养基中流加半胱氨酸盐酸盐(控制其在发酵培养基中的浓度为0.1g/L)和柠檬酸钠(控制其在发酵培养基中的浓度为6g/L)。

经检测，发酵液中活菌含量为1.8×10

对比例2

本对比例与实施例3的区别在于：

同时接种种子液1、种子液2和种子液3，接种后反应35min后，在氮气环境下向发酵培养基中流加半胱氨酸盐酸盐(控制其在发酵培养基中的浓度为0.6g/L)和柠檬酸钠(控制其在发酵培养基中的浓度为0.3g/L)。

经检测，发酵液中活菌含量为1.1×10

实施例5女性私护复合益生菌粉的制备方法

(1)得到的发酵液在4℃下，以3000-5000rpm离心8-10min，得到菌泥；

(2)按照1:2的质量比，向菌泥中加入保护剂混合，在-80℃下预冻6h，在-20℃，真空度0.2Pa的条件下，冷冻干燥20-25h，得到冻干复合益生菌菌粉，即为女性私护复合益生菌组合物，其中，所述保护剂配方(灭菌处理)为：海藻糖10wt％、β-环状糊精2wt％、蔗糖5wt％、葡萄糖3wt％、黄原胶5wt％和水余量。

将实施例1-4和对比例1-2发酵得到的发酵液，根据实施例5的制备方法，制备得到的不同的复合益生菌菌粉，即得到不同的女性私护复合益生菌组合物，其活菌数及产量如下表1所示。

表1

功效验证

对本发明实施例和对比例提供的女性私护复合益生菌组合物进行抑菌实验，检测其对引起阴道炎、尿路感染的白色念珠菌和大肠杆菌的抑菌能力。

结果如表2所示。

表2

实验方法如下：

(1)样品：将实施例1-4和对比例1-2制备的女性私护复合益生菌组合物，加无菌水，分别制备成益生菌液，备用；

(2)取15ml融化的SOB培养基，并置于灭菌平皿内，然后分别滴加0.2ml菌液(活菌量为1×10

其中，对照组为市售(润盈生物)的卷曲乳杆菌LC-G22、婴儿双歧杆菌B1-G201和格氏乳杆菌LG-G12，按活菌数1:1:1混合得到的益生菌组合物。