一种熊去氧胆酸缓释制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂技术领域，具体为一种熊去氧胆酸缓释制剂及其制备方法。

背景技术

熊胆是一味传统的名贵药材，熊去氧胆酸作为熊胆所含的主要有效成分，可促进脂肪和脂肪酸水解；亦可以抑制肝脏胆固醇的合成，增加肝脏过氧化氢酶的活性，促进肝糖原的蓄积，提高肝脏抗毒、解毒能力，并可降低肝脏和血清中三酰甘油的浓度；能显著降低胆固醇合成酶HMG-CoA还原酶的活性，提高胆固醇代谢酶7α轻化酶的活性，从而降低胆汁中胆固醇及胆固醇酯的克分子数和胆固醇的饱和指数，有利于结石中胆固醇的逐渐溶解，使结石形成指数大大降低，利胆功效极好，可作为原发性胆汁性肝硬化者的首选药物，且不良反应率远低于国内同类产品。

熊去氧胆酸呈弱碱性，口服后通过被动扩散而迅速吸收，吸收的最有效部位是中等碱性环境的回肠。其生物利用度为90％，总蛋白结合率为70％。熊去氧胆酸通过肝脏时被摄取5％-60％，明显低于鹅去氧胆胆胆酸，仅少量药物进入体循环，血药浓度很低。熊去氧胆酸的治疗作用不取决于血药浓度而与胆汁中的药物浓度有关。半衰期为3.5-5.8天。熊去氧胆酸在肝脏与甘氨酸或牛磺酸迅速结合，从胆汁排入小肠，参加肝肠循环。小肠内结合的熊去氧胆胆胆酸一部分水解回复为游离型，另一部分在细菌作用下转变为石胆酸(Lithocholic Acid)，后者进而被硫酸化，从而降低其潜在的肝脏毒性。

其明显的缺陷在于，在常规服用时吸收率较低，大多随粪便排出，此外，熊去氧胆酸在肠道内迅速释放，形成较高浓度，还会阻碍吸收，引起胃肠道紊乱。因此如何维持熊去氧胆酸在肠道的释放速率，降低其释放速率、提高其吸收效率，是提高熊去氧胆酸药理学作用的重要方式。

早在20世纪60年代化学家们提出了将高分子材料应用于生物药物领域，制备高分子药物载体成为改善药物的最有效的方法之一。从此，高分子药物载体的研究越来越广泛。而作为药物控制释放的高分子材料载体一直是医用研究中最热门的领域之一。缓释系统是指药物能在指定时间内按预定的速度释放到指定的部位，它可控制药物在体内的释放速率，使药物在体内能够保持有效浓度，减小或消除副作用，特别是在植入或附于病区时，则更能显示其优越性。

作为药物的缓释载体，其必须具备：(1)良好的生物相容性；(2)能保持细胞的正常生长、分化、增殖能力和分泌基质；(3)具有可控的降解时间；(4)材料及其降解产物对机体无毒副作用；(5)具有可消毒性。

用于药物载体的材料十分广泛，按来源可分为天然高分子材料、半合成高分子材料、合成高分子材料。天然高分子材料稳定、无毒、成膜性较好，是较常用的药物载体材料。其中主要包括胶原蛋白、阿拉伯树胶、海藻酸盐、蛋白类、淀粉衍生物。近年来研究较多的是几丁糖、壳聚糖、海藻酸盐；而源于动物的胶原蛋白则显示出巨大的潜力。半合成高分子包括羧甲基纤维素、邻苯二甲酸纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲纤维素、丁酸醋酸纤维素、琥珀酸醋酸纤维素等，其特点是毒性小、粘度大、成盐后溶解度增大，易水解，但不宜高温处理，需临时现用现配。

鉴于天然的药物缓释载体相对于半合成、合成的高分子材料，具有良好的生物相容性、可降解性、低抗原性、相对稳定的理化性质等，使其成为21世纪主要的研究方向。因此，本发明认为将天然的药物缓释载体和熊去氧胆酸结合，制成熊去氧胆酸缓释制剂是提高熊去氧胆酸利用率并降低其副作用的有效途径。

CN 112245409 B公开了一种植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊及其制备方法，是首先通过反溶剂沉淀法，将植物蛋白和熊去氧胆酸自组装成纳米粒，然后利用生物材料对纳米粒进行包覆，从而获得植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊。其缺陷在于植物蛋白的载药量低，无法控制熊去氧胆酸的释放位置，并且对熊去氧胆酸的释放速率控制力较弱。

发明内容

针对现有技术存在的缺陷，本发明提供了一种熊去氧胆酸缓释制剂及其制备方法。

一种熊去氧胆酸缓释制剂，包括以下原料：熊去氧胆酸缓释纳米颗粒、粘合剂、稀释剂、pH缓冲液、矫味剂、水。

优选的，所述熊去氧胆酸缓释制剂，按质量份计，包括以下原料：100-200份熊去氧胆酸缓释纳米颗粒、10-20份粘合剂、20-30份稀释剂、3-5份pH缓冲液、3-5份矫味剂、200-400份水。

所述粘合剂为羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素、羟乙基纤维素中的至少一种。

所述稀释剂为蔗糖、乳糖、玉米淀粉中的至少一种。

所述pH缓冲液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、酒石酸-酒石酸钠缓冲液、醋酸-醋酸铵缓冲液中的至少一种，pH缓冲液的pH为5-7。

所述矫味剂为甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜、山梨醇、甘露糖醇中至少一种；优选的，所述矫味剂为阿斯巴甜、甘露糖醇按质量比(2-3)：(1-2)混合而成。

所述熊去氧胆酸缓释纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

S1按质量份计，将1-5份十六烷基三甲基氯化铵、2-3份浓度为24-26wt％的氨水、100-200份乙二醇单乙醚和300-400份水混合，以100-200r/min转速搅拌5-10min，接着加入10-15份四乙氧基硅烷，密封以100-200r/min转速搅拌反应18-30h，经过滤、洗涤、干燥，得到粗产物，将上述粗产物置于500-700℃下煅烧1-2h，冷却至室温，得到多孔二氧化硅纳米球；

S2按质量份计，将5-10份步骤S1制得的多孔二氧化硅纳米球、10-20份熊去氧胆酸、60-80份无水乙醇混合，以100-200r/min转速搅拌10-20min，使得熊去氧胆酸被多孔二氧化硅充分吸附，经干燥后，得到熊去氧胆酸负载的二氧化硅；

S3按质量份计，将1-3份壳聚糖、1-3份胶原蛋白、0.1-0.3份交联剂、80-100份冰醋酸水溶液混合，置于35-40℃下以100-200r/min转速搅拌20-40min，得到载药膜溶液；

S4将步骤S2制得的熊去氧胆酸负载的二氧化硅加入到步骤S3制得的载药膜溶液中，以100-200r/min转速搅拌40-60min，然后置于45-50℃下干燥，得到所述熊去氧胆酸缓释纳米颗粒。

步骤S3所述冰醋酸水溶液的pH为2-3。

步骤S3所述胶原蛋白为I型、Ⅱ型、Ⅺ型、V型中的至少一种；优选的，所述胶原蛋白为I型。

步骤S3所述交联剂为氯化锌、醋酸锌、硝酸锌、葡萄糖酸锌、硫酸锌中的至少一种；优选的，所述交联剂为醋酸锌。

一种熊去氧胆酸缓释制剂的制备方法，包括以下步骤：按质量份计，将100-200份熊去氧胆酸缓释纳米颗粒、10-20份粘合剂、20-30份稀释剂、3-5份pH缓冲液、3-5份矫味剂、200-400份水混合，以100-200r/min转速搅拌20-40min后制成片状，经干燥后，得到所述熊去氧胆酸缓释制剂。

本发明选用多孔二氧化硅纳米球作为药物载体，由于其耐酸性好，能够有效的抑制胃酸带来的影响，能够有效的进入中等偏碱性的回肠部位，达到定点释放的目的。但是，二氧化硅纳米颗粒的耐碱性极差，其极易在弱碱性环境下分解形成硅酸钠，从而短时间释放出大量的熊去氧胆酸，形成较高浓度，阻碍吸收，引起胃肠道紊乱。因此，为了控制熊去氧胆酸的释放速率，本发明进一步采用生物膜对负载有熊去氧胆酸的多孔二氧化硅纳米球进行包覆，并且本发明对生物膜进行设计，采用壳聚糖、胶原蛋白交联，制备具有载药性的生物膜，从而还提升其对熊去氧胆酸的包封率。壳聚糖在弱碱环境中不溶，难以分解，以其包封负载有熊去氧胆酸的多孔二氧化硅纳米球能够有效的起到缓释的作用。但是，由于壳聚糖分子上存在大量的氨基、醛基等基团，其能够极为紧密的包覆在负载有熊去氧胆酸的多孔二氧化硅纳米球表面，并减少负载有熊去氧胆酸的多孔二氧化硅纳米球和结肠液的接触，导致结肠液无法分解多孔二氧化硅纳米球，吸附在孔道中的熊去氧胆酸无法析出，这不利于人体对熊去氧胆酸的有效吸收和利用。因此，本发明采用胶原蛋白和壳聚糖混合制备载药生物膜，胶原蛋白能够被蛋白酶分解，从而暴露出内部的负载有熊去氧胆酸的多孔二氧化硅纳米球，壳聚糖在弱碱环境中不溶，难以分解，二者协同能够有效的调控熊去氧胆酸的释放速率。

另一方面，载药生物膜的包封率较差，部分熊去氧胆酸处于游离状态，这会导致初始熊去氧胆酸浓度极高，不利于人体吸收。因此，本发明进一步加入交联剂改进载药生物膜的网络结构，提高其对熊去氧胆酸的包封率。在引入锌离子作为交联剂后，熊去氧胆酸缓释纳米颗粒的包封率达到了98.4％，展现出了极好的包封效果。

药物的使用过程中，其用量必需是要严格控制的。而现有的药物缓释技术所采用的纳米载体、微胶囊、脂质体等，其包封率普遍较低，这会造成药物初始浓度过高，可能会对人体造成损害，也不利于人体吸收。提高包封率的最简单的办法就是，将其溶解，用溶剂尽量去除游离的药物，这几乎能使得其包封率达到100％，但是，药物的剩余量不好控制，无法实际应用。本发明采用载体吸附，再辅以载药生物膜包覆的方式，实现了极高的药物包覆率，并且能够精确定量缓释剂中药物的含量，有利于药物缓释剂的使用和推广。

本发明有益效果：

本发明针对吸收率较低，在肠道内迅速释放，形成较高浓度，还会阻碍吸收，引起胃肠道紊乱的缺陷，以多孔二氧化硅纳米颗粒为载体吸附熊去氧胆酸，并以胶原蛋白、壳聚糖、交联剂合成载药生物膜包覆多孔二氧化硅纳米颗粒，制得的熊去氧胆酸缓释纳米颗粒能够调控熊去氧胆酸的释放速率，并且具有极高的包封率。

具体实施方式

羟乙基纤维素，货号：YCKJ，武汉链讯共创科技有限公司。

蔗糖，货号：021，天津锦耀翔承科技有限公司。

玉米淀粉，货号：001，济南盛腾化工有限公司。

阿斯巴甜，货号：ZZS1043706，青岛克斯特生物科技有限公司。

甘露糖醇，CAS：69-65-8。

壳聚糖，货号：L22151，西安中科达生物科技有限公司。

胶原蛋白，货号：C4404，湖北云镁科技有限公司。

实施例1

一种熊去氧胆酸缓释制剂的制备方法，包括以下步骤：按质量份计，将150份熊去氧胆酸缓释纳米颗粒、15份粘合剂、25份稀释剂、4份pH缓冲液、4份矫味剂、300份水混合，以200r/min转速搅拌30min后制成片状，经干燥后，得到所述熊去氧胆酸缓释制剂。

所述粘合剂为羟乙基纤维素。

所述稀释剂由蔗糖、玉米淀粉按质量比1:4混合而成。

所述pH缓冲液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，pH缓冲液的pH为6。

所述矫味剂为阿斯巴甜、甘露糖醇按质量比3：2混合而成。

所述熊去氧胆酸缓释纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

S1按质量份计，将3份十六烷基三甲基氯化铵、2.4份浓度为24wt％的氨水、140份乙二醇单乙醚和350份水混合，以200r/min转速搅拌10min，接着加入15份四乙氧基硅烷，密封以200r/min转速搅拌反应24h，经过滤、洗涤、干燥，得到粗产物，将上述粗产物置于600℃下煅烧2h，冷却至室温，得到多孔二氧化硅纳米球；

S2按质量份计，将10份步骤S1制得的多孔二氧化硅纳米球、20份熊去氧胆酸、80份无水乙醇混合，以200r/min转速搅拌20min，使得熊去氧胆酸被多孔二氧化硅充分吸附，经干燥后，得到所述熊去氧胆酸缓释纳米颗粒。

实施例2

一种熊去氧胆酸缓释制剂的制备方法，包括以下步骤：按质量份计，将150份熊去氧胆酸缓释纳米颗粒、15份粘合剂、25份稀释剂、4份pH缓冲液、4份矫味剂、300份水混合，以200r/min转速搅拌30min后制成片状，经干燥后，得到所述熊去氧胆酸缓释制剂。

所述粘合剂为羟乙基纤维素。

所述稀释剂由蔗糖、玉米淀粉按质量比1:4混合而成。

所述pH缓冲液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，pH缓冲液的pH为6。

所述矫味剂为阿斯巴甜、甘露糖醇按质量比3：2混合而成。

所述熊去氧胆酸缓释纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

S1按质量份计，将3份十六烷基三甲基氯化铵、2.4份浓度为24wt％的氨水、140份乙二醇单乙醚和350份水混合，以200r/min转速搅拌10min，接着加入15份四乙氧基硅烷，密封以200r/min转速搅拌反应24h，经过滤、洗涤、干燥，得到粗产物，将上述粗产物置于600℃下煅烧2h，冷却至室温，得到多孔二氧化硅纳米球；

S2按质量份计，将10份步骤S1制得的多孔二氧化硅纳米球、20份熊去氧胆酸、80份无水乙醇混合，以200r/min转速搅拌20min，使得熊去氧胆酸被多孔二氧化硅充分吸附，经干燥后，得到熊去氧胆酸负载的二氧化硅；

S3按质量份计，将3份壳聚糖、3份胶原蛋白、100份冰醋酸水溶液混合，置于40℃下以200r/min转速搅拌40min，得到载药膜溶液；

S4将步骤S2制得的熊去氧胆酸负载的二氧化硅加入到步骤S3制得的载药膜溶液中，以200r/min转速搅拌60min，然后置于50℃下干燥，得到所述熊去氧胆酸缓释纳米颗粒。

步骤S3所述冰醋酸水溶液的pH为3。

步骤S3所述胶原蛋白为I型。

实施例3

一种熊去氧胆酸缓释制剂的制备方法，包括以下步骤：按质量份计，将150份熊去氧胆酸缓释纳米颗粒、15份粘合剂、25份稀释剂、4份pH缓冲液、4份矫味剂、300份水混合，以200r/min转速搅拌30min后制成片状，经干燥后，得到所述熊去氧胆酸缓释制剂。

所述粘合剂为羟乙基纤维素。

所述稀释剂由蔗糖、玉米淀粉按质量比1:4混合而成。

所述pH缓冲液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，pH缓冲液的pH为6。

所述矫味剂为阿斯巴甜、甘露糖醇按质量比3：2混合而成。

所述熊去氧胆酸缓释纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

S1按质量份计，将3份十六烷基三甲基氯化铵、2.4份浓度为24wt％的氨水、140份乙二醇单乙醚和350份水混合，以200r/min转速搅拌10min，接着加入15份四乙氧基硅烷，密封以200r/min转速搅拌反应24h，经过滤、洗涤、干燥，得到粗产物，将上述粗产物置于600℃下煅烧2h，冷却至室温，得到多孔二氧化硅纳米球；

S2按质量份计，将10份步骤S1制得的多孔二氧化硅纳米球、20份熊去氧胆酸、80份无水乙醇混合，以200r/min转速搅拌20min，使得熊去氧胆酸被多孔二氧化硅充分吸附，经干燥后，得到熊去氧胆酸负载的二氧化硅；

S3按质量份计，将3份壳聚糖、3份胶原蛋白、0.3份交联剂、100份冰醋酸水溶液混合，置于40℃下以200r/min转速搅拌40min，得到载药膜溶液；

S4将步骤S2制得的熊去氧胆酸负载的二氧化硅加入到步骤S3制得的载药膜溶液中，以200r/min转速搅拌60min，然后置于50℃下干燥，得到所述熊去氧胆酸缓释纳米颗粒。

步骤S3所述冰醋酸水溶液的pH为3。

步骤S3所述胶原蛋白为I型。

步骤S3所述交联剂为醋酸锌。

实施例4

一种熊去氧胆酸缓释制剂的制备方法，包括以下步骤：按质量份计，将150份熊去氧胆酸缓释纳米颗粒、15份粘合剂、25份稀释剂、4份pH缓冲液、4份矫味剂、300份水混合，以200r/min转速搅拌30min后制成片状，经干燥后，得到所述熊去氧胆酸缓释制剂。

所述粘合剂为羟乙基纤维素。

所述稀释剂由蔗糖、玉米淀粉按质量比1:4混合而成。

所述pH缓冲液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，pH缓冲液的pH为6。

所述矫味剂为阿斯巴甜、甘露糖醇按质量比3：2混合而成。

所述熊去氧胆酸缓释纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

S1按质量份计，将3份十六烷基三甲基氯化铵、2.4份浓度为24wt％的氨水、140份乙二醇单乙醚和350份水混合，以200r/min转速搅拌10min，接着加入15份四乙氧基硅烷，密封以200r/min转速搅拌反应24h，经过滤、洗涤、干燥，得到粗产物，将上述粗产物置于600℃下煅烧2h，冷却至室温，得到多孔二氧化硅纳米球；

S2按质量份计，将10份步骤S1制得的多孔二氧化硅纳米球、20份熊去氧胆酸、80份无水乙醇混合，以200r/min转速搅拌20min，使得熊去氧胆酸被多孔二氧化硅充分吸附，经干燥后，得到熊去氧胆酸负载的二氧化硅；

S3按质量份计，将6份壳聚糖、0.3份交联剂、100份冰醋酸水溶液混合，置于40℃下以200r/min转速搅拌40min，得到载药膜溶液；

S4将步骤S2制得的熊去氧胆酸负载的二氧化硅加入到步骤S3制得的载药膜溶液中，以200r/min转速搅拌60min，然后置于50℃下干燥，得到所述熊去氧胆酸缓释纳米颗粒。

步骤S3所述冰醋酸水溶液的pH为3。

步骤S3所述交联剂为醋酸锌。

实施例5

一种熊去氧胆酸缓释制剂的制备方法，包括以下步骤：按质量份计，将150份熊去氧胆酸缓释纳米颗粒、15份粘合剂、25份稀释剂、4份pH缓冲液、4份矫味剂、300份水混合，以200r/min转速搅拌30min后制成片状，经干燥后，得到所述熊去氧胆酸缓释制剂。

所述粘合剂为羟乙基纤维素。

所述稀释剂由蔗糖、玉米淀粉按质量比1:4混合而成。

所述pH缓冲液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，pH缓冲液的pH为6。

所述矫味剂为阿斯巴甜、甘露糖醇按质量比3：2混合而成。

所述熊去氧胆酸缓释纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

S1按质量份计，将3份十六烷基三甲基氯化铵、2.4份浓度为24wt％的氨水、140份乙二醇单乙醚和350份水混合，以200r/min转速搅拌10min，接着加入15份四乙氧基硅烷，密封以200r/min转速搅拌反应24h，经过滤、洗涤、干燥，得到粗产物，将上述粗产物置于600℃下煅烧2h，冷却至室温，得到多孔二氧化硅纳米球；

S2按质量份计，将10份步骤S1制得的多孔二氧化硅纳米球、20份熊去氧胆酸、80份无水乙醇混合，以200r/min转速搅拌20min，使得熊去氧胆酸被多孔二氧化硅充分吸附，经干燥后，得到熊去氧胆酸负载的二氧化硅；

S3按质量份计，将6份胶原蛋白、0.3份交联剂、100份冰醋酸水溶液混合，置于40℃下以200r/min转速搅拌40min，得到载药膜溶液；

S4将步骤S2制得的熊去氧胆酸负载的二氧化硅加入到步骤S3制得的载药膜溶液中，以200r/min转速搅拌60min，然后置于50℃下干燥，得到所述熊去氧胆酸缓释纳米颗粒。

步骤S3所述冰醋酸水溶液的pH为3。

步骤S3所述胶原蛋白为I型。

步骤S3所述交联剂为醋酸锌。

测试例1

精确称量一定量各实施例制得的熊去氧胆酸缓释制剂(含熊去氧胆酸50mg)，加入到事先溶胀完全的透析袋(8000-14000Da)，扎紧透析袋。用50mL模拟结肠液作为溶出介质，转速调节为100rpm，水浴温度为37℃，得到缓释溶液。并于预定的时间间隔(0.5h、1h、3h、6h、9h、12h、15h、18h、21h、24h)分别吸取缓释溶液各1mL，取完后补充等量等温的溶出介质。取出的溶液过0.45μm的滤膜后，在紫外分光光度计中测定吸收值，并计算不同时间点收集液中药物的浓度，推算得累计释药百分率及其所需释放时间，结果见表1。

模拟结肠液(pH＝7.4)的配制方法为：6.8gK

表1：肠析实验结果

由表1可以看出，本发明实施例1制得的熊去氧胆酸缓释制剂，虽然其累计释药百分率能够达到100％，但是其释放熊去氧胆酸的速率过快。本发明之所以选用多孔二氧化硅纳米球作为药物载体，是由于其耐酸性好，能够有效的抑制胃酸带来的影响，能够有效的进入中等偏碱性的回肠部位，达到定点释放的目的。但是，二氧化硅纳米颗粒的耐碱性极差，其极易在弱碱性环境下分解形成硅酸钠，从而短时间释放出大量的熊去氧胆酸，形成较高浓度，阻碍吸收，引起胃肠道紊乱。因此，为了控制熊去氧胆酸的释放速率，本发明进一步采用生物膜对负载有熊去氧胆酸的多孔二氧化硅纳米球进行包覆，并且本发明对生物膜进行设计，采用壳聚糖、胶原蛋白交联，制备具有载药性的生物膜，从而还提升其对熊去氧胆酸的包封率。壳聚糖在弱碱环境中不溶，难以分解，以其包封负载有熊去氧胆酸的多孔二氧化硅纳米球能够有效的起到缓释的作用。但是，从实施例4的累计释药百分率来看，其前期释药速率较快，但是随着时间的推移，其释药速率逐渐减慢，本发明认为这是由于壳聚糖分子上存在大量的氨基、醛基等基团，其能够极为紧密的包覆在负载有熊去氧胆酸的多孔二氧化硅纳米球表面，并减少负载有熊去氧胆酸的多孔二氧化硅纳米球和结肠液的接触，导致结肠液无法分解多孔二氧化硅纳米球，吸附在孔道中的熊去氧胆酸无法析出，这不利于人体对熊去氧胆酸的有效吸收和利用。因此，本发明采用胶原蛋白和壳聚糖混合制备载药生物膜，如实施例2所示，胶原蛋白能够被蛋白酶分解，从而暴露出内部的负载有熊去氧胆酸的多孔二氧化硅纳米球，壳聚糖在弱碱环境中不溶，难以分解，二者协同能够有效的调控熊去氧胆酸的释放速率。但是，由实施例的数据可以看出，其制得的熊去氧胆酸缓释制剂在3h前，具有极高的累计释药百分率，远高于3h-12h间药物的释放速率，本发明认为这是由于实施例2制得的载药生物膜的包封率较差，还有部分熊去氧胆酸处于游离状态，这导致初始熊去氧胆酸浓度极高，不利于人体吸收。因此，本发明进一步加入交联剂改进载药生物膜的网络结构，提高其对熊去氧胆酸的包封率。如实施例3所示，在引入锌离子作为交联剂后，3h时测得的累计释药百分率明显低于实施例2，并且每3小时药物释放速率基本一致，展现了极好的缓释效果。

测试例3

包封率测试

将本发明各实施例制得的熊去氧胆酸缓释纳米颗粒(含熊去氧胆酸50mg)置于50mL无水乙醇中，以80r/min转速搅拌15min后，测定溶液中游离的熊去氧胆酸的浓度，经计算得出熊去氧胆酸的包封率。

表2:包封率测定结果

由表2可以看出实施例3制得的熊去氧胆酸缓释纳米颗粒其包封率最高。药物的使用过程中，其用量必需是要严格控制的。而现有的药物缓释技术所采用的纳米载体、微胶囊、脂质体等，其包封率普遍较低，这会造成药物初始浓度过高，可能会对人体造成损害，也不利于人体吸收。提高包封率的最简单的办法就是，将其溶解，用溶剂尽量去除游离的药物，这几乎能使得其包封率达到100％，但是，药物的剩余量不好控制，无法实际应用。本发明采用载体吸附，再辅以载药生物膜包覆的方式，实现了极高的药物包覆率，并且能够精确定量缓释剂中药物的含量，有利于药物缓释剂的使用和推广。